UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS …repositorio.ug.edu.ec/bitstream/redug/28376/1/BCIEQ-T-0251 Cedeño... · presencia de azucares reductores, saponinas y flavonoides

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

INVESTIGACIÓN

TEMA:

“ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO Y FITOQUÍMICO

DE LAS HOJAS DE DOS VARIEDADES DE

ACHOTILLO (Nephelium lappaceum L.)”

TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO

PARA OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICO Y FARMACÉUTICO

AUTORES:

LILIANA DEL ROCÍO CEDEÑO GÓMEZ

JORGE PATRICIO GANCHOZO MORÁN

TUTORA:

QF. LAURA VALDEZ LÓPEZ M.Sc.

CO-TUTORA:

Dra. MIGDALIA MARTÍNEZ Ph.D

GUAYAQUIL - ECUADOR

2018

ii

FICHA DE REGISTRO DE TESIS/TRABAJO DE GRADUACIÓN

TÍTULO Y SUBTÍTULO: ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO Y FITOQUÍMICO DE LAS HOJAS DE DOS VARIEDADES DE ACHOTILLO (Nephelium lappaceum L.)

AUTOR(ES) (apellidos/nombres): LILIANA DEL ROCÍO CEDEÑO GÓMEZ, JORGE PATRICIO GANCHOZO MORÁN

REVISOR(ES)/TUTOR(ES) (apellidos/nombres):

ADONIS BELLO Ph.D. (REVISOR) Q.F. LAURA VALDEZ (TUTORA)

INSTITUCIÓN: UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

UNIDAD/FACULTAD: FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

MAESTRÍA/ESPECIALIDAD:

GRADO OBTENIDO: TERCER NIVEL – QUIMICO FARMACÉUTICO

FECHA DE PUBLICACIÓN: 14 DE MARZO 2018 No. DE PÁGINAS: 63

ÁREAS TEMÁTICAS: FITOQUÍMICA

PALABRAS CLAVES/ KEYWORDS:

achotillo, fenoles, flavonoides, fitoquímico, farmacognóstico.

RESUMEN/ABSTRACT (150-250 palabras): El trabajo de investigación titulado “ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO Y

FITOQUÍMICO DE LAS HOJAS DE DOS VARIEDADES DE ACHOTILLO (Nephelium lappaceum L.)”, tuvo como

finalidad la identificación de compuestos activos presentes en las hojas de dos variedades de achotillo cultivada

en una Finca correspondiente al Cantón Quevedo Provincia de Los Ríos. El presente proyecto inició con el lavado,

secado y molienda de las hojas; métodos de percepción y características organolépticas de las hojas, se realizaron

los estudios farmacognósticos para lo cual se llevaron a cabo diferentes análisis para determinar contenido de

humedad, cenizas totales, cenizas solubles en agua respectivamente. En el tamizaje fitoquímico se determinó

cualitativamente la presencia de azucares reductores, saponinas y flavonoides en las dos variedades de hojas;

con respecto al análisis cuantitativo para las dos variedades de achotillo se evidenció que las hojas amargas

contienen mayor cantidad de fenoles y flavonoides que las hojas dulces.

ADJUNTO PDF: SI NO

CONTACTO CON AUTOR/ES: Teléfono: 0985534819 - 0980126767

E-mail: [email protected]

[email protected]

CONTACTO CON LA INSTITUCIÓN:

Nombre: SEDE CIENCIAS QUIMICAS

Teléfono: 042293680

E-mail: www.fcq.ug.edu.ec

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DEDICATORIA

Dedicamos nuestro trabajo y toda nuestra carrera universitaria a

nuestro Dios Todopoderoso por brindarnos la sabiduría suficiente

para tomar las mejores decisiones y brindarnos la oportunidad de

ser profesionales, para honrarlo y venerarlo en todo lo que nos

propongamos en nuestra vida.

A él le dedicamos este trabajo, por estar siempre presente en cada

paso que damos apoyándonos en nuestras luchas y victorias y

darnos las fuerzas necesarias para no desmayar y seguir adelante

hasta alcanzar nuestro objetivo.

Liliana y Jorge

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AGRADECIMIENTOS

Agradezco en primer lugar a mis amados padres que han sido los pilares fundamentales

en mi vida, gracias a ellos me he convertido en una mujer guerrera que no desmaya

ante los obstáculos que se presentan en la vida.

El camino que he tenido que seguir para cumplir este objetivo de ser profesional no fue

nada fácil tantas horas de desvelo y de sacrificio constante me permitieron cumplir mi

sueño, y gracias a las personas que supieron alentarme en los momentos más difíciles

y a mis queridos amigos Mayra y Wladimir por siempre estar pendiente de mí cuando

más necesitaba de una mano amiga.

Agradezco a mi hermosa familia, a mis hermanos, a mis suegros, a mi esposo Miller,

que me apoyaba en cada paso desvelándose conmigo y ayudándome en todo lo que

necesitaba, mi hermoso hijo Dereck que, aunque no entendía mi esfuerzo siempre me

apoyaba para seguir adelante, era mi inspiración para ser mejor cada día gracias por

estar siempre a mi lado.

Agradezco a mi amigo y compañero de tesis Jorge por estar dispuesto a colaborar

cuando más lo necesitaba gracias amigo mío por tu buena actitud.

Mi gratitud a la Dra. Migdalia Miranda Martínez, por su valiosa ayuda y orientación del

trabajo, sin importar cuan ocupada se encontraba siempre estaba dispuesta a

ayudarnos sin problemas y con una gran sonrisa.

A mi segunda madre y tutora la Dra. Laura Valdez López que estuvo pendiente de

nosotros en cada momento, que estuvo siempre dispuesta a colaborarnos y guiarnos en

nuestro trabajo, ayudándonos con mucha paciencia y amor.

Agradezco infinitamente a mi querido profesor Dr. Oswaldo Pesantes por facilitarnos el

Laboratorio de Productos Naturales para Investigación Docencia y Estudiantil, y al Dr.

Carlos Silva por estar dispuesto a ayudarnos en cada momento y prestarnos el

laboratorio de Análisis Químico de Alimentos.

Muchísimas gracias

Liliana

xv

“ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO Y FITOQUÍMICO DE LAS HOJAS DE DOS

VARIEDADES DE ACHOTILLO (Nephelium lappaceum Linneo.)”

AUTORES: Ganchozo Morán Jorge Patricio

Cedeño Gómez Liliana del Rocío

TUTOR: QF. Laura Valdez López.

RESUMEN

El trabajo de investigación titulado “ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO Y FITOQUÍMICO

DE LAS HOJAS DE DOS VARIEDADES DE ACHOTILLO (Nephelium lappaceum L.)”,

tuvo como finalidad la identificación de compuestos activos presentes en las hojas de

dos variedades de achotillo cultivada en una Finca correspondiente al Cantón Quevedo

Provincia de Los Ríos. El presente proyecto inició con el lavado, secado y molienda de

las hojas; métodos de percepción y características organolépticas de las hojas, se

realizaron los estudios farmacognósticos para lo cual se llevaron a cabo diferentes

análisis para determinar contenido de humedad, cenizas totales, cenizas solubles en

agua respectivamente. En el tamizaje fitoquímico se determinó cualitativamente la

presencia de azucares reductores, saponinas y flavonoides en las dos variedades de

hojas; con respecto al análisis cuantitativo para las dos variedades de achotillo se

evidenció que las hojas amargas contienen mayor cantidad de fenoles y flavonoides que

las hojas dulces.

Palabras claves: achotillo, fenoles, flavonoides, fitoquímico, farmacognóstico.

xvi

"STUDY PHARMACOGNOSY AND PHYTOCHEMICALS OF THE LEAVES OF

TWO VARIETIES OF ACHOTILLO (Nephelium lappaceum L.)"

AUTHORS: Ganchozo Morán Jorge Patricio

Cedeño Gómez Liliana del Rocío

TUTOR: QF. Laura Valdez López.

ABSTRACT

The research work entitled "Study pharmacognosy and phytochemicals of the leaves of

two varieties of achotillo (Nephelium lappaceum L.)", aimed to identify active compounds

present in the leaves of two varieties of achotillo cultivated in a farm corresponding to

the canton Quevedo, provincia de Los Rios. This project began with the washing, drying

and milling of the leaves; Methods of perception and organoleptic characteristics of the

leaves, both bitter and sweet; Subsequently, pharmacognosy studies were conducted

for which different analyses were carried out to determine moisture content, total ashes,

water soluble ashes, respectively, by which it was demonstrated that it complies with the

requirements of established quality. In the phytochemicals, the presence of reducing

sugars, saponins and flavonoids were determined qualitatively in which there was no

significant difference between the two varieties of leaves; With respect to the quantitative

analysis for the two varieties of Achotillo, it is was that the bitter leaves contain more

phenols and flavonoids than the sweet leaves.

