-
PENGDAUN
GUKURAN TEH H
DPP
AN KAPAHIJAU (CaPH DAN V
ASITAS Aamellia siVOLTAM
ANTIOKinensis) DMMETRI
KSIDAN EDENGAN I SIKLIK
EKSTRAKMETOD
K
K DE
ARRINI SEPTIANTI
DEPFAKULLTAS MATEMATIK
PARTEME
INSTITUKA DAN I
EN KIMIA
T PERTAILMU PE
A
BOGO2011
ANIAN BOENGETAHHUAN ALAAM OGOR
OR 1
-
ABSTRAK ARINI SEPTIANTI. Pengukuran Kapasitas Antioksidan
Ekstrak Daun Teh Hijau (Camellia sinensis) dengan Metode DPPH dan
Voltammetri Siklik. Dibimbing oleh ELLY SURADIKUSUMAH dan DEDEN
SAPRUDIN.
Daun teh hijau (Camellia sinensis) memiliki kemampuan sebagai
antioksidan. Penelitian ini bertujuan menentukan kapasitas
antioksidan fraksi teraktif ekstrak daun teh hijau menggunakan
metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) dan voltammetri siklik.
Ekstrak kasar metanol memiliki aktivitas antioksidan lebih besar
dibandingkan ekstrak aseton. Ekstrak metanol difraksionasi dengan
kromatografi lapis tipis preparatif (KLTp) menghasilkan 10 fraksi.
Di antara 10 fraksi, fraksi 2 merupakan fraksi teraktif antioksidan
karena memilki persentase inhibisi terbesar dibandingkan fraksi
lain ketika diukur dengan metode DPPH, yaitu 74.78%. Begitu pun,
metode voltammetri siklik menunjukkan bahwa fraksi 2 memiliki
kapasitas antioksidan terbesar yang terlihat pada voltammogram
daerah anode, yaitu 2.2710A.s. Berdasarkan uji fitokimia, fraksi
teraktif mengandung senyawa flavonoid dan tanin.
ABSTRACT
ARINI SEPTIANTI. Measuring Antioxidant Capacity of Green Tea
Leaves (Camellia sinensis) Extract using DPPH and Cyclic
Voltammetry Methods. Supervised by ELLY SURADIKUSUMAH and DEDEN
SAPRUDIN.
Green tea (Camellia sinensis) exhibited antioxidant activity.
The purpose of study was to determine antioxidant capacity of the
most active green tea leaves fraction using DPPH
(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) and cyclic voltammetry methods.
Methanol crude extract of the sample showed antioxidant activity
higher than the acetone extract. Fractionation of the methanol
extract by preparative thin layer chromatography resulted 10
fractions. Among the 10 fractions, fraction 2 was the most active
fraction with inhibition percentage of 74.78%. Similarly, cyclic
voltammetry method showed that fraction 2 was the most active on
anodic area of 2.2710 A.s. The result of phytochemical tests showed
that the most active fraction contain flavonoids and tannins.
-
PENGUKURAN KAPASITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAUN TEH HIJAU
(Camellia sinensis) DENGAN METODE
DPPH DAN VOLTAMMETRI SIKLIK
ARINI SEPTIANTI
Skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN
ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR
2011
-
Judul : Pengukuran Kapasitas Antioksidan Ekstrak Daun Teh Hijau
(Camellia sinensis) dengan Metode DPPH dan Voltammetri Siklik
Nama : Arini Septianti NIM : G44061573
Disetujui, Pembimbing I, Pembimbing II,
Ir. Elly Suradikusumah, MS Deden Saprudin, S.Si, M.Si NIP
19450214 197010 2 001 NIP 19680518 199412 1 001
Diketahui, Ketua Departemen Kimia
Prof. Dr. Ir. Tun Tedja Irawadi, MS NIP 19501227 197603 2
002
Tanggal lulus :
-
PRAKATA
Syukur alhamdulillah penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT atas
limpahan rahmat, hidayah, dan karunia-Nya sehingga penulis dapat
menyelesaikan karya ilmiah ini dengan judul Pengukuran Kapasitas
Antioksidan Ekstrak Daun Teh Hijau (Camellia sinensis) dengan
Metode DPPH dan Voltammetri Siklik. Penelitian ini dilaksanakan
sejak bulan November 2010 sampai Mei 2011 di Laboratorium Kimia
Analitik dan Laboratorium Bersama, Departemen Kimia, FMIPA,
IPB.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada berbagai pihak yang
memberikan bimbingan dan motivasi selama penelitian sampai
penulisan karya ilmiah ini. Terima kasih kepada Ibu Ir, Elly
Suradikusumah,MS dan Bapak Deden Saprudin, S.Si, M.Si selaku
pembimbing yang selalu memberikan saran, motivasi, dan meluangkan
waktu untuk berkonsultasi. Ucapan terima kasih tak terhingga untuk
mama, papa, Kak Rifky, dan Kak Rina atas doa, motivasi, dan kasih
sayangnya kepada penulis.
Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada seluruh staf
Laboratorium Kimia Analitik (Pak Eman, Bu Nunung, Pak Dede, Pak
Ridwan, dan Pak Kosasih) dan staf laboratorium bersama (Mas Eko dan
Mba Siti Rachmah) atas bantuannya selama penulis melaksanakan
penelitian. Selain itu, penulis juga mengucapkan terima kasih
kepada teman satu bimbingan (Ahmad Yani, Emilia Fatmawati, dan
Martha Yusfita), Aisyah Hidayat, dan Catharina.
Teriring doa dan harap semoga Allah meridhoi upaya yang penulis
harapkan. Semoga karya ilmiah ini bermanfaat bagi penulis sendiri
maupun berbagai pihak.
Bogor, Mei 2011
Arini Septianti
-
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Bogor pada tanggal 9 September 1988 dari
pasangan Hendarwan dan Sudiah. Penulis merupakan anak ketiga dari
tiga bersaudara.
Tahun 2006, penulis lulus dari SMA Negeri 4 Bogor dan pada tahun
yang sama lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi
Masuk IPB (USMI). Penulis memilih mayor Kimia dan minor Teknologi
Pangan.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis menjadi asisten Kimia
Analitik untuk mahasiswa Biologi dan ITP pada tahun ajaran
2009/2010; Analisis Komponen Aktif dan Uji Aktivitas untuk program
Diploma Analisis Kimia pada tahun ajaran 2010/2011; Kimia Analitik
Dasar untuk program Diploma Analisis Kimia pada tahun ajaran
2010/2011; dan Kimia Industri untuk program Diploma Analisis Kimia
pada tahun ajaran 2010/2011. Selain itu, penulis mengajar di
bimbingan belajar Primagama pada tahun 2009 sampai 2011.
-
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL
..............................................................................................
viii
DAFTAR GAMBAR
.........................................................................................
viii
DAFTAR LAMPIRAN
......................................................................................
xi
PENDAHULUAN
.............................................................................................
1
TINJAUAN PUSTAKA
....................................................................................
1 Teh Hijau
........................................................................................................
1 Antioksidan
....................................................................................................
2 Voltammetri Siklik
.........................................................................................
2 Mekanisme Kapasitas Antioksidan Menggunakan Metode Voltammetri
Siklik
..............................................................................................................
3 Mekanisme Kapasitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH
................ 3 Ekstraksi
.........................................................................................................
4 Kromatografi
..................................................................................................
4
BAHAN DAN METODE
..................................................................................
5 Lingkup kerja
.................................................................................................
5 Alat dan Bahan
...............................................................................................
5
HASIL DAN PEMBAHASAN
..........................................................................
6 Kadar Air
........................................................................................................
6
Ekstraksi
.........................................................................................................
7 Ekstrak Aktif
..................................................................................................
7 Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
.............................................................. 8
Penentuan Fraksi Teraktif Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
..... 9 Penentuan Kapasitas Antioksidan dengan Voltammetri Siklik
..................... 10 Uji Fitokimia
..................................................................................................
12
SIMPULAN DAN SARAN
...............................................................................
12 Simpulan
........................................................................................................
12 Saran
...............................................................................................................
12
DAFTAR PUSTAKA
........................................................................................
12
LAMPIRAN
.......................................................................................................
14
-
DAFTAR GAMBAR
Halaman 1 Struktur Resonansi Radikal Bebas dari DPPH
........................................... 3
2 Pita Absorpsi DPPH dalam Pelarut Metanol
.............................................. 3
3 Mekanisme Penghambatan Radikal DPPH
................................................. 4
4 Bioautografi Aktivitas Antioksidan dengan DPPH Ekstrak Metanol
dan Aseton Daun Teh
Hijau..........................................................
7
5 Voltammogram Pengukuran Antioksidan Ekstrak Kasar
........................... 8
6 Hasil Pemisahan Ekstrak Metanol Daun Teh Hijau dengan KLTP
............ 8
7 KLT Bioautografi Fraksi KLTp dengan DPPH
.......................................... 9
8 Mekanisme Reaksi Senyawa Flavonoid dengan DPPH
.............................. 9
9 Kurva Kalibrasi Asam Askorbat dengan DPPH 0.05 mM
.......................... 10
10 Voltammogram Fraksi Hasil KLTp
............................................................ 10
11 Voltammogram Fraksi 2 Hasil KLTp
......................................................... 11
12 Voltammogram Asam Askorbat
.................................................................
11
13 Kurva Kalibrasi Asam Askorbat dengan DPPH 0.05 mM
.......................... 11
-
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman 1 Diagram Alir Penelitian
.................................................................................
15
2 Penentuan Kadar Air Daun Teh Hijau
........................................................... 16
3 Penentuan Rendemen Ekstrak Kasar Daun Teh Hijau dalam Metanol
......... 17
4 Penentuan Rendemen Ekstrak Kasar Daun Teh Hijau dalam Aseton
........... 18
5 Pengukuran Kapasitas Antioksidan Ekstrak Kasar Daun Teh Hijau
dengan Metode Voltammetri Siklik
...........................................................................
