Prak Analisis Instrumen D3 Farmasi-2014

PETUNJUK PRAKTIKUMKIMIA ANALITISA INSTRUMEN D3 FARMASI

Oleh.Tim analitik dan organic jurusan Kimia

Atmanto H W, Candra P, Tri Martini, Desi Suci H, asisten D3 farmasi

JURUSAN KIMIAFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA2014

TATA TERTIB PRAKTIKUM

1. Praktikan harus datang 10 menit sebelum praktikum dimulai.2. Selama praktikum berlangsung, praktikan harus mengenakan jas

praktikum.3. Tidak diperkenankan makan, minum, merokok dan bersenda gurau di

laboratorium selama praktikum berlangsung.4. Setiap acara praktikum, praktikan harus telah membuat jurnal percobaan

yang akan dilakukan.5. Setelah selesai praktikum, praktikan harus membuat laporan sementara

yang diperiksa dan ditanda tangani oleh asisten pembimbing.6. Laporan resmi praktikum, harus dibuat dan diserahkan kepada asisten

sebelum acara praktikum berikutnya dimulai.7. Apabila belum menyerahkan laporan resmi, maka praktikan tidak

iperkenankan melanjutkan acara praktikum berikutnya.8. Apabila praktikan berhalangan hadir / tidak masuk, diwajibkan

memberitahukan dan mohon ijin kepada asisten pembimbing dengan surat.9. Apabila praktikan tidak mengikuti praktikum selama 3 kali percobaan

tanpa keterangan yang dapat dipertanggungjawabkan, maka yang bersangkutan tidak diperkenankan melanjuktan praktikum pada semester tersebut.

10. Praktikan wajib menjaga kebersihan laboratorium.11. Selesai melakukan praktikum, praktikan wajib mengembalikan alat dan

bahan.12. Tiap kelompok wajib membawa kain lap dan kertas tisu.13. Apabila praktikan merusakkan / memecahkan alat, praktikan harus

mengganti sesuai dengan barang yang dirusakkan / ipecahkan.14. Hal-hal yang belum tercantum dalam tata tertib ini akan diatur berdasarkan

kebijaksanaan asisten.

DAFTAR ISI

Percobaan 1 : penentuan kandungan nitrit menggunakan spektrofotometer uv-vis

Percobaan 2 : penentuan kandu logam besi (fe) dalam obat atau makanan menggunakan AAS

Percobaan 3 : ekstraksi dan analisa kromatografi lapis tipis bahan alam

Percobaan 4 : pemisahan komponen senyawa dari ekstrak kunyit (curcuma longa l ) menggunakan kromatografi kolom

Percobaan 5 : penentuan kadar logam krom (Cr) dalam sampel menggunakan HPLC

Percobaan 6 : penentuan etanol dalam minuman menggunakan kromatografi gas (GC)

Percobaan 7 : analisa gugus fungsi menggunakan spektrofotometer infra merah (IR)

Percobaan 8 : Demo dan analisisa NMR

PERCOBAAN IPENENTUAN KANDUNGAN NITRIT MENGGUNAKAN

SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

A. TUJUAN PERCOBAAN Memahami prinsip dasar instrument spektrofotometer UV-Vis Melakukan preparasi sampel dalam analisis kandungan nitrit

menggunakan spektrofotometer UV-Vis

Melakukan analisa kuantitatif nitrit menggunakan spektrofotometer UV-Vis dalam sampel

B. DASAR TEORIMetode analisis spektrometri adalah metode analisis yang

banyak dipakai dalam analisis kimia, seperti pada analisis dengan gelombang ultraviolet dan tampak. Prinsip dasar spektroskopi adalah interaksi antara radiasi elektromagnetik dengan suatu sampel, dan adanya interaksi tersebut menyebabkan terjadinya transisi electron padamolekul ke tingkat energi orbital yang lebih tinggi. Intensitas radiasi yang diserap oleh sampel berhubungan dengan konsentrasi analit dalam suatu larutan sampel. Jumlah radiasi yang diserap oleh suatu larutan sampel digambarkan oleh hukum Lambert-Beer :

A = - Log T = Log 1/T = Log Io/I = bcA = 2,00 log % T

Dimana :A = absorbansiT = transmitansiB = panjang kuvet (cm )

= absorsivitas molar ( cm-1.mol-1.liter )C = konsentrasi larutan ( mol/L )Io = intensitas sinar datingI = intensitas sinar yang diteruskan

Ada tiga teknik yang biasa dipakai dalam analisis secara spektrometri. Ketiga teknik tersebut adalah :

1. Metode standar tunggalMetode ini sangat praktis karena hanya menggunakan satu

larutan standar yang telah diketahui konsentrasinya (Cstd). Selanjutnya absorbsi larutan standar (Astd) dan absorbsi larutan sampel (Asmp) diukur dengan spektrometri. Dari hukum Beer diperoleh:

Astd = .b.Cstd Asmp = .b.Csmp.b = Astd/Cstd .b = Asmp/Csmp

Sehingga,Astd/Cstd = Csmp/Asmp Csmp = (Asmp/Astd) x CstdDengan mengukur absorbansi larutan sampel dan standar, konsentrasi larutan sampel dapat dihitung.

2. Metode Kurva KalibrasiDalam metode ini dibuat suatu seri larutan standar dengan

berbagai konsentrasi dan absorbansi dari larutan tersebut diukur dengan misalnya AAS atau UV-Vis. Langkah selanjutnya adalah membuat grafik antara konsentrasi (C) dengan Absorbansi (A) yang akan merupakan garis lurus melewati titik nol dengan slope = .b atau slope = a.b. Konsentrasi larutan sampel dapat dicari setelah absorbansi larutan sampel diukur dan diintrapolasi ke dalam kurva kalibrasi atau dimasukkan ke dalam persamaan garis lurus yang diperoleh dengan menggunakan program regresi linear pada kurva kalibrasi.3. Metoda Adisi Standar

Metoda ini dipakai secara luas karena mampu meminimalkan kesalahan yang disebabkan oleh perbedaan kondisi lingkungan (matriks) sampel dan standar. Dalam metoda ini dua atau lebih sejumlah volume tertentu dari sampel dipindahkan ke dalam labu takar. Satu larutan

diencerkan sampat volume tertentu kemudian diukur absorbansinya tanpa ditambah dengan zat standar, sedangkan larutan-larutan yang lain sebelum diukur absorbansinya ditambah terlebih dulu dengan penambahan secara linear (misalnya 1,2,3 dst) larutan standar dan diukur absorbansinya seperti pada larutan yang pertama (lihat gambar kanan) .Menurut hukum Beer akan berlaku hal-hal berikut:Ax = k.Ck AT = k(Cs+Cx)Dimana,Cx = konsentrasi zat sampelCs = konsentrasi zat standar yang ditambahkan ke larutan sampelAx = absorbansi zat sampel (tanpa penambahan zat standar)AT = absorbansi zat sampel + zat standarJika kedua rumus digabung maka akan diperoleh Cx = Cs + {Ax/(AT-Ax)}

Konsentrasi zat dalam sampel (Cx) dapat dihitung dengan mengukur Ax dan AT dengan spektrometri. Jika dibuat suatu seri penambahan zat standar dapat pula dibuat grafik antara AT lawan Cs garis lurus yang diperoleh dari ekstrapolasi ke AT = 0, sehingga diperoleh:Cx = Cs x {Ax/(0-Ax)} ; Cx = Cs x (Ax/-Ax)Cx = Cs x (-1) atau Cx = -Cs

Gambar : kurva kalibrai (kiri) dan kurva adisi standar (kanan) dalam analisis spektrometri

C. ALAT1. Spektrofotometer sinar tampak dengan kuvet silika2. Labu ukur 50 mL:250 mL;500 mL dan 100 m:3. Pipet ukur 1 mL;5 mL;10 mL4. Pipet tetes5. Gelas piala 150 mL;250 mL; 600 mL6. Erlenmeyer 250 mL7. Dragball8. Cawan arloji9. Neraca analitik

D. BAHAN1. larutan sampel2. aquades bebas nitrit3. sulfanilamide (SA)4. N-(1-naphthyl) ethylene diamine dihydrochloride (NED

dihydrochloride)

