Aplikasi kultur jaringan

Aplikasi kultur jaringan

Pengertian • Kultur jaringan adalah suatu teknik isolasi bagian-bagian

tanaman, seperti jaringan, organ ataupun emrio dengan cara mengisolasi bagian tanaman dalam kondisi aseptik sehingga dapat memperbanyak diri dan beregenerasi menjadi individu baru yang utuh

• Teknik kultur jaringan didasari oleh konsep totipotensi sel yang artinya total genetic potential atau setiap sel dari tubuh multisel memiliki potensi memperbanyak diri dan berdiferensiasi menjadi tanaman lengkap

Aplikasi anggrek bulan dengan kultur jaringan

• Teknik pertama yang digunakan pada perbanyakan vegetatif anggrek adalah kultur meristem

• Teknik ini kemudian dikembangkan untuk perbanyakan vegetatif anggrek yaitu dengan cara mengkulturkan meristem, menumbuhkannya, membelahnya menjadi beberapa bagian, msing-masing bagian dikulturkan, sub kultur ini dilakukan berulang-ulang

Langkah- langkah kultur jarinagn pada tanaman anggrek bulan (Phalaenopsis).

Alat • Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) • Cawan petri• Lampu spiritus• Gelas piala• Pipet + Pipet filler  • Alat-alat tanam (pinset, tangkai skapel dan pisay skapel)

Bahan• Daun muda anggrek

phalaenopsis• Fungisida benlate• Bakterisida Agrimycin• Ca-hipoklorit• HgCl2• Air steril• Medium MS padat

Prosedur Kerja1) Menyiapkan alat-alat dan bahan-

bahan yang akan digunakan2) Mencampurkan larutan stok hara

makro, mikro, Fe-chelat, vitamin dan hormon sesuai kebutuhan ke dalam erlenmeyer sambil digoyangkan agar larutan dapat homogen

3) Menambahkan gula dalam larutan media tersebut kemudian menera larutan tersebut dengan aquades steril.

4) Melakukan pengukuran pH5) Memasukkan pemadat media (agar 7gr/L atau gelrite

2gr/L) ke dalam larutan media. Setelah itu media dapat langsung dipanaskan dengan menggunakan hotplate atau dipanaskan di atas kompor gas

6) Setelah larut, menuangkan media tersebut ke dalam botol-botol media yang telah dipersiapkan

7) Memasukkan botol-botol tersebut ke dalam autoclaf dan disterilisasi dengan suhu 121°C dengan tekanan 1,5 kg/cm2 selama 20-30 menit.

8) Menyimpan media yang sudah disterilisasi di dalam ruang penyimpanan media ber-AC (suhu 24 - 26°C) selama 3 hari sebelum digunakan untuk memastikan bahwa media tersebut tidak terkontaminasi

angkah selanjutnya !!11. Sterilisasi alat dan bahan dengan LAFC yaitu di laminar flow dan

menggunakan alat-alat yang juga steril.

2) Inisiasi adalah pengambilan eksplan dari bagian tanaman yang akan dikulturkanLangkah-langkahnya adalah :• Mengambil 2 helai daun muda anggrek phalaenopsis lalu di

cuci dengan air mengalir• Merendam daun tersebut di larutan Benlate (1g/L) selama 30

menit• Membilas daun tersebut dengan air steril• Merendam daun anggrek phalaenopsis dalam larutan

Agrimycin (1 g/L) selama 3 menit• Membilas daun tersebut beberapakali dengan air steril• Merendam daun dalam larutan Ca-hipoklorit 1,0% • Masukkan daun yang di rendam kedalam LACF selama 30

menit• Membilas daun dengan air, masing-masing 5 menit• Merendam daun dengan HgCl2 0,2% selama 15 menit• Membilas daun dengan air steril 3 ali, masinh-masing 5

menit• Meletakkan daun di cawan petri• Memotong daun berbentuk segi empat kira-kira 0,5 cm2 • Mengkultur pada medium yang telah disiapkan

3) Multiplikasi• Multiplikasi adalah kegiatan memperbanyak calon tanaman dengan

menanam eksplan pada media.• Langkah :

– Eksplan dikeluarkan dari botol kultur jaringan lalu dimasukan ke dalam cawan petri.

– Eksplan dipotong-potong (split) dengan menggunakan scalpel dan pinset yang sebelumnya telah digarang.

– Potongan tadi dimasukan ke dalam media multiplikasi (MS0 + (0,5-2mg/l BAP)).

4) AklimatisasiAklimatisasi adalah kegiatan memindahkan eksplan keluar dari ruangan aseptic ke bedeng