Key words: achotillo, phenols, flavonoids, phytochemical, pharmacognostic.

xvii

ÍNDICE GENERAL

DEDICATORIA .......................................................................................................................xiii

AGRADECIMIENTOS ............................................................................................................ xiv

RESUMEN ............................................................................................................................... xv

ÍNDICE GENERAL ................................................................................................................ xvii

INTRODUCCIÓN ...................................................................................................................... 1

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ................................................................................... 2

HIPÓTESIS ............................................................................................................................... 2

OBJETIVO GENERAL ............................................................................................................. 2

OBJETIVO ESPECÍFICOS ..................................................................................................... 2

CAPÍTULO I. MARCO TEÓRICO ........................................................................... 3

I.1. ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN ........................................................... 3

I.2. MARCO TEÓRICO ............................................................................................................ 4

I.2.1. Nephelium lappaceum L. generalidades .................................................................... 4

I.2.2. Características ............................................................................................................... 5

I.2.4. Descripción Botánica ..................................................................................................... 7

I.2.4.1. Árbol .......................................................................................................... 7

I.2.4.2. Raíces ....................................................................................................... 8

I.2.4.3. Hojas ......................................................................................................... 8

I.2.4.4. Flores ......................................................................................................... 9

I.2.4.5. Fruto .......................................................................................................... 9

I.2.5. Valores nutritivos y medicinales del achotillo o rambután (Nephelium lappaceum

L.) ................................................................................................................................................ 9

I.2.6. Estudio Farmacognóstico........................................................................................... 11

I.2.6.1. Conceptos de la farmacognosia ............................................................... 11

I.2.7. Estudio fitoquímico ...................................................................................................... 11

I.2.8. Marco conceptual ........................................................................................................ 13

CAPÍTULO II. MATERIALES Y MÉTODOS ....................................................................... 15

II.1. METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN ................................................................ 15

II.1.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN .......................................................................... 15

II.2. VARIABLES DE LA INVESTIGACIÓN ........................................................................ 15

II.2.1. VARIABLE INDEPENDIENTE .................................................................... 15

II.2.2. VARIABLE DEPENDIENTE ....................................................................... 15

Metabolitos secundarios encontrados en las dos variedades de hojas. ....................... 15

II.2.3. VARIABLE INTERVINIENTE ..................................................................... 15

xviii

II.6. ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO ...................................................................... 16

II.6.1. RECOLECCIÓN Y SELECCIÓN DEL MATERIAL VEGETAL ................. 16

II.7. MÉTODOS DE PERCEPCIÓN DE LAS HOJAS ....................................................... 16

II.7.1. MACROMORFOLOGÍA ............................................................................ 16

II.7.2. CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS ........................................................... 16

Se tomó en cuenta el olor, sabor, color, condición, y textura de la droga. ............. 16

II.8. SECADO, MOLIDA Y ALMACENAMIENTO .............................................................. 16

II.9. DETERMINACIÓN DE LOS PARÁMETROS FÍSICO-QUÍMICOS ......................... 17

II.9.2. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD POR SECADO EN ESTUFA. MÉTODO

GRAVIMÉTRICO. ................................................................................................. 17

II.9.3. DETERMINACIÓN DE CENIZAS TOTALES. ............................................. 18

II.9.4. DETERMINACIÓN DE CENIZAS SOLUBLES EN AGUA. ......................... 19

II.9.6. DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS SOLUBLES. .................................... 19

II.10. ESTUDIO QUÍMICO CUALITATIVO. ........................................................................ 20

II.10.1. TAMIZAJE FITOQUÍMICO ........................................................................ 20

................................................................................................................................................... 25

II.11. ANALISIS DEL EFECTO ANTIOXIDANTE .............................................................. 26

II.11.1. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FENOLES TOTALES ........................ 26

II.11.2. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FLAVONOIDES TOTALES

EXPRESADOS COMO QUERCETINA .............................................................................. 27

II.12. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA ......................................................................... 27

CAPÍTULO III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN .................................................................. 29

III.2. CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS DE LAS HOJAS ............................. 30

III.3. DETERMINACIÓN DE LOS ÍNDICES FARMACOGNÓSTICOS DE LAS HOJAS

31

III.4. TAMIZAJE FITOQUÍMICO ........................................................................................... 32

III.5. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FENOLES ................................................ 34

III.7. SUSTANCIAS EXTRAÍBLES ....................................................................................... 38

II.8. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA ........................................................................... 39

CONCLUSIONES ................................................................................................................... 40

RECOMENDACIONES ......................................................................................................... 40

BIBLIOGRÁFIA ....................................................................................................................... 41

ANEXOS .................................................................................................................................. 45

xix

ÍNDICE TABLAS

Tabla I. Clasificación taxonómica del Achotillo (Nephelium lappaceum). ...................... 7

Tabla II. Valores nutricionales del achotillo (Nephelium lappaceum L.) .......................10

Tabla III. Fitoquímicos más estudiados .......................................................................12

Tabla IV. Características Macromorfológicas del Nephelium lappaceum L. .................29

Tabla V. Mediciones de largo y ancho del Nephelium lappaceum L. ...........................30

Tabla VI. Características Organolépticas del Nephelium lappaceum L. .......................30

Tabla VII. Resultados de la determinación de los índices farmacognósticos del

Nephelium lappaceum L. .............................................................................................31

Tabla VIII. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Etéreo del Nephelium

lappaceum L. ...............................................................................................................32

Tabla IX. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Alcohólico del Nephelium

lappaceum L. ...............................................................................................................33

Tabla X. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Acuoso del Nephelium

lappaceum L. ...............................................................................................................34

Tabla XI. Absorbancia según su concentración para la curva de calibración con patrón

Ácido Gálico ................................................................................................................35

Tabla XII. Resultados obtenidos de la Absorbancia de Fenoles ..................................35

Tabla XIII. Absorbancia según su concentración para la curva de calibración con patrón

Quercetina. .................................................................................................................36

Tabla XIV. Resultados obtenidos de la Absorbancia de Flavonoides ..........................37

Tabla XV. Resultados obtenidos de Materia Extraíble en Etanol de las Hojas Dulces .38

Tabla XVI. Resultados obtenidos de Materia Extraíble en Etanol de las Hojas Amargas

....................................................................................................................................38

Tabla XVII. Resultados del factor de retención utilizando como revelador el ácido

sulfúrico. ………………………………………………………………………………………39

xx

ÍNDICE FIGURAS

Figura 1. Árbol Nephelium lappaceum L. .............................................................................. 5

Figura 2.Fruto Nephelium lappaceum L. ................................................................................ 6

Figura 3. Hoja (Nephelium lappaceum L.) .............................................................................. 8

Figura 4. Tamizaje fitoquímico. Extracción sucesiva con disolventes ............................. 24

Figura 5. Reacciones cualitativas a realizar en los extractos ............................................ 25

Figura 6.Curva de calibración con patrón Ácido Gálico ..................................................... 35

Figura 7. Curva de calibración con patrón Quercetina ....................................................... 37

Figura 8.Cromatografía de capa fina de las dos variedades de achotillo ....................... 39

1

INTRODUCCIÓN

El rambután o mamón chino se ha transformado en los últimos años en una de las

frutas “no tradicionales” más populares en el mercado de nuestro país. El color atractivo

y la apariencia característica de la fruta, el exquisito sabor de su pulpa, la relativa

rusticidad y capacidad productiva de los árboles de esta especie, han permitido que este

cultivo se transforme en una actividad frutícola promisoria de las zonas tropicales

húmedas de nuestro país. El achotillo (Nephelium lappaceum L.), es un frutal tropical

exótico, perteneciente a la Familia Sapindaceae, y es nativo de la región de Malasia e

Indonesia. El achotillo se ha difundido desde tiempos prehistóricos en la mayoría de los

países tropicales del Sureste de Asia. (Fraire, 2001)

El campo Agroindustrial no sólo se enfoca en la parte del proceso de

transformación; también es su compromiso de investigar nuevas formas de

aprovechamiento de los recursos existentes para desarrollar un manejo integral

adecuado, que incentive y ayude al productor agrícola a ofertar productos que luego

garanticen, seguridad y salud al consumidor, fomentando y desarrollando investigación.

En la bibliografía revisada se pudo encontrar diversos estudios realizados a la

cáscara y al fruto, en donde se dan a conocer compuestos de gran importancia química

como flavonoides, polifenoles, terpenos; cabe mencionar que no existen análisis

farmacognósticos y fitoquímicos realizados a las hojas de Nephelium lappaceum L., por

lo que el estudio a las hojas de achotillo será de gran aporte al incorporar información

publicada por primera vez.

Debido a la gran cantidad de nutrientes que posee la especie Nephelium

lappaceum L., ha sido de gran interés estudiar la composición de dichas variedades de

hojas del achotillo, con la finalidad de conocer los múltiples beneficios de los

compuestos químicos que se encuentran presentes. El desarrollo de este tipo de

investigación en el Ecuador, ayudan a descubrir diferentes moléculas de interés

farmacológico que aún no se hayan desarrollado; por lo que es de gran interés para los

investigadores fomentar este tipo de estudio.

2

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

¿Los compuestos químicos hallados en las hojas de dos variedades de achotillo

(Nephelium lappaceum L.) tendrán potencial farmacológico?

HIPÓTESIS

El estudio fitoquímico y farmacognóstico de las hojas de Nephelium lappaceum L.

permite identificar los principales compuestos químicos presentes en las dos variedades

de achotillo.

OBJETIVO GENERAL

Estudiar Farmacognóstica y Fitoquímicamente las hojas de dos variedades de

Nephelium lappaceum L. que se cultivan en la Ciudad de Quevedo.

OBJETIVO ESPECÍFICOS

Determinar los parámetros físicos y químicos de las hojas de dos variedades de

achotillo.

Analizar, mediante tamizaje fitoquímico, la composición química de dos variedades

de las hojas de achotillo.

Evaluar la concentración de fenoles totales y flavonoides de las hojas de la planta.

Demostrar los compuestos químicos de las hojas Nephelium lappaceum L.

mediante cromatografía de placa delgada.

.

3

CAPÍTULO I. MARCO TEÓRICO

I.1. ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN

Como parte fundamental de presente investigación se procede a la revisión

bibliográfica de estudios con variables semejantes al presente, los cuales servirán de

base para la realización del presente, los cuales serán descritos brevemente su

metodología y resultados en los párrafos a continuación.

En un estudio realizado por Flores & Prieto, (2015) sobre el tema “estudio

Farmacognóstico y Fitoquímico del Rizoma de Zingiber officinale Roscoe “Jengibre” de

la Ciudad de Chanchamayo - Región Junín – Perú”, el cual tuvo como objetivo principal

establecer los parámetros de calidad e identificación de los fitoconstituyentes de la

droga, cuya metodología implementada fue de tipo experimental mediante la

identificación, clasificación taxonómica, perdida de humedad en secado y parámetros

de calidad, la macromorfología, determinación de sustancias solubles en agua y en

etanol 70ºGL, determinación de cenizas totales, determinación de cenizas solubles en

agua y de cenizas insolubles en ácido clorhídrico. Se determinó índices menores a los

máximos establecidos, mostrando la calidad y pureza de nuestra droga. El estudio

químico cualitativo se realizó mediante tamizaje fitoquímico según técnicas de la

Universidad de la Habana, Miranda (2001), que emplea el método de extracción

discontínua: maceración con agitación constante y solvente de polaridad creciente; éter

dietílico, etanol 70º GL y agua.