5. KMnO46. Larutan induk nitrit7. H2SO4 pekat8. FAS9. Na2C2O4

E. CARA KERJA1. Pembakuan larutan induk nitrit, 250 mg/L NO2-N

a) Pipet 10 mL larutan KMnO4 0,05 N, masukkan kedala Erlenmeyer 250 mL

b) Tambahkan 1 mL H2SO4 pekatc) Pipet 10 mL larutan induk nitrit, masukkan kedalam

larutan KMnO4 dengan cara ujung pipet berada dibawah permukaan larutan KMnO4

d) Diamkan selama 5 menite) Hilangkan warna permanganat dengan penambahan

larutan FAS 0,05 N dengan penambahan secara bertahap sebanyak 10 mL

f) Titar kelebihan FAS dengan larutan KMnO4 0,05 N sampai sedikit warna merah muda sebagai titik akhir

g) Hitung kandungan NO2-N dari larutan induk dengan rumus berikut :

= [( 1 1) ( 2 2)]73Dimana:C adalah kadar NO2-N dalam larutan induk, mg/mL NO2-NV1 adalah jumlah mL total larutan KMnO4 yang digunakanN1 adalah normalitas larutan KMnO4V2 adalah jumlah mL total larutan Na2C2O4 atau jumlah mL total larutan FAS

N2 adalah normalitas larutan Na2C2O4 (atau jumlah mL larutan FAS)V3 adalah jumlah mL larutan induk NO2-N yang diambil (dititar)

2. Pembuatan kurva kalibrasia) Optimalkan spektrofotometer sesuai petunjuk

penggunaan alatb) Ke dalam masing-masing 25 mL larutan standart

tambahkan 0,5 mL larutan sufanilamida, kocok dan biarkan 2 menit sampai dengan 8 menit

c) Tambahkan 0,5 mL larutan NED dihirochlorida, kocok dan biarkan selama 10 menit dan segera lakukan pengukuran absorbansi (pengukuran tidak boleh dilakukan lebih dari 2 jam)

d) Baca masing-masing absorbansinya pada panjang gelombang 543 nm (atau serapan maksimumnya)

e) Buat kurva kalibrasinya3. Prosedur analisis sampel

a) Pipet 10 mL sampel, masukkan kedalam gelas piala 200 mL

b) Tambahkan 0,2 mL larutan sulfanilamid, kocok dan biarkan 2 menit sampai dengan 8 menit

c) Tambahkan 0,2 mL larutan NED dihidrochlorida, kocok dan biarkan selama 10 menit dan segera lakukan pengukuran absorbansi (pengukuran tidak boleh dilakukan lebih dari 2 jam)

d) Baca masing-masing absorbansinya pada panjang gelombang 543 nm

e) Hitung kadar nitrit dalam sampel menggunakan kurva standar

PERCOBAAN IIPENENTUAN KANDUNGAN LOGAM BESI (Fe) DALAM OBAT

ATAU MAKANAN MENGGUNAKAN AAS

A. TUJUAN PERCOBAAN Memahami prinsip dasar instrumen AAS Melakukan preparasi sampel obat atau makanan dalam

analisis logam Fe menggunakan AAS Menentukan kandungan logam Fe dalam obat atau makanan

B. DASAR TEORIPrinsip dasar dari AAS adalah dengan cara larutan

sampel diaspirasikan ke suatu nyala dan unsur-unsur di dalam sampel diubah menjadi uap atom sehingga nyala mengandung atom unsur-unsur yang dianalisis. Atom-atom akan berada dalam keadaan netral dengan tingkat energy dalam keadaan dasar (ground state). Atom-atom ground state ini kemudian menyerap radiasi yang diberikan oleh sumber radisi yang terbuat dari unsur-unsur yang bersangkutan (misal analisis Cu dengan sinar dari lampu Cu) sehingga terjadi proses eksitasi electron dariatom. Panjang gelombang yang dari sumber radiasi adalah sama dengan panjang gelombang yang diabsorpsi oleh atom dalam nyala.

Penyerapan energi/sinar (absorbansi) oleh atom pada panjang gelombang tertentu akan mengikuti hukum Lambert-Beer, yakni absorbansi berbanding lurus dengan panjang kuvet yang dilalui sinar dan konsentrasi uap atom dalam nyala. Tetapi panjang kuvet dapat dibuat konstan sehingga absorbansi hanya berbanding langsung dengan konsentrasi analit dalam larutan sampel.

Gambar alat AAS

Hukum Lambert-Beer sebagai berikut:

= = 1 = = = 2,00 log%Keterangan:A = absorbansiT = transmitansib = panjang kuvet (cm) = absortivitas molar (L/cm.mol)c = konsentrasi larutan (mol/L)Io = intensitas sinar datangI = intensitas sinar yang diteruskan

C. ALAT1. Spektroskopi Serapan Atom (AAS)2. Neraca3. Gelas beker4. Labu ukur

5. Pipet volume / pipet gondok6. Pipet tetes7. Kaca arloji8. Pengaduk kaca9. Erlenmeyer10. Dragball11. Corong kaca12. dll

D. BAHAN1. Larutan induk Fe 1000 ppm2. Sampel obat/makanan yang mengandung Fe3. Akuades4. HNO3 pekat

E. CARA KERJA1. Preparasi Sampel

a. Destruksi (lebih diutamakan)ambil 0,005 g sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Tambahkan 10 mL HNO3 pekat kemudian panaskan sampai sampel larut seluruhnya dan larutan menjadi kering/hampir kering. Encerkan sampel dengan larutan HNO3 0,1M menggunakan labu ukur 10 mL.

b. Tanpa DestruksiAmbil 0,05 gram sampel dan larutkan di dalam beker dengan HNO3 pekat kemudian diencerkan menggunakan labu ukur 10 mL. 1mL larutan tersebut diambil dan diencerkan menggunakan 10 mL labu ukur.

2. Metode Standar KalibrasiBuatlah larutan standar Fe 0.0 ; 0.5 ; 1 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 ; 10 ppm dengan mengencerkan larutan induk Fe 100 ppm dengan larutan HNO3 0,1M menggunakan labu ukur 10 mL.

3. Metode Standar AddisiBuatlah larutan standar Fe 0.0 ; 0.5 ; 1 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 ; 10 ppm dengan mengencerkan larutan induk Fe 100 ppm dengan larutan HNO3 0,1M menggunakan labu ukur 10 mL.

Kemudian ditambahkan 1mL larutan sampel pada setiap variasi konsentrasi.

4. Pengukuran Standar dan SampelLakukan pengukuran larutan standar dari metode standar kalibrasi dan standar addisi yang dimulai dari konsentrasi terendah secara berurutan. Catat absorbansi masing-masing larutan standar tersebut. Buatlah grafik standar antara konsentrasi versus absorbansi. Kemudian lakukan pengukuran larutan sampel yang telah dibuat. Apabila absorbansinya berada di luar kurva standar maka lakukanlah pengenceran terhadap larutan sampel. Hitunglah kandungan logam besi (Fe) dalam sampel menggunakan kurva standar.

PERCOBAAN IIIEKSTRAKSI DAN ANALISA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

BAHAN ALAM

TUJUAN1. Mengekstraksi senyawa kimia dari bahan alam dengan

menggunakan ekstraksi cair-cair.2. Menganalisis ekstrak daun nyamplung dengan metode

kromatografi lapis tipis.

DASAR TEORIEkstraksi merupakan salah satu metode pemisahan kimia (partisi

kimia) berdasarkan perbedaan distribusi komponen sampel di dalam dua pelarut dengan sifat kepolaran yang berbeda. Adapun metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut:

1. Cara dingina. Maserasi Proses pengekstrakan dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruang.

b. PerkolasiEkstraksi dengan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan pada temperatur ruang.

2. Cara panasa. RefluksEkstraksi dengan pelarut pada temperature titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.b. Sokletasi Ekstraksi yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinyu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

Kromatografi adalah suatu metode analitik untuk pemurnian dan pemisahan senyawa-senyawa organik dan anorganik. Metode ini berguna untuk fraksionasi campuran kompleks dan pemisahaan untuk senyawa yang sejenis. Dalam kromatografi, komponen-kompenen terdistribusi menjadi dua fasa, yaitu fasa diam dan fasa gerak. Transferfasa gerak dan fasa diam terjadi bila molekul-molekul campuran terserap pada permukaan partikel (terserap di dalam pori-pori partikel).

ALAT DAN BAHANALAT BAHAN1. Corong pisah 1 buah 1. Daun nyamplung 10 lembar 2. Pipa kapiler 1 buah 2. Methanol 100 mL3. Chamber KLT 1 buah 3. n-heksana 57 mL4. Hot plate 1 buah 4. Etil asetat 4 mL5. Lampu uv 1 buah 5. Kloroform 16 mL6. Gelas beaker 250 mL3 buah 6. Aseton 1 mL7. Gelas ukur 50 mL 1 buah 7. Plat KLT 3 buah

CARA KERJA1. Daun nyamplung dimaserasi dengan metanol selama semalaman.

