UNIVERSIDAD ANDINA
NSTOR CCERES VELSQUEZ
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CAP.: FARMACIA Y BIOQUMICA
ASIGNATURA: BioqumicaDICENTE: MORALES CCARITA, Juan Richard
SEMESTRE ACADMICO: VII
INFORME PRCTICO N 6Titulo: HGADO GRASO O ESTEATOSIS1.-
Objetivos: Inducir hgado graso utilizando un modelo animal.
Cuantificar los lpidos totales extrados del hgado de los animales
experimentales por medio de un mtodo colorimtrico. Observar las
diferencias de concentraciones de lpidos entre un animal normal y
uno al que se le indujo hgado graso.2.- Marco terico:
Es una acumulacin de grasas en las clulas del hgado. Los sntomas
del hgado graso suelen ser fatiga crnica, dolor en la parte
superior derecha del abdomen, malestar general y sensacin de
pesadez despus de las comidas aunque tambin es cierto que hay
muchos pacientes sin ningn sntoma.
El hgado graso (esteatosis) suele estar tambin un poco agrandado
aunque no suele producir dolor. El problema es que si no tratamos
esta enfermedad (esteatosis) algunos casos pueden terminar en una
cirrosis irreversible.
Aunque algunos casos de hgado graso se relacionan con el
alcoholismo la mayora se deben, hoy en da, a la obesidad y a altos
niveles de colesterol y triglicridos. La mayor incidencia de la
diabetes tipo dos (la que no necesita inyectarse insulina) tambin
favorece el desequilibrio metablico.
Por qu se produce la esteatosis heptica?La causa de la
acumulacin de grasa en el hgado no se conoce con certeza, pero hay
algunos mecanismos que se han demostrado muy importantes en el
desarrollo de la enfermedad:
Resistencia a la insulina, responsable del sndrome metablico,
tan frecuente en el hipertenso. Estrs oxidativo. Liberacin de
citoxinas. El hallazgo de hgado graso es extremadamente frecuente.
Esta enfermedad se asocia a los siguientes factores de riesgo:
Obesidad
Diabetes
Hipercolesterolemia
Hipertrigiceridemia
Sexo femenino
Produce sntomas? El hgado graso frecuentemente es asintomtico y
solo es descubierto a raz de una ecografa abdominal.
La otra forma de llegar al diagnstico es a travs del hallazgo de
elevaciones de las transaminasas descubiertas en un anlisis de
sangre realizado por cualquier motivo.
Algunas personas se quejan de dolor abdominal leve a moderado en
el hipocondrio derecho.
Slo un pequeo porcentaje de pacientes presentan sntomas de
insuficiencia heptica, como por ejemplo trastorno de la coagulacin,
aparicin de ictericia o retencin de lquido en el abdomen.
3.- Mtodos:Observacin, experimentacin
4.- Materiales:
Bao Mara.
Mechero.
Gradillas con tubos de ensayo
Vaso de precipitado con agua
Aceite vegetal
Solucin de Sudn III en frasco cuentagotas
Tinta roja en frasco cuentagotas
Solucin de Hidrxido sdico al 20%.
ter o cloroformo.
5.- Procedimiento:Para la realizacin de este trabajo de
laboratorio se utilizaron dos cobayos, de las cuales una fue
inyectada intraperitonealmente con 0.5ml de una solucin compuesta
de tetracloruro de carbono y aceite mineral en partes iguales,
tomando a la misma como rata experimental para la induccin de hgado
graso.
El segundo cobayo fue tomado como cobayo control. 24 horas
despus las ratas fueron sacrificadas y se les extrajo a ambas el
hgado, del cual se obtuvieron y pesaron pequeas piezas que a
continuacin se maceraron en presencia de cloroformo-metanol (3:1)
para extraer los lpidos.
Del extracto de lpidos se tom una gota para llevar a cabo la
hidrolizacin de los acil gliceroles en la solucin utilizando para
esto 0.2 ml de cido sulfrico concentrado y calor por 10 minutos,
luego de enfriar la solucin se agreg fosfovainillina y se incub a
37C por 15 minutos, finalmente se leyeron en el espectrofotmetro a
540nm los tubos de las dos muestras (rata experimental y control)
obteniendo una absorbancia de 0.061 y 0.023 (respectivamente). La
curva de calibracin se prepar utilizando soluciones patrn de lpidos
de 250, 500, 750 y 1000 mg/dl y utilizando el mismo mtodo
colorimtrico utilizado para la preparacin de las muestras.
