ISSN 1808-9909 Volume 4, Número 2, 2008 PLANT CELL CULTURE & MICROPROPAGATION Cultura de Células & Micropropagação de Plantas Publicação Científica da Associação Brasileira de Cultura de Tecidos de Plantas Plant Cell Cult. Micropropag., Lavras, MG, v. 4, n. 2, p. 55-110, 2008
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ISSN 1808-9909 Volume 4 Nuacutemero 2 2008
PLANT CELL CULTUREamp
MICROPROPAGATION
Cultura de Ceacutelulasamp
Micropropagaccedilatildeo de Plantas
Publicaccedilatildeo Cientiacutefica da Associaccedilatildeo Brasileirade Cultura de Tecidos de Plantas
Plant Cell Cult Micropropag Lavras MG v 4 n 2 p 55-110 2008
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagation editada semestralmente pela Editora daUniversidade Federal de Lavras (Editora UFLA) publica artigos cientiacuteficos da aacuterea de cultura de tecidosde plantas por membros da comunidade cientiacutefica nacional e internacional Com uma tiragem de 600exemplares eacute distribuiacuteda aos membros da ASSOCIACcedilAtildeO BRASILEIRA DE CULTURA DETECIDOS DE PLANTAS (ABCTP) em dia com a anuidade
Para se associar agrave ABCTP consulte o site ltwwwabctpuflabrgt
PERMUTA
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagation deseja fazer permuta com revistas de aacutereas afins
ABCTP
Universidade Federal de Lavras Departamento de BiologiaSetor de Fisiologia Vegetal Caixa Postal 3037 Lavras MG CEP 37200-000
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FICHA CATALOGRAacuteFICA
Diretoria
Presidente Renato Paiva UFLASecretaacuterio Moacir Pasqual UFLA
Secretaacuterio Adjunto Antocircnio Carlos Torres EMBRAPA HortaliccedilasTesoureiro Guilherme Augusto Canella Gomes Benger do Brasil
Comissatildeo Editorial
Editor ChefeRenato Paiva UFLA
Conselho EditorialAntocircnio Carlos Torres EMBRAPA Hortaliccedilas
Consultoria Cientiacutefica(Vol 4 N2)Ana da Silva Ledo EMBRAPA
Antonio Carlos Torres EMBRAPAAparecida Gomes de Arauacutejo UFLA
Elka Fabiana Aparecida Almeida EMBRAPAEvaristo Mauro de Castro UFLA
Fabiano Guimaratildees Silva CEFET Rio VerdeFernanda Pereira Soares MAPA
Jonny Everson Scherwinski Pereira EMBRAPAJoseacute Eduardo Brasil Pereira Pinto UFLANatoniel Franklin de Melo EMBRAPA
Raiacuterys Cravo Nogueira UFPA
Plant Cell Culture amp Micropropagation
ISSN 1808-9909
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-110 2008
CONTEUacuteDO
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia lingulata Ruiz amp Pav em ambiente protegido em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo Acclimatization of micropropagated plants of Heliconia Lingulata Ruiz amp Pav in protected environments as a function of irrigation depth Benito Moreira de Azevedo Eliana Lee Jorge Rocha Thales Viniacutecius de Arauacutejo Viana Albanise Barbosa Mariho Ana Cristina Portugal Pito de Carvalho Denise Vieira Vasconcelos 55
In vitro organogenesis of passion fruit (Passiflora edulis Sims F flavicarpa Deg) affected by irradiance sucrose and explant position Organogecircnese in vitro do maracujazeiro (Passiflora edulis Sims F flavicarpa Degener) afetado por irradiacircncia sacarose e posiccedilatildeo dos explantes Rodrigo Sobreira Alexandre Flaacutevio Alencar D Arauacutejo Couto Joseacute Maria Moreira Dias Wagner Campos Otoni Rita De Caacutessia Mendes Paulo Roberto Cecon 62
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental [Ananas Comosus (L) Merr Var Bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo Substrates evaluation for production of ornamental pineapple [Ananas Comosus (L) Merr Var Bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] plants under greenhouse conditions Francisco Nunes da Cunha Filho Antonio Carlos Torres Joatildeo Maria Charchar
70
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos na multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental in vitro Effect of isopentenyl adenine in four subcultures during the in vitro multiplication of ornamental pineapple shoot Maria do Desterro Mendes dos Santos Joseacute Getuacutelio Da Silva Filho Antonio Carlos Torres 76
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento da cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) cultivada in vitro em diferentes concentraccedilotildees de sacarose e qualidade de luz Photochemical efficiency and growth characteristics of sugar cane (Saccharum officinarum L) plants cultivated in vitro under different sucrose concentrations and light quality Geoacutergia Peixoto Bechara Motheacute Alena Netto Torres Luis Eduardo Campos Crespo Eliemar Campostrini 84
Effects of auxins and cytokinins on in vitro development of Alpinia purpurata K Schum and phenolic compounds production Efeito de auxinas e citocininas no desenvolvimento in vitro de Alpinia purpurata K Schum e produccedilatildeo de substacircncias fenoacutelicas Cristiane Pimentel Victoacuterio Iacinete Pamplona da Cruz Alice Sato Ricardo Machado Kuster Celso Luiz Salgueiro Lage 92
Curva de crescimento atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteis e taninos totais em calos de Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville (Fabaceae-Mimosoideae) Growth curve phenylalanine ammonia-lyase activity and total phenol levels in callus of Stryphnodendron Adstringens (Mart) Coville - (Fabaceae-Mimosoideae) Ana Hortecircncia Fonsecircca Castro Miller Marani Lima Renato Paiva Amauri Alves de Alvarenga Mirelle Oliveira Soacuteter 99
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica L concentraccedilotildees de NH4NO3 e de KNO3 no desenvolvimento de embriotildees Direct somatic embryogenesis of Coffea arabica L concentrations of NH4NO3 and KNO3 on the development of embryos Juliana Costa de Rezende Moacir Pasqual Samuel Pereira de Carvalho Ester Alice Ferreira Flavia Carvalho Santos 105
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 55
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(Recebido em 17 de abril de 2008 e aprovado em 22 de julho de 2008)
ACLIMATIZACcedilAtildeO DE MUDAS MICROPROPAGADAS DE Heliconialingulata Ruiz amp Pav EM AMBIENTE PROTEGIDO EM FUNCcedilAtildeO
DA LAcircMINA DE IRRIGACcedilAtildeO1
ACCLIMATIZATION OF MICROPROPAGATED PLANTS OF Heliconia lingulata Ruiz ampPav IN PROTECTED ENVIRONMENTS AS A FUNCTION OF IRRIGATION DEPTH
BENITO MOREIRA DE AZEVEDO2 ELIANA LEE JORGE ROCHA3 THALES VINIacuteCIUS DE ARAUJO VIANA4ALBANISE BARBOSA MARINHO5 ANA CRISTINA PORTUGAL PINTO DE CARVALHO6
DENISE VIEIRA VASCONCELOS7
1Parte da dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade Federal do Cearaacute pelo primeiro autor para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem2Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC benitoazevedohotmailcom
3Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem (In memoacuteria)4Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC thalesufcbr
5Doutora em Produccedilatildeo Vegetal Pesquisadora CNPqFUNCAP albanisebmgmailcom6Doutora Embrapa Agroinduacutestria Tropical Cx P l 3761 60511-110 Fortaleza CE cristinacnpatembrapabr7Engenheira Agrocircnoma Mestre Universidade Federal do CearaacuteUFC denisevasconceloshotmailcom
RESUMOAs helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com sua beleza
e exotismo constituem uma das maiores riquezas da flora brasileiraEm decorrecircncia da alta demanda do mercado consumidor as mudasvecircm sendo produzidas em escala comercial por meio damicropropagaccedilatildeo uma teacutecnica importante da cultura de tecidosque apresenta diversas etapas A etapa de aclimatizaccedilatildeo eacute a fasemais criacutetica e importante pois se natildeo for bem executada podeproporcionar altos iacutendices de mortalidade e baixas taxas decrescimento e desuniformidade das plantas com consequumlentequeda na produccedilatildeo Para minimizar esse problema e atender agravesexigecircncias do mercado consumidor eacute preciso buscar informaccedilotildeesteacutecnicas e cientiacuteficas sobre o adequado manejo das plantas nafase de aclimatizaccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliaro efeito de distintas lacircminas de irrigaccedilatildeo na aclimatizaccedilatildeo demudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata Ruizamp Pav) A pesquisa foi conduzida em um ambiente protegidopertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical Fortaleza CE(3ordm44 S e 38ordm33 W) Foram analisadas quatro lacircminas de irrigaccedilatildeo1 2 3 e 4 mm de aacutegua As variaacuteveis agronocircmicas avaliadas nosexperimentos foram altura da planta nuacutemero de folhas e diacircmetrodo caule Os resultados dos experimentos evidenciaram o melhordesenvolvimento das mudas micropropagadas de helicocircniaquando irrigadas com lacircmina de 25 mm dia-1
Termos para indexaccedilatildeo Floricultura Heliconia lingulatamanejo de irrigaccedilatildeo
ABSTRACTHeliconias are beautiful and exotic ornamental plants of
the wealthy Brazilian flora Due to a high demand of theconsuming market plants are being produced in a commercial
scale using the technique of micropropagation In this techniqueacclimatization is the most important and critical phase forpromoting high rates of mortality reduced growth and plantuniformity which reduce its production The objective of thiswork was to evaluate the effect of different irrigation depth inthe acclimatization of micropropagated heliconia (Heliconialingulata) The experiments were in a protected environmentlocated at Embrapa Tropical Agroindustry Fortaleza CearaBrazil (3ordm44 S and 38ordm33 W) The agronomic variables evaluatedwere plant height leaf number and stem diameter The resultsshowed the best development of micropropagated heliconia plantsusing water depth of 25 mm day-1
Index terms floraculture Heliconia lingulata irrigationmanagement
INTRODUCcedilAtildeO
As helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com
sua beleza e exotismo assemelham-se a verdadeiras
esculturas lembrando em sua forma piracircmides bicos de
aves cascatas de flores pinhais ou cachos de banana As
helicocircnias constituem uma das maiores riquezas da flora
brasileira Atualmente sabe-se que o mercado internacional
tem proporcionado muitas oportunidades de negoacutecios para
os produtores dessas flores tropicais
A floricultura eacute uma atividade desenvolvida em
geral em ambientes protegidos estufas ou tuacuteneis plaacutesticos
AZEVEDO B M de et al56
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combinando alta produtividade com maior qualidade
garantindo ao agricultor uma colheita satisfatoacuteria e
reduzindo ao maacuteximo as perdas por danos proporcionados
por variaccedilotildees climaacuteticas adversas (GONDIM et al 2004)
De acordo com Terceiro Neto et al (2004) uma etapa
importante na produccedilatildeo de flores e plantas ornamentais
estaacute relacionada agrave utilizaccedilatildeo de mudas de qualidade Nesse
contexto a produccedilatildeo de mudas atraveacutes da
micropropagaccedilatildeo surge como uma alternativa viaacutevel para
obtenccedilatildeo de mudas em escala comercial com alta qualidade
geneacutetica e fitossanitaacuteria em um curto espaccedilo de tempo
atendendo dessa forma agraves necessidades dos produtores
Dentre as etapas da micropropagaccedilatildeo pode-se destacar a
aclimatizaccedilatildeo que eacute a fase mais criacutetica e importante
A irrigaccedilatildeo eacute uma praacutetica de suma importacircncia no
processo de aclimatizaccedilatildeo jaacute que a aacutegua eacute um dos fatores
que mais limitam a produccedilatildeo das plantas Seu manejo ou
seja a quantidade de aacutegua e sua frequumlecircncia de aplicaccedilatildeo eacute
um fator fundamental para o estabelecimento e o adequado
desenvolvimento das mudas micropropagadas Para se
alcanccedilar todos os objetivos da praacutetica de irrigaccedilatildeo que
englobam a maximizaccedilatildeo da produccedilatildeo racionalizaccedilatildeo do
uso da matildeo-de-obra energia aacutegua e fertilizante e a
aplicaccedilatildeo correta da aacutegua eacute imprescindiacutevel adotar um
correto manejo desse sistema (PEREIRA et al 1997)
Para Pieter et al (2007) os efeitos de aplicaccedilotildees
excessivas ou deficitaacuterias satildeo irreversiacuteveis e variam de
acordo com a intensidade e tempo de duraccedilatildeo do
procedimento imposto Nesses casos os processos
fisioloacutegicos da planta relacionados ao crescimento satildeo
afetados e sob condiccedilotildees severas o deacuteficit pode provocar
a murcha permanente do vegetal Conforme a Embrapa
(2007) em regiotildees de calor intenso com inverno ameno
normalmente a exigecircncia das mudas por aacutegua em qualquer
fase de desenvolvimento eacute maior que em regiotildees de clima
temperado Por outro lado alguns tipos de substrato por
terem menor capacidade de retenccedilatildeo de aacutegua exigem que
se aplique mais aacutegua a cada irrigaccedilatildeo ou que se aumente a
frequumlecircncia das mesmas Eacute recomendaacutevel que as lacircminas
sejam aplicadas nas primeiras horas da manhatilde e ao
entardecer uma vez que irrigaccedilatildeo nas horas mais quentes
pode danificar as mudas principalmente quando
fertirrigadas (CESP 2000)
Para Bernardo et al (2005) eacute necessaacuterio conhecer o
comportamento da cultura em funccedilatildeo das diferentes
quantidades de aacutegua fornecidas e identificar as fases de
desenvolvimento de maior consumo de aacutegua e os periacuteodos
criacuteticos quando a falta ou o excesso provocaria quedas de
produccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliar o
efeito de lacircminas de irrigaccedilatildeo sobre o desenvolvimento de
mudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata
Ruiz amp Pav) em fase de aclimatizaccedilatildeo em ambiente
protegido
MATERIAL E MEacuteTODOS
O presente trabalho foi conduzido em um ambiente
protegido pertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical
no periacuteodo de fevereiro a abril de 2006 A aacuterea estaacute situada
no municiacutepio de Fortaleza Cearaacute com as coordenadas
geograacuteficas correspondentes agrave 3ordm44 S 38ordm33 W e 195 m
de altitude De acordo com a classificaccedilatildeo climaacutetica de
Koppen o clima da regiatildeo eacute do tipo Aw caracterizado
como clima tropical chuvoso de savana tropical com a
eacutepoca mais seca no inverno e maacuteximo de chuvas no veratildeo-
outono
O tuacutenel alto de cultivo forccedilado de formato
semicircular e orientaccedilatildeo leste-oeste foi instalado com as
seguintes dimensotildees 45 m de comprimento 5 m de largura
e 2 m de altura comportando aproximadamente uma aacuterea
de 225 msup2 e um volume de 357 m3 Toda a sua estrutura foi
completamente coberto por uma tela de sombreamento
para reduzir 50 da luminosidade
O sistema de irrigaccedilatildeo empregado foi do tipo
microaspersatildeo suspenso sendo constituiacutedo por um
conjunto motobomba uma linha principal uma linha de
derivaccedilatildeo e uma linha lateral de 10 m com emissores
espaccedilados de 24 m e a uma altura de 05 m das bandejas
Os microaspersores foram do tipo nebulizador modelo
Tietze com bocal violeta em posiccedilatildeo invertida a vazatildeo do
emissor era de 43 l h-1 na pressatildeo de 30 kgf cm-2
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 57
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As mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata)
utilizadas nesse experimento foram obtidas atraveacutes do
processo de micropropagaccedilatildeo realizado no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos e Geneacutetica Vegetal da Embrapa
Agroinduacutestria Tropical Na ocasiatildeo do plantio as mudas
apresentavam-se completamente enraizadas e com alturas
variando de 26 a 35 cm
As plantas provenientes do material in vitro foram
retiradas dos frascos e suas raiacutezes lavadas em aacutegua
corrente para a retirada do excesso do meio de cultura
Apoacutes a lavagem as mudas foram colocadas em bandejas e
suas raiacutezes podadas com o auxiacutelio de uma tesoura com o
objetivo de uniformizar o material facilitar o plantio e
estimular o desenvolvimento de um sistema radicular mais
funcional
As mudas foram transplantadas para tubetes de
capacidade volumeacutetrica de 180 cm3 contendo o substrato
formado pela mistura poacute-de-coco seco + huacutemus de
minhoca + solo (PCS+H+S) na proporccedilatildeo de 111
misturado no Laboratoacuterio de Solos da Embrapa e sem
fornecimento de fertilizantes durante o periacuteodo
experimental Para promover o completo umedecimento
do substrato e aumentar a umidade relativa do ambiente
momentos antes da transferecircncia das mudas para os
tubetes o sistema de irrigaccedilatildeo foi acionado
proporcionando assim um ambiente favoraacutevel ao
estabelecimento das mudas Com os recipientes em seus
devidos lugares as mudas foram acondicionadas e
levadas em bandejas ateacute o tuacutenel alto de cultivo forccedilado
iniciando a etapa de plantio As mudas foram inseridas
numa profundidade meacutedia de 5 cm de forma que as raiacutezes
e a parte inicial do caule ficaram enterradas As mudas
foram transferidas para os respectivos substratos no dia
3 de fevereiro de 2006
Para promover melhores condiccedilotildees para o
estabelecimento das mudas do primeiro ao quadrageacutesimo
quinto dia apoacutes o transplantio (DAT) essas receberam
uma irrigaccedilatildeo padratildeo com a aplicaccedilatildeo de uma lacircmina
correspondente a 3 mm de aacutegua parcelada duas vezes ao
dia sendo uma aplicaccedilatildeo pela manhatilde iniciando-se
aproximadamente agraves 9 h e a outra agrave tarde a partir das 16 h
A partir do 45ordm DAT foi adotada a diferenciaccedilatildeo das lacircminas
de irrigaccedilatildeo
O delineamento experimental foi em blocos
casualizados composto por quatro tratamentos e cinco
repeticcedilotildees constituiacutedas por cinco fileiras verticais com
cinco plantas cada totalizando 25 plantas por tratamento
num total de 100 plantas por experimento Os tratamentos
consistiram de quatro niacuteveis de irrigaccedilatildeo equivalentes agraves
lacircminas de 10 (L1) 20 (L
2) 30 (L
3) e 40 (L
4) miliacutemetros de
aacutegua tambeacutem parcelada em duas aplicaccedilotildees diaacuterias agraves 9 h
e agraves 16h
Os dados foram coletados em duas ocasiotildees apoacutes
a diferenciaccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo A primeira coleta
de dados ocorreu em 04 de abril aos 60 dias apoacutes o
transplantio (DAT) e a segunda em 19 de abril (aos 75
DAT) As variaacuteveis analisadas foram nuacutemero de folhas
(NF) altura da planta (AP) e diacircmetro do caule (DC) O
nuacutemero de folhas foi contado visualmente em todas as
mudas transplantadas Todas as folhas foram consideradas
na contagem exceto as totalmente secas A altura da planta
foi medida a partir da base ateacute a abertura das folhas por
meio de um escaliacutemetro graduado em centiacutemetros
subdividido em miliacutemetros O diacircmetro do caule foi
mensurado com o auxiacutelio de um paquiacutemetro digital
graduado em centiacutemetros considerando a base do caule
como padratildeo de contagem
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos aplicativos Microsoft Office Excel e SISVAR
versatildeo 46 (FERREIRA 2003)
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os valores meacutedios mensais de temperatura do ar
umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidade
do vento a 2 m de altura registrados durante o experimento
pela estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade
Federal do Cearaacute (UFC) encontram-se na Tabela 1 cuja
temperatura meacutedia do periacuteodo foi de 23 ordmC e umidade relativa
meacutedia de 93 caracterizando um periacuteodo de temperaturas
amenas
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TABELA 1 Valores meacutedios mensais de temperatura do ar umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidadedo vento a 2m de altura Fortaleza-CE 2006
Mecircs Temperatura (ordmC) U R () Rad solar global (W m-2) Vel do vento (m s-1)
Fevereiro 23 95 1329 173
Marccedilo 24 84 1291 125
Abril 23 99 1162 094
Fonte Estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade Federal do Cearaacute (UFC)
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Tanto o deacuteficit quanto o excesso hiacutedrico afetaram o
crescimento das mudas Isso pode ter ocorrido pelo fato
da deficiecircncia hiacutedrica ocasionar o fechamento dos
estocircmatos diminuindo a concentraccedilatildeo intracelular de CO2
e consequumlentemente gerando decreacutescimo na assimilaccedilatildeo
do mesmo (BERNARDO et al 2005) Jaacute o excesso hiacutedrico
ocasiona a falta de oxigecircnio que provoca a reduccedilatildeo da
fotossiacutentese e prejudica a conversatildeo da mateacuteria orgacircnica
pelos microorganismos em formas soluacuteveis que a planta
possa reutilizar Esses fatores podem proporcionar um
TABELA 2 Anaacutelise de variacircncia das caracteriacutesticas de desenvolvimento altura da planta (AP) diacircmetro do caule(DC) e nuacutemero de folhas (NF) de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das laminas aplicadas aos 60e 75 DAT
(ns) natildeo significativo significativo a 5 de probabilidade pelo teste F
Quadrado meacutedio Variaacutevel FV GL
60 DAT 75 DAT
Bloco 4 03966ns 02946ns
Tratamento 3 23675 31348 AP
Resiacuteduo 12 03593 06279
Bloco 4 06407ns 02754ns
Tratamento 3 16645 41102 DC
Resiacuteduo 12 06222 06728
Bloco 4 04377 01829ns
Tratamento 3 03421 05204 NF
Resiacuteduo 12 0773 01081
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 59
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menor crescimento das plantas devido agrave diminuiccedilatildeo da
eficiecircncia de transformaccedilatildeo de fotoassimilados nessas
condiccedilotildees (REGO et al 2004)
A anaacutelise de regressatildeo indica que o modelo que
melhor se ajustou agrave relaccedilatildeo altura de planta em funccedilatildeo da
lacircmina de irrigaccedilatildeo aos 60 e 75 DAT foi o polinomial
quadraacutetico apresentando valores para R2 de 0997 e 0966
respectivamente (Figuras 1 e 2) Observa-se que aos 60 e 75
DAT a altura da planta aumentou com a lacircmina aplicada ateacute
FIGURA 1 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 60 DATFortaleza-CE 2005 (ns natildeo significativo pelo teste F significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
FIGURA 2 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 75 DATFortaleza-CE 2005 (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
um ponto maacuteximo de 247 e 250 mm dia-1 respectivamente
representando a lacircmina que proporcionou maior
desenvolvimento das mudas em relaccedilatildeo agrave altura da planta
sendo obtida 896 e 1012 cm respectivamente Lacircminas acima
desse valor causaram reduccedilatildeo no crescimento
possivelmente devido ao excesso de aacutegua
Soares et al (1998) salientam que a aacutegua em excesso
proporciona aumentos nos custo de produccedilatildeo e do risco
de lixiviaccedilatildeo da aacutegua e dos nutrientes nela diluiacutedos o que
AP = -05934LI2 + 29273LI + 53519R2 = 0997
700
740
780
820
860
900
940
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1)
Altu
ra d
a pl
anta
(cm
)
AP = -06728L2 + 33294L + 59869
R2 = 0966
80
84
88
92
96
100
104
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Alt
ura
da p
lant
a (c
m)
AZEVEDO B M de et al60
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pode prejudicar o desenvolvimento radicular Aleacutem disso
o excesso de aacutegua compromete os processos de
fotossiacutentese e respiraccedilatildeo os quais envolvem a utilizaccedilatildeo
de determinadas concentraccedilotildees de oxigecircnio (RAVEN et
al 2001) Jaacute em casos de deacuteficit hiacutedrico podem ocorrer
problemas de ordem fisioloacutegica ou seja afetar