2. Maserat disaring dan ditambahkan n-heksana untuk kemudian diekstraksi dengan menggunakan corong pisah

3. N-heksana dipisahkan dari campuran dan dievaporasi hingga diperoleh ekstrak kental.

4. Ekstak daun nyamplung dilakukan analisa dengan kromatografi lapis tipis dengan eluen yang berbeda. (n-heksana : etil asetat 4:6, kloroform : aseton 9:1, dan kloroform : n-heksana 7:3)

5. Hitung Rf dari masing-masing noda yang tampak.

PERCOBAAN IVPEMISAHAN KOMPONEN SENYAWA DARI EKSTRAK

KUNYIT (Curcuma longa L ) MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI KOLOM

A. TUJUAN1. Memahami teknik penggunaan kromatografi kolom2. Melakukan pemisahan komponen-komponen senyawa dari

ekstrak kunyit menggunakan kromatografi kolom3. Melakukan identifikasi kurkumin dari hasil pemisahan

secara kromatografi kolom menggunakan KLT

B. DASAR TEORI

Kromatografi adalah suatu metode yang digunakan untuk memisahkan senyawa organik dan anorganik sehingga senyawa tersebut dapat dianalisis dan dapat diambil secara murni. Kromatografi digunakan sebagian digunakan untuk mengetahui komponen apa saja yang terdapat dalam suatu sampel zat padat atau zat cair.

Metode kromatografi adalah cara pemisahan dua atau lebih senyawa atau ion berdasarkan pada perbedaan migrasi dan distribusi senyawa atau ion ion tersebut dalam dua fasa yang berbeda. Dua fasa ini bisa berwujud padat-cair, cair-cair, atau gas-cair. Zat terlarut didalam suatu fasa gerak mengalir pada suatu fasa diam. Fasa diam adalah fasa yang tidak bergerak, sedang kan fasa gerak adalah fasa yang bergerak melalui fasa diam dan membawa komponen komponen senyawa yang akan dipisahkan. Zat analit terlarut yang memiliki afinitas yang lebih besar terhadap fasa gerak akan tertahan lebih lama pada fasa gerak, sedangkan zat terlarut yang afinitas terhadap fasa gerak lebih kecil akan tertahan lebih lama pada fasa diam. Dengan demikian senyawa-senyawa dapat dipisahkan komponen demi komponen akibat perbedaan migrasi di dalam fasa gerak dan fasa diam. Jika terdapat komponen A yang terdistribusi dalam fasa gerak (mobile) dan fase diam (stationary) :A mobile A stationary

Kd = [][]

f= fraksi mol A dalam fasa gerak =

[] []keakuratan hasil pemisahan dengan metode kromatografi bergantung pada beberapa faktor berikut :1. Pemilihan absorben sebagai fasa diam2. Kepolaran pelarut atau pemilihan pelarut yang sesuai sebagai

fasa gerak3. Ukuran kolom (panjang dan diameter)4. Laju elusi atau kecepatan fasa gerak

Terdapat empat jenis kromatografi : kromatografi cair, kromatografi gas, kromatografi lapis tipis, dan kromatografi kertas. Dalam kromatografi lapis tipis, fasa gerak adalah pelarut sedangkan fasa diamnya adalah plat tipis yang dilapisi absorben

tertentu. Kromatografi kolom merupakan jenis kromatografi serapan yang didasarkan pada distribusi zat diantara padatan penyerap (fasa diam) dan pelarut (fasa gerak). Kolom kromatografi dapat berupa tabung kaca yang dilengkapi dengan kran pada salah satu ujungnya. Ukuran kolom biasanya berdiameter 1-5 cm dan panjangnya 10-100 cm. Perbandingan ukuran antara diameter dengan panjang kolom ditentukan oleh kesukaran pemisahan. Pada prinsipnya dalam kromatografi kolom, apabila suatu cuplikan yang merupakan campuran dari beberapa komponen dimasukan melalui bagian atas kolom, maka komponen yang diserap lemah oleh adsorben akan keluar lebih cepat bersama eluen, sedangkan komponen yang diserap kuat akan keluar lebih lama.

C. ALAT

1. Kolom kromatografi 1 buah2. Chamber 1 buah3. Lampu UV 1 set4. Gelas beker 2 buah5. Gelas ukur 1 buah6. Pipet volume 1 buah7. Pipet tetes 1 buah 8. Corong gelas 1 buah9. Dragball 1 buah10. Pengaduk kaca 1 buah11. Pipa kapiler 1 buah12. Hot plate 1 buah13. Hair dryer 1 buah14. Flakon kaca 10 buah

D. BAHAN

1. Ekstrak kunyit 1 tetes

2. CH2Cl2 100 mL3. CH3OH 1 mL4. Plat KLT 1 lembar5. Silika gel 15 gram

E. CARA KERJA

Pembuatan kolom dilakukan dengan cara 15 gram silika gel dilarutkan dengan eluen CH2Cl2 : CH3OH (99 :1) kemudian dimasukan secara perlahan kedalam kolom kromatografi, kondisi kolom harus selalu basah dengan pelarut, kemudian teteskan ekstrak kunyit secara perlahan pada bagian atas kolom ( jangan sampai merusak permukaan kolom yang sudah rata). Lakukan elusi hingga komponen terpisah menjadi beberapa fraksi, tampung fraksi kedalam flakon kaca sesuai dengan perbedaan warna komponen, gabungan fraksi yang mengandung komponen pertama ini diuapkan kemudian ditotolkan pada plat KLT, dimasukan kedalam chamber yang berisi eluen CH2Cl2 : CH3OH (99:1), plat KLT dikeringkan, noda pada plat KLT dilihat menggunakan lampu UV.

PERCOBAAN VPENENTUAN KADAR LOGAM KROM (Cr) DALAM SAMPEL

MENGGUNAKAN HPLC

A. TUJUAN1. Memahami prinsip kerja HPLC.2. Menganalisis kandungan logam krom dalam sampel

menggunakan HPLC baik secara kualitatif maupun kuantitatif.

B. DASAR TEORIHigh Performance Liquid Chromatography atau kromatografi

cair kinerja tinggi (HPLC) merupakan salah satu contoh kromatografi cair. Pemisahan dalam HPLC normalnya lebih efisien dan tidak membutuhkan kolom yang panjang. Proses pemisahan komponen - komponen dalam suatu sampel dengan menggunakan HPLC dibutuhkan tekanan yang cukup tinggi sehingga proses pemisahannya lebih sempurna dan cepat.

Analisis kualitatif dapat dilakukan dengan mencocokkan waktu retensi dan similarity indeks (SI) kromatogram sampel dengan standard yang akan dianalisis atau dengan metode spiking sampel dengan standard yang akan dianalisis. Sedangkan analisis kuantitatif dapat dilakukan dengan menggunakan beberapa metode, seperti :

1. Metode standard tunggal atau spiking standard tunggal2. Metode kurva kalibrasi/kurva standard3. Metode standard adisi

Gambar alat HPLC

C. ALAT1. Seperangkat alat HPLC dengan detector UV 254 nm kolom C182. Syringe 25 l3. Pipet ukur 10 ml4. Pipet tetes5. Erlenmeyer 6. Gelas beker 50 ml7. Labu ukur 25 ml8. Corong gelas

D. BAHAN1. Sampel krom2. Larutan standard krom3. Aquabides4. Kertas saring

E. CARA KERJAPanaskan alat HPLC selama beberapa jam sebelum digunakan

untuk menstabilkan alat dan mencuci kolom dengan eluen yang akan digunakan selama pemanasan. Ambil 1 ml larutan Cr(NO3)2 10 ppm dan encerkan menjadi 25 ml sehingga diperoleh larutan A. Kemudian injeksikan larutan A ke dalam tempat sampel HPLC menggunakan eluen aquabides dengan syringe. Catat waktu retensi, intensitas, dan luas puncak utama dari kromatogram standard tersebut. Ambil 1 ml sampel krom kemudian diencerkan sebanyak 25 ml dengan aquabides sehingga diperoleh larutan B. Injeksikan larutan B ke dalam tempat sampel HPLC dengan syringe menggunakan eluen dan kondisi yang sama. Selanjutnya tambahkan 1 ml larutan A ke dalam 9 ml larutan B kemudian dilarutkan menjadi 25 ml dengan aquabides sehingga diperoleh larutan C. Injeksikan larutan C pada HPLC menggunakan eluen dan kondisi yang sama. Analisislah kromatogram yang diperoleh dan hitung kadar krom dalam sampel :( )

= ( )

atau :( )

= ( )

dimana :I = intensitasA = luas permukaan peakC = konsentrasi

PERCOBAAN VIPENENTUAN ETANOL DALAM MINUMAN MENGGUNAKAN

KROMATOGRAFI GAS (GC)

A. TUJUAN PERCOBAAN1. Memahami prinsip kerja kromatografi gas.2. Menganalisis kandungan etanol dalam minuman dengan

menggunakan kromatografi gas, baik secara kualitatif maupun kuantitatif.

