acara 2 fix

5/28/2018 acara 2 fix

1/21

29

II. ANALISA MIKROBIOLOGI UNTUK BAKTERI DAN FUNGIA. Pendahuluan

1. Latar BelakangDalam bidang ilmu mikrobiologi, untuk dapat menelaah bakteri

khususnya dalam skala laboratorium, maka terlebih dahulu kita harus

dapat menumbuhkan mereka dalam suatu biakan yang mana di dalamnya

hanya terdapat baktri yang kita butuhkan tersebut tanpa adanya

kontaminasi dari mikroba lain. Biakan yang semacam ini biasanya dikenal

dengan istilah biakan murni. Untuk melakukan hal ini, haruslah di

mengerti jenis-jenis nutrien yang disyaratkan bakteri dan juga macam

ligkungan fisik yang menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhan

bakteri tersebut. Selain teknik pertumbuhan bakteri atau teknik isolasi di

atas, dikenal juga adanya teknik isolasi mikroba yaitu inokulasi yang

merupakan suatu teknik pemindahan suatu biakan tertentu dari medium

yang lama ke medium yang baru dengan tujuan untuk mendapatkan suatu

biakan yang murni tanpa adanya kontaminasi dari mikroba yang lain yang

tidak diiinginkan.

Keanekaragaman dari mikroorganisme di alam sangat menarik

perhatian manusia. Mikroorganisme tersebut ada yang menguntungkan

dan ada pula yang merugikan manusia. Rasa keingintahuan yang ada pada

manusia untuk mengetahui tentang jenis, sifat dan keuntungannya bagi

manusia menyebabkan manusia melakukan usaha-usaha pembiakan

terhadap mikrobia tersebut. Usaha pembiakan kali ini dilakukan pada

media NA dan PDA. Setalah tumbuk mikroba yang diinginkan kemudain

di analisa. Analisa yang dilakukan antara lain identifikasi morfologi,

isolasi, inokulasi, purifikasi dan pewarnaan gram.

Dalam praktikum ini dilakukan isolasi mikrobiota dengan cara

pengenceran (dilution),yaitu pengenceran bertingkat. Tujuan pengenceran

bertingkat adalah untuk memperkecil jumlah mikroba yang tersuspensi

dalam cairan. Selain itu kali ini akan dilakukan isolasi dan menghitung

5/28/2018 acara 2 fix

2/21

30

jumlah koloni bakteri dan jamur, purifikasi, dan identifikasi pada bakteri

dan jamur berdasar kenampakan morfologi koloninya serta pewarna gram.

Dilihat dari morfologinya, bakteri memiliki beberapa bentuk yaitu batang,

koma, dan spiral. Bentuk jamur mirip dengan tumbuhan, tetapi tidak

memiliki daun dan akar yang sejati serta tidak mempunyai klorofil

sehingga dia tidak dapat melakukan fotosintesis.

2. Tujuan PraktikumTujuan dari praktikum acara ketiga Analisa Mikrobiologi untuk

Bakteri dan Fungi antara lain:a. Mahasiswa mam pu mengisolasi dan menghitung jumlah koloni jamur

dan bakteri

b. Mahasiswa mam pu melakukan purifikasi jamur dan bakteric. Mahasiswa mam pu membedakan jamur dan bakteri bedasar

kenampakan mofologi koloninya.

d. Mahasiswa mam pu melakukan pengukuran massa pada bakteri danfungi serta analisa deferinsiasi pada bakteri.

B. Tinjuan PustakaFungi memiliki tipe sel eukariotik, dapat berkembangbiak baik secara

seksual maupun aseksual. Fungi ada yang bersifat parasit dan

menguntungkan, dapat hidup pada berbagai habitat. Perannya di alam dapat

berfungsi sebagai decomposer, mikrosimbion, maupun pathogen

(Campbell 2003).

Bakteri adalah mikroorganisme yang paling berkelimpahan dari semua

organisme. Mereka tersebar (berada di mana-mana) di tanah, air, dan sebagai

simbiosis dari organisme lain. Banyak patogen merupakan bakteri.

Kebanyakan dari mereka kecil, biasanya hanya berukuran 0,5-5 m, meski ada

jenis dapat menjangkau 0,3 mm dalam diameter (Thiomargarita). Mereka

umumnya memiliki dinding sel, seperti sel hewan dan jamur, tetapi dengan

komposisi sangat berbeda (peptidoglikan). Banyak yang bergerak

menggunakan flagela, yang berbeda dalam strukturnya dari flagela kelompok

lain (Martinko 2005).