Otro estudio realizado fue el elaborado por Bucay (2014) con el tema “estudio

Farmacognóstico y Actividad Antimicrobiana de la Violetilla (Hybanthus parviflorus)

perteneciente a la parroquia de Calpi del cantón Riobamba para fiebre, artritis, purgante

y como antimicrobiano. La investigación fue de tipo experimental, investigativo utilizando

material vegetal en el laboratorio de la Facultad de Ciencias de la ESPOCH. El estudio

empezó con recolección, el lavado con hipoclorito de sodio a 10 ppm, temperatura

ambiente y su molienda, el cual se sometió a extracciones de polaridad creciente, el

tamizaje fitoquímico y su evaluación microbiológica en el extracto etéreo e

hidroalcohólico. Se demostró humedad residual de 4.71 %, cenizas solubles en agua

0.85, cenizas insolubles en ácido 1.82 %, cenizas solubles en agua 0.85, cenizas 3.53

%. Los fitoquímicos encontrados fueron: alcaloides, esteroides, lactonas, coumarinas,

triterpenos, azúcares reductores, fenoles, taninos y saponinas.

4

I.2. MARCO TEÓRICO

I.2.1. Nephelium lappaceum L. generalidades

El rambután o comúnmente conocido en el Ecuador como achotillo es una fruta

exótica proveniente del continente asiático, que al momento no tiene una alta

comercialización por su escasa producción, sin embargo, diversos estudios han

encontrado gran potencial nutritivo y de contenido sustancial para avances científicos

medicinales. (Moreno, 2013)

De acuerdo a Arias et al., (2016) menciona que “el achotillo de nombre científico

Nephelium lappaceum L. originario del archipiélago malasio es un fruto exótico cultivado

en climas tropicales como los que existe en América Latina y el Caribe por ser zonas

húmedas”.

El cultivo de achotillo en el país es muy pequeño debido al desconocimiento o

popularidad de la fruta, por lo que no tiene gran demanda, sin embargo, quienes la han

consumido la fruta concuerdan que es muy agradable de sabor y textura, además de su

alto contenido nutritivo de calcio, manganeso y potasio. (Moreno, 2013)

Osorio, Leyva, & Toledo, (2017), mencionan que “el achotillo pertenece a la familia

de la sapindácea, es un árbol perenne de tamaño medio, nativo de Asia, parecidos al

lichi y logan, posee flores pequeñas de 2mm sin pétalos que dan frutos de pulpa blanca,

jugosa y mielosa”.

N. lappaceum L, como se describió anteriormente es una fruta tropical de sabor

dulce agradable al paladar, la fruta se caracteriza por tener un aspecto de erizo de color

variable desde amarillo hasta rojos, consumido comúnmente de forma fresca. (Moreno,

2013)

5

I.2.2. Características

Estefano, (2014) N. lappaceum L, es una especie exótica que posee diversas

características que lo diferencia de las demás plantas y frutos. Este fruto proviene de un

árbol perenne, de ciclo corto, pertenecientes a la familia de Sapindaceae de orden

Sapindales y de género Nephelium conocida en el Ecuador como achotillo y en otras

partes del mundo como rambután, mamón chino, entre otro.

Figura 1. Árbol Nephelium lappaceum L.

Fuente: (Andrade, y otros, 2013).

El árbol de achotillo es de altura media de 10 a 12 metros, produce frutos el género

hembra durante la etapa adulta a partir de los 4 años en adelante, con hojas alternas y

pinnadas, con flores pequeñas de 2 a 3 milímetros color rosadas, blanca o verdosas de

donde brotan racimos de 10 a 20 frutos de características peculiares. (Andrade et al.,

2013)

6

Figura 2.Fruto Nephelium lappaceum L.

Fuente: (Pérez, y otros, 2014).

Según Pérez, y otros (2014). “el fruto N. lappaceum L. tiene una extraña apariencia

de espinas suave en la cascara de color marrón rojizo con pulpa blanquecina traslucida

de sabor dulce posee una similitud a la consistencia de la uva, con semilla no consumible

de 1 a 2 cm de color café”.

Nephelium lappaceum L. se desarrolla en el nivel del mar hasta los 1200 metros

sobre el nivel del mar, pero tiene su altura óptima es de 300 y 600 metros sobre el nivel

del mar, debe tener una humedad relativa mayor de 80 %, temperatura promedio de 25

a 32°C y con lluvias. Su mejor desarrollo se presenta en suelos profundos, limosos,

areno-limosos, francos con una tendencia ácida y muy ricos en materia orgánica. (Arias,

2016)

Existen más de 100 variedades de achotillo a nivel mundial; se caracterizan por

la calidad de la fruta, maduración, requerimientos climáticos. Entre las variedades más

importantes de Nephelium lappaceum L. se describen a continuación: (Moreno, 2013)

Leabarbudus: es un fruto grande redondo, con una cáscara amarillo-rojiza a la

maduración, está considerada como la mejor variedad porque tiene una mezcla

dulce y ácida y el arilo no se pega a la cubierta de la semilla. (Moreno, 2013).

7

Binjai: tiene un fruto oval, alargado, con una cáscara roja profunda, cuando

madura, tiene una textura crujiente y buen sabor, aunque no es tan jugosa como

la variedad anterior. (Moreno, 2013).

Rapiah: es un fruto pequeño y redondo, el pericarpio es grueso y duro, de

espiternos cortos y cuando llega a la madurez puede ser verde, amarilla o roja

(Moreno, 2013).

Seechompoo: el fruto es grande y rojo al madurar, el arilo es dulce y la cobertura

de la semilla se separa fácilmente del arilo, el pericarpio y los espiternos son

propensos a daño durante el transporte del fruto. (Moreno, 2013).

I.2.3. Taxonomía de Nephelium lappaceum

Según Rodríguez (2017), se estima que el nombre del achotillo es N. lappaceum

L., este fruto comestible consta de una clasificación taxonómica, donde se encuentra

ordenado desde la clase hasta la especie. (tabla I).

Tabla I. Clasificación taxonómica del Achotillo (Nephelium lappaceum L.).

Reino Plantae

Clase Magnoliopsida

Orden Sapindales

Familia Sapindáceae

Género Nephelium

Especie lappaceum Linneo

Fuente: (Rodríguez, 2017)

I.2.4. Descripción Botánica

I.2.4.1. Árbol

Al respecto, Moreno, (2013), manifiesta que “el rambután es un árbol de 15 a 25

metros, el diámetro del tronco es de 50 a 60 centímetro, además consta de una corteza

de color oscuro con copa semi abierto y los primeros frutos se dan al tercer año”.

8

Por su parte el autor Arias, (2015) afirma que:

“El achotillo proviene de Indonesia y Malasia, este es un árbol tropical

que crece como una planta silvestre en distintos lugares, ya que tiene

gran capacidad para adaptarse a varios tipos de suelos, este árbol

crece durante 3 años y su fruto se da luego del crecimiento total.”

I.2.4.2. Raíces

Los autores, Maridueña, Moreno, & Villafuerte (2012), establecen que “las raíces

del árbol de achotillo no son profundos en el suelo por lo que este puede extenderse

varios metros en la superficie, es decir que son raíces laterales que crecen sobre el

suelo superficial”.

I.2.4.3. Hojas

Según, Maridueña, (2013), expresa que “las hojas del achotillo son de forma

pinnadas y compuestas, este mide 30 cm de largo su color es verde oscuro, posee

pequeños pelos cuando son jóvenes, además tienen 15 pares de venas principales en

la parte inferior”.

Figura 3. Hoja (Nephelium lappaceum L.)

Fuente: Plantas medicinales Filipinas

Al respecto, Moya, (2013), manifiesta que las hojas de N. lappaceum L. “poseen

de dos a cuatro pares de folíolos, las cuales son alternos y opuestos, además puede

medir 20 cm de largo y 10 cm de ancho, el haz presenta un color verde claro brillante,

sin embargo, el envés es todo lo contrario”.

9

I.2.4.4. Flores

Vela, (2015), concierne que las flores del achotillo “son hermafroditas, las cuales

funcionan como una flor femenina y masculina, por otro lado, el estambre no tiene una

función establecida, mientras que las panículas emergen de forma escalonada, luego

de un año y medio aparecen los primeros brotes”.

Según, manifiestan los autores Alemán et al., (2013), manifiestan que la flor es el

aparato reproductor de la planta este cumplen con los procesos de fecundación de

semillas, además consta de los órganos como: cáliz, corola, estambres, estigmas y

ovarios”, cabe destacar que cada una de estas partes es esencial en el periodo de

inflorescencia.

I.2.4.5. Fruto

Grijalva, (2012), indica que “los frutos del achotillo son avalados consta de una

cobertura rojiza con pelos espinarte, este varia de tamaño y color, ya que puede ser rojo

o verde, en su interior se encuentra una drupa cubierta de carne jugosa, el cual es

comestible”.

El Instituto Interamericano de Cooperación para la Agricultura, IICA (2015), afirma

que los frutos “son globosos u ovoides de color rojo o amarillo, además posee tricomas

largos, también consta de un arilo blanco o translúcido, el cual es jugoso y rico en

vitamina C”. Cabe recalcar que varían de color tanto la fruta y los espinaretes.

I.2.5. Valores nutritivos y medicinales del achotillo o rambután (Nephelium

lappaceum L.)

Torres, (2014), estima que “el rambután presenta una composición muy nutritiva

y medicinal las cuales están compuestas de minerales, vitaminas y nutrientes, además

posee muchos beneficios para la salud. (tabla II)

10

Tabla II. Valores nutricionales del achotillo (Nephelium lappaceum L.)

Carbohidratos 20.87 g

Fibra alimentaria 0.9 g

Grasas 0.21 g

Proteínas 0.65 g

Tiamina (vit. B1) 0.013 mg

Riboflavina (vit. B2) 0.022 mg

Niacina (vit. B3) 1.352 mg

Vitamina B6 0.02 mg

Ácido fólico (vit. B9) 8 μg

Vitamina C 4.9 mg

Calcio 22 mg

Hierro 0.35 mg

Magnesio 7 mg

Manganeso 0.343 mg

Fósforo 9 mg

Potasio 42 mg

β-caroteno 2 µg

Sodio 11 mg

Zinc 0.08 mg

Fuente: (USDA, 2016)

López, (2012), concierne que “las propiedades del achotillo aporta con vitaminas,

como A, B1, B2, B3, entre otras existentes, además posee calcio, hierro, sodio, potasio,

las cuales ayuda con la eliminación de radicales libres ya que tiene propiedades

antioxidantes, antisépticas, antivíricas, también sirve como calmante y mejora el sistema

nervioso”.

