37
Lampiran 1. Determinasi Tanaman
38
Lampiran 1. Lanjutan
39
Lampiran 1. Lanjutan
40
Lampiran 2. Ethical Clearence
41
Lampiran 3. Surat Keterangan telah Melaksanakan Penelitian di Laboratorium
Biologi Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang.
42
Lampiran 4. Surat Keterangan telah melaksanakan penelitian di Laboratorium
Parasitologi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta
43
Lampiran 5. Penentuan IC50 EEKTU pada sel kanker payudara T47D
1. Kontrol Sel dan Kontrol Media
Absorbansi
kontrol sel
(KS)
Rata-rata
absorbansi
KS
Absorbansi
kontrol media
(KM)
Rata-rata
absorbans
i KM
Absorbans
i KS-KM
0.930 0.157 0.877 0.887 0.097 0.117 0.769 0.853 0.098
2. Data viabilitas sel setelah perlakuan EEKTU
konsentrasi
mcg/ml
log
kadar absorbansi % Viabilitas sel
Rata-
rata
%V SD
1000 3 0.400 0.360 0.390 34.575 31.540 35.440 33.852 2.05
500 2.70 0.410 0.419 0.401 38.040 39.210 36.870 38.040 1.17
400 2.60 0.466 0.470 0.493 45.320 45.840 48.830 46.663 1.89
300 2.47 0.479 0.524 0.544 47.010 52.860 55.460 51.777 4.33
200 2.30 0.563 0.505 0.534 57.930 50.390 54.160 54.160 3.77
100 2 0.582 0.607 0.668 60.400 63.650 71.570 65.207 5.75
80 1.90 0.677 0.703 0.673 72.750 76.130 72.230 73.703 2.12
3. Grafik Hubungan Kadar EEKTU vs % Viabilitas Sel
y = -35.245x + 137.52
R² = 0.9584
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Via
bil
itas
sel
(%
)
Konsentrasi EEKTU (log konsentrasi)
44
Analisis Regresi Linier dengan Ms Excel 2013
y = -35.245x + 137.52
R² = 0.9584
Mencari IC50 Sehingga Y =50
50 = -35.245x + 137.52
X = 50−137.52
− 35.245 = 2.483
Anti log 2.478 = 304.220
Sehingga diperoleh IC50 EEKTU 304.220 μg/ml
45
Lampiran 6. Perhitungan Sel dan Seri Konsentrasi Ekstrak Etanol Kulit Terong
Ungu (EEKTU) Uji Aktivitas Sitotoksik
1. Sel T47D
a. Perhitungan Sel
Jumlah sel terhitung = 203 sel
Jumlah sel dalam stok = 203 𝑋 104
1 = 2,03 x 106 sel/ml
b. Pembuatan Suspensi Sel (Stok)
Sel T47D untuk perlakuan = 1 x 105sel/sumuran
Jumlah sel yang ditanam dalam setiap sumuran adalah 100.000 sel
Volume yang diambil = 100 𝑥 102
2,03 𝑥 106 = 4.9 ml + MK ad 10 ml
2. Seri Konsentrasi EEKTU Perlakuan Tunggal
a. Pembuatan Larutan Stok Konsentrasi 100.000 μg/ml
Sebanyak 10,4 mg EEKTU dilarutkan dalam 104 μl DMSO (10 x bobot
ekstrak yang ditimbang) kemudian divortex hingga homogen.
