Pmrksn Mikroskopik

PRAKTIKUMPATOLOGI ANATOMINovember 2007PEMERIKSAAN MIKROSKOPIK

Dr. T. Ibnu Alferraly, Sp.PA

Dr. T. Kemala Intan, M.Ec.

Pathology ?Pathos : PenyakitLogos : Ilmu

Patologi merupakan :

Teori ilmu dasar penyakitKeahlian dalam laboratorium kedokteranMemberikan konsultasi pada dokter lainMembantu diagnosa klinis

Jenis pemeriksaan Patologi :

Pemeriksaan contoh jaringan Pemeriksaan contoh darah Pemeriksaan cairan tubuh Pemeriksaan patologi autopsi

Patologi Experimental

observasi terhadap pengaruh perlakuan pada suatu sistem di laboratorium dengan binatangatau kultur jaringan

Pemeriksaan Patologi Anatomi :

Makroskopis :Pemeriksaan langsung dengan indera manusia :- Bentuk- Ukuran dan berat- Warna- Konsistensi- Aroma- Kelainan-kelainan yang ada

MikroskopisPemeriksaan dengan menggunakan alat bantu ( mikroskop cahaya / elektron, dll )

Jenis Tehnik Pemeriksaan :

SITOPATOLOGIKumpulan sel tubuh yang berasal dari :

> Produksi tubuh yang didapatkan : Urin, Feces, Saliva, Sperma, dll

> Gunakan Tehnik tertentu : Aspirasi Biopsi, PapSmear, Scrapping, Tapping, dll

HISTOPATOLOGIPemeriksaan Jaringan / Organ / Bagian tubuhdari hasil operasi / biopsi / tindakan medis lainnya

DIAGNOSTIK SITOPATOLOGIPemeriksaan / penilaian / interpretasi dari sel yang berasaldari tubuh manusia, baik dari sel yang terlepas ( exfoliated )maupun diambil dari berbagai tempat di tubuh dengan caratertentu.

Bahan yg diperiksa secara sitologi : Vaginal Smear Sputum Bronchial Washing / Brushing Urine Cairan Lambung / Pleura Cairan Ascites Cairan Sendi Aspirasi Biopsi jaringan tumor / radang Inprint Jaringan tunmor Scrapping

ASPIRASI BIOPSIPERALATAN ASPIRASI BIOPSI REGULER

PERALATAN ASPIRASI BIOPSI ORGAN DALAM

PAPS SMEAR

Papanikolaou test ( Pap smear ) : metode screening ginekologi ( Georgios Papanikolaou )

- Menemukan proses premalignant dan malignant di ectocervix- Menemukan infeksi dalam endocervix dan endometrium. - Mendeteksi kanker rahim yang disebabkan oleh HPV

Wanita yang aktif secara seksual disarankan menjalani Pap smear sekali setahun.

Cara : memasukkan speculum ke vagina pasien untuk mengambil sample dari cervix. ( tidak dilakukan selama menstruasi )Lakukan Pewarnaan Papanikolaou

Normal Cervix :SUPER F INTERMBASAL

Cervical Dysplasia:

Cervical HPV infection:

Pap Smear Results:

PEMERIKSAAN HISTOPATOLOGI

Kelainan Retrogresif & ProgresifATROFI

Hipertrofi

Hiperplasia

Metaplasia

SEDIAAN

PROCESSING

PEMERIKSAAN /PENILAIANTermasuk pewarnaan sediaan ( staining )

Contoh2 Zat Warna Untuk Staining :

Pewarnaan Rutin : Hematoksilin Eosin ( HE )

Pewarnaan Khusus : PapaniculaouAcridine Orange FluorescentMethylen BlueMay-Grunwald-Giemsa ( MGG )Periodeic Acid Schift ( PAS )Sudan BlackVan GiesonReticulin, dllImunohistokimia

HEMATOKSILIN EOSIN ( HE )

Keuntungan H&E adalah relatif cepat, murah dan mudah tidak dapat menjelaskan etiologi, histogenetik atau patogenetik dari suatu penyakit.