11

I.2.6. Estudio Farmacognóstico

I.2.6.1. Conceptos de la farmacognosia

De acuerdo a Bruneton, (2016) “la farmacognosia es una ciencia que estudia las

características biológicas, bioquímicas y económicas de la extracción de las drogas

naturales y sus componentes del medio natural en el que se encuentran para su

utilización en la farmacología”.

La farmacognosia se dedica al estudio de los fitomedicamentos, dicho término se

introdujo por primera vez en 1815 por Seydler, está compuesto por dos palabras

“pharmakon” que significa droga y “gnosis” que se refiere a conocimiento. (Carreño, y

otros, 2015)

El estudio farmacognóstico está constituido por una serie de procesos, las cuales

permite la descripción botánica y clasificación taxonómica de las plantas, tiene como

principal utilidad identificar la actividad farmacológica para su posterior uso en la

farmacología. (Carreño, y otros, 2015)

El estudio farmacognóstico permite la identificación de las drogas que pueden ser

utilizadas de forma de fármacos en su estado natural encontrados en las frutas, raíces,

hojas o tallos, cuyas propiedades son extraídas dentro de su complejidad y constituye

una forma bruta de medicamento.

I.2.7. Estudio fitoquímico

La fitoquímica está relacionada con las sustancias químicas contenidas en las

plantas, las cuales, aunque nos son consideradas esenciales para el metabolismo

humano son beneficiosas para la prevención y tratamiento de enfermedades que

afectan la salud, existen más de 2000 fitoquímicos que se agrupan de acuerdo a su

función. (Instituto Nacional de Nutrición, 2013)

12

En la siguiente tabla se presentan los Fitoquímicos más estudiados.

Tabla III. Fitoquímicos más estudiados (Nephelium lappaceum L.)

POLIFENOLES

Ácido Elágico

Geranina

Corilagina

FLAVONOIDES Flavona

TIROLES Caroteno

Fuente: (Hernández, y otros, 2015)

13

La Fitoquímica es una disciplina científica que tiene como objeto el aislamiento,

análisis, purificación, elucidación de la estructura y caracterización de la actividad

biológica de diversas sustancias producidas por los vegetales. (Instituto Nacional de

Nutrición, 2013).

Como se indicó la fitoquímica se dedica al estudio de los metabolitos secundarios

existentes en las plantas: estructura, propiedades, función en el organismo vegetal,

aprovechamiento. (Instituto Nacional de Nutrición, 2013)

I.2.8. Marco conceptual

Farmacognosia: De acuerdo a (Bruneton, 2016) “la farmacognosia es una ciencia

que estudia las características biológicas, bioquímicas y económicas de la extracción de

las drogas naturales y sus componentes del medio natural en el que se encuentran para

su utilización en la farmacología”.

Fitoquímica: La Fitoquímica es una disciplina científica que tiene como objeto el

aislamiento, análisis, purificación, elucidación de la estructura y caracterización de la

actividad biológica de diversas sustancias producidas por los vegetales. (Instituto

Nacional de Nutrición, 2013).

Nephelium lappaceum L: De acuerdo a (Arias, y otros, 2016), menciona que “el

achotillo de nombre científico Nephelium lappaceum L originario del archipiélago

malasio es un fruto exótico cultivado en climas tropicales como los que existe en américa

latina y el caribe por ser zonas húmedas”.

Droga: (Bruneton, 2016) considera como “todo material de origen natural ya sea

en bruto u obtenido por sencillas operaciones como extractos que contienen los

principios activos con actividad farmacológica para el uso directo en la elaboración de

medicamentos con efectos sobre el sistema nervioso central”.

Principio activo: (Pérez, y otros, 2014), menciona que “son sustancia química

pura (aislada de la droga) responsable de la actividad farmacológica y del uso

terapéutico que se le atribuye a una droga”.

14

Medicamento: (Carreño, y otros, 2015) menciona que “son sustancias

medicinales (natural o sintética) con propiedades para prevenir, curar, diagnosticar una

enfermedad: se prescribe a una dosis y se ha elaborado de una forma correcta para su

administración”.

15

CAPÍTULO II. MATERIALES Y MÉTODOS

II.1. METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN

II.1.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN

El trabajo de titulación realizado presentó un método de investigación de carácter

empírico y experimental, y se llevó a cabo en el Laboratorio de Farmacognosia y

Fitoquímica en la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad de Guayaquil, en el

cual se determinó cualitativamente los compuestos presentes en las hojas de dos

variedades de achotillo.

II.2. VARIABLES DE LA INVESTIGACIÓN

II.2.1. VARIABLE INDEPENDIENTE

Variedades de las hojas de Nephelium lappaceum.

II.2.2. VARIABLE DEPENDIENTE

Metabolitos secundarios encontrados en las dos variedades de hojas.

II.2.3. VARIABLE INTERVINIENTE

Época del año

Tipo de suelo

16

II.6. ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO

II.6.1. RECOLECCIÓN Y SELECCIÓN DEL MATERIAL VEGETAL

Se recolectaron las dos variedades de hojas de la especie Nephelium lappaceum

L. en una Finca del Cantón Quevedo Provincia de Los Ríos, correspondiendo a plantas

adultas de aproximadamente 15 a 25 m de altura. Se trabajó con hojas recolectadas

entre los meses de junio y agosto del 2017 en estado de floración.

De la muestra recolectada se emplearon hojas de diferentes tamaños,

previamente lavadas con agua potable para su posterior secado.

II.7. MÉTODOS DE PERCEPCIÓN DE LAS HOJAS

II.7.1. MACROMORFOLOGÍA

La descripción macromorfológica de las hojas se realizó a simple vista. Se

evaluaron las hojas por medio de los órganos sensoriales en los cuales se tomó en

consideración: forma del limbo, borde, ápice, base, peciolo, venación, y consistencia.

También se efectuaron mediciones de largo y ancho de las hojas y se calcularon valores

promedios.

II.7.2. CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS

Se tomó en cuenta el olor, sabor, color, condición, y textura de la droga.

II.8. SECADO, MOLIDA Y ALMACENAMIENTO

El secado se llevó a cabo mediante el uso de la estufa utilizando las muestras de

las dos variedades de hojas y se las sometió a 105°C por dos horas. Una vez que la

muestra se secó se procedió a molerla, y luego se colocó en frascos herméticos en un

lugar fresco y seco.

17

II.9. DETERMINACIÓN DE LOS PARÁMETROS FÍSICO-QUÍMICOS

II.9.1. PARÁMETROS DE CONTROL DE LA CALIDAD.

Los métodos fisicoquímicos de análisis pueden determinar y establecer la calidad

de una droga y completar su identificación. Los distintos análisis se llevaron a cabo en

el Laboratorio de Farmacognosia y Fitoquímica de la Facultad de Ciencias Químicas de

la Universidad de Guayaquil. Los diferentes ensayos se realizaron según la metodología

descrita por (Miranda y Cuéllar, 2000).

II.9.2. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD POR SECADO EN ESTUFA.

MÉTODO GRAVIMÉTRICO.

Se basa en la determinación gravimétrica de la pérdida en masa que muestra una

droga después de ser desecada en la estufa.

Procedimiento

En una cápsula de porcelana, se pesó 5 g de la muestra distribuyéndola

uniformemente.

Se colocó 3 veces en la estufa a 105 °C hasta peso constante.

Se llevó la cápsula al interior del desecador hasta que ésta alcance la temperatura

ambiente.

Realizar los cálculos:

Expresión de los resultados:

Hg =M2 − M1

M2 − M X 100

Donde:

Hg = pérdida en peso por desecación (%)

M2 = masa de la cápsula con la muestra de ensayos (g)

M1 = masa de la cápsula con la muestra de ensayo desecada (g)

M = masa de la cápsula vacía

100 = factor matemático para el cálculo

18

II.9.3. DETERMINACIÓN DE CENIZAS TOTALES.

La ceniza es el residuo obtenido después de la incineración de la materia orgánica

hasta que queda libre de carbón, y representa el contenido de material mineral presenta

en esa materia.

Procedimiento

Se determinó la masa de 2,0 g de la porción de ensayo pulverizada y tamizada en

un crisol de porcelana previamente tarado. Se incineró en un horno mufla a una

temperatura de 700°C, durante 2 h. (Miranda & Cuéllar, 2000)

Se colocó el crisol en una desecadora por 30 minutos para que llegue a

temperatura ambiente, luego se procedió a pesar, repitiéndose el proceso hasta que dos

pesadas sucesivas no difieran en más de 0,5 mg por g (masa constante). Para obtener

la masa constante los intervalos entre calentamiento y pesada son de 30 min. (Miranda

& Cuéllar, 2000)

Expresión de los resultados:

M2 - M

M1 - M C = x 100

En donde:

C = porcentaje de cenizas totales en base hidratada.

M = masa del crisol vacío (g)

M1= masa del crisol con la porción de ensayo (g)

M2= masa del crisol con la ceniza (g)

100= factor matemático para los cálculos.

19

II.9.4. DETERMINACIÓN DE CENIZAS SOLUBLES EN AGUA.

Procedimiento

A las cenizas totales obtenidas, se le añadió 20 mL de agua. Después de tapar el

crisol se calentó suavemente a la llama del mechero durante 5 min. La solución se filtró

utilizando papel de filtro libre de cenizas. El filtro con el residuo se transfirió al crisol

inicial, y luego se procedió a incinerarlo en un horno mufla a 700°C, durante 2 h.

Posteriormente se colocó en una desecadora y cuando alcanzó la temperatura ambiente

se pesó. Se repite el procedimiento hasta alcanzar peso constante. (Miranda & Cuéllar,

2000)

Expresión de los resultados.

