Xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật trong bảo quản củ hành tím Vĩnh Châu (Sóc Trăng)

8/17/2019 Xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật trong bảo quản củ hành tím Vĩnh Châu (Sóc Trăng)

http://slidepdf.com/reader/full/xac-dinh-du-luong-thuoc-bao-ve-thuc-vat-trong-bao-quan 1/77

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN

- - - - - -

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP

XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC

BẢO VỆ THỰC VẬT TRONG BẢO QUẢN CỦ HÀNH TÍM VĨNH CHÂU (SÓC TRĂNG)

CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN

ThS. Nguyễn Thị Diệp Chi Phạm Bình Minh

MSSV: 2092072

Lớp: Hóa Học K35

Cần Thơ, 2013

WW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON

WWW.BOIDUONGHOAHOCQUYNHON.BLOGSPOT.COMóng góp PDF bở i GV. Nguy ễ n Thanh Tú



TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN

Năm học 2012-2013

Đề tài:

XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT TRONG

BẢO QUẢN CỦ HÀNH TÍM VĨNH CHÂU (SÓC TRĂNG)

LLỜỜII CCAAMM ĐĐOOAA N N

……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

Cần Thơ, ngày…tháng …năm 2013

Luận văn tốt nghiệp đại học ngành: Hóa Học

Mã số: TN338

Đã bảo vệ và được duyệt

Hiệu trưởng………………………………..

Trưởng khoa………………………………..

Trưởng chuyên ngành Cán bộ hướng dẫn

Nguyễn Thị Diệp Chi





TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Độc lập – Tự do – Hạnh phúc

BỘ MÔN HÓA HỌC ----------

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN

1. Cán bộ hướng dẫn: Th.S Nguyễn Thị Diệp Chi

2. Đề tài: Xác định dư lượng thuốc bảo về thực vật trong bảo quản củ hành

tím Vĩnh Châu (Sóc Trăng).

3. Sinh viên thực hiện: Phạm Bình Minh

MSSV: 2092072 Lớp: Hóa Học – Khóa 35

4. Nội dung nhận xét: a. Nhận xét về hình thức luận văn tốt nghiệp:

......................................................................................................................................

......................................................................................................................................

b. Nhận xét về nội dung luận văn tốt nghiệp:

......................................................................................................................................

......................................................................................................................................

......................................................................................................................................

c. Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài:

......................................................................................................................................

......................................................................................................................................

d. Kết luận, đề nghị, điểm:

......................................................................................................................................

......................................................................................................................................


Cán bộ chấm hướng dẫn





TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Độc lập – Tự do – Hạnh phúc

BỘ MÔN HÓA HỌC ----------

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN

1. Cán bộ phản biện: ..........................................................................................................

2. Đề tài: Xác định dư lượng thuốc bảo về thực vật trong bảo quản củ hành

tím ở Vĩnh Châu (Sóc Trăng).

3. Sinh viên thực hiện: Phạm Bình Minh

MSSV: 2092072 Lớp: Hóa Học – Khóa 35

4. Nội dung nhận xét: a. Nhận xét về hình thức luận văn tốt nghiệp:

......................................................................................................................................

......................................................................................................................................

b. Nhận xét về nội dung luận văn tốt nghiệp:

......................................................................................................................................

......................................................................................................................................

......................................................................................................................................

c. Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài:

......................................................................................................................................

......................................................................................................................................

d. Kết luận, đề nghị, điểm:

......................................................................................................................................

......................................................................................................................................


Cán bộ chấm phản biện





Luận văn tốt nghiệp Hóa Học

Trang i

LỜI CẢM ƠN

------ ------

Trong suốt quá trình học tập ở bậc đại học, được sự giúp đỡ tận tình của các

thầy cô trong bộ môn Hóa và bên cạnh việc thực hiện Luận văn tốt nghiệp đã giúp em

tiếp thu được nhiều kiến thức bổ ích, tích lũy được nhiều kinh nghiệm quan trọng để

hỗ trợ cho công việc sau này. Để đạt được kết quả như ngày hôm nay, em xin gửi lời

cảm ơn chân thành đến:

Tất cả các thầy cô trường Đại học Cần Thơ, đặc biệt là quý thầy cô của Bộ môn

Hóa – Khoa Khoa Học Tự Nhiên đã tận tình giảng dạy và truyền đạt kiến thức cho

chúng em trong suốt quá trình học tập ở giảng đường Đại học.

Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến và cô Nguyễn Thị Diệp Chi, cô Phạm Bé

Nhị cán bộ Bộ môn Hóa – Khoa Khoa Học Tự Nhiên đã tận tình hướng dẫn và luôn

tạo điều kiện để em hoàn thành tốt luận văn.

Em cũng xin gửi lời cảm ơn đến anh Trương Vĩnh Lễ và các anh chị trong

phòng Quản lý chất lượng và Môi trường - Công ty Cổ phần Thuốc sát trùng Cần Thơ

đã quan tâm, tạo điều kiện và truyền đạt cho em những kiến thức, kinh nghiệm thực tế

bổ ích. Cuối cùng em xin gửi lời ảm ơn đến gia đình và bạn bè đã luôn quan tâm giúp

đỡ em trong suốt khóa học.

Em xin chân thành cảm ơn!






Trang ii

DANH MỤC HÌNH

Hình 2.1: Hành tím Vĩnh Châu ........................................................................................ 6

Hình 2.2: Người nông dân bị mù khi làm việc không có bảo hộ lao động. .................... 7

Hình 2.3: Hành được bảo quản theo công thức của người nông dân .............................. 7

Hình 2.4: Thuốc trừ rầy rệp VIMIPC 25WP ................................................................. 12

Hình 2.5: Thuốc trừ sâu VISHER 25EC ....................................................................... 13

Hình 2.7: Đồ thị phương pháp ngoại chuẩn .................................................................. 18

Hình 2.8: Đồ thị phương pháp nội chuẩn ...................................................................... 19

Hình 3.1: Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao……………… …………………….....26

Hình 3.2: Hệ thống cô quay……………………….…………………………………..26Hình 3.3: Peak chuẩn Cypermethrin. ............................................................................ 33

Hình 3.4: Peak Cypermethrin trong mẫu ....................................................................... 33

Hình 3.5: Đồ thị khảo sát tính tuyến tính Cypermethrin ............................................... 34

Hình 3.6: Sắc ký đồ đồ trên mẫu chiết thực M90 .......................................................... 35

Hình 3.7: Peak Isoprocarb trong chuẩn. ........................................................................ 37

Hình 3.8: Peak Isoprocarb trong mẫu ............................................................................ 37

Hình 3.9: Sắc ký đồ khảo sát độ lặp lại Isoprocarb ....................................................... 37

Hình 3.10: Đồ thị khảo sát tính tuyến tính của Isoprocarb……………………….…...38

Hình 3.11: Sắc ký đồ mẫu thật M90 .............................................................................. 39






Trang iii

DANH MỤC BẢNG

Bảng 3.1: Kết quả khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) Cypermethrin ............................ 34

Bảng 3.2: Khảo sát tính tuyến tính của Cypermethrin .................................................. 34

Bảng 3.3: Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Cypermethrin ................................ 34

Bảng 3.4: Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của Cypermethrin ............................. 35

Bảng 3.5: Kết quả khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết Cypermethrin ... 35

Bảng 3.6: Kết quả nồng độ Cypermethrin trên mẫu thật (đơn vị: mg/kg)…….……..36

Bảng 3.7: Kết quả khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Isoprocarb .......................... 38

Bảng 3.8: Khảo sát tính tuyến tính của Isoprocarb ....................................................... 38

Bảng 3.9: Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Isoprocarb ..................................... 38

Bảng 3.10: Kết quả tính giới hạn định lượng (LOQ) của Isoprocarb ........................... 39Bảng 3.11: Kết quả khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết Isoprocarb ...... 39






Trang iv

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN .......................................................................................................................... iDANH MỤC HÌNH ............................................................................................................... iiDANH MỤC BẢNG ............................................................................................................. iiiDANH MỤC BẢNG ............................................................................................................. iii

MỤC LỤC ............................................................................................................................. ivMỞ ĐẦU .................................................................................................................................... 1ĐẶT VẤN ĐỀ ........................................................................................................................ 2MỤC TIÊU CỤ THỂ .............................................................................................................. 4

TỔNG QUAN ............................................................................................................................ 5CHƯƠNG I: THỊ XÃ VĨNH CHÂU VÀ CỦ HÀNH TÍM[1],[2][12] ........................................ 6CHƯƠNG II: THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT VÀ CÁC HOẠT CHẤT SỬ DỤNGTRONG BẢO QUẢN HÀNH TÍM[3],[4],[8],[13]........................................................................ 8

I. Giới thiệu về hóa chất bảo vệ thực vật ............................................................................ 81.1. Định nghĩa ............................................................................................................... 81.2. Phân loại .................................................................................................................. 8

II. Hoạt chất Cypermethrin và Isoprocarb .......................................................................... 92.1. Cypermethrin ........................................................................................................... 9

2.1.1. Tính chất ........................................................................................................... 92.1.2. Công thức và danh pháp ................................................................................... 92.1.3. Ứng dụng và ảnh hưởng của Cypermethrin trong nông nghiệp ..................... 10

2.2. Isoprocarb .............................................................................................................. 112.2.1. Tính chất ......................................................................................................... 112.2.2. Công thức và danh pháp ................................................................................. 112.2.3. Ứng dụng trong nông nghiệp .......................................................................... 12

2.3. Công thức bảo quản và các loại thuốc hóa học dùng trong công thức bảo quản... 122.3.1. Công thức bảo quản ........................................................................................ 12

2.3.2 Các loại thuốc hóa học dùng trong công thức bảo quản: ................................. 12CHƯƠNG III: PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNGCAO (HPLC)[7],[11],[14],[15],[16] ................................................................................................ 14

I. Phương pháp Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ......................................................... 141.1. Nguyên tắc, cấu tạo máy sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ............................... 141.2. Các yếu tố và thông số đặc trưng của máy sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) .... 16

1.2.1. Các yếu tố trong sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ..................................... 161.2.2. Các thông số đặc trưng trong sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ................. 16

1.3. Định tính và định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) . 161.3.1. Định tính ......................................................................................................... 161.3.2. Định lượng ...................................................................................................... 16

* Nguyên tắc ......................................................................................................... 17* Phương pháp định lượng ................................................................................... 17

1.4. Ứng dụng của sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ................................................ 20II. Thẩm định quy trình phân tích: .................................................................................... 20

2.1. Tầm quan trọng của việc thẩm định ...................................................................... 202.2. Nội dung thẩm định ............................................................................................... 20

2.2.1. Tính tuyến tính (Linearity) ............................................................................. 212.2.2. Độ lặp lại (repeatability) ................................................................................. 222.2.3. Giới hạn phát hiện (LOD) (Limit of Detection) ............................................. 222.2.4. Giới hạn định lượng (LOQ) (Limit of Quantition) ......................................... 22

2.2.5. Hiệu suất thu hồi ............................................................................................. 23THỰC NGHIỆM ...................................................................................................................... 24CHƯƠNG I: CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM ............................................................................ 25






Trang v

1.1. Thời gian và địa điểm thực hiện ............................................................................ 251.2. Phương pháp nghiên cứu và thí nghiệm ................................................................ 25

1.2.1. Phương pháp thí nghiệm ................................................................................. 251.2.2. Điều kiện phân tích ......................................................................................... 251.2.3. Phương pháp chiết mẫu .................................................................................. 251.2.4. Đánh giá kết quả phân tích ............................................................................. 25

1.3. Dụng cụ, thiết bị và hóa chất ................................................................................. 251.3.1. Dụng cụ, thiết bị ............................................................................................. 251.3.2. Hóa chất và dung môi ..................................................................................... 26

1.4. Hoạch định thí nghiệm .......................................................................................... 261.4.1. Xác định dư lượng Cypermethrin ................................................................... 261.4.2. Xác định dư lượng Isoprocarb ........................................................................ 26

CHƯƠNG II: TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM ......................................................................... 27I. Xác định dư lượng Cypermethrin bằng phương pháp Sắc ký lỏng hiệu năng cao(HPLC) ............................................................................................................................. 27

1.1. Phương pháp chiết mẫu phân tích ......................................................................... 271.2. Điều kiện phân tích Cypermethrin......................................................................... 27

1.3. Thẩm định quy trình phân tích dư lượng Cypermethrin ........................................ 271.3.1. Thí nghiệm 1: Định tính Cypermethrin .......................................................... 271.3.2. Thí nghiệm 2: Khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Cypermethrin ............. 281.3.3. Thí nghiệm 3: Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của Cypermethrin ...... 281.3.4. Thí nghiệm 4: Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Cypermethrin ........... 281.3.5. Thí nghiệm 5: Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của Cypermethrin ........ 281.3.6. Thí nghiệm 6: Khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết ................. 291.3.7 Thí nghiệm 7: Tiến hành trên mẫu thực .......................................................... 29

II. Xác định dư lượng Isoprocarb bằng phương pháp Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).......................................................................................................................................... 30

2.1. Phương pháp chiết mẫu phân tích ......................................................................... 30

2.2. Điều kiện phân tích ................................................................................................ 302.3. Thẩm định quy trình phân tích dư lượng Isoprocarb ............................................. 30

