UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD FARMACIA Y BIOQUMICA
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICA
CARACTERSTICAS FISICOQUMICAS DEL ACEITE ESENCIAL DE LAS HOJAS DE Peperomia dolabriformis Kunth congona de zorro Y SU EFECTO SOBRE LEON AISLADO DE Cavia porcellus.PROYECTO DE INVESTIGACIN
TESIS II
PARA OPTAR EL GRADO ACADMICO DE:
BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUMICA
AUTORES:
Castro Alvarado, Jhanelly Liliana
Estupian Santilln, Manuel ngel
ASESOR:
Msc. Q.F. Maril Soto Rojas. Co-ASESOR:
Mg. Q.F. Ivan Quispe Diaz.
TRUJILLO PER
2015
INDICE
I. GENERALIDADES1. Ttulo...Pg.22. Personal investigador...Pg.2
3. Tipo de Investigacin.Pg.3
4. Rgimen de la Investigacin..Pg.3
5. Lugar de Ejecucin.....Pg.36. Cronograma de Ejecucin.....Pg.3
7. Presupuesto....Pg.5
Recursos disponibles...Pg.5 Recursos no Disponibles ..Pg.98. Financiacin....Pg.13II. PLAN DE INVESTIGACIN
1. Realidad problemtica.....Pg.142. Justificacin........Pg.203. Problema...Pg.204. Hiptesis.......Pg.205. Objetivos.......Pg.206. Metodologa de Trabajo.............................Pg.257. Anlisis Estadstico...........Pg.348. Referencias Bibliogrficas.........................Pg.35PROYECTO DE TESIS III. GENERALIDADES1. TITULO:Caractersticas fisicoqumicas del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth congona de zorro y su efecto sobre leon aislado de Cavia porcellus.2. PERSONAL INVESTIGADOR:
2.1 AUTORES: Castro Alvarado, Jhanelly LilianaEstudiante de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo.
Nmero de matrcula: 011101508 Estupian Santilln, Manuel ngelEstudiante de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo.
Nmero de matrcula: 0511010092.2 ASESOR:
Dra. Q.F. Maril Soto VSQUEZDocente Asociada de la ctedra de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo.2.3 CO-ASESOR:
Mg. Q.F. IVN QUISPE DIAZDocente de la Ctedra de Farmacologa de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo.3. TIPO DE INVESTIGACION:
3.1 De acuerdo a la orientacin:
Bsica3.2 De acuerdo a la tcnica de contrastacin:
Experimental4. REGIMEN DE LA INVESTIGACION: Libre5. DEPARTAMENTO Y SECCIN A LA QUE PERTENECE EL PROYECTO:
5.1. DEPARTAMENTO: Bioqumica5.2: SECCIN: Farmacognosia y Farmacologa6. LOCALIDAD E INSTITUCION EN LA QUE SE DESARROLLARA EL PROYECTO:
6.1 Localidad:
Departamento de La Libertad - Trujillo
6.2 Institucin:
Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo.7. CRONOGRAMA DE EJECUCION DEL PROYECTO:
ETAPASDURACION (semanas)
Recoleccin de datos3
Anlisis de resultados2
Redaccin del informe3
Total8
8. FECHAS DE INICIO Y TERMINO:
Supeditadas a la aprobacin del proyecto
9. HORAS SEMANALES DEDICADAS AL PROYECTO:Autores: 8 horas
Asesor: 4 horas10. RECURSOS DISPONIBLES:
10.1 Personal investigador: Jhanelly Liliana, Castro Alvarado (investigador 1) Manuel ngel, Estupian Santilln (investigador 2) Dra. Q.F. Maril Soto Vsquez (Asesor) Mg.. Q.F. Ivn Quispe Daz.( Co-asesor)
10.2 Materiales y equipos:
10.2.1 Material Botnico:
10 kg de Peperomia dolabriformis Kunth10.2.2 Material Biolgico:
8 especies de Cavia porcellus10.2.3 Equipos de Laboratorio:
-Cmaras de bao de rgano aislado de 25 mL, Panlab ML1110.
-Termostato, Panlab serie 0505482, V230, A4.1, W 960, Hz 50.
-Tanque de agua de 32X19X60 cm, plexiglas(60C max), vol 8 L.
-Transductor de fuerza isomtrica o isotnica, AD instruments, rango 10mg-25g resolucin +/- 5mg, MLT0210.
-Bridge pod, AD instruments, ML 301.
-Powerlab 26 T, AD instruments, V 100, mA20, ML 856.
-Bomba de oxigeno, Gong Yang Bang, HP 100.