M2 - Ma

M1 - MCa = x 100

En donde:

Ca = porcentaje de cenizas solubles en agua en base hidratada.

M2 = masa del crisol con las cenizas totales (g).

Ma =masa del crisol con las cenizas insolubles en agua (g)

M1 = masa del crisol con la muestra de ensayo (g)

M = masa del crisol vacío.

100 = factor matemático.

II.9.6. DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS SOLUBLES.

Se basa en la extracción de las sustancias solubles en agua, alcohol o mezclas

hidroalcohólicas, mediante maceración y evaporación hasta sequedad de una alícuota

del extracto. (Miranda & Cuéllar, 2000)

20

Procedimiento.

De la muestra de ensayo previamente pulverizada y tamizada, se pesó

exactamente 4 g y se transfirieron a un Erlenmeyer de 250 mL; se añadieron 100 mL de

alcohol etílico, luego se agito por 15 minutos, dejándolo en reposo por 4 horas; después

se llevó a reflujo por una hora, una vez terminado el tiempo de espera se procedió a

filtrarlo. Se tomó una alícuota de 20 mL transfiriéndola a una cápsula previamente

tarada. Se evaporó sobre baño de agua, luego se llevó a desecar en estufa a 105oC

durante 3 h, se enfrío y pesó. (Miranda & Cuéllar, 2000)

Expresión de los resultados

R.500.100

M (100-H)Ss =

En donde:

Ss = sustancias solubles (%).

H = humedad de la muestra (%)

500 y 100 = factores matemáticos para los cálculos.

R = residuo de la muestra (g)

M = masa de la muestra (g).

II.10. ESTUDIO QUÍMICO CUALITATIVO.

II.10.1. TAMIZAJE FITOQUÍMICO

Antes de realizar la extracción completa de la muestra a ser analizada, es

necesario llevar a cabo pruebas preliminares sencillas y rápidas que permitan detectar

cualitativamente la presencia de determinados grupos de compuestos. Esto se logra

mediante las técnicas de "screening" (tamizaje), que se ayudan de las reacciones

coloreadas y selectivas para evidenciar estos grupos de constituyentes mediante

formación de precipitados, coloraciones, etc.

No debe olvidarse que cuando se obtiene un resultado negativo, este puede

deberse a la ausencia de la clase de compuestos buscada, a la selección errónea del

solvente para extraer, a la presencia de sustancias extrañas que interfieran o a una

21

concentración en el orden de trazas del compuesto ensayado; y es 100 % seguro

cuando es positivo.

El tamizaje fitoquímico se realizó a las hojas secas y pulverizadas, según

procedimiento descrito por (Miranda & Cuéllar, 2000)

Se utilizó un sistema de extracción con disolventes de menor a mayor polaridad,

sobre las hojas pulverizadas y tamizadas, para obtener los diferentes metabolitos

extraídos según la polaridad de los extractos. La droga seca se extrajo con éter etílico,

etanol y agua por 48 horas con cada disolvente para obtener los respectivos extractos,

los cuales se emplearon en los diferentes ensayos. (Miranda & Cuéllar, 2000)

II.10.1.1. Ensayo de Sudan

Sirve para identificar compuestos grasos. Se le añade 1 mL de una solución

diluida en agua del colorante Sudan III o Sudan IV. Se calienta en baño de agua hasta

evaporación del solvente. El resultado Es positivo cuando existe la presencia de gotas

o una película coloreada de rojo.

II.10.1.2 Ensayo de Dragendorff

Sirve para elucidar la presencia de alcaloides, en caso de que la alícuota tomada

del extracto esté en un solvente orgánico, se evapora en baño de agua y se redisuelve

el residuo en 1 mL de ácido clorhídrico al 1%. En caso de ser un extracto acuoso, se

añade 1 gota de ácido clorhídrico concentrado a la alícuota, se calienta suavemente y

se deja enfriar. Se añaden III gotas del reactivo de Dragendorff a la solución acuosa

acida, se puede observar y anotar: opalescencia (+), turbidez definida (++), precipitado

(+++).

II.10.1.3. Ensayo de Mayer

Se realiza una solución acuosa ácida como la descrita anteriormente. Se adiciona

una piza de cloruro de sodio en polvo, se agita y se filtra. Se adicionan de II a III gotas

de la solución de Mayer, se puede observar y anotar: opalescencia (+), turbidez definida

(++), precipitado coposo (+++).

22

II.10.1.4. Ensayo de Wagner

Se procede de la misma forma que los ensayos descritos previamente. Se adicionan de

II a III gotas del reactivo de Wagner y se anotan los resultados de la misma manera.

II.10.1.5. Ensayo de Liebermann-Burchard

Sirve para elucidar la presencia de triterpenos y/o esteroides, debido a que ambos

metabolitos poseen un núcleo del androstano, generalmente insaturado en el anillo B y

la posición 56. En caso de que la alícuota del extracto no se encuentra en cloroformo,

el solvente debe evaporarse en baño de agua y el residuo debe redisolverse en 1 mL

de cloroformo. Se añade 1 mL de anhídrido acético y se mezcla homogéneamente. Se

adiciona por las paredes del tubo de II a III gotas de ácido sulfúrico concentrado sin

agitar. Un ensayo positivo se reconocer por un cambio rápido de coloración:

Rosado-azul muy rápido.

Verde intenso-visible, aunque rápido.

Verde oscuro-negro-final de la reacción.

Muy pocas veces puede observarse el primer cambio. El tercer cambio

generalmente ocurre cuando el material evaluado tiene cantidades significativas.

II.10.1.6. Ensayo de Fehling

Sirve para elucidar la presencia de azúcares reductores. En caso de que la

alícuota del extracto no se encuentra en agua, se debe evaporar el solvente en baño de

agua y el residuo debe redisolverse en 1 a 2 mL de agua. Se añaden 2 mL del reactivo

y se calienta en baño de agua de 5 a 10 min. Se considera positivo si la solución se

colorea de rojo o aparece precipitado rojo.

II.10.1.7. Ensayo de Catequinas

Se toma I gota de la solución alcohólica, mediante un capilar y aplicará sobre papel

filtro. Sobre la mancha se aplicará solución de carbonato de sodio. La aparición de una

mancha verde carmelita a la luz UV indica un ensayo positivo.

23

II.10.1.8. Ensayo de Shinoda

Sirve para elucidar la presencia de flavonoides. En caso de que la alícuota del

extracto se encuentra en alcohol, se diluye con 1 mL de ácido clorhídrico concentrado y

un pedacito de cinta de magnesio metálico. Después de la reacción se esperan 5min,

se adiciona 1 mL de alcohol amílico, se mezclan las fases y se deja reposar hasta que

se separen. En caso de que la alícuota del extracto se encuentra en agua, se procede

de igual forma, a partir de la adición del ácido clorhídrico concentrado. El ensayo se

considera positivo cuando el alcohol amílico se colorea de amarillo, naranja, carmelita o

rojo intenso en todos los casos.

II.10.1.9. Ensayo de Mucílagos

Sirve para elucidar la presencia de una estructura tipo polisacárido, el cual forma

un coloide hidrófilo de alto índice de masa que aumenta la densidad del agua donde se

extrae. Se enfría una alícuota del extracto en agua de 0 a 5 ºC y si la solución toma una

consistencia gelatinosa el ensayo es positivo.

II.10.1.10. Ensayo de Resinas

Se adicionan a 2 mL de la solución alcohólica, 10 mL de agua destilada. La

aparición de un precipitado indica un ensayo positivo.

II.10.1.11. Ensayo de Espuma

Sirve para elucidar la presencia de saponinas, tanto del tipo esteroidal como

triterpénica. En caso de que la alícuota se encuentre en alcohol, se diluye con cinco

veces su volumen en agua y se agitará, dicha mezcla, vigorosamente durante 5 a 10min.

El ensayo se considerará positivo si apareciese espuma en la superficie del líquido de

más de 2 mm de altura y persistente por más de 2min.

II.10.1.12. Ensayo de Cloruro Férrico

Sirve para elucidar la presencia de compuestos fenólicos y/o taninos. En caso de

que el extracto de la planta se realiza con alcohol, el ensayo determina tanto fenoles

como taninos. Se adicionan III gotas de una solución de tricloruro férrico al 5% en

solución salina fisiológica a una alícuota del extracto alcohólico. Si el extracto es acuoso,

24

el ensayo determina fundamentalmente taninos. Se adiciona acetato de sodio para

neutralizar y se añaden III gotas de una solución de tricloruro férrico al 5% en solución

salina fisiológica a una alícuota del extracto, un ensayo positivo puede dar la siguiente

información general:

Desarrollo de una coloración rojo-vino: compuestos fenólicos en general.

Desarrollo de una coloración verde intensa: taninos del tipo pirocatecólicos.

Desarrollo de una coloración azul, taninos del tipo pirogalotánicos.