2.3.1. Thí nghiệm 1: Định tính Isoprocarb. .............................................................. 302.3.2. Thí nghiệm 2: Khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Isoprocarb .................. 302.3.3. Thí nghiệm 3: Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của Isoprocarb............ 312.3.4. Thí nghiệm 4: Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Isoprocarb ................ 312.3.5. Thí nghiệm 5: Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của Isoprocarb ............. 312.3.6. Thí nghiệm 6: Khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết ................. 312.3.7. Thí nghiệm 7: Tiến hành trên mẫu thật .......................................................... 32

CHƯƠNG III: THẢO LUẬN KẾT QUẢ ............................................................................ 33I. Kết quả xác định dư lượng Cypermethrin ..................................................................... 33

1.1. Định tính Cypermethrin ......................................................................................... 331.2. Khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Cypermethrin ........................................... 341.3. Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của Cypermethrin ..................................... 341.4. Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Cypermethrin ......................................... 341.5. Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của Cypermethrin ....................................... 351.6. Khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết ................................................ 351.7. Tiến hành phân tích trên mẫu thật ......................................................................... 35

II. Kết quả xác định dư lượng Isoprocarb ......................................................................... 37II. Kết quả xác định dư lượng Isoprocarb ......................................................................... 37

2.1. Định tính Isoprocarb .............................................................................................. 37

2.2. Khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Isoprocarb ................................................ 372.3. Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của Isoprocarb .......................................... 382.4. Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Isoprocarb ............................................... 38






Trang vi

2.5. Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của Isoprocarb ............................................ 392.6. Khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết ................................................ 392.7. Tiến hành phân tích trên mẫu thật ......................................................................... 39

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .................................................................................................. 41KẾT LUẬN .......................................................................................................................... 42KIẾN NGHỊ .......................................................................................................................... 44

TÀI LIỆU THAM KHẢO .................................................................................................... 45PHỤ LỤC ............................................................................................................................. 47








Trang 2

ĐẶT VẤN ĐỀ

Thuốc bảo vệ thực vật được coi là một vũ khí có hiệu quả của con người trong

việc phòng chống dịch hại, bảo vệ cây trồng. Bên cạnh ưu điểm là bảo vệ năng suất

cây trồng, thuốc bảo vệ thực vật còn gây ra nhiều tác hại khác như làm ô nhiễm môi

trường, gây độc cho người và gia súc, tăng chi phi sản xuất, và nhất là để lại tồn dư

trong nông sản gây ảnh hưởng đến chất lượng nông sản và sức khỏe người tiêu dùng.

Tác động tiêu cực của thuốc bảo vệ thực vật càng trở nên nghiêm trọng khi con người

sử dụng không đúng cách và quá lạm dụng vào thuốc.

Hóa chất bảo vệ thực vật có nhiều nhóm hóa chất khác nhau, trong đó có bốn

nhóm chính là: lân hữu cơ, Clo hữu cơ, Carbamate và Pyrethroid. Nhóm clo hữu cơ đã

bị cấm sử dụng, nhóm Pyrethroid vẫn đang được sử dụng nhưng độc tính thấp, ít cókhả năng gây nhiễm độc cho người sử dụng. Còn lại 2 nhóm: lân hữu cơ và Carbamate

đang được dùng rộng rãi trong nông nghiệp, có độc tính cao và là nguyên nhân chính

của phần lớn các vụ ngộ độc do ăn rau quả nhiễm hóa chất bảo vệ thực vật ở nước ta

hiện nay.

Từ nhiều năm nay, hành tím Vĩnh Châu (Sóc Trăng) đã trở nên quen thuộc với

người tiêu dùng trong và ngoài nước. Thương hiệu hành tím Vĩnh Châu nổi tiếng khi

được cấp chứng nhận đạt tiêu chuẩn Global GAP.

Trước đây nông dân thường dùng chất DDT, 2,4D,… để bảo quản. Nhưng hiện

nay, các chất này đã nằm trong danh mục các hóa chất bị cấm sử dụng nên chuyển

sang dùng các loại thuốc khác như: VIMIPC (Isoprocarb), VISHER (Cypermethrin),…

Để bảo quản củ hành người nông dân đã sử dụng VIMIPC (Isoprocarb),

VISHER (Cypermethrin) và bột đất sét trong công thức bảo quản và được gọi là bột

bảo quản. Bột bảo quản được người nông dân sử dụng để ngăn chặn, chống lại các loại

côn trùng sâu, rầy phá hoại trong lúc chờ để bán sản phẩm.

Theo thống kê chưa đầy đủ của Hội Chữ thập đỏ thị xã Vĩnh Châu, trên địa bàn

hiện có trên 800 người bị mù. Nạn nhân là những nông dân chuyên trồng hành và một

số thanh niên, phụ nữ nông thôn tham gia bóc vỏ hành thời vụ vào mùa thu hoạch hành

tím thương phẩm. Ngoài ra còn những ảnh hưởng chưa được nghiên cứu hết trên

những người trồng và người sử dụng, người tiêu dùng trên các loại hành này.

Với những lí do trên, đề tài “Xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật trongbảo quản củ hành tím ở Sóc Trăng” được thực hiện để thử nghiệm và đánh giá dư






Trang 3

lượng thuốc bảo vệ thực vật trong hành tím trong khi bảo quản để đưa ra các khuyến

cáo cũng như đánh giá mức độ độc hại ảnh hưởng đến sức khỏe của người nông dân,

người tiêu dùng.






Trang 4

MỤC TIÊU CỤ THỂ

Trong khuôn khổ một Luận văn tốt nghiệp đại học đề tài hướng đến mục tiêu:

Thử nghiệm quy trình chiết dư lượng của 2 loại thuốc bảo vệ thực vật

(Cypermethrin và Isoprocarb) được sử dụng để bảo quản củ hành tím.

Thẩm định quy trình và xác định dư lượng 2 loại thuốc bảo vệ thực vật

(Cypermethrin và Isoprocarb) bằng các phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

(HPLC).






Trang 5

TỔNG QUAN






Trang 6

CHƯƠNG I: THỊ XÃ VĨNH CHÂU VÀ CỦ HÀNH TÍM[1],[2][12]

I. Sơ lược về Thị xã Vĩnh Châu

Thị xã Vĩnh Châu thuộc Tỉnh Sóc Trăng. Phía Đông và Nam giáp biển Đông,

Phía Tây giáp tỉnh Bạc Liêu, Phía Bắc giáp huyện Mỹ Xuyên và Trần Đề; là một thị xã

nằm ven biển có 43 km chiều dài bờ biển; tổng diện tích tự nhiên 47.339,48 ha, dân số

có 163.800 người (số liệu thống kê năm 2009). Lĩnh vực nông nghiệp là kinh tế mũi

nhọn (chiếm tỷ trọng 72%), công nghiệp và tiểu thủ công nghiệp (chiếm 11%), thương

mại và dịch vụ (chiếm 17%). Với vị trí đắc địa ở vùng cửa sông giáp biển nên Vĩnh

Châu có lợi thế mạnh về nuôi trồng thuỷ sản, nổi bật là tôm sú, cá kèo... kế đến là

trồng hoa màu trên vùng đất cát pha, đất giồng ven biển với sản phẩm nổi tiếng là hành

tím, củ cải, tỏi ...là nguồn hàng chủ lực tiêu thụ mạnh trong cả nước và xuất khẩu ranhiều quốc gia trên thế giới.

II. Củ hành tím với người nông dân Vĩnh Châu

Thị xã Vĩnh Châu, tỉnh Sóc Trăng được ví như là “thủ phủ” hành tím của khu

vực ĐBSCL, với diện tích gieo trồng giao động từ 5 -7 ngàn ha hàng năm, tổng sản

lượng cung ứng ra thị trường lên đến hơn 150 ngàn tấn/năm.

Hình 2.1: Hành tím Vĩnh Châu

Theo Chi cục Bảo vệ thực vật và Sở Khoa học-Công nghệ Sóc Trăng, Hợp tác

xã hành tím Vĩnh Châu đã thực hiện mô hình sản xuất hành tím theo tiêu chuẩn Global

GAP. Sau hơn 1 năm thực hiện, Ngày 29/12/2009, Cục Sở hữu trí tuệ (Bộ Khoa học và

Công nghệ) có quyết định chứng nhận đăng ký nhãn hiệu hành tím Vĩnh Châu cho Câu

lạc bộ hành tím Vĩnh Châu (nay là Hợp tác xã hành tím Vĩnh Châu), thuộc ấp Cà Lăng

A Biển, xã Vĩnh Châu. Người trồng hành tím ở Vĩnh Châu vui mừng vì sản phẩm chủ

lực của địa phương này được cấp chứng nhận mô hình sản xuất hành tím theo tiêu

chuẩn Global GAP. Hành tím Vĩnh Châu được cấp vé “thông hành” để đến được một

số thị trường khó tính như: Indonesia, Thái Lan, Philippines, Ấn Độ…






Trang 7

Bên cạnh những thuận lợi người nông dân ở đây cũng gặp nhiều khó khăn và

nguy hiểm trong việc bảo quản củ hành thành phẩm. Theo thống kê chưa đầy đủ của

Hội Chữ thập đỏ thị xã Vĩnh Châu (2012), trên địa bàn hiện có 828 người bị mù, trong

đó 267 người bị mù cả hai mắt và 561 người bị mù một mắt. Nạn nhân phần lớn là

những nhà nông Khmer cần cù, chuyên trồng hành và một số thanh niên, phụ nữ nông

thôn tham gia bóc vỏ hành thời vụ vào mùa thu hoạch hành tím thương phẩm. Có

nhiều nguyên nhân gây mù cho người dân ban đầu được xác định là do môi trường làm

việc, bóc vỏ tiếp xúc trực tiếp với hành và bột bảo quản, bụi hành có chứa hóa chất

độc hại, hơi cay khi bóc củ hành xộc vào mắt, nhiều người thường lấy tay dụi gây

viêm loét.

Hình 2.2: Người nông dân bị mù khi làm việc không có bảo hộ lao động.

Để bảo quản củ hành người nông dân đã sử dụng thuốc bảo vệ thực vật trong

công thức với thành phần chính là bột đất sét và một số loại thuốc bảo vệ thực vật vớitên thương phẩm như sau: MISUER (Isoprocarb), SHERPA (Cypermethrin), VIMIPC

(Isoprocarb), VISHER (Cypermethrin),…

Hình 2.3: Hành được bảo quản theo công thức của người nông dân






Trang 8

CHƯƠNG II: THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT VÀ CÁC HOẠT

CHẤT SỬ DỤNG TRONG BẢO QUẢN HÀNH TÍM[3],[4],[8],[13]

I. Giới thiệu về hóa chất bảo vệ thực vật

1.1. Định nghĩa Hóa chất bảo vệ thực vật là những hợp chất có nguồn gốc tự nhiên hoặc tổng

hợp hóa học được dùng để phòng và trừ sinh vật gây hại cây trồng và nông sản . Thuốc

bảo vệ thực vật (thuốc trừ sâu) hay còn gọi là nông dược, là những chất độc có nguồn

gốc từ tự nhiên hay hóa chất tổng hợp được dùng để bảo vệ cây trồng và nông sản

nhằm chống lại sự phá hoại của những sinh vật gây hại đến tài nguyên thực vật. Những

sinh vật gây hại chính bao gồm: sâu hại, bệnh hại, cỏ dại, chuột và các tác nhân khác.

Hóa chất bảo vệ thực vật gồm nhiều nhóm khác nhau, được gọi theo tên nhóm sinh vật

gây hại, ví dụ như thuốc trừ sâu dùng để trừ sâu hại, thuốc trừ bệnh dùng để trừ bệnh

cho cây…

1.2. Phân loại

Thuốc bảo vệ thực vật gồm 4 nhóm chính:

- Nhóm Clo hữu cơ (Organnochlorine) là các dẫn xuất clo của một số hợp chất

hữu cơ như: Diphenyletane, Benzene,... Nhóm này gồm những hợp chất rất bền trong

tự nhiên và thời gian bán phân huỷ dài. Đại diện là Aldrin, Dieldrin, DDT,…

- Nhóm lân hữu cơ (Organophosphorus) đều là các Este, là các dẫn xuất hữu cơ

của Acid Photphoric. Nhóm này có thời gian bán phân huỷ ngắn và được sử dụng rộng

rãi. Nhóm này bao gồm một số hợp chất như : Parathion, Malathion, Diclovos,

Clopyrifos…

- Nhóm Carbamate là các dẫn xuất hữu cơ của Acid Cacbamic, gồm những hoá

chất ít bền vững hơn trong môi trường tự nhiên, song cũng có độc tính cao đối với

người và động vật. Đại diện cho nhóm này như: Carbofuran, Carbaryl, Isoprocarb,…

- Nhóm Pyrethroid là những thuốc trừ sâu có nguồn gốc tự nhiên, là hỗn hợp

của các Este khác nhau với cấu trúc phức tạp được tách ra từ hoa của những giống cúc

nào đó. Đại diện của nhóm này gồm Cypermethrin, Deltamethrin,…

Ngoài ra, còn có một số nhóm khác như: các chất trừ sâu vô cơ, nhóm thuốc trừ

sâu sinh học có nguồn gốc từ vi khuẩn, nấm, virus, nhóm các hợp chất vô cơ,…






Trang 9

II. Hoạt chất Cypermethrin và Isoprocarb

2.1. Cypermethrin

2.1.1. Tính chất

Chất lỏng màu vàng độ nhớt cao.