B. DASAR TEORI (baca juga bab percobaan HPLC atau kromatografi lainnya)

Prinsip dasar kromatografi gas sama seperti kromatografi lainnya. Perbedaannya hanya pada eluen, dimana pada GC menggunakan eluen gas.

Analisis kualitatif dapat dilakukan dengan mencocokkan waktu retensi dan similarity indeks (SI) kromatogram sampel terhadap kromatogram standar, atau dengan metode spikingsampel terhadap standar.

Analisis kuantitatif dapat dilakukan dengan menggunakan beberapa metode, seperti:1. Metode standar tunggal.2. Metode kurva kalibrasi/kurva standar.3. Metode standar adisi.

Gambar skema sederhana alat GC

C. METODOLOGI PERCOBAAN1. ALAT

1. Seperangkat alat GC (detektor UV 254 nm, kolom C18)2. Syringe 50 L3. Pipet volume 1 mL4. Pipet volume 5 mL5. Labu ukur 5 mL6. Gelas beker 25 mL 7. Pipet tetes8. Glassfin

2. BAHAN1. Larutan standar etanol 98%2. Sampel minuman beralkohol

D. CARA KERJA1. Panaskan alat GC selama beberapa jam sebelum digunakan,

dan mencuci kolom dengan eluen selama pemanasan (mohon ditanyakan kepada operator alat)

2. Siapkan larutan standar, sampel, dan campuran standar+sampel (perbandingan 3:2 dan 6:4) masing-masing 5 mL.

3. Injeksikan larutan standar sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC menggunakan syringe.

4. Catat waktu retensi, intensitas, dan luas permukaan peak utama dari kromatogram.

5. Injeksikan larutan sampel minuman sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC dengan eluen dan kondisi yang sama.

6. Injeksikan larutan campuran sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC dengan eluen dan kondisi yang sama.

7. Analisa kromatogram yang dihasilkan, hitung kadar etanol dalam sampel minuman dan dalam larutan campuran dengan metode standar tunggal.

8. Buat 5 larutan deret standar dengan konsentrasi 5%, 10%, 15%, 20%, dan 25% sebanyak 5 mL.

9. Injeksikan masing-masing standar sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC, dilanjutkan dengan larutan sampel.

10. Analisa data kromatogram. Hitung kadar etanol dalam sampel dengan metode kurva kalibrasi.

Metode standar tunggal

As : respon sinyal standar Ax : respon sinyal sampelCs : konsentrasi standar Cx : konsentrasi sampel

PERCOBAAN VIIANALISA GUGUS FUNGSI MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER INFRA MERAH (IR)

A. Tujuan1. Memahami prinsip kerja dari FTIR2. Menganalisa gugus fungsi yang ada dalam suatu sampel

menggunakan FTIR

B. Dasar TeoriPada spektrofotometer Infra merah (IR) didasarkan pada

interaksi antara radiasi elektromagnetik dengan vibrasi suatu molekul sehingga terjadi eksitasi tingkat energi vibrasi molekul. Besarnya energi ini tergantung pada massa atom tereduksi dari atom-atom yang berikatan, kekuatan, panjang dan jenis ikatan. Tingkat energi ini spesifik terhadap gugus fungsi tertentu sehingga dapat dijadaikan instrumen dalam menganalisis gugus fungsi dalam suatu sampel.

Gambar diagram skema alat FTIR

=

C. Alat

1. Spektrofotometer IR2. Pencetak pellet3. Neraca analitik

D.

E. Bahan

1. KBr2. Anilin3. Asam benzoate

F. Cara Kerja

Haluskan serbuk KBr kemudain diambil 1 mg untuk dibuat pellet menggunakan alat pembuat pellet bertekanan tinggi. Selanjutnya, gerus sampel dan serbuk Kbr dengan perbandingan tertentu sampai homogen. Kemudian diambil 1 mg untuk di buat pellet. Pellet dianalisis menggunakan FTIR pada bilangan gelombang 400-4000 cm-1. Analisa spektra IR

PERCOBAAN VIIIANALISIS STRUKTUR SENYAWA ALKOHOL

MENGGUNAKAN SPEKTROMETER RESONANSI MAGNETIK INTI (NMR)

A. Tujuan Percobaan1. Memahami instrument spektrometer resonansi magnetik inti

untuk analisis kimia2. Mengintepretasikan data analisis dari spektrometer

resonansi magnetik inti untuk analisis struktur suatu senyawa

B. Dasar TeoriUnsur yang mempunyai nomor atom dan nomor massa

ganjil, inti atomnya mempunyai spin inti yang dapat diamati menggunakan spektrometer resonansi magnetik inti (NMR). Sebagai contoh sederhana adalah proton yang mempunyai nomor atom 1, perputaran (spin) pada proton tersebut dapat menimbulkan medan magnet yang disebut momen magnet. Perbedaan energi yang ditimbulkan oleh medan magnet yang kuat dapat dijelaskan dengan persamaan berikut :

= 2dimanaE = perbedaan energi antara spin dan

(keadaan spin pada energi rendah dan spin pada energi tinggi)

= perbedaan giro energi (26753 / detik / Gauss untuk proton)

h = tetapan PlanckHo = kekuatan medan magnet eksternal

sedangkan untuk energi foton dapat dijelaskan sebagai :

=

dimana = frekuensi gelombang elektromagnetik

sehingga

= = = Medan magnet untuk frekuensi resonansi 60 Hz adalah sebesar 1402 Gauss. NMR menyajikan berbagai macam medan magnet yang diplot pada grafik dari absorbsi energi sebagai fungsi kekuatan medan magnet.

Jenis pertama spektometer NMR terdiri dari 4 bagian, yaitu :1. Magnet yang stabil dengan pengontrol yang sensitif dan

dapat menghasilkan medan magnet precise.2. Frekuensi radio (transmitter RF)3. Detektor yang mengukur energi RF absorbsi sampel4. Pencatat (recorder)

Grafik absorbsi terjadi pada ordinat Y sebagai fungsi medan magnet pada axis X. Grafik medan magnet yang kuat akan berada di sebelah kanan (upfield), sedangkan grafik magnet yang lemah akan berada pada bagian kiri (downfield). Absorbansi pada proton yang lebih shielded pada upfield di sebelah kanan. Sebaliknya pada proton yang kurang shieldedakan berada pada downfield berada pada posisi sebelah kiri.

C. Alat dan Bahan1. Spektrometer Resonansi Magnetik Inti2. Komputer pengendali3. Tempat sampel (kuvet)

4. Pelarut TMS5. Metanol

D. Cara Kerja (didampingi operator)1. Menghidupkan alat NMR

a. Hidupkan magnetic console (diperlukan waktu sampai 7 hari agar medan magnet yang dihasilkan stabil)

b. Hidupkan FT NMR (diperlukan waktu 2 jam sebelum dilakukan pengukuran)

c. Hidupkan pompa untuk memutar (spinning sample)d. Hidupkan komputer pengendalie. Tentukan parameter-parameter untuk membuat medan

magnet yang dihasilkan stabil

2. Melakukan pengukuran senyawa standarLakukan pengukuran untuk senyawa sekunder dan bandingkan spektra yang dihasilkan dengan spektra sekunder

3. Melakukan pengukurana. Masukkan sampel alkohol ke dalam tabung kuvet sampai

kira-kira tingginya tabungb. Tambahkan 3 tetes TMSc. Masukkan tabung kuvet ke dalam tempat penyimpanan

sampel dan biarkan selama 15 menit supaya suhu sampel sama dengan suhu pengukuran

d. Pasang tabung kuvet ke dalam tempat pengukuran, pastikan spinning pada posisi eject kemudian masukkan tabung dan putar dengan memutar knop pada posisi spin

e. Tentukan parameter pengukuranf. Analisis spektra yang dihasilkan

PETUNJUK PRAKTIKUM

KIMIA ANALITISA INSTRUMEN D3 FARMASI

Oleh.

