LEUCEMIAS AGUDAS, CLASIFICACION, DIAGNOSTICO, TRATAMIENTO Y APORTACION DE LAS NUEVAS TECNICAS DIAGNOSTICAS. Ana Maria Gómez García FIR 3º año Análisis Clínicos
LEUCEMIAS AGUDAS, CLASIFICACION, DIAGNOSTICO, TRATAMIENTO Y APORTACION DE LAS NUEVAS TECNICAS DIAGNOSTICAS.
Ana Maria Gómez García
FIR 3º año Análisis Clínicos
LEUCEMIAS
LINFOBLASTICAS
AGUDASExpansión clonal de precursores hematopoyeticos
CRONICASExpansión de elementos maduros de MO
MIELOBLASTICAS
80% L.infantiles son LLA
15% son LMA
Restantes son indiferenciadas o cronicas(LMC, LMMC JUVENIL)
ANTECEDENTES HISTORICOS
� Virchow, 1845
� Ehrich, 1891 Citoquimica
� Farber, 1948 empleo Aminopterina
ESTRATEGIAS DE ESTUDIO DE LAS L.A:
L.A.
CLINICA
DATOS LABORATORIO
MORFOLOGIA
INMUNOFENOTIPO
CITOGENETICAFISH
BIOLOGIA MOLECULAR
Complejo diagnostico de las Leucemias en la Actualidad.
METODOS DE LABORATORIO PARA CARACTERIZAR BLASTOS LEUCEMICOS:
DEFINICION LEUCEMIA
� Proliferación neoplásica a partir de una célula hematopoyética inmadura que ha perdido la capacidad de diferenciarse.
� Disminución del tejido hematopoyetico normal en MO y posterior invasión de sangre periférica y otros órganos.
� Enfermedad oncológica más frecuente diagnosticada en menores de 15 años.
ETIOLOGIA
� La mayoría carecen de etiología clara� Factores predisponentes:� Factores genéticos� Anomalías cromosómicas� Inmunodeficiencias congénitas� Radiaciones ionizantes� Fármacos mielotóxicos.� Enfermedades inmunológicas� Virus
CLINICA
� SINTOMAS CONSTITUCIONALES : astenia, debilidad, perdida peso, sudoración nocturna.
� SINTOMAS POR INFILTRACION DE LA MO:
- desplazamiento serie roja : Anemia ( palidez)
- desplazamiento serie blanca : Fiebre (50%), infecciones 2ª a neutropenia.
- desplazamiento serie plaquetar : diátesis hemorrágicas
(petequias, sangrado) por la plaquetopenia.
CLINICA� SINTOMAS POR INFILTRACION DE ALGUN
ORGANO O TEJIDO:1. - 50-80% hepatoesplenomegalia2. - linfoadenopatias3. - 40% niños dolor óseo o articular4. - hipertrofia gingival5. - infiltración piel, mediastino y SNC (5-7% de
niños con L.A.)
DATOS DE LABORATORIO
� 95% Anemia normocítica, normocrómica y arregenerativa ( ret )
� Neutropenia.
� 90% Trombocitopenia.
� 16% carecen de blastos en SP.
El compromiso de 2 o mas series hematopoyeticas
MIELOGRAMA
CARACTERISTICAS SERICAS
� LDH elevada : Se correlaciona con la masa tumoral y la gravedad de la enfermedad
� Otras menos frecuentes� Hipercalcemia� Hiperuricemia� Aumento de transaminasas� Uremia
ADVIA 120: AUTOANALIZADOR HEMATOLOGICO
� Autoanalizador por citometria de flujo.� Tres sistemas analíticos:1Citómetro de flujo con lámpara diodo laser para canales: RBC/PLAQBASOLOBULARIDADRETICULOCITOS
2.Citometro de flujo con lámpara tungsteno para canal de PEROXIDASA.
3.Colorimetro para medir HEMOGLOBINA.
Autoanalizador hematologico:Graficas serie blanca
tamaño
mieloperoxidasa Complejidad nuclear
Graficas serie roja
CONCENTRACION DE Hb
TAMAÑO
Serie plaquetar VOLUMEN
DENSIDAD
DIAGNOSTICO DIFERENCIAL
� Reacciones leucemoides linfocitarias: mononucleosis infecciosa, Bordetella Pertussis….