19
6 Hasil Pemisahan Fraksi KLT Preparatif
........................................................ 20
7 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH 0.05 mM Dalam
Metanol
..........................................................................................................
21
8 Penentuan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Teh Hijau
dengan Metode DPPH
....................................................................................
22
9 Hasil Voltammogram Pengukuran Kapasitas Antioksidan Fraksi
KLTp Ekstrak Metanol Daun Teh Hijau
..................................................................
23
10 Pengukuran Kapasitas Antioksidan Fraksi KLTp Ekstrak Metanol
Daun Teh hijau dengan Metode Voltammetri Siklik
............................................... 24
11 Penentuan Aktivitas Antioksidan Vitamin C dengan Metode DPPH
............ 25
12 Pengukuran Kapasitas Antioksidan Asam Askorbat dengan
Metode
Voltammetri
...................................................................................................
25
-
PENDAHULUAN
Radikal bebas berperan dalam terjadinya berbagai penyakit. Efek
dari proses oksidatif radikal bebas dapat menyebabkan peradangan
dan penuaan dini. Terjadinya kondisi stres oksidatif, yaitu kondisi
tidak seimbangnya antioksidan alami yang terkandung di dalam tubuh,
menyebabkan manusia tidak dapat bergantung pada antioksidan alami
yang sudah terkandung di dalam tubuhnya untuk mengatasi radikal
bebas (Campanella et al. 2006). Antioksidan adalah zat yang dapat
menetralisir atau menghancurkan radikal bebas. Radikal memiliki
tingkat reaktivitas yang tinggi dan secara alami ada di dalam tubuh
sebagai hasil dari reaksi biokimia di dalam tubuh (Konisi et al.
2003).
Radikal bebas yang berlebih dalam tubuh dapat mempercepat proses
penuaan dan menyebabkan bahaya patologis yang serius, seperti struk
otak, diabetes melitus, arthritis reumatoid, penyakit Parkinson,
penyakit Alzheimer, dan kanker. Radikal bebas oksigen termasuk
spesies oksigen reaktif (ROS), yaitu spesies dengan kecenderungan
oksidasi kuat, meliputi radikal alami (radikal superoksida dan
radikal hidroksil) dan bukan radikal alami (ozon dan hidrogen
peroksida). Produksi ROS pada tubuh manusia selalu melalui proses
metabolik. Jika tidak terdeaktivasi, spesies ini memberikan
reaktivitas kuat yang berbahaya bagi semua molekul. Dalam beberapa
tahun ini, upaya mengatasi pembentukan radikal bebas pada produk
farmasi dan bahan pangan diatasi oleh antioksidan dari bahan alami
(Campanella et al. 2006).
Teh hijau berasal dari tanaman teh (Camellia sinensis) yang
dapat tumbuh dengan baik di daerah pegunungan beriklim sejuk. Teh
hijau merupakan salah satu jenis teh yang digemari terutama di Cina
dan Jepang, sedangkan teh hitam paling banyak digemari di Amerika,
Eropa, dan Indonesia. Teh hijau mengandung zat aktif antioksidan
alami dengan kandungan yang lebih tinggi daripada teh hitam ataupun
teh merah. Antioksidan alami tersebut berupa polifenol,umumnya
adalah kelompok flavanol yang dikenali sebagai katekin dan tanin.
Antioksidan ini berfungsi sebagai penangkal radikal bebas (Suzuki
et al. 2003).
Metode pengukuran aktivitas antioksidan didasarkan pada
pengukuran aktivitas pengumpulan suatu radikal oleh senyawa
antioksidan. Senyawa antioksidan dalam bentuk tereduksi akan
bereaksi dengan radikal bebas menjadi bentuk teroksidasinya
yang
stabil dan memiliki warna yang berbeda dengan bentuk
tereduksinya. Perubahan warna tersebut dapat dideteksi menggunakan
spektrofotometer pada panjang gelombang yang sesuai. Saat ini
terdapat beberapa metode penentuan aktivitas antioksidan
menggunakan metode spektrofotometri yang terkenal, seperti
2,2-azinobis - (3-etil-benzotiazolin-6-asam sulfonat) (ABTS),
2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), asam-2-tiobarbiturat (TBA),
kemampuan mereduksi feri (FRAP), kemampuan mereduksi kupri
(CUPRAC), dan kapasitas absorbansi radikal oksigen (ORAC) (Caldwell
2001).
Metode yang digunakan untuk menentukan kapasitas antioksidan
ekstrak daun teh hijau pada penelitian ini adalah metode
spektrofotometri dan elektrokimia. Metode spektrofotometri yang
dipilih adalah metode DPPH. Metode ini berdasarkan penangkapan atom
hidrogen dari suatu antioksidan oleh radikal DPPH sehingga stabil
dalam bentuk tereduksi. Metode elektrokimia yang digunakan adalah
voltammetri siklik. Metode elektrokimia mengukur kapasitas
antioksidan berdasarkan pada pengukuran daerah anode dari
voltammogram siklik. Penelitian ini bertujuan menentukan fraksi
teraktif antioksidan ekstrak daun teh hijau menggunakan metode DPPH
dan voltammetri siklik.
TINJAUAN PUSTAKA
Teh Hijau
Teh merupakan salah satu produk minuman terpopuler yang banyak
dikonsumsi oleh masyarakat indonesia maupun dunia dikarenakan teh
mempunyai rasa dan aroma yang atraktif, selain itu teh juga
dipercaya mempunyai khasiat bagi kesehatan tubuh diantaranya
mencegah kegemukan, kanker dan kolesterol. Teh berdasarkan proses
pengolahannya diklasifikasikan ke dalam tiga jenis yaitu teh
fermentasi (teh hitam), teh semi fermentasi (teh olong) dan teh
tanpa fermentasi (teh hijau). Teh merupakan minuman yang sudah
dikenal oleh penduduk bumi ini. Dari berbagai macam tipe teh
setidaknya ada 3 kategori utama, yaitu teh hijau, teh olong dan teh
hitam. Teh hitam dibuat dari dengan melakukan fermentasi terhadap
daun teh. Selama proses produksi teh hitam, sebagian besar
senyawa-senyawa yang ada akan teroksidasi. Teh olong dibuat dengan
fermentasi sebagian. Sedangkan, teh hijau
-
2
mengalami proses pengeringan untuk mencegah proses oksidasi
lebih lanjut hingga zat yang terkandung tetap dalam kondisi
utuh.
Khasiat pada teh hijau diperoleh dari komponen-komponen yang
dimiliki oleh teh hijau, seperti senyawa-senyawa polifenol. Senyawa
ini mempunyai aktivitas antioksidan yang dapat mencegah oksidasi
oleh radikal bebas, yang dapat menyebabkan timbulnya kanker.
Polifenol merupakan komponen kimia yang mempunyai aktivitas
antioksidan (Suzuki et al. 2003). Penelitian yang sudah dilakukan
baik secara farmakologi maupun endimologi menegaskan bahwa
polifenol pada teh hijau mempunyai peran yang sangat potensial pada
aktivitas antioksidan (Ikeda et al. 2003). Kandungan polifenol
dalam daun teh mencapai 25-35% dari keseluruhan bahan kering daun
(Belitz and Grosch 1999). Pada teh hijau senyawa-senyawa polifenol
yang terdiri atas flavonol, flavandiol, flavonoida dan asam-asam
fenolat. Umumnya, senyawa polifenol di dalam teh hijau adalah
kelompok flavanol yang dikenali sebagai katekin dan senyawa
tanin.
Katekin pada teh merupakan flavonoid yang termasuk dalam kelas
flavanol. Jumlah atau kandungan katekin ini bervariasi untuk
masing-masing jenis teh. Adapun katekin teh yang utama adalah
Epicatehcin (EC), Epicatehcin gallate (ECG), Epigalochatechin dan
Epichatecin gallate (EGCG). Katekin teh memiliki sifat tidak
berwarna, larut dalam air, serta membawa sifat pahit dan sepat pada
seduhan teh. Hampir semua sifat produk teh termasuk didalamnya
warna, rasa dan aroma secara langsung maupun tidak langsung,
dihubungkan dengan modifikasi pada katekin ester menjadi katekin
non ester dapat menurunkan rasa pahit dan sepat dari teh hijau
(Hartoyo 2003).
Antioksidan
Antioksidan memiliki peranan yang sangat penting dalam memerangi
radikal bebas. Antioksidan adalah zat yang diperlukan tubuh untuk
menangkap radikal bebas terhadap sel normal, protein, dan lemak
(Prakasih 2001). Antioksidan dalam tubuh bermanfaat untuk mencegah
reaksi oksidasi yang ditimbulkan oleh radikal bebas baik berasal
dari metabolisme tubuh maupun faktor eksternal lainnya. Radikal
bebas adalah atom atau molekul yang tidak stabil dan sangat reaktif
karena mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada
orbital terluarnya. Radikal bebas akan bereaksi dengan molekul
di sekitarnya untuk memperoleh pasangan elektron supaya mencapai
kestabilan atom atau molekul. Reaksi ini berlangsung terus menerus
dalam tubuh dan bila tidak dihentikan akan menimbulkan berbagai
penyakit, seperti kanker, jantung, katarak, penuaan dini, serta
penyakit degeneratif lainnya (Kikuzaki & Nakatani 1993).
Antioksidan dapat diperoleh secara alami maupun sintetik.
Beberapa contoh antioksidan alami di antaranya asam askorbat
(vitamin C), -tokoferol, -karoten, asam urat, sistein, vitamin K,
serum albumin, bilirubin, dan beberapa logam seperti seng dan
selenium. Sementara itu, contoh antioksidan sintetik diantaranya
hidroksianisol berbutil (BHA) dan hidroksitoluena berbutil (BHT)
(Mosquera et al. 2007).
