ANÁLISE GENETICA DE Xanthomonas axonopodispv. dieffenbachiae, CEPAS REVELAM DIFERENTES
GRUPOS FITOPATOGENICOS.
Instituto Federal Goiano - Câmpus Urutaí.Curso de Agronomia
Disciplina de Fitopatologia I
Apresentador: André R.Rietjens
1
Donahoo, R. S., Jones, J. B., Lacy, G. H., Stromberg, V. K., and Norman, D. J. Geneticanalyses of Xanthomonas axonopodis pv. Dieffenbachiae strains reveal distinctphylogenetic groups. Phytopathology 103: 237-244. 2013.
Introdução
• O artigo foi desenvolvido com plantas ornamentais da famíliaAráceae.
• Foram utilizadas as espécies : Aglaonema, Anthurium, Caladium,Dieffenbachia, e Syngonium.
• São espécies produzidas intensamente em estufas comerciais emregiões todo o mundo.
• A doença e conhecida mundialmente como crestamentobacteriano, e causa grandes danos econômicos na produção deplantas ornamentais.
3
Introdução
• Primeiramente, o patôgeno foi classificado como Bactériadieffenbachia, depois com a introdução do sistema patovar eatravés do estudo abrangente de hibridização DNA-DNA foireclassificada como Xanthomonas axonopodos pv. Diffenbachia.
• A identificação precisa e a tipagem de bactérias atualmente contacom uma série de abordagens , incluindo a análise da seqüência16S rDNA , a análise do polimorfismo dos fragmentos de restriçãodo DNA genómico (RFLP), o polimorfismo de DNA ao acaso (RAPD),o uso de seqüência oligonucleotídicas iniciadoras complementaresde seqüências de DNA repetitivas (REP-PCR), o polimorfismo decomprimento de fragmentos amplificados (AFLP), e os dadosfenotípicos de acido graxos e ester metílicos (FAME).
4
Introdução
• Devido ao valor econômico da produção de Anthurium combinadocom a ameaça de perdas devido à X. axonopodis pv. Dieffenbachiaesurgiu vários estudos sobre esta bactéria utilizando a genética,métodos sorológicos e métodos fisiológicos .
5
Crestamento bacteriano em Anthurium, causado porXanthomonas axonopodis pv. Dieffenbachiae .
6
Objetivo
O objetivo deste artigo foi realizar uma genética detalhada ècaracterização de populações distintas de compostosheterogenéticos de espécies e patovares de xanthomonaspatogênicas em plantas da família Araceae, usando métodos degenotipagem Rep- PCR, AFLP, FAME, homologia DNA-DNA e análiseda seqüência multilocus.
7
Materiais e Métodos• Foram utilizadas 175 cepas, coletadas durante um período de 20
anos a partir de 10 hospedeiros da família Araceae.
8
Materiais e Métodos
• As cepas foram cultivadas em agar nutriente ou em caldo , e as daespécie Syngonium foi cultivadas em meio com 0,5% de sacarose.
• As bactérias foram armazenadas em 15 % de glicerol a -80 ° C.
• Utilizando o método de genotipagem (REP-PCR), foi gerado osperfis genômicos para todas as 175, onde as reações foramseparadas com BOX, ERIC e REP utilizando métodos padrõesdescritos, os produtos gerados de PCR, foram separados em 1,5 %de gel de agarose , corado com brometo de etidio e fotografadossobre luz UV.
9
Materiais e Métodos
• Já utilizando o método AFLP, um subgrupo de 40 cepas foiselecionados com base em 4 aglomerados e genotipado com AFLPutilizando enzimas, adaptadores e iniciadores, gerando os perfiscom pares primes e feita a analise de cluster.
• Com o método FAME a extração e diferenciação foi realizado em 40estirpes cultivados em agar de caldo de soja e analisados com omicrobiana Sherlock sistema de identificação.
10
Materiais e Métodos
• Depois foram comparados, utilizando a hibridização DNA-DNA e aanalise de seqüência multilocus.
• As seqüências resultantes foram alinhadas utilizando um softwareSAGA e comparadas com as seqüências das espécies e patovares deXanthomonas que foram obtidas no banco de dados da Associaçãode Plantas e Micróbios.
11
Resultados e Discussão
12
Resultados e Discussão
13
Conclusões
• Este estudo exemplifica a natureza heterogenética dasXanthomonas que infectam plantas da família Araceae .
• Compreensão a inter-relação entre variantes patogênicas dessasXanthomonas é importante para o desenvolvimento de um sistemaeficaz integrado ao programa de gestão de pragas. Esse programadeve incluir protocolos eficazes de diagnóstico, melhoramento paraa resistência do hospedeiro, e posterior implementação deiniciativas de regulamentação prudente.
14
15