5/28/2018 acara 2 fix

3/21

31

Kultur murni diperlukan karena semua metode septis mikrobiologis

yang digunakan untuk menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme,

termasuk penelaahan ciri-ciri cultural, morfologis, fisiologis, maupun

serologis memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam

mikroorganisme saja (Suhardi, dkk 2008). Biakan murni bakteri adalah

biakan yang terdiri dari satu spesies bakteri yang ditumbuhkan dalam medium

buatan. Medium buatan tersebut berfungsi sebagai medium pertumbuhan.

Pada medium ini, bakteri dapat tumbuh dan berkembang biak. Bahan dasar

yang digunakan untuk medium pertumbuhan ini adalah agar-agar. Untuk

bakteri heterotrof, medium dilengkapi dengan air dan molekul makanan

misalnya gula, sumber nitrogen, dan mineral (Purwoko 2009).

Isolasi adalah cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba

tertentu dari lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni atau biakan

murni. Kultur murni adalah kultur yang sel-sel mikrobanya berasal dari

pembelahan dari satu sel tunggal. Biakan murni diperlukan karena semua

metode mikrobiologis yang digunakan untuk menelaah dan mengidentifikasi

mikroba, termasuk penelaahan ciri-ciri kultur, morfologis, fisiologis, maupun

serologis memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam mikroba

saja (Waluyo 2005).

Isolasi mikrobia pada prinsipnya adalah memisahkan suatu jenis

mikrobia dengan jenis mikrobia lainnya dengan asal mikrobia yang terdiri dari

berbagai macam spesies. Proses pemisahan atau pemurnian dari

mikroorganisme lain perlu dilakukan karena semua pekerjaan mikrobiologis,

misalnya telaah dan identifikasi mikroorganisme, memerlukan suatu populasi

yang hanya terdiri dari satu macam mikroorganisme saja. Pertumbuhan

bakteri lebih banyak dijumpai pada intensitas pengenceran 10-8, sedangkan

pertumbuhan fungi banyak dijumpai pada intensitas pengenceran 10-4

(Muharni 2009).

Proses isolasi fungi dilakukan memakai medium PDA

(Potato Dextrose Agar) yang terdiri dari kentang 20%, dektrosa 2% dan agar

2%. Media dibuat pH 5,0 untuk mengurangi kemungkinan kontaminasi oleh

5/28/2018 acara 2 fix

4/21

32

bakteri pada saat isolasi. Fungi lebih tahan terhadap pH suasana asam jika

dibandingkan dengan bakteri atau aktinomycetes, sehingga dengan cara ini

juga telah terjadi seleksi terhadap mikroba yang sedang diisolasi

(Saryono 2002).

Bakteri merupakan mikrobia uniseluler yang termasuk dalam kelas

Shizomycetes. Bakteri tersebar luas di alam. Ada yang hidup bebas, bersifat

saprofitik, parasit, atau patogen pada manusia, binatang atau tumbuhan. Ada

beberapa jenis bakteri bersifat fotosintetik. Ada tiga bentuk dasar bakteri,

yaitu bentuk bulat, batang, dan melilit (Irianto 2007).Purifikasi bertujuan untuk mendapatkan satu spesies dalam satu tabung

pemeliharaan kultur. Hal ini perlu dilakukan karena identifikasi

mikroorganisme memerlukan suatu populasi yang hanya terdiri dari satu.

Langkah pemurnian adalah koloni dengan karakter morfologi tertentu dapat

dipisahkan satu dengan lainnya dengan cara mengambilnya dengan ose.

Digoreskan pada media nutrien agar atau pemurnian yang lain. Pengambilan

dengan ose dapat memisahkan koloni tunggal dengan yang lainnya.

Mengambil koloni dengan karakter morfologi tertentu dengan cara

mengambilnya dengan jarum enten kemudian menaruhnya pada satu titik

media PDA pada cawan petri. Jarum ose dan jarum enten yang digunakan

untuk memindahkan sedikit biakan bakteri dan fungi ke gelas obyek harus

disterilisasi dengan cara dipanaskan diatas lampu bunsen agar terbebas dari

mikroba (steril), begitu pula dengan bibir cawan petri tempat koloni fungi

(Suria 2005).