-Estufa elctrica Memmert
-Balanza analtica Sartorius
-Equipo material de diseccin.
-Equipo Clebenger extraccin de aceites voltiles.
10.2.4 Materiales de Laboratorio:
Material de vidrio y porcelana:
-Mortero y piln
-Pipetas 1 y 5 mL.
-Vasos de precipitacin de 50 y 100 mL.
-Fiolas de 500 y 1000 L10.2.5 Reactivos:
-Cloruro de calcio, Merck
-Bicarbonato de sodio, Merck
-Glucosa anhidra, Merck
-Cloruro de sodio, Merck
-Cloruro de potasio, Merck
-Cloruro de magnesio, Merck
-Fosfato monobsico de sodio, Merck
-Hidrogeno fosfato de dipotasio, Merck
-Agua destilada
-Acetilcolina10.2.6 Medicamentos:
-N- butil bromuro de Hioscina.10.2.7 Material quirrgico:
-Pinzas mosquito curvas, Halstead.
-Tijeras rectas, Mayo.
-Pinza de diseccin recta.10.2.8 Otros:
-Jeringas de 1 cc,
-Viales de 5 cc, color mbar.
-Algodn hidroflico.
-Termmetro,
-Placas petri.
-Papel filtro Whatman #1-Cocina elctrica.
-Frascos color mbar10.3 Locales:
Laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo, Departamento de la Libertad.
Laboratorio de Farmacologa de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo, Departamento de la Libertad.11. RECURSOS NO DISPONIBLES Y PRESUPUESTO:Presupuesto de acuerdo al clasificador de gastos para el ao 2015CODIGODESCRIPCINCANTIDADPRECIOTOTAL
UNITARIO
2.3BIENES Y SERVICIOS
2.3.1 10.1SUMINISTROS PARA USO AGROPECUARIO, FORESTAL Y
VETERINARIO
2.3.1 10.12MATERIAL BIOLGICO
Hojas de Peperomia dolabriformis1 kg 10.00 10.00
"congona de zorro"
"Cavia porcellus"8 especmenes 15.00 120.00
2.3.1 1.11ALIMENTOS Y BEBIDAS PARA CONSUMO HUMANO
Bebidas (Agua)2 personas 1.50 30.00
Almuerzos2 personas 5.00 200.00
2.3.15.1MATERIAL Y TILES DE OFICINA
2.3.15.1 2PAPELERA EN GENERAL, TILES Y MATERIALES DE OFICINA
Bolgrafo4 0.50 2.00
papel Bond A41 millar 23.00
Resaltador2 2.50 5.00
Corrector1 2.50 2.50
Borrador2 1.00 2.00
Cinta adhesiva2 1.00 2.00
Tijeras1 4.00 4.00
Engrapador1 10.00 10.00
Etiquetas1 paquete 4.00
Grapas1 paquete 5.00
Flder5 0.50 2.50
Regla1 1.00 1.00
Plumones tinta indeleble2 3.00 6.00
2.3.15.3.1ASEO, LIMPIEZA Y TOCADOR
Leja2 2.00 4.00
Detergente2 kg. 10.00
Papel toalla x 21 paquete 8.00
Toalla2 2.00 4.00
Franela2 2.00 4.00
Jabn y jaboncillo2 1.50 3.00
Bolsas de plstico1 paquete 1.50
2.3.1 8.21MATERIAL, INSUMOS, INSTRUMENTAL Y ACCESORIOS MDICOS,
QUIRRGICOS, ODONTOLGICOS Y DEL LABORATORIO
Algodn1 kg. 4.00 4.00
Papel filtro Whatman N 11/2 caja 40.00 40.00
Papel Kraft3 pliegos 1.00 3.00
2.3.18.12MEDICAMENTOS
N-butil bromuro de Hioscina 20mg/ml (amp)3 unidades 0.50 1.50
2.3.18.21INSTRUMENTAL MEDICO QUIRRGICO
Guantes quirrgicoscajax100 unid. 1.00 15.00
Jeringas 1cc25 unidades 0.50 12.50
Agujas Hipodrmicascajax100 unid. 14.00 14.00
Hilo de seda N 6/01 unidad 4.50 4.50
Algodn 200g1 unidad 4.00 4.00
2.3.1 99.1 2PRODUCTOS QUMICOS
Alcohol de 961 L 6.00 6.00
2.3.1 99.1 99OTROS BIENES
Agua destilada15 L 1.00 15.00
2.3.2 1.2 99PASAJES Y GASTOS DE TRANSPORTE
Transporte2 personas 252.00
2.3.2 2.2SERVICIOS DE TELEFONIA E INTERNET
2.3.2 2.21SERVICIO DE TELEFONIA MVIL
Tarjeta para celular41040
2.3.2 2.23SERVICIOS DE INTERNET
Internetgeneral 50.00
2.3.2 2.4SERVICIOS DE PUBLICIDAD, IMPRESIONES, DIFUSION E IMAGEN
INSTITUCIONAL
2.3.2 2.44SERVICIOS DE IMPRESIONES, ENCUADERNACIN Y EMPASTADO
Impresiones100 0.20 20.00
Empastados6 unidades 20.00 50.00
2.3.2 4.1 99DE OTROS BIENES Y ACTIVOS
Fotocopia200 0.10 20.00
Digitacingeneral 20.00
2.3.22.44OTROS SERVICIOS
Jaulas para cuyes2 ejemplares 15.00 30.00
Alimentos para cuyes60 kg. 60.00 60.00
2.3.2 7.2 2SERVICIOS DE CONSULTORIA
Asesoramiento de estadsticageneral 100.00
2.3.2 7.4 3SOPORTE TECNICO
Memoria de Almacenamiento1 40.00 40.00
Masivo (USB 4 Gb)
TOTAL (S/.) = 1 266.40
RESUMEN DEL PRESUPUESTO:Presupuesto de acuerdo al clasificador de gastos para el ao 2015CODIGOCLASIFICADOR DE SERVICIOSPRECIO (S/.)