Voltammetri Siklik
Voltammetri adalah metode elektrokimia dengan pengukuran arus
sebagai fungsi potensial. Metode voltammetri mengaplikasikan suatu
potensial pada sebuah sel elektrokimia dan arus yang mengalir
melalui sel diukur sebagai fungsi dari potensial. Plot arus sebagai
fungsi potensial disebut voltammogram. Voltammogram menampilkan
informasi kualitatif dan kuantitatif tentang spesi yang terlibat
pada reaksi oksidasi dan reduksi (Harvey 2000).
Metode voltammetri secara umum dilakukan dengan menggunakan dua
elektrode. Namun, metode voltammetri modern yang berkembang
menggunakan tiga elektrode. Sinyal eksitasi dari potensial
diaplikasikan pada elektrode kerja, mengubah potensialnya relatif
terhadap potensial tetap dari elektrode rujukan. Arus yang
dihasilkan antara elektrode kerja dan pembantu diukur. Elektrode
pembantu yang digunakan secara umum adalah kawat platina dan
elektrode SCE, serta Ag/AgCl adalah electrode rujukan yang sering
digunakan (Harvey 2000).
Sinyal eksitasi yang dihasilkan dalam sel kimia pada metode
voltammetri memiliki 4 bentuk berdasarkan metode yang digunakan
adalah linear scan, differential pulse, square wave, dan triangular
(cyclic voltametry) (Skoog et al. 1998).
Voltammetri siklik adalah teknik yang paling luas digunakan
untuk mendapatkan informasi kualitatif dan kuantitatif tentang
reaksi elektrokimia. Voltammetri siklik digunakan sebagai
eksperimen awal pada studi elektroanalisis. Secara khusus, metode
ini digunakan untuk menentukan lokasi dari
-
3
potensial redcepat dan mpengaruh mkeseluruhan
Voltammvoltammetriselama penawal ke popotensial aw(scanning)
reduksi berkatodik maukatodik adalpenyapuan darus yang pasebaliknya
(
MekanAntioks
Mekanisumum menterjadi dalampropagasi, dpembentukasubstrat
yanreaktif akibasubstrat akmembentuk propagasi. Rmenyerang
hidroperoks(Javanmardi
Antioksimelalui duperpindahanperpindahanPAH mengudalam
menmemberikansedangkan kemampuantransfer elesenyawa, se(Prior et
al.
Pengukumenggunakatermasuk kemelibatkan didasarkan pdari
voltamdaerah anodsuatu zat anmengandungantioksidan
voltammetrielektron sua
doks dari spememberikan ev
edia terhadapn (Wang 1994)metri siklik i berdasarkannyapuan
poteotensial akhiwal atau dise
dapat diballangsung. Deupun anodik lah arus yangdari arus
yangaling kecil da(Khopkar 2002
esi elektroaktivaluasi yang b proses redok).
f secara baik dari ks secara
nisme Penguksidan MenggVoltammetr
sme kerja nghambat oksm tiga tahap dan terminasi. an radikal
subng bersifat tidat hilangnya skan bereaks
radikal peRadikal perok
substrat yida dan radi et al. 2003). idan mampu mua mekanis
n atom hidn elektron beukur kemampnstabilkan radn atom h
metode n antioksidaektron untuk eperti logam, 2005).
uran kapaan metode e dalam jenis
donor elepada daerah an
mmogram. Kude bergantungntioksidan ke g radikal.
dengani siklik diukuatu zat antiok
merupakan n pengukura
ensial dari pir dan kembebut juga penik kembali
engan demikidapat teruku
digunakan pag paling besar an arus anodik2).
kuran Kapasigunakan Metori Siklik
antioksidan sidasi substrautama, yaitu Tahap inisiasbstrat,
yaitu
dak stabil dansatu atom H. si dengan eroksi pada ksi lebih
lanjyang menghdikal substra
mendeaktivasisme utama, drogen (PAHebas (PEB). puan dari
antidikal bebas hidrogennya
PEB mean melalui
mereduksi bkarbonil, dan
asitas antivoltammetri metode PEB
ektron. Pengnode yang dih
urva yang dihg pada donor e
suatu senyawBesarnya k
n menggur berdasarkanksidan tersebu
teknik an arus potensial ali lagi nyapuan
setelah an arus
ur. Arus ada saat menuju
k adalah
itas ode
secara at yang inisiasi,
si terjadi turunan
n sangat Radikal oksigen
tahap ut akan hasilkan at baru
i radikal yaitu
H) dan Metode
ioksidan dengan
(AH), engukur
proses berbagai n radikal
ioksidan siklik
B karena gukuran hasilkan hasilkan elektron wa yang kapasitas
gunakan n donor ut yang
dihasilkan terjadinya do2006).
pada daerahonor elektron
h anode t(Campanella
tempat a et al.
Mekani
Antiisme Pengukuioksidan Met
uran Aktivitatode DPPH
as
Penangka
utama aktiviBeberapa memana aktivipenangkapan organik
poltemperatur ksatunya deng2003). DPPadalah radikungu.
Ketikaberwarna kun(Gambar 1).
apan radikal itas antioksidetode telah ditas antioksioleh
radikal s
Gambar 1 Sd
Metode D
penentuan aradikal yang metanol danditunjukkan ometanol pada520
nm (Gadalam bentudilakukan peyang cukup a
Gambar 2 Pm
lar, seperti kamar. Peng
gan menggunaPH (2,2-difekal bebas yana direduksi ning
(2,2-dife
adalah mekadan pada madikembangkanidan diukur sintetik pada
p
metanol gukuran ini akan DPPH enil-1-pikrilhing stabil beroleh
radikal
enil-1-pikrilhid
anisme akanan. n yang
oleh pelarut
pada salah
(Ionita idrazil) rwarna l akan drazin)
Struktur resondari DPPH (Io
DPPH seringantioksidan. bebas dalam
n memiliki oleh pita absoa panjang geloambar 2). DPuk radikal
engukuran akakurat (Molyn
ita absorpsi Dmetanol (Moly
nansi radikal onita 2003).
g digunakan DPPH merularutan etano
warna ungu orpsi dalam pombang sekitaPPH bersifat sehingga
muktivitas antioeux 2004).
DPPH dalam pyneux 2004).
bebas
untuk upakan ol atau
yang pelarut ar 515-
stabil ungkin
oksidan
pelarut
-
4
Metode pengukuran Radikal bmenangkap ekstrak ysehingga tereduksi
(G
DPPH mantioksidan
bebas dari atom hidrog
ang mengamenghasilkan
Gambar 3).
merupakan berdasarkanantioksidan
gen dari komandung antin bentuk
metode n PAH.
akan mponen ioksidan
DPPH
Gambar 3
D
Ekstrakssenyawa tubahan dengberdasarkantidak
salindidefinisikanatau lebih kfase lain.
Ekstraksyang dilakukterkandung bantuan supada ekstrakelarutan
likakan melarHal-hal yanpemilihan pracun, dan (Khopkar 20
Sokhletasecara berkdipanaskan penyari temolekul airmenyari
siselanjutnya bulat. Pendilakukan ditempatkandilapisi kertpenyari
dipsehingga mekondensor cairan penymenyari zatcairan penysifon,
selurulabu alas b
Mekanisme pDPPH (Prakas
Ekstra
si adalah punggal atau mgan mengunan distribusinyang bercampun
sebagai pro
komponen dar
si merupakan kan untuk medalam suatu
uatu pelarut. aksi pelarut mke dissolve likrutkan zat pong perlu
dippelarut adala
kemudahann002). asi merupakankesinambungasehingga m
erkondensasi r oleh pendinimplisia dalamasuk kembaarikan
kompdengan cara
n dalam klotas saring sedpanaskan dalaenguap dan dbola menja
ari yang jatuht aktif di dalayari telah muh cairan aka
bulat melalui
penghambatansih 2001).
aksi
proses pengamajemuk dar
akan pelarut a pada dua faur. Ekstraksoses pemindahri matriks
me
suatu proses engambil zat-zu campuran
Metode pemmenggunakan ke, yaitu pelarolar dan
sebertimbangkan
ah selektivitanya untuk d
n penyarian sian, cairan
menguap, uapmenjadi m
ngin balik daam Slongsonali ke dalam laponen kimiaa serbuk
sionsong yang
demikian rupaam labu aladikondensasikdi molekul-mh ke dalam kam
simplisia dmencapai peran turun kempipa kapiler
n radikal
ambilan ri suatu tertentu
ase yang si juga han satu ereka ke
selektif zat yang
dengan misahan
prinsip rut polar aliknya.
n dalam as, sifat diuapkan
implisia penyari cairan
molekul-an turun ng dan abu alas a yang implisia g telah a,
cairan as bulat kan oleh molekul lonsong dan jika rmukaan mbali
ke
hingga
terjadi sirkulabila cairan tampak noda mencapai
20-dikumpulkan
asi. Ekstraksidi sifon tidajika di KLT,
-25 kali. Ekstdan dipekatk
i sempurna diak berwarna, atau sirkulastrak yang dip
kan.
itandai tidak
si telah peroleh
Kromatoggrafi
Kromatog
pemisahan ymemisahkan lainnya bertersebut padKromatografiempat
jenis,kromatografi ion, dan Kromatografikomponen spermukaan bahan
isian memisahkan sehingga mecairan tipis bertindak sebbertindak
sebpertukaran ioberbentuk iodilakukan deyang permeabberlangsung
didasarkan komponen ya
Kromatogjenis kromamenggunakanalumina padlogam yangkromatografi
menggunakandalam sinar upelarut atau (Furniss et almerupakan
splanar yang analisis kualiditotolkan papada sebuah naik pada pedan
komponejarak yang bedan derajat (Christian 19
grafi adalahyang dapat suatu kompo
rdasarkan mda fase diami dapat dikelo, yaitu krompartisi,
krom
kromatograi adsorbsecara selektiadsorben ya
kolom. Krkomponen
engalami parpada penya
bagai fase diabagai fase gon memisahkaon. Kromatongan mengisibel
sebagai faseperti proseatas ukura
ang dipisahkan
Kromatogdigunakan umurni suatu stipis preparaoleh gaya k
grafi lapis tipiatografi partn sebuah lapda sebuah leg keras.