Metode pengecatan pertama kali ditemukan oleh Christian gram pada

tahun 1884. Dengan metode ini, bakteri dapat dikelompokkan menjadi dua,

yaitu bakteri gram positif dan gram negatif yang didasarkan dari reaksi atau

sifat bakteri terhadap cat tersebut. Reaksi atau sifat bakteri tersebut ditentukan

oleh komposisi dinding selnya sehingga pengecatan gram tidak bisa dilakukan

pada mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti Mycoplasma

sp. (Tryana ST 2008).

5/28/2018 acara 2 fix

5/21

33

Pengecatan gram dilakukan dalam 4 tahap. Yaitu

a. Pemberian cat warna utama (cairan Kristal violet) berwarna ungub. Pengintensifan cat warna dengan penambahan larutan mordanc. Pencucian (dekolarisasi) dengan larutan alcohol asamd. Pemberian cat lawan yaitu cat warna safranin

Banyak seenyawa organic berwarna (zat warna) digunakan untuk

mewarnai mikroorganisme untuk pemeriksaan mikroskopis dan telah

dikembangkan prosedur pewarnaan gram untuk: Mengamati dengan baik

morfologi mikroorganisme secara kasar, Mengidentifikasi bagian-bagian

structural sel mikroorganisme, Membantu mengidentifikasi atau membedakan

organism yang serupa ( Suriawieia 2002).

C. Metodologi Praktikum1. Waktu dan Tempat Praktikum

Praktikum Mikrobiologi Pertanian acara pertama ini dilaksanakan

pada hari Rabu tanggal 30 Oktober 2013 pukul 08.50-10.40 WIB di

Laboratorium Biologi Tanah, Fakultas Pertanian, Universitas Sebelas

Maret.

2. Alata. Lampu Bunsen

b. Alumunium foilc. Jarum osed. Dryglaskie. Tabung reaksif. Pipetg. Erlenmayerh. Incubatori. Cawan petri

j. Kertas labelk. Hand colony counterl. Spidolm. Jarum inokulasi

5/28/2018 acara 2 fix

6/21

34

n. Kacca preparato. Bak pewarna

p. Mikroskopq. Pinset

3. Bahana. Sampel tanah

b. Mikrobia dari bagian tubuhc. Sampel buah segard. Sampel buah busuke. Sampel air mineralf. Sampel kertasg. Alcoholh. Media NAi. Media PDA

j. Aquadestk. Garam fisiologisl. Seperangkat pewarna gram (ungu Kristal, larutan iodium gram,

alcohol 95%, safranin)

4. Cara Kerjaa. Bakteri

1)Identifikasi, Perhitungan Populasi, dan Purifikasia)Memasukkan 10 gram bahan kedalam 90 ml garam fisiologis,

lalu digojog hingga homogeny (pengenceran 10-1)

b)Mengambil 1 ml larutan 10-1, memasukkan ke dalam 9 ml garamfisiologis, lalu digojok hingga homogeny (pengenceran 10-2)

c)Melakukan hal seperti diatas hingga pengenceran 10-5d)Mengisolasi mikroba kedalam media NA dengan cara berikut:

i. Mengambil 0,1 ml larutan 10-5 dan menuangkan kedalammedia NA, lalu meratakan larutan tersebut keseluruh media

menggunakan dryglasky steril.

ii. Melakukan hal yang sama terhadap semua pengenceran

5/28/2018 acara 2 fix

7/21

35

e)Menginkubasi isolate-isolat tersebut pada suhu kamar, denganposisi petridish terbalik, selama 3 hari, kemudian amati koloni-

koloni dari mikrobia yang tumbuh.

f) Menghitung jumlah koloni yang tumbuh menggunakan handcolony counter dan mengidentifikasi morfologi koloni yang

terbentuk.

g)Menggambil koloni untuk ditumbuhkan lagi ke media agarmiring dengan metode zig-zag

h)Menumbuhkan satu koloni bakteri dalam petridish denganmetode goresan kuadran (streak quadrant)

i) Melakukan isolasi mikroba dari bahan sampel lainnya.2)Pewarnaan Gram

a)Melakukan konfirmasi (penyesuaian) antara mikroba yangtumbuh pada isolasi yang pertama dengan terakhir.

b)Menyiapkan olesan bakteri pada kaca preparat dan memfiksasidengan panas.

c)Meletakkan kaca preparat diatas rak kawat pada bak pewarna.d)Menggenangi olesan bakteri dengan pewarna primer (ungu

Kristal) selama 1 menit.

e)Memiringkan kaca preparat menggunakan pinset dan membuangkelebihan ungu Kristal dan membilas menggunakan aquadest.

f) Meniriskan kaca preparat dan meletakkan diatas kawat pada bakpewarna.

g)Menggenangi olesan dengan iodium gram selama 2 menit.h)Memiringkan kaca preparat untuk membuang kelebihan iodium

dan bilas dengan aquades

i) Mencuci olesan dengan pemucat warna yaitu alcohol 95%,meneteskan tetes demi tetes selama 30 detik sampai zat unggu

Kristal tidak terlihat.

j) Mencuci dengan aquadest kemudian meniriskan danmengembalikan diatas rak kawat pada bak pewarna.