negativamente o desenvolvimento das plantas
Em ambos os periacuteodos avaliados observou-se que
as lacircminas aplicadas influenciaram o diacircmetro de caule
das mudas de helicocircnia com valores meacutedios de 97 e 103
cm aos 60 e 75 DAT respectivamente A anaacutelise de
regressatildeo indicou que aos 60 DAT o modelo polinomial
quadraacutetico foi o que melhor representou o diacircmetro do
caule em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo com R2 de 0746
(Figura 3) O maacuteximo valor do diacircmetro de caule (1022
cm) calculado por derivaccedilatildeo da curva de ajuste foi obtido
aplicando-se uma lacircmina de 264 mm dia-1 A partir dessa
lacircmina houve uma diminuiccedilatildeo no diacircmetro de caule
ocasionado possivelmente pelo excesso de aacutegua Aos
75 DAT o modelo matemaacutetico ajustado para relacionar o
diacircmetro de caule em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo
apresentou coeficiente de determinaccedilatildeo (R2) muito baixo
natildeo sendo representativo
Modelos polinomiais quadraacuteticos para explicar o
efeito da lacircmina de irrigaccedilatildeo sobre a altura e diacircmetro de
caule tambeacutem foram obtidos por Pieter et al (2007) na
produccedilatildeo da flor da fortuna por Lopes et al (2005) em
mudas de Eucalyptus grandis W Hill por Pereira et al
(2003) e Recircgo et al (2004) na cultura do crisacircntemo
A anaacutelise de variacircncia (Tabela2) indicou que o
nuacutemero de folhas nas mudas de helicocircnia foi influenciado
pelas lacircminas de irrigaccedilatildeo nas duas eacutepocas analisadas (60
e 75 DAT) com valores meacutedios de 325 e 345 folhas nas
respectivas eacutepocas poreacutem o modelo matemaacutetico para
representar essa relaccedilatildeo apresentou coeficiente de
determinaccedilatildeo (R2) muito baixo e natildeo foi estatisticamente
significativo
As anaacutelises mostraram que aos 60 e 75 DAT a
lacircmina de irrigaccedilatildeo ideal que proporcionou o melhor
desenvolvimento das plantas encontra-se na faixa
compreendida de 247 a 264 mm dia-1 Valores
semelhantes foram obtidos por Gomes et al (2006) que
verificaram que a taxa de evapotranspiraccedilatildeo meacutedia da
Heliconia psittacorum L f x HSpatho-circinada
Aristeg cultivada em ambiente protegido foi de 22 mm
dia-1
FIGURA 3 Diacircmetro de caule de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) aos 60 DAT em funccedilatildeo das lacircminas deirrigaccedilatildeo Fortaleza CE (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
DC= -04111L2
+ 21726L + 73492
R2 = 0746
80
85
90
95
100
105
110
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Diacirc
met
ro d
o ca
ule(
cm)
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 61
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
CONCLUSOtildeES
As lacircminas de irrigaccedilatildeo influenciaram as
caracteriacutesticas de desenvolvimento avaliadas aos 60 e 75
DAT
A altura de planta e o diacircmetro de caule
apresentaram resposta quadraacutetica em relaccedilatildeo agraves lacircminas
aplicadas
Nas condiccedilotildees em que foi desenvolvido este
trabalho para a aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas
de helicocircnia recomenda-se irrigar com 25 mm dia-1 com o
intuito de se obter mudas mais vigorosas para serem
transplantadas para condiccedilotildees de campo
AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pela concessatildeo da bolsa de estudo
Agrave Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaacuteria
CNPAT pela oportunidade de realizaccedilatildeo desta pesquisa
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ALEXANDRE R S et al62
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
(Recebido em 4 de marccedilo de 2008 e aprovado em 1 de setembro de 2008)
IN VITRO ORGANOGENESIS OF PASSION FRUIT (PASSIFLORAEDULIS SIMS F FLAVICARPA DEG) AFFECTED BYIRRADIANCE SUCROSE AND EXPLANT POSITION
ORGANOGEcircNESE IN VITRO DO MARACUJAZEIRO (PASSIFLORA EDULIS SIMSF FLAVICARPA DEGENER) AFETADO POR IRRADIAcircNCIA SACAROSE E
POSICcedilAtildeO DOS EXPLANTES
RODRIGO SOBREIRA ALEXANDRE1 FLAacuteVIO ALENCAR D
ARAUacuteJO COUTO1 JOSEacute MARIA MOREIRA DIAS1WAGNER CAMPOS OTONI2 RITA DE CAacuteSSIA MENDES3 PAULO ROBERTO CECON4
1Professor Doutor Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG rsalexandreclick21combr2Doutor Departamento de Biologia Vegetal Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG3Teacutecnica em Quiacutemica Graduanda em Agronomia Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
4Doutor Departamento de Informaacutetica Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
ABSTRACTThe culture of the tissues has helped considerably the
Passiflora genus development achieving successfully themorphogenic responses in different in vitro explants Theobjective this work was to assess the in vitro morphogenicresponses of hypocotyl segments of passion fruit collected from5 positions (apical sub-apical median sub-basal and basalnamely 1-5 respectively) along the hypocotyls axis and culturedin medium with different concentrations of sucrose and exposedto irradiance levels The experiments were performed as acompletely randomized blocks design with 15 repetitions in 4 x4 x 5 factorial scheme (irradiance x sucrose x explant positions)totalizing 80 treatments on which every experimental parcelwas comprised of a flask containing five hypocotyls Thehypocotyl segment from positions 1 and 3 at their extremedistal ends cultured onto medium of culture with 30 g L-1 sucroseand under 100 micromol m-2 s-1 irradiance enable the greatest numberof buds and shoots differentiated The distal extremity from thesegments of hypocotyl farthest from the cotyledonary nodes(position 1) cultivated in 20 g L-1 sucrose and exposed to 50micromol m-2 s-1 irradiance result in the best condition for shootdevelopment
Index terms Passiflora edulis f flavicarpa in vitro propagationyellow passion fruit
RESUMOA cultura de tecidos tem auxiliado no desenvolvimento
do gecircnero Passiflora alcanccedilando sucesso morfogecircnico emdiferentes explantes in vitro Objetivou-se neste trabalho avaliarrespostas morfogecircnicas in vitro de segmentos de hipocoacutetilo domaracujazeiro coletados de 5 posiccedilotildees (apical sub-apicalmediana sub-basal e basal isto eacute 1-5 respectivamente) ao longodo eixo dos hipocoacutetilos e cultivados em meios com diferentesconcentraccedilotildees de sacarose e expostos a niacuteveis de irradiacircncia Oexperimento foi instalado em blocos casualizados com 15
repeticcedilotildees em esquema fatorial 4 x 4 x 5 (irradiacircncia x sacarose xposiccedilatildeo dos explantes) totalizando 80 tratamentos nos quaistoda parcela experimental foi constituiacuteda de um frasco contendocinco hipocoacutetilos As posiccedilotildees 1 e 3 no extremo distal dossegmentos de hipocoacutetilo cultivados em meio de cultura com 30 gL-1 de sacarose e sob 100 micromol m-2 s-1 de irradiacircncia proporcionamaior nuacutemero de brotos e brotos diferenciados A extremidadedistal dos segmentos de hipocoacutetilo extraiacutedos mais distantes donoacute cotiledonar (posiccedilatildeo 1) cultivados em 20 g L-1 de sacarose eexpostos agrave irradiacircncia de 50 micromol m-2 s-1 resulta na melhorcondiccedilatildeo para o desenvolvimento do broto
Termos para indexaccedilatildeo Passiflora edulis f flavicarpapropagaccedilatildeo in vitro maracujazeiro amarelo
INTRODUCTION
The genus of Passiflora was originated at South
America and comprises more than 580 species most of them
belonging to the Tropical America mainly from Brazil
(OLIVEIRA 1987) Among them the most commercially used
is the passion fruit plant P edulis Sims f flavicarpa Deg
The culture of the tissue has been reaching with
the Passiflora genus answers satisfactory morphogenic in
different in vitro explants (BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1993 1994 MORAN-ROBLES 1979 SCORZA
amp JANICK 1980)
The explant morphogenic capability has
relationship with the polarity effect such factor is
responsible for the shoot emergence Several studies were
researched to assess the effect of the position of the
In vitro organogenesis of passion fruit 63
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
explants extracted from the hypocotyl and roots of Citrus
plantlets during the shoot-bud proliferation (BURGER amp
HACKETT 1986 COSTA et al 2004 DIAS 1998
GARCIA-LUIS et al 1999) as well as the effect of the
polarity in the formation the buds and shoots
(McCLELLAND amp SMITH 1990 YAE et al 1987)
In the in vitro organogenesis of plants of the genus
Passiflora several factors influence among them among
them the irradiance for which different types of explants
were spared for the essays 58 micromol m-2 s-1 in internodes
(MORAN-ROBLES 1979) 20 micromol m-2 s-1 in mesophyll-
derived protoplasts (OTONI et al 1995) 30 or 23 micromol m-
2 s-1 in leaf (KAWATA et al 1995 APPEZZATO-DA-
GLOacuteRIA et al 1999 respectively) 50 micromol m-2 s-1 in
endosperm (MOHAMED et al 1996) 80 30 or 24 micromol m-
2 s-1 in shoot cultures (FARIA amp SEGURA 1997
KURIYAMA et al 1998 BARBOSA et al 2001
respectively) 20-55 micromol m-2 s-1 in cotyledons (HALL et
al 2000) 60 or 54 micromol m-2 s-1 in hipocotyl (COUCEIRO
2002 FELISMINO 2005 respectively) Although different
irradiances have been studied in these works in none of
them the effect of difference irradiances was studied during
the in vitro organogenic process of passion fruit plant
Other important factor for the in vitro
organogenesis is the source of carbon The in vitro
organogenesis works affirm that sucrose has been the most
employed source of carbon in the culture for Passiflora
(APPEZZATO-DA-GLOacuteRIA et al 1999 HALL et al 2000)
its concentration varies from 10 to 30 g L-1
The present work aimed to evaluate the in vitro
morphogenic responses of hypocotyledonary explants of
passion fruit plants throughout the use of different levels
of irradiance sucrose concentration and positions of the
segments of hypocotyls derived from in vitro germinated
plantlets
MATERIALS AND METHODS
Axenic and vigorous etiolated plantlets were
obtained from in vitro germinated seeds and used as
explants sources
In vitro-grown seedlings (25-30 days-old) were
transversally cut into 1-12 cm long were cultured on
different conditions of incubation The explants were
cultured in 300 mL glass flasks (Santa Marina Satildeo Paulo
Brazil) containing 30 mL aliquots of MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) medium salts 100 mg L-1 mio-inositol 10
mg L-1 6-benzylaminopurine (BAP) vitamins of White
(1951) and 80 g L-1 of agar (Isofarreg Brazil) The medium
pH was adjusted to 57 plusmn 01 before the addition of agar
Several concentrations of sucrose (0 10 20 or 30 g L-1)
were added to this medium The culture flasks were sealed
with polypropylene lids and the medium was autoclaved
at 121ordmC 15 kgf cm-2 during 20 minutes
The segments of hypocotyls were cut in five
segments numbered from 1 to 5 follows 1 basal the first
segment adjacent to the root collar 2 sub-apical the
second segment adjacent to the hypocotyl root 3 median
the central segment in relation to the hypocotyl region 4
sub-apical the second segment that is adjacent to the
cotyledonary node 5 - apical the first segment that is
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
Axenic plantlets Segments of hypocotyls in the
medium of culture
DE
PE
FIGURE 1 The segments of hypocotyls numbered from1 to 5 were characterized as follows 1 basal the firstsegment adjacent to the root collar 2 sub-apical thesecond segment adjacent to the hypocotyl root 3 median the central segment in relation to the hypocotylregion 4 sub-apical the second segment that is adjacentto the cotyledonary node 5 - apical the first segment thatis adjacent to the cotyledonary node () ED = distalextremity EP = proximal extremity
ALEXANDRE R S et al64
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
adjacent to the cotyledonary node (Figure 1) In this order
the five hypocotyl explants were placed horizontally on
the media maintaining the proximal extremity towards the
wall of the flask and having the distal extremity facing the
centre of the flask
The flasks were distributed 5 cm far from each other
on the shelves at the growth room to avoid shadowiness
at these flasks The explants were kept at the temperature
of 27 plusmn 2ordmC photoperiod of 168-h lightdark regime and
irradiances of 25 50 100 and 150 micromol m-2 s-1
The irradiance levels were provided by the
utilization of 40 W daylight fluorescent light tubes (Osramreg
Brazil) as follows I - 25 micromol m-2 s-1 (1 light on without
on without dislocating the luminous panel) III - 100 micromol
m-2 s-1 (4 lights on setting the luminous panel at 20 cm
from the shelf surface) IV - 150 micromol m-2 s-1 (5 lights on
setting the luminous panel at 16 cm from the shelf surface)
Copper strings were used to support the fluorescent
incandescent lamps
After 45 days of incubation regeneration frequencies
and number of shoots per explant were assessed which
were formed at the distal and proximal ends The
organogenesis was assessed regarding shoot lengths from
the evaluated positions at the proximal and distal ends
The experiment was performed under complete
randomized blocks design with 15 replicates in a 4 x 4 x 5
factorial scheme (irradiance levels 25 50 100 and 150 igravemol
m-2 s-1 x sucrose concentrations 0 10 20 and 30 g L-1 x
position of the explants at the hypocotyl 1 2 3 4 and 5)
totalizing 80 treatments being the experiment plot
comprised of a flask containing five segments of
hypocotyl Considering the three factors studied were made
by analysis of test average (Tukey) and regression to
concentrations of sucrose and levels of irradiance The
experiments were repeated at least once
RESULTS AND DISCUSSION
In vitro organogenesis at the distal extremity The
differentiation of buds and shoots as influenced by
irradiance levels and distinct positions of explants along
the hypocotyls axis and the mean values and the standard
deviation of the total number of buds and shoots formed
at the distal extremity are shown in figures 2 and 3
respectively
Independently from the other factors at the medium
without sucrose there was no morphogenic response in
the explants (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The number of structures formed at the distal
extremity reached the highest means when there was added
30 g L-1 sucrose to the medium under 100 micromol m-2 s-1
irradiance at the positions 1 and 3 (Figure 3a) Considering
the means of the five explant positions an average of 592
structures per explant was obtained Similarly Couceiro
(2002) has obtained 590 structures per explant at the distal
extremity when cultivating them horizontally under 60 micromol
m-2 s-1 of irradiance in MS medium containing 50 mg L-1 of
BAP and 30 g L-1 of sucrose Garcia-Luis et al (1999) have
shown in Citrange Troyer that despite the explants being
horizontally placed on the medium surface there was an
additional effect of polarity evidenced by the larger number
of shoots differentiated at the apical extremity and the
distance among the cotyledonary node has affected the
morphogenesis These results confirmed the studies of
Ziv et al (1970) and Fari amp Czako (1981) evidencing that
normally in stem and root sections the shoot-buds are
formed at the distal extremity and the roots at the proximal
extremity In the present work structures formed at both
explant extremities but in a higher degree at the distal
extremity
The largest value found for the average length of
the shoot a was 364 mm for the explants that were extracted
farthest from the cotyledonary node (position 1) and
cultured in medium containing 20 g L-1 of sucrose and
submitted to 50 micromol m-2 s-1 of irradiance (Figure 4a)
However in Passiflora actinia the inclusion of auxins to
the medium favoured the development of the shoot-buds
that consequently presented larger lengths when the
hypocotyl segments were cultivated in MS medium
containing 001 mg L-1 de IBA (KOCH et al 2001)
In vitro organogenesis of passion fruit 65
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
In vitro organogenesis at the proximal extremity
The mean values and the standard deviation of the total
number of buds and shoots formed at the proximal extremity
of the explants are presented in Figure 3b Likewise to the
distal extremity the formation of buds and shoots did not
happen when the explants were cultured in medium without
sucrose (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The differentiation and development of the buds
and shoots at the proximal extremity reached the highest
FIGURE 2 In vitro organogenesis in hypocotyl segments that are characterized by the positions that variesfrom 1 to 5 under effect of different irradiance levels A 25 micromol m-2 s-1 B 50 micromol m-2 s-1 C 100 micromol m-2 s-1 andD 150 micromol m-2 s-1 and sucrose concentrations (a 0 b 10 c 20 d 30 g L-1) for 45 days
A 1
2
3
4
5
a
1
2
3
4
5
b 1
2
3
4
5
c 1
2
3
4
5
d
B
a
b
c
d
C
a
b
c
d
D
a
b
c
d
Distal extremity
Proximal extremity
averages (35) at 25 micromol m-2 s-1 of irradiance in MS medium
containing 20 g L-1 sucrose for explants derived from the
position 4 (Figure 3b) Concurrently the work by Baccarin
(1988) pointed out the best bud and shoot proliferation in
explants from the regions closer to the cotyledonary nodes
The presence of BAP in the medium was essential to
the organogenic process as observed in works with Passiflora
spp (BECERRA et al 2004 BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1994 FERNANDO 2005 HALL et al 2000)
ALEXANDRE R S et al66
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Position 1
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 2
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
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0
2
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6
8
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25 50 100 150
Num
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otal
of e
stru
ture
s
Position 4
0
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6
8
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25 50 100 150
Nuacutem
ero
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l de
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as
Position 1
0
1
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5
25 50 100 150
Nuacutem
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l de
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utur
as
10
20
30
Position 2
0
1
2
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25 50 100 150
Nuacutem
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0
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5
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Nuacutem
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0
1
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Nuacutem
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utur
as
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4
6
8
10
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 5
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Sucrose
(g L-1)
a
b
FIGURE 3 Mean values and standard deviation of the total number of structures (buds and shoots) formed at thedistal (a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
In vitro organogenesis of passion fruit 67
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
FIGURE 4 Mean values and standard deviation of the lengths of structures (buds and shoots) formed at the distal(a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
Position 1
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 2
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Com
prim
ento
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brot
os
(mm
)
Position 3
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Leng
th o
f sho
ots
(mm
)
Position 4
0
1
2
3
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25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 5
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
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brot
os
(mm
)
Position 1
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1
2
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Com
prim
ento
de
brot
os(m
m)
10
20
30
Position 2
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os(m
m)
Position 3
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 4
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
o (m
m)
Position 5
0
1
2
3
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Sucrose
(g L-1)
a
b
ALEXANDRE R S et al68
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Independently from the irradiance levels different
sucrose concentrations and explant positions at the
hypocotyl the shoot elongation was considered to be
lower (Figure 4b) than the minimum recommended
(approximately 2-3 cm) for the in vitro rooting process It
highlights the need of previous submission of the explants
to an adequate medium for the elongation process
CONCLUSIONS
The morphogenic response for bud and shoot
formation was remarkably superior at the distal extremity
The maximum concentration among the sucrose
and the irradiance of 100 micromol m-2 s-1 has proportioned
better morphogenic responses at the distal extremity
regardless the position of the explants
The buds and shoots differentiated at the distal
extremity farthest to the cotyledonary node developed
better under 50 micromol m-2 s-1 of irradiance in medium
supplemented with 20 g L-1 sucrose
The use of a carbon source is essential for in vitro
morphogenesis
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(Recebido em 15 de maio de 2008 e aprovado em 2 de setembro de 2008)
AVALIACcedilAtildeO DE SUBSTRATOS NA PRODUCcedilAtildeO DE MUDASDO ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL [Ananaacutes comosus (L) Merr
var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] EM CONDICcedilOtildeESDE CASA DE VEGETACcedilAtildeO
SUBSTRATES EVALUATION FOR PRODUCTION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE[Ananas comosus (L) Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] PLANTS
UNDER GREENHOUSE CONDITIONS
FRANCISCO NUNES DA CUNHA FILHO1 ANTONIO CARLOS TORRES1 JOAtildeO MARIA CHARCHAR1
1Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF francisconunescnphembrapabr torrescnphembrapabr
RESUMOA utilizaccedilatildeo de substratos na aclimataccedilatildeo de mudas
micropropagadas oferece consideraacutevel vantagem no custo e napossibilidade de obtenccedilatildeo de alta porcentagem de sobrevivecircnciados propaacutegulos ex vitro aliado agrave obtenccedilatildeo de mudas maisuniformes vigorosas precoces e com alta qualidade fitossanitaacuteriaAvaliaram-se quatro diferentes tipos de substratos (fibra de cococomercial fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxe substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas) na aclimataccedilatildeode mudas do abacaxizeiro ornamental As variaacuteveis massa frescatotal massa fresca da parte aeacuterea massa fresca de raiacutezescomprimento de raiacutezes altura de plantas e nuacutemero total de folhasforam avaliadas O delineamento experimental utilizado foi ointeiramente casualizado com quatro tratamentos e com quatrorepeticcedilotildees Pela anaacutelise dos resultados o substrato padronizadoda Embrapa Hortaliccedilas o de fibra de coco comercial e o Plantmaxforam os mais eficientes na produccedilatildeo de mudas de abacaxizeiroornamental para fins comerciais O substrato de coco-verde daEmbrapa Hortaliccedilas foi o menos indicado
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatus plantaornamental substrato
