43
Lampiran 1. Kromatogram Larutan Baku Isoniazid dan Pyridoxin HCl
a. Larutan standar baku Isoniazid 10 µg/mL dan Pyridoxin HCl 2 µg/mL
b. Larutan standar baku Isoniazid 20 µg/mL dan Pyridoxin HCl 4 µg/mL
c. Larutan standar baku Isoniazid 30 µg/mL dan Pyridoxin HCl 6 µg/mL
d. Larutan standar baku Isoniazid 40 µg/mL dan Pyridoxin HCl 8 µg/mL
44
e. Larutan standar baku Isoniazid 50 µg/mL dan Pyridoxin HCl 10 µg/mL
f. Larutan standar baku Isoniazid 60 µg/mL dan Pyridoxin HCl 12 µg/mL
Lampiran 2. Contoh Kromatogram Sampel Isoniazid dan Pyridoxin HCl
a. Kromatogram Sampel Isoniazid dan Pyridoxin HCl sirup A
b. Kromatogram Sampel Isoniazid dan Pyridoxin HCl sirup B
45
Lampiran 3. Contoh Perhitungan Perolehan Kembali Isoniazid dengan
Metode Standard Addition Method sirup A
1. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 80% dari target
kadar analit dalam sampel
a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)
1) Luas puncak isoniazid = 969139
2) Kadar isoniazid berdasarkan persamaan garis Y = 24817.54x
+230862.5 adalah 29,748 µg/mL
b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)
1) Luas puncak isoniazid = 695874
2) Kadar isoniazid berdasarkan persamaan garis Y = 24817.54x
+230862.5 adalah 18,737µg/mL
c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)
1) Luas puncak total analit 1 = 1435130
Luas puncak total analit 2 = 1435335
Luas puncak total analit 3 = 1436053
2) Berdasarkan persamaan garis Y = 24817.54x +230862.5 maka :
Kadar total analit 1 = 48,52 µg/mL
Kadar total analit 2 = 48,53 µg/mL
Kadar total analit 3 =48,56 µg/mL
46
2. Perhitungan perolehan kembali
a. Analit 1
= 100,02%
b. Analit 2
= 100,25%
c. Analit 3
= 100,41%
47
Lampiran 4. Perhitungan LOD dan LOQ Isoniazid
No X Xi² - - ² Yi Yc (Yi-Yc) (Yi-Yc)²
1 10 100 -25 625 501979 479037.9 22941.1 526294069.2
2 20 400 -15 225 695874 727213.3 -31339.3 982151724.5
3 30 900 -5 25 969139 975388.7 -6249.7 39058750.09
4 40 1600 5 25 1226697 1223564 3132.9 9815062.41
5 50 2500 15 225 1494874 1471740 23134.5 535205090.3
6 60 3600 25 625 1708295 1719915 -11619.9 135022076
35 ∑9100 ∑1750
∑2227546772
Dari persamaan Y = 24817.54x +230862.5maka Yc dapat dihitung :
1. Y = 24817.54x +230862.5
Y = 24817.54(10) +230862.5
Y = 479037,9
2. Y = 24817.54x +230862.5
Y = 24817.54(20) +230862.5
Y = 727213,3
3. Y = 24817.54x +230862.5
Y = 24817.54(30) +230862.5
Y = 975388,7
4. Y= 24817.54x +230862.5
Y = 24817.54(40) +230862.5
Y = 1223564,1
5. Y = 24817.54x +230862.5
Y = 24817.54(50) +230862.5
Y = 1471739,5
6. Y = 24817.54x +230862.5
48
Y = 24817.54(60) +230862.5
Y =1719914,9
Persamaan kurva baku : Y = 24817.54x +230862.5(r = 0,9989)
∑
= (2227546772/4)½
= 23598,45
⁄ √∑
∑
= 23598,45x√
=23598,45x 0,930
= 21946,55
Perhitungan nilai LOD :
Nilai Y pada batas deteksi ditentukan dengan persamaan Y = YB + 3 SB
Y = nilai intersept (a) pada persamaan kurva kalibrasi
SB = simpangan baku intersept (a) (Sa)
Y = 230862,5 + 3 (21946,55)
= 296702,15
Y = 24817.54x +230862.5
296702,15= 24817.54x +230862.5
LOD = X = 2,65 µg/mL
Perhitungan nilai LOQ :
Nilai Y pada batas kuantifikasi ditentukan dengan persamaan Y = YB + 10 SB
Y = nilai intersept (a) pada persamaan kurva kalibrasi
SB = simpangan baku intersept (a) (Sa)
Y = 230862,5+ 10 (21946,55)
49
= 450328
Y = 24817.54x +230862.5
450328 = 24817.54x +230862.5
LOQ = X = 8,843 µg/mL
50
Lampiran 5. Contoh Perhitungan Kadar Isoniazid
Persamaan regresi linier kurva baku adalah
Y = BX + A
Y = 24817.54x +230862.5
Replikasi 1
Y = 24817.54x +230862.5
1225784 = 24817.54x +230862.5
X = 40,09µg/mL
Sampel dilarutkan dalam 50 ml air, sehingga kadar isoniazid adalah
X = 40,09 µg/mL x 50
= 2004,5µg/mL
Kadar sebelum pengenceran 10x= 2004,5 µg/ml x 10 = 20045 µg/ml
Kadar isoniazid dalam 1 ml sampel (mg) =
= 20,04 mg
% Kadar isoniazid =
= 100,22 %
51
Lampiran 6. Perhitungan selektivitas Pyridoxin HCl dan Isoniazid
R = 4,8
52
Lampiran 7. Surat Permohonan Bahan Baku
53
Lampiran 8.Certificate of Analysis Isoniazid
54
Lampiran 9.Certificate of Analysis Pyridoxin HCl
55
Lampiran 10. Surat Keterangan Laboratorium
56
Lampiran 11. Dokumentasi Penelitian