Thuộc nhóm Pyrethroid.

Tan trong Methanol, Acetone.

Nhiệt độ nóng chảy: 60-80oC.

Khối lượng phân tử: 416.3 g/mol.

Áp suất hơi: 110-7 mmHg (20°C).

Trong nước (nhiệt độ 20o

C và pH=4) thì thời gian bán hủy là 12,4-14,8ngày, trong không khí thời gian bán hủy là 3,47 giờ và trong đất thời gian

bán hủy là 34,2-38,2 ngày.

Khi bị thủy phân, thời gian bán hủy của Cypermethrin phụ thuộc vào dạng

đồng phân và pH của môi trường. Ở điều kiện nhiệt độ 25oC, thời gian bán

hủy của dạng đồng phân trans là 923 ngày, 136 ngày, 5 ngày và 23 phút

tương ứng với điều kiện pH là 3, 7, 8 và 11. Dạng đồng phân cis bền hơn

nên có thời gian bán hủy là 1302 ngày, 221 ngày, 21 ngày và 38 phút,

tương ứng với điều kiện pH là 3, 7, 8 và 11.

Cơ chế tác động động chủ yếu của Cypermethrin là tác động lên hệ thống

thần kinh, cơ chế tác động của Cypermethrin là gây ảnh hưởng đến sự vận

chuyển của Na+ qua màng tế bào thần kinh. Cypermethrin làm tăng độ

thấm của của Na+ qua màng tế bào thần kinh, kết quả gây nên sự lặp đi lặp

lại và kéo dài xung động thần kinh trong cơ quan cảm giác và làm đình trệ

xung động trong sợi thần kinh. Ngoài ra, Cypermethrin còn gây nên các

hiện tượng xung huyết (Congestion), xuất huyết (Haemorrhage), hoại tử

(Necrosis), teo nhân (Py knosis) trên một số cơ quan như não, gan, thận và

mang của cá.

2.1.2. Công thức và danh pháp

Công thức phân tử (CTPT): C22H19Cl2 NO3






Trang 10

Công thức cấu tạo:

O O

ClCl

O

N

(R, S)-alpha-cyano-3-phenoxybenzyl-2 ,2-dimethyl (1R, 1S)-cis, trans-3-(2,2 dichlorovinyl) cyclopropane-carboxylate(Cypermethrin)

Danh pháp: (R, S)-alpha-cyano-3-phenoxybenzyl-2,2-dimethyl (1R,1S)-

cis, trans-3-(2,2 dichlorovinyl) cyclopropane-carboxylate.

Tên thương mại bao gồm: Ammo Arrivo, Barricade, Basathrin, CCN52,Cymbush, Cymperator,….

2.1.3. Ứng dụng và ảnh hưởng của Cypermethrin trong nông nghiệp

Cypermethrin là hóa chất diệt côn trùng phổ rộng, nó giết cả côn trùng có lợi và

động vật cũng như côn trùng gây hại. Cypermethrin tác dụng gây độc nhanh với hệ

thần kinh của côn trùng. Sự kháng Cypermethrin đã phát triển nhanh chóng với những

côn trùng tiếp xúc thường xuyên và có thể làm vô hiệu hóa hiệu lực hiệu lực của nó.

Cypermethrin tác dụng tiếp xúc và vị độc, có phổ tác động rất rộng, trừ được nhiều

loại côn trùng và nhện hại, đặc biệt là côn trùng thuộc bộ cánh vẩy (Bướm).

Trong nuôi trồng thủy sản, Cypermethrin được sử dụng để diệt giáp xác nguồn

nước cấp cho các ao nuôi tôm. Cypermethrin cực độc đối với thủy sinh vật, đặc biệt là

nhóm giáp xác và côn trùng. Độ độc cấp tính của Cypermethrin đối với giáp xác và

côn trùng thường ở nồng độ nhỏ hơn 0,01 mg/L, đối với cá đối thì nhỏ hơn 1 mg/L.

Cypermethrin cũng được sử dụng trong ao nuôi cá để diệt ngoại ký sinh như: rận cá,

nấm thủy mi, trùng mỏ neo, trùng quả dưa, trùng bánh xe, sán lá… Thời gian xử lý là

15 ngày trước khi thả tôm, cá.

Hoạt chất Cypermethrin rất độc đối với cá rô đồng, LC 50-96 giờ là 23 µg/L.

Khi tiếp xúc với Cypermethin ở nồng độ 0,2 µg/L và 5,8 µg/L tần suất đớp khí trời của

cá rô tăng lần lượt 1,7 và 2,4 lần so với đối chứng nhưng có khuynh hướng giảm ở

nồng độ 2,3 µg/L. Khi tiếp xúc với Cypermethin, hệ số chuyển hóa thức ăn trong M30-

30 ngày và 1-60 ngày thí nghiệm có khuynh hướng gia tăng (p>0,05) so với đối chứng.Tốc độ tăng trưởng tương đối của đối của cá có xu hướng giảm dần theo sự gia tăng






Trang 11

nồng độ Cypermethrin. Ở nồng độ 5,8 µg/L, SGR giảm 11,4% trong 30 ngày thí

nghiệm và 3,2% so với đối chứng trong 60 ngày thí nghiệm. ( Nghiên cứu của Nguyễn

Văn Công, Trường Đại Học Cần Thơ).

Theo nghiên cứu của Nguyễn Thị Hiền (Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản II ,

thành phố Hồ Chí Minh) cho thấy Cypermethrin nồng độ 0,05 ppb gây chết 100% tôm

sau 10 ngày. Các nồng độ Cypermethrin còn lại là 0,01; 0,001 và 0,0001 ppb gây tỉ lệ

chết sau 35 ngày lần lượt là 76,2; 45,2 và 30,6%. Tôm chết có dấu hiệu hoại tử dạng 1

cơ quan gan tụy trên tổng số mẫu thu mô học và đọc được tiêu bản ở các nghiệm thức

Cypermethrin 0,05; 0,01; 0,001 và 0,0001 ppb có tỉ lệ lần lượt là là 0; 13,8; 14,3 và

42,9%. Trong khi đó, tỉ lệ mẫu tôm

2.2. Isoprocarb

2.2.1. Tính chất

Tinh thể màu trắng.

Thuộc nhóm Carbarmate.

Dễ tan trong Methanol, Acetone, không tan trong nước.

Nhiệt độ nóng chảy: 88-93oC.

Khối lượng phân tử: 193,2 g/mol.

Áp suất hơi: 0,1333mPa (25°C).

Độc tính LD50 qua miệng: 483 mg/kg.

Isoprocarb dễ bị phân hủy bởi kiềm, ít bền ở điều kiện đồng ruộng nên

thuốc chỉ có hiệu lực trong vài ngày.

2.2.2. Công thức và danh pháp

Công thức phân tử (CTPT): C11H15 NO2

Công thức cấu tạo:

CN

O

OH

CH

CH3

CH3

2-isopropylphenyl methylcarbamate(Isoprocarb)

H

Danh pháp: o-cumenyl methyl Carbamate

hoặc 2-isopropylphenyl methylCarbamate.

Tên thương mại: Etrofolan, Mipcine, Mipcin, Isoprocarbe, mipsin, Mipc,…






Trang 12

2.2.3. Ứng dụng trong nông nghiệp

Isoprocab được phối trộn với một số chất phụ gia khác dưới dạng bột hoặc nhũ

dầu ở nồng độ khoảng 20-25%, với tên thương phẩm: APLAUD-MIPC 25BTN,

VIMIPC 25 WP,…

Isoprocarb là hoạt chất thuốc trừ sâu tác động tiếp xúc và vị độc và tác động nội

hấp, xông hơi, diệt trứng sâu non, trưởng thành của nhiều loại sâu miệng nhai, miệng

chích hút. Phổ tác dụng rộng trừ nhiều loại sâu thuộc bộ cánh vảy, cánh cứng trên

nhiều loại cây trộng khác nhau: sâu đục thân, sâu gai hại lúa, sâu cuốn lá, sâu tơ hại

rau, sâu hại khoai tây,… Khi phun, xịt lên cây, thuốc được cây hấp thu nhanh. Trên lúa

thuốc diệt trừ được các loại bọ, rầy lúa rất mạnh chủ yếu thuốc được dùng để trị các

loại rầy lúa (rầy nâu, rầy xanh đuôi đen, rầy lưng trắng), trừ bọ xít, bọ trĩ, bọ gai, sâu

năng, các loại sâu ăn lá, nhưng lại ít hay không gây hại đến thiên địch, độc đối với cá.

Trên cây ăn trái, rau, cây công nghiệp như: xoài, thuốc lá, ca cao, trà, bông vải...

Thuốc trừ được một số loại rầy, bọ xít. Dùng Mipcin 20 ND liều lượng 2 -2,5 lít/ha,

nồng độ 1:300. Cần phun kỹ những nơi côn trùng ẩn nấp ngay từ lúc sâu còn non.

2.3. Công thức bảo quản và các loại thuốc hóa học dùng trong công

thức bảo quản

2.3.1. Công thức bảo quản

Công thức được chọn theo quy ước bảo quản của người dân địa phương trong

việc bảo quản củ hành tím như sau:

Bột đất + Vimipc (Isoprocarb) + Visher (Cypermethrin)

Bột đất + Miseur (Isoprocarb) + Sharpa (Cypermethrin)

Bột đất + Mipcin (Isoprocarb) + Visher (Cypermethrin)2.3 .2 Các loại thuốc hóa học dùng trong công thức bảo quản:

a. VIMIPC 25WP:

Hình 2.4: Thuốc trừ rầy rệp VIMIPC 25WP






Trang 13

VIMIPC 25WP là một chế phẩm của Công ty cổ phần thuốc sát trùng Việt

Nam. Thành phần chính là: Isoprcarb 25%, và thành phần phụ gia vừa đủ 100%.

Sản phẩm được người nông dân sử dụng đặc trị: rầy nâu, bọ trĩ, sâu năng , s âu

ăn lá, rầy bọ xít, rệp,… trên lúa và các loại cây trồng khác như: rau, xoài, cacao, cà

phê, thuốc lá,… Thuốc có tác động tiếp xúc, vị độc, hiệu lực lâu dài.

b. VISHER 25EC:

Hình 2.5: Thuốc trừ sâu VISHER 25EC

VISHER 25EC là một chế phẩm của Nhà máy nông dược Bình Dương. Thành

phần chính là: Cypermethrin 25%, và thành phần phụ gia vừa đủ 100%.

VISHER 25EC là loại thuốc đặc trị: rầy xanh, bọ xít, sâu vẽ bùa, sâu keo, sâu đục

quả,… Thuốc có tác động tiếp xúc, vị độc, hiệu lực lâu dài. Thuốc được sử dụng trên

lúa, bắp, cam, quýt, các loại rau màu, cây công nghiệp,…






Trang 14

CHƯƠNG III: PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH BẰNG SẮC KÝ

LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC)[7],[11],[14],[15],[16]

I. Phương pháp Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

HPLC là chữ viết tắt của 04 chữ cái đầu bằng tiếng Anh của phương pháp sắcký lỏng hiệu năng cao (HPLC: High Performance Liquid Chromatography), trước kia

gọi là phương pháp sắc ký lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography).

Phương pháp này ra đời từ năm 1967–1968 trên cơ sở phát triển và cải tiến từ phương

pháp sắc ký cột cổ điển.

Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) là một phương pháp tách hóa lý dựa vào ái

lực khác nhau của các chất khác nhau với hai pha luôn tiếp xúc và không trộn lẫn, một

pha động và một pha tĩnh. Trong đó pha động là chất lỏng chảy qua cột với một tốc độ

nhất định và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được phân chia dưới dạng tiểu phân

hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn, hay một chất mang đã được biến đối

bằng liên kết hóa học với các nhóm chức hữu cơ. Quá trình sắc ký lỏng dựa trên cơ

chế hấp phụ, phân bố, trao đổi ion hay phân loại theo kích cỡ (rây phân tử).

1.1. Nguyên tắc, cấu tạo máy sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

Để thực hiện việc tách một hỗn hợp chất bằng kỹ thuật phân tích HPLC, chúng

ta phải có hệ thống trang bị về kỹ thuật này. Hệ thống trang bị của HPLC đơn giản và

đủ để làm việc được theo kỹ thuật HPLC bao gồm các bộ phận chính sau:

* Bơm : có nhiệm vụ đẩy pha động vào trong cột sắc ký, rửa giải chất tan ra

khỏi cột sắc ký. Bơm có hai loại: bơm một piston và bơm hai piston, bơm một piston

áp suất có xung, bơm hai piston áp suất không có xung.

* Bộ phận tiêm mẫu : để bơm mẫu phân tích vào cột tách theo những lượng

mẫu nhất định không đổi trong một quá trình sắc ký. Có thể tiêm mẫu bằng tay haytiêm mẫu tự động (Autosampler ). Tiêm mẫu bằng tay thì độ lặp lại thường không tốt,

phụ thuộc rất nhiều vào kỹ thuật tiêm mẫu của người sử dụng, tiêm mẫu tự động độ lặp

lại tốt hơn nhiều.

