Istraživanje stanica

Koje su organizacijske razine u živom Koje su organizacijske razine u živom svijetu?svijetu?

Koja je organizacijska razina zajednička Koja je organizacijska razina zajednička za cjelokupni živi svijet?za cjelokupni živi svijet?

Što je to stanica? – stanična teorijaŠto je to stanica? – stanična teorija

Kada je stanica uočena, tj. kada se Kada je stanica uočena, tj. kada se postavila stanična teorija?postavila stanična teorija?

Kojim metodama istražujemo stanice?Kojim metodama istražujemo stanice?

ISTRAŽIVANJE STANICAISTRAŽIVANJE STANICA

POVIJEST OTKRIĆA STANICEPOVIJEST OTKRIĆA STANICE

13. st. upotreba prvih leća13. st. upotreba prvih leća1665. R. Hooke1665. R. Hooke promatra pluto , uočava prostore nalik promatra pluto , uočava prostore nalik saću i naziva ih stanicamasaću i naziva ih stanicama17. stoljeće 17. stoljeće A. van LeeuwenhoekA. van Leeuwenhoek izradio mikroskop izradio mikroskop povećanje 270 puta, promatra žive st.povećanje 270 puta, promatra žive st.1838-1839. M. Schlieden i T. Schwann STANIČNA 1838-1839. M. Schlieden i T. Schwann STANIČNA TEORIJA TEORIJA 1831. R.Brown- uočava jezgru1831. R.Brown- uočava jezgru1839. Purkinije – protoplazma 1839. Purkinije – protoplazma 1858. R.Virchow “1858. R.Virchow “Omnis cellula ex cellula” Omnis cellula ex cellula” 1859. Pasteur –rušenje ideje o spontanoj generaciji1859. Pasteur –rušenje ideje o spontanoj generaciji

SVJETLOSNI MIKROSKOP SVJETLOSNI MIKROSKOP

veličina životinjske stanice 10 -12 µmveličina životinjske stanice 10 -12 µmveličina biljne stanice 80 -200 µmveličina biljne stanice 80 -200 µmmoć razlučivanja oko 0.2-0.4 µmmoć razlučivanja oko 0.2-0.4 µm(moć razlučivanja ljudskog oka 0,08-(moć razlučivanja ljudskog oka 0,08-0,1 0,1 mmmm ) )OGLEDALO -konveksno OGLEDALO -konveksno - ravno- ravno

LEĆE : okular LEĆE : okular objektivobjektiv kondenzorkondenzor

TUBUS

REVOLVER

IRIS ZASLONA

•STALAK

VELIKI I MALI VIJAK

okular

objektiv

•kondenzor

MIKROSKOPSKI PREPARATMIKROSKOPSKI PREPARAT

trajni preparattrajni preparatbojani preparatbojani preparatmokri- svježi preparatmokri- svježi preparatpribor za mikroskopiranjepribor za mikroskopiranjebiološki materijalbiološki materijalPOVEĆANJE - POVEĆANJE -

pov. objektiva × pov. Okularapov. objektiva × pov. Okulara - - imerzijaimerzija- posebni objektiv i ulje, - posebni objektiv i ulje,

koji se koriste kada je povećanje koji se koriste kada je povećanje 1000 puta1000 puta

Fazni mikroskop Fazni mikroskop – ( neobojeni djelovi žive st.) ( neobojeni djelovi žive st.)

Polarizacijski mikroskop Polarizacijski mikroskop – (pravilne strukture – centrioli mikrotubuli, (pravilne strukture – centrioli mikrotubuli,

kristali)kristali)

Fluorescencijski mikroskop Fluorescencijski mikroskop – vezivanje bojila na st. strukture vezivanje bojila na st. strukture – obasjavanje pobudnom svjetlošćuobasjavanje pobudnom svjetlošću– florescencija florescencija

ELEKTRONSKI MIKROSKOPELEKTRONSKI MIKROSKOPDe BroglieDe Broglie – čestice koje se gibaju – čestice koje se gibaju velikom brzinom imaju svojstvo vala velikom brzinom imaju svojstvo vala

Elektronske leće Elektronske leće = prstenasti = prstenasti elektromagnetielektromagneti(TEM), ubrzani snop elektrona pri prolazu (TEM), ubrzani snop elektrona pri prolazu kroz preparat stvara sliku na elektronskom kroz preparat stvara sliku na elektronskom zaslonu nije moguće promatranje cijelih zaslonu nije moguće promatranje cijelih stanica stanica Debljina preparata =100nmDebljina preparata =100nmUltramikroton = uređaj za pripravu Ultramikroton = uređaj za pripravu posebno tankih prerezaposebno tankih prereza