Tekhnik-tekhnik pewarnaan lain Pewarnaan Khusus dipakai dalam keadaan-keadaan tertentu.Semua Tujuan Pewarnaan : perbedaan warna komponen2 jaringan

( SPECIAL STAINING )Hampir semua jaringan : tidak berwarna : sulit diamati

Dikembangkan metode untuk memulas jaringan, untuk : - melihat berbagai unsur jaringan - dapat membeda-bedakannyaPrinsip pewarnaan jaringan adalah afinitas antara bahan cat (pewarna) dengan bahan yang diwarnai(sel/jaringan).

Afinitas tersebut ada dua macam yaitu:1.Secara Langsung ( Direct )2.Secara Tidak Langsung ( Indirect )

SECARA LANGSUNG (DIRECT)

Cat Sel/Jaringan Ikatan antara zat warna dengan sel/jaringan

SECARA TIDAK LANGSUNG ( INDIRECT )

Bahan cat dengan jaringan tidak dapat berikatan secara langsungbutuh bahan perantara yang disebut sebagai mordan

Cat Mordan Jaringan Ikatan antara zat warna dgn jaringan dengan perantaraan mordan.

Beberapa metode pewarnaan khusus

Pewarnaan Jaringan Ikat

PEWARNAAN VON GIESON Prinsip : Untuk membedakan kolagen dengan otot polos pada tumor atau pada penyakit2 yang menyebabkan peningkatan jumlah kolagen. Pewarnaan yang menggunakan gabungan antara bahan pewarna yang memiliki berat molekul besar ( acid fuchsin) dan bahan pewarna yang memiliki berat molekul rendah (picric acid)

Fiksasi : dapat menggunakan berbagai larutan fiksasi paling baik mercuric chloridePemotongan : paraffin, frozen section atau cellulose nitrate section.Reagen : Celestine Blue, Curtis Stain, 1% Ponceau S (Cl 27195)

HasilInti : BiruKolagen : Merah TerangSitoplasma, otot, fibrin & sel darah merah : Kuning

PEWARNAAN TRICHOME

Prinsip: Gabungan phosphotungstic + phosphomolybdic acid + pewarnaan anionic.

Melihat jenis dan jumlah dari material ekstraselular.

Tiga komponen jaringan ditunjukkan oleh tiga jenis pewarna yang berbeda yaitu inti, sitoplasma dan jaringan ikat.

Inti diwarnai oleh pewarna inti biasanya dengan haematoxyllin.

Jaringan ikat dan otot mempunyai warna berbeda karena afinitas pewarna pada jaringan tergantung kepada :ukuran molekulkepadatan jaringan,ph penggunaan phospotungstic atau phospomolybdic acid.

Ada 2 jenis :PEWARNAAN GOMORIS TRICHOME PEWARNAAN MASSON TRICHOME

PEWARNAAN GOMORIS TRICHOME

Fiksasi : Zenker, Helly, Bouin, Formalin 10%Pemotongan: Potong tipis blok parafinReagen: Cellestine Blue Gomoris TrichomeHasilOtot : MerahKolagen: HijauInti: Biru atau Hitam

PEWARNAAN MASSON TRICHOME

Fiksasi : Formalin 10%, Zenker, Helly, BouinPemotongan :Blok parafin 5 mikronReagen dan PelarutWeigerts Iron Hematoxyllin Solution Stock Solution A Stock Solution B Biebrich Scarlet Acid Fuchsin SolutionPhosphomolybdic-Phosphotungstic Acid SolutionAniline Blue Solution1% Acetic Acid SolutionHasilKolagen :BiruInti: HitamOtot, Sitoplasma, keratin: Merah