PESOCOLORCONSISTENCIA
COBAYO CONTROLnormal normo colorContenido biliar:
normal.consistencia: normal
Superficie heptica: normal, presenta rugosidades.
COBAYO CON CCl4ligeramente aumentadonormo colorContenido biliar:
aumentado (1.5 ml.)
consistencia: rgidasuperficie heptica: lisa, presenta escasas
rugosidades
6.- Conclusiones la esteatosis es la alteracin morfolgica ms
frecuente, hallable en un 80% de los pacientes estudiados. Entre
las grasas se encuentran triglicridos en una concentracion 10 veces
superior a lo habitual. Es una consecuencia directa de la oxidacin
del etanol en el hgado, 7.- Cuestionario:
1. Por que resulta conveniente la utilizacin de ratas hembra en
el experimento de induccin de hgado graso por etionina?
Existe diferencia sexual en la respuesta de las ratas a la
intoxicacin con etionina. Tambin las ratas hembras son menos
susceptibles a los efectos agudos de la deficiencia de colina. En
trabajos reportados anteriormente por nosotros se haba determinado
que en el hgado graso inducido por etionina en ratones adultos,
machos y hembras, no se oberv diferencias atribubles al sexo. El
presente trabajo se realiz con el objetivo de determinar la
progresin del hgado graso causado por etionina en ratones hembras y
machos lactantes.
2. Por qu mecanismos el etanol induce el hgado graso?
Aparecen diferentes grados de dao heptico ante la exposicin a
dosis similares de alcohol, se ha postulado que el avance de formas
leves a formas graves de dao heptico alcohlico exige losefectos
acumulados de varias noxas separadas (es decir, mltiples injurias).
Por falta de tiempo, en estaexposicin se tratar la manera como el
alcohol daa los hepatocitos, que son las clulas predominantesen el
hgado; pero es importante reconocer que otras clulas,
particularmente las clulas de Kpffer,macrfagos residentes en el
hgado, y las clulas estrelladas, que producen el tejido fibrtico
que se acumula en los hgados cirrticos, tambin se alteran con la
exposicin al alcohol.
De acuerdo con esta teora, el etanol se metaboliza a
acetaldehdo, producto intermedio txico, por accin de enzimas del
hepatocito (diapositiva 10). En condiciones de exposicin
infrecuente al etanol, ste se oxida y forma acetaldehdo,
predominantemente por accin de la alcohol deshidrogenasa (ADH)
citoslica,y el acetaldehdo resultante es destoxificado rpidamente
convirtindose en acetato por accin de la aldehdo deshidrogenasa
(ALDH) mitocondrial. El acetato, a su vez, pasa a ser un sustrato
para el metabolismo intermediario y genera CO2 y H2O. Los
polimorfismos de ADH/ALDH y los frmacos (Antabuse) que causan la
sobreactividad de la ADH respecto a la ALDH, se han asociado con
aumento del dao heptico en las personas, lo que apoya la
importancia del acetaldehdo como sustancia hepatotxica
3. Por qu la deficiencia de cidos pantotenicos pueden determinar
hgado graso?
El cido pantotnico tambin se conoce como vitamina B5. El cido
pantotnico se forma de -alanina y cido pantoco. El pantotenato se
requiere para la sntesis de la coenzima A (CoA), y es un componente
del dominio de la protena transportadora de grupos acilos (ACP) de
la sintasa de cidos grasos. El pantotenato, por lo tanto, se
requiere para el metabolismo del ciclo del TCA de la va de los
carbohidratos y de todas las grasas y protenas. Se han identificado
al menos 70 enzimas que requieren CoA o los derivados de ACP para
su funcin.
La deficiencia del cido pantotnico es extremadamente rara debido
a su extensa distribucin en los cereales integrales, las legumbres
y la carne. Los sntomas de la deficiencia del pantotenato son
difciles de determinar puesto que son sutiles y se asemejan a los
de otras deficiencias de la vitamina B.
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