ABSTRACTThe use of substrate in the acclimatization of
micropropagated plants offers considerable cost advantages andthe possibility to obtain high percentage of ex vitro survivingplants as well as in the production of uniform vigorous precociousand healthy plants Four different substrates (commercial coconutfiber green-coconut fiber from Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxand the standardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas) wereevaluated for acclimatization of ornamental pineapple plantsTotal fresh mass fresh mass of shoots fresh mass of roots rootlength plant height and total number of leaves were obtainedThe experiment followed a complete randomized design withfour treatments and four replicates The results showed that thestandardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas commercialcoconut fiber and Plantmax were the most efficient for theproduction of ornamental pineapple plants for commercialpurpose Green-coconut fiber substrate from Embrapa was lessindicated
Index terms Ananas comosus var bracteatus ornamental plantgrowth substrate
INTRODUCcedilAtildeO
Os abacaxizeiros ornamentais apresentam flores e
infrutescecircncias de beleza atrativa muito usadas em arranjos
decorativos e ornamentais no Brasil e exterior
representando um segmento de grande potencial para
exportaccedilatildeo (CABRAL 2000 SOUZA et al 2004) No
comeacutercio de flores nativas o abacaxi ornamental jaacute obteve
valores agregados da ordem de 5000 em relaccedilatildeo ao
abacaxi de fruta natildeo ornamental (SOUZA et al 2004)
A propagaccedilatildeo vegetativa do abacaxizeiro ornamental
para fins de comercializaccedilatildeo eacute feita por mudas oriundas da
planta-matildee Poreacutem essa propagaccedilatildeo apresenta o
inconveniente de disseminar agentes patogecircnicos e pragas
pela utilizaccedilatildeo de mudas contaminadas Dentre os patoacutegenos
e pragas mais comuns destacam-se o fungo Fusarium
subglutinans (Wollenw amp Reinking) PE Nelson (TOUSSON
amp MARASAS 1983) e a cochonilha Dysmicoccus brevipes
turfa casca curtida de eucalipto ou Pinus palha de arroz
carbonizada poacute de carvatildeo (GRATTAPAGLIA amp
MACHADO 1998) casca de arroz carbonizada poacute de
casca de coco seco e verde (SANTOS et al 2006) mistura
de areiaxaximhuacutemus (SOUZA JUNIOR et al 2001) solo
esterco bovino Plantmax e composto orgacircnico em
diferentes proporccedilotildees (MOREIRA et al 2006) dentre
outros Entretanto para o genoacutetipo em estudo as
tecnologias disponiacuteveis necessitam de adequaccedilatildeo para
serem mais eficientes e de baixo custo na produccedilatildeo
comercial de mudas
Objetivou-se neste trabalho avaliar quatro
diferentes substratos na produccedilatildeo de mudas do
abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L) Merr var
bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] para fins comerciais
utilizando-se propaacutegulos produzidos in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
Produccedilatildeo de mudas in vitro
Foram utilizados como fonte de explantes
propaacutegulos produzidos in vitro subcultivados a cada 60
dias utilizando-se o meacutetodo proposto por Correia et al
(1999) Os explantes consistiram de brotaccedilotildees com 2 cm de
comprimento transferidos para meio baacutesico de cultura
contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 3 de sacarose e em mg L-1 incluiacuteram-
se i-inositol 100 tiaminaHCl 02 aacutecido nicotiacutenico 005
piridoxinaHCl 005 e glicina 02 O meio de cultura foi
solidificado com 06 de aacutegar e o pH do meio foi ajustado
para 57 O meio foi distribuiacutedo em tubos de ensaio de 25 x
150 mm na quantidade de 125 mL por tubo
Os tubos foram esterilizados em autoclave a 121ordmC
e a 104 Kpa de pressatildeo por 15 minutos Apoacutes a inoculaccedilatildeo
as culturas foram mantidas em cacircmara de crescimento com
fotoperiacuteodo de 16 horas irradiacircncia de 32 mmol m-2 s-1
temperatura de 27oC durante 30 dias
As mudas foram preacute-aclimatizadas mediante
abertura das tampas dos frascos de cultura cinco dias
antes do transplantio para os respectivos substratos
Transplante e desenvolvimento de mudas micropropagadas
Mudas enraizadas e preacute-aclimatizadas de
abacaxizeiro ornamental foram retiradas dos tubos de
cultura e transplantadas em bandejas de isopor com 72
ceacutelulas contendo quatro diferentes substratos utilizados
como tratamentos 1) substrato comercial de fibra de coco
2) substrato de fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas
3) substrato Plantmax e 4) substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas composto por solo de cerrado areia
lavada esterco de gado curtido e palha de arroz
carbonizada em proporccedilotildees de 3111 vv com adiccedilatildeo de
300 g de calcaacuterio dolomiacutetico e de 300 g da formulaccedilatildeo 4-
30-16
Apenas 30 ceacutelulas por bandeja foram
transplantadas com mudas de abacaxizeiro ornamental (uma
muda por ceacutelula) deixando-se 42 ceacutelulas livres (sem planta)
para que natildeo houvesse competiccedilatildeo entre plantas nas
bandejas As bandejas permaneceram cobertas com
envoltoacuterio plaacutestico nos primeiros trecircs dias apoacutes o
transplante
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado com 10 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca
de raiz e tamanho de raiz e 30 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
altura e nuacutemero de folhas Os dados foram coletados aos
90 dias apoacutes o transplantio A anaacutelise de variacircncia do
experimento foi realizada com o auxiacutelio do programa
estatiacutestico SAS Institute Inc (SAS INSTITUTE 1988) e a
CUNHA FILHO F N da et al72
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
diferenciaccedilatildeo de meacutedias pelo teste de Tukey p 001 e
p 005
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
A anaacutelise conjunta do experimento indicou que
existiu homogeneidade de variacircncia natildeo sendo necessaacuteria
a transformaccedilatildeo de dados para a realizaccedilatildeo das anaacutelises A
anaacutelise de variacircncia (Tabelas 1 e 2) indicou que houve
efeito significativo dos diferentes substratos (teste de
Tukey p 005) sobre a massa fresca total massa fresca da
parte aeacuterea altura de plantas e nuacutemero total de folhas e
que natildeo houve diferenccedila significativa entre os diferentes
substratos com relaccedilatildeo agrave massa fresca de raiacutezes e o
comprimento de raiacutezes (Figuras 1 A-F)
Embora natildeo tenha havido diferenccedila significativa
(teste de Tukey p 005) entre os valores de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea nos tratamentos com
os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
comercial de fibra de coco e o Plantmax os valores
absolutos mais elevados desses paracircmetros foram obtidos
com o substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
(Figuras 1 A-B)
No substrato de fibra de coco-verde da Embrapa
Hortaliccedilas as plantas de abacaxizeiro ornamental tiveram
sempre pior performance em produccedilatildeo de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea natildeo se diferenciando
estatisticamente dos valores obtidos com o uso dos
substratos comerciais da Plantmax e de fibra de coco
Entretanto esses substratos foram significativamente
inferiores (teste de Tukey p 005) em relaccedilatildeo aos valores
obtidos com o uso do substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas (Figuras 1 A-B)
Os valores obtidos para as variaacuteveis massa fresca
de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes natildeo diferiram
estatisticamente entre si (teste de Tukey p 005) em
relaccedilatildeo aos quatro tratamentos (substratos analisados)
Os maiores valores absolutos dessas variaacuteveis foram obtidos
para a massa fresca de raiacutezes no substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e para o comprimento de raiacutezes no
substrato comercial de fibra de coco (Figuras 1 C-D)
TABELA 1 Resumo da anaacutelise de variacircncia para massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca deraiacutezes e comprimento de raiacutezes de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio
Fontes de variaccedilatildeo GL Massa fresca total
Massa fresca
da parte aeacuterea Massa fresca
de raiacutezes Comprimento
de raiacutezes
Tipo de substrato 03 673536 518934 02201ns 22382ns
Resiacuteduo 36 115108 80557 01328 13107
Total 39 - - - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade (ns) natildeo significativo
TABELA 2 Resumo da anaacutelise de variacircncia para altura e nuacutemero de folhas de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio Fontes de variaccedilatildeo GL
Altura de plantas Nuacutemero total de folhas
Tipo de substrato 003 1424357 526854
Resiacuteduo 124 50188 16807
Total 127 - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas 73
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
FIGURA 1 Variaacuteveis avaliadas na determinaccedilatildeo de eficiecircncia dos substratos Plantmax Embrapa Hortaliccedilas fibra decoco e fibra de coco-verde na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental -em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo A)massa fresca total B) massa fresca da parte aeacuterea C) massa fresca de raiacutezes D) comprimento de raiacutezes E) altura deplantas e F) nuacutemero total de folhas Meacutedias seguidas da mesma letra natildeo diferem significativamente entre si pelo testede Tukey Plt005
3653+b 0688
7459+ab 1414
9894+a 1229
6254+ab 0789
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a to
tal (
g)
A
3421+b 0664
6822+ab 1152
8930+a 0933
6002+ab 0763
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax Embrapa Hortaliccedilas Fibra de coco Fibra de coco verde
Tipo de substratos
Mas
sa fr
sca
da p
arte
aeacuter
ea (
g)
B
0568 + 0178 a
0298 + 0007 a0363 + 0120 a
0222 + 0039 a
0
02
04
06
08
1
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a de
rai
zes
(g)
C
12000 + 0338 a
12800 + 0387 a
11690 + 0468 a12020 + 0204 a
10
11
12
13
14
15
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Com
prim
ento
de
raiz
es (c
m)
D
11789 + 0412 a13800 + 0406 b
11088 + 0381 a
8797 + 0385 c
02468
1012141618
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Alt
ura
de p
lant
as (c
m)
E
5882 + 0173 c
7727 + 0191 b8818 + 0259 a
8143 + 0294 ab
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Nuacutem
ero
tota
l de
folh
as
F
Houve diferenccedila significativa (teste de Tukey
p 005) entre os valores meacutedios obtidos para a altura de
plantas e para o nuacutemero total de folhas nos quatro
tratamentos avaliados As plantas tiveram
significativamente maior desenvolvimento em altura no
substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas Natildeo houve
diferenccedila significativa entre os valores meacutedios em altura
de plantas nos substratos comerciais da Plantmax e de
fibra de coco Esses poreacutem foram diferentes dos valores
obtidos no substrato de fibra de coco-verde que
proporcionou significativamente o menor crescimento das
plantas (Figura 1 E)
Maiores meacutedias da variaacutevel nuacutemero total de folhas
foram obtidas com a utilizaccedilatildeo do substrato padronizado
CUNHA FILHO F N da et al74
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
da Embrapa Hortaliccedilas e do Plantmax Natildeo houve diferenccedila
significativa entre os valores meacutedios do nuacutemero total de
folhas nos substratos Plantmax e de fibra de coco comercial
mas esses diferiram estatisticamente dos obtidos no
substrato fibra de coco-verde O substrato de fibra de coco-
verde foi o que propiciou os menores valores da variaacutevel
nuacutemero total de folhas (Figura 1 F) Esses resultados
contradizem os relatados por Carrijo et al (2002) que
verificaram que os substratos contendo fibra de coco-verde
satildeo os mais indicados para produccedilatildeo de mudas de
hortaliccedilas e ornamentais em cultivo sem solo Correia et al
(2003) natildeo observaram diferenccedila significativa entre os
valores da massa fresca de raiacutezes de mudas de cajueiro
anatildeo precoce crescidas em substratos com adiccedilatildeo de poacute
de coco-verde ou de poacute de coco-maduro Santos et al
(2006) relataram que os substratos orgacircnicos contendo as
combinaccedilotildees de fibras de coco seco ou verde
proporcionaram baixo desenvolvimento na aclimatizaccedilatildeo
de mudas Heliconia rostrata Ruiz amp Pav provenientes
da micropropagaccedilatildeo Poreacutem Bezerra et al (2001) discordam
dos autores acima mencionados informando que os
substratos contendo fibras de coco-verde ou seco foram
os mais indicados respectivamente para o enraizamento
de mudas de crisacircntemo (Chrysanthemum sp) e de violeta
africana (Saintpaulia ionantha H Wendl)
Tambeacutem substrato contendo casca de arroz
carbonizada tem sido utilizado na produccedilatildeo de mudas
micropropagadas Weber et al (2003) relataram que o
substrato contendo esse componente misturado com
vermiculita e vermicomposto em proporccedilotildees de 111 foi a
melhor opccedilatildeo para aclimataccedilatildeo de mudas de abacaxizeiro
ornamental oriundas da cultura in vitro e transplantadas
para tubetes Esses autores ainda observaram que o uso
da mistura contendo casca de arroz carbonizada e poacute de
casca de coco em proporccedilotildees de 11 resultou em baixo
desempenho de mudas do abacaxizeiro ornamental em
funccedilatildeo da maacute agregaccedilatildeo fiacutesica baixa retenccedilatildeo de aacutegua e
limitaccedilatildeo nutricional da planta
Neste trabalho os resultados com o uso de substrato
contendo casca de arroz carbonizada sem a presenccedila de
fibras de coco seco ou verde tambeacutem proporcionou
excelente desenvolvimento de mudas do abacaxizeiro
ornamental o que indica uma provaacutevel incompatibilidade
das fibras de coco com outros componentes de substratos
na produccedilatildeo de mudas dessa ornamental
Natildeo houve diferenccedila significativa entre valores de
massa fresca de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes de
abacaxizeiro ornamental em relaccedilatildeo aos quatro substratos
analisados Poreacutem o maior valor absoluto em massa fresca
de raiacutezes foi obtido no substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas enquanto que o maior valor em comprimento
de raiacutezes no substrato comercial de fibra de coco
Com relaccedilatildeo agraves demais variaacuteveis analisadas
observou-se que a massa fresca total e a massa fresca da
parte aeacuterea tiveram performances mais significativas nos
substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas comercial
de fibra de coco e o da Plantmax enquanto que a altura de
plantas foi significativamente mais elevada no substrato
padronizado da Embrapa Hortaliccedilas e o nuacutemero total de
folhas mais significativo nos substratos padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e o Plantmax
CONCLUSOtildeES
Os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
fibra de coco comercial e o da Plantmax satildeo os mais
indicados para a produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro
ornamental para fins comerciais
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) as bolsas concedidas
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SANTOS M do D M dos et al76
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(Recebido em 8 de abril de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFEITO DE ISOPENTENILADENINA POR QUATROSUBCULTIVOS NA MULTIPLICACcedilAtildeO DE BROTACcedilOtildeES
DE ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL IN VITRO
EFFECT OF ISOPENTENYL ADENINE IN FOUR SUBCULTURES DURING THEIN VITRO MULTIPLICATION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE SHOOT
MARIA DO DESTERRO MENDES DOS SANTOS1 JOSEacute GETUacuteLIO DA SILVA FILHO2ANTONIO CARLOS TORRES3
1Bioacuteloga MSc em Botacircnica Departamento de Botacircnica Universidade de BrasiacuteliaUnB Cx P 4457 709190-970 Brasiacutelia DF mariacnphembrapabr2Engenheiro Agrocircnomo Especialista em Biotecnologia de Plantas Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF jgetuliocnphembrapabr3Engenheiro Agrocircnomo Embrapa Hortaliccedilas CxP 218 70359-970 Brasiacutelia DF
RESUMOObjetivou-se no presente trabalho foi o de avaliar o
efeito da adiccedilatildeo de concentraccedilotildees de 2iP em diferentes subcultivosna micropropagaccedilatildeo do abacaxizeiro ornamental var bracteatusBrotaccedilotildees com aproximadamente 10 cm de tamanho oriundosda cultura in vitro foram utilizados como explantes Os explantesforam inoculados em meio baacutesico liquido contendo sais mineraisMS 3 sacarose e em mg L-1 i-inositol 100 tiaminaHCl 01piridoxina HCl 05 aacutecido nicotiacutenico 005 glicina 20 formulaccedilatildeoliacutequida A esse meio foram adicionados concentraccedilotildees de 2iP(00 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro subcultivos(30 60 90 e 120 dias) Maacuteximo nuacutemero de brotaccedilotildees por explante(139) foi obtido em meio baacutesico com 16 mg L-1 de 2iP e no quartosubcultivo aos 120 dias Apoacutes a transferecircncia de brotaccedilotildeesindividualizadas para meio contendo ANA (00 05 10 15 2025 30 e 40 mg L-1) verificou-se a diferenciaccedilatildeo de raiacutezesadventiacutecias na porccedilatildeo basilar dos explantes
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatusmicropropagaccedilatildeo cultivo in vitro
ABSTRACTThe objective of this work was to evaluate the effect of
2iP addition in different subcultures during the micropropagationof ornamental pineapple var bracteatus Shoots with 10 cm inlength originated from in vitro culture were used as explantsThe explants were inoculated in liquid basal medium containingMS salts 3 sucrose 100 mg L-1 i-inositol 01 mg L-1
thiamineHCl 05 mg L-1 pyridoxineHCl 005 mg L-1 nicotinicacid and 20 mg L-1 glycine Different concentrations of 2iP (0005 10 and 20 mg L-1) in combination with four subcultures (3060 90 e 120 days) were used Maximum number of shoot formedper explant (139) was observed in basal medium with 16 mg L-1
2iP at the fourth subculture (120 days) After transferringindividual shoots to medium containing different concentrationsof NAA (00 05 10 15 20 25 30 and 40 mg L-1) mediaadventitious root formed in the basal portion of the explants
Index terms Ananas comosus var bracteatus micropropagationin vitro culture
INTRODUCcedilAtildeO
O abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L)
Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] eacute uma
planta de propagaccedilatildeo vegetativa com grande potencial
ornamental (D EECKENBRUGGE amp LEAL 2003) A
qualidade fitossanitaacuteria do campo de produccedilatildeo dessa
espeacutecie depende do material utilizado para sua propagaccedilatildeo
Assim sendo pode haver acuacutemulo entre plantios
sucessivos de patoacutegenos que satildeo transmitidos de um ciclo
de produccedilatildeo a outro via mudas contaminadas A
micropropagaccedilatildeo em larga escala de mudas sadias via
cultura de tecidos eacute uma estrateacutegia que possibilita
contornar a limitaccedilatildeo de mudas com alta qualidade
fitossanitaacuteria principalmente isentas de fusariose
(REINHARDT amp CUNHA 1999)
Em espeacutecies do gecircnero Ananaacutes os explantes mais
utilizados satildeo as gemas axilares das mudas do tipo coroa
ou filhote embora outros tipos de mudas possam ser usadas
A vantagem do uso de gemas axilares incluem boa
sobrevivecircncia em meio de cultura e com a quebra da
dominacircncia apical do broto haacute estiacutemulo para a formaccedilatildeo de
gemas muacuteltiplas (DREW 1980) A adiccedilatildeo de
fitorreguladores em geral eacute necessaacuteria para suprir as
possiacuteveis deficiecircncias dos niacuteveis endoacutegenos de hormocircnios
nos explantes in vitro Assim sendo recomenda-se a
combinaccedilatildeo de uma auxina com uma citocinina (SKOOG amp
MILLER 1957) Em geral a benzilaminopurina (BAP)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 77
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(ALMEIDA et al 2002 BARBOZA et al 2001 BE amp
DEBERG 2006) ou essa substacircncia em combinaccedilatildeo auxina
e aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (COSTA amp ZAFFARI 2005
GUERRA et al 1999) tecircm sido a(s) substacircncia(s)
reguladora(s) de crescimento mais usada(s) na formaccedilatildeo
de brotaccedilotildees de Ananas sp Entretanto em abacaxizeiro
ornamental a inclusatildeo de BAP no meio pode induzir o
aparecimento de variaccedilotildees somaclonais (RODRIGUES et
al 2007 SANTOS et al 2008) Tambeacutem a combinaccedilatildeo de
cinetina ANA e AIB (aacutecido indolbutiacuterico) foi empregada
para proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees em abacaxizeiro (KISS et
al 1995 MATHEWS amp RANGAN 1979)
Dada a escassez de informaccedilotildees sobre o efeito de
isopenteniladenina (2iP) na propagaccedilatildeo in vitro de espeacutecies
do gecircnero Ananas neste trabalho procurou-se otimizar a
concentraccedilatildeo de 2iP na produccedilatildeo de brotaccedilotildees de
abacaxizeiro ornamental em diferentes subcultivos e seu
subsequumlente enraizamento
MATERIAL E MEacuteTODOS
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Brotaccedilotildees
individualizadas com aproximadamente 1 cm de
comprimento estabelecidas a partir da cultura de gemas
axilares de mudas tipo coroa foram utilizadas como fonte
de explantes Os explantes foram cultivados em meio baacutesico
liacutequido contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) 3 sacarose e em mg L-1 tiaminaHCl 01
piridoxinaHCl 005 aacutecido nicotiacutenico 005 e glicina 20
(SANTOS 2008) O delineamento experimental empregado
foi o inteiramente ao acaso em esquema fatorial 4x4
referentes concentraccedilotildees de 2iP e subcultivos Ao meio
baacutesico foram adicionadas quatro concentraccedilotildees de BAP
(0 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro
subcultivos (30 60 90 e 120 dias) O pH dos meios foi
ajustado a 57 Foram utilizadas nove repeticcedilotildees por
tratamento sendo que cada parcela foi constituiacuteda por um
explante Inicialmente os explantes foram inoculados em
frascos de 250 mL de capacidade com 40mL de meio No
segundo subcultivo os propaacutegulos foram transferidos para
frascos idecircnticos com meio receacutem-preparado No terceiro
e quarto subcultivos foram utilizados frascos de 1000 mL
com 100 mL de meio As culturas foram mantidas em sala
de crescimento sob fotoperiacutedo de 16 horas com densidade
de fluxo de foacutetons de 32 mmol m-2 s-1 a 27plusmn2oC Em cada
subcultivo foi determinado o nuacutemero e a massa de mateacuteria
fresca das brotaccedilotildees formadas por explante inoculado
Os dados foram transformados para 1X e as
anaacutelises estatiacutestica foram realizadas com o auxiacutelio dos
programas SASStat e SISVAR versatildeo 301 Aplicou-se a
anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo grau para
avaliar o efeito da concentraccedilatildeo de 2iP sobre o nuacutemero e
massa da mateacuteria fresca de brotaccedilotildees em cada subcultivo
Enraizamento das brotaccedilotildees Foram utilizadas
brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental regeneradas in vitro
Os explantes com 10 a 20 cm de comprimento foram
inoculados em tubos de ensaio (25x150 mm) com 20 ml de
meio baacutesico 07 de aacutegar suplementado com diferentes
concentraccedilotildees de aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (00 05
10 15 20 25 30 e 40 mg L-1)
Apoacutes inoculaccedilatildeo as culturas foram mantidas em
cacircmara de crescimento nas condiccedilotildees descritas
anteriormente Apoacutes 30 dias da inoculaccedilatildeo foram avaliados