Figura 4. Tamizaje fitoquímico. Extracción sucesiva con disolventes

Fuente: (Miranda & Cuéllar, 2000)

50 g Material vegetal

Extraer con 150mL de éter etílico por maceración durante

48 horas a temperatura ambiente

EXTRACTO

ETÉREO

Medir volumen

RESIDUO

SÓLIDO

Filtrar y pesar

Extraer con 3 veces el peso del

residuo en volumen con etanol

por maceración durante 48 horas

RESIDUO SÓLIDO

Filtrar y pesar

EXTRACTO

ALCOHÓLICO

Medir volumen

Extraer con 3 veces el peso del

residuo en volumen con agua destilada

por maceración durante 48 horas

RESIDUO SÓLIDO

Desechar

EXTRACTO

ACUOSO

Medir volumen

25

Figura 5. Reacciones cualitativas a realizar en los extractos

Fuente: (Miranda & Cuéllar, 2000)

SUDÁN (ACETES Y GRASAS)

DRAGENDORFF, MAYER Y WAGNER

(ALCALOIDES)

BALJET (LACTONAS Y COUMARINAS)

LIEBERMANN-BUCHARD (TRITERPENOS-

ESTEROIDES)

CATEQUINAS

RESINAS

FEHLING (AZÚCARES REDUCTORES)

BALJET (LACTONAS)

LIEBERMANN-BUCHARD (TRITERPENOS-

ESTEROIDES)

ESPUMA (SAPONINAS)

CLORURO FÉRRICO (FENOLES Y TANINOS)

NINHIDRINA (AMINOÁCIDOS)

BORNTRAGER (QUINONAS)

SHINODA (FLAVONOIDES)

KEDDE (CARDENÓLIDOS)

ANTOCIANIDINA

DRAGENDORFF. MAYER Y WAGNER

(ALCALOIDES)

DRAGENDORFF, MAYER Y WAGNER

(ALCALOIDES)

CLORURO FÉRRICO (TANINOS)

SHINODA (FLAVONOIDES)

FEHLING (AZÚCARES REDUCTORES)

ESPUMA (SAPONINAS)

MUCÍLAGOS

PRINCIPIOS AMARGOS

EXTRACTO

ETÉREO

EXTRACTO

ALCOHÓLICO

EXTRACTO

ACUOSO

26

II.11. ANALISIS DEL EFECTO ANTIOXIDANTE

II.11.1. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FENOLES TOTALES

MÉTODO FOLIN-CIOCALTEU

El método de Folin-Ciocalteu se basa en la capacidad de los fenoles para

reaccionar con agentes oxidantes. El reactivo de Folin-Ciocalteu contiene molibdato y

tungstato sódico, que reaccionan con cualquier tipo de fenol, formando complejos

fosfomolíbdico-fosfotúngstico.

Procedimiento

1. Solución diluida de Folin-Ciocalteu: Tomar 10mL del reactivo Folin-Ciocalteu y diluir

a 100 mL con agua destilada.

2. Solución de carbonato de sodio 7,5 %: Pesar 75 g de Na2CO3 anhidro y disolver en

un litro de agua destilada.

3. En tubos de ensayos de aproximadamente 50 mL de capacidad adicionar:

4. 200 µL de extracto de la muestra o de la solución diluida de ácido gálico.

5. 10 mL de solución diluida de Folin-Ciocalteu

6. 1, 8 mL de agua destilada

7. Agitar y esperar cinco minutos

8. Adicionar 8 mL de solución 7,5 % de Na2CO3. Agitar suavemente

9. Dejar en reposo durante dos horas

10. Leer la absorbancia a 765 nm

11. El blanco es agua destilada

Pesar 500 mg de ácido gálico y disolver en 20-30 mL de etanol al 96%. Transferir

cuantitativamente a matraz aforado de 50 mL y enrasar con agua destilada.

De esta solución concentrada de ácido gálico tomar alícuotas de 1, 2, 3, 4, 5, 10,

30 y 40 mL y diluirlas a 100 mL. Estas diluciones corresponden a concentraciones de

10, 20, 30, 40, 50, 100, 300 y 400 mg/L de ácido gálico.

El contenido de fenoles totales se expresó en mg de ácido gálico/L de extracto.

27

II.11.2. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FLAVONOIDES TOTALES

EXPRESADOS COMO QUERCETINA

Procedimiento

1. Solución de tricloruro de aluminio al 10 % en etanol al 96 %

2. Solución de Acetato de potasio (CH3CO2K) diluida en agua (1 M)

3. Diluir 10 mg de quercetina en etanol al 96 % y de ahí diluir a 10, 25, 50, 100, 200,

250, 300 y 350 µg/mL.

En tubos de ensayos adicionar:

1. 0,5 mL de extracto o solución patrón

2. 1,5 mL de etanol al 96 %

3. 0,1 mL de tricloruro de aluminio al 10 %

4. 0,1 mL de acetato de potasio 1 M

5. 2,8 mL de agua destilada

6. Esperar 30 minutos y leer a 415 nm

7. El blanco es etanol al 96 %

8. El contenido de flavonoides totales se expresó en base a quercetina (µg/mL)

II.12. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

Procedimiento

En la cámara se adiciona los solventes orgánicos (fase móvil) la mezcla de:

Hexano-Cloroformo-Acetato de Etilo-Metanol (10:5:5:2,5).

En la silicagel con ayuda de un lápiz y regla se mide 1 ml en la parte inferior la

misma que será la línea de referencia y en la parte superior 1,5 ml.

En la parte inferior se realizaron las punzadas con ayuda de un capilar.

Luego la silicagel se la coloca en la cámara que esta con la fase móvil y se

espera hasta que los solventes se desplacen sobre la fase estacionaria.

28

Si en la silicagel al ser expuesta a la luz UV muestra manchas de colores significa

que existe la presencia de grupos cromóforos altamente saturados.

Luego se adiciona el revelador no selectivo (revelador universal) que es ácido

sulfúrico al 50% en etanol.

𝑹𝒇 = 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜

𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑓𝑎𝑠𝑒 𝑚𝑜𝑣𝑖𝑙

29

CAPÍTULO III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

En este capítulo se expondrán en tablas, los datos experimentales y los resultados

obtenidos en las diferentes pruebas realizadas a las hojas de achotillo.

III.1. EVALUACIÓN MACROMORFOLÓGICA DE LAS HOJAS

La evaluación macromorfológica de las hojas de Achotillo (N. lappaceum L.), se

logró determinar mediante Manual de Practicas de Laboratorio (Miranda & Cuéllar,

2000).

Tabla IV. Características Macromorfológicas del Nephelium lappaceum L.

SEGÚN SU FORMA

De acuerdo al peciolo Peciolada

De acuerdo al ápice Mucronada

De acuerdo a la base Obtusa

De acuerdo al borde del limbo Entera

De acuerdo al contorno o forma Elíptica

De acuerdo a las nerviaciones Palminervia

SEGÚN SU SUPERFICIE

Glabra

SEGÚN SU TEXTURA

Membranosa

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

Los resultados de las dimensiones de las hojas estudiadas se informan en la tabla

V, donde se pudo apreciar que las hojas de las dos variedades tienen dimensiones

similares, ligeramente superiores para la variedad amarga.

30

Tabla V. Mediciones de largo y ancho del Nephelium lappaceum L.

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

III.2. CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS DE LAS HOJAS

Las características organolépticas de la droga cruda no se pueden comparar con

otras plantas, ya que se utiliza los órganos de los sentidos para poder indicar las

características de la misma y son propias de cada planta, las observaciones se refieren

en la tabla VI.

Tabla VI. Características Organolépticas del Nephelium lappaceum L.

OLOR Sui generis

COLOR

Verde

CONDICIÓN Fresca y completa

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

Hojas

Valor Promedio Largo

(cm) ± S

Valor Promedio Ancho

(cm) ± S

Achotillo Dulce 13,44 ± 0,75 6,24 ± 0,38

Achotillo Amargo 13,66 ± 0,80 6,77 ± 0,42

31

III.3. DETERMINACIÓN DE LOS ÍNDICES FARMACOGNÓSTICOS DE LAS HOJAS

En la Tabla VII se detalla los resultados obtenidos de los ensayos Físico- Químicos

de las hojas de Achotillo (Nephelium lappaceum L.).

Tabla VII. Resultados de la determinación de parámetros físico-químicos del

Nephelium lappaceum L.

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

En la Tabla VII se detalla los resultados obtenidos de los ensayos Físico- Químicos

de las hojas de Achotillo (Nephelium lappaceum L.); los valores para la humedad

residual de las hojas de las dos variedades dulces y amargas fueron de 6.5 % y 6.3 %

respectivamente; Según (Solis y col. 2009) el resultado de humedad en semillas fue de

6,1 % que comparado al de esta investigación son similares.

Anotando que la humedad nos permite conocer la estabilidad de la materia prima, si

existe un exceso de agua en una droga puede provocar el crecimiento microbiano, la

presencia de hongos o insectos y el deterioro, seguido de la hidrólisis de los principios

activos.

En cuanto a cenizas totales de hojas de dos variedades de achotillo dulces y

amargas fueron de 7,16 % y 10 % respectivamente. Según (Solís y col. 2009) el valor

de cenizas que obtuvieron de las semillas fue de 1,22 % que refleja una diferencia

significativa con respecto a las hojas de dos variedades de achotillo. Las cenizas totales

nos indican el contenido de sales mineral de la planta, es importante porque la materia

mineral puede ser responsable de alguna acción farmacológica.

Al no encontrarse una investigación similar en la que se haya estudiado humedad

y cenizas en hojas de achotillo se tomó como referencia un estudio en las semillas de

Nephelium lappaceum L. para realizar una comparación, en la cual se concluyó que

existe diferencia significativa entre las semillas y las hojas de la planta.

PARÁMETROS PORCENTAJE (%)

Hojas Dulces ± S PORCENTAJE (%)

Hojas Amargas ± S

Humedad Residual 6,5 ± 0,2 6,3 ± 0,5

Cenizas Totales 7,2 ± 0,7 10,0 ± 0,2

Cenizas solubles en agua

1,2 ± 0,4 1,4 ± 0,3

Sustancias Extraibles 24,1 ± 0,2 24,0 ± 0,7

32

Los resultados que se obtuvieron para cenizas solubles en agua en hojas dulces

fueron de 1,2 % y 1,4 % en hojas amargas de esta especie; al no encontrarse

antecedentes de este análisis los resultados que se exponen se informan por primera

vez.

III.4. TAMIZAJE FITOQUÍMICO

La Tabla VIII, IX y X presenta los resultados del Tamizaje Fitoquímico, que

permitieron conocer cualitativamente la presencia de metabolitos secundarios presentes

en los extractos de éter, alcohol y agua, donde se observa una diferencia significativa

en cuanto al tipo y cantidad de metabolitos presentes, con el cual identificamos,

compuestos grasos, saponinas, triterpenos y esteroides, antocianidinas, taninos,

flavonoides, principios amargos, azúcares reductores.

Tabla VIII. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Etéreo del Nephelium

lappaceum L.

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

Leyenda: + ensayo positivo; ++/+++ muy positivo; - negativo

Al no haber encontrado una publicación científica relacionada a un estudio

fitoquímico de hojas de achotillo, se tomó como referencia la investigación

“Composición, comportamiento de fase y estabilidad térmica de la grasa comestible

natural de semillas de rambután (Nephelium lappaceum L.)” realizada por Solís y col,

(2009), en donde lograron aislar los principales ácidos grasos: 40,3% de ácido oleico,

34,5% de ácido araquídico, 6,1% de ácido palmítico, 7,1% de ácido esteárico, 6,3% de

góndola y 2,9% de ácido behénico corroborando así que la especie estudiada contiene

compuestos grasos.