* Cột sắc ký: là cột chứa pha tĩnh, nó là một yếu tố quyết định hiệu quả sự tách

sắc ký của một hỗn hợp chất mẫu. Cột được làm bằng thép không rỉ, chiều dài thường

từ 10-30 cm, đường kính trong từ 4-10 mm, cỡ hạt pha tĩnh từ 3-10 µm. Thường dùng

cột dài 15cm, 25cm, đường kính trong 4,6 mm, cỡ hạt 5 µm. Hiện nay, có cột dà i 5-10






Trang 15

cm, đường kính trong 1-4,6 mm, cỡ hạt 1,7 µm. Trước các cột sắc ký thường kèm theo

bộ phận tiền cột có tác dụng giữ lại phần bẩn từ dung môi, bảo vệ cột phân tích.

* Đầu dò (Detector ): khi chất phân tích đi qua đầu dò tạo tín hiệu điện, tín hiệu

này được đọc trên máy ghi, tín hiệu điện tỉ lệ với lượng chất phân tích đi qua đầu dò.

Đầu dò phải đạt các yêu cầu về: phát hiện nhanh và lặp lại, độ nhạy cao, không làm

thay đổi độ phân giải, không làm hỏng chất phân tích.

Hiện nay, có nhiều loại đầu dò như: đầu dò UV-Vis, đầu dò huỳnh quang, đầu

dò chuỗi Diod (DAD), đầu dò khúc xạ kế vi sai (RI), đầu dò điện hóa (ECD), đầu dò

đo độ dẫn (CD), đầu dò ghép khối phổ (MS),...

*Trang bị chỉ thị kết quả: Hiện nay, người ta sử dụng máy tính và máy in kèm

theo ghi tín hiệu đo dưới dạng các peak của các chất để xử lý kết quả và in kết quả.

Hình 2.6: Sơ đồ hệ thống HPLCTrong đó:

(1) Bình chứa dung môi pha động.

(2) Bộ phận khử khí.

(3) Bơm cao áp.

(4) Bộ phận tiêm mẫu.

(5) Cột sắc ký (pha tĩnh) (để ngoài môi trường hay trong bộ điều nhiệt).

(6) Detector (nhận tín hiệu).

(7) Hệ thống máy tính gắn phần mềm nhận tín hiệu và xử lý dữ kiệu, điều

khiển hệ thống HPLC.

(8) In dữ liệu.






Trang 16

1.2. Các yếu tố và thông số đặc trưng của máy sắc ký lỏng hiệu năng

cao (HPLC)

1.2.1. Cá c yếu tố trong sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

- Pha tĩnh thường là silicagel gắn các nhóm phân cực (-diol, -amine, -cyano,…),

ít hay không phân cực (-C18, -C8, - phenyl,…).

- Pha động là dung môi hay hệ dung môi (trong HPLC), là khí mang như

Nitrogen, heli, argon (trong GC).

- Trong HPLC chia làm 2 loại: pha thường hay pha thuận có pha tĩnh là phân

cực, pha động không phân cực; pha đảo thì ngược lại, pha tĩnh ít hay không phân cực,

pha động thì phân cực.

- Dung môi:+ Các dung môi dùng cho HPLC đều phải lọc qua màng lọc có kích thước lỗ là

0,45µm hay 0,22µm. (trừ một số dung môi mà sản xuất đã lọc trước: Acetonitrile,

Methanol,…)

+ Dung môi là nước hoặc hệ đệm trong nước thì dùng màng lọc Cellulose

Acetat hay Nitrat, hỗn hợp dung môi hữu cơ và nước thì dùng màng lọc Polyamid hay

Nylon, dung môi hữu cơ lọc qua màng lọc Teflon.

1.2.2. Các thông số đặc trưng trong sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

- Thời gian chết (to): là thời gian cần thiết để pha động chạy qua hệ thống tách.

- Thời gian lưu (tºR ): là thời gian cần thiết để từ khi chất được bơm vào cột cho

đến khi đạt nồng độ cực đại trên detector.

- Số đĩa lý thuyết (N): N = 16×(tR /W)2 với W là chiều rộng đáy peak. N tốt nhất

khi N gần bằng Nmax với Nmax = 4000 × (L/dr ) với L là chiều dài cột max (cm), dr là

đường kính hạt pha tĩnh (µm).

1.3. Định tính và định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng

cao (HPLC)

1.3.1. Định tính

Nguyên tắc của phân tích định tính là: so sánh thời gian lưu của các peak sắc ký

trong mẫu phân tích với thời gian lưu của các peak sắc ký trong mẫu chuẩn. Từ đó sẽ

xác định trong mẫu phân tích có những chất nào, nếu chúng có thời gian lưu giữ đúng

như thời gian lưu giữ của các peak trong mẫu chuẩn.

1.3.2. Định lượng






Trang 17

* Nguyên tắc

Tất cả các phương pháp định lượng bằng sắc ký đều dựa trên nguyên tắc: nồng

độ của chất tỷ lệ với chiều cao hoặc diện tích peak của nó.

* Phương pháp định lượng

Sau khi hòa tan thuốc, dung dịch hòa tan được lấy ra, đem lọc, pha loãng (nếu

cần), lọc qua màng lọc Milipore 0,45µm, tiến hành chạy sắc ký để định lượng.

Có 4 phương pháp định lượng trong sắc ký: phương pháp ngoại chuẩn, phương

háp nội chuẩn, phương pháp thêm chuẩn và phương pháp chuẩn hóa diện tích. Trong

điều kiện tiến hành luận văn ở phòng Kiểm Nghiệm, định lượng tiến hành theo phương

pháp ngoại chuẩn.

a. Phương pháp ngoại chuẩnPhương pháp ngoại chuẩn là phương pháp định lượng cơ bản, trong đó cả hai

mẫu chuẩn và thử đều được tiến hành sắc ký trong cùng điều kiện.

So sánh diện tích (hoặc chiều cao) peak của mẫu thử với diện tích (hoặc chiều

cao) peak của mẫu chuẩn sẽ tính được nồng độ của các chất trong mẫu thử.

Có thể sử dụng phương pháp chuẩn hóa một điểm hoặc nhiều điểm.

a.1 Chuẩn hóa một điểm: Chọn nồng độ của mẫu chuẩn xấp xỉ nồng độ của

mẫu thử.

Tính nồng độ mẫu thử theo công thức: s

x sS

S C xC

Cx : nồng độ mẫu thử

Cs: nồng độ chất chuẩn

Sx: diện tích (hoặc chiều cao) peak của mẫu thử

Ss: diện tích (hoặc chiều cao) peak của mẫu chuẩn

a.2 Chuẩn hóa nhiều điểm: Chuẩn bị một dãy chuẩn với các nồng độ tăng dần

rồi tiến hành sắc ký. Các đáp ứng thu được là các diện tích hoặc chiều cao peak ở mỗi

điểm chuẩn. Vẽ đồ thị chuẩn biểu diễn sự tương quan giữa diện tích S (hoặc chiều cao

H) của peak với nồng độ của chất chuẩn (C).

Sử dụng đoạn tuyến tính của đường chuẩn để tính toán nồng độ của chất cần

xác định có thể thực hiện việc tính toán này theo hai cách:

Áp dữ kiện diện tích hoặc chiều cao peak của chất thử vào đường chuẩn sẽ suyra được nồng độ của nó.






Trang 18

Hình 2.7: Đồ thị phương pháp ngoại chuẩn

Xây dựng phương trình hồi quy tuyến tính mô tả quan hệ giữa diện tích (hoặc

chiều cao) peak với nồng độ của chất cần xác định.

baY C x

^

Y = a + bCx

Y: diện tích peak

a: giao điểm của đường chuẩn với trục tung

b: độ dốc của đường chuẩn

Cx: nồng độ của chất thử.

Dựa vào phương trình hồi quy này ta tính được nồng độ chất thử.

Chú ý: Độ lớn của diện tích (hoặc chiều cao) peak mẫu thử phải nằm trong đoạn

tuyến tính của đường chuẩn.

b. Phương pháp nội chuẩn

Đối với phương pháp này, người ta thêm vào cả mẫu chuẩn lẫn mẫu thử những

lượng bằng nhau của một chất tinh khiết, rồi tiến hành sắc ký trong cùng điều kiện.

Chất được thêm là chất nội chuẩn.

Từ những dữ kiện về: diện tích (hoặc chiều cao) peak và hàm lượng (hoặc nồng

độ) của chuẩn, chất nội chuẩn và mẫu thử, có thể xác định được hàm lượng của thành

phần cần định lượng trong mẫu thử một cách chính xác. b.1 Chuẩn hóa một điểm: chất nội chuẩn được thêm vào cả mẫu chuẩn và mẫu

thử, rồi tiến hành sắc ký.

Lượng hoặc nồng độ của thành phần trong mẫu thử được tính như sau:

x IS IS

T T F m

S S

m

Tính theo nồng độ ta có: x IS

IS

T T F C

S

S C

S

C

S2

S1

Sx

Cx

x






Trang 19

b.2 Chuẩn hóa nhiều điểm:Chuẩn bị một dãy chuẩn có chứa những lượng (hoặc

nồng độ) chất chuẩn khác nhau nhưng tất cả cùng chứa một lượng (hoặc nồng độ) chất

nội chuẩn. Sau khi sắc ký và thu được các dữ kiện diện tích, tiến hành vẽ đường chuẩn,

biểu diễn sự tương quan giữa tỷ số diện tích (hoặc chiều cao) peak của chuẩn trên nội

chuẩn (SS/SIS) với tỷ số của nồng độ ngoại chuẩn trên nội chuẩn (CS/CIS).

Hình 2.8: Đồ thị phương pháp nội chuẩn

Song song tiến hành sắc ký mẫu thử cũng được thêm nội chuẩn với lượng (hoặcnồng độ) như thang chuẩn.

Tính tỷ số diện tích (hoặc chiều cao) peak của chất thử trên diện tích (hoặc

chiều cao) peak nội chuẩn (ST/SIS) rồi dựa vào đường chuẩn sẽ tìm được nồng độ của

chất thử (CT).

c. Phương pháp thêm chuẩn

Kỹ thuật này phối hợp phương pháp nội chuẩn và ngoại chuẩn.

Kỹ thuật tiến hành như sau:

- Xử lý mẫu thử rồi tiến hành sắc ký

- Thêm vào mẫu thử những lượng đã biết của các chất chuẩn tương ứng

với các thành phần có trong mẫu thử rồi lại tiến hành xử lý mẫu và sắc ký trong cùng

điều kiện. Nồng độ chưa biết CX của mẫu thử được tính dựa vào sự chênh lệch nồng độ

C (lượng chất chuẩn thêm vào) và sự tăng của diện tích (hoặc chiều cao) peak S

theo công thức: S C S x

xC

d. Phương pháp chuẩn hóa diện tích

Nguyên tắc: Hàm lượng phần trăm của một chất trong hỗn hợp nhiều thành

phần được tính bằng tỷ lệ phần trăm diện tích peak của nó so với tổng diện tích của tất

cả các peak thành phần trên sắc đồ.

Phương pháp này yêu cầu tất cả các thành phần đều được rửa giải và được phát

hiện. Tất cả các thành phần đều có đáp ứng detector như nhau. Kỹ thuật này được sử

SS/SIS

SS/SIS

Sx/SIS

Sx/SIS






Trang 20

dụng nhiều trong sắc ký khí vì thường có đáp ứng như nhau ở Detector Ion hóa ngọn

lửa (FID).

Ví dụ: Phân tách sắc ký một hỗn hợp gồm 3 thành phần: X, Y, Z.

Hàm lượng phần trăm của X được tính như sau:

n

i

i

x

Z Y X

x

S

S

S S S

S X

1

100100%

1.4. Ứng dụng của sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

Kỹ thuật phân tích HPLC đã đóng vai trò vô cùng quan trọng trong việc tách,

phân tích các chất trong mọi lĩnh vực khác nhau: hóa dược, sinh hóa, hóa dầu, các loại

chất độc hại…

Ngoài ra, kỹ thuật này còn dùng để định tính và định lượng các sản phẩm thuốc,

phân tích kiểm nghiệm các thành phần trong thực phẩm và môi trường…nhằm để đáp

ứng đầy đủ các quy định quốc gia và quốc tế.

II. Thẩm định quy trình phân tích:

2.1. Tầm quan trọng của việc thẩm định

Thẩm định quy trình phân tích là một quá trình tiến hành thiết lập bảng thực

nghiệm các thông số đặc trưng của phương pháp để chứng minh phương pháp đáp ứngyêu cầu phân tích dự kiến. Nói cách khác, việc thẩm định một quy trình phân tích yêu

cầu chúng ta phải chứng minh một cách khoa học rằng khi tiến hành thí nghiệm các sai

số mắc phải là rất nhỏ và chấp nhận được.

Trong các tiêu chuẩn chúng ta phải xây dựng phương pháp phân tích hay cũng

gọi là quy trình thử nghiệm để giúp cho việc thực hiện kiểm tra chất lượng cũng như

các tiêu chí đề ra cho các tiêu chuẩn đó.

Mục tiêu của việc thẩm định các phương pháp phân tích là để chứng tỏ rằngquy trình đáp ứng với yêu cầu dự kiến.