a percentagem de brotaccedilotildees enraizadas nuacutemero e massa
fresca das raiacutezes desenvolvida por brotaccedilatildeo altura da
planta e massa da mateacuteria fresca da parte aeacuterea O
delineamento experimental foi inteiramente casualizado com
29 repeticcedilotildees Cada parcela foi constituiacuteda de um tubo de
ensaio com um explante
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos programas SASStat e SISVAR versatildeo 301
Aplicou-se a anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo
grau para avaliar a variaccedilatildeo das variaacuteveis em funccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de ANA
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Na proliferaccedilatildeo de
brotaccedilotildees observou-se que os fatores concentraccedilatildeo de
2iP e o subcultivo isoladamente e em interaccedilatildeo afetam
significativamente (P 005) as variaacuteveis nuacutemero e massa
da mateacuteria fresca das brotaccedilotildees formadas A equaccedilatildeo que
SANTOS M do D M dos et al78
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
melhor se ajustou para explicar o efeito de 2iP nos diferentes
subcultivos para a variaacutevel nuacutemero de brotaccedilotildees foi a de
segundo grau (Figuras 1 e 2) A multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees
de abacaxizeiro ornamental in vitro eacute dependente de 2iP
no meio de cultura O nuacutemero de brotaccedilotildees por explante
responsivo de tamanho maior que 05 cm de comprimento
foi pequeno na primeira subcultura (30 dias) em todas as
concentraccedilotildees de 2iP testadas aumentando-se nos demais
subcultivos Aos 30 60 90 e 120 dias estimou-se que a
concentraccedilatildeo de 16 mg L-1 de 2iP produziu o maacuteximo de
brotaccedilotildees por explante inoculado respectivamente 20 42
64 e 139 (Figuras 1 e 2) Esses resultados estatildeo em
consonacircncia com a importacircncia da citocinina em vaacuterios
aspectos do crescimento e desenvolvimento da planta
tais como divisatildeo celular (SKOOG amp MILLER 1957) quebra
da dominacircncia apical e desenvolvimento das gemas laterais
(SACHS amp THIMMAN 1964) induccedilatildeo e multiplicaccedilatildeo de
brotaccedilotildees in vitro (GRATTAPAGLIA amp MACHADO
1998 JOSHI amp DHAWAN 2007 MURASHIGE 1974)
Tambeacutem o tipo de citocinina e a sua concentraccedilatildeo satildeo
determinantes no processo de micropropagaccedilatildeo
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998 MURASHIGE
1974) Em Ananas sp o BAP tem sido preferencialmente
usado na proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees in vitro (ALMEIDA
1994 ALMEIDA et al 2002 CRUZ 2000 ESCALONA et
al 1999 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
GUERRA et al 1999 MATHEWS et al 1976) Entretanto
Kiss et al (1995) relataram que tanto o BAP quanto a
cinetina foram efetivos para formaccedilatildeo de brotaccedilotildees em
abacaxizeiro comercial No presente trabalho o 2iP foi
adicionado ao meio devido a sua maior atividade bioloacutegica
comparada com o BAP e a cinetina (MURASHIGE 1974)
Tambeacutem para a variaacutevel massa da mateacuteria fresca
foi constatada a resposta quadraacutetica das doses de 2iP
(Figuras 3 e 4) Pelas equaccedilotildees de regressatildeo infere-se
que o 2iP estimula o acuacutemulo de massa fresca nas
brotaccedilotildees com o maacuteximo obtido com a concentraccedilatildeo de
18 mgL-1 desse fator nos subcultivos de 30 60 e 120 dias
com a produccedilatildeo de respectivamente 9 17 e 77 g por
explante inoculado No terceiro subcultivo aos 90 dias a
concentraccedilatildeo de 17 gL-1 de 2iP produziu o total de
biomassa de 45 g por explante Essa observaccedilatildeo estaacute em
concordacircncia com os trabalhos do efeito beneacutefico de
citocininas na produccedilatildeo de parte aeacuterea ateacute uma
concentraccedilatildeo oacutetima acima da qual seu excesso eacute inibitoacuterio
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1988)
FIGURA 1 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
y)dias 60(14585x = -247661x + 31353 +
R 20999 =
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e bo
taccedilotilde
es p
or
expl
ante
s
30 dias
60 dias
y (60 dias) = 14585x2 - 47661x + 31353
R2 = 0999
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 79
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 2 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
FIGURA 3 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
FIGURA 4 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa mateacuteria fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
y)dias 90(22847x = -2 73196x + 55784
R209477 =
y)dias 120(5072x = -21623x + 9464 +
R20954 =
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero m
eacutedio
de
brot
accedilatildeo
por
expl
ante
90 dias
120 dias
y (120 dias) = 50725x2 - 1623x + 9464
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
R2 = 0954
y(60 dias) = -38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (
g)
30 dias
60 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (60 dias) = - 38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
y)dias 90(12255x = -243239x + 75847 +
R209717 =
y)dias 120(19075x = -271029x + 11295 +
R2096 =
0
10
2030
40
50
6070
80
90
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (g
)
90 dias
120 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (120 dias) = 19075x2 - 71029x + 11295
R2 = 096
y (90 dias) = 12255x2 - 43239x + 75847R2 = 09717
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e br
otaccedil
atildeo p
or e
xpla
nte
SANTOS M do D M dos et al80
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
Enraizamento das brotaccedilotildees A induccedilatildeo
emergecircncia e alongamento das raiacutezes ocorreram em todos
os tratamentos Em meio sem regulador de crescimento
os propaacutegulos apresentaram raiacutezes desenvolvendo-se
de maneira pontual na extremidade seccionada dos
explantes (Figura 5) Em meio com ANA as raiacutezes
desenvolveram-se na porccedilatildeo basilar dos propaacutegulos em
forma de roseta Em geral a auxina eacute utilizada na fase de
enraizamento de propaacutegulos oriundos da cultura in vitro
de Ananas (BARBOZA et al 2004 CORREIA et al
2000 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
PRAXEDES et al 2001 TENG 1997) Entretanto o
enraizamento pode ser feito em meio sem regulador de
crescimento (KISS et al 1995 ZEPEDA amp SAGAWA
1981) A utilizaccedilatildeo de uma auxina na fase de enraizamento
induz agrave formaccedilatildeo de um sistema radicular mais
pronunciado que facilitaraacute a fase de aclimataccedilatildeo (Figura
5) Observou-se que a concentraccedilatildeo de ANA afetou
significativamente (P 005) o nuacutemero de raiacutezes massa
fresca das raiacutezes e da parte aeacuterea A altura da planta natildeo
foi afetada pela concentraccedilatildeo de ANA sendo o valor
de F natildeo significativo
Constatou-se uma relaccedilatildeo quadraacutetica entre as
variaacuteveis nuacutemero e massa da mateacuteria fresca das raiacutezes e da
parte aeacuterea e a concentraccedilatildeo de ANA A estimativa da
proliferaccedilatildeo de raiacutezes baseando-se no nuacutemero de raiacutezes
por explante aumentou com a concentraccedilatildeo de ANA
atingindo um maacuteximo de 119 com 22 mg L-1 de ANA
Concentraccedilotildees acima de 22 mg L-1 tendem a apresentar
um efeito inibitoacuterio na produccedilatildeo de raiacutezes (Figura 6)
Tambeacutem a massa da mateacuteria fresca das raiacutezes aumentou
com a concentraccedilatildeo de ANA com um maacuteximo de 023 g
obtida com a concentraccedilatildeo de 24 mg L-1 de ANA (Figura
7) Essa tendecircncia foi observada para a massa fresca da
parte aeacuterea onde a estimativa maacutexima da produccedilatildeo de
biomassa foi de 046 g por explante em meio com 19 mg L-1
de ANA (Figura 8)
Com relaccedilatildeo agrave altura das plantas natildeo houve
diferenccedila significativa entre as diferentes concentraccedilotildees
de ANA e essa variaacutevel
FIGURA 5 Brotaccedilotildees enraizadas em meio MS contendo diferentes concentraccedilotildees de ANA (mg L-1) aos 30 dias apoacutesa inoculaccedilatildeo
00 05 10 15 20 25 30 40
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 81
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 6 Variaccedilatildeo do nuacutemero de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 7 Variaccedilatildeo na massa da mateacuteria fresca de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 8 Variaccedilatildeo da massa de mateacuteria fresca da parte aeacuterea por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
y = -1202x2 + 5291x + 61504
R2 = 06865
0
2
4
6
8
10
12
14
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Nordm
de r
aiacuteze
s
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00282x2 + 01359x + 00704
R2 = 07573
0
005
01
015
02
025
03
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Mas
sa fr
esca
das
raiacutez
es
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00363x2 + 01407x + 03255
R2 = 0857
0
01
02
03
04
05
06
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Mas
sa fr
esca
da
part
e aeacute
rea
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
SANTOS M do D M dos et al82
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
CONCLUSOtildeES
No meio liacutequido contendo MS vitaminas 3 de
sacarose e 16 mg L-1 de 2iP obteacutem-se uma estimativa meacutedia
de 139 brotaccedilotildees por explante inoculado no final do quarto
subcultivo (120 dias)
Maior nuacutemero de raiacutezes adventiacutecias por explante eacute
estimado com a concentraccedilatildeo de 22 mg L-1 de ANA
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) pelas bolsas concedidas
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MOTHEacute G P B et al84
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
(Recebido em 25 de marccedilo de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFICIEcircNCIA FOTOQUIacuteMICA E CARACTERIacuteSTICAS DECRESCIMENTO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR (Saccharum officinarum L)CULTIVADA IN VITRO EM DIFERENTES CONCENTRACcedilOtildeES DE
SACAROSE E QUALIDADE DE LUZ
PHOTOCHEMICAL EFFICIENCY AND GROWTH CHARACTERISTICS OF SUGARCANE (Saccharum officinarum L) PLANTS CULTIVATED IN VITRO UNDER
DIFFERENT SUCROSE CONCENTRATIONS AND LIGHT QUALITY
1Bioacuteloga Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000 28015-620
Campos dos Goytacazes RJ georgiabecharayahoocombr2Engenheiro Agrocircnomo Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA
Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000
28015-620 Campos dos Goytacazes RJ alenauenfbr crespouenfbr campostuenfbr
RESUMODentre os diversos produtos agriacutecolas cultivados no
Estado do Rio de Janeiro a cana-de-accediluacutecar (Saccharumofficinarum L) eacute a cultura de maior importacircncia econocircmicaDiante dessa importacircncia na regiatildeo fluminense torna-senecessaacuteria cada vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividadedessa espeacutecie A produccedilatildeo em escala comercial de plantas decana-de-accediluacutecar pode ser beneficiada pela obtenccedilatildeo de mudas dealta qualidade e homogeneidade em curtos periacuteodos de tempo oque pode ocorrer pelo uso da micropropagaccedilatildeo A presenccedila decarboidrato eacute essencial para o enraizamento de muitas espeacuteciesin vitro sendo a sacarose o accediluacutecar mais utilizado namicropropagaccedilatildeo Poreacutem a necessidade desse composto nomeio de cultivo vem sendo discutida por alguns autoresObjetivou-se neste trabalho verificar o efeito da concentraccedilatildeode sacarose no meio de cultivo e a qualidade da luz sobre acapacidade fotossinteacutetica e as caracteriacutesticas de crescimentoem plantas de cana de accediluacutecar cultivadas in vitro Para tanto foiquantificada a emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila determinadaa massa seca de raiz e da parte aeacuterea a massa foliar especiacutefica eestimada a concentraccedilatildeo de clorofilas Os resultados obtidosmostraram que em cana de accediluacutecar cultivada in vitro em frascosfechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de sacarose no meio decultivo promoveu aumentos na mateacuteria seca da parte aeacuterea e daraiz na massa foliar especiacutefica e na intensidade de cor verde dasfolhas estudadas Natildeo houve modificaccedilatildeo na capacidadefotoquiacutemica maacutexima do PSII A justificativa para o natildeo-comprometimento da sacarose sobre as caracteriacutesticasrelacionadas agrave fotossiacutentese estudadas neste trabalho como oteor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o rendimentoquacircntico maacuteximo do PSII pode estar relacionada com a altacapacidade dessa espeacutecie em armazenar sacarose nos tecidos
Termos para indexaccedilatildeo Saccharum officinarum aclimatizaccedilatildeomeio de cultura fotossiacutentese
ABSTRACTThe State of Rio de Janeiro was one of the pioneers in
Brazil to set out the sugar cane activity which still represents animportant segment in the regional economy The production ofplants in commercial scale would be benefited by the attainmentof seedlings of high quality and homogeneity in short periods oftime which can be obtained using the micropropagation Thepresence of carbohydrate is essential for in vitro rooting of manyspecies with the sucrose being considered the most used sugarduring micropropagation despite the discussion by some authorsregarding its requirement The objective of this work was toevaluate the effect of sucrose concentrations in the culture mediumand light quality on the photosynthetic capacity and biometriccharacteristics on micropropagated sugar cane plants Chlorophyllfluorescence and contents were quantified root and shoot drymass and specific leaf mass were determined and chlorophyllconcentrations were estimated The results showed that theincrease in sucrose concentration during the in vitro cultivationof sugar cane in closed flasks promotes increase in the shootand root dry matter specific leaf mass and chlorophyll contentsNo modification of maximum PSII photochemistry capacity wasobserved The lack of sucrose effects on photosyntheticcharacteristics such chlorophyll contents and PSII yield may berelated to the high capacity of this specie to storage sucrose inthe tissues
Index terms Saccharum officinarum aclimatization culturemedium photosynthesis
Siacutembolos PSII fotossistema II SPAD Soil Plant AnalysisDevelopment BAP benzilaminopurina FFF fluxo de foacutetonsfotossinteacuteticos MPC medidor portaacutetil de clorofilas MFE massafoliar especiacutefica F
vF
maacutex Rendimento quacircntico maacuteximo do
fotossistema II MSPA massa seca parte aeacuterea MSR massaseca raiz AIB acido indol butirico ANAacido naftaleno aceacutetico
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 85
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
INTRODUCcedilAtildeO
A cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) foi
introduzida no Brasil no seacuteculo XVII com o objetivo de
quebrar o monopoacutelio mundial exercido pela Franccedila no
comeacutercio do accediluacutecar produzido nas Ilhas do Caribe O cultivo
da cana-de-accediluacutecar teve um grande aumento quando em
meados da deacutecada de 70 o Brasil criou o Programa Nacional
do Aacutelcool o qual teve como objetivo estimular a produccedilatildeo
do aacutelcool visando o atendimento das necessidades do
mercado interno e externo e da poliacutetica de combustiacuteveis
automotivos (MENEZES VEIGA et al 2006)
Atualmente a cana-de-accediluacutecar eacute uma das principais
culturas do panorama brasileiro e continua crescendo em
funccedilatildeo do consumo como fonte de energia e accediluacutecar Dentre
os diversos produtos agriacutecolas cultivados no estado do Rio
de Janeiro a cana-de-accediluacutecar eacute a cultura de maior importacircncia
econocircmica (MENEZES VEIGA et al 2006) Diante dessa
importacircncia na regiatildeo fluminense torna-se necessaacuteria cada
vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividade dessa espeacutecie
Uma das alternativas para essa elevaccedilatildeo eacute a formaccedilatildeo de
lavouras por meio do uso de mudas de excelente qualidade
Assim a micropropagaccedilatildeo eacute uma teacutecnica que pode contribuir
significativamente para a produccedilatildeo de mudas de cana de
accediluacutecar de alta qualidade Entre as diversas vantagens que
essa teacutecnica apresenta estaacute a produccedilatildeo raacutepida de mudas em
larga escala e a eliminaccedilatildeo de microrganismos potencialmente
fitopatogecircnicos
A micropropagaccedilatildeo tradicional tem como premissa
a presenccedila de sacarose no meio de cultivo uma vez que
esse composto eleva a produccedilatildeo de biomassa e pode
contribuir para aumentar o enraizamento de muitas espeacutecies
in vitro (GRATTAPAGALIA amp MACHADO 1990)
Entretanto vaacuterios autores tecircm sugerido que a fonte de
carboidrato no meio de cultura inibe o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono A adiccedilatildeo da sacarose ao meio
inibiu a fotossiacutentese potencial in vitro (LEES et al 1991)
reduziu a atividade da Rubisco (GROUT amp DONKIN 1987)
inibiu o acuacutemulo de clorofila (LA ROSA et al 1984) e
diminuiu a fixaccedilatildeo do carbono inorgacircnico por meio da
inibiccedilatildeo da atividade da carboxilase do fosfoenol-piruvato
e do Ciclo de Calvin (NEUMANN amp BENDER 1987)
Entretanto Khan et al (2006) trabalhando com cana-de-
accediluacutecar relataram que a maacutexima taxa de multiplicaccedilatildeo de
dois clones (AEC82-223 e NIA-2004) foi nas concentraccedilotildees
de 4 e 6 de sacarose no meio mostrando que nesses
clones cultivados em frascos fechados in vitro a sacarose
foi de fundamental importacircncia para a otimizaccedilatildeo do
crescimento da parte aeacuterea Esses autores mostraram que
a maior taxa de enraizamento foi em meio MS com 1 mg L-
1 de AIB e 6 de sacarose
Alguns autores para facilitar a aclimatizaccedilatildeo da
planta micropropagada sugerem adotar na uacuteltima fase da
cultura in vitro diminuir a concentraccedilatildeo de sacarose com
o objetivo de tentar elevar a taxa fotossinteacutetica e capacitar
a planta agrave nutriccedilatildeo autotroacutefica uma vez que a fonte de
carboidrato no meio de cultura pode inibir o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono Em vista disso Simmonds (1983)
obteve melhores resultados no enraizamento de porta-
enxerto de macieira ao reduzir a concentraccedilatildeo de sacarose
no meio de cultura para apenas 1 Contudo Wainwright
amp Scrace (1989) sugerem manter a sacarose no niacutevel
normalmente utilizado (3) ou ateacute mesmo aumentaacute-lo numa
fase anterior agrave aclimatizaccedilatildeo visando melhorar a qualidade
da planta Segundo esses autores o preacute-condicionamento
em altas concentraccedilotildees de sacarose aumentaria as reservas
de carboidratos armazenadas pelas folhas aumentando
assim a energia disponiacutevel para as placircntulas durante o
processo de aclimataccedilatildeo Para George amp Sherrington (1984)
no desenvolvimento in vitro de muitas espeacutecies a
assimilaccedilatildeo fotossinteacutetica eacute baixa fazendo com que as
culturas sejam dependentes do suporte externo de
carboidratos
Objetivou-se neste trabalho verificar o efeito da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo e da qualidade
de luz sobre a eficiecircncia fotoquiacutemica e as caracteriacutesticas de
crescimento da cana-de-accediluacutecar cultivada in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
O experimento foi realizado na unidade de pesquisa
em fotossiacutentese de plantas in vitro no Setor de Fisiologia
MOTHEacute G P B et al86
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
Vegetal Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal
na UENF Campos dos GoytacazesRJ
Como fonte de explante foram utilizadas placircntulas
de cana-de-accediluacutecar com dois a trecircs centiacutemetros de altura
proveniente de material vegetal jaacute em fase de multiplicaccedilatildeo
contendo meio MS modificado (02 mg L-1 de fonte de
nitrogecircnio combinado 01 mg L-1 de cinetina 02 mg L-1 de
BAP 1 mg L-1 de Tiamina 100 mg L-1 de mio-inositol e 20 g
L-1 de sacarose) em condiccedilotildees de perfilhamento O material
foi obtido no Laboratoacuterio de Cultura de Tecido do Campus
Dr Leonel Miranda UFRRJ O meio de cultura utilizado
para o recultivo foi o MS padratildeo (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 100 mg L-1 de mio-inositol 7 g L-1 de
Agar (Vetec) e sem adiccedilatildeo de reguladores de crescimento
Os tratamentos consistiram de uma combinaccedilatildeo bifatorial
de seis concentraccedilotildees de sacarose no meio (0 10 20 30
40 e 50 g L-1) e dois tipos de luz (lacircmpada fluorescente
branca 40w luz branca com irradiacircncia de 948 igravemol m-2 s-
1 e lacircmpada fluorescente tipo Grolux 40w luz vermelha
com irradiacircncia de 966 igravemol m-2 s-1) O pH do meio foi
ajustado para 58 antes da inclusatildeo do aacutegar e da
autoclavagem (15 atm a 120ordmC por 20 min) A parcela
experimental consistiu de frascos tipo baby food
contendo 50 mL do meio MS nas diferentes
concentraccedilotildees de sacarose O delineamento experimental
foi inteiramente casualizado com trecircs repeticcedilotildees em que
cada parcela consistiu de um frasco com duas plantas
Apoacutes a inoculaccedilatildeo os explantes foram cultivados em
sala de crescimento a uma temperatura 25ordm C plusmn 10 a um
fluxo de foacutetons fotossinteacuteticos de 120 a 150 igravemol m-2 s-1
com 16h de fotoperiacuteodo
Aos vinte e oito dias apoacutes a inoculaccedilatildeo (DAI) foi
utilizada a 2ordm eou 3ordm folha mais expandida para as anaacutelises
para determinaccedilatildeo do rendimento quacircntico maacuteximo do PSII
(FvF
max) (apoacutes adaptaccedilatildeo da folha ao escuro por 30
minutos com auxiacutelio de pinccedilas) por meio de um fluoriacutemetro
natildeo modulado PEA (Plant Efficiency Analyser - Hansatech
Ltd King s Lynn Norfolk UK)
A medida de intensidade de verde (relacionada com
o teor de clorofilas totais) foi feita nesta mesma eacutepoca por
meio do medidor portaacutetil do teor de clorofila SPAD 502
Chlorophyll Meter Minolta Japatildeo Os valores da
intensidade do verde foram provenientes da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha
A massa foliar especiacutefica feita aos 28 dias apoacutes o
cultivo in vitro foi determinada a partir da divisatildeo da massa
seca da folha de uma parte do limbo foliar pela respectiva
aacuterea dessa parte
No final do experimento foi determinada a massa
seca das partes aeacuterea e da raiz das plantas Essas partes
foram colocadas em estufa com ventilaccedilatildeo forccedilada a 70ordm C
por 48 h A partir dos dados da massa seca estimou-se a
relaccedilatildeo parte aeacuterearaiz (massa seca da parte aeacuterea massa
seca das raiacutezes)
Os dados experimentais foram submetidos a uma
anaacutelise de variacircncia e para cada tratamento foram
avaliados trecircs frascos Foram realizadas duas repeticcedilotildees
para cada frasco e seis plantas foram utilizadas
provenientes de trecircs frascos Os dados de cada avaliaccedilatildeo
foram analisados estatisticamente por teste Tukey a 5
e os resultados expressos como meacutedia (plusmn erro-padratildeo) de
seis repeticcedilotildees
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os diferentes tratamentos de luz e dosagem de
sacarose no meio de cultura influenciaram a produccedilatildeo de
biomassa na parte aeacuterea mostrando que maiores
concentraccedilotildees de sacarose produziram maior biomassa