EXTRACTO ETÉREO

HOJAS DULCES

HOJAS AMARGAS

ENSAYOS TIPO DE COMPUESTO

RESULTADOS RESULTADOS

Sudan

Compuestos

grasos

+

+

Dragendorff Alcaloides

- -

Baljet Cumarinas

-

-

Liebermann-burchard

Triterpenos y esteroides

Verde intenso Verde intenso

33

Tabla IX. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Alcohólico del

Nephelium lappaceum L.

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

Leyenda: + ensayo positivo; ++/+++ muy positivo; - negativo

EXTRACTO ALCOHÓLICO

ENSAYOS

TIPO DE

COMPUESTO

HOJAS

DULCES

HOJAS

AMARGAS

RESULTADOS RESULTADOS

Catequinas

Catequinas

-

-

Resinas

Resinas

-

-

Fehling

Azucares reductores

++

+++

Baljet

Cumarinas

-

-

Lieberman- burchard

Triterpenos y esteroides

+ +

Espuma

Saponinas

+++

+++

Cloruro férrico

Taninos

++

++

Ninhidrina

Aminoácidos

libres

-

-

Borntrager Quinonas

- -

Shinoda

Flavonoides

+++

+++

Antocianidina

Antocianidinas

+++

+++

dragendorff

Alcaloides

-

-

34

Tabla X. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Acuoso del Nephelium

lappaceum L.

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

Leyenda: + ensayo positivo; ++/+++ muy positivo; - negativo

III.5. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FENOLES

La Tabla XI y Figura 6 expresan las concentraciones con respecto a la

absorbancia obtenidos para la curva de calibración con patrón Ácido Gálico la misma

que sirve para determinar la concentración de Fenoles. La ecuación que se ajusta a la

curva es y = 1,0488x + 0,0049, con un coeficiente de correlación R² = 0,9975.

EXTRACTO ACUOSO

ENSAYOS

TIPO DE

COMPUESTO

HOJAS DULCES HOJAS AMARGAS

RESULTADOS RESULTADOS

Dragendorff

Alcaloides

-

-

Cloruro férrico Taninos

++ ++

Shinoda Flavonoides

Roja amarilla

Fehling Azucares reductores

++ +++

Espuma Saponinas

++ ++

Mucílagos Mucílagos/ Estructura tipo

polisacárido

-

-

Principios amargos

Principios amargos

+ +

35

Tabla XI. Absorbancia según su concentración para la curva de calibración con

patrón Ácido Gálico

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

Figura 6.Curva de calibración con patrón Ácido Gálico

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

El contenido de Fenoles en el extracto alcohólico de Achotillo (Nephelium

lappaceum L.) se determinó mediante la fórmula que se obtuvo en la curva de

calibración; los valores para la muestra de hojas de achotillo dulce oscilan entre los

0,710 μg/g, y para la muestra de hojas de achotillo amarga oscila entre los 0,763 μg/g.

Tabla XII. Resultados obtenidos de la Absorbancia de Fenoles

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

y = 1,0488x + 0,0049R² = 0,9975

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

3,5

4

4,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5

abso

rban

cia

concentración ácido Gálico (mg/ml)

ALICUOTA Absorbancia Concentración (mg/mL)

1 0,1133 0,1

2 0,2071 0,2

3 0,2889 0,3

4 0,3925 0,4

5 0,4806 0,5

10 0,9156 1,0

30 2,7092 3,0

40 3,9133 4,0

Hojas Achotillo Dulce Hojas Achotillo Amarga

0,7486 0,8053

36

En la determinación de fenoles se obtuvieron concentraciones de 0,710 µg/g y 0,763

µg/g para las hojas dulces y amargas respectivamente, que en comparación al estudio

titulado “Actividades antioxidantes in vitro de extractos de diferentes hojas de cinco

variedades de Rambután (Nephelium lappaceum) y su correlación con contenido

flavonoide, fenólico y carotenoide total” realizado por Fidrianny y col, (2015), obtuvieron

valores que van desde 0,84 a 29,46 g ac. Gálico/ 100 g para las cinco variedades de

hojas de achotillo estudiadas.

III.6. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FLAVONOIDES

La Tabla XIII y Figura 7 expresan las concentraciones con respecto a la

absorbancia obtenidos para la curva de calibración con patrón Quercetina, la misma que

sirve para determinar la concentración de Flavonoides. La ecuación que se ajusta a la

curva es y = 0,1774x + 0,0016, con un coeficiente de correlación R² = 0,999.

Tabla XIII. Absorbancia según su concentración para la curva de calibración con

patrón Quercetina.

ALICUOTA ABSORBANCIA CONCENTRACIÓN mg/ml

1 0,0523 0,008

2 0,0912 0,016

3 0,1333 0,024

4 0,1575 0,032

5 0,1984 0,040

10 0,4290 0,080

30 1,3808 0,240

40 1,7719 0,320

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

37

Figura 7. Curva de calibración con patrón Quercetina

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

El contenido de Flavonoides en el extracto alcohólico de Achotillo (Nephelium

lappaceum L.) se determinó mediante la fórmula que se obtuvo en la curva de

calibración; los valores para la muestra de hojas de achotillo dulce oscilan entre los

16,50 μg/g, y para la muestra de hojas de achotillo amarga oscila entre los 20,59 μg/g.

Tabla XIV. Resultados obtenidos de la Absorbancia de Flavonoides

Hojas Achotillo Dulce Hojas Achotillo Amarga

2,9291 3,6539

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

En la determinación de flavonoides se obtuvieron concentraciones de 16,50 µg/g y 20,59

µg/g para las hojas dulces y amargas respectivamente, que en comparación al estudio

titulado “Actividades antioxidantes in vitro de extractos de diferentes hojas de cinco

variedades de Rambután (Nephelium lappaceum) y su correlación con contenido

flavonoide, fenólico y carotenoide total” realizado por Fidrianny y col, (2015), obtuvieron

valores que van desde 1,83 a 9,59 g Quercetina/ 100 g para las cinco variedades de

hojas de achotillo estudiadas.

y = 0,1774x + 0,0016R² = 0,999

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

0,35

0 0,5 1 1,5 2

AB

OR

BA

NC

IA

CONCENTRACIÓN

38

III.7. SUSTANCIAS EXTRAÍBLES

III.7. 1. Materia extraíble en etanol hojas dulces

Tabla XV. Resultados obtenidos de Materia Extraíble en Etanol de las Hojas de

Achotillo Dulce

Muestra Peso de la cápsula Cant.

Extracto

Materia extraíble del

extracto

Achotillo

Dulces 44,34 g 20 ml 44,52 g

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

SUSTANCIAS EXTRAÍBLES = 24,06

III.7. 2. Materia extraíble en etanol hojas amargas

Tabla XVI. Resultados obtenidos de Materia Extraíble en Etanol de las Hojas de

Achotillo Amargo

Muestra Peso de la capsula Cant.

Extracto

Materia extraíble del

extracto

Achotillo

Amargas 43,38 g 20 ml 43,56 g

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

SUSTANCIAS EXTRAÍBLES = 24,01

El contenido de materia extraíble fue de 24,06 para las hojas dulces y de 24,01 de

las hojas amargas; al no encontrarse antecedentes de este análisis los resultados que

se exponen se informan por primera vez.

39

II.8. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

Al realizar la cromatografía en capa fina se logró separar compuestos cromóforos

verificando así que la muestra alcohólica de las Hojas de Achotillo (Nephelium

lappaceum L.) tanto dulce como amarga contiene metabolitos secundarios, pero se

observa que en ambos casos no existe diferencia.

Figura 8.Cromatografía de capa fina de las dos variedades de achotillo

Tabla XVII. Resultados del factor de retención utilizando como revelador el ácido sulfúrico.

Extracto alcohólico Rf

Hojas Dulces 0,9125

Hojas Amargas 0,9062

Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)

El trabajo concluyó con el análisis por cromatografía en capa delgada de los

extractos alcohólicos de las hojas de las variedades dulces y amargas. Al observar la

placa cromatográfica al UV, se revelaron en ambos extractos, compuestos con valores

de Rf similares.

40

CONCLUSIONES

Se establecieron los parámetros farmacognósticos de las hojas de dos

variedades de achotillo (Nephelium lappaceum L.), de la Ciudad de Quevedo

Provincia de Los Ríos recolectada entre los meses de junio y agosto del 2017.

El tamizaje fitoquímico logró identificar los principales metabolitos presentes:

compuestos grasos, saponinas, triterpenos y esteroides, antocianidinas, taninos,

flavonoides y azúcares reductores.

Se realizó la cuantificación de flavonoides dando concentraciones diferentes

para ambas especies, y de fenoles totales una concentración similar para las

dos variedades de achotillo.

La cromatografía de capa fina mostró la presencia de manchas atribuidas a

compuestos cromóforos en ambas muestras en la que no hubo diferencia

cualitativa.

RECOMENDACIONES

Profundizar los estudios químicos para determinar los compuestos fenólicos y/o

flavonoides presentes en las hojas de Nephelium lappaceum L.

Evaluar el potencial antioxidante de la especie, considerando los contenidos de

compuestos fenólicos y flavonoides obtenido.

Evaluar un posible suplemento alimenticio y/o medicinal a partir de las hojas de

esta especie.

Clasificar taxonómica y genéticamente las especies, cuando se encuentre en

estado de floración.

41

BIBLIOGRÁFIA

1. Alemán, R., Frelie, J., & Iparraguire, M. (2013). Rescate de práctica agrícola

ancestrales y agricultura tradicional campesina para promover la producción

sostenible a nivel familiar. Ecuador: Universidad Estatal Amazónica:

https://www.uea.edu.ec/huellas/images/revistas/Huellas_Sumaco_Art_1_Vol14.

pdf.

2. Andrade, A., Macedo, G., Geraldo, A., Rinaldo, M., & Pitta, J. (2013).

Caracterização morfológica e química de frutos de rambután. Brasilia: Rev. Bras.