2.3.1 10.12Material biolgico130.00
2.3.1 1. 11Alimentos y bebidas para consumo humano 230.00
2.3.15.1Material y tiles de oficina 69.00
2.3.1 5.3Aseo, limpieza y tocador 34.50
2.3.1 8.21Material, insumos, instrumental y accesorios mdicos, 97.00
quirrgicos, odontolgicos y del laboratorio
2.3.1 8.1 2Medicamentos 2.90
2.3.1 99.12Productos qumicos 6.00
2.3.1 99.1 2Otros bienes 15.00
2.3.2 1.2 99Pasajes y Gastos de transporte 252.00
2.3.2 2.2Servicios de telefona e internet 90.00
2.3.2 2.4Servicios de publicidad, impresiones, difusin 70.00
e imagen institucional
2.3.2 4.1 99De otros bienes y servicios 40.00
2.3.2 2.44Otros servicios 90.00
2.3.2 7.2 2Servicios de Consultora 100.00
2.3. 2 7.4 3Soporte Tcnico 40.00
TOTAL = 1,266.40
12. Financiamiento: Con recursos propios y de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo.II. PLAN DE INVESTIGACION
1. Realidad problemtica:El dolor abdominal, en la mayora de los casos, es inofensivo y temporal. Varias personas presentan dolor de corta duracin en la zona estomacal de vez en cuando. El estrs, los problemas familiares o el ingerir alimentos muy condimentados, cidos o con alto contenido graso pueden causar dolor temporal. Pero en ocasiones, el dolor no desaparece despus de algunos minutos.1Algunas veces los msculos de los rganos digestivos presentan contracciones denominadas espasmos o clicos. Esto puede causar dolor en la regin inferior del abdomen, que se prolonga durante varias horas o inclusive varios das. 1Los espasmos abdominales, son la manifestacin ms comn e importante de los trastornos gastrointestinales, caracterizados por dolor tipo clico, que en la mayora se localiza en la zona intestinal. Puede deberse a una obstruccin del intestino delgado o una inadecuada digestin, y normalmente se acompaa de vmitos, diarrea, nauseas, etc. 2,3El intestino delgado, se caracteriza por su gran rea superficial debida a sus pliegues circulares, vellosidades y microvellosidades. Es la parte de mayor longitud del sistema gastrointestinal (aproximadamente 5 m), alrededor de 5% de su longitud inicial corresponde al duodeno (caracterizado por la ausencia del mesenterio), enseguida se ubica el yeyuno (alrededor del 40% de longitud intestinal), y finaliza con el leon. Es el rgano de absorcin y digestin alimenticia ms importante en el organismo, estas funciones se realizan principalmente en duodeno y yeyuno 4.Los tipos principales de movimiento intestinal son dos: segmentacin y peristaltismo. El de segmentacin es el ms frecuente en el intestino delgado y consiste en contracciones de la capa muscular circular, esto provoca la divisin del intestino en segmentos pequeos. Cuando esta segmentacin es rtmica, las contracciones son alternadas, es decir, un segmento se contrae y enseguida se relaja y as sucesivamente. El peristaltismo consiste en contracciones de secciones sucesivas del msculo liso circular, provocando el movimiento del contenido intestinal en forma antergrada 4.Existen mecanismos que explican cmo se genera la contraccin del musculo liso. Son varios los agonistas que se unen a receptores especficos y activan la contraccin del msculo liso. Subsecuentemente a esta unin, la respuesta de las clulas es incrementar la actividad de la fosfolipasa C, generando segundos mensajeros a partir del fosfatidilinositol 4, 5 bifosfato de la membrana; diacilglicerol (DAG) e inositol 1,4,5 trifosfato (IP3), los cuales permitirn la entrada del calcio a nivel citoplasmtico. El calcio se une a calmodulina provocando la activacin de la cinasa de la cadena ligera de la miosina (MLC cinasa), la cual fosforila la cadena ligera de miosina, y junto con la actina llevan a cabo el proceso iniciando el acortamiento de la clula del msculo liso 4,5.
