LABORATORIUM FARMAKOGNOSI-FITOKIMIA PROGRAM STUDI FARMASI F-MIPA UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA I PRAKTIKUM IV KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS Disusun Oleh : Rizkia Fajrianoor J1E113046 Kelompok VI (Shift 2) PROGRAM STUDI S-1 FARMASI
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
LABORATORIUM FARMAKOGNOSI-FITOKIMIAPROGRAM STUDI FARMASI F-MIPAUNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT
LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA I
PRAKTIKUM IV
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
Disusun Oleh :
Rizkia Fajrianoor
J1E113046
Kelompok VI (Shift 2)
PROGRAM STUDI S-1 FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT
BANJARBARU
2015
LAPORAN PRAKTIKUMFITOKIMIA I
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
Oleh :
Rizkia Fajrianoor
NIM. J1E113046
Kelompok VI (Shift 2)
Tanggal Praktikum:16 November 2015Dikumpul Tanggal : 26 November 2015Nilai :
Mengetahui
(Siti Rahayu)
PROGRAM STUDI FARMASIFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURATBANJARBARU
2015
PRAKTIKUM IV
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
I. TUJUAN
Tujuan dari percobaan ini adalah untuk menjelaskan dan melakukan
identifikasi senyawa kimia dari tanaman bilaran tapah hasil praktikum
lapangan Desa Kelumpang Kecamatan Bungir Kabupaten Tapin Kalimantan
Selatan.
II. DASAR TEORI
Kromatografi dalam bidang kimia merupakan sebuah teknik analisis
yang digunakan untuk memisahkan sebuah campuran ataupun persenyawaan
kimia (Adnan, 1997). Kromatografi adalah suatu metoda untuk separasi
yang menyangkut komponen suatu contoh di mana komponen dibagi-
bagikan antara dua tahap, salah satu yang mana adalah keperluan selagi
gerak yang lain. Di dalam gas chromatography adalah gas mengangsur suatu
cairan atau tahap keperluan padat. Di dalam cairan chromatography adalah
campuran cairan pindah gerakkan melalui cairan yang lain, suatu padat, atau
suatu 'gel' agar. Mekanisme separasi komponen mungkin adalah adsorpsi,
daya larut diferensial, ion-exchange, penyebaran/perembesan, atau
mekanisme lain (David. 2001).
Dalam teknik kromatografi, sampel yang merupakan campuran dari
berbagai macam komponen ditempatkan dalam situasi dinamis dalam sistem
yang terdiri dari fase diam dan fase gerak. Semua pemisahan pada
kromatografi tergantung pada gerakan relatif dari masing-masing komponen
diantara kedua fase tersebut. Senyawa atau komponen yang tertahan lebih
lemah oleh fase diam akan bergerak lebih cepat daripada komponen yang
satu dengan lainnya disebabakan oleh perbedaan dalam adsorbsi, partisi,
kelarutan atau penguapan diantara kedua fase (Khopkar, 2010).
Pada hakekatnya KLT merupakan metode kromatografi cair yang
melibatkan dua fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase geraknya berupa
campuran pelarut pengembang dan fasa diamnya dapat berupa serbuk halus
yang berfungsi sebagai permukaan penyerap (kromatografi cair-padat) atau
berfungsi sebagai penyangga untuk lapisan zat cair (kromatografi cair-cair).
Fase diam pada KLT sering disebut penyerap walaupun berfungsi sebagai
penyangga untuk zat cair di dalam sistem kromatografi cair-cair. Hampir
segala macam serbuk dapat dipakai sebagai penyerap pada KLT, contohnya
silika gel (asam silikat), alumina (aluminium oksida), kiselgur (tanah
diatomae) dan selulosa. Silika gel merupakan penyerap paling banyak
dipakai dalam KLT (Iskandar, 2007).
Cara pemisahan dengan adsorbsi pada lapisan tipis adsorben yang
sekarang dikenal dengan kromatografi lapis tipis (Thin Layer
Chromatography atau TLC) telah dipakai sejak tahun 1983. Tekhnik ini
bertujuan untuk memisahkan komponen kimia secara cepat berdasarkan
prinsip adsorbsi dan partisi.TLC atau KLT dapat digunakan untuk
memisahkan berbagai senyawa seperti ion – ion anorganik, kompleks
senyawa-senyawa organik dengan dengan senyawa – senyawa anorganik,
dan senyawa-senyawa organik baik yang terdapat di alam maupun senyawa-
senyawa organik sintetik. Kelebihan penggunaan kromatografi lapis tipis
dibandingkan dengan kromatografi kertas adalah karena dapat dihasilkannya
pemisahan yang lebih sempurna, kepekaan yang lebih tinggi, dan dapat
dilaksanakan dengan lebih cepat (Adnan, 1997).