(figuras 2 e 3) O tratamento controle (0 g L-1 de sacarose)
natildeo produziu biomassa suficiente para as anaacutelises
Portanto as plantas-controle cultivadas nessas
condiccedilotildees requerem a adiccedilatildeo de carboidratos para suprir
suas necessidades metaboacutelicas quer participando na
geraccedilatildeo de energia ou como fonte de esqueletos
carbocircnicos para vaacuterios processos bioquiacutemicos sugerindo
que as condiccedilotildees encontradas no frasco de cultivo e na
sala de crescimento foram ineficientes para as plantas-
controle desenvolverem condiccedilotildees de realizar
fotossiacutentese e consequumlentemente produzir biomassa
(Figura 1)
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 87
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 1 Plantas de cana-de-accediluacutecar cultivada em diferentes concentraccedilotildees de sacarose apoacutes 28 dias de cultivo (A)0 g L-1 (B) 10 g L-1 (C) 20 g L-1 (D) 30 g L-1 (E) 40 g L-1 e (F) 50 g L-1
Os resultados obtidos por meio da anaacutelise de
variacircncia para as cinco diferentes concentraccedilotildees de
sacarose (10 20 30 40 e 50 g L-1) no meio demonstraram
que para a caracteriacutestica massa seca da parte aeacuterea (MSPA)
houve uma resposta crescente em que doses crescentes
de sacarose promoveram acreacutescimos de biomassa seca
(Figura 2A) A concentraccedilatildeo 10 g L-1 diferenciou
significativamente das concentraccedilotildees de 40 g L-1 e 50 g L-
1 produzindo uma menor MSPA 0039 0101 e 0135g
respectivamente (Figura 2A) Dados semelhantes foram
obtidos em morangueiros batata menta e videira por
(RIQUELME et al 1991) e por (NICOLOSO 2003) em que
nesse trabalho a elevaccedilatildeo da concentraccedilatildeo de sacarose
de 30 ateacute 60 g L-1 promoveu maior produccedilatildeo de biomassa
dos oacutergatildeos de Pfaffia glomerata (Spreng) Pedersen
Com relaccedilatildeo agrave mateacuteria seca da raiz (MSR) as
diferenccedilas de concentraccedilatildeo de sacarose influenciaram
significativamente os resultados As menores
concentraccedilotildees (10 20 e 30 g L-1) somente diferenciaram
significativamente da maior concentraccedilatildeo (50 g L-1) que
produziu valores 0084g de MSR (Figura 2b) Pelos
resultados foi verificado que a presenccedila de sacarose
mostrou-se fundamental para o desenvolvimento da parte
aeacuterea e das raiacutezes da cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro
De fato Khan et al (2008) mostraram que o meio MS com
meia forccedila suplementado com reguladores de crescimento
(AIB e ANA) e 60 g L-1 de sacarose proporcionou maior
enraizamento em 3 variedades elite de cana-de-accediluacutecar Khan
et al (2006) tambeacutem indicaram a importacircncia da sacarose
no crescimento da parte aeacuterea em clones dessa espeacutecie
George (1996) relata que para formaccedilatildeo de raiacutezes in vitro
haacute necessidade de energia e carboidratos sendo esses
fornecidos por meio da fotossiacutentese (em condiccedilotildees
autotroacuteficas) ou oriunda de uma fonte exoacutegena de accediluacutecar
(em sistemas heterotroacuteficos ou mixotroacuteficos) O autor
verificou ainda que o aumento da concentraccedilatildeo de
sacarose de modo geral estimula o crescimento e a
formaccedilatildeo de raiacutezes de algumas espeacutecies Jaacute em outros
trabalhos na fase de enraizamento a reduccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultura vem sendo
citada como beneacutefica na melhoria da qualidade do sistema
radicular bem como na sobrevivecircncia das placircntulas
transplantadas (ANDRADE 1998)
Com relaccedilatildeo agrave MSPAMSR os tratamentos natildeo
apresentaram diferenccedila significativa apontando uma
relaccedilatildeo direta entre o crescimento das raiacutezes e da parte
MOTHEacute G P B et al88
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 2 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e as diferentes concentraccedilotildees de sacarose no meio de cultivoindependente da luz (A) Massa seca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa seca raiz (MSR) (C) Razatildeo massa seca da parteaeacuterearaiacutezes (MSPAMSR) (D) Massa foliar especiacutefica (MFE) (E) Teor estimado de clorofilas totais (valores de MPC)(F) Rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (F
vF
m) em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Cada
siacutembolo representa a meacutedia de seis repeticcedilotildees em MSPA MSR MSPA MSR e MFE e oito repeticcedilotildees em Valores deMPC e da relaccedilatildeo F
vF
m Meacutedias seguidas pela mesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
aeacuterea Essa relaccedilatildeo eacute de fundamental importacircncia para a
organizaccedilatildeo dos processos fisioloacutegicos e desenvolvimento
das plantas (TAIZ amp ZEIGER 2002) Essas partes estatildeo
relacionadas entre si e essa relaccedilatildeo eacute devida agrave dependecircncia
nutricional e fitohormonal da parte aeacuterea com a raiz
(SALISBURY amp ROSS 1992) (Figura 2c)
As diferentes concentraccedilotildees de sacarose
influenciaram a massa foliar especiacutefica (MFE) a qual
representa a quantidade de massa seca por unidade de
aacuterea da folha estimando a proporccedilatildeo relativa da superfiacutecie
assimilatoacuteria e os tecidos de sustentaccedilatildeo e condutores da
folha aleacutem de poder ser correlacionada positivamente com
a taxa fotossinteacutetica (CRUZ et al 2004) A menor
concentraccedilatildeo de sacarose apresentou o menor valor (148
g m-2) o que indica que a ausecircncia de sacarose pode
comprometer a espessura foliar bem como a capacidade
da maquinaria fotossinteacutetica (Figura 2d)
O teor de clorofila foi estimado por meio do medidor
portatil de clorofila (MPC) Os valores encontrados da
intensidade do verde foram oriundos da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha As diferentes concentraccedilotildees de
sacarose no meio de cultivo influenciaram a intensidade
de verde (Figura 2e) em que a maior concentraccedilatildeo de
sacarose apresentou o maior valor do MPC (336)
0
003
006
009
012
015
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
A (g
)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MFE
(gm
2)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
0
002
004
006
008
01
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSR
(g)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
20
22
24
26
28
30
32
34
36
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
Val
ores
de
MPC
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
000
100
200
300
400
500
600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
AM
SR
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
062
064
066
068
07
072
074
076
078
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
FvF
m
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
A
B
D
C
E
F
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 89
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
diferenciando significativamente dos demais tratamentos
Esses valores estatildeo relacionados com uma maior
quantidade de clorofilas totais em maiores teores de
sacarose Nesse caso em plantas de cana-de-accediluacutecar a
elevaccedilatildeo no teor de sacarose contribui para o incremento
do teor de clorofilas a partir de 30 g L-1 desse composto no
meio de cultivo
Com relaccedilatildeo agrave atividade do PSII avaliada por meio
da emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila a as plantas de
cana-de-accediluacutecar apresentaram alteraccedilotildees com relaccedilatildeo aos
tratamentos utilizados Estatisticamente os valores
menores da eficiecircncia fotoquiacutemica maacutexima do PSII (FvF
m)
foram verificados na concentraccedilatildeo de 20 g L-1 de sacarose
(Figura 2f) Com exceccedilatildeo das plantas crescidas nessa
concentraccedilatildeo de sacarose as demais plantas cultivadas
em meios com maiores concentraccedilotildees de sacarose natildeo
apresentaram diferenccedilas significativas para a caracteriacutestica
FvF
m Por meio dos resultados relacionados aos efeitos
da concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo sobre as
caracteriacutesticas de crescimento a produccedilatildeo de biomassa
estaria mais relacionada agrave oferta de carbono no meio de
cultivo do que a eficiecircncia na maquinaria fotoquiacutemica das
plantas
A qualidade do fluxo de foacutetons fotossinteacutetico (FFF)
teve influecircncia relevante nas caracteriacutesticas MSPA MSR
MFE e valores do MPC A luz considerada vermelha emitida
pelas lacircmpadas GroLux proporcionou maiores valores das
caracteriacutesticas supracitadas Tais resultados poderiam estar
relacionados a um maior ganho de carbono por meio de um
aumento da taxa fotossinteacutetica liacutequida eou indiretamente
causado por alteraccedilotildees fitormonais causadas pela
modificaccedilatildeo no espectro luminoso (CAMPELL amp
BONNER 1986) Ainda na presenccedila da luz vermelha houve
favorecimento para a produccedilatildeo de biomassa tanto na parte
FIGURA 3 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e os diferentes tipos de luz (Branca e Vermelha) (A) Massaseca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa foliar especifico (MFE) (C) Massa seca raiz (MSR) e (D) Teor estimado declorofilas totais (Valores de MPC) Cada siacutembolo representa a meacutedia sendo 15 repeticcedilotildees em MSPA MSR e valores deMPC e 20 repeticcedilotildees em MFE em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Meacutedias seguidas pelamesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
14
16
18
20
22
LUZ
MFE
(gm
2)
Luz branca
Luz vermelha
0
001
002
003
004
005
LUZ
MSR
(g)
Luz branca
Luz vermelha
002
004
006
008
01
012
014
LUZ
MSP
A (g
)
Luz branca
Luz vermelha
20
22
24
26
28
30
LUZ
Val
ores
de
MP
C
Luz branca
Luz vermelha
A
C
B
D
MOTHEacute G P B et al90
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
aeacuterea como no sistema radicular A luz branca apresenta
uma composiccedilatildeo espectral que pode variar e causar
respostas diferenciadas na cultura in vitro A
predominacircncia na emissatildeo de foacutetons na regiatildeo do vermelho
ateacute o azul pode estimular a induccedilatildeo de calos quebrar a
moleacutecula de AIA e ainda estimular a induccedilatildeo de brotos
(BARRUETO CID 2001 CHAMOVITZ amp DENG 1996)
As plantas cultivadas em maiores concentraccedilotildees
(40 e 50 gL-1) de sacarose e aclimatadas em luz vermelha
tiveram melhores resultados do que nos outros tratamentos
(Figura 2 e 3)
CONCLUSOtildeES
Em cana-de-accediluacutecar cultivada em condiccedilotildees in vitro
e em frascos fechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de
sacarose no meio de cultivo promoveu aumentos na
mateacuteria seca da parte aeacuterea e da raiz na massa foliar
especiacutefica e na intensidade de cor verde das folhas
estudadas Natildeo houve alteraccedilatildeo na eficiecircncia fotoquiacutemica
maacutexima do PSII A luz vermelha associada agrave concentraccedilotildees
de sacarose de 40 e 50gL-1 parece ter uma resposta
somatoacuteria tanto na produccedilatildeo de parte aeacuterea e raiz quanto
na massa foliar especiacutefica e no teor de clorofila
A justificativa para o natildeo-comprometimento da
sacarose no meio sobre as caracteriacutesticas relacionadas agrave
fotossiacutentese estudadas neste trabalho como exemplo o
teor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o
rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (FvF
m) pode estar
relacionada com a alta capacidade dessa espeacutecie em
armazenar sacarose nos tecidos
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
(Recebido em 20 de junho de 2008 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EFFECTS OF AUXINS AND CYTOKININS ON IN VITRODEVELOPMENT OF Alpinia purpurata K SCHUM AND
PHENOLIC COMPOUNDS PRODUCTION
EFEITO DE AUXINAS E CITOCININAS NO DESENVOLVIMENTO IN VITRO DEAlpinia purpurata K SCHUM E PRODUCcedilAtildeO DE SUBSTAcircNCIAS FENOacuteLICAS
CRISTIANE PIMENTEL VICTOacuteRIO1 IACINETE PAMPLONA DA CRUZ2 ALICE SATO3RICARDO MACHADO KUSTER4 CELSO LUIZ SALGUEIRO LAGE5
1Doutora em Ciecircncias Bioloacutegicas (Biofiacutesica) Instituto de Biofiacutesica Carlos Chagas FilhoLab Fisiologia Vegetal Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050 21952-590 Rio de Janeiro RJ crispvbiofufrjbr
2Estudante de Farmaacutecia bolsista PIBICUFRJ3Doutora em Biotecnologia Vegetal Prof Dep Botacircnica Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro Av Pasteur 458
22290-040 Rio de Janeiro RJ alicesatouniriobr4Doutor Prof Laboratoacuterio de Fitoquiacutemica Nuacutecleo de Pesquisas de Produtos Naturais (NPPN) Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco H 21941-902 Rio de Janeiro RJ kusternppnufrjbr
5Doutor Prof IBCCFo Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050
21952-590 Rio de Janeiro RJ clslagebiofufrjbr
ABSTRACTAlpinia purpurata K Schum is largely used in
ornamentation and scarcely present itself in folk medicine Studiesusing plant tissue culture technique under standardized conditionpermit to evaluate plant physiological morphological andphytochemical responses to exogenous plant growth regulatorThis work consisted in the establishment of in vitro A purpurataplants using different concentrations of auxin and cytokinins inmg L-1 IAA 2 TDZ 2 and 4 IAA 2 + TDZ 2 IAA 2 + BAP 2Additionally it was determined the content of phenoliccompounds in the leaves of field and in vitro plants using Folin-Ciocalteau method Buds from inflorescence A purpurata weredisinfested and introduced in solid MS medium to initiate culturesThe direct organogenesis process was fast and satisfactoryproducing elongated plants with a developed radicular systemThe rooting percentage reached 100 for all treatments after 2months Cytokinins and auxins were important for the increasingof the leaves quantity (42 to 51) and shoot elongation (40 cm)Liquid MS0 presented the favorable results for fastmicropropagation and higher production of shoots providingplants ready to be acclimatized In vitro plants cultivated underMS0 produced 93 of phenolic compounds in comparison withfield plants (100) Through High Performance LiquidChromatographic it was verified similar chromatographic profilesbetween field and in vitro plant extracts
Index terms Folin-Ciocalteau HPLC micropropagation tissueculture Zingiberaceae Alpinia purpurata
RESUMOAlpinia purpurata K Schum eacute uma espeacutecie muito
utilizada como ornamental e possui escassas indicaccedilotildees de usona medicina popular Estudos utilizando teacutecnicas de cultura detecidos vegetais permitem a partir de condiccedilotildees padronizadas
avaliar as respostas fisioloacutegicas morfoloacutegicas e fitoquiacutemicas dosvegetais aos fitorreguladores exoacutegenos Este trabalho consistiuno estabelecimento de plantas de A purpurata in vitro utilizando-se diferentes concentraccedilotildees de auxina e citocininas (mg L-1) AIA2 TDZ 2 e 4 AIA 2 + TDZ 2 AIA 2 + BAP 2 Verificou-setambeacutem o conteuacutedo de substacircncias fenoacutelicas nas folhas de plantasde campo e in vitro atraveacutes do meacutetodo de Folin-CiocalteauBrotos oriundos da inflorescecircncia de A purpurata foramdesinfestados e introduzidos em meio MS soacutelido para iniciar asculturas O processo de organogecircnese direta foi raacutepido esatisfatoacuterio produzindo plantas alongadas e com sistema radiculardesenvolvido A porcentagem de enraizamento atingiu 100 paratodos os tratamentos ao final de 2 meses As citocininas e auxinasforam importantes para incrementar o nuacutemero de folhas (42 a51) e alongamento dos brotos (40 cm) em comparaccedilatildeo com omeio controle O MS0 liacutequido foi o mais favoraacutevel para raacutepidapropagaccedilatildeo in vitro e maior produccedilatildeo de brotos com suprimentode plantas aptas a serem aclimatizadas Plantas in vitro cultivadasem meio MS0 produziram 93 de fenoacuteis totais em relaccedilatildeo agravesplantas de campo (100) Atraveacutes da Cromatografia Liacutequida deAlta Eficiecircncia foi verificada semelhanccedila entre os perfiscromatograacuteficos dos extratos de plantas de campo e in vitro
Termos para indexaccedilatildeo Folin-Ciocalteau CLAEmicropropagaccedilatildeo cultura de tecidos vegetais ZingiberaceaeAlpinia purpurata
INTRODUCTION
Alpinia purpurata K Schum is widely used as
ornamental plant in several tropical and subtropical areas
with high international market demand (KRESS et al 2002
SANGWANANGKUL et al 2008) In folk medicine it is
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 93
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
used for cough in Venezuela and presents antibacterial
activity (BERMUacuteDEZ amp VELAacuteSQUEZ 2002 ZOGHBI et
al 1999) Recent studies have showed the phytochemical
potential of this species (VICTOacuteRIO et al 2007 2008)
The vegetative propagation through rhizome is the
main way of reproduction of this species According to
Moroacuten (1987) for the propagation of A purpurata in
greenhouse the time is twice more than in in vitro systems
Plant tissue culture techniques have been employed in
Brazil since 1950 and the main advantages include the
continuous and fast production of aseptic and selected
plants These techniques permit a commercial-scale
production of plants (ROUT et al 2006) and some studies
have showed them as an alternative for optimizing
secondary metabolites production (RAO amp
RAVISHANKAR 2002) The micropropagation of A
purpurata supplies may be a source for ornamental and
medicinal raw material (MULABAGAL amp TSAY 2004
POMPELLI et al 2007)
Addition of auxins and cytokinins in the culture
media are essential to improve and regulate growth and
morphogenesis of the cultures (CHITRA amp PADMAJA
2005 KYOZUKA 2007) Besides several studies have
reported the effects of plant growth regulators in in vitro
phenolic production (SANTOS-GOMES et al 2002
THIEM 2003) We intended to develop a protocol for in
vitro production of A purpurata plants and to evaluate
the effects of auxins and cytokinins on plant development
and compounds phenolic production
MATERIAL AND METHODS
Plant Material
Buds from inflorescence of donor plants of Alpinia
purpurata red inflorescence were used as source of plant
material to initiate in vitro cultures Voucher specimen was
deposited at the Herbarium of Rio de Janeiro Botanical
Garden under accession number RB 433484 Buds were
collected and washed with running water using nylon
brush for removing residues The sterilization process was
concluded in four steps in sterile ambient after dissection
of leaves 20 of commercial bleach solution for 40 min
followed by immersion in distilled water plus commercial
detergent solution for 15 min dipped in 70 ethanol
washed for 10 min in 30 of commercial bleach solution
and rinsed with sterile distilled water three after each step
Establishment of in vitro cultures
Explants were subcultured into glasses (16 x 8 cm)
containing 50 ml of culture medium Murashige amp Skoog
(1962) supplemented with 3 of sucrose 148 igraveM thiamine-
Different letters indicate significant differences at plt 005 level Tukey s test n e 30
VICTOacuteRIO C P et al96
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
FIGURE 2 In vitro development of Alpinia purpurata plants in MS medium under different plant growth regulators(mgl-1) (A) Sequence of development 1 month (I) 2 months (II) and 3 months (III) (B) shoot height after 2 months (C)shoot height and (D) percentage of shoots after 3 months Different letters indicate significant differences at plt 005level Tukey s test n e 30 100 correspond to 30 shoots per explant within 1 year
advantage of in vitro production of secondary metabolites
is the possibility to control environment and nutritional
factors Data show high level of phenolics in in vitro
cultures of A purpurata (93) compared with field plants
(100) (Figure 3A) Through reversed-phase HPLC was
found similarity between field and in vitro plants profiles
(Figure 3B-C) The peaks 1 2 and 3 presented
characteristics of phenolic compounds verified through
UV spectra obtained by HPLC A purpurata is not currently
used in folk medicine and these results may indicate the
presence of therapeutic resource in its phytochemistry
The preliminary investigation of phenolic in
organogenic cultures of A purpurata using Folin-
Ciocalteau reagent and HPLC analysis brings perspectives
about the production of antioxidant compounds by this
species In addition the establishment of tissue culture of
A purpurata may be a good alternative to produce aseptic
plants and its bioactive metabolites
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 97
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
ACKNOWLEDGEMENTS
C P Victoacuterio acknowledges the fellowship from
CAPES and PROEX financial support
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Curva de crescimento atividade da fenilalanina 99
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
(Recebido em 23 de janeiro de 2008 e aprovado em 7 de outubro de 2008)
CURVA DE CRESCIMENTO ATIVIDADE DA FENILALANINA AMOcircNIA-LIASE E TEORES DE FENOacuteIS E TANINOS TOTAIS EM CALOS DE
GROWTH CURVE PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE ACTIVITY AND TOTALPHENOL LEVELS IN CALLUS OF Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville
(FABACEAE-MIMOSOIDEAE)
ANA HORTEcircNCIA FONSEcircCA CASTRO1 MILLER MARANI LIMA2 RENATO PAIVA3 AMAURI ALVES DE ALVARENGA4 MIRELLE OLIVEIRA SOacuteTER5
1Doutora Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG2Bolsista ICFAPEMIG Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG3PhD Universidade Federal de LavrasUFLA 37200-000 Lavras MG4Doutor Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 37200-000 Lavras MG renpaivauflabr5Acadecircmica Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG
RESUMOObjetivou-se estabelecer a curva de crescimento e avaliar
a atividade da fenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis etaninos totais em calos de barbatimatildeo explantes foliares foraminoculados em meio MS suplementado com 30 g L-1 sacarose eacrescidos de 905 M de 24-D O crescimento a atividade dafenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis e taninos totaisforam avaliados a cada 10 dias durante 110 dias A curva decrescimento dos calos apresentou um padratildeo sigmoidal com cincofases distintas Os teores meacutedios de fenoacuteis totais acompanharamas variaccedilotildees observadas para a atividade enzimaacutetica Alta atividadee maiores teores de fenoacuteis totais foram observados no explanteinicial com reduccedilotildees progressivas ateacute a fase linear Na faseestacionaacuteria observaram-se incrementos importantes naatividadeda fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais Natildeo foidetectada a presenccedila de taninos totais nos calos
Termos para indexaccedilatildeo Barbatimatildeo cultivo in vitro plantamedicinal Stryphnodendron adstringens
ABSTRACTIn order to establish growth curve phenylalanine ammonia-
lyase (PAL) activity and total phenol and tannin levels inStryphnodendron adstringens leaf explants were inoculated inMS medium supplemented with 30 g L-1 sucrose and 905 M24-D The growth PAL activity and total phenol and tanninlevels were evaluated at 10 days intervals during 110 days Callusgrowth curve presented a sigmoid shape with five different phasesAverage levels of total phenol followed the changes observed forenzymatic activity High activity and higher levels of total phenolwere observed in initial explants with progressive reductions untilthe linear phase Increases in phenylalanine ammonia-lyase activityand total phenols levels were observed in stationary phase Notannins were observed on callus
Index terms Stryphnodendron adstringens In vitro CultureMedicinal Plant