Sin embargo, la elevacin en la concentracin de calcio dentro de la clula es pasajera, y la respuesta contrctil es mantenida por un mecanismo sensibilizado por el calcio proporcionado por la inhibicin de la actividad de la miosina fosfatasa por Rho cinasa. Este mecanismo sensibilizado al calcio es iniciado al mismo tiempo que la fosfolipasa C es activada, e involucra la activacin de la pequea protena RhoA unida a GTP. La naturaleza precisa de la activacin de RhoA por el receptor acoplado a protena G no es completamente clara, pero involucra un factor de intercambio del nucletido guanina (RhoGEF) y migracin de RhoA a la membrana plasmtica. Por encima de la activacin, RhoA incrementa la actividad de la Rho-cinasa, conduciendo a la inhibicin de la miosina fosfatasa. Esto fomenta el estado contrctil, ya que la cadena ligera de miosina no puede ser desfosforilada4,5.Dentro del tratamiento farmacolgico ms empleado tenemos a los anticolinrgicos, los cuales actan de forma competitiva los receptores muscarnicos colinrgicos, impiden la accin de la acetilcolina sobre el msculo liso y las glndulas exocrinas, por lo que inhiben la secrecin salival y cida gstrica. Sobre la motilidad gastrointestinal, los anticolinrgicos producen una reduccin significativa del tono muscular y de la frecuencia y amplitud de las contracciones, lo que se traduce en un enlentecimiento del trnsito intestinal 6.Los antiespasmdicos se clasifican en varios grupos ,de acuerdo a su mecanismo de accin : a) agentes relajantes del musculo liso ( meveberina , agentes derivados de papaverina) ,b)anticolinrgicos (butilhioscina, hioscina, hiosciamina, levocina, dicicloverina, butilescopolamina, trimebutina y bromuro de cimetropio) ,y c)agentes bloqueadores de los canales de calcio (bromuro de pinaverio ,bromuro de otilonio, alverina, fenoverina, rociverina y pirenzepina).7Los relajantes directos del musculo liso actan sobre las miofibrillas del musculo liso del aparato digestivo, reducen el tono y el peristaltismo, y alivian los espasmos intestinales sin afectar de forma sustancial a la motilidad gastrointestinal.7Los antiespasmdicos anticolinrgicos atenan los espasmos o contracciones en el intestino, y por tanto, tienen el potencial de reducir el dolor abdominal. Se utilizan en combinacin con cardiozepxido para disminuir efectos secundarios.7Los antagonistas de calcio relajan el intestino al prevenir la entrada de ste en las clulas del msculo liso intestinal. Dado que el calcio desencadena la cascada de sucesos que activa la contraccin muscular, su inhibicin en las clulas causa relajacin intestinal.7Si bien la medicina moderna est bien desarrollada en la mayor parte del mundo, grandes sectores de la poblacin de los pases en desarrollo todava dependen de los profesionales tradicionales, las plantas medicinales y los medicamentos herbarios para su atencin primaria. Es ms, durante los ltimos decenios, el inters del pblico en las terapias naturales ha aumentado enormemente en los pases industrializados, y se halla en expansin el uso de plantas medicinales y medicamentos herbarios.8Las plantas medicinales son importantes para la investigacin farmacolgica y el desarrollo de medicamentos, no solo cuando los constituyentes de plantas se usan directamente como agentes teraputicos sino tambin como materiales de base para la sntesis de los medicamentos o como modelos para compuestos farmacolgicamente activos. 8La familia Piperaceae cuenta con ms de 3610 especies agrupadas en 5 gneros: Piper, Peperomia, Zippelia, Manekia y Verhuellia de los cuales los ms importantes y extensos son el gnero Piper seguido por el Peperomia .9Las diversas especies de Peperomia tienen en comn su porte herbceo, postrado o colgante, sus hojas ms o menos suculentas sin estpulas, sus flores con estigma simple o hendido y dos estambres por cada flor. Su hbitat suele ser epfito o saxcola en reas con gran humedad atmosfrica donde crecen asociadas a musgos.