2.2. Nội dung thẩm định

Cơ sở cần thiết cho việc thẩm định phương pháp phân tích để định lượng những

thành phần chủ yếu trong nguyên liệu làm thuốc, hoạt chất trong các chế phẩm cần dựa

vào các tiêu chuẩn sau:

- Tính tuyến tính

- Độ lặp lại






Trang 21

- Giới hạn phát hiện

- Giới hạn định lượng

- Hiệu suất thu hồi.

2.2.1. Tính tuyến tính (Linearity)

Tính tuyến tính của một phương pháp phân tích là khả năng luận ra các kết quả

thử của phương pháp hoặc bằng phép biến đổi toán học hay trực tiếp dựa vào tương

quan tỉ lệ giữa đại lượng đo được và nồng độ. Tính tuyến tính trong một miền giá trị

được xác định bằng hệ số tương quan.

Cách thực hiện:

Tiến hành thực nghiệm để xác định ứng với các nồng độ x biết trước, các giá trị

định lượng được y. Như ta đã biết nếu y phụ thuộc tuyến tính vào x có nghĩa là trong

khoảng nồng độ cần khảo sát đường biểu diễn của y theo x là một đường thẳng (đoạn

thẳng) theo phương trình sau: Y = AX +B.

Dựa vào kết quả thu được từ thực nghiệm của x và y tương ứng ta tính hệ số

tương quan R:

22 )()(

)()(

y y x x

y y x x R

Nếu R = 1: có tương quan tuyến tính rõ rệt

R > 0: có tương quan đồng biến

R < 0: có tương quan nghịch biến

R < 5: không có tương quan nghịch biến

R > 5: có phụ thuộc tuyến tính

R = 0: hoàn toàn không có tương quan tuyến tính

Sau khi xác định được khoảng tuyến tính của phương pháp, ta có thể xây dựng phương trình hồi quy của khoảng này tức là xác định hệ số a và b của phương trình

trên:

n x x

n y x xy R

/

/22

; ax yb

y : giá trị định lượng được.

x : nồng độ định lượng.

* Phương trình hồi qui : Y = AX + B

Yêu cầu: Tùy theo hoạch định mà chọn giá trị R. Nói chung R phải ≥ 0,99.






Trang 22

2.2.2. Độ lặp lại (repeatability)

Độ lặp lại (hay độ chính xác) là mức độ sát gần giữa các kết quả thử riêng lẻ với

giá trị trung bình x thu được khi áp dụng phương pháp đề xuất cho cùng một mẫu thử

đồng nhất trong cùng điều kiện xác định.

Độ lặp lại bị ảnh hưởng bởi sai số ngẫu nhiên.

Độ lặp lại thường được thể hiện bằng độ lệch chuẩn (SD) hay độ lệch chuẩn

tương đối (RSD) của một loạt các lần thử ngiệm.


Với cùng một mẫu được làm đồng nhất, tiến hành xác định bằng phương pháp

đề xuất n lần (n = 6–10 hay nhiều hơn). Sau đó áp dụng công thức tính SD và RSD của

phương pháp.

1

)( 2

n

X xSD

i X: là giá trị trung bình

%100 X

SD RSD

n

x X i

Yêu cầu: RSD càng nhỏ, phương pháp phân tích càng chính xác, RSD do mỗi

phòng thí nghiệm đưa ra. Thông thường ta chọn RSD ≤ 10%

2.2.3. Giới hạn phát hiện (LOD) (Limit of Detection) Giới hạn phát hiện là nồng độ thấp nhất của chất thử trong mẫu thử còn có thể

phát hiện bằng phương pháp đề xuất, nó là một thông số của phương pháp thử giới

hạn. Giới hạn phát hiện thường được biểu thị bằng nồng độ phần trăm, phần ngàn,

phần tỷ của chất cần thử trong mẫu. Việc xác định giới hạn phát hiện không cần thiết

phải định lượng chính xác mà chỉ cần xác định chất thử có nồng độ thấp hơn hay cao

hơn một giới hạn nào đó.

Xác định: giới hạn phát hiện được xác định dựa vào phương trình hồi quy tuyến

tính của mẫu thử và các thông số thống kê (trắc nghiệm F- phân phối Fischer và trắc

nghiệm t- phân phối Student).

Giới hạn phát hiện (Limit of Detection: LOD) được tính theo công thức:

LOD=3,3độ lệch chuẩn/độ dốc

2.2.4. Giới hạn định lượng (LOQ) (Limit of Quantition)

Giới hạn định lượng là một thông số của phương pháp phân tích định lượng cáchợp chất có trong một khung mẫu với lượng thấp như những tạp chất trong nguyên






Trang 23

liệu làm thuốc và sản phẩm phân hủy có trong chế phẩm. Giới hạn định lượng là nồng

độ thấp nhất của chất cần phân tích có trong một mẫu thí nghiệm còn có thể xác định

được với độ đúng và độ chính xác có thể chấp nhận được.

Giới hạn định lượng có thể được biểu thị bằng nồng độ phần trăm, phần ngàn, phần tỷ

có chất cần phân tích có trong mẫu.

Xác định: giới hạn định lượng được xác định dựa vào phương trình hồi quy

tuyến tính của mẫu thử và các thông số thống kê (trắc nghiệm F- phân phối Fischer và

trắc nghiệm t- phân phối Student).

Giới hạn định lượng (Limit of Quantitation: LOQ) được tính theo công thức:

LOQ=10độ lệch chuẩn/độ dốc

2.2.5. Hiệu suất thu hồi - Xác định hiệu suất thu hồi để đánh giá được sự phục hồi của chất cần định

lượng khi qua quá trình chiết mẫu.

- Với định lượng: đảm bảo rằng kết quả thu được của hàm lượng chất cần phân

tích trong mẫu là chính xác.


- Pha dung dịch chuẩn trung gian: Cân một lượng chất cần phân tích và định

mức tới vạch bằng dung môi phân tích (CH3OH) ta sẽ được dung dịch trung gian A

với nồng độ a µg/ml.

- Pha dung dịch chuẩn: hút 1 ml dung dịch trung gian A cho vào bình định mức

10 ml và định mức tới vạch bằng dung môi.

- Dung dịch mẫu trắng + chuẩn: thêm 1 ml dung dịch trung gian vào mẫu trắng

(giai đoạn cân mẫu chuẩn bị cho quá trình chiết mẫu) tiến hành chiết mẫu theo quy

trình chiết mẫu.- Dung dịch mẫu trắng: được chiết theo quy trình.

- Khi hệ thống ổn định thì tiến hành bơm mẫu.

Kết quả hiệu suất thu hồi được tính như sau:

%100S

SS%H

Chuan

Mau trangMau trangChuanhoithu






Trang 24

THỰC NGHIỆM






Trang 25

CHƯƠNG I: CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM

1.1. Thời gian và địa điểm thực hiện

Thời gian thực hiện: Từ ngày 03/01/2013 đến ngày 14/05/2013.

Địa điểm thực hiện

- Phòng quản lý Chất lượng-Môi trường – Công ty cổ phần Thuốc sát

trùng Cần Thơ. Địa chỉ: Km 14, Quốc lộ 91, P. Phước Thới, Q. Ô Môn,

TP. Cần Thơ.

- Phòng thí nghiệm Hóa Sinh-Khoa Khoa Học Tự Nhiên-Trường Đại Học

Cần Thơ.

1.2. Phương pháp nghiên cứu và thí nghiệm

1.2.1. Phương pháp thí nghiệm

Qua một thời gian nghiên cứu và khảo sát tại phòng thí nghiệm của Công ty Cổ

phần Thuốc sát trùng Cần Thơ và Khoa khoa học Tự nhiên-Trường Đại Học Cần Thơ ,

chúng tôi đã lựa chọn được phương pháp chiết mẫu và phương pháp phân tích

Cypermethrin và Isoprocarb trên hệ thống “Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)” và

những điều kiện phân tích của hai hợp chất này trên hệ thống

1.2.2. Điều kiện ph ân tích

Qua quá trình khảo sát điều kiện phân tích được chọn theo tiêu chuẩn cơ sở năm

2010 của Công ty cổ phần Thuốc sát trùng Cần Thơ.

1.2.3. Phương pháp chiết mẫu

Chúng tôi đã lựa chọn phương pháp chiết theo AOAC, Tiêu chuẩn Việt Nam.

1.2.4. Đánh giá kết quả phân tích

Phương pháp đánh giá kết quả phân tích bằng phần mềm Excel.

1.3. Dụng cụ, thiết bị và hóa chất 1.3.1. Dụng cụ, thiết bị

- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

- Hệ thống cô quay

- Cân điện tử (chính xác 0,0001g)

- Bể siêu âm.

- Bình tam giác 500ml.

- Bình định mức (10ml, 25ml, 50ml).






Trang 26

- Pipet, micropipet 1000µL, 10µL

- Kim bơm mẫu bằng tay 50µL.

1.3.2. Hóa chất vàdung môi

- Nước siêu sạch (nước HPLC).

- Chuẩn gốc Cypermethrin 92,7%.

- Chuẩn gốc Isoprocarb 97,3%.

- Methanol.

- Chloroform.

- Natri Sulfat (Na2SO4).

Hình 3.1: Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao. Hình 3.2: Hệ thống cô quay

1.4. Hoạch định thí nghiệm

1.4.1. Xác định dư lượng Cypermethr in

Thí nghiệm 1: Định tính Cypermethrin.

Thí nghiệm 2: Khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Cypermethrin.

Thí nghiệm 3: Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của Cypermethrin.

Thí nghiệm 4: Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Cypermethrin.

Thí nghiệm 5: Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của Cypermethrin.

Thí nghiệm 6: Khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết. Thí nghiệm 7: Tiến hành trên mẫu thực.

1.4.2. Xác định dư lượng I soprocarb

Thí nghiệm 1: Định tính Isoprocarb.

Thí nghiệm 2: Khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Isoprocarb.

Thí nghiệm 3: Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của Isoprocarb.

Thí nghiệm 4: Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Isoprocarb.

Thí nghiệm 5: Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của Isoprocarb.

Thí nghiệm 6: Khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết.






Trang 27

Thí nghiệm 7: Tiến hành trên mẫu thực.

CHƯƠNG II: TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM

I. Xác định dư lượng Cypermethrin bằng phương pháp Sắc ký lỏng

hiệu năng cao (HPLC)

1.1. Phương pháp chiết mẫu phân tích

Qua quá trình nghiên cứu chúng tôi đã lựa chọn được quy trình chiết dư lượng

thuốc bảo vệ thực vật áp dụng cho hoạt chất Cypermethrin như sau:

Bước 1: Cân 100g mẫu hành tím đã cắt nhuyễn (chính xác 0,001g), cho vào

bình tam giác 500ml.

Bước 2: Cho tiếp vào bình tam giác 100ml Chloroform, sau đó đặt vào bể siêu

âm 20 phút. Lọc lấy dịch chiết và lặp lại thêm 2 lần.Bước 3: Đuổi bớt dung môi. Cho vào dung dịch Na2SO4 để loại bớt nước trong

dung dịch chiết.

Bước 4: Lọc lấy dịch chiết. Cô cạn dịch chiết và hòa lại bằng 10ml dung môi

Methanol được dung dịch phân tích.

1.2. Điều kiện phân tích Cypermethrin

Điều kiện phân tích Cypermethrin được chọn theo tiêu chuẩn cơ sở của Công ty

Cổ phần Thuốc sát trùng Cần Thơ năm 2010.

Cột pha đảo C18, 1504,6mm (i.d), 5 μm.

Pha động: Acetonitrile:Methanol (40:60).

Detector: UV-Vis; λmax= 278 nm.

Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút.

Thể tích tiêm: 20 μL.

1.3. Thẩm định quy trình phân tích dư lượng Cypermethrin1.3.1. Thí nghiệm 1: Định tính Cypermethrin

Mục đích: Xác định thời gian lưu của Cypermethrin trong mẫu thông qua thời

gian lưu của dung dịch chuẩn gốc khi phân tích trên hệ thống Sắc ký lỏng hiệu năng

cao (HPLC).

Thực hiện: Pha dung dịch từ chuẩn gốc (Cypermethrin 92,7%), dung dịch chiết

từ mẫu hành. Cho phân tích trên hệ thống Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).






Trang 28

1.3.2. Thí nghiệm 2: Khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của

Cypermethrin

Mục đích: Xác định giá trị độ lệch chuẩn tương đối (RSD) của quá trình định

lượng. RSD càng nhỏ phương pháp có độ chính xác càng cao (RSD ≤ 10%).

Thực hiện: Chuẩn bị mẫu: Lấy 1,0 ml dung dịch chuẩn 37,0 µg/ml cho vào

bình định mức 10ml có chứa nền mẫu, sau đó định mức tới vạch bằng CH3OH, thu

được dung dịch 3,7 µg/ml. Khi hệ thống ổn định thì tiến hành bơm mẫu.Tiến hành

phân tích theo quy trình 6 lần.

1.3.3. Thí nghiệm 3: Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của

Cypermethrin

Mục đích: Khảo sát tính tuyến tính lập dãy chuẩn với các nồng độ: 4µg/ml,

5µg/ml, 10µg/ml, 20µg/ml, 30µg/ml.

Xác định phương trình hồi quy Y = AX + B và hệ số tương quan tuyến tính (R)

giữa nồng độ và diện tích peak Cypermethrin.