10,4 𝑚𝑔
104 µ𝑙→
10400
104 µ𝑙 → 100.000 μg/ml
b. Pembuatan Seri Konsentrasi 2000 μg/ml
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 100.000 μg/ml = 1600 μl x 2000 μg/ml
V1 = 1600 µl x 2000 µg/ml
100.000 µg/ml
= 32 μl EEKTU dari 100.000 μg/ml
di + MK ad 2000 μl dalam conical tube sebagai sub stok
46
c. Pembuatan Seri Konsentrasi 1000 μg/ml
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 2000 μg/ml = 700 μl x 1000 μg/ml
V1 = 700 µl x 1000 µg/ml
2000 µg/ml
= 350 μl EEKTU dari 2000 μg/ml
di + MK ad 700 μl dalam conical tube kemudian 100 μl
campuran tersebut diambil untuk dimasukkan dalam
sumuran dan direplikasi 6x
d. Pembuatan Seri Konsentrasi 500 μg/ml
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 2000 μg/ml = 700 μl x 500 μg/ml
V1 = 700 µl x 500 µg/ml
2000 µg/ml
= 175 μl EEKTU dari 2000 μg/ml
di + MK ad 700 μl dalam conical tube kemudian 100 μl
campuran tersebut diambil untuk dimasukkan dalam
sumuran dan direplikasi 6x
e. Pembuatan Seri Konsentrasi 400 μg/ml
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 2000 μg/ml = 700 μl x 400 μg/ml
V1 = 700 µl x 400 µg/ml
2000 µg/ml
= 140 μl EEKTU dari 2000 μg/ml
47
di + MK ad 700 μl dalam conical tube kemudian 100 μl
campuran tersebut diambil untuk dimasukkan dalam
sumuran dan direplikasi 6x
f. Pembuatan Seri Konsentrasi 300 μg/ml
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 2000 μg/ml = 700 μl x 300 μg/ml
V1 = 700 µl x 300 µg/ml
2000 µg/ml
= 105 μl EEKTU dari 2000 μg/ml
di + MK ad 700 μl dalam conical tube kemudian 100 μl
campuran tersebut diambil untuk dimasukkan dalam
sumuran dan direplikasi 6x
g. Pembuatan Seri Konsentrasi 200 μg/ml
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 2000 μg/ml = 700 μl x 200 μg/ml
V1 = 700 µl x 200 µg/ml
2000 µg/ml
= 70 μl EEKTU dari 2000 μg/ml
di + MK ad 700 μl dalam conical tube kemudian 100 μl
campuran tersebut diambil untuk dimasukkan dalam
sumuran dan direplikasi 6x
h. Pembuatan Seri Konsentrasi 100 μg/ml
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 2000 μg/ml = 700 μl x 100 μg/ml
48
V1 = 500 µl x 100 µg/ml
2000 µg/ml
= 35 μl EEKTU dari 2000 μg/ml
di + MK ad 700 μl dalam conical tube kemudian 100 μl
campuran tersebut diambil untuk dimasukkan dalam
sumuran dan direplikasi 6x
i. Pembuatan Seri Konsentrasi 80 μg/ml
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 2000 μg/ml = 700 μl x 80 μg/ml
V1 = 700 µl x 80 µg/ml
2000 µg/ml
= 28 μl EEKTU dari 2000 μg/ml
di + MK ad 700 μl dalam conical tube kemudian 100 μl
campuran tersebut diambil untuk dimasukkan dalam
sumuran dan direplikasi 6x
49
Lampiran 7. Migrasi Sel
1. Perhitungan Migrasi Sel dengan Microsoft Excel 2013
Konsentrasi
area %closure
0h 18h 24h 42h 18h 24h 42h
ks 270843 176412 66759 0 35 75 100
291305 53298 28234 329 82 90 100
295484 23248 104120 123 92 65 100
AVG 270843 84319 66371 151 70 77 100
EETU ¼
IC50 370146 299094 186147 42190 19 50 89
257556 142179 116622 6330 45 55 98
274427 130761 137944 739 53 50 100
AVG 300710 190678 146904 16419.7 39 52 95
EEKTU 1/8
IC50 311162 250541 160538 37792 19 48 88
289934 113054 73754 4949 61 75 98
369581 214080 81264 69120 42 78 81
AVG 323559 192558 105185 37286.8 41 67 89
EEKTU ½
IC50 531412 313723 198525 61561 41 63 88
411736 173906 139897 10525 58 66 97