Las especies de Peperomia tiene propiedades curativas reconocidas en nuestro pas .Actan fundamentalmente como sedantes sobre el aparato neurovegetativo. Son antiinflamatorios, antiespasmdicas y posiblemente antibiticas.10Peperomia dolabriformis fue descrita por Humbold a base de una planta colectada por Bonpland en Huancabamba. Posteriormente, ha sido colectada en los departamentos de La Libertad, Cajamarca, Lambayeque y Amazonas. Es propia de valles abrigados de ambas vertientes de los Andes del Norte del Per .Su nombre vulgar es congona de zorro. 10Las hojas trituradas son cicatrizantes tpicos, la infusin de hojas e inflorescencias se usan como antiinflamatorios tpicos de la regin perineal. 10Dentro de las plantas que poseen aceite esencial tenemos a la Peperomia dolabriformis. Los aceites esenciales son sustancias aromticas de base lipdica encontradas prcticamente en todas las plantas; son muy numerosos y estn ampliamente distribuidos en las distintas partes de la planta: races, tallo, hojas, flores y frutos. Los aceites esenciales son componentes heterogneos de terpenos, sesquiterpenos, cidos, steres, fenoles, lactonas; separables por mtodos qumicos o fsicos como la destilacin, la refrigeracin, la centrifugacin, entre otros. 11El uso de los aceites esenciales de condimentos y especias en las industrias de alimentos y farmacutica es cada vez ms generalizado, debido en parte a la homogeneidad del aroma y a la minimizacin de las posibilidades de contaminacin microbiana, cuando se compara con el uso directo de tales especies y condimentos. 12Los aceites esenciales son usados como agentes carminativos, estimulantes, diurticos y antirreumticos; algunos poseen propiedades insecticidas, antifngicas y antibacterianas frente a microorganismos patgenos y han sido considerados como ingredientes activos en algunos plaguicidas botnicos, debido a su eficacia frente a un nmero considerable de plagas, su toxicidad mnima en mamferos y su disponibilidad general 122. JUSTIFICACIN
El impulso para el desarrollo de esta investigacin se encuentra en el hecho de que un gran porcentaje de la poblacin peruana no tiene acceso a tratamientos farmacolgicos. En conjunto, esto lleva a la necesidad de aumentar el conocimiento de los productos naturales, a fin de conocer mejor las propiedades de cada planta medicinal acrecentando su uso, logrando un mejor aprovechamiento de estos recursos naturales.3. Problema:Cules son los caractersticas fisicoqumicos del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth congona de zorro y su efecto sobre leon aislado de Cavia porcellus?4. Hiptesis:
El aceite esencial de Peperomia dolabriformis Kunth tiene efecto antiespasmdico, debido a la reduccin de la amplitud y frecuencia de contraccin del leon aislado de Cavia porcellus.Objetivos
Objetivo General
Determinar las caractersticas fisicoqumicas del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth congona de zorro y su efecto sobre leon aislado de Cavia porcellus Objetivos Especficos
-Determinar los parmetros fisicoqumicas que tiene el aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth.
- Determinar las caractersticas organolpticas del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth.
-Evaluar el efecto del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth a las dosis de 0.5%, 1.0%, 2.5% y 5.0% sobre las contracciones inducida por acetilcolina, respecto a la amplitud en leon aislado de Cavia porcellus5.-DESCRIPCIN DEL DISEO 5.1 MATERIALES:5.1.1. Material Botnico.
Se adquirir muestras de Peperomia dolabriformis procedentes del departamento de La Libertad, en enero del 2015 y se llevar al Herbario Truxillense (HUT) (Trujillo), para su identificacin taxonmica.
5.1.2 Material biolgicoSe utilizar ocho especies de Cavia porcellus, machos, con peso entre 350-450 g, procedentes del Bioterio de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo. Los especmenes seleccionados tendrn un periodo de aclimatacin de una semana antes del experimento. As mismo se controlar su microambiente; con jaulas adecuadas para su tamao e individuales para evitar la sobre densidad, con alimento a base de panca de choclo. El macroambiente, se evitar el uso de desinfectantes que emanen olores, que sean irritantes y mucho menos desodorizantes dentro del bioterio, minimizando el ruido excesivo e intermitente en el ambiente de alojamiento de los especmenes, mediante la no utilizacin de radios, celulares, alarmas y otros generadores de sonido, aun con auriculares o audfonos y con un ciclo luz/oscuridad de 12 horas (luz a las 07:00 am).