Frutic. (Impr.) Jaboticabal. 30(4). Pp. 958-963.

3. Arias, M. (2015). El rambután, frutal asiático con potencial para Colombia:

avances de la investigación en el piedemonte del Meta. Colombia:

http://www.scielo.org.co/pdf/rcch/v10n2/v10n2a07.pdf.

4. Arias, M., Velazques, H., Cagua, M., & Chaparro, H. (2016). El rambután

(Nephelium lappaceum), frutal asiático con potencial para Colombia: avances de

la investigación el piedemonte del Meta. Bogotá, Colombia: Revista cientifica

Scielo.

5. Bruneton, J. (2016). Farmacognosia, Fitoquímica, plantas medicinales. . Madrid,

España: Bernal.

6. Bucay, L. (2014). Estudio Farmacognóstico y Actividad Antimicrobiana de la

Violetilla (Hybanthus parviflorus). Chimborazo: Escuela Superior Politécnica de

Chimborazo. http://dspace.espoch.edu.ec/handle/123456789/207.

7. Carreño, M., & Rojas, L. (2015). Farmacología experimental pre-clínica. Un

método de aprendizaje de la Farmacología para el estudiante. Lima, Perú: 1ra

ed., UNMSM.

8. Estefano, R. (2014). Proyecto para la exportación de Rambutan (achotillo) a la

comunidad económica Europea. Guayaquil, Ecuador:

http://www.dspace.espol.edu.ec/xmlui/bitstream/handle/123456789/10459/PRE

SENTACION%20FINAL%20RAMBUTAM.pdf?sequence=1.

9. Fidrianny, I. Sukowati, A. & Sukrasno. (2015). In vitro antioxidant activities of

various leaves extracts from five varieties of rambutan (Nephelium lappaceum)

42

and it’s correlation with total flavonoid, phenolic, carotenoid content. Bandung,

Indonesia: Pharmaceutical Biology Research Group, School of Pharmacy,

Bandung Institute of Technology.

10. Flores, E., & Prieto, E. (2015). Estudio Farmacognóstico y Fitoquímico del

Rizoma de Zingiber officinale Roscoe “Jengibre” de la Ciudad de Chanchamayo

- Región Junín - Perú. Trujillo, Perú: Universidad NAcional de Trujillo.

http://dspace.unitru.edu.pe/handle/UNITRU/4770.

11. Fraire, V.G. (2001). El Rambután: Alternativa para la producción frutícola del

trópico húmedo de México. Folleto técnico No. 1. CIRPS-INIFAP. Campo

Experimental Rosario Izapa. Tuxtla Chico, Chiapas, México. 36 p.

12. Grijalva, A. (2012). Flora Útil: Etnobotánica de Nicaragua. Managua, Nicaragua

: Gobierno de Nicaragua: Misnisterio del Ambiente y los Recursis Naturales:

http://www.bio-nica.info/biblioteca/GrijalvaFloraUtilNicaragua.pdf.

13. Hernández, C; Ascacio, J; & Aguilera, A. (2015). Aprovechamiento de cáscara

de rambután como fuente de antioxidante. Mexico: Universidad Autonoma

Agraria Antonio Narro.

14. IICA. (2015). Rambután. Managua, Nicaragua: Instituto Interamericano de

Coopreacion para la Agricultura:

http://orton.catie.ac.cr/repdoc/A4752e/A4752e.pdf.

15. Instituto Nacional de Nutrición. (2013). FITOQUÍMICOS. Carácas, Venezuela:

Dirección de Investigaciones de Venezuela.

16. López, R. (2012). Beneficios del mamón chino. Colombia:

https://laclavedelasalud.blogspot.com/2010/09/tu-blog-apasionado-por-temas-

de-salud.html.

17. Maridueña, M. (2013). Arboles Frutales. Quito, Ecuador:

https://arbolesfrutales.org/rambutan-todo-lo-que-debes-saber/.

18. Maridueña, M., Moreno, M., & Villafuerte, G. (2012). Proyecto para la exportacion

de rambután a la comunidad economica europea. Guayaquil, Ecuador: Escuela

Superior Politécnica del Litoral:

43

https://www.dspace.espol.edu.ec/bitstream/123456789/10458/1/Proyecto%20Fi

nal.pdf.

19. Miranda M. M., Cuéllar A. C. 2000. Manual de prácticas de laboratorio.

Farmacognosia y productos naturales. Ciudad Habana. 25-49, 74-79.

20. Moreno, E. (2013). Efectos de prácticas agronómicas en la calidad postcosecha

de fruto de rabután (Nephelium lappaceum L.). Chapingo, México: Universidad

Autónoma de Fitotécnia.

21. Moya, R. (2013). Boletín Rambután. Paraguay:

http://www.fhia.org.hn/dowloads/diversificacion_pdfs/br2octubre2006.pdf.

22. Nakasone, H.Y. y R.E. Paull. 1998. Tropical fruits. Cab International, New York,

NY.

23. Osorio, H., Leyva, A., & Toledo, E. (2017). Evaluación de cultivos de ciclo corto

en rambután (Nephelium lappaceum L.) en México utilizando IET. La Habana,

Cuba: Scielo.

24. Palacios, M. (2013). INTRODUCCION A LA FARMACOGNOSIA. México:

Universidad Central de Mexico. Estudio Sistemático de la farmacognosia.

http://farmacognosia-farmaciauladech.blogspot.com/.

25. Pérez, A., Adame, J., & Villafómes, T. (2014). Características sensoriales y

físico-químicas de seis clones de Rambután (Nephelium lappaceum L.), como

indicadores del potencial de cultivo en . Veracruz, México : Instituto Nacional de

Investigaciones Forestales. Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2014, 31: 253-273.

26. Rodríguez, C. (2017). Modelo de negocio para la elaboracióny comercialización

de la conserva de achotillo en la ciudad de Guayaquil. Guayaquil, Ecuador:

Universidad de Guayquil. Facultad de Ciencias Administractivas.

27. Rodríguez, C. (2017). Modelo de negocio para la elaboracióny comercialización

de la conserva de achotillo en la ciudad de Guayaquil. Guayaquil, Ecuador:

Universidad de Guayquil. Facultad de Ciencias Administractivas.

28. Sociedad Brasileira de Farmacognosia. (2014). Descripción general de la

Farmacognosia. Brasil: http://www.sbfgnosia.org.br/.

44

29. Solis, J; Camey, G; Hernández, R; Pérez, F; & Durán, C. (2009). Composition,

phase behavior and thermal stability of natural edible fat from rambutan

(Nephelium lappaceum L.) seed. Mexico: Instituto de Ciencias Básicas,

Universidad Veracruzana.

30. Torres, J. (2014). Nutrición y Alimentaria. Argentina :

http://nutricion.nichese.com/rambutan.html.

31. Vela, A. (2015). Cultivo Rambután: Injerto de púa por hendidura. Costa Rica:

Infoagrio:

http://www.infoagro.go.cr/Infoagro/HojasDivulgativas/Cultivo%20Rambutan%20

(Nephelium%20lappaceum%20L).pdf.

45

ANEXOS

LAVADO Y SECADO DE LAS HOJAS DEL ACHOTILLO (Nephelium

lappaceum L.)

Anexo 1. Hojas del achotillo dulce en la hacienda del Sr. Steven Roca en la Cuidad de Quevedo .

Anexo 3. Lavado de Hojas de Achotillo

Anexo 2. Hojas del achotillo amargo en

la hacienda del Sr. Steven Roca en la

Cuidad de Quevedo

Anexo 4. Proceso de secado al ambiente

46

Anexo 5. Proceso de secado en estufa

CLASIFICACIÓN DE LAS HOJAS DEL ACHOTILLO (Nephelium

lappaceum L.)

Anexo 6. Clasificación de hojas

(achotillo dulce)

Anexo 7. Clasificación de hojas

(achotillo amargo)

47

PESADO Y MOLIENDA DE LAS HOJAS DE ACHOTILLO

Anexo 8. Pesado de hojas de achotillo

Anexo 10. Molienda de Hojas Amargas

Anexo 9. Trituración de las hojas

Anexo 11. Molienda de Hojas Dulces

48

DETERMINACION DEL CONTENIDO DE HUMEDAD Y DE CENIZAS

Anexo 13. Muestras colocadas en la

estufa

Anexo 12. Pesado de la muestra para

realizar humedad

Anexo 14. Cenizas de hojas dulces

49

DETERMINACIÓN DE ANÁLISIS QUÍMICO CUALITATIVO

Anexo 15. Extracto etéreo - Ensayo de

Dragendorf

Anexo 17. Extracto etéreo - Ensayo de

Saponinas

Anexo 16. Extracto etéreo - Ensayo de

Fehling

Anexo 18. Extracto etéreo - Ensayo de

Baljet

50

Anexo 19. Extracto etéreo - Ensayo de

Cloruro Férrico

Anexo 21. Extracto etéreo - Ensayo de

Resina

Anexo 23. Extracto etéreo - Ensayo de

Catequinas

Anexo 20. Extracto etéreo - Ensayo de

Catequinas

Anexo 22. Extracto etéreo - Ensayo de

Shinoda

Anexo 24. Extracto etéreo - Ensayo de

Borntrager

51

Anexo 25.Extracto alcohólico- Ensayo

de Dragendorf

Anexo 27. Extracto alcohólico- Ensayo

de Fehling

Anexo 29. Extracto alcohólico- Ensayo

de Borntrager

Anexo 26. Extracto acuoso - Ensayo de

Dragendorf

Anexo 28. Ensayo de Lieberman

52

DETERMINACION DE SUSTANCIAS SOLUBLES

Anexo 30. Peso de la muestra

Anexo 32. Balones en reflujo

Anexo 31. Adición del alcohol etílico

Anexo 33. Extracto alcohólico de las

hojas

53

CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

Anexo 34. cámara con solventes

orgánicos (fase móvil),

Anexo 36. Laboratorio de Productos

Naturales

Anexo 35. Cromatografía de capa

delgada de las dos variedades de flores

del Nephelium lappaceum L. revelada

con ácido sulfúrico.