Thực hiện: Chuẩn bị mẫu: Cân 34,6 mg Cypermethrin 92,7% dùng làm chuẩn,

cho vào bình định mức 25 ml, định mức tới vạch bằng CH3OH, lắc kỹ và cho vào bể

siêu âm khoảng 10 phút, ta được dung dịch chuẩn 1: 1283,5 µg/ml. Lấy 10 ml dung

dịch chuẩn 1 cho vào bình định mức 100 ml, sau đó định mức tới vạch, thu được dung

dịch chuẩn 2: 128,35 µg/ml. Lấy từng thể tích dung dịch chuẩn bằng Miropipet pha

các dung dịch với nồng độ 4µg/ml; 5µg/ml; 10µg/ml; 20µg/ml; 30µg/ml trong bình

định mức 10 ml. Khi hệ thống ổn định thì tiến hành bơm mẫu.

1.3.4. Thí nghiệm 4: Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của

Cypermethrin

Mục đích: Xác định nồng độ thấp nhất của Cypermethrin trong mẫu thí nghiệm

mà phương pháp có thể phát hiện được.

Thực hiện: Từ phương trình hồi quy tuyến tính Y = AX +B, tính được giới hạn

phát hiện của phương pháp.

1.3.5. Thí nghiệm 5: Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của

Cypermethrin

Mục đích: Tìm nồng độ thấp nhất của chất cần phân tích có trong mẫu thínghiệm còn có thể xác định được với độ đúng và độ chính xác có thể chấp nhận.






Trang 29

Thực hiện: Từ phương trình hồi quy tuyến tính Y = 36773X - 57960, tính được

giới hạn định lượng của phương pháp.

1.3.6. Thí nghiệm 6: Khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết

Mục đích: Xác định hàm lượng Cypermethrin trong mẫu thực tế và đánh giá

được độ sự thu hồi của phương pháp chiết.

Thực hiện: Chuẩn bị mẫu: cân 4,5 mg Cypermethrin 97% định mức tới vạch

25ml ta được dung dịch chuẩn 180 µg/ml. Hút 1ml dung dịch chuẩn 180 µg/ml cho

vào định mức tới vạch 10 ml bằng CH3OH, ta đượcdung dịch chuẩn 18 µg/ml.

Hút 1ml dung dịch chuẩn 180 µg/ml cho vào mẫu hành chuẩn bị chiết (mẫu

hành chưa được bảo quản) và tiến hành chiết mẫu theo quy trình, ta đượcdung dịch

chuẩn + mẫu.

Chuẩn bị mẫu trắng: chiết mẫu theo quy trình đã chọn (mẫu hành chưa được

bảo quản), ta được dung dịch mẫu trắng.

Triển khai các mẫu trên sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) theo điều kiện đã

chọn với 3 dung dịch trên.

Công thức tính hiệu suất thu hồi:

%100S

SS%HChuan


1.3 .7 Thí nghiệm 7: Tiến hành trên mẫu thực

Mục đích: Xác định hàm lượng (nồng độ) Cypermethrin trong mẫu thực tế.

Thực hiện: Quá trình lấy mẫu thực hiện trên mẫu thực tế trong 3 giai đoạn tính

từ ngày hành được đưa vào bảo quản (M00: 00 ngày; M30: 30 ngày; M60: 60 ngày;

M90: 90 ngày).

Ký hiệu mẫu Số ngày bảo quản

M00 Chưa BQ

M30 30 ngày

M60 60 ngày

M90 90 ngày

Quá trình chiết mẫu được thực hiện theo quy trình đã chọn. Khi hệ thống ổnđịnh thì tiến hành bơm mẫu.






Trang 30

II. Xác định dư lượng Isoprocarb bằng phương pháp Sắc ký lỏng hiệu

năng cao (HPLC)

2.1. Phương pháp chiết mẫu phân tích

Qua quá trình nghiên cứu chúng tôi đã lựa chọn được quy trình chiết dư lượng

thuốc bảo vệ thực vật áp dụng cho hoạt chất Cypermethrin như sau:

Bước 1: Cân 100g mẫu hành tím đã cắt nhuyễn (chính xác 0,001g) , cho vào

bình tam giác 500ml.

Bước 2: Cho tiếp vào bình tam giác 100ml Chloroform, sau đó đặt vào bể siêu

âm 20 phút. Lọc lấy dịch chiết và lặp lại thêm 2 lần.

Bước 3: Đuổi bớt dung môi. Cho vào dung dịch Na2SO4 để loại bớt độ ẩm

trong dung dịch chiết. Bước 4: Lọc lấy dịch chiết. Cô cạn dịch chiết và hòa lại bằng 10ml dung môi

Methanol được dung dịch phân tích.

2.2. Điều kiện phân tích

Điều kiện phân tích Isoprocarb được chọn theo tiêu chuẩn cơ sở của Công ty Cổ

phần Thuốc sát trùng Cần Thơ năm 2010.

Cột pha đảo C18, 1504,6mm (i.d), 5 μm.

Pha động: Methanol:Nước HPLC (80:20).

Detector: UV-Vis; λmax= 263 nm.

Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút.

Thể tích tiêm: 20 μL.

2.3. Thẩm định quy trình phân tích dư lượng Isoprocarb

2.3.1. Thí nghiệm 1: Định tính Isoprocarb.

Mục đích: Xác định thời gian lưu của Isoprocarb trong mẫu thông qua thờigian lưu của dung dịch chuẩn gốc khi phân tích trên hệ thống Sắc ký lỏng hiệu năng

cao (HPLC).

Thực hiện: Pha dung dịch từ chuẩn gốc (Isoprocarb 97,3%), dung dịch chiết từ

mẫu hành, phân tích trên hệ thống HPLC.

2.3.2. Thí nghiệm 2: Khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Isoprocarb

Mục đích: Xác định giá trị độ lệch chuẩn tương đối (RSD) của quá trình định

lượng. RSD càng nhỏ phương pháp có độ chính xác càng cao (RSD ≤ 10%).






Trang 31

Thực hiện: Chuẩn bị mẫu: Lấy 1,0 ml dung dịch chuẩn 37,0 µg/ml cho vào

bình định mức 10ml có chứa nền mẫu, sau đó định mức tới vạch bằng CH3OH, thu

được dung dịch 3,7 µg/ml. Khi hệ thống ổn định thì tiến hành bơm mẫu.Tiến hành

phân tích theo quy trình 6 lần.

2.3.3. Thí nghiệm 3: Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của

Isoprocarb

Mục đích: Khảo sát tính tuyến tính lập dãy chuẩn với các nồng độ: 0,5µg/ml,

1µg/ml, 2µg/ml, 3µg/ml, 4µg/ml, 5µg/ml.

Xác định phương trình hồi quy Y = AX + B và hệ số tương quan tuyến tính (R)

giữa nồng độ và diện tích peak Isoprocarb.

Thực hiện: Chuẩn bị mẫu: Cân 141,3 mg Isoprocarb 97% dùng làm chuẩn, chovào bình định mức 25 ml, định mức tới vạch bằng CH3OH, lắc kỹ và cho vào bể siêu

âm khoảng 10 phút, ta đượcdung dịch chuẩn 1: 5481 µg/ml. Lấy 1 ml dung dịch

chuẩn 1 cho vào bình định mức 100 ml, sau đó định mức tới vạch, thu được dung dịch

chuẩn 2: 54,81 µg/ml. Lấy từng thể tích dung dịch chuẩn bằng Miropipet pha các dung

dịch với nồng độ 0,5µg/ml; 1µg/ml; 2µg/ml; 3µg/ml; 4µg/ml; 5µg/ml trong bình định

mức 10 ml. Khi hệ thống ổn định thì tiến hành bơm mẫu.

2.3.4. Thí nghiệm 4: Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Isoprocarb

Mục đích: Xác định nồng độ thấp nhất của Isoprocarb trong mẫu thí nghiệm

mà phương pháp có thể phát hiện được.

Thực hiện: Từ phương trình hồi quy tuyến tính Y = AX + B; tính được giới

hạn phát hiện của phương pháp.

2.3.5. Thí nghiệm 5: Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của

IsoprocarbMục đích: Tìm nồng độ thấp nhất của chất cần phân tích (Isoprocarb) có trong

mẫu thí nghiệm còn có thể xác định được với độ đúng và độ chính xác có thể chấp

nhận.

Thực hiện: Từ phương trình hồi quy tuyến tính Y = AX + B; tính được giới

hạn định lượng của phương pháp.

2.3.6. Thí nghiệm 6: Khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết .

Mục đích: Xác định hàm lượng Isoprocarb trong mẫu thực tế và đánh giá được

sự hao hụt của phương pháp chiết.






Trang 32

Thực hiện: Chuẩn bị mẫu: Hút 1ml dung dịch 480 µg/ml cho vào bình định

mức 10 ml, định mức cho tới vạch bằng CH3OH, ta đượcdung dịch 48µg/ml.

Hút 1ml dung dịch 480 µg/ml cho vào mẫu hành chuẩn bị chiết (mẫu hành chưa

được bảo quản) và tiến hành chiết mẫu theo quy trình, ta đượcdung dịch chuẩn + mẫu.

Chuẩn bị mẫu trắng: chiết mẫu theo quy trình đã chọn (mẫu hành chưa được

bảo quản), ta được dung dịch mẫu trắng.

Triển khai các mẫu trên sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) theo điều kiện đã

chọn với 3 dung dịch trên.

Công thức tính hiệu suất thu hồi:

%100S

SS%H

Chuan


2.3.7. Thí nghiệm 7: Tiến hành trên mẫu thật

Mục đích: Xác định hàm lượng (nồng độ) Isoprocarb trong mẫu thực tế.

Thực hiện: Quá trình lấy mẫu thực hiện trên mẫu thực tế trong 4 giai đoạn khi

hành được đưa vào bảo quản (M00: 00 ngày; M30: 30 ngày; M60: 60 ngày; M90: 90

ngày).Ký hiệu mẫu Số ngày bảo quản

M00 Chưa BQ

M30 30 ngày

M60 60 ngày

M90 90 ngày

Quá trình chiết mẫu được thực hiện theo quy trình đã chọn. Khi hệ thống ổn

định thì tiến hành bơm mẫu.






Trang 33

CHƯƠNG III: THẢO LUẬN KẾT QUẢ

Có nhiều quy trình chiết tách từng loại dư lượng khác nhau và mỗi quy

trình sử dụng các loại dung môi riêng các quy trình thường. Trong phòng thí

nghiệm thường sử dụng quy trình chiết lỏng-lỏng để chiết dư lượng thuốc bảo

vệ thực vật. Sau đó, việc làm sạch trên các cột Silicagel, Florisil thì tốn kém

nhiều thời gian và tiền bạc. Tuy nhiên để thực hiện đề tài thì dung môi

Chloroform được lựa chọn để chiết đồng thời hai hoạt chất Cypermethrin và

Isoprocarb bởi vì tính phân cực cao và hòa tan tốt. Từ đó, áp dụng cho chất

chuẩn và cùng một nền mẫu thuộc quá trình chiết sẽ tính được hiệu suất thu hồi

sẽ xác định chính xác kết quả thật.

I. Kết quả xác định dư lượng Cypermethrin 1.1. Định tính Cypermethrin

0 5

0

50

100

0

. 9 6 3

2 . 0 3

7

2

. 7 0 3

3 . 2

3 3

4

. 0 5 3

4 . 2

3 2

Surveyor UV/VIS-278nm

Retention Time

Hình 3.3: Peak chuẩn Cypermethrin.

0 5

0

10

20

1 . 7

6 0

2 . 0

2 8


Retention Time

Hình 3.4: Peak Cypermethrin trong mẫu

Qua quá tr ình khảo sát sắc ký đồ của Cypermethrin chuẩn và Cypermethrin

trong mẫu thử, ta nhận thấy thời gian lưu của Cypermethrin khi phân tích trên hệ thống

Cypermethrin






Trang 34

HPLC nằm trong khoảng 2,0 phút. Như vậy ta đã xác định được vị trí trên sắc ký đồ

của Cypermethrin.

1.2. Khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Cypermethrin

Bảng 3.1: Kết quả khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) Cypermethrin

n S peak Nồng

độ Kết quả

1 73206 3,57Số lần thí nghiệm: n = 6 Độ lệch chuẩn: SD = 0,03 Độ lệch chuẩn tương đối: RSD % = 0,74%

2 74178 3,593 73812 3,584 74899 3,615 75941 3,646 75037 3,62

Độ lệch chuẩn SD=0,03; Độ lệch chuẩn tương đối RSD =0,74 %, theo tiêu

chuẩn RSD ≤ 10%. Vậy hệ thống phù hợp. 1.3. Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của Cypermethrin

Bảng 3.2: Khảo sát tính tuyến tính của Cypermethrin

Đường chuẩn Cypermethrin

y = 36773x - 57960

R2 = 0.9996

0

200000

400000

600000

800000

1000000

1200000

0 5 10 15 20 25 30 35

Nồng độ (ppm)

D i ệ n

t í c h

p e a k

Hình 3.5: Đồ thị khảo sát tính tuyến tính của

Cypermethrin

Với 9998,02 R R . Vậy trong khoảng nồng độ: 4-30µg/ml thì nồng độ X và

diện tích peak Y là tuyến tính theo phương trình Y = 36773X - 57960.