5.1.3. Equipos:
-Cmaras de bao de rgano aislado de 25 mL, Panlab ML1110.
-Termostato, Panlab serie 0505482, V230, A4.1, W 960, Hz 50.
-Tanque de agua de 32X19X60 cm, plexiglas(60C max), vol 8 L.
-Transductor de fuerza isomtrica o isotnica, AD instruments, rango 10mg-25g resolucin +/- 5mg, MLT0210.
-Bridge pod, AD instruments, ML 301.
-Powerlab 26 T, AD instruments, V 100, mA20, ML 856.
-Bomba de oxigeno, Gong Yang Bang, HP 100.
-Estufa elctrica Memmert
-Balanza analtica Sartorius
-Equipo material de diseccin.
-Equipo Clebenger extraccin de aceites voltiles.
5.1.4. Material de vidrio y porcelana:-Mortero y piln
-Pipetas 1 y 5 mL.
-Vasos de precipitacin de 50 y 100 mL.
-Fiolas de 500 y 1000 mL 5.1.5. Reactivos:-Cloruro de calcio, Merck
-Bicarbonato de sodio, Merck
-Glucosa anhidra, Merck
-Cloruro de sodio, Merck
-Cloruro de potasio, Merck
-Cloruro de magnesio, Merck
-Fosfato monobsico de sodio, Merck
-Hidrogeno fosfato de dipotasio, Merck
-Agua destilada-Acetilcolina 5.1.6. Medicamentos:
-N- butil bromuro de Hioscina (20mg/ml)5.1.7. Material quirrgico-Pinzas mosquito curvas, Halstead.
-Tijeras rectas, Mayo.
-Pinza de diseccin recta.
5.1.8. Otros
-Jeringas de 1 cc,
-Viales de 5 cc, color mbar.
-Algodn hidroflico.
-Termmetro,
-Placas petri.
-Papel filtro
-Cocina elctrica.
-Frascos color mbar.5.2. MTODO
5.2.1. Diseo. Estudio experimental con estimulo creciente. 13FASE: Determinacin de la amplitud frente a acetilcolina.
LEYENDA:
E1: Est conformado por el leon de Cavia porcellus, que fueron sometidas a la secuencia de los seis grupos.x: Acetilcolina
x: Fueron aplicadas segn secuencia de orden respectivamente.
* La actividad frente a espasmgenos se aplicar a ocho especmenes.
5.2.2. Procedimiento
5.2.2.1 Recoleccin e identificacin taxonmica:
1 kg de la planta de Peperomia dolabriformis congona de zorro ser recolectada del cerro Campana, a 945 m.s.n.m. distrito de Huanchaco- Regin La Libertad .Un ejemplar completo de la planta ser llevado al Herbario Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo, para su identificacin y posterior verificacin taxonmica. 5.2.2.2 Preparacin de la muestra:a. Seleccin
La planta recolectada ser transportada al laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo, donde se eliminarn las sustancias extraas presentes en la muestra.b. Lavado
Luego de la separacin de las sustancias extraas, se proceder a lavar las hojas con agua destilada, seguido de una desinfeccin utilizando hipoclorito de sodio, a una concentracin de 200 ppm. (16)5.2.2.3. Obtencin del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis congona de zorroEl aceite esencial ser extrado a partir de las hojas frescas por el mtodo de destilacin por arrastre de vapor de agua. Las hojas frescas se cortarn en pequeos trozos y se pesarn 100 g luego se colocarn en un baln y se agregar 400 mL de agua destilada y finalmente se calentar hasta punto de ebullicin durante 3 h. Como producto del proceso de condensacin se obtendr dos fases una de aceite esencial y otra del agua; posteriormente se separar el aceite esencial y se deshidratar las impurezas de agua en el aceite esencial con Na2SO4 anhidro, se filtrar y se guardar en un frasco de vidrio color mbar (para evitar la descomposicin por la luz), bajo refrigeracin a una temperatura de 4 oC.(17)5.2.2.4. Determinacin del rendimiento de aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis congona de zorroA partir de 100 g de hojas de Peperomia dolabriformis congona de zorro, se obtendr un determinado volumen que ser medido. Por el mtodo gravimetra-volumtrico se determinar el porcentaje de rendimiento del aceite esencial (%RAE), aplicando la siguiente frmula: %RAE = Vol. AE (mL)/ Pmuestra (g) x 100
Donde:
% RAE : Porcentaje del rendimiento del aceite esencial
Vol. AE : Volumen del aceite esencial obtenido en mililitros.