� Hiperplasia linfoide madura en niños< 2 años.
� Otros: Anemia aplasica, linfoma, neuroblastoma, síndromes hemorrágicos (purpuratrombocitopenica aguda), síndrome mielodisplasico…
LEUCEMIAS AGUDAS.CLASIFICACION FAB
British Journal of Hematology, 1976 Aug ; 33(4): 451-8
Proposals for the Classification of the Acute Leukaemias
FRENCH-AMERICAN-BRITISH (FAB) CO-OPERATIVE GROUP
Bennett JM , Catovsky D, Daniel MT , Flandrin G, Galton DA, Gralnick HR, Sultan C,
Accepted for publication 26 January 1976
PROBLEMAS CON LA CLASIFICACION FAB:
•No todas las L. Agudas tienen 30% blastos (traslocaciones especificas).
•Excluye leucemias bifenotipicas.
•No incluye L. multilínea u otras poco frecuentes
•Excluye información esencial para tto y pronostico.
CLASIFICACION MORFOLOGICA
FAB (1976)
MIELOBLÁSTICA
M0 minimamente diferenciadaM1 Sin maduraciónM2 Con maduraciónM3 promielociticaM4 mielomonociticaM5 monoblásticaM6 eritroleucemiaM7 megacarioblástica
LINFOBLÁSTICA
L1L2L3
Tamaño celularMorfología NuclearNucleolosBasofilia citoplasmáticaVacuolas citoplasmáticas
L1: cels pequeñas
L2: cels pequeñas y grandes
L3: tipo Burkitt.
LEUCEMIA AGUDA CLASIFICACION OMS ( 2001)
� L.MIELOIDES AGUDAS� L.LINFOIDES AGUDAS
� L.MIELOIDE CRONICA� L.LINFATICA CRONICA
De precursor de cel B
De precursor de cel T
De Burkit
LEUCEMIA AGUDA CLASIFICACION OMS ( 2001)
CLASIFICACION OMS:
L. AGUDA 20% BLASTOS
MORFOLOGIA GENETICA FENOTIPO
EGIL (1995)Mas usada
LINFOBLASTICAS AGUDAS
BIFENOTIPICAS AGUDAS
MIELOBLASTICAS AGUDAS
CLASIFICACION INMUNOFENOTIPICA
Paneles de anticuerpos monoclonales empleados para el estudio inicial de las LAs (FITC/ PE/ ECD/ PC5/ PC7)
ESTUDIO INICIAL DE LA LEUCEMIA. ESTUDIO INICIAL DE LA LEUCEMIA. CITOMETRIA DE FLUJOCITOMETRIA DE FLUJO
cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34CD45/ CD4/ CD8/ CD3/ CD19CD10/ CD20/ CD45/ CD34/ CD19CD38/ CD22/ CD45/ HLADR/ CD19CD15/ CD13/ CD45/ CD33/ CD19KOR-SA/ 7.1/ CD45/ CD24/ CD19IP (DNA)/ pan-B
cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34CD45/ CD4/CD8/ CD3/ CD19CD7/ CD34/ CD3/ HLADR/ CD5CD7/ CD1a/ CD45/ CD33/ CD56CD7/ CD13/ CD45/ CD10/ CD2CD38/ TCRαβ/ CD45/ TCRγδ/ CD3
LLA de fenotipo B LLA de fenotipo T
INMUNOFENOTIPOS LEUCÉMICOS
LMA
cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34CD45/ CD4/ CD8/ CD3/ CD19CD15/ CD13/ CD45/ CD33/ CD34CD7/ CD117/ CD45/ CD34/ CD56CD65/ CD135/ CD45/ CD2/ CD34CD64/ CD11b/ CD45/ CD14/ CD16HLADR/ CD235a/ CD45/ CD34/ CD41
LLA DE FENOTIPO B LLA DE FENOTIPO T LMA
LEUCEMIAS NIÑO JESUS 2005
MIELOIDE M5
LMMJ
LMC
MIELOIDE M4
MIELOIDE M3
MIELOIDE M0
LLA T PRO TLLA T
INTERMEDIA
LLA PROB
LLA B PROB-PREB
MIELOIDE M0 CD56+
LLA B COMUN
MIELOIDESLINFOIDES
LEUCEMIAS LINFOBLÁSTICAS AGUDAS B (EGIL):
SUBTIPOS MARCADORES INMUNOLOGICOS
LAL B1 o pro-B
CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+,CD34+
LAL B2 o comun
CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+,CD34±CD 10+
LAL B3 o pre- B
CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+,
Cad µintracitoplasmatica
LAL B4 o maduros
CD79a+ y/o CD 22+ y/oCD19+,Ig Sup+
TdT +
CD34+
CD19+
CD22+
TdT+
CD34+/-
CD19+
CD22+
CD10++
IgM+
CD20++
CD19+
CD22+
CD10 +d
IgM+
Ig super+
CD20++
CD19+
CD22++
CD10+/-
5%
60%
15%
3%
FRECUENCIA
LEUCEMIAS LINFOBLÁSTICAS AGUDAS T (EGIL):
SUBTIPOS MARCADORES INMUNOLOGICOS
LAL T1 o pro-T
+ CD 7 Y CD3 citoplasmático, CD34+
LAL T2, pre-T
A lo anterior añadir + CD 2 y/o CD 5 y/o
CD8.