5/28/2018 acara 2 fix

8/21

36

k)Menggenangi olesan dengan pewarna tandingan yaitu safraninselama 30 detik, dan memiringkan kaca preparat untuk

membuang kelebihan safranin kemudian membilas dengan

aquades.

l) Meniriskan kaca preparat dan menyerap kelebihan airmenggunakan kertas serap, kemudian mengamati dengan

mikroskop.

b. Fungi1)Melakukan teknik pengenceran bertingkat seperti pada poin a,

namun menggunakan media PDA

2)Menginkubasi isolate-isolat tersebut pada suhu kamar, denganposisi petridish terbalik, selama 3 hari kemudian amati koloni-

koloni dari mikrobia yang tumbuh

3)Menghitung jumlah koloni yang tumbuh dengan hand colonycounter dan mengidentifikasikan morfologi koloni yang terbentuk

4)Mengambil 1 koloni untuk ditumbuhkan lagi kemedia agar miringdengan metode zig-zag

5)Menumbuhkan satu koloni bakteri dalam petridish dengan metodegoresan kuadran (streak quadrant)

6)Melakukan identifikasi koloni mikrobia yang tumbuh7)Melakukan konfirmasi (penyesuaian) antara mikrobia yang tumbuh

pada isolasi yang pertama dengan yang terakhir.

8)Melakukan isolasi mikrobia dari bahan sample yang lainnya.

5/28/2018 acara 2 fix

9/21

37

D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan1. Hasil Pengamatan

Tabel 2.1 Hasil Isolasi dan Identifikasi Mikroba

No MediaAsal

MikrobaFoto Hasil Pengamatan Keterangan

1. PDA Sayur

Tanah 10-4

Kertas

AirMineral

Ukuran: besar

Bentuk: rhizoidElevasi: flatMargin: sertatePermukaan: kerutanOpacity: hampir

trasparan sedikitdistorsiChromagenesis:putih kusamJumlah koloni: 28

Ukuran: besarBentuk: circularElevasi: umbonateMargin: entirePermukaan: kasarOpacity: buramChromagenesis:

hitamJumlah koloni: 8

Ukuran: largeBentuk: irregular

Elevasi: umbonteMargin: serrate

Permukaan: kasarOpacity: buramChromagenesis:putih kecoklatanJumlah koloni: 13

Ukuran: kecilBentuk: irragulerElevasi: convexMargin: lobate

Permukaan:berkontur

Opacity: transparanChromagenesis:putih kekuninganJumlah koloni: 101

Tidak ada

kontaminasi

Tidak adakontaminasi


AdaKontaminasi

5/28/2018 acara 2 fix

10/21

38

2. NA Sayur

Tanah 10-4

Kertas

AirMineral

Ukuran: besarBentuk: irraguler

Elevasi: raisedMargin: berombakPermukaan: halusOpacity: hampirtransparan sedikitdistorsiChromagenesis:putih tulangkekuninganJumlah koloni: 25

Ukuran: sedang

Bentuk: circularElevasi: flat

Margin: lobatePermukaan: halusOpacity: buramChromagenesis:putih kekuningan

Jumlah koloni: 18

Ukuran: besarBentuk: irregulerElevasi: flat

Margin: lobatePermukaan: halus

Opacity: buramChromagenesis:putih tulangkekuninganJumlah koloni: 2

Ukuran: smallBentuk: circularElevasi: convex

Margin: entirePermukaan: halusOpacity: buramChromagenesis:putih kecoklatanJumlah koloni: 132