Pmuestra: Peso de la muestra a destilar en gramos.5.2.2.5. Preparacin de las diferentes concentraciones del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis congona de zorroSe tomarn del aceite esencial puro (100%), volmenes de 0,05 mL, 0,1 mL, 0,25 mL y 0,5 mL y, se colocaron en una fiola de 10 mL. Luego se completaron a volumen con Tween 80, obteniendo las concentraciones de 0,5%, 1,0%, 2,5% y 5,0% (v/v) respectivamente.
Posteriormente, se colocarn cada concentracin en frascos de color mbar, para protegerlas de la luz. Las diluciones se guardaron a 4 C para el estudio farmacolgico.5.2.2.6. Parmetros fisicoqumicos del aceite esencial 14:1.- Determinacin de las caractersticas organolpticas.
Los caracteres organolpticos incluyen olor, color, sabor y textura.1.1. Determinacin de olor: Se tomar una tira de papel secante de aproximadamente 1 cm de ancho por 10cm de largo y se introducir en un extremo en la muestra de ensayo. Luego se oler y se determinar si corresponde con la caracterstica del producto.
1.2 Determinacin del color: Se tomar en un tubo de ensayos bien limpio y seco y se llenar hasta las tres cuartas partes con la muestra de ensayo y se observar el color, la transparencia, la presencia de partculas y la separacin en capas.1.3. Determinacin del sabor: Se tomar una pequea alcuota y se sentir el sabor1.4. Determinacin de textura: Se tomar una alcuota y se sentir con el tacto la textura y consistencia.2. Determinacin de la densidad relativa.
Se pesar el picnmetro vaco y seco 2 C y se llenar con la porcin de ensayo, manteniendo la temperatura de 25 C (1C) durante 15 min y luego se ajustar el lquido al nivel empleado.
Se pesar cuidadosamente el picnmetro con la porcin de ensayo y se repetir la operacin con el agua destilada a 25 C.
Expresin del resultado:
La densidad relativa a 25 C se calcula por la siguiente frmula:
D25 = M1 -M
M2-M Donde:
M1: peso del picnmetro con la muestra (g)
M2: peso del picnmetro con el agua (g)
M: peso el picnmetro vaco (g).
Los resultados se aproximan hasta la tercera cifra.3. Determinacin del ndice de refraccin.
Se colocar sobre el prisma de medicin una gota de agua destilada, utilizando para ello una varilla de vidrio que no tenga cantos agudos, se ajustar el equipo seleccionando la zona del espectro visible que aparece en la lnea lmite del campo visual, moviendo el compensador cromtico y colocando la interseccin del retculo sobre la lnea lmite de los campos claro y oscuro.
Despus de haber realizado el ajuste del refractmetro, se colocar una gota de la muestra de ensayo sobre el prisma de medicin, se cerrar el termo prisma y se enfocar la luz por medio del espejo, de modo tal que la misma incida sobre la apertura de entrada del prisma de medicin y se proceder de la misma forma que con el agua.4. Determinacin del pH
Se ajustar el equipo con la solucin reguladora de pH adecuada al rango en que se realizar la determinacin. Posteriormente se determinar el valor del pH del aceite.
Los resultados se darn apreciando hasta la dcima.1. Solubilidad
Se colocar en 7 tubos 0,5 mL de aceite esencial y luego se aadir a cada tubo por separado 5 mL de agua, 5mL de etanol 50%, 5 mL de etanol 70%, 5 mL de etanol 80%, 5 mL de etanol 96%, 5 mL n-hexano y 5mL de ter etlico respectivamente. Luego se agitar cada tubo y se observar en cada uno de ellos si se produce algn enturbiamiento.
Puesto que la solubilidad vara con la temperatura, sta determinacin se realizar a temperatura constante con ayuda del bao termosttico.
2. Determinacin del ndice de acidez
Se preparar una solucin que consiste en una mezcla de partes iguales de alcohol-ter neutralizado
En un matraz de capacidad adecuada se pesar entre 1 a 2 g de aceite
Luego se aadir 60 mL de alcohol-ter, ms tres gotas de fenolftalena
Se agitara y valorara con la solucin KOH 0.1N hasta coloracin ligeramente rosada.
Luego se anotara los mililitros gastados y se efectuara los clculos segn la siguiente frmula:
IA = 5.61 x V
P
Donde:
IA: ndice de acidez
P: el peso, en gramos de la muestra ensayada
V: el volumen en mililitros, de hidrxido de potasio utilizado.