F
lapis tipisn substansi yaultraviolet. Fa
campuran pl. 1989). Kromsalah satu be
dapat diguitatif maupun ada pelat kemwadah berisi
elat dengan aen sampel akaerbeda bergan
retensinya 86).
h suatu mdigunakan
onen dari kommigrasi komm dan fase ompokkan ke matografi ad
matografi pertuafi filtrasi si memisif teradsorbsiang dipakai
romatografi
secara sertisi antara langga padat am dan eluen
gerak. Kromatan komponenografi filtrasi kolom deng
ase diam. Pems pengayakan
an molekul n (Adnan 1997s (KLT) merutisi dan ad
pis tipis silikempeng gelasFase diam s seringkali ang dapat
berpse gerak meru
pelarut yang matogtafi lapientuk kromat
unakan pada kuantitatif. S
mudian ditempeluen. Sampe
adanya gaya kan bergerak d
ntung pada kelpada fase
metode untuk
mponen mponen
gerak. dalam
dsorbsi, ukaran
gel. sahkan i pada
untuk partisi
elektif, lapisan
yang n yang tografi n yang si gel gan gel
misahan n yang
dari 7). upakan dsorbsi a atau s atau untuk
juga pendar upakan sesuai
is tipis tografi
skala Sampel patkan
el akan kapiler dengan larutan
diam
grafi lapis tuntuk memisenyawa, yaitutif (KLTp). kapilaritas
y
tipis (KLT) isahkan komu kromatografTeknik ini d
yang pemisah
yang mponen fi lapis dibantu hannya
-
berdasarkan perbedaan interaksi sampel dalam dua fase yang tidak
saling campur. Spot yang dihasilkan dikelompokkan menjadi beberapa
fraksi. Hasil fraksi tersebut dikerok untuk diidentifikasi komponen
yang terdapat pada sampel tersebut.
BAHAN DAN METODE
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan adalah peralatan kaca, radas Soxhlet,
neraca analitik, pengering putar, kolom kaca, pelat KLT, lampu UV,
oven, lempeng tetes, potensiostat-galvanostat, dan spektrofotometer
ultraviolet-tampak (UV-Vis).
Bahan-bahan yang diperlukan adalah daun teh hijau dari
Perkebunan Gunung Mas, vitamin C, metanol, aseton, serbuk Mg, HCl
pekat, amil alkohol, etanol, eter, anhidrida asam asetat anhidrat,
H2SO4 pekat, H2SO4 2 M, kloroform, NH4OH, pereaksi Meyer, pereaksi
Wagner, pereaksi Dragendorf, FeCl3 1%, heksana, etil asetat,
diklorometana, toluena, silika, larutan bufer fosfat 0.05 mol/L
dengan pH 7.4, KClO4, elektrode pasta karbon, elektrode Ag/AgCl,
dan elektroda platina.
Lingkup Kerja
Metode penelitian ini secara garis besar terdiri dari 2 tahap.
Tahap pertama adalah ekstraksi daun teh hijau dengan pelarut
metanol dan aseton, kemudian ditentukan fraksi aktif antioksidan di
antara 2 ekstrak tersebut menggunakan metode DPPH dan voltametri
siklik. Tahap kedua adalah melakukan fraksionasi terhadap ekstrak
kasar yang termasuk fraksi aktif antioksidan untuk menentukan
fraksi teraktif antioksidan menggunakan metode DPPH dan voltammetri
siklik. Bagan aliran penelitian dapat dilihat pada Lampiran 1.
Penentuan Kadar Air (AOAC 2006)
Cawan porselen dikeringkan pada suhu 105 oC selama 30 menit lalu
didinginkan dalam eksikator dan ditimbang. Sebanyak masing-masing 3
gram sampel daun teh hijau dimasukkan dalam cawan dan dipanaskan
pada suhu 105 oC selama 3 jam sampai
diperoleh bobot konstan. Setelah itu, didinginkan dalam
eksikator dan ditimbang.
Ekstraksi Daun Teh Hijau
Bahan diekstraksi dengan menggunakan metode Soxhlet. Pelarut
yang digunakan adalah metanol dan aseton. Sebanyak 40 gram sampel
serbuk daun teh disoxhletasi selama 4 jam menggunakan masing-masing
200 mL pelarut metanol dan aseton. Ekstrak metanol dan aseton
kemudian dipekatkan dengan penguap putar tekanan rendah sehingga .
Uji Fitokimia (Harborne 1987)
Uji Flavonoid. Sebanyak 0.1 g ekstrak teh hijau ditambahkan 10
mL air panas kemudian dididihkan selama 5 menit dan disaring.
Sebanyak 10 mL filtrat ditambahkan 0.5 serbuk Mg, 1 mL HCl pekat,
dan 1 mL amil alkohol. Campuran dikocok kuat-kuat. Uji positif
ditandai dengan munculnya warna merah, kuning, atau jingga pada
lapisan amil alkohol.
Uji Triterpenoid dan Steroid. Sebanyak 0.1 g ekstrak teh hijau
dilarutkan dengan 25 mL etanol (50 oC), disaring, dan residu
ditambahkan eter. Filtrat ditambahkan 3 tetes anhidrida asam asetat
dan 1 tetes asam sulfat pekat secara berurutan. Larutan dikocok
perlahan dan dibiarkan beberapa menit. Uji positif ditandai dengan
terbentuknya warna merah atau ungu untuk triterpenoid serta hijau
atau biru untuk steroid.
Uji Alkaloid. Sebanyak 0.1 g ekstrak teh hijau dilarutkan dengan
10 mL kloroform dan beberapa tetes NH4OH dan disaring ke dalam
tabung reaksi tertutup. Ekstrak kloroform dalam tabung reaksi
dikocok dengan penambahan 10 tetes H2SO4 2 M kemudian lapisan
asamnya dipindahkan dalam tabung reaksi lain. Lapisan asam ini
diteteskan pada pelat tetes dan ditambahkan pereaksi Meyer, Wagner,
dan Dragendorf yang akan menimbulkan endapan warna berturut-turut
putih, cokelat, dan merah jingga.
Uji Saponin. Sebanyak 0.1 g ekstrak teh hijau ditambahkan ke
dalam 10 mL air panas dan dididihkan selama 5 menit lalu disaring.
Filtrat dikocok dalam tabung reaksi tertutup selama 10 detik lalu
dibiarkan selama 10 menit. Adanya saponin ditunjukkan dengan
terbentuknya buih yang stabil.
Uji Tanin. Sebanyak 0.1 g ekstrak teh hijau ditambahkan ke dalam
10 mL air panas dan dididihkan selama 5 menit lalu disaring.
Filtrat ditambahkan 10 mL FeCl3 1%. Uji
-
positif ditandai munculnya warna hijau kehitaman. Pemilihan
Eluen Terbaik dengan KLT
Pelarut atau fase gerak yang akan digunakan untuk fraksionasi
ekstrak teh hijau dipilih dari hasil KLT yang terbaik. Ekstrak
pekat teh hijau dilarutkan dalam pelarut yang sesuai dan ditotolkan
pada pelat KLT. Setelah kering, pelat KLT langsung dielusi dalam
ruang elusi yang telah dijenuhkan oleh uap eluen pengembang. Eluen
yang digunakan, ialah diklorometana:metanol (5:1), heksana:etil
asetat (2:1), metanol:kloroform (1:9), etil asetat:toluena (1:1),
dan etil asetat:diklorometana (7:3). Noda hasil elusi diamati di
bawah lampu UV pada panjang gelombang 254 dan 366 nm (Ikeda et al.
2003). Fraksionasi dengan KLT Preparatif
Fraksionasi daun teh hijau dilakukan dengan KLT preparatif
(KLTp). Sampel ditotolkan pada pelat kaca yang dilapisi oleh silika
gel. Elusi dilakukan dengan eluen terbaik. Sebelum dielusi, eluen
dijenuhkan selama 30 menit. Setelah elusi selesai, noda yang
dihasilkan kemudian dideteksi oleh sinar UV pada panjang gelombang
254 dan 366 nm. Noda tersebut dikerok dan dikelompokkan menjadi
beberapa fraksi. Setelah itu, dilarutkan dengan pelarut ekstrak
awal. Penentuan Fraksi Aktif Secara Bioautografi
Ekstrak pekat dilarutkan dalam masing-masing pelarut yang
sesuai, yaitu metanol dan aseton kemudian ditotolkan pada pelat
KLT. Setelah kering, pelat kemudian dielusi dengan eluen terbaik
yang telah dijenuhkan. Noda hasil elusi diamati di bawah sinar UV
pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm kemudian disemprot
menggunakan larutan DPPH dalam metanol. Fraksi yang aktif
ditunjukkan dengan berkurangnya intensitas warna ungu pada DPPH.
Penentuan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH (Hanani
2005)
Ekstrak sampel yang akan diuji aktivitas antioksidannya dibuat
dalam konsentrasi 100 ppm. Ekstrak tersebut dipipet 0.2 mL kemudian
ditambahkan 3.8 mL larutan DPPH 0.05 mM dalam metanol. Campuran
dihomogenkan dan dibiarkan selama 30 menit dalam ruang gelap.
Serapan diukur dengan spektrofotometer UV-tampak pada panjang
gelombang 515 nm. Sebagai kontrol positif digunakan asam askorbat
konsentrasi 2, 3, 4, 5 dan 6 ppm dengan perlakuan yang sama dengan
sampel uji. Persentase inhibisi sampel dan control positif dihitung
untuk mengetahui fraksi teraktif sebagai aktivitas antioksidan.