Tim analitik dan organic jurusan Kimia

Atmanto H W, Candra P, Tri Martini, Desi Suci H, asisten D3 farmasi

JURUSAN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA

2014

TATA TERTIB PRAKTIKUM

1. Praktikan harus datang 10 menit sebelum praktikum dimulai.

2. Selama praktikum berlangsung, praktikan harus mengenakan jas praktikum.

3. Tidak diperkenankan makan, minum, merokok dan bersenda gurau di laboratorium selama praktikum berlangsung.

4. Setiap acara praktikum, praktikan harus telah membuat jurnal percobaan yang akan dilakukan.

5. Setelah selesai praktikum, praktikan harus membuat laporan sementara yang diperiksa dan ditanda tangani oleh asisten pembimbing.

6. Laporan resmi praktikum, harus dibuat dan diserahkan kepada asisten sebelum acara praktikum berikutnya dimulai.

7. Apabila belum menyerahkan laporan resmi, maka praktikan tidak iperkenankan melanjutkan acara praktikum berikutnya.

8. Apabila praktikan berhalangan hadir / tidak masuk, diwajibkan memberitahukan dan mohon ijin kepada asisten pembimbing dengan surat.

9. Apabila praktikan tidak mengikuti praktikum selama 3 kali percobaan tanpa keterangan yang dapat dipertanggungjawabkan, maka yang bersangkutan tidak diperkenankan melanjuktan praktikum pada semester tersebut.

10. Praktikan wajib menjaga kebersihan laboratorium.

11. Selesai melakukan praktikum, praktikan wajib mengembalikan alat dan bahan.

12. Tiap kelompok wajib membawa kain lap dan kertas tisu.

13. Apabila praktikan merusakkan / memecahkan alat, praktikan harus mengganti sesuai dengan barang yang dirusakkan / ipecahkan.

14. Hal-hal yang belum tercantum dalam tata tertib ini akan diatur berdasarkan kebijaksanaan asisten.

DAFTAR ISI

Percobaan 1

: penentuan kandungan nitrit menggunakan spektrofotometer uv-vis

Percobaan 2

: penentuan kandu logam besi (fe) dalam obat atau makanan menggunakan AAS

Percobaan 3

: ekstraksi dan analisa kromatografi lapis tipis bahan alam

Percobaan 4

: pemisahan komponen senyawa dari ekstrak kunyit (curcuma longa l ) menggunakan kromatografi kolom

Percobaan 5

: penentuan kadar logam krom (Cr) dalam sampel menggunakan HPLC

Percobaan 6

: penentuan etanol dalam minuman menggunakan kromatografi gas (GC)

Percobaan 7

: analisa gugus fungsi menggunakan spektrofotometer infra merah (IR)

Percobaan 8

: Demo dan analisisa NMR

PERCOBAAN I

PENENTUAN KANDUNGAN NITRIT MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

A. TUJUAN PERCOBAAN

Memahami prinsip dasar instrument spektrofotometer UV-Vis

Melakukan preparasi sampel dalam analisis kandungan nitrit menggunakan spektrofotometer UV-Vis

Melakukan analisa kuantitatif nitrit menggunakan spektrofotometer UV-Vis dalam sampel

B. DASAR TEORI

Metode analisis spektrometri adalah metode analisis yang banyak dipakai dalam analisis kimia, seperti pada analisis dengan gelombang ultraviolet dan tampak. Prinsip dasar spektroskopi adalah interaksi antara radiasi elektromagnetik dengan suatu sampel, dan adanya interaksi tersebut menyebabkan terjadinya transisi electron pada molekul ke tingkat energi orbital yang lebih tinggi. Intensitas radiasi yang diserap oleh sampel berhubungan dengan konsentrasi analit dalam suatu larutan sampel. Jumlah radiasi yang diserap oleh suatu larutan sampel digambarkan oleh hukum Lambert-Beer :

A = - Log T = Log 1/T = Log Io/I = bc

A = 2,00 log % T

Dimana :

A = absorbansi

T = transmitansi

B = panjang kuvet (cm )

= absorsivitas molar ( cm-1.mol-1.liter )

C = konsentrasi larutan ( mol/L )

Io = intensitas sinar dating

I = intensitas sinar yang diteruskan

Ada tiga teknik yang biasa dipakai dalam analisis secara spektrometri. Ketiga teknik tersebut adalah :

1. Metode standar tunggal

Metode ini sangat praktis karena hanya menggunakan satu larutan standar yang telah diketahui konsentrasinya (Cstd). Selanjutnya absorbsi larutan standar (Astd) dan absorbsi larutan sampel (Asmp) diukur dengan spektrometri. Dari hukum Beer diperoleh:

Astd = .b.CstdAsmp = .b.Csmp

.b = Astd/Cstd.b = Asmp/Csmp

Sehingga,

Astd/Cstd = Csmp/Asmp Csmp = (Asmp/Astd) x Cstd

Dengan mengukur absorbansi larutan sampel dan standar, konsentrasi larutan sampel dapat dihitung.

2. Metode Kurva Kalibrasi

Dalam metode ini dibuat suatu seri larutan standar dengan berbagai konsentrasi dan absorbansi dari larutan tersebut diukur dengan misalnya AAS atau UV-Vis. Langkah selanjutnya adalah membuat grafik antara konsentrasi (C) dengan Absorbansi (A) yang akan merupakan garis lurus melewati titik nol dengan slope = .b atau slope = a.b. Konsentrasi larutan sampel dapat dicari setelah absorbansi larutan sampel diukur dan diintrapolasi ke dalam kurva kalibrasi atau dimasukkan ke dalam persamaan garis lurus yang diperoleh dengan menggunakan program regresi linear pada kurva kalibrasi.

3. Metoda Adisi Standar

Metoda ini dipakai secara luas karena mampu meminimalkan kesalahan yang disebabkan oleh perbedaan kondisi lingkungan (matriks) sampel dan standar. Dalam metoda ini dua atau lebih sejumlah volume tertentu dari sampel dipindahkan ke dalam labu takar. Satu larutan diencerkan sampat volume tertentu kemudian diukur absorbansinya tanpa ditambah dengan zat standar, sedangkan larutan-larutan yang lain sebelum diukur absorbansinya ditambah terlebih dulu dengan penambahan secara linear (misalnya 1,2,3 dst) larutan standar dan diukur absorbansinya seperti pada larutan yang pertama (lihat gambar kanan) .

Menurut hukum Beer akan berlaku hal-hal berikut:

Ax = k.Ck AT = k(Cs+Cx)

Dimana,

Cx = konsentrasi zat sampel

Cs = konsentrasi zat standar yang ditambahkan ke larutan sampel

Ax = absorbansi zat sampel (tanpa penambahan zat standar)

AT = absorbansi zat sampel + zat standar

Jika kedua rumus digabung maka akan diperoleh Cx = Cs + {Ax/(AT-Ax)}

Konsentrasi zat dalam sampel (Cx) dapat dihitung dengan mengukur Ax dan AT dengan spektrometri. Jika dibuat suatu seri penambahan zat standar dapat pula dibuat grafik antara AT lawan Cs garis lurus yang diperoleh dari ekstrapolasi ke AT = 0, sehingga diperoleh:

Cx = Cs x {Ax/(0-Ax)} ; Cx = Cs x (Ax/-Ax)

Cx = Cs x (-1) atau Cx = -Cs

Gambar : kurva kalibrai (kiri) dan kurva adisi standar (kanan) dalam analisis spektrometri

C. ALAT

1. Spektrofotometer sinar tampak dengan kuvet silika

2. Labu ukur 50 mL:250 mL;500 mL dan 100 m:

3. Pipet ukur 1 mL;5 mL;10 mL

4. Pipet tetes

5. Gelas piala 150 mL;250 mL; 600 mL

6. Erlenmeyer 250 mL

7. Dragball

8. Cawan arloji

9. Neraca analitik

D. BAHAN

1. larutan sampel

2. aquades bebas nitrit

3. sulfanilamide (SA)