INTRODUCcedilAtildeO
Atualmente um consideraacutevel esforccedilo tem sido feito
com o intuito de se produzir fitoteraacutepicos com maiores
concentraccedilotildees de substacircncias ativas vegetais atraveacutes de
culturas de ceacutelulas ou tecidos Segundo Taniguchi et al
(2002) dentre as diferentes teacutecnicas de cultivo in vitro a
cultura de calos tem apresentado grande importacircncia para
a propagaccedilatildeo e produccedilatildeo in vitro de espeacutecies de interesse
medicinal A desdiferenciaccedilatildeo e induccedilatildeo de regeneraccedilatildeo
das plantas a partir de calos satildeo muitas vezes processos
difiacuteceis de serem obtidos e podem demandar algum tempo
As auxinas tecircm sido amplamente utilizadas nos meios de
cultivo para a induccedilatildeo de calos e geralmente dependendo
da concentraccedilatildeo causam elongaccedilatildeo celular e expansatildeo ou
divisatildeo celular Em geral com o uso de baixas
concentraccedilotildees de auxinas predomina a formaccedilatildeo de raiacutezes
adventiacutecias enquanto que altas concentraccedilotildees induzem a
formaccedilatildeo de calos A interaccedilatildeo entre auxinas e citocininas
tambeacutem eacute muito utilizada para a induccedilatildeo de calogecircnese
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998)
Durante a calogecircnese eacute importante estabelecer-se
a curva de crescimento de calos o que propicia a
identificaccedilatildeo das fases distintas de crescimento da espeacutecie
A partir deste estudo pocircde-se determinar o momento exato
de repicagem dos calos para um meio fresco ou a
CASTRO A H F et al100
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
possibilidade de sua utilizaccedilatildeo em suspensotildees celulares
visando a otimizaccedilatildeo da produccedilatildeo de metaboacutelitos
secundaacuterios em espeacutecies medicinais (GEORGE 1996) O
crescimento in vitro de calos geralmente apresenta um
padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas Segundo Smith
(1992) a fase lag se caracteriza como fase de maior produccedilatildeo
de energia correspondendo ao periacuteodo em que as ceacutelulas
se preparam para a divisatildeo visando sua expansatildeo Ocorre o
iniacutecio da mobilizaccedilatildeo de metaboacutelitos primaacuterios sem qualquer
divisatildeo celular siacutentese de proteiacutenas e de compostos
especiacuteficos Essa fase resulta em um pequeno crescimento
dos calos A fase exponencial eacute biossinteacutetica Observa-se o
maior crescimento dos calos devido agrave maacutexima taxa de divisatildeo
celular caracteriacutestica desse periacuteodo O nuacutemero de ceacutelulas
aumenta Na fase linear haacute diminuiccedilatildeo da divisatildeo celular
mas aumento de volume celular e a fase de desaceleraccedilatildeo eacute
o momento em que as culturas devem ser transferidas para
outro meio devido agrave reduccedilatildeo de nutrientes produccedilatildeo de
produtos toacutexicos secagem do aacutegar e reduccedilatildeo do oxigecircnio
no interior das ceacutelulas Na fase estacionaacuteria ocorre maior
acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
O barbatimatildeo [Stryphnodendron adstringens
(Mart) Coville Fabaceae-Mimosoideae) eacute uma importante
espeacutecie medicinal do cerrado com altos teores de
compostos polifenoacutelicos em especial os taninos Possui
grande distribuiccedilatildeo e importacircncia econocircmica para o estado
de Minas Gerais sendo empregado como adstringente e
cicatrizante no combate de amidalite faringite
hemorroacuteidas leucorreacuteias erupccedilotildees cutacircneas diarreacuteias e
como agentes antiinflamatoacuterios (LIMA et al 1998)
A fenilalanina amocircnia-liase (EC 4315) eacute uma
enzima-chave e regulatoacuteria da rota biossinteacutetica dos
fenilpropanoacuteides e de seus derivados e catalisa a
desaminaccedilatildeo do aminoaacutecido L-fenilalanina em aacutecido trans-
cinacircmico sendo esse o primeiro passo para a biossiacutentese
dos fenoacutelicos vegetais (ASSIS et al 2001) De acordo com
Rivero et al (2001) os niacuteveis dessa enzima podem flutuar
significativamente em intervalos relativamente curtos em
resposta a uma ampla variedade de estiacutemulos como o
fotoperiacuteodo fitocromo mudanccedilas de temperatura radiaccedilatildeo
UV deficiecircncia de nutrientes reguladores de crescimento
virais e ataque de insetos bem como o estaacutedio de
desenvolvimento vegetal e o grau de diferenciaccedilatildeo de
ceacutelulas e tecidos (SOLECKA amp KACPERSKA 1995)
Devido agrave exploraccedilatildeo irracional pelas induacutestrias de
curtimento do couro o barbatimatildeo encontra-se ameaccedilado
de extinccedilatildeo Assim devem-se melhorar as teacutecnicas de
propagaccedilatildeo encorajar seu cultivo e criar vias alternativas
para a produccedilatildeo de tanino em larga escala a partir de
fontes naturais
Objetivou-se estabelecer a curva de crescimento e
avaliar a atividade da fenilalananina amocircnia-liase e os teores
de fenoacuteis e taninos totais em calos de barbatimatildeo
MATERIAL E MEacuteTODOS
As etapas experimentais foram realizadas entre
fevereiro de 2007 e janeiro de 2008 no Centro Universitaacuterio
de Lavras (UNILAVRAS) e na Universidade Federal de
Lavras (UFLA)
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento foi obtida a partir da
inoculaccedilatildeo de segmentos foliares de 025 cm2 de aacuterea
empregados como explantes em meio MS (MURASHIGE
amp SKOOG 1962) suplementado com 30 g L-1 sacarose e
acrescidos de 905 M de 24-D Os meios foram
solidificados com aacutegar na proporccedilatildeo de 7 g L-1 e o pH
ajustado para 57 plusmn 01 antes da autoclavagem por 20 min
Apoacutes inoculaccedilatildeo os explantes foram transferidos para sala
de crescimento onde foram incubados na presenccedila de luz
agrave temperatura de 27 plusmn 1 oC fotoperiacuteodo de 16 horas e
DFFFA= 25 mol m-2 s-1
Foram feitas pesagens do material inoculado fresco
a partir do dia da inoculaccedilatildeo (tempo 0) ateacute ser atingida a
fase de desaceleraccedilatildeo em intervalos de 10 dias O
porcentual de crescimento dos calos foi determinado pela
equaccedilatildeo proposta por Lameira (1997)
crescimento = Pf Pi
Pf
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 101
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
onde
Pf = Mateacuteria seca final
Pi = Mateacuteria seca inicial
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado sendo cada pesagem composta
por duas repeticcedilotildees e cada repeticcedilatildeo pela meacutedia de 10
tubos cada tubo contendo um explante Os dados obtidos
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia e analisados
estatisticamente utilizando-se o Sistema de Anaacutelise de
Variacircncia para Dados Balanceados (FERREIRA 2000)
Determinaccedilotildees da atividade da fenilalanina amocircnia-liasee teores de fenoacuteis e taninos totais
Calos obtidos na curva de crescimento foram
imersos em nitrogecircnio liacutequido e posteriormente
armazenados em Freezer Forma Scientific a -86 oC ateacute o
momento de serem utilizados na determinaccedilatildeo da atividade
enzimaacutetica Outros calos assim como aqueles obtidos no
experimento com a sacarose foram liofilizados para
determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis e taninos totais
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase
O procedimento descrito por Cheng amp Breen (1991)
com algumas modificaccedilotildees foi utilizado para extraccedilatildeo e
determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica
Calos congelados (5 g) foram triturados
homogeneizadas com acetona 80 e congelados por 15
minutos O homogenato foi filtrado e o pelet foi seco atraveacutes
de vaacutecuo
O extrato proteacuteico foi obtido homogeneizando-se
05 g do pelet seco em 5 mL de tampatildeo borato de soacutedio 01
M pH= 88 contendo 5 mM de -mercaptoetanol 2 mM
de EDTA e 4 (pv) de PVP a 4oC Depois de 1h o
homogenato foi centrifugado a 27000 g por 30 minutos a
4 oC A mistura de reaccedilatildeo foi constituiacuteda por 05 mL de L-
fenilalanina 30 M 30 mM de tampatildeo borato de soacutedio pH=
88 e 1 mL de extrato cru num volume total de 3 mL O
substrato foi adicionado apoacutes 10 minutos de preacute-incubaccedilatildeo
e a reaccedilatildeo foi interrompida com 01 mL de HCl 6 N A
atividade da fenilalanina amocircnia-liase foi determinada pela
produccedilatildeo de cinamato apoacutes 90 minutos agrave 30 oC sob
agitaccedilatildeo contiacutenua medida pela variaccedilatildeo da absorbacircncia a
290 nm A atividade especiacutefica da enzima foi definida em
nmol de aacutecido cinacircmicohmg de proteiacutena
Fenoacuteis totais
Amostras de calos liofilizados foram trituradas em
micromoinho e armazenadas em frascos fechados
protegidos da luz
Aproximadamente 500 mg de calos liofilizados e
triturados foram extraiacutedos cinco vezes com 5 mL de uma
mistura de metanolaacutegua (11) sob refluxo O volume final
do extrato foi completado para 25 mL
Uma aliacutequota de 100 L do extrato foi utilizada para
a determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis totais atraveacutes do
meacutetodo de Folin-Dennis segundo as normas da AOAC
(1970) As determinaccedilotildees foram feitas em triplicata e o
resultado foi expresso em porcentagem de aacutecido tacircnico
por grama de calo seco
Taninos Totais
A determinaccedilatildeo dos teores de taninos totais foi
realizada atraveacutes do Meacutetodo de Difusatildeo Radial de acordo
com Hagerman (1987)
Um volume de 5 mL do extrato foi concentrado a 37oC e posteriormente retomado com 05 mL de uma mistura
de metanolaacutegua (11) Uma aliacutequota de 15 mL foi utilizada
para a determinaccedilatildeo Todas as determinaccedilotildees foram feitas
em triplicata O resultado foi expresso em percentagem de
tanino por grama de calo seco
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento dos calos seguiu o padratildeo
sigmoidal apresentando cinco fases distintas lag
exponencial linear desaceleraccedilatildeo e estacionaacuteria (Figura
1) A fase lag onde as ceacutelulas do explante se preparam para
a divisatildeo celular e produccedilatildeo de energia ocorreu ateacute o 30o
dia apoacutes a inoculaccedilatildeo com calos apresentando um
crescimento de aproximadamente 73 A segunda fase
exponencial estendeu-se do 31o
ao 50o
dia de cultivo
com 70 de crescimento periacuteodo esse caracterizado pela
CASTRO A H F et al102
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
maacutexima divisatildeo celular A fase linear ocorreu entre o 51o ao
70o
dia e natildeo se verificou crescimento dos calos nesse
periacuteodo Entre o 71o
e 100o
dia observou-se a fase de
desaceleraccedilatildeo com 28 de crescimento e a partir do 101o
dia a cultura entrou na fase estacionaacuteria Segundo Smith
(1992) na fase de desaceleraccedilatildeo os calos devem ser
transferidos para um novo meio de cultura devido agrave
reduccedilatildeo de nutrientes secagem do aacutegar e acuacutemulo de
substacircncias toacutexicas
FIGURA 1 Curva de crescimento de calos deStryphnodendron adstringens obtidos a partir de segmentosfoliares inoculados em meio MS contendo 905 M de 24-D e 30 g L-1 de sacarose
0
002
004
006
008
01
012
014
016
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Mat
eacuteria
sec
a (g
)
De maneira semelhante essa mesma curva de
crescimento pode ser dividida em trecircs fases fase de
crescimento lento (do dia da inoculaccedilatildeo ateacute o 30o dia) fase
de crescimento ativo (do 31o
ao 70o
dia) e fase de
estabilizaccedilatildeo (71o
dia em diante) sendo indicada a
repicagem entre o 71o ao 100o dia
A curva de crescimento para calos de
barbatimatildeo apresentou um padratildeo semelhante ao de outras
espeacutecies medicinais de cerrado como Byrsonima
intermeacutedia A Juss (NOGUEIRA et al 2008) Croton
(BONILLA 2002) e Derris sp (CONCEICcedilAtildeO 2000)
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteise taninos totais
Na figura 2 encontram-se representados os
resultados da atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase
e dos teores de fenoacuteis totais verificados durante o periacuteodo
experimental O explante inicial apresentou um teor meacutedio
de 065 de taninos totais natildeo se detectando entretanto
a presenccedila de taninos nos demais calos formados
Conforme pode-se observar a atividade da
fenilalanina amocircnia-liase situou-se entre 016 e 196 mol
de aacutecido cinacircmico h-1 g-1 de mateacuteria fresca (plt005) (figura
2A) A atividade apresentou-se maacutexima no explante inicial
(dia 0) e reduziu progressivamente ateacute o 70o dia periacuteodo
esse correspondente agraves fases lag exponencial e linear
Entre o 71o ao 100o dia ou seja na fase de desaceleraccedilatildeo a
atividade enzimaacutetica indicou uma tendecircncia em se manter
constante e a partir do 101o dia (fase estacionaacuteria) verificou-
se um pequeno incremento nessa atividade da ordem de
26 De maneira semelhante os teores meacutedios de fenoacuteis
totais acompanharam as variaccedilotildees observadas para a
atividade enzimaacutetica e situaram-se em uma faixa de 029 a
399 sendo o teor meacutedio maacuteximo observado no explante
inicial (figura 2B) Os teores de fenoacuteis totais reduziram
significativamente ateacute o 60o dia (fase lag e exponencial) e a
partir do 61o
ao 90o
dia permaneceram praticamente
constantes com os menores niacuteveis observados durante o
periacuteodo experimental em torno de 037 em meacutedia A partir
da fase estacionaacuteria (100o dia) verificou-se um aumento de
65 nos teores meacutedios de fenoacuteis totais
Estes resultados mostraram-se muito interessantes
do ponto de vista fisioloacutegico e fitoquiacutemico e corroboram
com relatos de Conceiccedilatildeo (2000) e Lameira (1997) os quais
citam que a fase estacionaacuteria corresponde ao periacuteodo em
que ocorre maior acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
Apesar de esses teores serem baixos eacute importante ressaltar
que o meio de cultura pode ser otimizado para produccedilatildeo
em larga escala de fenoacuteis totais e taninos uma vez que
foram obtidos in vitro a partir de segmentos foliares e de
forma convencional satildeo extraiacutedos da casca da planta adulta
cultivada in vivo
A presenccedila de baixos teores de fenoacuteis e a ausecircncia
de taninos pode estar associada agrave alta atividade metaboacutelica
relacionada ao crescimento dos calos (mitose) o que
demanda elevada quantidade de substrato necessaacuterio agrave
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 103
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
FIGURA 2 Valores meacutedios de atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase (A) e teores de fenoacuteis totais (B) emStryphnodendron adstringens durante o periacuteodo experimental
0
05
1
15
2
25
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Ativ
idad
e da
Fen
ilala
nina
Am
ocircnia
-Lia
se (
mm
ol d
e aacutec
cin
acircmic
o h-1
g-1 M
F)
A
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120Dias
Fenoacute
is T
otai
s (
)
B
produccedilatildeo de energia Segundo Botta et al (2001) a
diferenciaccedilatildeo celular assim como a desaceleraccedilatildeo da
atividade mitoacutetica progressivamente permite o acuacutemulo de
compostos derivados do metabolismo secundaacuterio Para
Lavola et al (2000) e Pentildeuelas et al (1997) variaccedilotildees nos
teores de metaboacutelitos secundaacuterios natildeo podem ser explicadas
somente pelas diferenccedilas na disponibilidade de carboidratos
devendo-se considerar tambeacutem a disponibilidade de
precursores para a sua siacutentese e as mudanccedilas nos padrotildees
de siacutentese e catabolismo desses compostos
CONCLUSOtildeES
A curva de crescimento para calos de barbatimatildeo
apresentou um padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas
sendo indicada a repicagem entre o 71o ao 100o dia
Alta atividade e maiores teores de fenoacuteis totais
foram observados no explante inicial com reduccedilotildees
progressivas ateacute a fase linear Na fase estacionaacuteria
observaram-se incrementos importantes na atividade da
fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais
Natildeo se detectou a presenccedila de taninos totais nos
calos durante a determinaccedilatildeo da curva de crescimento na
presenccedila de 904 M de 24-D
AGRADECIMENTOS
Agrave Fundaccedilatildeo de Amparo agrave Pesquisa do Estado de
Minas Gerais (FAPEMIG) pelo suporte financeiro ao
projeto e concessatildeo de bolsa de iniciaccedilatildeo cientiacutefica
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 105
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
(Recebido em 14 de fevereiro de 2007 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EMBRIOGEcircNESE SOMAacuteTICA DIRETA DE Coffea arabica LCONCENTRACcedilOtildeES DE NH4NO3 E DE KNO3 NO
DESENVOLVIMENTO DE EMBRIOtildeES1
DIRECT SOMATIC EMBRYOGENESIS OF Coffea arabica L CONCENTRATIONS OFNH4NO3 AND KNO3 ON THE DEVELOPMENT OF EMBRYOS
JULIANA COSTA DE REZENDE2 MOACIR PASQUAL3 SAMUEL PEREIRA DE CARVALHO3ESTER ALICE FERREIRA4 FLAVIA CARVALHO SANTOS5
1Artigo extraiacutedo da dissertaccedilatildeo de mestrado da primeira autora apresentada a Universidade Federal de LavrasUFLA2Pesquisadora MSc Epamig Campus da UFLA Cx P 176 372000-000 Lavras MG julianacostaepamigbr3Professor Dr Titular do Departamento de AgriculturaDAG Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 372000-000
Lavras MG pasqualuflabr samuelpcuflabr4Pesquisadora Dra Epamig Cx P 351 Uberaba MG esterepamigbr5Doutoranda em Fitotecnia Bolsista Capes flavinha3010yahoocombr
RESUMOO melhoramento geneacutetico do cafeeiro tem incorporado
atraveacutes de cruzamentos ganhos geneacuteticos para produtividade eoutras caracteriacutesticas de interesse agronocircmico A introduccedilatildeo demeacutetodos biotecnoloacutegicos para auxiliar os programas demelhoramento geneacutetico tem-se mostrado bastante uacutetilprincipalmente em culturas perenes como eacute o caso do cafeeiroUm importante meacutetodo de propagaccedilatildeo in vitro de plantas deCoffea eacute a embriogecircnese somaacutetica direta Objetivou-se com estetrabalho avaliar os efeitos de diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3 no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos
diretos de C arabica L cv Rubi Os tratamentos foramconstituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH
4NO
3 (0 4125 825
12375 e 1650 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3 (0 475
950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS O experimentofoi mantido por 150 dias em sala de crescimento com irradiacircnciaem torno de 32 igraveM m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas comtemperatura de 25 plusmn 1oC As variaacuteveis avaliadas foram nuacutemero defolhas comprimento da parte aeacuterea e massa fresca da parte aeacutereaOs resultados indicaram que a utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO
3combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de NH
4NO
3 como a mais
indicada para o desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos de Carabica L Os resultados apontam ainda que a ausecircncia denitrogecircnio promove o maior peso das placircntulas
Termos para indexaccedilatildeo Nitrogecircnio cafeacute cv Rubi Coffeaarabica
ABSTRACTCoffee breeding programs have incorporated using
artificial crossings genetic benefits for productivity and othercharacteristics of agronomic interest The introduction ofbiotechnology methods to improve genetic breeding programshas demonstrated to be useful mainly in perennial cultures ascoffee species An important method of in vitro propagation ofCoffea plants is somatic embryogenesis Therefore the objectiveof this work was to obtain the most adequate combinations ofculture medium components for plantlets growth The influence
of NH4NO
3 (0 4125 825 12375 and 1650 mg L-sup1) of MS
formulation x KNO3
(0 475 950 1425 and 1900 mg L-sup1) MSformulation were tested for the development of somatic embryosThe experiments were maintained in a growth room under lightintensity of 32 microMol m-2 s-1 photoperiods of 16 hours andtemperature of 25 plusmn 1o C The characteristics evaluated were leafnumber shoot length and shoot fresh matter The results indicatedthat the use of 950 mgL-sup1 KNO
3 combined with 1155 to 2475
mg L-sup1 NH4NO
3 is the most indicated for the development of
somatic embryos of C arabica L The absence of nitrogenpromotes the largest weight of plantlets
Index Terms Nitrogen Coffee cv Rubi Coffea arabica
INTRODUCcedilAtildeO
O nitrogecircnio eacute um dos elementos necessaacuterios e
ativos para diversos processos metaboacutelicos da planta pois
eacute constituinte de vaacuterias biomoleacuteculas essenciais tais como
aminoaacutecidos aacutecidos nucleacuteicos enzimas e proteiacutenas e
juntamente com a sacarose eacute o principal componente em
quantidade no meio de cultura
O nitrogecircnio difere dos demais macronutrientes por
apresentar-se na forma de caacutetion (amocircnio) e acircnion (nitrito
e nitrato) contribuindo de forma efetiva tanto no
metabolismo celular como na regulaccedilatildeo do seu potencial
osmoacutetico Atua como agente tamponante e favorece a
absorccedilatildeo de outros iacuteons presentes no meio (NAGAO et
al 1994) A vantagem dos tecidos vegetais receberem pelo
menos parte do nitrogecircnio sob uma forma prontamente
reduzida eacute que haveria uma diminuiccedilatildeo no gasto de energia
REZENDE J C de et al106
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
que ocorre na conversatildeo enzimaacutetica de nitrato a amocircnio
(GEORGE et al 1987) O efeito dessas diferentes formas
inorgacircnicas separadamente pode promover ou natildeo o
crescimento e desenvolvimento de determinadas espeacutecies
de plantas enquanto a combinaccedilatildeo das duas estimula o
crescimento de muitas espeacutecies in vitro (CALDAS et al
1998)
De acordo com George amp Sherrington (1984) o
desenvolvimento e morfogecircnese em cultura de tecidos satildeo
acentuadamente influenciados pela disponibilidade de
nitrogecircnio e pela forma como o mesmo eacute fornecido Alta
concentraccedilatildeo de sais do meio MS comparada a outros
meios especificamente dos niacuteveis de amocircnio (-NH4) e
nitrato (-NO3) pode ser criacutetica no processo de morfogecircnese
e crescimento (SAKUTA amp KOMAMINE 1987) estando
pois a demanda energeacutetica fornecida pelo metabolismo de
carboidratos e a assimilaccedilatildeo destes iacuteons diretamente
relacionada com o sucesso da cultura in vitro
Sato (1994) estudou o efeito de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio sobre a propagaccedilatildeo de trecircs
diferentes clones de geacuterbera de vaso (Gerbera jamesonii
Adlam) e concluiu que a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio do
MS completo inibe a regeneraccedilatildeo de brotos enquanto a
utilizaccedilatildeo de concentraccedilotildees diluiacutedas favorece a induccedilatildeo
dos brotos Bespalhok et al (1992) estudaram a
concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia na induccedilatildeo de brotos
em estevia (Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni) e
constataram que a concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia do
MS eacute toacutexica Obteve maior induccedilatildeo de brotaccedilotildees usando
frac14 de nitrato de amocircnia no meio MS Por outro lado Tadesse
et al (2000) verificaram que a accedilatildeo de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio promoveu um incremento
inicial da aacuterea foliar das placircntulas formadas mas ocasionou
efeitos relativamente negativos no aumento da aacuterea foliar