Penentuan Kapasitas Antioksidan Menggunakan Metode Voltammetri
Siklik (Campanella et al. 2006)
Pengukuran dilakukan menggunakan potensostat-galvanostat dengan
pasta karbon sebagai elektrode kerja, platina sebagai elektrode
pembantu, dan elektrode Ag/AgCl sebagai elektrode pembanding.
Ekstrak dengan konsentrasi 100 ppm dan KClO4 dilarutkan dalam
larutan bufer fosfat 0.05 mol/L dengan pH 7.4 ke dalam sel
elektrokimia. Ketiga elektrode dimasukkan ke dalam larutan bufer
fosfat hingga permukaan elektrode tercelup. Sebelum dilakukan
pengukuran, larutan dideaerasi dengan mengalirkan gas nitrogen
selama kurang lebih 1 menit. Saat pengukuran, gas nitrogen tetap
dialirkan di atas larutan contoh. Perubahan yang terjadi diamati
pada profil voltamogram yang dihasilkan. Arus diukur pada kisaran
potensial -0.3V +1.,3V dengan laju payaran sebesar 400 mV/s. Setiap
dilakulan pengukuran, elektrode dibilas dengan akuades. Pengukuran
juga dilakukan untuk kontrol positif, yaitu vitamin C.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Penentuan kadar air bertujuan menentukan jumlah air pada sampel
tanaman sehingga diketahui cara penyimpanannya yang terbaik agar
tidak tejadi kerusakan sampel akibat mikrob (Harjadi 1993). Selain
itu, kadar air bertujuan menentukan rendemen suatu ekstrak. Kadar
air pada daun teh hijau diperoleh sebesar 8.62% (Lampiran 2). Kadar
air menurut literatur sekitar 410% (Ikeda et al. 2003). Hal ini
menunjukkan kadar air dalam daun teh hijau sangat bervariasi
bergantung pada proses pengeringan dan penyimpanan.
Sampel yang baik disimpan dalam jangka panjang adalah yang
memiliki kadar air kurang dari 10% (Winarno 1997). Kadar air
-
7
yang diperoleh kurang dari 10% sehingga sampel tersebut memiliki
jangka waktu simpan yang sangat baik dan relatif lama.
Ekstraksi
Serbuk sampel daun teh hijau diekstraksi dengan pelarut metanol
dan aseton. Senyawa polifenol merupakan salah satu senyawa yang
terdapat pada daun teh dan termasuk golongan flavonoid. Flavonoid
merupakan senyawa polar karena mempunyai gugus hidroksil atau suatu
gula sehingga flavonoid larut dalam pelarut polar, seperti metanol
dan aseton.
Metanol dapat melarutkan hampir semua senyawa organik yang
bersifat polar maupun semipolar. Metanol juga mudah menguap
sehingga mudah dibebaskan dari ekstrak. Aseton adalah senyawa
berbentuk cairan yang tidak berwarna dan mudah terbakar. Aseton
larut dalam berbagai nisbah dengan air, etanol, dan dietil eter.
Polaritas aseton yang menengah dapat digunakan untuk melarutkan dan
mengekstraksi berbagai macam senyawa.
Rendemen ekstrak daun teh hijau dalam metanol diperoleh sebesar
16.70% (Lampiran 3) dan dalam aseton sebesar 14.83% (Lampiran 4).
Rendemen ekstrak metanol lebih besar, maka diduga senyawa yang
terdapat pada daun teh hijau memiliki polaritas yang sama dengan
pelarut metanol, seperti epigalokatekin galat (ECGC). Senyawa
polifenol ini kelarutannya sangat besar pada pelarut metanol karena
gugus fenoliknya.
Metode Soxhlet menggunakan efek panas untuk membantu proses
difusi pelarut ke dalam dinding sel. Adanya efek panas menyebabkan
naiknya energi kinetik pelarut dan komponen-komponen dalam tumbuhan
sehingga akan meningkatkan frekuensi tumbukan di antara keduanya.
Tumbukan ini sangat diperlukan terutama dalam mempercepat proses
destruksi dinding sel, difusi pelarut, dan melarutkan
senyawa-senyawa tumbuhan dalam pelarut yang digunakan (Hidayat
2004).
Keuntungan Soxhletasi adalah membutuhkan pelarut yang sedikit
karena penyarian terjadi berulang-ulang dan zat yang tersari di
dalam pelarut lebih banyak. Namun, prosedur Soxhletasi biasanya
hanya dipergunakan untuk bahan penyusun yang relatif aman terhadap
pengaruh pemanasan dan hanya dipergunakan untuk simplisia tumbuhan
yang berjumlah kecil oleh karena keterbatasan daya tampung radas
Soxhlet tersebut.
Ekstrak Aktif
Penentuan ekstrak aktif dilakukan dengan 2 metode, yaitu dengan
metode KLT bioautografi menggunakan DPPH dan metode voltammetri
siklik. Pada KLT bioautografi, sampel ditotolkan ke pelat KLT
kemudian dielusi dengan eluen yang sesuai. Berdasarkan pemilihan
eluen terbaik, didapatkan heksana:etil asetat (2:1). Setelah itu,
dilakukan penyemprotan larutan DPPH dalam metanol 1mM pada pelat
KLT yang telah dielusi.
Larutan DPPH akan menghasilkan warna ungu. Ekstrak yang paling
aktif akan menunjukkan intensitas warna ungu yang paling rendah
(pudar) dan terlihat noda ekstrak sampel tersebut (hilang warna
ungu). Hal ini karena komponen aktif pada ekstrak yang berpotensi
sebagai antioksidan bereaksi dengan DPPH dan mengubah DPPH menjadi
bentuk tereduksinya dengan ditandai hilangnya atau pudarnya warna
ungu pada DPPH. Hasil bioautografi ini menunjukkan bahwa ekstrak
metanol memiliki aktivitas antioksidan lebih besar dibandingkan
denngan ekstrak aseton (Gambar 4).
Gambar 4 Bioautografi aktivitas antioksidan
dengan DPPH ekstrak metanol daun teh hijau (kiri) dan ekstrak
aseton daun teh hijau (kanan) dengan eluen heksana:etil asetat
(2:1).
Metode voltammetri siklik digunakan
untuk menentukan lokasi potensial redoks dari spesies
elektroaktif secara cepat serta menampilkan informasi tentang
spesies yang terlibat pada reaksi oksidasi dan reduksi. Hasil yang
ditampilkan berupa voltammogram. Pengukuran antioksidan pada metode
ini berdasarkan pengukuran daerah anode yang dihasilkan
voltammogram. Anode merupakan daerah terjadinya donor elektron.
Karena itu, semakin besar daerah anode yang dihasilkan, semakin
besar kapasitas antioksidan.
-
8
(a)
(b)
Gambar 5 Voltammogram hasil pengukuran kapasitas antioksidan
ekstrak metanol daun teh hijau + KClO4 dalam bufer pH 7.4 (100,
500, dan 1000 ppm) [a] dan ekstrak aseton daun teh hijau + KClO4
dalam buffer pH 7.4 (100, 500, dan 1000 ppm) [b].
Pengukuran kapasitas antioksidan dengan
metode voltammetri siklik ini menggunakan KClO4 sebagai
oksidator yang akan direduksi oleh senyawa antioksidan yang
terdapat pada daun teh hijau. Pengukuran dilakukan pada ekstrak
metanol dan aseton dengan konsentrasi 100, 500, dan 1000 ppm
(Gambar 5). Hasil pengukuran selengkapnya ditunjukkan pada Lampiran
5.
Terlihat bahwa semakin besar konsentrasi ekstrak, semakin besar
kapasitas antioksidan yang dihasilkan pada daerah anode. Kapasitas
antioksidan terbesar terdapat pada ekstrak metanol. Hal ini
dikarenakan senyawa antioksidan daun teh hijau dalam ekstrak
metanol lebih banyak mendonorkan elektron
pada senyawa KClO4. Radikal bebas pada oksidator yang ada
memerlukan elektron agar stabil. Elektron tersebut terdapat pada
antioksidan yang terdapat pada daun teh hijau. Senyawa-senyawa yang
berpotensi sebagai antioksidan pada daun teh diduga ada yang tidak
larut dalam aseton, seperti kafein sehingga mengurangi aktivitas
antioksidan.
Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
Ekstrak yang paling aktif sebagai
antioksidan difraksionasi lebih lanjut dengan Kromatografi Lapis
Tipis Preparatif (KLTp). Ekstrak yang aktif menurut metode KLT
bioautografi dan metode voltammetri siklik adalah ekstrak
metanol.
Fase gerak yang digunakan untuk KLTp berdasarkan pemilihan eluen
terbaik, ialah heksana:etil asetat (2:1). Sebagai fase diam
digunakan silika gel yang tercetak pada lempengan kaca. Silika gel
merupakan senyawa anhidrat sehingga perlu diaktifkan dalam oven
selama 30 menit sebelum digunakan. Tujuannya adalah agar air yang
terikat secara fisik pada permukaannya dapat lepas. Silika gel
dapat menjerap air sebanyak 3.5% bobot keringnya dalam kelembapan
sekitar 4050%.
Silika gel bersifat polar sehingga akan mengikat senyawa yang
bersifat polar juga. Senyawa yang bersifat polar akan cepat
bergerak jika menggunakan pelarut yang polar begitu juga sebaliknya
(Harvey 2000). Noda yang terbentuk diamati di bawah lampu UV pada
panjang gelombang 254 dan 366 nm. Dihasilkan 10 fraksi (Gambar 6)
dengan RRf yang ditunjukkan pada Lampiran 6. Semua fraksi yang
diperoleh diuji aktivitas antioksidannya.
Gambar 6 Hasil pemisahan ekstrak metanol
daun teh hijau menggunakan KLTp (Fraksi 1-10 dari bawah ke
atas).