4. N-(1-naphthyl) ethylene diamine dihydrochloride (NED dihydrochloride)

5. KMnO4

6. Larutan induk nitrit

7. H2SO4 pekat

8. FAS

9. Na2C2O4

E. CARA KERJA

1. Pembakuan larutan induk nitrit, 250 mg/L NO2-N

a) Pipet 10 mL larutan KMnO4 0,05 N, masukkan kedala Erlenmeyer 250 mL

b) Tambahkan 1 mL H2SO4 pekat

c) Pipet 10 mL larutan induk nitrit, masukkan kedalam larutan KMnO4 dengan cara ujung pipet berada dibawah permukaan larutan KMnO4

d) Diamkan selama 5 menit

e) Hilangkan warna permanganat dengan penambahan larutan FAS 0,05 N dengan penambahan secara bertahap sebanyak 10 mL

f) Titar kelebihan FAS dengan larutan KMnO4 0,05 N sampai sedikit warna merah muda sebagai titik akhir

g) Hitung kandungan NO2-N dari larutan induk dengan rumus berikut :

Dimana:

C adalah kadar NO2-N dalam larutan induk, mg/mL NO2-N

V1 adalah jumlah mL total larutan KMnO4 yang digunakan

N1 adalah normalitas larutan KMnO4

V2 adalah jumlah mL total larutan Na2C2O4 atau jumlah mL total larutan FAS

N2 adalah normalitas larutan Na2C2O4 (atau jumlah mL larutan FAS)

V3 adalah jumlah mL larutan induk NO2-N yang diambil (dititar)

2. Pembuatan kurva kalibrasi

a) Optimalkan spektrofotometer sesuai petunjuk penggunaan alat

b) Ke dalam masing-masing 25 mL larutan standart tambahkan 0,5 mL larutan sufanilamida, kocok dan biarkan 2 menit sampai dengan 8 menit

c) Tambahkan 0,5 mL larutan NED dihirochlorida, kocok dan biarkan selama 10 menit dan segera lakukan pengukuran absorbansi (pengukuran tidak boleh dilakukan lebih dari 2 jam)

d) Baca masing-masing absorbansinya pada panjang gelombang 543 nm (atau serapan maksimumnya)

e) Buat kurva kalibrasinya

3. Prosedur analisis sampel

a) Pipet 10 mL sampel, masukkan kedalam gelas piala 200 mL

b) Tambahkan 0,2 mL larutan sulfanilamid, kocok dan biarkan 2 menit sampai dengan 8 menit

c) Tambahkan 0,2 mL larutan NED dihidrochlorida, kocok dan biarkan selama 10 menit dan segera lakukan pengukuran absorbansi (pengukuran tidak boleh dilakukan lebih dari 2 jam)

d) Baca masing-masing absorbansinya pada panjang gelombang 543 nm

e) Hitung kadar nitrit dalam sampel menggunakan kurva standar

PERCOBAAN II

PENENTUAN KANDUNGAN LOGAM BESI (Fe) DALAM OBAT ATAU MAKANAN MENGGUNAKAN AAS

A. TUJUAN PERCOBAAN

Memahami prinsip dasar instrumen AAS

Melakukan preparasi sampel obat atau makanan dalam analisis logam Fe menggunakan AAS

Menentukan kandungan logam Fe dalam obat atau makanan

B. DASAR TEORI

Prinsip dasar dari AAS adalah dengan cara larutan sampel diaspirasikan ke suatu nyala dan unsur-unsur di dalam sampel diubah menjadi uap atom sehingga nyala mengandung atom unsur-unsur yang dianalisis. Atom-atom akan berada dalam keadaan netral dengan tingkat energy dalam keadaan dasar (ground state). Atom-atom ground state ini kemudian menyerap radiasi yang diberikan oleh sumber radisi yang terbuat dari unsur-unsur yang bersangkutan (misal analisis Cu dengan sinar dari lampu Cu) sehingga terjadi proses eksitasi electron dari atom. Panjang gelombang yang dari sumber radiasi adalah sama dengan panjang gelombang yang diabsorpsi oleh atom dalam nyala.

Penyerapan energi/sinar (absorbansi) oleh atom pada panjang gelombang tertentu akan mengikuti hukum Lambert-Beer, yakni absorbansi berbanding lurus dengan panjang kuvet yang dilalui sinar dan konsentrasi uap atom dalam nyala. Tetapi panjang kuvet dapat dibuat konstan sehingga absorbansi hanya berbanding langsung dengan konsentrasi analit dalam larutan sampel.

Gambar alat AAS

Hukum Lambert-Beer sebagai berikut:

Keterangan:

A = absorbansi

T = transmitansi

b = panjang kuvet (cm)

= absortivitas molar (L/cm.mol)

c = konsentrasi larutan (mol/L)

Io = intensitas sinar datang

I = intensitas sinar yang diteruskan

C. ALAT

1. Spektroskopi Serapan Atom (AAS)

2. Neraca

3. Gelas beker

4. Labu ukur

5. Pipet volume / pipet gondok

6. Pipet tetes

7. Kaca arloji

8. Pengaduk kaca

9. Erlenmeyer

10. Dragball

11. Corong kaca

12. dll

D. BAHAN

1. Larutan induk Fe 1000 ppm

2. Sampel obat/makanan yang mengandung Fe

3. Akuades

4. HNO3 pekat

E. CARA KERJA

1. Preparasi Sampel

a. Destruksi (lebih diutamakan)

ambil 0,005 g sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Tambahkan 10 mL HNO3 pekat kemudian panaskan sampai sampel larut seluruhnya dan larutan menjadi kering/hampir kering. Encerkan sampel dengan larutan HNO3 0,1M menggunakan labu ukur 10 mL.

b. Tanpa Destruksi

Ambil 0,05 gram sampel dan larutkan di dalam beker dengan HNO3 pekat kemudian diencerkan menggunakan labu ukur 10 mL. 1mL larutan tersebut diambil dan diencerkan menggunakan 10 mL labu ukur.

2. Metode Standar Kalibrasi

Buatlah larutan standar Fe 0.0 ; 0.5 ; 1 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 ; 10 ppm dengan mengencerkan larutan induk Fe 100 ppm dengan larutan HNO3 0,1M menggunakan labu ukur 10 mL.

3. Metode Standar Addisi

Buatlah larutan standar Fe 0.0 ; 0.5 ; 1 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 ; 10 ppm dengan mengencerkan larutan induk Fe 100 ppm dengan larutan HNO3 0,1M menggunakan labu ukur 10 mL. Kemudian ditambahkan 1mL larutan sampel pada setiap variasi konsentrasi.

4. Pengukuran Standar dan Sampel

Lakukan pengukuran larutan standar dari metode standar kalibrasi dan standar addisi yang dimulai dari konsentrasi terendah secara berurutan. Catat absorbansi masing-masing larutan standar tersebut. Buatlah grafik standar antara konsentrasi versus absorbansi. Kemudian lakukan pengukuran larutan sampel yang telah dibuat. Apabila absorbansinya berada di luar kurva standar maka lakukanlah pengenceran terhadap larutan sampel. Hitunglah kandungan logam besi (Fe) dalam sampel menggunakan kurva standar.

PERCOBAAN III

EKSTRAKSI DAN ANALISA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS BAHAN ALAM

TUJUAN

1. Mengekstraksi senyawa kimia dari bahan alam dengan menggunakan ekstraksi cair-cair.

2. Menganalisis ekstrak daun nyamplung dengan metode kromatografi lapis tipis.

DASAR TEORI

Ekstraksi merupakan salah satu metode pemisahan kimia (partisi kimia) berdasarkan perbedaan distribusi komponen sampel di dalam dua pelarut dengan sifat kepolaran yang berbeda. Adapun metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut:

1. Cara dingin

a. Maserasi

Proses pengekstrakan dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruang.

b. Perkolasi

Ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan pada temperatur ruang.

2. Cara panas

a. Refluks

Ekstraksi dengan pelarut pada temperature titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

b. Sokletasi

Ekstraksi yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinyu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

Kromatografi adalah suatu metode analitik untuk pemurnian dan pemisahan senyawa-senyawa organik dan anorganik. Metode ini berguna untuk fraksionasi campuran kompleks dan pemisahaan untuk senyawa yang sejenis. Dalam kromatografi, komponen-kompenen terdistribusi menjadi dua fasa, yaitu fasa diam dan fasa gerak. Transfer fasa gerak dan fasa diam terjadi bila molekul-molekul campuran terserap pada permukaan partikel (terserap di dalam pori-pori partikel).