das placircntulas durante a aclimatizaccedilatildeo
O nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio sustenta
boa taxa de crescimento em algumas culturas como roseira
(Rosa gallica L) (NASH amp DAVIES 1972) e trigo (Triticum
que natildeo crescem bem com o nitrato no meio como por
exemplo o arroz (Oriza sativa L) (SARGENT amp KING 1974
YATAZAWA amp FURUHASHI 1968)
Grewal et al (1980) citados por Grattapaglia amp
Machado (1990) verificaram em culturas de eucalipto
(Eucaliptus citriodora Hook) que ao se reduzir pela
metade as concentraccedilotildees de nitrato de amocircnio e de
potaacutessio do meio MS a taxa de multiplicaccedilatildeo dobrava
Essa mesma concentraccedilatildeo proporcionou o melhor
comprimento da parte aeacuterea em embriotildees zigoacuteticos de C
arabica L (RIBEIRO 2001)
A maioria das plantas prioriza a absorccedilatildeo de NH4
+ a
NO3
- poreacutem eacute necessaacuterio encontrar o balanccedilo ideal de
NH4+NO
3- para o oacutetimo crescimento in vitro (SATO 1994)
Objetivou-se com este trabalho estudar os efeitos de
diferentes concentraccedilotildees de NH4NO
3 e KNO
3 do meio MS
no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos diretos de C
arabica L cv Rubi
MATERIAL E MEacuteTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos Vegetais do Departamento de
Agricultura da Universidade Federal de Lavras MG Foram
utilizados como explantes embriotildees de C arabica cv
Rubi provenientes da embriogecircnese somaacutetica direta Os
embriotildees somaacuteticos foram induzidos em meio MS
(MURASHIGE amp SKOOG 1962) com 50 dos sais
acrescido de 20 mg L-1 de GA3 6 mg L-1 de cinetina 8 mg
L-1 de ANA 100mg L-1 de caseiacutena hidrolisada e 400mg L-
1 de extrato de malte Os tubos de ensaio foram mantidos
durante 150 dias sob condiccedilotildees de obscuridade com
temperatura de 25 plusmn 1oC Os embriotildees somaacuteticos induzidos
nesse processo foram individualizados em tubos de
ensaio e mantidos durante 30 dias em meio MS
objetivando a homogeneizaccedilatildeo do material para a
realizaccedilatildeo deste experimento
No preparo do meio foram utilizadas soluccedilotildees-
estoque armazenadas em frascos de vidro escuro a
temperaturas em torno de 5degC Os tratamentos foram
constituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH4NO
3 (0 475
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 107
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
950 1425 e 1900 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3
(0 475 950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS
O meio foi solidificado com 5g L -1 de aacutegar e o pH
ajustado para 58 plusmn 01 utilizando NaOH 05 e 01 N ou HCl
05 N e 01 N e distribuiacutedo em tubos de ensaio cada um
recebendo 15 mL do mesmo Os tubos foram vedados com
tampas plaacutesticas transluacutecidas antes do processo de
autoclavagem a 121degC e 1 atm por 20 minutos Apoacutes o
resfriamento o meio foi levado agrave cacircmara de fluxo laminar
desinfestada com aacutelcool 70 (etanol) onde foi feita a
inoculaccedilatildeo dos explantes
Os tubos foram vedados com parafilme e mantidos
em sala de crescimento com irradiacircncia em torno de 32 igraveM
m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas com temperatura de 25 plusmn
1oC O delineamento experimental utilizado foi inteiramente
casualizado com quatro repeticcedilotildees e trecircs tubos por
parcela cada tubo contendo um explante
Aos 150 dias apoacutes a instalaccedilatildeo foram avaliadas as
variaacuteveis nuacutemero de folhas comprimento da parte aeacuterea e
peso da mateacuteria fresca das placircntulas Os valores observados
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia para dados
desbalanceados Utilizou-se o procedimento GLM
disponiacutevel no aplicativo computacional SASreg (SAS
INSTITUTE 1990)
Em situaccedilotildees em que a anaacutelise de variacircncia natildeo
confirmou a normalidade dos resiacuteduos para o comprimento
da parte aeacuterea e peso da mateacuteria fresca os dados sofreram
uma transformaccedilatildeo para garantir que essa pressuposiccedilatildeo
fosse atendida As transformaccedilotildees utilizadas foram x e5 1 02x respectivamente A variaacutevel nuacutemero de folhas
atendeu agraves pressuposiccedilotildees de normalidade A anaacutelise de
variacircncia do peso da mateacuteria fresca foi realizada por meio
do meacutetodo dos quadrados miacutenimos ponderados pelo
inverso das variacircncias de cada tratamento uma vez que
esses apresentaram heterogeneidade de variacircncias
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Houve efeito significativo das concentraccedilotildees de
NH4NO
3 e KNO
3 para o nuacutemero de folhas e peso da mateacuteria
fresca das placircntulas (Tabela 1) Observa-se que a interaccedilatildeo
entre os fatores mostrou-se significativa em relaccedilatildeo a todas
as caracteriacutesticas avaliadas a 5 de probabilidade pelo
teste F
Nuacutemero de folhas
Analisando-se as curvas de regressatildeo observa-
se na Figura 1 que houve formaccedilatildeo de maior nuacutemero
de folhas quando foram adicionados ao meio de cultura
1900 mg L-sup1 de KNO3
combinado com 12985 mg L-sup1 de
NH4NO
3 (meacutedia de 1163 folhas) Com a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 87879 mg L-sup1 de NH
4NO
3
pocircde-se observar a formaccedilatildeo meacutedia de 1001 folhas
Dessa forma como a diferenccedila eacute miacutenima justifica-se a
utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 com o objetivo de
reduccedilatildeo dos custos
TABELA 1 Anaacutelise de variacircncia dos dados relativos ao nuacutemero de folhas (NF) comprimento da parte aeacuterea (CPA) epeso da mateacuteria fresca (PMF) das placircntulas de Coffea arabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3
QM Fonte de variaccedilatildeo GL
NF CPA (cm) PMF (g)
NH4NO3 4 458337 01152 17450
KNO3 4 230014 00837 22117
NH4NO3 x KNO3 16 20447 01215 15139
Erro 135 91386 00584 05871
CV () 5162 2357 912
Significativo a 5 pelo teste F
REZENDE J C de et al108
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
FIGURA 1 Nuacutemero folhas de placircntulas de Coffea arabicacv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 combinadas com 0950 e 1900 mg L-sup1 de KNO
3
Contudo concentraccedilotildees acima de 87879 mg L-sup1 de
NH4NO
3 combinadas com 950 mg L-sup1 de NH
4NO
3 ou na
ausecircncia desse provocaram reduccedilatildeo no nuacutemero de folhas
possivelmente por toxidez causada pelo amocircnio devido agrave
sua concentraccedilatildeo mais elevada em relaccedilatildeo ao nitrato no
meio de cultura Quando o nitrogecircnio eacute fornecido somente
na forma de sais inorgacircnicos de amocircnio as ceacutelulas in vitro
apresentam sintomas de toxidez (GAMBORG amp SHYLUK
1970 YATAZAWA amp FURUHASHI 1968) demonstrando
assim a necessidade de combinaccedilatildeo dessas duas fontes
no meio de cultura
Segundo Raab amp Terry (1994) em virtude do grande
requerimento de energia fotoquiacutemica para a reduccedilatildeo
bioquiacutemica do nitrato era de se esperar que as plantas
crescessem melhor em meios com amocircnia do que em meios
com nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio no entanto
observou-se o inverso Esses mesmos autores apontam
como causa desse paradoxo o efluxo de iacuteons H+ que ocorre
devido agrave absorccedilatildeo do iacuteon amocircnio provocando acidificaccedilatildeo
do meio impedindo a absorccedilatildeo de nutrientes Segundo
Hashimoto et al (1992) a presenccedila de amocircnio in vitro
poderia acidificar o meio favorecendo a siacutentese de
carbamatos e tambeacutem a atividade de anidrase carbocircnica
Esses autores conseguiram diminuir o efeito toacutexico do
amocircnio apenas diminuindo a concentraccedilatildeo de nitrato de
amocircnio no meio MS
O nuacutemero de folhas obtidas na ausecircncia de KNO3
foi inferior quando comparado aos demais tratamentos (a
maior meacutedia observada foi 658 folhas na concentraccedilatildeo de
37626 mg L-sup1 de NH4NO
3) evidenciando assim a
importacircncia desse sal para o desenvolvimento de folhas
em placircntulas de C arabica cv Rubi Os resultados obtidos
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 109
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
concordam em parte com os obtidos por Ribeiro (2001)
trabalhando com embriotildees zigoacuteticos de C arabica que
recomenda a adiccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de NH4NO
3 e KNO
3 no
meio de cultura para comprimento da parte aeacuterea
Observa-se ainda que utilizando-se a concentraccedilatildeo
de 1425 mg L-sup1 de KNO3 haacute reduccedilatildeo no comprimento da
parte aeacuterea das placircntulas ateacute a concentraccedilatildeo de 42091 mg
L-sup1 de NH4NO
3 havendo a partir desse ponto incremento
no desenvolvimento da variaacutevel ateacute a concentraccedilatildeo de
149131 mg L-sup1 de KNO3 (132 cm dados transformados)
Esses resultados demonstram que as respostas de
interaccedilatildeo entre fontes de nitrogecircnio variam em funccedilatildeo das
concentraccedilotildees utilizadas
Na ausecircncia de NH4NO
3 em ambas as
concentraccedilotildees estudadas o comprimento da parte aeacuterea
foi inferior (09 e 097 cm respectivamente nas
concentraccedilotildees de 950 e 1425 mg L-sup1 de KNO3) evidenciando
mais uma vez a importacircncia desse sal no desenvolvimento
de embriotildees em C arabica cv Rubi
Peso da mateacuteria fresca
FIGURA 3
Peso da mateacuteria fresca de placircntulas de Carabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildeesde NH
4NO
3 combinadas com 0950 mg L-sup1 de KNO
3
6
65
7
75
8
85
9
95
10
105
0 4125 825 12375 1650NH4NO3 (mg L-1)
Peso
da
mat
eacuteria
fre
sca
(g)
Y KNO3 475 Y KNO3 1425 Y KNO3 1900 = ns Y KNO3 0 = 968811 - 006491X + 000061019X2 R2 = 09017 Y KNO3 950 = 800708 + 002278X 000022883X2 R2 =09053
Na ausecircncia de KNO3 houve decreacutescimo do peso
da mateacuteria fresca associado ao incremento das
concentraccedilotildees de NH4NO
3 ateacute a concentraccedilatildeo de 91775
mg L-sup1 de NH4NO
3 (Figura 3) observando-se aumento do
peso da mateacuteria fresca a partir deste ponto Para a
concentraccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 ocorreu aumento do
peso da mateacuteria fresca ateacute a concentraccedilatildeo de 100221 mg L-
sup1 de NH4NO
3 Poreacutem o maior valor foi registrado na
ausecircncia de ambos os sais estudados (976 g)
Da mesma forma Grossi (2000) trabalhando com
bromeacutelia observou que a menor concentraccedilatildeo de
nitrogecircnio promoveu maior produccedilatildeo de massa fresca
Kanashiro et al (2007) observou decreacutescimo linear na
massa fresca de folhas de bromeacutelia agrave medida que se
aumentou a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio (entre 75 e 120
mM) sendo que para cada mM de nitrogecircnio acrescido ao
meio houve um decreacutescimo de 00018 g na massa fresca
Provavelmente o cultivo em concentraccedilotildees maiores de
nitrogecircnio tenderia a diminuir a produccedilatildeo de massa fresca
como foi observado no presente experimento
CONCLUSOtildeES
Com base no crescimento da parte aeacuterea e na
formaccedilatildeo do maior nuacutemero de folhas a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de
NH4NO
3 eacute mais indicada para o desenvolvimento de
embriotildees somaacuteticos de Coffea arabica L Os resultados
indicam ainda que a ausecircncia de nitrogecircnio promove o
maior peso das placircntulas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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YATAZAWA M FURUHASHI K Nitrogen sources forthe growth of rice callus tissue Soil Science and PlantNutrition v 14 p 73-79 1968
NORMAS PARA PUBLICACcedilAtildeO DE ARTIGOS E COMUNICACcedilOtildeES CIENTIacuteFICAS
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagationeacute editada semestralmente pela Editora da UniversidadeFederal de Lavras (Editora UFLA) publica artigoscientiacuteficos e comunicaccedilotildees cientiacuteficas da aacuterea de culturade tecidos de plantas elaborados por membros dacomunidade cientiacutefica nacional e internacional Natildeo eacutecobrada taxa para publicaccedilatildeo de trabalhos desde que umdos autores seja soacutecio e esteja em dia com a ABCTP(Associaccedilatildeo de Cultura de Cultura de Tecidos de Plantas)Eacute condiccedilatildeo fundamental que os artigoscomunicaccedilotildeessubmetidos agrave apreciaccedilatildeo da revista Plant Cell Culture ampMicropropagation natildeo foram e nem seratildeo publicadossimultaneamente em outro lugar Com a aceitaccedilatildeo do artigopara publicaccedilatildeo os editores adquirem amplos e exclusivosdireitos sobre o artigo para todas as liacutenguas e paiacuteses Apublicaccedilatildeo de artigoscomunicaccedilotildees dependeraacute daobservacircncia das Normas Editoriais dos pareceres do CorpoEditorial e da Comissatildeo ad hoc Todos os pareceres tecircmcaraacuteter sigiloso e imparcial e tanto os autores quanto osmembros do Corpo Editorial eou Comissatildeo ad hoc natildeoobtecircm informaccedilotildees identificadoras entre si
Os conceitos e afirmaccedilotildees contidos nos artigos ecomunicaccedilotildees seratildeo de inteira responsabilidade do(s)autor(es)
1 SUBMISSAtildeO
Cada trabalho deveraacute ter no maacuteximo 14 paacuteginas ejunto do mesmo deveraacute ser encaminhado ofiacutecio dirigido aoEditor Chefe da revista solicitando a publicaccedilatildeo do artigo
Esse ofiacutecio deveraacute conter o pedido de apreciaccedilatildeona revista ao editor chefe a declaraccedilatildeo de ser um trabalhooriginal e natildeo ter sido submetido a nenhuma outra revistaser assinado por todos os autores constar o endereccedilocompleto telefone e e-mail de todos Qualquer inclusatildeoexclusatildeo ou alteraccedilatildeo na ordem dos autores deveraacute sernotificada mediante ofiacutecio assinado por todos os autores(inclusive do autor excluiacutedo)
Originais quatro vias impressas e uma via em CDR comtexto e ilustraccedilotildees e graacuteficos Das 4 vias impressas apenas1 deve conter os nomes completos dos autores e rodapeacutena primeira paacuteginaProcessador de texto Word for Windows (version 98 2000XP ou 2003)Redigido em portuguecircs inglecircs ou espanholEspaccedilamento do texto Duplo Margens esquerda (3cm)direita (2cm) inferior e superiores (25cm) Cabeccedilalho eRodapeacute (25cm)Papel formato A4Fonte Times New Roman tamanho 12Nuacutemero de paacuteginas ateacute 14 paacuteginas numeradasconsecutivamente incluindo as ilustraccedilotildees
Tabelas devem fazer parte do corpo do artigo e serapresentadas no moacutedulo tabela do Word O tiacutetulo deveficar acimaGraacuteficos Figuras e Fotografias devem ser apresentadosem preto e branco niacutetidos e com contraste escaneadosinseridos no texto apoacutes a citaccedilatildeo dos mesmos e tambeacutemem um arquivo agrave parte salvos em extensatildeo tif ou jpg com resoluccedilatildeo de 300 dpi Os graacuteficos devem vir tambeacutemem excel com letra Times New Roman tamanho 10 semnegrito sem caixa de textos e agrupados em arquivo agraveparteSiacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitos emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker sem perda de suas formas originais
2 ESTRUTURA E ORGANIZACcedilAtildeO
21 O artigo cientiacutefico deve ser apresentado na seguintesequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfulas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumo
Index terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
INTRODUCcedilAtildeO
Deve apresentar uma visatildeo concisa do estado atualdo conhecimento sobre o assunto que o manuscritoaborda e enfatizar a relevacircncia do estudo sem constituir-se em extensa revisatildeo e na parte final os objetivos dapesquisa Deve incluir a revisatildeo de literatura
MATERIAL E MEacuteTODOS
Esta seccedilatildeo pode ser dividida em subtiacutetulosindicados em negrito
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Podem ser divididas em subseccedilotildees com subtiacutetulosconcisos e descritivos e conter tabelas e figuras
CONCLUSOtildeES
Finalizar com os resultados de acordo com osobjetivos do trabalho
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e naseccedilatildeo proacutepria
22 A comunicaccedilatildeo cientiacutefica deve ser apresentada naseguinte sequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfluas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumoIndex terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
Texto sem subdivisatildeo poreacutem com introduccedilatildeo material emeacutetodos resultados e discussatildeo (podendo conter tabelase graacuteficos e conclusatildeo subentendidas
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e na seccedilatildeoproacutepria
3 CASO O ARTIGO CONTENHA FOTOGRAFIASGRAacuteFICOS FIGURAS SIacuteMBOLOS E FOacuteRMULASESSAS DEVERAtildeO OBEDECER AgraveS SEGUINTESNORMAS
31 Fotografias deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpi
32 Figuras deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpiAs figuras deveratildeo ser elaboradas com letra Times NewRoman tamanho 10 sem negrito sem caixa de textos eagrupadas
33 Graacuteficos deveratildeo ser inseridos apoacutes citaccedilatildeo dosmesmos dentro do proacuteprio texto elaboradopreferencialmente em Excel com letra Times New Romantamanho 10 sem negrito sem caixa de textos e agrupadas
34 Siacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitas emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker (ex MathType Equation) sem perda de suasformas originais
OBS A formataccedilatildeo correta eacute parte imprescindiacutevel para queo trabalho seja devidamente protocolado Caso este natildeoesteja nas normas o mesmo seraacute recusado
4 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS as referecircnciasbibliograacuteficas devem ser citadas conforme a NBR60232002da ABNT
A exatidatildeo das referecircncias constantes da listagem e acorreta citaccedilatildeo no texto satildeo de responsabilidade do(s)autor(es) do artigo
41 Orientaccedilotildees gerais- Deve-se apresentar todos os autores do documentocientiacutefico (fonte)- O nome do perioacutedico deve ser descrito por extenso natildeodeve ser abreviado- Em todas as referecircncias deve-se apresentar o local depublicaccedilatildeo (cidade) a ser descrito no lugar adequado paracada tipo de documento- As referecircncias devem ser ordenadas alfabeticamente
42 Exemplificaccedilatildeo (tipos mais comuns)
ARTIGO DE PERIOacuteDICO
VIEIRA R F RESENDE M A V de Eacutepocas de plantio deervilha em Patos de Minas Uberaba e Janauacuteba MinasGerais Ciecircncia e Agrotecnologia Lavras v 24 n 1 p 74-80 janmar 2000
LIVRO
a) livro no todo
STEEL R G D TORRIE J H Principles andprocedures of statistics New York McGraw-Hill Bookl960 481 p
b) Parte de livro com autoria especiacutefica
FLEURY J A Anaacutelise ao niacutevel de empresa dos impactosda automaccedilatildeo sobre a organizaccedilatildeo da produccedilatildeo de trabalhoIn SOARES R M S M Gestatildeo da empresa Brasiacutelia IPEAIPLAN 1980 p 149-159
c) Parte de livro sem autoria especiacutefica
MARTIM L C T Nutriccedilatildeo de bovino de corte emconfinamento In ______ Confinamento de bovino decorte 2 ed Satildeo Paulo Nobel 1986 cap 3 p 29-89
DISSERTACcedilAtildeO E TESE
GONCcedilALVES R A Preservaccedilatildeo da qualidade tecnoloacutegicade trigo (Triticum aestivum L) e controle de Rhyzoperthadominica (F) durante o armazenamento em atmosferacontrolada com Co2 e N2 1997 52 f Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Ciecircncia dos Alimentos) Universidade Federal deLavras Lavras 1997
MATIOLI G P Influecircncia do leite proveniente de vacasmastiacuteticas no rendimento de queijo frescal 2000 55 pDissertaccedilatildeo (Mestrado em Ciecircncias dos Alimentos) -Universidade Federal de Lavras Lavras 2000
Nota A folha eacute composta de duas paacuteginas anverso everso Alguns trabalhos como teses e dissertaccedilotildees satildeoimpressos apenas no anverso e neste caso indica-se f(ABNT NBR60232002 p 18)
TRABALHOS DE CONGRESSO E OUTROS EVENTOS
SILVA J N M Possibilidades de produccedilatildeo sustentada demadeira em floresta densa de terra firme da Amazocircniabrasileira In CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO 61990 Campos do Jordatildeo Anais Campos do Jordatildeo SBSSBEF 1990 p 39-45
DOCUMENTOS ELETROcircNICOS
As obras consultadas online satildeo referenciadas conformenormas especiacuteficas para cada tipo de documento(monografia no todo e em parte trabalho apresentado emevento artigo de perioacutedico artigo de jornal etc)acrescidas de informaccedilotildees sobre o endereccedilo eletrocircnicoapresentado entre braquetes (lt gt) precedido da expressatildeo
Disponiacutevel em e da data de acesso ao documentoprecedida da expressatildeo Acesso em Nota Natildeo se recomenda referenciar material eletrocircnico decurta duraccedilatildeo nas redes (ABNT NBR60232000 p 4)Segundo padrotildees internacionais a divisatildeo de endereccediloeletrocircnico no fim da linha deve ocorrer sempre apoacutes barra ()
Monografia (acesso online)
a) livro no todo
TAKAHASHI T (Coord) Tecnologia em foco BrasiacuteliaSocinfoMCT 2000 90 p Disponiacutevel em lthttpwwwsocinfoorgbrgt Acesso em 22 ago 2000
b) parte de livro
TAKAHASHI T Mercado trabalho e oportunidades In______ Sociedade da informaccedilatildeo no Brasil livro verdeBrasiacutelia SocinfoMCT 2000 cap 2 p 13-24 Disponiacutevelem lthttpwwwsocinfogovbrgt Acesso em 22 ago 2000
c) Parte de congresso seminaacuterio etc
GIESBRECHT H O Avaliaccedilatildeo de desempenho deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica a experiecircncia deprojeto excelecircncia na pesquisa tecnoloacutegica InCONGRESSO ABIPTI 2000 Fortaleza Gestatildeo deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica Fortaleza Nutec 2000Disponiacutevel em lthttpwwwabiptiorgbrgt Acesso em01 dez 2000
d) Tese
SILVA E M Arbitrariedade do signo a liacutengua brasileirade sinais (LIBRAS) 1997 144 p Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Linguumliacutestica Aplicada e Estudo de Liacutengua) - PontifiacuteciaUniversidade Catoacutelica de Satildeo Paulo Satildeo Paulo 1997Disponiacutevel em lthttpwwwterracombrvirtualbooksfreebookportdid teseshtmgt Acesso em 28 nov 2000
Artigo de perioacutedico (acesso online)
RESENDE A M G Hipertexto tramas e trilhas de umconceito contemporacircneo Informaccedilatildeo e Sociedade Recifev 10 n 1 2000 Seccedilatildeo Educaccedilatildeo Disponiacutevel em lthttpwwwinformaccedilatildeoesociedadeufpbbrgt Acesso em 30 nov2000
CITACcedilAtildeO PELO SISTEMA ALFABEacuteTICO (AUTOR-DATA) (conforme ABNT NBR105202002)Dois autores - Steel amp Torrie (1960) ou (STEEL amp TORRIE1960)Trecircs ou mais autores - Valle et al (l945) ou (VALLE et al1945)Obs Quando forem citados dois autores de uma mesmaobra deve-se separaacute-los pelo sinal amp (comercial)
5 O EDITOR CHEFE NOTIFICARAacute O AUTOR DORECEBIMENTO DO ORIGINAL E POSTERIORMENTE
O INFORMARAacute SOBRE SUA PUBLICACcedilAtildeO OSARTIGOS QUE NECESSITAREM DE MODIFICACcedilOtildeESSERAtildeO DEVOLVIDOS AO AUTOR PARA A DEVIDAREVISAtildeO
6 OS ARTIGOS NAtildeO APROVADOS SERAtildeODEVOLVIDOS
7 OS ARTIGOS SERAtildeO PUBLICADOS EM ORDEMDE APROVACcedilAtildeO
8 O NAtildeO-CUMPRIMENTO DESSAS NORMASIMPLICARAacute NA DEVOLUCcedilAtildeO DO ARTIGO AOAUTOR
9 OS CASOS OMISSOS SERAtildeO RESOLVIDOS PELACOMISSAtildeO EDITORIAL
10 O ARTIGO DEVERAacute SER ENVIADO PARA
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepartamento de BiologiaSetor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 3037CEP 37200-000Lavras MG
