Strategier för KloningHur hitta klonen för en specifik
gen?
Begrepp:• Direkt selektion• Olika typer av DNA bibliotek• Identifiering från genbibliotek• Hur identifiera en klon
Selektionsproblem!!
Sid 127
Olika strategier för selektion
Sid 128
Direkt selektion
Sid 129
Direkt selektion för TrpA genen
Sid 130
Genbibliotek i en cosmid
Sid 132
Expression av gener
Sid 132
Nukleinsyra hybridisering
Sid 135
Labeling olika tekniker
Sid 136
Identifiering av vanligt förekommande gener
Sid 139
Heterologous prbing
Sid 142
Southern hybridisering
Sid 143
Immunoscreening
Sid 145
PCR
• Hur designar man primer• Skillnader mellan olika DNA polymeraser• Felfrekvensen på Taq Polymeras• Kvantifiering av DNA och RNA
Agarosgelelektrofores
Sid 150
Amplifiering av α1-globin genen
Sid 151
Korta primer ger ospecifik bindning
Sid 151
Typisk PCR cykel
Sid 152
Annealingtemperaturens betydelse
Sid 153
Beräkning av Tm värde för primer
Sid 154
Kombinatorisk screening
Sid 155
Taq Polymeras adderar extra A
Sid 156
Felfrekvens på Taq polymeras
Sid 158
Kvantifiering av PCR produkt
Sid 159
Realtids PCR
Sid 160
Kvantifiering med realtids PCR
Sid 160
Kvantifiering av RNA
Sid 161