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-30
-25
-20
-15
-10
-5
0
5
10
15
20
25
Aru
s (A
)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Ekstrak metanol 100 ppm Ekstrak metanol 500 ppm Ekstrak metanol
1000 ppm
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-30
-25
-20
-15
-10
-5
0
5
10
15
20
25
30
Aru
s (A
)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Ekstrak aseton 100 ppm Ekstrak aseton 500 ppm Ekstrak aseton
1000 ppm
-
9
PenentuAntiok
Pengujia
DPPH dilakKLT bspektrofotombioautografidisemprot Terlihat
bahantioksidan (Gambar menunjukkaungu DPPH
Gambar 7
Larutan
yang dominmembuat dihasilkan terlihat pada2, 3, dan aktivitas
antmetode spefraksi terakRadikal bebabsorpsi dalgelombang m
Penentuaantioksidan didasarkan persentase antioksidan Fraksi 2
antioksidan 8).
Senyawasenyawa anbentuk DPPakan semakserapan padPada uji
uan Fraksi Teksidan dengan
an antioksidakukan dengan bioautografi metri. Padai, fraksi yang
dengan larut
hwa 3 fraksi mterbaik, yait7). Frak
an berkurangnH.
1
2
3
4 5
7 6
9 8
10
KLT bioaudengan DPfraksi KLTp
DPPH memnan. Adanya intensitas wberkurang at
a noda yang d8. Ketiga f
tioksidannya dektrofotometriktif dari ketbas DPPH 0.0lam pelarut
mmaksimum 51an fraksi
dengan mpada persenyang menggdalam menan
didapati terbesar, yait
a DPPH dittioksidan don
PH tereduksi. kin pudar dada panjang gfraksi terak
eraktif Aktivn Metode DPP
an dengan 2 cara, yaitu
dan a metode diperoleh dartan DPPH
menunjukkan atu fraksi 2,3,ksi-fraksi nya intensitas
utografi fraksiPPH (kiri) dap (kanan).
mpunyai warnsenyawa anti
warna ungutau pudar. H
dihasilkan padfraksi tersebudengan menggi untuk mentiga fraksi
t05 mM memilmetanol pada p15 nm (Lampi
teraktif smetode DPPntase inhibisigambarkan angkap
radikalmemiliki a
tu 74.78% (La
tangkap olehnor hidrogen m
Warna larutaan diikuti pengelombang 5
ktif dengan
vitas PH
metode dengan metode
KLT ri KLTp 1 mM. aktivitas , dan 8 tersebut s warna
i KLTp an hasil
na ungu ioksidan
u yang Hal ini
da fraksi ut diuji gunakan ngetahui tersebut. liki pita panjang
iran 7). senyawa PH ini i, yaitu aktivitas l bebas. aktivitas
ampiran
h suatu menjadi an ungu nurunan 15 nm. DPPH,
penangkapan memantau pekarena redukserapan yaninhibisi semabahwa
aktiviseperti yang d
Teh hijausenyawa feflavandiol, fSenyawa fenkatekin (Hartersebut
beContohnya, r(Gambar 8).flavonoid meRadikal arimengalami rhidrogen
kedPembentukandengan DPstruktur momenggambarkmempunyai sal.
2009).
Gambar 8
Kontrol p
asam askorbkerja menangterjadinya reSoedibyo 19komponen
alpereduksi. M2 radikal DP
radikal enurunan absoksi oleh radikng diperoleh,akin besar.
Hitas antioksiddiperoleh pada
u mengandungenol, antaraflavonoid, dnol utama rtoyo 2003).
erperan sebreaksi flavon
Atom hidroreduksi radikail dari seesonansi dandua ke radikn
kompleks sePH bergantunlekulnya. Mkan bahwa sesifat yang rel
Mekanismeflavonoid (Jiang et al
positif yang at atau vitam
gkap radikal beaksi beranta98). Asam a
lami yang meMolekul asam PPH melalui 2
diikuti dorbansi yang kal. Semakin maka pers
Hal ini menandan semakin a fraksi 2.
g tanin dan bea lain fladan asam fedalam teh
Senyawa-sebagai antioknoid dengan ogen dari seal bebas dari
Denyawa flav
n memberikankal DPPH laenyawa antiong pada kest
Mekanisme teenyawa antiolatif stabil (Ji
e reaksi sedengan
l. 2009).
digunakan min C denganbebas dan menai (Dalimarthaskorbat
meruemiliki sifat saskorbat mer
2 atom hidrog
dengan terjadi
n kecil sentase ndakan
besar,
erbagai avanol, fenolat. adalah
enyawa ksidan. DPPH
enyawa DPPH. vonoid n atom ainnya. ksidan tabilan ersebut
ksidan
iang et
enyawa DPPH
adalah n cara ncegah
ha dan upakan sebagai reduksi gennya
-
10
sehingga membentuk DPPH nonradikal. Senyawa ini mampu memberikan
atom hidrogennya kepada radikal bebas sehingga aktivitasnya dapat
diukur dengan metode DPPH. Asam askorbat dapat menangkap radikal
bebas dan mampu mencegah terjadinya reaksi berantai.
Gambar 9 Kurva kalibrasi asam askorbat
dengan DPPH 0.05 mM.
Kurva kalibrasi asam askorbat yang dihasilkan mempunyai
persamaan regresi linear y = 1.934 + 12.71x dengan R2 = 0.980
(Gambar 9). Nilai R2 menggambarkan korelasi antara konsentrasi
analit dan sinyal analit. Korelasi yang memenuhi persyaratan adalah
0.9972, sedangkan secara ilmu statistika nilai 0.80 masih
menunjukkan korelasi yang cukup bagus (ICH 1995). Nilai R2 pada
percobaan menunjukkan korelasi yang cukup bagus antara konsentrasi
asam askorbat dengan % inhibisi. Fraksi teraktif daun teh hijau 100
ppm berdasarkan DPPH setara dengan 5.7 ppm asam askorbat. Jadi,
aktivitas antioksidan asam askorbat masih lebih besar.
Penentuan Kapasitas Antioksidan Menggunakan Voltammetri
Siklik
Pengukuran kapasitas antoksidan dengan
menggunakan voltammetri siklik didasarkan pada perpindahan
elektron bebas pada daerah anode. Daerah tersebut adalah tempat
terjadinya pendonoran elektron. Pada pengukuran, potensial
diberikan pada contoh melalui elektrode konduktif (elektrode kerja)
yang dicelupkan ke dalam sampel. Potensial yang berfungsi sebagai
gaya dorong dipayar sepanjang potensial tertentu yang dikehendaki.
Kisaran potensial yang diukur untuk menentukan kapasitas
antioksidan ekstrak teh hijau sebesar -0.3 +1.3 V.
Metode pengukuran menggunakan 3 elektrode, yaitu elektrode pasta
karbon sebagai elektrode kerja, elektrode Ag/AgCl sebagai elektrode
pembanding, dan elektrode
platina (Pt) sebagai elektrode pembantu. Elektrode kerja adalah
tempat terjadinya reduksi atau oksidasi analit, elektrode
pembanding adalah elektrode dengan potensial tetap, dan elektrode
pembantu adalah elektrode untuk melengkapi sirkuit agar arus
mengalir.
Hanya senyawa aktif yang akan memberikan puncak pada
voltammogram di daerah anoda (Gambar 10a), sedangkan senyawa yang
tidak aktif tidak memberikan puncak pada voltammogram (Gambar 10b).
Voltammogram semua fraksi sebanyak 3 kali ulangan terdapat pada
Lampiran 9. Semakin besar daerah anode, maka semakin besar
kapasitas antioksidan senyawa tersebut. Fraksi 2 merupakan fraksi
teraktif karena memilki kapasitas antioksidan terbesar, yaitu
2.2710 A.s (Lampiran 10). Hasil tersebut sama dengan metode DPPH,
yaitu fraksi 2 merupakan fraksi teraktif.
(a)
(b)
Gambar 10 Voltammogram fraksi 1 sampai 5 (a) dan fraksi 6 sampai
10 (b).
y =12.71x +1.934R=0.980
020406080100
0 5
%In
hibisi
Konsentrasi(ppm)
10
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
1.4-24-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468
101214
Aktif Ar
us (
A)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Buffer pH 7.4 Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Fraksi 5
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
1.4-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468
1012 Tidak aktif
Arus
(A)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Buffer pH 7.4 Fraksi 6 Fraksi 7 Fraksi 8 Fraksi 9 Fraksi 10
-
11
Pengukuran antioksidan dengan metode voltammetri siklik
dilakukan sebanyak 3 kali ulangan. Hasil voltammogram dari 3 kali
ulangan tersebut memberikan pola yang hampir sama (Gambar 11). Hal
tersebut menunjukkan keterulangan yang baik.
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4
-35
-30
-25
-20
-15
-10
-5
0
5
10
15
20
25
30
Arus
(A
)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Asam askorbat 60 ppm Asam askorbat 70 ppm Asam askorbat 80 ppm
Asam askorbat 90 ppm
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-20
-15
-10
-5
0
5
10
Arus
(A
)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Fraksi 2 (1)+KClO4 Fraksi 2 (2)+KClO4 Fraksi 2 (3)+KClO4
Gambar 12 Voltammogram asam askorbat.
Kurva kalibrasi asam askorbat yang dihasilkan mempunyai
persamaan regresi linier y = 0.049x 1.202 dengan R2 = 0.997 (Gambar
13). Nilai R2 menggambarkan korelasi antara konsentrasi analat
dengan sinyal analat. Korelasi yang memenuhi persyaratan adalah
0.9972, sedangkan secara ilmu statistika nilai 0.80 masih
menunjukkan korelasi yang cukup bagus (ICH 1995). Nilai R2 pada
percobaan menunjukkan korelasi yang cukup bagus antara konsentrasi
asam askorbat dengan daerah anoda. Fraksi teraktif daun teh hijau
100 ppm berdasarkan voltammetri siklik setara dengan asam askorbat
konsentrasi 70.87 ppm. Oleh karena itu, kapasitas antioksidan asam
askorbat lebih besar.
Gambar 11 Voltammogram fraksi 2 hasil
KLTP.