Tidak ada

kontaminasi



Sumber: Logbook

5/28/2018 acara 2 fix

11/21

39

Tabel 2.2 Hasil Inokulasi Mikroba pada Media Miring

No. Media Asal Mikroba Foto Keterangan

1. PDA Sayur

Tanah 10-4

Kertas

Air mineral


Tidak ada

kontaminasi

Tidak ada

kontaminasi

Ada kontaminasi

2. NA Sayur

Tanah 10-4

Tidak ada

kontaminasi

Tidak ada

kontaminasi

5/28/2018 acara 2 fix

12/21

40

Kertas

Air mineral

Tidak ada

Kontaminasi

Tidak ada

kontaminasi

Sumber: Logbook

Tabel 2.3 Hasil Purifikasi Streak Kuadran Mikroba

No MediaAsal

MikrobaFoto

HasilPengamatan

Keterangan

1. PDA Sayur

Tanah 10-4

Kertas

Ukuran: large

Bentuk: filamenElevasi: raisedMargin: felamePermukaan: halus

Opacity: buramChromagenesis:putih kapas

Ukuran: smallBentuk: rizoidElevasi: berbukit-bukitMargin: sepertibenangPermukaan: kasarOpacity: buramChromagenesis:hitam

Ukuran: small

Bentuk: circularElevasi: flatMargin: sepertiwolPermukaan: halus

Opacity: buramChromagenesis:

coklat keabuanUkuran: -

Tidak ada

kontaminasi


Tidak ada

kontaminasi

5/28/2018 acara 2 fix

13/21

41

AirMineral

Bentuk: -Elevasi: -

Margin:-Permukaan:-Opacity: -Chromagenesis:-

Adakontaminasi

2. NA Sayur

Tanah 10-4

Kertas

Ukuran: smallBentuk: bundardendan tepiantimbulElevasi: cembung

Margin: brlekukPermukaan:kerutan

Opacity: buramChromagenesis:putih basah

Ukuran: besar

Bentuk: takberaturan danmenyebarElevasi: flat

Margin:bercabangPermukaan: licin

Opacity: buramterdisrosi

Chromagenesis:putih susu

Ukuran: smallBentuk: circular

Elevasi: timbulMargin: licinPermukaan:bundar dengantepian timbul

Opacity: buramChromagenesis:kuning

Ukuran: besar


Tidak ada

kontaminasi


Tidak ada

5/28/2018 acara 2 fix

14/21

42

AirMineral

Bentuk: bundardengan tepian

timbulElevasi: timbulMargin :licinPermukaan:timbulOpacity: bening(transparan)Chromagenesis:putih bening

kontaminasi

Sumber: Logbook

Tabel 2.4 Hasil Pewarnaan Gram

Asal Mikroba Foto KeteranganBakteri Sayur Penampakan bakteri

dibawah mikroskop

menghitam karena

terbakar

Sumber: Logbook

2. PembahasanMenurut waluyo (2005) isolasi merupakan cara untuk

memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari lingkungannya.

Tujuannya adalah untuk memperoleh kultur murni atau biakan murni.

Kultur murni adalah kultur yang sel-sel mikrobanya berasal dari

pembelahan dari satu sel tunggal. Biakan murni diperlukan karena semua

metode mikrobiologis yang digunakan untuk menelaah dan

mengidentifikasi mikroba, termasuk penelaahan ciri-ciri kultur,morfologis, fisiologis, maupun serologis memerlukan suatu populasi yang

terdiri dari satu macam mikroba saja

Purifikasi mikroba adalah suatu cara atau mekanisme untuk

mendapatkan mikroba yang dibutuhkan atau diinginkan. Identifikasi

mikroba adalah cara untuk mempelajari secara detail karakter fisik,

kimiawi, dan biologis mikroba sehingga dapat diketahui dan

dimanfaatkan secara optimal. Identifikasi akan menimbulkan suatu

5/28/2018 acara 2 fix

15/21

43

karakteristik sifat dari masing-masing mikroorganisme dan bertujuan

untuk membedakan morfologi dari fungi dan bakteri. Tujuan dari

purifikasi dan identifikasi bakteri dan jamur adalah untuk mendapatkan

bakteri dan jamur yang diinginkan dan untuk membedakan morfologi

antara jamur dan bakteri.