1.4. Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Cypermethrin

Bảng 3.3: Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Cypermethr in

Phương trình hồi quy Giới hạn phát hiện

Y = 36773X - 57960LOD=3,3độ lệch chuẩn/độ dốc =3,3 9517.5/36773=0,8541 µg/ml

Theo phương trình Y = 36773X – 57960, thì giới hạn phát hiện của

Cypermethrin LOD=0,5841 µg/ml.

Nồng độ

(µg/ml)

Vchuẩn2

(µL)VMeOH S peak

04 31,2Định

mức đến

10ml

82275

05 39,0 126942

10 77,9 311127

20 155,8 690024

30 233,7 1037170






Trang 35

1.5. Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của Cypermethrin

Bảng 3.4: Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của Cypermethrin

Phương trình hồi quy Giới hạn định lượng

Y = 36773X - 57960


=109517,5/36773=2,5882 µg/mlTheo phương trình Y = 36773X – 57960, thì giới hạn phát hiện của

Cypermethrin LOQ=2,5882 µg/ml.

1.6. Khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết

Bảng 3.5: Kết quả khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết Cypermethrin

Mẫu tlưu (phút) S peak Kết quả

Trắng 2,000 0

%15,73193159

0141300%

H Mẫu trắng + chuẩn 2,028 141300

Mẫu chuẩn 2,028 193159

Qua quá trình tách chiết dư lượng (với 3 lần lặp lại) thì hiệu suất thu hồi của

Cypermethrin H%=73,15%.

1.7. Tiến hành phân tích trên mẫu thật

0 5

0

200

400

600

1 . 7

6 8 2

. 0 4 3


Retention Time

Hình 3.6: Sắc ký đồ đồ trên mẫu chiết thật M90

Dư lượng Cypermethrin biểu thị bằng miligam trên kilogam (mg/kg), được tính

theo công thức:

%H10ma

1000V

X (mg/kg)X hoithu3

0 0

Trong đó: X 0: là nồng độ Cypermethrin theo phương trình hồi quy (µg/ml).

Vo: thể tích mẫu phân tích (ml).

a: là hệ số cô đặc.

m: khối lượng hành để chiết mẫu (g).

Hthu hồi%: là hiệu suất thu hồi.






Trang 36

Bảng 3.6: Kết quả nồng độ Cypermethrin trên mẫu thật (đơn vị: mg/kg)

Giaiđoạn

mmẫu chiết

(g)

Hệsố côđặt

S peak

Nồngđộ

(mg/kg)

Trung bình

(mg/kg)

M00100,1427 1 00000 0,000

0,00

100,3510 1 00000 0,000M30

100,3521 1 49079 0,3970,406

100,0681 1 53478 0,414

M60100,4129 1 63119 0,448

0,449100,1058 1 63206 0,450

M90100,0348 1 151616 0,779

0,759100,1953 1 141300 0,739

Nhận xét: Qua kết quả kiểm tra cho thấy dư lượng cao hơn rất nhiều so với Tiêu

chuẩn của Bộ Nông Nghiệp và Phát triển nông thôn (tối đa 0,01 mg/kg)

(TT68/2010/BNNPTNT).






Trang 37

II. Kết quả xác định dư lượng Isoprocarb

2.1. Định tính Isoprocarb

0 2 4

0

2

4

0 . 7

7 5

1 . 6

5 3

2 . 3

1 2


Retention Time

Hình 3.7: Peak Isoprocarb trong chuẩn.

0 2 4

0

100

200

300

0 . 9

5 8

2 . 3

0 8

Surveyor UV/VIS-263nmRetention Time

Hình 3.8: Peak Isoprocarb trong mẫu

Qua quá trình khảo sát sắc ký đồ của Isoprocarb chuẩn và Isoprocarb trong mẫu

thử, ta nhận thấy thời gian lưu của Isoprocarb khi phân tích trên hệ thống Sắc ký lỏng

hiệu năng cao (HPLC) nằm trong khoảng 2,3 phút. Như vậy ta đã xác định được vị trí

trên sắc ký đồ của Isoprocarb.

2.2. Khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Isoprocarb

0 2 4

0

50

100

2 . 2

0 8

2 . 2

7 0

3 . 2

9 2


Retention Time

Hình 3.9: Sắc ký đồ khảo sát độ lặp lại Isoprocarb

Isoprocarb






Trang 38

Bảng 3.7: Kết quả khảo sát độ chính xác (độ lặp lại) của Isoprocarb

n S peak

Nồngđộ

(µg/ml)Kết quả

1 740928 21,72

Số lần thí nghiệm: n = 6 Độ lệch chuẩn: SD = 1,53 Độ lệch chuẩn tương đối: RSD% = 7,43%

2 771822 22,563 618456 18,394 678847 20,045 714634 21,016 659237 19,50

Độ lệch chuẩn SD=1,53; Độ lệch chuẩn tương đối RSD = 7,43 %, theo tiêu

chuẩn RSD ≤ 10%. Vậy hệ thống phù hợp.

2.3. Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của Isoprocarb

Bảng 3.8: Khảo sát tính tuyến tính của Isoprocarb

Đường chuẩn Isoprocarb

y = 16036x + 5173.5

R2 = 0.9933

0

10000

20000

30000

40000

50000

60000

70000

80000

90000

0 1 2 3 4 5 6

Nồng độ ppm

D i ệ n t í c h p e a k

Hình 3.10: Đồ thị khảo sát tính tuyến tính của

Isoprocarb

Với 9966,02 R R . Vậy trong khoảng nồng độ : 0,5-5µg/ml thì nồng độ X

và diện tích peak Y tuyến tính theo phương trình Y = 16036X + 5173,5.

2.4. Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Isoprocarb

Bảng 3.9: Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) của Isoprocarb

Phương trình hồi quy Giới hạn phát hiện

Y = 16036X + 5173,5

LOD=3,3độ lệch chuẩn/độ dốc

=3,32915,18/16036

=0,5999 µg/ml

Theo phương trình Y = 16036X + 5173,5; thì giới hạn phát hiện của Isoprocarb

LOD=0,5999 µg/ml

Nồngđộ

(µg/ml)

Vchuẩn 2 (µL)

VMeOH S peak

0,5 91,2Định

mức đến vạch 10 ml

103061 182,4 221793 547,3 538414 729,8 713025 912,2 85723






Trang 39

2.5. Khảo sát giới hạn định lượng (LOQ) của Isoprocarb

Bảng 3.10: Kết quả tính giới hạn định lượng (LOQ) của Isoprocarb

Phương trình hồi quy Giới hạn định lượng

Y = 16036X + 5173,5


=102915,18/16036

=1,8179 µg/ml

Theo phương trình Y = 16036X + 5173,5; thì giới hạn phát hiện của Isoprocarb

LOQ=1,8179 µg/ml.

2.6. Khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết

Bảng 3.11: Kết quả khảo sát hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết Isoprocarb

Mẫu tlưu (phút) S peak TB Kết quả Trắng 2,20 0

%93,74771822

0578313%

H Mẫu trắng + chuẩn 2,20 578313

Mẫu chuẩn 2,27 771822

Qua quá tr ình tách chiết dư lượng (với 3 lần lặp lại) thì hiệu suất thu hồi của

Isoprocarb H%=74,93%.

2.7. Tiến hành phân tích trên mẫu thật

0 2 4

l

0

100

200

300

0 . 9

5 8

2 . 3

0 8


Retention Time

Hình 3.11: Sắc ký đồ mẫu thật M90Dư lượng Isoprocarb biểu thị bằng miligam trên kilogam (mg/kg), được tính

theo công thức:

%H10ma

1000V

X (mg/kg)X hoithu3

0 0

Trong đó:

X 0: là nồng độ Isoprocarb trong mẫu theo phương trình hồi quy (µg/ml).

Vo: thể tích mẫu phân tích (ml).

a: là hệ số cô đặc.






Trang 40

m: khối lượng hành để chiết mẫu (g).

Hthu hồi%: là hiệu suất thu hồi

Bảng 3.12: Kết quả nồng độ Isoprocarb trên mẫu thật (đơn vị: mg/kg).

Giai

đoạn

mmẫu chiết

(g)

Hệ số

cô đặt

S peak Nồng độ

(mg/kg)

Trung bình

(mg/kg)M00

100,6831 10 000000 0,0000,000

100,4106 10 000000 0,000

M30100,3452 10 315758 0,258

0,261100,2145 10 321906 0,263

M60100,3484 10 578673 0,476

0,476100,3215 10 578313 0,475

M90100,0124 10 1025422 0,868

0,859100,1597 10 1002136 0,849

Nhận xét: Qua kết quả kiểm tra cho thấy dư lượng cao hơn rất nhiều so với Tiêu

chuẩn của Bộ Nông Nghiệp và Phát triển nông thôn (tối đa 0,01 mg/kg)(TT68/2010/BNNPTNT).






Trang 41

KẾT LUẬN

VÀ

KIẾN NGHỊ






Trang 42

KẾT LUẬN

Qua 4 tháng thực hiện đề tài phân tích dư lượng hoạt chất Cypermethrin và

Isoprocarb bằng phương pháp Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) đã thu được kết quả

sau:

Tìm hiểu về các loại thuốc và các hoạt chất được sử dụng trong bảo quản

hành tím. Thử nghiệm bảo quản và phân tích dư lượng 2 loại hoạt chất

(Cypermethrin, Isoprocarb) sử dụng trong bảo quản theo thời gian là 90 ngày.

Mẫu được chọn là mẫu hành tím Vĩnh Châu (Sóc Trăng) chưa được bảo

quản. Được mang về bảo quản tại Khoa Khoa Học Tự Nhiên- Trường Đại

Học Cần Thơ. Thời gian: tháng 01-04/2013.

Công thức được lựa chọn để bảo quản là: Bột đất + Vimipc + Visher. Phân tích dư lượng 2 hoạt chất khác nhau với các điều kiện phân tích

khác nhau, vì vậy thời gian lưu của 2 hoạt chất này không anh hưởng với nhau

cũng như ảnh hưởng đến kết quả định lượng.

Xây dựng và thẩm định quy trình xác định dư lượng Cypermethrin và

Isoprocarb bằng phương pháp Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Quá trình

thẩm định đã đạt được các tiêu chí phù hợp như: Định tính, độ chính xác, tính

tuyến tính theo nồng độ, giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng

(LOQ), Hiệu suất thu hồi của phương pháp chiết.

Về phương pháp chiết tách đã chọn được quy trình chiết đồng thời cả 2

hoạt chất đơn giản, dễ thực hiện với hiệu suất thu hồi 73,15% cho

Cypermethrin và 74,93% cho Isoprocarb.

Tiến hành lấy mẫu phân tích dư lượng Cypermethrin và Isoprocarb với 4

lần lấy mẫu kiểm tra (M00: Mẫu chưa được bảo quản; M30: Mẫu được bảo

quản 30 ngày; M60: Mẫu được bảo quản 60 ngày; M90: Mẫu được bảo quản

90 ngày). Theo thời gian dư lượng thuốc càng ngày càng trở nên nhiều hơn.

Như vậy chính quá trình bảo quản làm tăng dư lượng thuốc bảo vệ thực vật

trong mẫu điều này rất nguy hiểm đối với người sử dụng.

Qua kết quả kiểm tra cho thấy dư lượng cao hơn rất nhiều so với Tiêu

chuẩn của Bộ Nông Nghiệp và Phát triển nông thôn (tối đa 0,01 mg/kg)

(TT68/2010/BNNPTNT).






Trang 43

Như vậy, việc tìm kiếm, lựa chọn chất bảo quản an toàn để thay thế cho

các loại thuốc trừ sâu là rất quan trọng.






Trang 44

KIẾN NGHỊ

Nếu có thời gian và kinh phí thực hiện chúng tôi sẽ thực hiện:

Kiểm tra dư lượng với nhiều công thức bảo quản khác nhau

Tiến hành kiểm tra dư lượng theo thời gian trên nhiều mẫu.

Tiến hành kiểm tra dư lượng trên mẫu bảo quản thực tế (của người nông dân

và mẫu thương phẩm).

Để đánh giá tốt hơn và khách quan hơn.






Trang 45

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tài liệu Tiếng Việt

[1] Cổng thông tin điện tử Vĩnh Châu (2013), Điều kiện tự nhiên, Giới thiệu Vĩnh Châu,

http://www.vinhchau.soctrang.gov.vn. Tỉnh Sóc Trăng.

[2] Quốc Minh (07/12/1012), Xóm mù mắt ở Vĩnh Châu - Sóc Trăng và chuyện dùng hoá chất

bảo quản nông sản, Trung tâm truyền hình Việt Nam tại Thành phố Cần Thơ.

[3] Trần Văn Hai (2013), Giáo trình Hóa bảo vệ thực vật , Khoa Nông nghiệp và Sinh

học ứng dụng, Trường Đại Học Cần Thơ.

[4] Nguyễn Trần Oánh (2007), Giáo trình Thuốc bảo vệ thực vật , Trường Đại Học

Nông Nghệp Hà Nội.

[5] Trương Quốc Phú, Ảnh hưởng của Cypermethrin đến đời sống thủy sinh vật và

động vật trên cạn, Khoa Thủy sản, Trường Đại Học Cần Thơ.