Senyawa antioksidan yang terdapat pada fraksi 2 bereaksi dengan
KClO4 yang dilarutkan pada bufer pH 7.4. Fungsi bufer sebagai
elektrolit pendukung, yaitu garam yang ditambahkan dalam jumlah
berlebih ke dalam larutan analit untuk mengurangi efek migrasi dan
menurunkan tahanan larutan. KClO4 sebagai oksidator kuat yang
sangat membahayakan tubuh akan direduksi oleh suatu senyawa
antioksidan yang terkandung di dalam daun teh hijau. Senyawa
antioksidan tersebut akan mendonorkan elektron ke KClO4. Terjadinya
donor elekron dapat menyebabkan peningkatan pH. Oleh karena itu,
diperlukan bufer pH 7.4 untuk mempertahankan pH selain sebagai
larutan elektrolit pendukung.
Kontrol positif yang digunakan pada pengukuran kapasitas
antioksidan daun teh hijau dengan menggunakan metode voltammetri
siklik adalah asam askorbat. Senyawa ini berperan sebagai pengikat
oksigen sehingga tidak mendukung reaksi oksidasi. Dalam hal ini,
senyawa tersebut akan mengadakan reaksi dengan oksigen yang berada
dalam sistem sehingga jumlah oksigen akan berkurang.
y =0.049x 1.202R=0.997
0
2
4
50 70 90Daerahan
oda
(A.s)
Konsentrasi(ppm)
Gambar 13 Kurva kalibrasi asam askorbat.
Hasil voltammetri siklik diperoleh fraksi teraktif, yaitu fraksi
2. Hal ini sama dengan hasil yang diperoleh dengan menggunakan
metode DPPH. Oleh karena itu, metode voltammetri siklik ini dapat
menggantikan metode DPPH. Metode voltammetri siklik ini lebih
murah, sederhana, dan cepat dibandingkan metode DPPH. Metode DPPH
hanya dapat melihat aktivitas antioksidan dari persentase inhibisi,
sedangkan metode voltammetri siklik dapat dilihat dari tiga
parameter, yaitu daerah anode, arus, dan potensial.
Asam askorbat akan mereduksi KClO4 dengan cara mendonorkan
elektronnya sehingga radikal bebas pada senyawa KClO4 akan stabil
(Gambar 12). Semakin besar konsentrasi asam askorbat, maka semakin
besar kapasitas antioksidan karena banyaknya elektron yang
didonorkan pada daerah anode (Lampiran 12).
-
Uji Fitokimia
Uji fitokimia adalah uji kualitatif untuk mengetahui kandungan
senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak tanaman.
Ekstrak kasar metanol dan aseton memiliki kandungan metabolit
sekunder yang sama, yaitu flavonoid, alkaloid, saponin, tanin, dan
steroid. Pada fraksi teraktif terdapat senyawa metabolit sekunder
berupa flavonoid dan tanin.
Tabel 1 Uji fitokimia ekstrak daun teh hijau
dan fraksi teraktif
Komponen Ekstrak Ekstrak Fraksi teraktif
metanol aseton Metanol Flavonoid + + + Saponin + + - Tanin + + +
Alkaloid + + - Triterpenoid - - - Steroid + + -
Keterangan: (+) terdeteksi, (-) tidak terdeteksi
Teh hijau mengandung tanin dan berbagai senyawa polifenol,
termasuk flavanol, flavandiol, flavonoid, dan asam fenolat. Senyawa
polifenol utama dalam ini adalah katekin. Senyawa katekin dalam ini
terdiri dari epikatekin, epigalokatekin, epikatekin galat, dan
epigalokatekin galat (Hartoyo 2003). Senyawa ini berfungsi sebagai
antioksidan untuk menangkap radikal bebas dalam tubuh juga ampuh
mencegah berkembangnya sel kanker dalam tubuh. Berdasarkan hasil
uji fitokimia terbukti bahwa ekstrak teraktif daun teh hijau
mengandung flavonoid dan tanin.
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Ekstrak metanol daun teh hijau lebih tinggi aktivitas
antioksidannya dibandingkan dengan ekstrak aseton. Fraksionasi
ekstrak metanol menghasilkan 10 fraksi. Diantara 10 fraksi, fraksi
2; 3; dan 8 memiliki aktivitas antioksidan lebih tinggi
dibandingkan fraksi lain. Fraksi 2 yang merupakan fraksi teraktif
menunjukkan aktivitas antioksidan sebesar 74.78% berdasarkan metode
DPPH dan 2.2710 A.s berdasarkan metode voltammetri siklik. Urutan
ketiga fraksi, yaitu fraksi 2 diikuti fraksi 8 dan yang terndah
fraksi 3. Urutan tersebut diperoleh berdasarkan metode DPPH dan
voltammetri siklik. Oleh karena
itu, metode voltammetri siklik dapat menggantikan metode
DPPH.
Saran
Analisis lanjut diperlukan penentuan
kapasitas antioksidan berdasarkan arus dan potensial maksimum
pada voltammetri siklik.
DAFTAR PUSTAKA
Adnan M. 1997. Teknik Kromatografi untuk
Analisis Bahan Makanan. Yogyakarta: Andi Yogyakarta.
[AOAC] The Association of Official
Analytical Chemist. 2006. Official Methods of Analysis. Ed
ke-18. Washington DC: Association of Official Analytical
Chemist.
Belitz HD and Grosch W. 1999. Food
Chemistry 2 Th. Jerman: Springer. Caldwell CR. 2001. Oxygen
radical
absorbance capacity of the phenolic compounds in plant extracts
fractioned by high- performance liquid chromatography. Anal Biochem
293:232-238.
Campanella L, Martini E, Rita G, Tomasseti
M. 2006. Antioxidant capacity of dry extracts checked by
voltammetric method. J Food Agric Environ 4:135-144.
Christian GD. 1986. Analytical Chemistry. Ed
ke-4. USA: John Willey & Sons. Dalimartha S, Soedibyo M.
1998. Awet Muda
Dengan Tumbuhan Obat dan Diet Suplemen. Jakarta: Trubus
Agriwidya.
Furniss BS, Hannaford AJ, Smith PWG,
Tatchell AR, Vogel AI. 1989. Vogels Textbook of Practical
Organic Chemistry 4th. New York: Willey & Sons.
Hanani E, Abdul M, Ryany S. 2005.
Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam Spons Callyspongia sp
dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian 2: 127-133.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.
Padmawinata K, Sudiro I, penerjemah. Bandung: Institut Teknologi
Bandung. Terjemahan dari: Phytochemical Methods.
-
13
Harjadi W. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar. Jakarta:
Gramedia.
Hartoyo A. 2003. Teh dan Khasiatnya bagi
Kesehatan. Yogyakarta: Kanisius. Harvey D. 2000. Modern
Analytical
Chemistry. New York: McGraw-Hill. Hidayat MG. 2004. Perbandingan
metode
ekstraksi flavonoid dan terpenoid dari sidaguri serta daya
inhibisi ekstrak terhadap aktivitas xantin oksidase. [Skripsi].
Bogor: Institut Pertanian Bogor.
[ICH] International conference on
Harmonization 1995. Validation of Analytical Procedures:
Methodology Q2B [terhubung berkala]. www.ich.org [12 Januari
2011].
Ikeda I et al. 2003. Heat epimerized tea
catechin rich in gallocatechin gallate and catechin gallate are
more effective to inhibit cholesterol absorption than tea catechin
rich in epigallocatechin gallate and epicatechin gallate. J Agric
Food Chem 51:7303-7307.
Ionita P. 2003. Is DPPH Stable Free Radical a
Good Scavenger for Oxygen Active Species?. J Chem 59:11-16.
Javanmardi J, Stushnoff C, Locke E, Vivanco
JM. 2003. Antioxidant activity and total phenolic content of
iranian ocimum accessions. J Agric Food Chem 83:547-550.
Jiang X, Chen X, Wei Y. 2009. Free Radical
Scavenging Activity and Flavonoids Contents of Polygonum
orientale Leaf, Stem and Seed Extracts. Latin Am J Pharm
28:284-287.
Khopkar SM. 2002. Konsep Dasar Kimia
Analitik. Saptorahardjo, penerjemah. Jakarta: UI Press.
Terjemahan dari: Basic Concept of Analytical Chemistry.
Kikuzaki H, Nakatani N. 1993. Antioxidant
effects of some ginger constituents. J Food Sci
58:1407-1410.
Konishi Y, Kobayashi S, Shimizu M. 2003.
Tea polyphenols inhibit tea transport of dietary phenolic acid
mediated by tea monocarboxylic acid transporter (MCT) in
intestinal caco-2 cell monolayers. J Agric Food Chem
51:7296-7302.
Molyneux. P. 2004. The use of the stabil free
radical diphenylpicrilhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant
activity. J Sci Tech 26:211-219.
Mosquera OM, Correa YM, Buitrago DC,
Nino J. 2007. Antioxidant activity of twenty five plants from
Colombian biodiversity. Mem Inst Oswaldo Cruz 102 (5): 631-634.
Prakasih A. 2001. Antioxidant activity.
Medallion Laboratories Analytical Progress 19 (2).
Prior RL, Wu X, Schaich K. 2005.
Standardized method for the determination of antioxidant
capacity and phenolics in food and dietary supplements. J Agric
Food Chem 55:2698 A-J.
Rouessac F, Rouessac A. 1994. Chemical
Analysis Modern Instrumentation Methods and Techniques 2nd. USA:
John Willey & Sons.
Skoog DA, West DM, Holler FJ. 1998.
Fundamentals of Analytical Chemistry. Ed ke-7. Orlando: Sounders
College.
Suzuki M et al. 2003.. Epimerization of tea
catechin and o-methylated derivatives of
(-)-epigallocatechin-3-o-gallate: relationship between
epimerization and chemical structure. J Agric Food Chem
51:510-514.
Wang J. 1994. Analytical Electrochemistry.