ALAT DAN BAHAN

ALATBAHAN

1. Corong pisah1 buah1. Daun nyamplung10 lembar

2. Pipa kapiler1 buah2. Methanol100 mL

3. Chamber KLT1 buah3. n-heksana57 mL

4. Hot plate1 buah4. Etil asetat4 mL

5. Lampu uv1 buah5. Kloroform16 mL

6. Gelas beaker 250 mL3 buah6. Aseton1 mL

7. Gelas ukur 50 mL1 buah7. Plat KLT3 buah

CARA KERJA

1. Daun nyamplung dimaserasi dengan metanol selama semalaman.

2. Maserat disaring dan ditambahkan n-heksana untuk kemudian diekstraksi dengan menggunakan corong pisah

3. N-heksana dipisahkan dari campuran dan dievaporasi hingga diperoleh ekstrak kental.

4. Ekstak daun nyamplung dilakukan analisa dengan kromatografi lapis tipis dengan eluen yang berbeda. (n-heksana : etil asetat 4:6, kloroform : aseton 9:1, dan kloroform : n-heksana 7:3)

5. Hitung Rf dari masing-masing noda yang tampak.

PERCOBAAN IV

PEMISAHAN KOMPONEN SENYAWA DARI EKSTRAK KUNYIT (Curcuma longa L ) MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI KOLOM

A. TUJUAN

1. Memahami teknik penggunaan kromatografi kolom

2. Melakukan pemisahan komponen-komponen senyawa dari ekstrak kunyit menggunakan kromatografi kolom

3. Melakukan identifikasi kurkumin dari hasil pemisahan secara kromatografi kolom menggunakan KLT

B. DASAR TEORI

Kromatografi adalah suatu metode yang digunakan untuk memisahkan senyawa organik dan anorganik sehingga senyawa tersebut dapat dianalisis dan dapat diambil secara murni. Kromatografi digunakan sebagian digunakan untuk mengetahui komponen apa saja yang terdapat dalam suatu sampel zat padat atau zat cair.

Metode kromatografi adalah cara pemisahan dua atau lebih senyawa atau ion berdasarkan pada perbedaan migrasi dan distribusi senyawa atau ion ion tersebut dalam dua fasa yang berbeda. Dua fasa ini bisa berwujud padat-cair, cair-cair, atau gas-cair. Zat terlarut didalam suatu fasa gerak mengalir pada suatu fasa diam. Fasa diam adalah fasa yang tidak bergerak, sedang kan fasa gerak adalah fasa yang bergerak melalui fasa diam dan membawa komponen komponen senyawa yang akan dipisahkan. Zat analit terlarut yang memiliki afinitas yang lebih besar terhadap fasa gerak akan tertahan lebih lama pada fasa gerak, sedangkan zat terlarut yang afinitas terhadap fasa gerak lebih kecil akan tertahan lebih lama pada fasa diam. Dengan demikian senyawa-senyawa dapat dipisahkan komponen demi komponen akibat perbedaan migrasi di dalam fasa gerak dan fasa diam. Jika terdapat komponen A yang terdistribusi dalam fasa gerak (mobile) dan fase diam (stationary) :

A mobile A stationary

Kd =

f= fraksi mol A dalam fasa gerak =

keakuratan hasil pemisahan dengan metode kromatografi bergantung pada beberapa faktor berikut :

1. Pemilihan absorben sebagai fasa diam

2. Kepolaran pelarut atau pemilihan pelarut yang sesuai sebagai fasa gerak

3. Ukuran kolom (panjang dan diameter)

4. Laju elusi atau kecepatan fasa gerak

Terdapat empat jenis kromatografi : kromatografi cair, kromatografi gas, kromatografi lapis tipis, dan kromatografi kertas. Dalam kromatografi lapis tipis, fasa gerak adalah pelarut sedangkan fasa diamnya adalah plat tipis yang dilapisi absorben tertentu. Kromatografi kolom merupakan jenis kromatografi serapan yang didasarkan pada distribusi zat diantara padatan penyerap (fasa diam) dan pelarut (fasa gerak). Kolom kromatografi dapat berupa tabung kaca yang dilengkapi dengan kran pada salah satu ujungnya. Ukuran kolom biasanya berdiameter 1-5 cm dan panjangnya 10-100 cm. Perbandingan ukuran antara diameter dengan panjang kolom ditentukan oleh kesukaran pemisahan. Pada prinsipnya dalam kromatografi kolom, apabila suatu cuplikan yang merupakan campuran dari beberapa komponen dimasukan melalui bagian atas kolom, maka komponen yang diserap lemah oleh adsorben akan keluar lebih cepat bersama eluen, sedangkan komponen yang diserap kuat akan keluar lebih lama.

C. ALAT

1. Kolom kromatografi1 buah

2. Chamber1 buah

3. Lampu UV1 set

4. Gelas beker 2 buah

5. Gelas ukur 1 buah

6. Pipet volume1 buah

7. Pipet tetes 1 buah

8. Corong gelas 1 buah

9. Dragball 1 buah

10. Pengaduk kaca1 buah

11. Pipa kapiler1 buah

12. Hot plate1 buah

13. Hair dryer1 buah

14. Flakon kaca 10 buah

D. BAHAN

1. Ekstrak kunyit1 tetes

2. CH2Cl2100 mL

3. CH3OH1 mL

4. Plat KLT1 lembar

5. Silika gel 15 gram

E. CARA KERJA

Pembuatan kolom dilakukan dengan cara 15 gram silika gel dilarutkan dengan eluen CH2Cl2 : CH3OH (99 :1) kemudian dimasukan secara perlahan kedalam kolom kromatografi, kondisi kolom harus selalu basah dengan pelarut, kemudian teteskan ekstrak kunyit secara perlahan pada bagian atas kolom ( jangan sampai merusak permukaan kolom yang sudah rata). Lakukan elusi hingga komponen terpisah menjadi beberapa fraksi, tampung fraksi kedalam flakon kaca sesuai dengan perbedaan warna komponen, gabungan fraksi yang mengandung komponen pertama ini diuapkan kemudian ditotolkan pada plat KLT, dimasukan kedalam chamber yang berisi eluen CH2Cl2 : CH3OH (99:1), plat KLT dikeringkan, noda pada plat KLT dilihat menggunakan lampu UV.

PERCOBAAN V

PENENTUAN KADAR LOGAM KROM (Cr) DALAM SAMPEL

MENGGUNAKAN HPLC

A. TUJUAN

1. Memahami prinsip kerja HPLC.

2. Menganalisis kandungan logam krom dalam sampel menggunakan HPLC baik secara kualitatif maupun kuantitatif.

B. DASAR TEORI

High Performance Liquid Chromatography atau kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) merupakan salah satu contoh kromatografi cair. Pemisahan dalam HPLC normalnya lebih efisien dan tidak membutuhkan kolom yang panjang. Proses pemisahan komponen - komponen dalam suatu sampel dengan menggunakan HPLC dibutuhkan tekanan yang cukup tinggi sehingga proses pemisahannya lebih sempurna dan cepat.

Analisis kualitatif dapat dilakukan dengan mencocokkan waktu retensi dan similarity indeks (SI) kromatogram sampel dengan standard yang akan dianalisis atau dengan metode spiking sampel dengan standard yang akan dianalisis. Sedangkan analisis kuantitatif dapat dilakukan dengan menggunakan beberapa metode, seperti :

1. Metode standard tunggal atau spiking standard tunggal

2. Metode kurva kalibrasi/kurva standard

3. Metode standard adisi

Gambar alat HPLC

C. ALAT

1. Seperangkat alat HPLC dengan detector UV 254 nm kolom C18

2. Syringe 25 l

3. Pipet ukur 10 ml

4. Pipet tetes

5. Erlenmeyer

6. Gelas beker 50 ml

7. Labu ukur 25 ml

8. Corong gelas

D. BAHAN

1. Sampel krom

2. Larutan standard krom

3. Aquabides

4. Kertas saring

E. CARA KERJA

Panaskan alat HPLC selama beberapa jam sebelum digunakan untuk menstabilkan alat dan mencuci kolom dengan eluen yang akan digunakan selama pemanasan. Ambil 1 ml larutan Cr(NO3)2 10 ppm dan encerkan menjadi 25 ml sehingga diperoleh larutan A. Kemudian injeksikan larutan A ke dalam tempat sampel HPLC menggunakan eluen aquabides dengan syringe. Catat waktu retensi, intensitas, dan luas puncak utama dari kromatogram standard tersebut. Ambil 1 ml sampel krom kemudian diencerkan sebanyak 25 ml dengan aquabides sehingga diperoleh larutan B. Injeksikan larutan B ke dalam tempat sampel HPLC dengan syringe menggunakan eluen dan kondisi yang sama. Selanjutnya tambahkan 1 ml larutan A ke dalam 9 ml larutan B kemudian dilarutkan menjadi 25 ml dengan aquabides sehingga diperoleh larutan C. Injeksikan larutan C pada HPLC menggunakan eluen dan kondisi yang sama. Analisislah kromatogram yang diperoleh dan hitung kadar krom dalam sampel :

=

atau :

=

dimana :

I = intensitas

A = luas permukaan peak

C = konsentrasi

PERCOBAAN VI

PENENTUAN ETANOL DALAM MINUMAN MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI GAS (GC)

A. TUJUAN PERCOBAAN

1. Memahami prinsip kerja kromatografi gas.

2. Menganalisis kandungan etanol dalam minuman dengan menggunakan kromatografi gas, baik secara kualitatif maupun kuantitatif.

