Introdução ao delineamento experimental
Prof. Dr. Vinicius CamposDisciplina de Bioestatística e Delineamento Experimental
Graduação em Biotecnologia - UFPel
Abordagens da aula...
O que é um experimento?
Um experimento é um teste feito para validar uma
hipótese
A experimentação razão pela qual nós estamos onde
estamos
O que um experimento propiciapara o pesquisador
Planejamento do experimento
Planejamento do experimento
Mas como driblamos este
problema?
Definindo objetivos
específicos
1. Defina a pergunta2. Esboce o experimento– Variáveis experimentais– Controles– Número de amostras e repetições do exp.– Estatística
3. Organize o experimento4. Realize o experimento5. Colete e analise os dados
Planejamento do experimento
• Não pensar sobre a necessidade do exp. • Planejar experimentos grandes• Esquecer dos controles• Não verificar se todos os reagentes estão
disponíveis• Não verificar se a estrutura do laboratório é
suficiente para a execução do experimento• Não saber como é feita a coleta e análise dos
dados
Erros comuns no planejamento
• Buscar leitura sobre experimentos semelhantes/metodologias– Buscar protocolos– Entrar em contato com pesquisadores
• Ler poucos artigos no início– Artigos em português e depois em inglês
• Buscar artigos sobre o tema uma vez por semana
Referencial teórico
Referencial teórico
Referencial teórico
Referencial teórico
• Controles experimentais– Marcador de peso molecular de DNA
• Controles de tratamento– Positivos ou negativos• Controles positivos
- soro sabidamente contaminado
• Controles negativos– soro sabidamente não-contaminado
Controles
• Intervalos de tempo– Expressão gênica em 0, 2, 4, 8, 16 h após o tratamento com IGF-1 em
células tumorais em cultivo
Controles
O que fazer se não der para fazer os controles?• Alguns controles podem ser excluídos
nesta ordem:1.Controles de procedimento2.Duplicatas de controles experimentais
Se tiver que excluir outros controles desista do experimento!!!
Controles
• Cuidados com as normas de cada técnica
• Rigidez na repetibilidade
• Use protocolos estabelecidos
Execução do experimento
1. Obtenha o protocolo
2. Leia o protocolo e veja se ele faz sentido
3. Prepare os reagentes listados no protocolo,
verifique e reserve os equipamentos necessários
4. Siga o protocolo exatamente na primeira vez
5. Modifique o protocolo baseado na sua
experiência com ele
Execução do experimento - protocolos
Protocolos
• Coleta dos dados– Saiba que tipo de resultado você está coletando!!!
Exemplo: Avaliação da produção de ROS em oócitos maturados in vitro
Técnica: coloração dos oócitos com 2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína – corante fluorescente
Resultado: ????
Coleta e análise dos dados
Oócitos corados com 2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína
Intensidade de fluorescência dos oócitos corados
• Estatística– Comparação dos dados
– Cálculos para testar se a diferença entre os dados é devida ao tratamento ou é meramente ao acaso
– Identificar previamente que teste estatístico será usado para comparar o tipo de dados que será obtido
– Usar softwares estatísticos
Análise dos dados
• Os dados deverão ser resumidos e organizados para apresentação e futura publicação
– Em tabelas – quando é importante a apresentação dos valores
– Em gráficos – apresentação distribuições, tendências ou relacionamento entre variáveis
Apresentação dos dados
Intensidade de fluorescência dos oócitos corados
• O experimento funcionou? – controles
• Quais são os resultados? - análise
• O que o experimento significa? - discussão
• Outros investigadores vão entender o
experimento? - pergunte
• O resultado pode ser repetido? – faça novamente
Interpretação de resultados
O experimento NÃO funciona!!!
• Checar os equipamentos
• Checar os reagentes
• Refaça parte do experimento
• Refaça todo o experimento
• Pense em trocar de experimento
Geralmente as idéias precedem a tecnologia
disponivel
O experimento funciona!!!
• Escreva e publique os resultados
imediatamente!!!
• Deposite uma patente de invenção!!!
Prof. Dr. Vinicius Farias CamposGraduação em [email protected][email protected]