Kromatografi lapis tipis merupakan kromatografi adsorbsi dan
adsorben bertindak sebagai fase stasioner. Empat macam adsorben yang
umum digunakan adalah silica gel (asam silikat), alumina (aluminium
oxyde), kieselghur (diatomeus earth) dan selulosa. Dari keempat jenis
adsorben tersebut, yang paling banyak dipakai adalah silica gel karena
mempunyai daya pemisahan yang baik. Teknik standar dalam melaksanakan
pemisahan dengan KLT ini adalah sebagai berikut : pertama kali lapisan
tipis adsorben dibuat pada permukaan plat kaca atau plat lain, misalnya
berukuran 5 x 20 cm atau 20 x 20 cm. tebal lapisan adsorben tersebut dapat
bervariasi, tergantung penggunaannya. Larutan campuran yang akan
dipisahkan diteteskan pada kira – kira 1,5 cm dari bagian bawah plat tersebut
dengan menggunakan pipet mikro atau syringe. Zat pelarut yang terdapat
pada sampel yang diteteskan tersebut kemudian diuapkan lebih dulu.
Selanjutnya plat kromatografi tersebut dikembangkan dengan dengan
mencelupkannya pada tangki yang berisi campuran zat pelarut (solvent
system). Dengan pengembangan tersebut masing –masing komponen
senyawa dalam sampel akan bergerak ke atas dengan kecepatan yang
berbeda. Perbedaan kecepatan gerakan ini merupakan akibat terjadinya
pengaruh proses dengan KLT, mulai pemilihan adsorben sampai identifikasi
masing – masing komponen yang telah terpisah (Adnan, 1997).
Keuntungan pemisahan dengan metode kromatografi dibandingkan
pemisahan metode lainnya yaitu:
a. Dapat digunakan pada sampel atau konstituen yang sangat kecil (semi
mikro dan mikro)
b. Cukup selektif terutama untuk senyawa-senyawa organic multi
komponen
c. Proses pemisahan dalat dilakukan dalam waktu yang relative singkat
d. Seringkali murah dan sederhana, karena umumnya tidak memerlukan
alat yang mahal dan rumit (Underwood & Day, 1999).
Beberapa kelebihan dari KLT yaitu sebagai berikut :
1. Waktu pemisahan lebih cepat
2. Sensitif, artinya meskipun jumlah cuplikan sedikit masih dapat dideteksi.
3. Daya resolusinya tinggi, sehingga pemisahan lebih sempurna (Alimin,
2007).
Nilai Rf dipengaruhi oleh ketebalan lapisan, sebagian besar prosedur
pemisahan untuk analisis kualitatif menggunakan ketebalan lapisan 250 µm
dan untuk anlisis preparatif digunakan ketebalan sampai 5 mm. Kadang-
kadang digunakan kalsium sulfat sebagai adsorben untuk mengikat lapisan
pada lempeng. Silika gel adalah bahan yang paling banayak digunakan untuk
pemisahan sejumlah besar senyawa. Hal yang harus diperhatikan adalah
atmosfer ruang pemisahan harus jenuh dengan pelarut, karena menentukan
besar kecilnya nilai Rf. Hal ini dapat dilakukan dengan menggunakan wadah
sekecil mungkin dan menghubungkan dinding dengan lapis tipis (KLT) yang
terendam dalam pelarut (Hendayana, 2010).
Bila suatu molekul dikenakan sinar oleh spektrofotometer, maka akan
terjadi interaksi antara cahaya dan molekul tersebut yang mengakibatkan
molekul akan mengalami transisi elektron ketingkat energi yang lebih tinggi
dan saat molekul tersebut kembali ke tingkat energi yang semula akan
mengeluarkan emisi yang dapat ditangkap oleh spektrofotometer sebagai
data absorban. Spektrum serapan kandungan tumbuhan dapat diukur dalam
larutan yang encer dengan pembanding blanko pelarut serta menggunakan
spektrofotometer yang merekam otomatis. Senyawa dan warna diukur pada
jangka 200 nm sampai 400 nm, senyawa berwarna diukur pada jangka 400
nm sampai 700 nm. Panjang gelombang serapan maksimum dan minimum
pada spektrum serapan yang diperoleh direkam dalam nm. Demikian juga
kekuatan absorbansi (keterserapan). Bahan yang dignakan hanya dalam
jumlah sedikit diisi dengan 3 ml larutan. Dengan manggunakan sel khusus
hanya diperlukan sepersepuluh volume tersebut. Pengukuran spektrum yang
demikian itu penting pada identifikasi kandungan tumbuhan termasuk untuk
mendeteksi golongan senyawa tersebut. Pelarut yang banyak digunakan
untuk spektroskopi UV adalah etanol 95 %, metanol, air, heksan dan eter.
Alkohol mutlak niaga harus dihindari karena mengandung benzen yang
menyerap di daerah UV pendek. Pelarut seperti kloroform harus dihindari
karena menyerap kuat di daerah 200 – 600 nm, tetapi sangat cocok untuk
mengukur spektrum tumbuhan karotenida didaerah spektrum tampak (Stahl,
1969).
Analisis dengan KLT dapat dilakukan untuk mengidentifikasi simplisia
yang kelompok kandungan kimianya telah diketahui. Kelompok kandungan
kimia tersebut antara lain :
a. Alkaloid
b. Glikosida jantung
c. Flavanoid
d. Saponin
e. Minyak atsiri
f. Kumarin dan asam fenol karboksilat
g. Valepotriat
(Depkes RI, 1979).
Lempeng yang digunakan lempeng silika gel 254 P dengan ukuran 10
x 10 cm. Lempeng dapat berupa lempeng kaca atau lempeng lain yang
cocok. Untuk menentukan kelompok kandungan kimia suatu simplisia