5.2.2.7. Preparacin de la solucin Tyrode.
Se aadir 64 g de cloruro de sodio en un recipiente de plstico que contiene 4 L de agua destilada, se agitar hasta disolucin, luego se aadir 1.6 g de cloruro de potasio, se agitar hasta disolucin, posteriormente se aadir 1.6 g de cloruro de calcio agitando hasta disolucin, luego se agregar 0.08 g de cloruro de magnesio y agitar hasta disolucin, se agregar 2 L de agua destilada, posteriormente se aadir 0.4 g de fosfato de sodio monobsico y se agitar hasta disolucin, despus se agregar 8 g de glucosa anhidra y se agitar hasta disolucin, luego se agregar 8 g de bicarbonato de sodio hasta disolucin, finalmente se agregar agua destilada hasta completar los 8 L. Esta solucin ser preparada 1 hora antes del trabajo experimental. 15
5.2.2.8. Preparacin del leon de Cavia porcellus Aislamiento del leon de Cavia porcellus
Los especmenes se privarn de alimentos 24 horas antes del experimento y se siguir los lineamientos ticos para el manejo y sacrificio de animales de experimentacin segn la sociedad americana de veterinaria (AVMA).
El sacrificio de los especmenes ser mediante dislocamiento cervical (AVMA). Posteriormente se abrir la cavidad abdominal mediante incisin longitudinal para extraer un segmentos de leon, que se colocar en una placa petri para ser lavado (para retirar los residuos del contenido intestinal), con solucin de Tyrode y temperatura de 37 C. Se cortar un segmento de 3 cm y se fijar con hilo de seda N6/0, sin ocluir la luz intestinal.15-18 Montaje del leon de Cavia porcellusPara el montaje de la preparacin se utilizar bao de rgano de 25mL conteniendo solucin Tyrode a 37C con aireacin constante. 15-18 5.2.2.9. Determinacin de la amplitud frente a acetilcolina18,20,21 Evaluacin del efecto del agua destilada sobre el leon aislado, respecto a la amplitud
Se dejar estabilizar la muestra de leon, al menos, por 20 minutos y luego se aadir 0.2 mL de acetilcolina 5x10-4M y en la mayor amplitud se agregar 0.2mL de agua destilada al rgano aislado, se registrar el tono por 10 minutos, luego se realizar el lavado de la cmara de rgano aislado (2 veces) y se estabiliz la muestra por 10 minutos. 18-21 Evaluacin del efecto de Peperomia dolabriformis 0.5%, sobre el leon aislado, respecto a la amplitud
Se aadir a cada cmara de rgano aislado 0.2mL de acetilcolina 5x10-4 M, y en la mayor amplitud se agregar 0.2 mL Peperomia dolabriformis 0.5%, se registrar el tono durante 10 minutos, luego se realizar el lavado de la cmara de rgano aislado (2 veces) y se estabiliz la muestra por 10 minutos. 18-21 Evaluacin del efecto de Peperomia Dolabriformis 1%, sobre el leon aislado, respecto a la amplitud
Se aadir a cada cmara de rgano aislado 0.2mL de acetilcolina 5x10-4 M, y en la mayor amplitud se agregar 0.2 mL Peperomia Dolabriformis 1%, se registrar el tono durante 10 minutos, luego se realizar el lavado de la cmara de rgano aislado (2 veces) y se estabiliz la muestra por 10 minutos18-21 Evaluacin del efecto de Peperomia dolabriformis 2.5%, sobre el leon aislado, respecto a la amplitud
Se aadir a cada cmara de rgano aislado 0.2mL de acetilcolina 5x10-4 M, y en la mayor amplitud se agregar 0.2 mL Peperomia dolabriformis 2.5%, se registrar el tono durante 10 minutos, luego se realizar el lavado de la cmara de rgano aislado (2 veces) y se estabiliz la muestra por 10 minutos. 18-21 Evaluacin del efecto de Peperomia dolabriformis 5%, sobre el leon aislado, respecto a la amplitud
Se aadir a cada cmara de rgano aislado 0.2mL de acetilcolina 5x10-4 M, y en la mayor amplitud se agregar 0.2 mL Peperomia dolabriformis 5%, se registrar el tono durante 10 minutos, luego se realizar el lavado de la cmara de rgano aislado (2 veces) y se estabiliz la muestra por 10 minutos. 18-215.2.3. Anlisis estadstico.Los datos sern analizados mediante el anlisis de varianza (ANOVA), con una probabilidad del 95%, si el resultado presenta p