B. DASAR TEORI (baca juga bab percobaan HPLC atau kromatografi lainnya)

Prinsip dasar kromatografi gas sama seperti kromatografi lainnya. Perbedaannya hanya pada eluen, dimana pada GC menggunakan eluen gas.

Analisis kualitatif dapat dilakukan dengan mencocokkan waktu retensi dan similarity indeks (SI) kromatogram sampel terhadap kromatogram standar, atau dengan metode spiking sampel terhadap standar.

Analisis kuantitatif dapat dilakukan dengan menggunakan beberapa metode, seperti:

1. Metode standar tunggal.

2. Metode kurva kalibrasi/kurva standar.

3. Metode standar adisi.

Gambar skema sederhana alat GC

C. METODOLOGI PERCOBAAN

1. ALAT

1. Seperangkat alat GC (detektor UV 254 nm, kolom C18)

2. Syringe 50 L

3. Pipet volume 1 mL

4. Pipet volume 5 mL

5. Labu ukur 5 mL

6. Gelas beker 25 mL

7. Pipet tetes

8. Glassfin

2. BAHAN

1. Larutan standar etanol 98%

2. Sampel minuman beralkohol

D. CARA KERJA

1. Panaskan alat GC selama beberapa jam sebelum digunakan, dan mencuci kolom dengan eluen selama pemanasan (mohon ditanyakan kepada operator alat)

2. Siapkan larutan standar, sampel, dan campuran standar+sampel (perbandingan 3:2 dan 6:4) masing-masing 5 mL.

3. Injeksikan larutan standar sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC menggunakan syringe.

4. Catat waktu retensi, intensitas, dan luas permukaan peak utama dari kromatogram.

5. Injeksikan larutan sampel minuman sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC dengan eluen dan kondisi yang sama.

6. Injeksikan larutan campuran sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC dengan eluen dan kondisi yang sama.

7. Analisa kromatogram yang dihasilkan, hitung kadar etanol dalam sampel minuman dan dalam larutan campuran dengan metode standar tunggal.

8. Buat 5 larutan deret standar dengan konsentrasi 5%, 10%, 15%, 20%, dan 25% sebanyak 5 mL.

9. Injeksikan masing-masing standar sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC, dilanjutkan dengan larutan sampel.

10. Analisa data kromatogram. Hitung kadar etanol dalam sampel dengan metode kurva kalibrasi.

Metode standar tunggal

As : respon sinyal standarAx : respon sinyal sampel

Cs : konsentrasi standarCx : konsentrasi sampel

PERCOBAAN VII

ANALISA GUGUS FUNGSI MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER INFRA MERAH (IR)

A. Tujuan

1. Memahami prinsip kerja dari FTIR

2. Menganalisa gugus fungsi yang ada dalam suatu sampel menggunakan FTIR

B. Dasar Teori

Pada spektrofotometer Infra merah (IR) didasarkan pada interaksi antara radiasi elektromagnetik dengan vibrasi suatu molekul sehingga terjadi eksitasi tingkat energi vibrasi molekul. Besarnya energi ini tergantung pada massa atom tereduksi dari atom-atom yang berikatan, kekuatan, panjang dan jenis ikatan. Tingkat energi ini spesifik terhadap gugus fungsi tertentu sehingga dapat dijadaikan instrumen dalam menganalisis gugus fungsi dalam suatu sampel.

Gambar diagram skema alat FTIR

C. Alat

1. Spektrofotometer IR

2. Pencetak pellet

3. Neraca analitik

D.

E. Bahan

1. KBr

2. Anilin

3. Asam benzoate

F. Cara Kerja

Haluskan serbuk KBr kemudain diambil 1 mg untuk dibuat pellet menggunakan alat pembuat pellet bertekanan tinggi. Selanjutnya, gerus sampel dan serbuk Kbr dengan perbandingan tertentu sampai homogen. Kemudian diambil 1 mg untuk di buat pellet. Pellet dianalisis menggunakan FTIR pada bilangan gelombang 400-4000 cm-1. Analisa spektra IR

PERCOBAAN VIII

ANALISIS STRUKTUR SENYAWA ALKOHOL MENGGUNAKAN SPEKTROMETER RESONANSI MAGNETIK INTI (NMR)

A. Tujuan Percobaan

1. Memahami instrument spektrometer resonansi magnetik inti untuk analisis kimia

2. Mengintepretasikan data analisis dari spektrometer resonansi magnetik inti untuk analisis struktur suatu senyawa

B. Dasar Teori

Unsur yang mempunyai nomor atom dan nomor massa ganjil, inti atomnya mempunyai spin inti yang dapat diamati menggunakan spektrometer resonansi magnetik inti (NMR). Sebagai contoh sederhana adalah proton yang mempunyai nomor atom 1, perputaran (spin) pada proton tersebut dapat menimbulkan medan magnet yang disebut momen magnet. Perbedaan energi yang ditimbulkan oleh medan magnet yang kuat dapat dijelaskan dengan persamaan berikut :

dimanaE = perbedaan energi antara spin dan

(keadaan spin pada energi rendah dan spin pada energi tinggi)

= perbedaan giro energi (26753 / detik / Gauss untuk proton)

h = tetapan Planck

Ho = kekuatan medan magnet eksternal

sedangkan untuk energi foton dapat dijelaskan sebagai :

dimana = frekuensi gelombang elektromagnetik

sehingga

Medan magnet untuk frekuensi resonansi 60 Hz adalah sebesar 1402 Gauss. NMR menyajikan berbagai macam medan magnet yang diplot pada grafik dari absorbsi energi sebagai fungsi kekuatan medan magnet.

Jenis pertama spektometer NMR terdiri dari 4 bagian, yaitu :

1. Magnet yang stabil dengan pengontrol yang sensitif dan dapat menghasilkan medan magnet precise.

2. Frekuensi radio (transmitter RF)

3. Detektor yang mengukur energi RF absorbsi sampel

4. Pencatat (recorder)

Grafik absorbsi terjadi pada ordinat Y sebagai fungsi medan magnet pada axis X. Grafik medan magnet yang kuat akan berada di sebelah kanan (upfield), sedangkan grafik magnet yang lemah akan berada pada bagian kiri (downfield). Absorbansi pada proton yang lebih shielded pada upfield di sebelah kanan. Sebaliknya pada proton yang kurang shielded akan berada pada downfield berada pada posisi sebelah kiri.

C. Alat dan Bahan

1. Spektrometer Resonansi Magnetik Inti

2. Komputer pengendali

3. Tempat sampel (kuvet)

4. Pelarut TMS

5. Metanol

D. Cara Kerja (didampingi operator)

1. Menghidupkan alat NMR

a. Hidupkan magnetic console (diperlukan waktu sampai 7 hari agar medan magnet yang dihasilkan stabil)

b. Hidupkan FT NMR (diperlukan waktu 2 jam sebelum dilakukan pengukuran)

c. Hidupkan pompa untuk memutar (spinning sample)

d. Hidupkan komputer pengendali

e. Tentukan parameter-parameter untuk membuat medan magnet yang dihasilkan stabil

2. Melakukan pengukuran senyawa standar

Lakukan pengukuran untuk senyawa sekunder dan bandingkan spektra yang dihasilkan dengan spektra sekunder

3. Melakukan pengukuran

a. Masukkan sampel alkohol ke dalam tabung kuvet sampai kira-kira tingginya tabung

b. Tambahkan 3 tetes TMS

c. Masukkan tabung kuvet ke dalam tempat penyimpanan sampel dan biarkan selama 15 menit supaya suhu sampel sama dengan suhu pengukuran

d. Pasang tabung kuvet ke dalam tempat pengukuran, pastikan spinning pada posisi eject kemudian masukkan tabung dan putar dengan memutar knop pada posisi spin

e. Tentukan parameter pengukuran

f. Analisis spektra yang dihasilkan