Pewarnaan lemak

PEWARNAAN OIL RED O Prinsip : senyawa yang digunakan lebih larut pada jaringan lemak daripada pelarutnya. Sebenarnya tidak memenuhi syarat. Tidak memiliki grup auxochrom hanya memiliki chromogen. Menggunakan sediaan hapus segar atau cryostat section dari jaringan Fiksasi : Fresh frozen,Formal Saline atau FormalCalcium Pemotongan: Frozen section Reagen : - OiI red stock stain - Oil red working solution - Glycerin Jelly Mounting MediaHasilLemak : MerahInti : Biru

Pewarnaan RetikulinPrinsip :

Memperlihatkan serat retikulin dan material basement membrane.

Serat Retikulin mempunyai afinitas yang rendah terhadap larutan perak harus ditambahkan potasium permanganat untuk merangsang pembentukan endapan perak pada jaringan.

Garam perak + basa kuat = perak oksida + bantuan amoniak ( perak diamine oksida ) yang direduksi dengan formalin terbentuk logam perak sebagai endapan perak yang berada pada serabut retikulin,sehingga struktur ini bisa terlihat.

PEWARNAAN GORDON AND SWEET RETICULINFiksasi:Formalin 10%Pemotongan: Blok parafin 5 mikronReagenLarutan Potassium PermanganatSilver Solution2% Aqueous oxalic acid4% Aqueous Iron Alum10% Formalin0,2% Gold Chloride2% Sodium ThiosulphateNeutral red stain-acidifiedHasilSerat retikulin : HitamInti: Merah atau tidak berwarna

Pewarnaan untuk hemosiderin,melanin dan kalsium Pewarnaan untuk hemosiderin

METODE PRUSIAN BLUEPrinsipHydrochloric acid splits pada protein akan mengikat besi ,memungkinkan potassium ferrocyanide untuk berikatan dengan ferric iron membentuk ferric ferrocyanide

Fiksasi : Formalin 10%Pemotongan : Blok parafin 5 mikronReagen: - 20% Aqueous Solution of Hydrochloric Acid - 10% Aqueous Solution of Potassium FerrocyanideHasilBesi: Biru terang Inti: MerahSitoplasma: Merah jambu

Pewarnaan untuk melanin

METODE FONTANA MASSON SILVER

PrinsipIdentifikasi granula argentafin dan melanin.

Melanin : pigmen coklat kehitaman ( normal terdapat pada rambut, kulit, retina,I ris dan beberapa bagian dari CNS.

Secara patologi argentafin dapat dijumpai pada tumor tumor karsinoid.

Reaksi argentafin positif berarti sel mengambil perak dan kemudian mereduksinya untuk memeperlihatkan warna metal tanpa bantuan agen pereduksi.

Fiksasi : Formalin 10% ( Hindari : alkohol, khromat, merkuri khlorida )Pemotongan : Blok parafin 4 mikronReagen: - Silver Nitrate Solution (Fontana) - 0,1%Gold Chloride - 5% Hiypo

HasilMelanin, Argentaffin cels : HitamInti: Merah

Pewarnaan untuk kalsium

VON KOSSA - CALCIUMPrinsip : Pewarna perak akan menggantikan kalsium dalam garam kalsium garam perak direduksi menjadi black metallic silver sehingga dapat dilihat.

Fiksasi : Formalin bufferPemotongan : Blok Parrafin Reagen1% aqueous silver nitrat2.5% Sodium thiosulphate1% Safranin O atau van Giesons picro fuchsin

HasilMelanin,Argentaffin : HitamInti: Merah

Pewarnaan glukosaPEWARNAAN PERIODIC ACID SCHIFF (PAS)

PrinsipMelihat glikogen pada jaringan seperti pada hati,jantung dan otot lurik.Jaringan yang mengandung kelompok vicinal glycol, amino atau alkil amino akan dioksidasi oleh periodic acid menjadi dialdehid yang dikombinasikan dengan reagen schiffs untuk membentuk komponen magenta yang tidak larut dalam air.