[6] Nguyễn Thị Hiền (2012), Đánh giá ảnh hưởng của Cypermethrin ở các nồng độ

khác nhau lên tỉ lệ sống và hiện tượng hoại tử cơ quan gan tụy trên tôm sú nuôi trong

điều kiện thực nghiệm trong nhà kín, Viện nghiên cứu và nuôi trồng thủy sản II, Quận

1, Thành phố Hồ Chí Minh.

[7] Nguyễn Thị Diệp Chi (2008), Giáo trình Các phương pháp phân tích hiện đại,

Khoa Khoa Học Tự Nhiên, Trường Đại Học Cần Thơ. [8] Nguyễn Thị Diệp Chi (2007), Giáo trình Phân tích kỹ thuật , Khoa Khoa Học Tự

Nhiên, Trường Đại Học Cần Thơ.

[9] Hoàng Hà (2009), Luận văn Thạc sĩ “Thực trạng dư lượng thuốc bảo vệ thực vật

trong một số loại rau trên địa bàn Hà Nội và đề xuất một số Phuong pháp quản lý

thuốc bảo vệ thực vật ”, Trường Đại Học Nông Nghệp Hà Nội.

[10] Tiêu chuẩn cơ sở, TCCS 29: 2011/BVTV Phương pháp xác định dư lượng thuốc

trừ sâu nhóm Carbamate trong rau, quả, Trung tâm kiểm định và khảo nghiệm thuốc

BVTV phía Nam, Hà Nội.

[11] Phạm Luận (2013), Bài giảng Sắc ký lỏng hiệu năng cao, Khoa Hóa học, Trường

Đại Học Quốc Gia Hà Nội.

[12] Đ.Triều, (29/11/2013), Nhiều người trồng hành tím bị mù mắt , trang tin Chính trị-

xã hội, Báo Tuổi Trẻ online, Thành Phố Hồ Chí Minh.



http://www.vinhchau.soctrang.gov.vn/






Trang 46

[13] Nguyễn Văn Công (2011), Ảnh hưởng của Cypermethrin lên tỷ lệ sống, tần suất

đớp khí trời và sinh trưởng cá rô đồng (anabas testudineus) giai đoạn giống , Tạp chí

Khoa học 2011:19b 197-208, Trường Đại học Cần Thơ.

[14] Nguyễn Đình Lâm (2013), Chuyên đề Sắc ký –Cơ sở lý thuyết và Ứng dụng,

Khoa Hóa, Trường Đại Học Bách Khoa Đà Nẵng.

Tài liệu Tiếng Anh

[15] Mohd Idris (2013), Simultaneous determination of methaqualone, saccharin,

paracetamol, and phenacetin in illicit drug samples by HPLC , Forensic Science

Institute, Osmania University, Hyderabad, India.

[16] Handbook (2007), Handbook of Hyphenated ICP-MS Applications, Agilent

Technologies.

[17] NPIC (1.800.858.7378), Cypermethrin, Oregon State University Environmental

and Molecular Toxicology, 333 Weniger Hall, Corvallis, OR 97331-6502.






Trang 47

PHỤ LỤC

Các Sắc ký đồ phân tích kèm theo sau:






Phụ lục Trang 1

Area % Report

Data File: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Data\050513

CYPERMETHRIN\130513 CYPERMETHRIN Mau Trang.dat

Method: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Method\CYPERMETHRIN.met

Printed: 5/13/2013 2:00:13 PM

0 5 10

0

500

1000

1 . 0

1 5

1 . 2

0 2

1 . 7

4 8 3

. 2 4

7

4 . 4

9 3


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-278nmResults (System

Reprocessed)

Retention Time Area Area % Height Height %

1.015 26906 0.25 4927 0.43

1.202 44388 0.41 3143 0.27

1.748 10384711 95.65 1092957 94.53

3.247 367711 3.39 54101 4.68

4.493 33077 0.30 1066 0.09

Totals 10856793 100.00 1156194 100.00






Phụ lục Trang 2

Area % Report


CYPERMETHRIN\130513 CYPERMETHRIN Trang+ Chuan.dat


Printed: 5/13/2013 2:04:33 PM

0 5 10

0

20

40

1 . 7

7 0

2 . 0

2 8

3 . 2

2 7


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-278nm

Results (SystemReprocessed)


1.770 257807 48.51 17616 27.34

2.028 193159 36.34 33823 52.49

3.227 80507 15.15 12994 20.17

Totals 531473 100.00 64433 100.00






Phụ lục Trang 3

Area % Report


CYPERMETHRIN\130513 CYPERMETHRIN Chuan.dat


Printed: 5/13/2013 2:41:24 PM

0 5 10

0

250

500

1 . 7

4 2 2

. 0 2

8

3 . 1

9 8


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-278nm



1.742 5150698 74.21 653274 66.51

2.028 141300 2.04 25546 2.60

3.198 1648379 23.75 303431 30.89

Totals 6940377 100.00 982251 100.00






Phụ lục Trang 4

Area % Report


CYPERMETHRIN\130513 CYPERMETHRIN Lap-01.dat


Printed: 5/13/2013 2:07:28 PM

0 5 10

0

5

10

15

2 . 0

2 7


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-278nm



2.027 73206 100.00 12633 100.00

Totals 73206 100.00 12633 100.00






Phụ lục Trang 5

Area % Report


CYPERMETHRIN\130513 CYPERMETHRIN M00.dat


Printed: 5/13/2013 2:00:13 PM

0 5 10

0

500

1000

1 . 0

1 5

1 . 2

0 2

1 . 7

4 8 3

. 2 4

7

4 . 4

9 3


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-278nmResults (System

Reprocessed)


1.015 26906 0.25 4927 0.43

1.202 44388 0.41 3143 0.27

1.748 10384711 95.65 1092957 94.53

3.247 367711 3.39 54101 4.68

4.493 33077 0.30 1066 0.09

Totals 10856793 100.00 1156194 100.00






Phụ lục Trang 6

Area % Report




Printed: 5/13/2013 2:29:44 PM

0 5 10

0

10

20

1 . 7

4 8

2 . 0

1 8 Surveyor UV/VIS-278nm

Retention Time

Surveyor

UV/VIS-278nm



1.748 247361 83.44 18419 69.53

2.018 49079 16.56 8070 30.47

Totals 296440 100.00 26489 100.00






Phụ lục Trang 7

Area % Report




Printed: 5/13/2013 2:34:11 PM

0 5 10

0

250

500

750

1 . 7

5 5 2

. 0 2 2


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-278nm



1.755 6009630 98.96 767227 98.54

2.022 63119 1.04 11366 1.46

Totals 6072749 100.00 778593 100.00






Phụ lục Trang 8

Area % Report




Printed: 5/13/2013 2:40:29 PM

0 5 10

0

200

400

600

1 . 7

7 3 2

. 0 4

3


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-278nm



1.773 5429881 97.28 672273 96.25

2.043 151616 2.72 26180 3.75

Totals 5581497 100.00 698453 100.00






Phụ lục Trang 9

Area % Report

Data File: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Data\050513CYPERMETHRIN\050513 CYPERMETHRIN 20ppm.dat Method: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Method\CYPERMETHRIN.metPrinted: 5/6/2013 10:10:18 AM

0 5 10

0

50

100

0 . 9

6 3

2 . 0

3 7

2 . 7

0 3

3 . 2

3 3

4 . 0

5 3

4 . 2

3 2


Retention Time

SurveyorUV/VIS-278nmResults (SystemReprocessed)

Retention Time Area Area % Height Height %0.963 5763 0.51 599 0.322.037 690024 60.77 109430 59.362.703 7225 0.64 514 0.28

3.233 390486 34.39 67571 36.654.053 8285 0.73 511 0.284.232 33658 2.96 5727 3.11

Totals1135441 100.00 184352 100.00






Phụ lục Trang 10

Area % Report

Data File: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Data\050513CYPERMETHRIN\050513 CYPERMETHRIN 30ppm.dat Method: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Method\CYPERMETHRIN.metPrinted: 5/6/2013 10:11:00 AM

0 5

0

50

100

150

2 . 0

4 2

2 . 6

7 3

3 . 2

3 3


Retention Time


Retention Time Area Area % Height Height %2.042 1037170 88.92 169501 88.142.673 1755 0.15 348 0.18

3.233 127521 10.93 22466 11.68

Totals 1166446 100.00 192315 100.00







Area % Report


CYPERMETHRIN\130513 ISOPRO.dat


Printed: 5/13/2013 2:43:24 PM

0 2 4 6

0

500

1000

1 . 0

0 8


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-263nm

Results (SystemOriginal)


1.008 154115 100.00 31138 100.00

Totals 154115 100.00 31138 100.00







Area % Report

Data File: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Data\050513 ISOPRO\130513

ISOPRO Trang.dat

Method: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Method\ISOPRO.met

Printed: 5/13/2013 2:45:17 PM

0 2 4 6

0

200

400

0 . 8

9 3


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-263nm

Results (SystemOriginal)


0.893 9952 100.00 1065 100.00

Totals

9952 100.00 1065 100.00







Area % Report


ISOPRO Chuan.dat


Printed: 5/13/2013 2:47:59 PM

0 2 4 6

0

50

100

1 . 5 4

8

2 . 2

0 8

2 . 2

7 2

3 . 2

9 2


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-263nm



1.548 32697 3.72 2429 1.77

2.208 226831 25.82 34418 25.08

2.272 544991 62.04 90484 65.93

3.292 73887 8.41 9904 7.22

Totals 878406 100.00 137235 100.00







Area % Report


ISOPRO LAP_01.dat


Printed: 5/13/2013 2:49:03 PM

0 2 4 6

0

50

100

0 . 8

9 3

2 . 2

7 2

3 . 2

9 3

3 . 5

2 0

3 . 7

1 0


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-263nm

Results (System

Reprocessed)


0.893 4295 0.51 726 0.70

2.272 740928 87.84 91350 88.63

3.293 94527 11.21 10447 10.14

3.520 846 0.10 84 0.08

3.710 2877 0.34 467 0.45

Totals

843473 100.00 103074 100.00







Area % Report

Data File: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Data\New Folder\20-4-13ISOPROCARB M00.dat Method: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Method\untitled.metPrinted: 4/11/2013 12:59:59 PM

0 2 4 6

0

50

100

150

. 0 . 9

2 7

1 . 5

6 0

2 . 1

5 3

3 . 3

4 0 3

. 7 5 2

4 . 2

0 3

4 . 8

5 7

5 . 4

3 0

5 . 9

6 3


Retention Time

SurveyorUV/VIS-263nmResults (SystemOriginal)


2.153 116272 5.97 5620 3.353.340 1569938 80.63 146119 87.193.752 30884 1.59 2274 1.364.203 106555 5.47 5004 2.994.857 26392 1.36 969 0.585.430 24252 1.25 993 0.595.963 4733 0.24 231 0.14

Totals1947205 100.00 167596 100.00







Area % Report


ISOPRO M30.dat


Printed: 5/13/2013 2:55:55 PM

0 2 4 6

0

25

50

75

0 . 9 2

5

2 . 2

0 8

2 . 2

9 0

3 . 3 2 0


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-263nm



0.925 30671 4.80 4915 4.89

2.208 236405 37.03 18463 18.38

2.290 315758 49.46 70327 70.00

3.320 55588 8.71 6756 6.72

Totals 638422 100.00 100461 100.00







Area % Report


ISOPRO M90.dat


Printed: 5/13/2013 3:03:33 PM

0 2 4 6

0

200

400

0 . 9

8 2

1 . 8

0 3

2 . 2

0 8 2 . 3

1 8

3 . 3

5 0


Retention Time

Surveyor

UV/VIS-263nm



0.982 203761 3.70 8444 1.25

1.803 4219432 76.58 500511 74.26

2.208 111894 2.03 20719 3.07

2.318 913528 16.58 136421 20.24

3.350 61557 1.12 7909 1.17

Totals

5510172 100.00 674004 100.00







Area % Report

Data File: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Data\New Folder\20-4-13ISOPROCARB 4ppm-2.dat Method: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Method\untitled.metPrinted: 4/11/2013 12:52:12 PM

0 2 4 6

0

2

4

0 . 9

4 2

1 . 7

2 0

2 . 3

1 8


Retention Time



2.318 71302 66.39 5028 65.09

Totals107395 100.00 7725 100.00







Area % Report

Data File: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Data\New Folder\20-4-133ppm-2.dat Method: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Method\untitled.metPrinted: 4/11/2013 12:53:02 PM

0 2 4 6

0

2

4

0 . 7

5 8

1 . 7

2 0

2 . 3

0 0


Retention Time



Totals66652 100.00 6459 100.00






Area % Report

Data File: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Data\New Folder\20-4-13ISOPROCARB 5ppm-4.dat Method: C:\ChromQuest\Enterprise\Projects\Default\Method\untitled.metPrinted: 4/11/2013 12:53:46 PM

0 2 4 6

0.0

2.5

5.0

0 . 9

4 0

1 . 6

3 5

2 . 1

1 0

2 . 3

1 8


Retention Time



2.318 82723 80.95 5692 68.31

Totals102186 100.00 8333 100.00


Xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật trong bảo quản củ hành tím Vĩnh Châu (Sóc Trăng)

Documents