Menurut Wistreich (2003), faktor yang mempengaruhi keberhasilan

isolasi suatu mikroorganisme antara lain:

a. Media biakan. Mikroorganisme memerlukan nutrisi untuk tumbuh yangberbeda, misalnya medium NA untuk bakteri dan medium PDA untuk

fungi.

b. Suhu, pengaruh suhu berhubungan dengan akktivitas enzim. Suhurendah menyebabkan aktiivtas enzim menurun dan jika suhu terlalu

tinggi dapat mendenaturasi protein enzim.

c. Tekanan osmotik. Keberadaan mikroorganisma dilingkungan dapatdipengaruhi kepekatan suspensi/ cairan di lingkungan. Bila kepekatan

suspensi di lingkungan tinggi makanisi sel akan ke luar. Sebaliknya

kepekatan suspensi di lingkungan rendah maka akan terjadi pergerakan

massa cair ke dalam sel.

d. Sinar UV, panjang gelombang 210-300 nm dapat membunuhmikroorganisme jika di paparkan. Komponen seluler yang dapat

menyerap sinar UV adalah asamnukleat sehingga dapat rusak dan

menyebabkan kematian.

e.pH berpengaruh terhadap sel dengan mempengaruhi metabolisme.Jamur dan bakteri memiliki ciri morfologi yang berbeda. Jamur

telah banyak kita temui sehari-hari, Sebagian besar fungi adalah

organisem multiseluler dengan hifa yang dibagi menjadi sel-sel oleh

dinding yang bersilangan. Jamur mempunyai tipe sel eukariotik,

berkembang biak secara seksual dan aseksual. Habitat jamur beragam

sehingga jamur dapat tumbuh dan berkembang dibanyak tempat. Jamur

adalah tumbuhan yang berinti, berspora, dan tidak berklorofil, berupa sel

atau benang yang bercabang-cabang, dengan dinding dari selulosa atau

5/28/2018 acara 2 fix

16/21

44

dari kitin atau dari keduanyal. Jamur ini tergolong tumbuhan thallus

karena belum bisa dibedakan antara bagian batang, daun, maupun

akarnya. Pertumbuhannya mula-mula akan berwarna putih, tetapi jika

spora telah timbul akan terbentuk berbagai warna tergantung dari jenis

kapang. Kapang terdiri dari suatu thallusyang tersusun dari filamen yang

bercabang yang disebut hifa. Kumpulan dari hifa disebut miselium.

Bakteri merupakan sekelompok mikroorganisme yang termasuk

prokaryote, sel tubuh bakteri berukuran sangat kecil, kebanyakan

diameternya berukuran kira-kira 0,5-0,1m. Kebanyakan bakteria

merupakan jasad yang transparan (tembus cahaya). Selain mikroskopik,

bakteri juga hampir tidak berwarna atau transparan dan kontras dengan

air. Sehingga melihat dan mengamati bakteri dalam kedaan hidup sangat

sulit. Untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik

pewarnaan sel bakteri. Bakteri ini biasanya ditemukan dalm keadaan

berlendir ataupun berbentuk kumpulan hifa yang berwarna putih keabuan.

Sehingga dapat disimpulkan bahwa perbedaan bakteri dan jamur

secara umum yakni dengan melihat ukurannya jamur berukuran lebih

besar daripada bakteri. Struktur sel jamur yang multiseluler dan bakteri

yang uniseluler. Bakteri merupakan mikroorganisme prokariotik yang

memiliki sel tunggal. Bakteri memiliki struktur sel yang sederhana karena

tidak memiliki nukleus/inti sel, cytoskeleton dan organel lain seperti

mitokondria juga kloroplas. Struktur morfologinya hanya bisa dilihat

dengan bantuan mikroskop karena ukurannya yang mikroskopis.

Selain diadakan isolasi dan purifikasi juda diakan identifikasi

morfologi koloni. Pada kondisi yang sesuai maka mikroorganisme akan

tumbuh dengan cepat serta jenis koloninya beragam. Untuk itu perlu

dilakukan identifikasi koloni. Identifikasi koloni ini akan menghasilkan

karakteristik dari mikroorganisme dengan cirri morfologi yang berbeda.

Identifikasi morfologi koloni meliputi: ukuran, bentuk, elevasi, tepiam,

permukaan, opacity, dan chromogenesis. Hasil dari identifikasi ini akan

5/28/2018 acara 2 fix

17/21

45

menentukan jenis mikroorganisme tersebut, apakah masuk dalam jenis

bakteri, jamur ataukan bagian dari yang lain.

Pada isolasi mikrobia dalam media NA, dan PDA kami

menggunakan berbagai bayan yakni: sayuran yang dicuci dan tidak

dicuci, air tanah, kertas, air mineral, dan tangan manusia.