New York: VCH. Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi.
Jakarta: Gramedia.
-
LAMPIRAN
-
15
Lampiran 1 Diagram alir penelitian
Sokhletasi dengan aseton
Ekstrak metanol
Ekstrak aseton
Uji Fitokimia
Fraksi teraktif
Pemilihan eluen terbaik dengan KLT
Fraksinasi dengan KLTp
Uji kapasitas antioksidan
Eluen terbaik
Serbuk daun teh hijau
Uji antioksidan
Sokhletasi dengan metanol
Uji fitokimia
-
16
Lampiran 2 Penentuan kadar air daun teh hijau
Ulangan Bobot cawan
Bobot sampel
Bobot cawan+sampel kering
Kadar air
kosong (g) (g) (g) (% b/b) 1 1.9051 3.0006 4.6479 8.59 2 1.9313
3.0009 4.6742 8.60 3 1.9258 3.0008 4.6661 8.68
Rerata 8.62 Contoh perhitungan ulangan 1: Bobot sampel (Bobot
cawan+sampel kering) Bobot cawan kosong Kadar air = 100% Bobot
sampel 3.0006 gram (4.6479 1.0951)gram = 100% 3.0006 gram 0.2578
gram = 3.0006 gram = 8.59%
-
17
Lampiran 3 Penentuan rendemen ekstrak kasar daun teh hijau dalam
metanol
Ulangan Bobot sampel Bobot ekstrak Faktor Rendemen
(g) (g) koreksi (% b/b) 1 40.162 5.1750 1.0862 14.00 2 40.117
7.1671 1.0862 19.40
Rerata 16.70 Contoh perhitungan rendemen ulangan 1: 100 + kadar
air Faktor koreksi = 100 100 + 8.62 = 100 = 1,0862 Bobot ekstrak
Rendemen = fk 100% Bobot sampel 5.1750 gram = fk 100% 40.1620 gram
= 14.00%
-
18
Lampiran 4 Penentuan rendemen ekstrak kasar daun teh hijau dalam
aseton
Ulangan Bobot sampel Bobot ekstrak Faktor Rendemen
(g) (g) koreksi (% b/b) 1 40.0103 4.5750 1.0862 12.42 2 40.0193
6.3510 1.0862 17.24
Rerata 14.83 Contoh perhitungan rendemen ulangan 1: 100 + kadar
air Faktor koreksi = 100 100 + 8.62 = 100 = 1,0862 Bobot ekstrak
Rendemen = fk 100% Bobot sampel 4.5750 gram = fk 100% 40.0103 gram
= 12.42%
-
19
Lampiran 5 Pengukuran kapasitas antioksidan ekstrak kasar daun
teh hijau dengan metode voltammetri siklik
Ekstrak Konsentrasi Ulangan Daerah anode Rerata daerah anode
(ppm) (A.s) (A.s) Metanol 1 2.321
100 2 2.320 2.319 3 2.317
1 5.420500 2 5.079 5.329
3 5.488
1 7.0871000 2 7.194 7.059
3 6.896
Aseton 1 1.858 100 2 1.733 1.772
3 1.724
1 4.598500 2 4.346 4.492
3 4.533
1 5.2661000 2 5.010 5.138
3 5.139
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-30
-25
-20
-15
-10
-5
0
5
10
15
20
25
Aru
s (
A)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Ekstrak metanol 100ppm (1) Ekstrak metanol 100ppm (2) Ekstrak
metanol 100ppm (3) Ekstrak metanol 500ppm (1) Ekstrak metanol
500ppm (2) Ekstrak metanol 500ppm (3) Ekstrak metanol 1000ppm (1)
Ekstrak metanol 1000ppm (2) Ekstrak metanol 1000ppm (3)
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-30
-25
-20
-15
-10
-5
0
5
10
15
20
25
30
Aru
s (
A)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Ekstrak aseton 100 ppm (1) Ekstrak aseton 100 ppm (2) Ekstrak
aseton 100 ppm (3) Ekstrak aseton 500 ppm (1) Ekstrak aseton 500
ppm (2) Ekstrak aseton 500 ppm (3) Ekstrak aseton 1000 ppm (1)
Ekstrak aseton 1000 ppm (2) Ekstrak aseton 1000 ppm (3)
-
20
Lampiran 6 Hasil pemisahan fraksi KLT preparatif
Fraksi
Jarak spot dari Jarak tempuh eluen Rf garis awal (cm) dari garis
awal (cm)
1 0.3 18 0.02 2 0.8 18 0.04 3 5.4 18 0.3 4 8 18 0.44 5 10.3 18
0.57 6 11.5 18 0.64 7 13 18 0.72 8 14.3 18 0.79 9 15.4 18 0.85 10
16.7 18 0.93
-
21
ampiran 7 Penentuan panjang gelombang maksimum DPPH 0.05 mM
dalam metanol
Panjang gelombang (nm) Absorbansi
Panjang gelombang (nm) Absorbansi
L
415 0.213 479 0.456 417 0.214 481 0.473 419 0.216 483 0.489 421
0.219 484 0.497 423 0.221 485 0.505 425 0.224 487 0.522 427 0.227
489 0.539 429 0.230 491 0.556 431 0.233 493 0.574 433 0.237 495
0.591 435 0.240 497 0.606 437 0.244 499 0.622 439 0.249 501 0.636
441 0.253 503 0.650 443 0.258 505 0.661 445 0.263 507 0.671 447
0.270 509 0.679 449 0.276 511 0.685 451 0.284 513 0.689 453 0.292
515 0.690 455 0.300 517 0.688 457 0.310 519 0.687 459 0.320 521
0.682 461 0.330 523 0.676 463 0.342 525 0.667 465 0.354 528
0.651
469 0.381 533 0.619 471 0.395 535 0.605
0.410 0.589
467 0.367 531 0.633
473 475
537 539 0.425 0.574
477 0.440 541 0.560
-
22
Lampiran 8 Penentuan aktivitas antioksidan ekstrak metanol daun
teh hijau dengan metode DPPH
Fraksi entrasi m) UlaAbsorbansi
i
Rerata Kons(pp ngan
% inhibisEkstrak Ekstrak+DPPH % inhibisi
2 100 0.059 .233 74.78
1 0 74.78 0.063 3 100 0.001 .245 64.56
2 0.237 74.78 1 0 64.64 2 0.002 .247
8 100 0.021 .235 68.83
0 64.49 1 0 68.98
0.023 Blanko .690
2 0.239 68.69 0
Contoh perhitungan: A blanko [(A ekstrak+DPPH) trak tanpa D%
Inhibis 100% A blanko .690 [0.23 59] = 100% 0.690
= 74.78 %
eks PPH] i =
0 3 0.0
-
23
raksi KLTp )
gan 3
(a)
(c)
Lampiran 9 Hasil voltammogram pengukuran kapasitas antioksidan
fekstrak metanol daun teh hijau + KClO4 dalam bufer pH 7.4
(aulangan 1, (b) ulangan 2, (c) ulan
1214
(b)
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
1.4-24-22-20-18-16-14-12-10
-8-6-4-202468
10
Aru
s (A
)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Buffer Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Fraksi 5
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
1.4-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468
1012
Arus
(A)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Buffer pH 7.4 Fraksi 6 Fraksi 7 Fraksi 8 Fraksi 9 Fraksi 10
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
1.4-24-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468
101214
Aru
s (
A)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Buffer pH 7.4 Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Frkais 5
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
1.4-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468
1012
Aru
s (A
)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Buffer pH 7.4 Fraksi 6 Fraksi 7 Fraksi 8 Fraksi 9 Fraksi 10
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
1.4-24-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468
101214
Arus
(A
)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Buffer pH 7.4 Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Fraksi 5
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
1.4-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468
1012
Arus
(A)
Potensial vs Ag/AgCl (volt)
Buffer Fraksi 6 Fraksi 7 Fraksi 8 Fraksi 9 Fraksi 10
-
24
Lampiran 10 Pengukuran kapasitas antioksidan fraksi KLTp ekstrak
metanol daun teh hijau dengan metode voltammetri siklik
Fraksi Ulangan Konsentrasi Daerah anoda Rerata daerah
anode (ppm) (A.s) (A.s) 1 1 100 0.1662
2 100 0.1672 0.1668 3 100 0.1670 2 1 100 2.5100
2 100 2.1650 2.2710 3 100 2.1380 3 1 100 0.7156
2 100 0.7087 0.7107 3 100 0.7078 4 1 100 0.4390
2 100 0.4409 0.4352 3 100 0.4257 5 1 100 -
2 100 - - 3 100 - 6 1 100 -
2 100 - - 3 100 - 7 1 100 0.6699
2 100 0.6646 0.6562 3 100 42 8 1 100 2.4550
0.63
2 100 2.1090 2.2233 3 100 2.1060 9 1 100 0.3719
2 100 0.3718 0.3722 3 100 0.3729
10 1 100 - 2 100 - -
3 100 -
-
25
Lampiran 11 Penentuan aktivitas antioksidan vitamin C dengan
metode DPPH
Konsentrasi Absorbansi
% inhibisi (ppm) Blanko 0.690 -
2 0.518 24.93 3 0.411 40.43 4 0.303 56.09 5 0.224 67.53 6 0.173
74.93
Contoh perhitungan: A blanko A sampel % Inhibisi = 100% A blanko
0.690 0.518 = 100% 0.690 = 24.93%
Lampiran 12 Pengukuran kapasitas antioksidan asam askorbat
dengan metode
voltammetri siklik
Konsentrasi Daerah anode
(ppm) (A.s) 60 1.758 70 2.218 80 2.678 90 3.238
CoverAbstrak dan AbstractHalaman JudulLembar
PengesahanPrakataRiwayat HidupDaftar IsiDaftar GambarDaftar
LampiranPendahuluan dan Tinjauan PustakaBahan dan MetodeHasil dan
PembahasanKesimpulan, Saran dan Daftar Pustaka Lampiran