(SEM) skeniranje snopa elektrona koji se (SEM) skeniranje snopa elektrona koji se odbija od vanjske površine preparataodbija od vanjske površine preparata– moć razlučivanja 0.2- 0.5 nmmoć razlučivanja 0.2- 0.5 nm

TEM TEM SEMSEM

RAČUNALARAČUNALA

ProgramiProgrami

VizualizacijaVizualizacija

ZaključciZaključci

komunikacijakomunikacija

AUTORADIOGRAFIJAAUTORADIOGRAFIJA

Izlaganje živih stanica specifičnoj radioaktivnoj Izlaganje živih stanica specifičnoj radioaktivnoj tvari tvari

inkubacija inkubacija

prevlačenje preparata tankim filmom prevlačenje preparata tankim filmom (fotografska emulzija) (fotografska emulzija)

razvijanje filma (na mjestima gdje je bilo došlo razvijanje filma (na mjestima gdje je bilo došlo do ugradnje radioaktivnih čestica u stanici, na do ugradnje radioaktivnih čestica u stanici, na filmu se pojavljuju srebrne mrlje) filmu se pojavljuju srebrne mrlje)

KULTURA STANICAKULTURA STANICA

-uzgoj stanica višestaničnog organizma na hranjivoj podlozi izvan samog -uzgoj stanica višestaničnog organizma na hranjivoj podlozi izvan samog organizma organizma

KULTURA BILJNIH STANICAKULTURA BILJNIH STANICA Podloga : šećer, mineralne soli, vitamini, hormoniPodloga : šećer, mineralne soli, vitamini, hormoniTOTIPOTENTNOSTTOTIPOTENTNOSTKLONIRANJEKLONIRANJE Svrha :Svrha :

proučavanje rasta i razvoja organizma proučavanje rasta i razvoja organizma djelovanja genadjelovanja genaproizvodnja genetski modificiranih biljaka (GMO)proizvodnja genetski modificiranih biljaka (GMO)

KULTURA ŽIVOTINJSKIH STANICAKULTURA ŽIVOTINJSKIH STANICAPodloga : aminokiseline, soli ,glukoza, antibiotici Podloga : aminokiseline, soli ,glukoza, antibiotici Svrha :Svrha :

- proučavanje djelovanja različitih faktora na stanice- proučavanje djelovanja različitih faktora na stanice

KULTURA ŽIVOTINJSKIH STANICAKULTURA ŽIVOTINJSKIH STANICA

STANIČNO FRAKCIONIRANJESTANIČNO FRAKCIONIRANJE

-postupak izdvajanja -postupak izdvajanja pojedinih staničnih pojedinih staničnih organela u organela u CENTRIFUGI na CENTRIFUGI na temelju razlike u brzini temelju razlike u brzini taloženjataloženja-kidanje stanica-kidanje stanica-protiskivanje-protiskivanje-odvajane -odvajane centrifugiranjem centrifugiranjem (supernatant i talog )(supernatant i talog )

Brzina taloženja ovisi o : Brzina taloženja ovisi o :

masi čestice masi čestice

obliku čestice obliku čestice

gustoći čestice gustoći čestice

gustoći otopine u kojoj se čestica nalazi gustoći otopine u kojoj se čestica nalazi

Brzina taloženja ovisi o : Brzina taloženja ovisi o :

masi čestice masi čestice - teže čestice se uvijek talože brže nego one lakše, istog oblika i - teže čestice se uvijek talože brže nego one lakše, istog oblika i

gustoće. gustoće.

obliku čestice obliku čestice – koeficijent trenja kompaktne čestice je manji nego onaj u slučaju koeficijent trenja kompaktne čestice je manji nego onaj u slučaju

izdužene čestice iste mase. izdužene čestice iste mase.

gustoći čestice gustoći čestice – gušće čestice se gibaju puno brže od onih manje gustoće gušće čestice se gibaju puno brže od onih manje gustoće

gustoći otopine u kojoj se čestica nalazi gustoći otopine u kojoj se čestica nalazi

PROTOČNA CITOMETRIJA PROTOČNA CITOMETRIJA