Mikroorganisme dapat pada media tersebut. Pada saat pengamatan setelah

diinkubasi se;alam 4 hari, mikroorganisme dapat teridentifikasi. Rata-rata

ukurannya yaitu cenderung kebesar karena mikroorganisme tumbuh

terkumpul disuatu tempat. Pada saat identifikasi didapatkan bahwa media

PDA untuk air mineral mengalami kontaminasi yaitu tumbuhnya jamur

pada media. Untuk menghindari tumbuhnya bakteri pada konsentrasi

tempat tertentu maka dilakukan purifikasi streak empat kuadran. Streak

empat kuadran ini digunakan untuk mencari biakan yang murni.

Pengamatan pada purifikasi ini adalah tidah adanya kontaminasi pada

media kecuali yang PDA air mineral yang sejak isolasi sudah

terkontaminasi.

Pada isolasi dilakukan pengenceran bertingkat. Tujuan dari

pengenceran bertingkat yaitu memperkecil atau mengurangi jumlah

mikroba yang tersuspensi dalam cairan. Penentuan besarnya atau

banyaknya tingkat pengenceran tergantung kepada perkiraan jumlah

mikroba dalam sampel. Untuk praktikum ini menggunakan perbandingan

1:9 untuk sampel dan pengenceran pertama dan selanjutnya, sehingga

pengenceran berikutnya mengandung 1/10 sel mikroorganisme dari

pengenceran tersebut. Pengenceran bertingkat ini menggunakan garam

fisiologis. Garam fisiologis ini berfungsi untuk menjaga tonisitas dari sel

mikroorganisme sehingga tidak akan terjadi plasmolisis.

Setelah dilakukan purifikasi, langkah selanjutnya dalah

menumbuhan masing-masing pada petridish dengan metode goresan 4

kuadran (streak plate). Tujuan dari streak 4 kuadran ini adalah untuk

memperoleh biakan yang benar-benar murni. Streak 4 kuadran ini juga

sebagai dimaksudkan menghindari tumbuhnya mikrrorganisme yang

5/28/2018 acara 2 fix

18/21

46

terkonsentrasi pada suatu tempat sehingga dalam mengidentifikasi jenis

koloni tersebut akan menyulitkan. Teknik streak plate (lempeng gores)

adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam

media agar dengan cara menstreak (menggores) permukaan agar dengan

jarum ose yang telah diinokulasikan dengan kultur bakteri. Dengan teknik

ini mikroorganisme yang tumbuh akan tampak dalam goresan-goresan

inokulum bekas dari streak jarum. Hasil dari steak 4 kuadran ini akan

tumbuh koloni yang lebih spesifik sehingga akan mempermudah dalam

mengidentifikasikan jenis koloni tersebut. Karena pada streak 4 kuadran

ini mikroorganisme tidak tumbuh menggumpul atau terkonsentrasi pada

suatu tempat.

Telah dijelaskan bahwa dalam mengidentifikasikan bakteri ini cukup

sulit. Karena morfologi dari bakteri ini adalah transparan, sehingga perlu

diadakan prosess pewarnaan untuk mengidentifikasikan jenis bakteri.

Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah salah satu teknik pewarnaan

yang paling penting dan luas yang digunakan untuk mengidentifikasi

bakteri. Dalam proses ini, olesan bakteri yang sudah terfiksasi dikenai

larutan larutan berikut : zat pewarna kristal violet, larutan yodium, larutan

alkohol (bahan pemucat), dan zat pewarna tandingannya berupa zat warna

safranin atau air fuchsin.

Pada pewarnaan gram, bakteri yang telah difiksasi dengan panas

sehingga membentuk noda pada kaca objek diwarnai dengan pewarna basa

yaitu crystal violet. Karena warna ungu mewarnai seluruh sel, maka

pewarna ini disebut pewarna primer. Selanjutnya noda dicuci dan pada

noda spesimen ditetesi iodin yang merupakan mordant. Setelah iodin

dicuci, baik bakteri Gram Positif maupun Gram Negatif tampak berwarna

ungu. Selanjutnya noda spesimen dicuci dengan alkohol yang merupakan

decolorizing agent (senyawa peluntur warna) yang pada spesies bakteri

tertentu dapat menghilangkan warna ungu dari sel. Setelah alkohol dicuci,

noda spesimen diwarnai kembali dengan safranin yang merupakan

pewarna basa berwarna merah. Bakteri yang tetap berwarna ungu

5/28/2018 acara 2 fix

19/21

47

digolongkan ke dalam Gram Positif, sedangkan bakteri yang berwarna

merah digoongkan ke dalam Gram Negatif.