LAL T3, tímico-cortical
+ CD1a
LAL T4, madura
Demostración de la existencia de CD 3 de sup en ausencia de CD 1a.
TdT+
CD3+
CD34 +
CD7+
TdT+
CD3+
CD8+
CD5+
CD7+CD2+
TdT +
CD3+
CD2
CD5
CD7
CD4+
CD8+
CD1a+
TdT+
CD2+
CD5+
CD7+
CD3+
CD4 o
CD8
FRECUENCIA
15%
MASFRECUENTE
LEUCEMIAS LINFOBLASTICAS T
� Menos frecuentes ( 15% LAL pediátricas).� Mas agresivas (30% recaen a los dos
años).� Menos caracterizadas citogeneticamente
(25-50% presentan cariotipos alterados).� Menos información pronostica.� Ttos menos específicos.
CLASIFICACION INMUNOLOGICA-MORFOLOGICA
TIPO inmunolog
TdT HLADR
CD10CALLA
CD3 CD1a
CD7 CD2CD5CD8
CD19 CIg SIg Tipo
FAB
proB + + - - - - - + - - L1L2
COMUN + + + - - - - + - - L1L2
PreB + + ± - - - - + + - L1L2
B NEG + ± - - - - + - + L3
ProT + - ± +cit - + - - - - L1L2
PreT + - ± +cit - + + - - - L1L2
TIMICO CORTICAL
+ - - +cit POS + + - - - L1L2
TIMICO MADURO
- - - +sup NEG + + - - - L1L2
COMO SE REALIZA UN DIAGNOSTICO?
� ANALIZADORES AUTOMATICOS.
� EXTENSION DE SANGRE PERIFERICA.
� EXTENSIONES DE MEDULA OSEA
� CITOQUIMICA DE EXTENSIONES MO.
� CITOMETRIA DE FLUJO DEL ASPIRADO DE MEDULA OSEA PARA TIPIFICAR LA LEUCEMIA
� CITOGENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR
CONTRIBUCION DE LA CITOQUIMICA AL DIAGNOSTICO HEMATOLOGICO� La citoquímica estudia la composición qca. de las
células y hace posible detectar y precisar la localización de algunos principios inmediatos, enzimas y sust.inorgánicas (metales pesados).
� Compuestos:� Carbohidratos: reacción del ác peryódico de Shiff
o reacción del PAS.� Enzs oxidantes: reacción de las peroxidasas.� Enzs hidrolíticas: fosfatasas alcalinas, ácidas, ß-
glucuronidasa, muramidasa, N-acetil- ß-glucosaminidasa, esterasas inespecíficas.
� Componentes inorgánicos: hierro⇒azul de Prusia o de Perls.
CITOQUIMICA
Tipos FAB L1 L2 L3 MO M1 M2 M3 M4 M5 M6
PAS + GRANO
+ GRANO
- +
MPX - - - - + ++ +++ ++ -+ -
P acida +T +T -
Cloroacetatoesterasa
- - - - -+ ++ +++ -+ - -
ANAE
(� naftol acetato
estarasa)
+T +T - - - - - + ++ -