329896 268300 256529 112883 19 22 66
AVG 424348 251976 198317 61656.3 39 50 84
50
Lampiran 7. Lanjutan
2. Morfologi Sel Setelah diberi Perlakuan EEKTU
Jam ke 0 Jam ke 18 Jam ke 24 Jam ke 42 Ks
EEKTU
½ IC50
EEKTU
¼ IC50
EEKTU
1/8 IC50
Keterangan : KS = Kontrol Sel
a. Dibandingkan dengan kontrol, pemberian EEKTU cenderung menghambat
penutupan migrasi sel
b. Semakin lama waktu inkubasi, penutupan migrasi sel semakin besar
51
Lampiran 7. Lanjutan
3. Gambar Hasil Analisis dengan Software ImageJ
Jam Sebelum Analisis Sesudah Analisis
Kontrol Sel
0
18
24
42
52
Lampiran 7. Lanjutan
Jam Sebelum Analisis Sesudah Analisis
EEKTU ½ IC50
0
18
24
42
53
Lampiran 7. Lanjutan
Jam Sebelum Analisis Sesudah Analisis
EEKTU ¼ IC50
0
18
24
42
54
Lampiran 7. Lanjutan
Jam Sebelum Analisis Sesudah Analisis
EEKTU 1/8 IC50
0
18
24
42
55
Lampiran 8. Perhitungan Sel dan Seri Konsentrasi Ekstrak Etanol Kulit Terong
Ungu (EEKTU) Uji Migrasi Sel
1. Sel T47D
a. Perhitungan Sel
Jumlah sel terhitung = 169 sel
Jumlah sel dalam stok = 169 𝑋 104
1 = 1,69 x 106 sel/ml
b. Pembuatan Suspensi Sel (Stok)
Sel T47D untuk perlakuan = 8.5 x 104 sel/sumuran
Jumlah sel yang ditanam dalam setiap sumuran adalah 85.000 sel
Volume yang diambil = 8.5 𝑥 104
1,69 𝑥 106 = 2.95 ml + MK ad 10 ml
2. Seri Konsentrasi EEKTU
a. Pembuatan Larutan Stok Konsentrasi 100.000 μg/ml
Sebanyak 14 mg EEDS dilarutkan dalam 140 μl DMSO (10 x bobot ekstrak
yang ditimbang) kemudian divortex hingga homogen.
14 𝑚𝑔
140 µ𝑙→
14000
140 µ𝑙 → 100.000 μg/ml
b. Pembuatan Seri Konsentrasi 1000 μg/ml
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 100.000 μg/ml = 2000 μl x 1000 μg/ml
V1 = 2000 µl x 1000 µg/ml
100.000 µg/ml
= 20 μl EEKTU dari 100.000 μg/ml
di + MK ad 2000 μl dalam conical tube
56
c. Pembuatan Seri Konsentrasi ½ IC50 ~ 150 μg/ml (300 μg/ml)
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 1000 μg/ml = 2500 μl x 300 μg/ml
V1 = 2500 µl x 300 µg/ml
1000 µg/ml
= 750 μl EEKTU dari 1000 μg/ml
di + MK ad 2500 μl dalam conical tube
d. Pembuatan Seri Konsentrasi 1/4 IC50 ~ 75 μg/ml (150 μg/ml)
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 1000 μg/ml = 2500 μl x 150 μg/ml
V1 = 2500 µl x 150 µg/ml
1000 µg/ml
= 375 μl EEKTU dari 1000 μg/ml
di + MK ad 2500 μl dalam conical tube
e. Pembuatan Seri Konsentrasi 1/8 IC50 ~ 37.5 μg/ml (75 μg/ml)
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 1000 μg/ml = 2500 μl x 75 μg/ml
V1 = 2500 µl x 75 µg/ml
1000 µg/ml
= 187.5 μl EEKTU dari 1000 μg/ml
di + MK ad 2500 μl dalam conical tube
57
Lampiran 9. Dokumentasi Kegiatan
Pemanenan Terong
Pengupasan Terong Ungu
Penimbangan Kulit Terong Ungu
Pencucian Kulit Terong Ungu
Pengovenan Kulit Terong Ungu
Pengecekan kadar Air
Penghalusan Kulit Terong dengan
Blender
Penimbangan Serbuk Kulit Terong Ungu
58
Lampiran 8. Lanjutan
Ekstraksi Ultrasonik
Hasil Ekstraksi
Penyaringan dengan corong Buchner
dan hasil penyaringan
Rotary evaporator
Pengambilan Ekstrak Kental
Hasil ekstrak kental 1,7 gram
Preparasi EEKTU
Vortex
59
Lampiran 8. Lanjutan
Pembuatan Seri Konsentrasi
Treatment sel untuk uji Sitotoksik
96 well plate EEKTU
ELISA Reader
Hasil ELISA
Sel T47D dalam media MK
Treatment sel dalam 24 well plate
Pembuatab Scatch
60
Lampiran 8. Lanjutan
Inkubasi dalam incubator CO2 5%
Hasil Scatch
61