Fiksasi : Formalin 10%Pemotongan :Blok paraffin mikron, frozen, freeze-dried atau potong cryostat Reagen0,5% Periodic acid solutionSchiff Reaction

HasilGlycogen,mucindanbasementmembra: MagentaInti: Biru

Pewarnaan mikroorganismePEWARNAAN GRAM

PrinsipPewarna crystal violet : mewarnai asam nukleat dari mikroorganisme dan jaringan berikatan dengan iodine membentuk complex berwarna hitam.

Bbrp mikroorganisme : dinding sel tidak dapat ditembus oleh zat warna ini, butuh bahan penghantar ( alkohol, anilin atau aseton ) Jaringan dan mikroorganisme yang tidak dapat diwarnai ini mengambil kationik dari pewarna kontras ( biasanya merah).

Mikroorganisme yang pada pewarnaan memberikan warna biru-hitam disebut gram positif,

Mikroorganisme yang mengambil warna merah dari counterstaining disebut gram negatif.

Fiksasi : Formalin atau bahan fiksasi lainPemotongan : Blok Parafin 3-5 mikronReagen: - Crystal violet stain - Grams iodineHasilMikroorganisme gram positif: Biru/HitamFilamen dari jamur nocardia dan actinomyces: BiruMikroorganisme gram negatif: MerahInti: Merah

PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN PrinsipMycobacteria dilindungi oleh kapsul yang mengandung asam lemak rantai panjang (mycolic acid) yang mengakibatkan keadaan hydrophobictdk dpt diwarnai dgn gram

Tmbahkan agen lipophilic pada larutan basic fuchsin dan pemanasan, mengurangi ketegangan pada dinding sel dan meningkatkan penyerapan. : pewarna dapat menembus kapsul.Fiksasi : Formalin atau bahan fiksasi lain kecuali larutan karnoyPemotongan :Blok parafin 3-5 mikron3ReagenCarbol-fuchsinAcidified methylen blue

HasilMycobacteria: MerahLatar belakang: Biru pucat

MIKROSKOP ELEKTRON

PEMERIKSAAN PATOLOGI DURANTE OPERASII. FROZEN SECTION

II. TEKNIK IMPRINT

Frozen section adalah teknik pengelolaan jaringan dengan cara membekukan dengan cepat (quenching) suatu jaringan segar pada suhu -160C berikutnya memindahkan molekul air dengan proses sublimasi pada ruang vakum dengan suhu -40C. Kemudian blok diletakkan pada suhu ruangan dan difiksasi dengan uap air atau embedding di dalam medium yang sesuai Mendiagnosa keganasan pada durante operasi (on-table) Digunakan pada diagnosa dan penelitian enzim histokimia dimana enzim bersifat labil Digunakan pada metode immunofluorescent Digunakan pada metode immunohistokimia Digunakan pada diagnosa dan penelitian non-enzim histokimia, misalnya lemak, dan karbohidrat Digunakan pada beberapa metode didalam neuropatologi

Prosedur Frozen Section

Prosedur frozen section dapat dibagi dalam empat tahap, yaitu :Quenching (freezing)DryingFixation and embeddingSubsequent treatment Teknik ini banyak memiliki kelebihan yang dapat meminimalisasi :Kehilangan substansi terlarutPerubahan letak bagian-bagian selPerubahan zat kimia yang reaktrifDenaturasi proteinKehancuran dan inaktivasi enzimKelemahan : Keterbatasan waktu Keterbatasan pewarnaan khusus Ketiadaan konsultasi

Ketebalan harus diperhatikan secara visual. Berikut ini akan ditunjukkan gambaran Lung Adenocarcinoma dan Uterine Sarcoma dengan ketebalan pemotongan 6 micron dan 3 micron. Lung Adenocarcinoma 6 micron 3 micron

Uterin sarcoma 6 micron 3 micron

***********