Pewarna yang digunakan antara lain : kristal violet sebagai gram A,

iodine sebagai gram B, alkohol sebagai gram C, serta safranin sebagai

gram D. Perbedaan warna antara bakteri Gram Negatif dan bakteri Gram

Positif disebabkan oleh adanya perbedaan struktur pada dinding sel nya.

Dinding Gram Positif mengandung banyak peptidoglikan, sedangkan

dinding bakteri Gram Negatif banyak mengandung lipopolisakarida

(Suriawiria 1999). Pada praktikum pewarnaan gram ini hasil dari

kelompok kami menghitam, hal ini disebabkan karena terlalu lama dalam

proses fiksasi sehingga bakteri yang diamati terbakar.

E. Kesimpulan dan Saran1. Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan praktikum

Mikrobiologi Terapan dapat ditarik kesimpulan, antara lain :

a. Isolasi mikrobia pada prinsipnya adalah memisahkan suatu jenismikrobia dengan jenis mikrobia lainnya dengan asal mikrobia yang

terdiri dari berbagai macam spesies dengan cara menumbuhkan pada

media padat.

b. Pada hasil isolasi terjadi kontaminasi pada PDA Air Mineralc. Inokulasi adalah tindakan menanam mikroorganisme ke dalam wadah

atau media tumbuhnya yang diambil dari sediaan, misalnya pada

pembiakan bakteri.

d. Streak 4 kuadran akan menghasilkan biakan yang murni, karenamikroorganisme tidak tumbuh pada menggumpul pada tempat

tertentu, sehingga mempermudah dalam identifikasi.

e. Pewarnaan gram merupakan meted yang penting dalammengidentifikasi bakteri, karena bakteri merupakan bakteri yang tidak

berwarna dan cenderung transparan.

f. Perbedaan warna antara bakteri Gram Negatif dan bakteri GramPositif disebabkan oleh adanya perbedaan struktur pada dinding sel

5/28/2018 acara 2 fix

20/21

48

nya. Dinding Gram Positif mengandung banyak peptidoglikan,

sedangkan dinding bakteri Gram Negatif banyak mengandung

lipopolisakarida.

2. SaranBerdasarkan hasil praktikum Analisis algae dan Protozoa dari alam,

maka didapatkan beberapa saran untuk lancarnya praktikum, yaitu sebagai

berikut:

a. Diharapkan praktikan serius dalam melakukan praktikum sehinggahasil dari praktikum bisa maksimal.

b. Pada proses pewarnaan gram sebaiknya co.ass menjelaskan lebih jelaslagi, terutama pada proses fiksasi sehingga tidak terjadi kegagalan

karena bakteri yang diamati terbakar.

5/28/2018 acara 2 fix

21/21

49

DAFTAR PUSTAKA

Campbell 2003.Biologi jilid 2. Jakarta: ErlanggaIrianto K 2007.Mikrobiologi.Bandung: Yrama Widya.

Madigan M and Martinko J (editors) 2005. Brock Biology of

Microorganisms (11th ed.).Prentice Hall: New Jersey

Muharni 2009. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Penghasil Kitinase dari Sumber

Air Panas Danau Ranau Sumatera Selatan. J. Penelitian Sains. Vol. 4

(9): 12-15.

Purwoko T 2009.Fisiologi Mikroba. Jakarta: Bumi Aksara.

Saryono 2002. Isolasi Dan Karakterisasi Fungi Penghasil Inulinase yang Tumbuh

pada Umbi Dahlia (Dahlia variabilis). J Natur Indonesia.Vol. 4 (2): 171-177.

Suhardi Koesnandar Indriani Arnaldo 2008. Biosafety: Pedoman Keselamatan

Kerja di Laboratorium Mikrobiologi dan Rumah Sakit. Jakarta: PT.

Multazam Mitra Prima.

Suria 2005. Mikrobiologi Dasar. Jakarta: Papas Sinar Sinanti.

Suriawiria 2002Mikrobiologi Dasar dalam Praktek. Jakarta: PT. Garaemedia

SuriawiriaU. 1999.Mikrobiologi. Jakarta : Universitas Terbuka.

Tryana ST 2008.Dasar-Dasar Mikrobiologi. Malang: DjambatanWaluyo L 2005.Mikrobiologi Umum. Malang: MM Press.

Wistreich GA 2003. Microbiologi Laboratory Fundamental and Application 2nd

Edition.New Jersey: Pearson Education

acara 2 fix

Documents