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Plant Cell Culture amp Micropropagation asemestral journal edited by Editora UFLA of theUniversidade Federal de Lavras publishes scientificarticles and communications in the area of plant tissueculture elaborated by researchers of the national andinternational scientific community One of the authors mustbe associated and have paid all charges required by theABCTP (Plant Tissue Culture Association) in order to betax free for publication in Plant Cell Culture ampMicropropagation Submission of a manuscript implies thatit is neither under consideration for publication elsewherenor has appeared previously in part or in whole Onacceptance for publication authors assign to the Editorsfull copyright of the manuscript in all languages andcountries Publications will depend on editorial rules andon the review of experts and ad hoc commission Reviewerand editorial opinions will be anonymously communicatedto authors
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The manuscript must present a maximum of 14pages At the time of submission a cover letter must besent with the manuscript copies to the Editor requestingpublication of the article This cover letter must be signedby all authors
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Original Four copies and CD with text and illustrationsOnly one of the 4 printed copies must contain the fullnames of the authors and footnote in the first pageFormat Word for Windows (version 98 2000 XP ou 2003)Spacing of the text Double Margin on the left hand sideand 20 cm margin on the right hand side 25 cm upper andlower margin 25 cm for the heading and 25 cm for thefootnotePaper A4 formatSource Times New Roman size 12Number of pages up to 14 pages including the illustrationsTables Tables should be part of the body of the paper andthey must be presented in Word or Excel The title shouldbe above and be presented in the language in which thearticle was written and in English The vertical linesseparating the columns should not appearGraphsFiguresPhotographs must be presented in blackand white clear and with contrast scanned inserted in
the text after citation and also in a separate file (on thesame diskette as the article) saved in extension tif orjpg with resolution of 300 dpi The title should be below
and presented in the language in which the article waswritten and in EnglishSymbols and Chemical Formula must be presented usinga word processor that permits a format Page Maker
2 STRUCTURE AND ORGANIZATION
21 The article should be presented in the followingsequence
TITLE
In English language containing no more than 15 words incapital letters and bold
AUTHORS
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copies Footnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTshould be informative and condensed and should
explain the objectives material and methods results andconclusion of the work in a maximum of 250 words all writtenin one paragraphFor articles written in English the abstract should also bepresented in Portuguese
Key words minimum of three and maximum of five Theyshould not repeat words that are already in the title Thesemay include phrases as well as individual words and shouldbe separate by commasFor articles written in English the key-words should alsobe presented in Portuguese
INTRODUCTION
Should present a concise vision of the current level ofknowledge that has been achieved within the subject areathat the paper will discuss It should neither give anextensive review nor should it include details about theresults and discussion It should clearly indicate theobjectives of the research that was carried out
MATERIAL AND METHODS
This section can contain subdivisions with subtitles inbold print
RESULTS AND DISCUSSION
This section can have subsection which begins withconcise descriptive titles in bold print
CONCLUSIONS
Finishing agree of objectives of work
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
22 The Communication should be presented in thefollowing sequence
TITLE
Sufficiently clear conspicuous and complete withoutsuperfluous words It is recommended to initiate with theterm that represent the most important aspect with otherterms in decreasing of importance
TITLE IN PORTUGUESE
FULL NAME(S) OF THE AUTHOR(S)
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ABSTRACTWritten continuously without paragraph It must
not exceed 250 words Index terms must be enclosed afterthe abstract using terms different from those used in thetitle and separated by comma
Index terms (3 to 5) must be described in capital and smallletters and express the content of the article
ABSTRACT AND INDEX TERMS IN PORTUGUESE
Text with no division but must include introductionmaterial and methods results and discussion andconclusion (it may include tables and figures)
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
3 PHOTOGRAPHS GRAPHS FIGURES SYMBOLSOR FORMULA CONTAINED IN THE ARTICLE SHOULDOBEY THE FOLLOWING RULES
31 Photographs must be presented in black and whiteclear and with contrast inserted in the text after their citationand also in a separate file (on the same diskette as thearticle) saved in extension TIFF
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32 Figures must be presented in black and white clearand with contrast inserted in the text after their citation andalso in a separate file (on the same diskette as the article)saved in extension TIFF
or JPEG with resolution of300 dpi They must be elaborated using Times New Romanfont size 10 without bold without text box and arranged
33 Graphs must be inserted in the text after their citationelaborated preferentially in Excel using Times New Romanfont size 10 without bold
34 Symbols and Chemical Formula must be presentedusing a word processor that permits a format for Page Maker(ex MathType Equation) without loss of its original form
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5 THE BRAZILIAN ASSOCIATION OF PLANT TISSUECULTURE (ABCTP) WILL INFORM THE AUTHOR THERECEIPT OF THE ORIGINAL MANUSCRIPT ANDEVENTUALLY IT WILL ALSO SEND INFORMATIONREGARDING ITS PUBLICATION MANUSCRIPTSTHAT REQUIRE MODIFICATIONS WILL BERETURNED TO THE AUTHOR FOR THE RESPECTIVEREVISION ANDCORRECTIONS
6 MANUSCRIPTS NOT APPROVED WON T BERETURNED TO THE AUTHOR
7 ARTICLES WILL BE PUBLISHED ACCORDING TOTHE ORDER OF RECEIPT AND APPROVAL
8 IF ANY OF THESE RULES ARE NOT ATTENDED THEMANUSCRIPT WILL BE RETURNED TO THE AUTHOR
9 THE NEGLECTFUL CASES WILL BE SOLVED BYTHE EDITORIAL COMMITTEE
10 MANUSCRIPTS SHOULD BE SENT TO THEFOLLOWING ADDRESS
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Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepto de Biologia - Setor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 303737200-000 Lavras MG BRAZIL
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagation editada semestralmente pela Editora daUniversidade Federal de Lavras (Editora UFLA) publica artigos cientiacuteficos da aacuterea de cultura de tecidosde plantas por membros da comunidade cientiacutefica nacional e internacional Com uma tiragem de 600exemplares eacute distribuiacuteda aos membros da ASSOCIACcedilAtildeO BRASILEIRA DE CULTURA DETECIDOS DE PLANTAS (ABCTP) em dia com a anuidade
Para se associar agrave ABCTP consulte o site ltwwwabctpuflabrgt
PERMUTA
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagation deseja fazer permuta com revistas de aacutereas afins
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FICHA CATALOGRAacuteFICA
Diretoria
Presidente Renato Paiva UFLASecretaacuterio Moacir Pasqual UFLA
Secretaacuterio Adjunto Antocircnio Carlos Torres EMBRAPA HortaliccedilasTesoureiro Guilherme Augusto Canella Gomes Benger do Brasil
Comissatildeo Editorial
Editor ChefeRenato Paiva UFLA
Conselho EditorialAntocircnio Carlos Torres EMBRAPA Hortaliccedilas
Consultoria Cientiacutefica(Vol 4 N2)Ana da Silva Ledo EMBRAPA
Antonio Carlos Torres EMBRAPAAparecida Gomes de Arauacutejo UFLA
Elka Fabiana Aparecida Almeida EMBRAPAEvaristo Mauro de Castro UFLA
Fabiano Guimaratildees Silva CEFET Rio VerdeFernanda Pereira Soares MAPA
Jonny Everson Scherwinski Pereira EMBRAPAJoseacute Eduardo Brasil Pereira Pinto UFLANatoniel Franklin de Melo EMBRAPA
Raiacuterys Cravo Nogueira UFPA
Plant Cell Culture amp Micropropagation
ISSN 1808-9909
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-110 2008
CONTEUacuteDO
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia lingulata Ruiz amp Pav em ambiente protegido em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo Acclimatization of micropropagated plants of Heliconia Lingulata Ruiz amp Pav in protected environments as a function of irrigation depth Benito Moreira de Azevedo Eliana Lee Jorge Rocha Thales Viniacutecius de Arauacutejo Viana Albanise Barbosa Mariho Ana Cristina Portugal Pito de Carvalho Denise Vieira Vasconcelos 55
In vitro organogenesis of passion fruit (Passiflora edulis Sims F flavicarpa Deg) affected by irradiance sucrose and explant position Organogecircnese in vitro do maracujazeiro (Passiflora edulis Sims F flavicarpa Degener) afetado por irradiacircncia sacarose e posiccedilatildeo dos explantes Rodrigo Sobreira Alexandre Flaacutevio Alencar D Arauacutejo Couto Joseacute Maria Moreira Dias Wagner Campos Otoni Rita De Caacutessia Mendes Paulo Roberto Cecon 62
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental [Ananas Comosus (L) Merr Var Bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo Substrates evaluation for production of ornamental pineapple [Ananas Comosus (L) Merr Var Bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] plants under greenhouse conditions Francisco Nunes da Cunha Filho Antonio Carlos Torres Joatildeo Maria Charchar
70
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos na multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental in vitro Effect of isopentenyl adenine in four subcultures during the in vitro multiplication of ornamental pineapple shoot Maria do Desterro Mendes dos Santos Joseacute Getuacutelio Da Silva Filho Antonio Carlos Torres 76
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento da cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) cultivada in vitro em diferentes concentraccedilotildees de sacarose e qualidade de luz Photochemical efficiency and growth characteristics of sugar cane (Saccharum officinarum L) plants cultivated in vitro under different sucrose concentrations and light quality Geoacutergia Peixoto Bechara Motheacute Alena Netto Torres Luis Eduardo Campos Crespo Eliemar Campostrini 84
Effects of auxins and cytokinins on in vitro development of Alpinia purpurata K Schum and phenolic compounds production Efeito de auxinas e citocininas no desenvolvimento in vitro de Alpinia purpurata K Schum e produccedilatildeo de substacircncias fenoacutelicas Cristiane Pimentel Victoacuterio Iacinete Pamplona da Cruz Alice Sato Ricardo Machado Kuster Celso Luiz Salgueiro Lage 92
Curva de crescimento atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteis e taninos totais em calos de Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville (Fabaceae-Mimosoideae) Growth curve phenylalanine ammonia-lyase activity and total phenol levels in callus of Stryphnodendron Adstringens (Mart) Coville - (Fabaceae-Mimosoideae) Ana Hortecircncia Fonsecircca Castro Miller Marani Lima Renato Paiva Amauri Alves de Alvarenga Mirelle Oliveira Soacuteter 99
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica L concentraccedilotildees de NH4NO3 e de KNO3 no desenvolvimento de embriotildees Direct somatic embryogenesis of Coffea arabica L concentrations of NH4NO3 and KNO3 on the development of embryos Juliana Costa de Rezende Moacir Pasqual Samuel Pereira de Carvalho Ester Alice Ferreira Flavia Carvalho Santos 105
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 55
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
(Recebido em 17 de abril de 2008 e aprovado em 22 de julho de 2008)
ACLIMATIZACcedilAtildeO DE MUDAS MICROPROPAGADAS DE Heliconialingulata Ruiz amp Pav EM AMBIENTE PROTEGIDO EM FUNCcedilAtildeO
DA LAcircMINA DE IRRIGACcedilAtildeO1
ACCLIMATIZATION OF MICROPROPAGATED PLANTS OF Heliconia lingulata Ruiz ampPav IN PROTECTED ENVIRONMENTS AS A FUNCTION OF IRRIGATION DEPTH
BENITO MOREIRA DE AZEVEDO2 ELIANA LEE JORGE ROCHA3 THALES VINIacuteCIUS DE ARAUJO VIANA4ALBANISE BARBOSA MARINHO5 ANA CRISTINA PORTUGAL PINTO DE CARVALHO6
DENISE VIEIRA VASCONCELOS7
1Parte da dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade Federal do Cearaacute pelo primeiro autor para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem2Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC benitoazevedohotmailcom
3Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem (In memoacuteria)4Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC thalesufcbr
5Doutora em Produccedilatildeo Vegetal Pesquisadora CNPqFUNCAP albanisebmgmailcom6Doutora Embrapa Agroinduacutestria Tropical Cx P l 3761 60511-110 Fortaleza CE cristinacnpatembrapabr7Engenheira Agrocircnoma Mestre Universidade Federal do CearaacuteUFC denisevasconceloshotmailcom
RESUMOAs helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com sua beleza
e exotismo constituem uma das maiores riquezas da flora brasileiraEm decorrecircncia da alta demanda do mercado consumidor as mudasvecircm sendo produzidas em escala comercial por meio damicropropagaccedilatildeo uma teacutecnica importante da cultura de tecidosque apresenta diversas etapas A etapa de aclimatizaccedilatildeo eacute a fasemais criacutetica e importante pois se natildeo for bem executada podeproporcionar altos iacutendices de mortalidade e baixas taxas decrescimento e desuniformidade das plantas com consequumlentequeda na produccedilatildeo Para minimizar esse problema e atender agravesexigecircncias do mercado consumidor eacute preciso buscar informaccedilotildeesteacutecnicas e cientiacuteficas sobre o adequado manejo das plantas nafase de aclimatizaccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliaro efeito de distintas lacircminas de irrigaccedilatildeo na aclimatizaccedilatildeo demudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata Ruizamp Pav) A pesquisa foi conduzida em um ambiente protegidopertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical Fortaleza CE(3ordm44 S e 38ordm33 W) Foram analisadas quatro lacircminas de irrigaccedilatildeo1 2 3 e 4 mm de aacutegua As variaacuteveis agronocircmicas avaliadas nosexperimentos foram altura da planta nuacutemero de folhas e diacircmetrodo caule Os resultados dos experimentos evidenciaram o melhordesenvolvimento das mudas micropropagadas de helicocircniaquando irrigadas com lacircmina de 25 mm dia-1
Termos para indexaccedilatildeo Floricultura Heliconia lingulatamanejo de irrigaccedilatildeo
ABSTRACTHeliconias are beautiful and exotic ornamental plants of
the wealthy Brazilian flora Due to a high demand of theconsuming market plants are being produced in a commercial
scale using the technique of micropropagation In this techniqueacclimatization is the most important and critical phase forpromoting high rates of mortality reduced growth and plantuniformity which reduce its production The objective of thiswork was to evaluate the effect of different irrigation depth inthe acclimatization of micropropagated heliconia (Heliconialingulata) The experiments were in a protected environmentlocated at Embrapa Tropical Agroindustry Fortaleza CearaBrazil (3ordm44 S and 38ordm33 W) The agronomic variables evaluatedwere plant height leaf number and stem diameter The resultsshowed the best development of micropropagated heliconia plantsusing water depth of 25 mm day-1
Index terms floraculture Heliconia lingulata irrigationmanagement
INTRODUCcedilAtildeO
As helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com
sua beleza e exotismo assemelham-se a verdadeiras
esculturas lembrando em sua forma piracircmides bicos de
aves cascatas de flores pinhais ou cachos de banana As
helicocircnias constituem uma das maiores riquezas da flora
brasileira Atualmente sabe-se que o mercado internacional
tem proporcionado muitas oportunidades de negoacutecios para
os produtores dessas flores tropicais
A floricultura eacute uma atividade desenvolvida em
geral em ambientes protegidos estufas ou tuacuteneis plaacutesticos
AZEVEDO B M de et al56
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
combinando alta produtividade com maior qualidade
garantindo ao agricultor uma colheita satisfatoacuteria e
reduzindo ao maacuteximo as perdas por danos proporcionados
por variaccedilotildees climaacuteticas adversas (GONDIM et al 2004)
De acordo com Terceiro Neto et al (2004) uma etapa
importante na produccedilatildeo de flores e plantas ornamentais
estaacute relacionada agrave utilizaccedilatildeo de mudas de qualidade Nesse
contexto a produccedilatildeo de mudas atraveacutes da
micropropagaccedilatildeo surge como uma alternativa viaacutevel para
obtenccedilatildeo de mudas em escala comercial com alta qualidade
geneacutetica e fitossanitaacuteria em um curto espaccedilo de tempo
atendendo dessa forma agraves necessidades dos produtores
Dentre as etapas da micropropagaccedilatildeo pode-se destacar a
aclimatizaccedilatildeo que eacute a fase mais criacutetica e importante
A irrigaccedilatildeo eacute uma praacutetica de suma importacircncia no
processo de aclimatizaccedilatildeo jaacute que a aacutegua eacute um dos fatores
que mais limitam a produccedilatildeo das plantas Seu manejo ou
seja a quantidade de aacutegua e sua frequumlecircncia de aplicaccedilatildeo eacute
um fator fundamental para o estabelecimento e o adequado
desenvolvimento das mudas micropropagadas Para se
alcanccedilar todos os objetivos da praacutetica de irrigaccedilatildeo que
englobam a maximizaccedilatildeo da produccedilatildeo racionalizaccedilatildeo do
uso da matildeo-de-obra energia aacutegua e fertilizante e a
aplicaccedilatildeo correta da aacutegua eacute imprescindiacutevel adotar um
correto manejo desse sistema (PEREIRA et al 1997)
Para Pieter et al (2007) os efeitos de aplicaccedilotildees
excessivas ou deficitaacuterias satildeo irreversiacuteveis e variam de
acordo com a intensidade e tempo de duraccedilatildeo do
procedimento imposto Nesses casos os processos
fisioloacutegicos da planta relacionados ao crescimento satildeo
afetados e sob condiccedilotildees severas o deacuteficit pode provocar
a murcha permanente do vegetal Conforme a Embrapa
(2007) em regiotildees de calor intenso com inverno ameno
normalmente a exigecircncia das mudas por aacutegua em qualquer
fase de desenvolvimento eacute maior que em regiotildees de clima
temperado Por outro lado alguns tipos de substrato por
terem menor capacidade de retenccedilatildeo de aacutegua exigem que
se aplique mais aacutegua a cada irrigaccedilatildeo ou que se aumente a
frequumlecircncia das mesmas Eacute recomendaacutevel que as lacircminas
sejam aplicadas nas primeiras horas da manhatilde e ao
entardecer uma vez que irrigaccedilatildeo nas horas mais quentes
pode danificar as mudas principalmente quando
fertirrigadas (CESP 2000)
Para Bernardo et al (2005) eacute necessaacuterio conhecer o
comportamento da cultura em funccedilatildeo das diferentes
quantidades de aacutegua fornecidas e identificar as fases de
desenvolvimento de maior consumo de aacutegua e os periacuteodos
criacuteticos quando a falta ou o excesso provocaria quedas de
produccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliar o
efeito de lacircminas de irrigaccedilatildeo sobre o desenvolvimento de
mudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata
Ruiz amp Pav) em fase de aclimatizaccedilatildeo em ambiente
protegido
MATERIAL E MEacuteTODOS
O presente trabalho foi conduzido em um ambiente
protegido pertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical
no periacuteodo de fevereiro a abril de 2006 A aacuterea estaacute situada
no municiacutepio de Fortaleza Cearaacute com as coordenadas
geograacuteficas correspondentes agrave 3ordm44 S 38ordm33 W e 195 m
de altitude De acordo com a classificaccedilatildeo climaacutetica de
Koppen o clima da regiatildeo eacute do tipo Aw caracterizado
como clima tropical chuvoso de savana tropical com a
eacutepoca mais seca no inverno e maacuteximo de chuvas no veratildeo-
outono
O tuacutenel alto de cultivo forccedilado de formato
semicircular e orientaccedilatildeo leste-oeste foi instalado com as
seguintes dimensotildees 45 m de comprimento 5 m de largura
e 2 m de altura comportando aproximadamente uma aacuterea
de 225 msup2 e um volume de 357 m3 Toda a sua estrutura foi
completamente coberto por uma tela de sombreamento
para reduzir 50 da luminosidade
O sistema de irrigaccedilatildeo empregado foi do tipo
microaspersatildeo suspenso sendo constituiacutedo por um
conjunto motobomba uma linha principal uma linha de
derivaccedilatildeo e uma linha lateral de 10 m com emissores
espaccedilados de 24 m e a uma altura de 05 m das bandejas
Os microaspersores foram do tipo nebulizador modelo
Tietze com bocal violeta em posiccedilatildeo invertida a vazatildeo do
emissor era de 43 l h-1 na pressatildeo de 30 kgf cm-2
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 57
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
As mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata)
utilizadas nesse experimento foram obtidas atraveacutes do
processo de micropropagaccedilatildeo realizado no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos e Geneacutetica Vegetal da Embrapa
Agroinduacutestria Tropical Na ocasiatildeo do plantio as mudas
apresentavam-se completamente enraizadas e com alturas
variando de 26 a 35 cm
As plantas provenientes do material in vitro foram
retiradas dos frascos e suas raiacutezes lavadas em aacutegua
corrente para a retirada do excesso do meio de cultura
Apoacutes a lavagem as mudas foram colocadas em bandejas e
suas raiacutezes podadas com o auxiacutelio de uma tesoura com o
objetivo de uniformizar o material facilitar o plantio e
estimular o desenvolvimento de um sistema radicular mais
funcional
As mudas foram transplantadas para tubetes de
capacidade volumeacutetrica de 180 cm3 contendo o substrato
formado pela mistura poacute-de-coco seco + huacutemus de
minhoca + solo (PCS+H+S) na proporccedilatildeo de 111
misturado no Laboratoacuterio de Solos da Embrapa e sem
fornecimento de fertilizantes durante o periacuteodo
experimental Para promover o completo umedecimento
do substrato e aumentar a umidade relativa do ambiente
momentos antes da transferecircncia das mudas para os
tubetes o sistema de irrigaccedilatildeo foi acionado
proporcionando assim um ambiente favoraacutevel ao
estabelecimento das mudas Com os recipientes em seus
devidos lugares as mudas foram acondicionadas e
levadas em bandejas ateacute o tuacutenel alto de cultivo forccedilado
iniciando a etapa de plantio As mudas foram inseridas
numa profundidade meacutedia de 5 cm de forma que as raiacutezes
e a parte inicial do caule ficaram enterradas As mudas
foram transferidas para os respectivos substratos no dia
3 de fevereiro de 2006
Para promover melhores condiccedilotildees para o
estabelecimento das mudas do primeiro ao quadrageacutesimo
quinto dia apoacutes o transplantio (DAT) essas receberam
uma irrigaccedilatildeo padratildeo com a aplicaccedilatildeo de uma lacircmina
correspondente a 3 mm de aacutegua parcelada duas vezes ao
dia sendo uma aplicaccedilatildeo pela manhatilde iniciando-se
aproximadamente agraves 9 h e a outra agrave tarde a partir das 16 h
A partir do 45ordm DAT foi adotada a diferenciaccedilatildeo das lacircminas
de irrigaccedilatildeo
O delineamento experimental foi em blocos
casualizados composto por quatro tratamentos e cinco
repeticcedilotildees constituiacutedas por cinco fileiras verticais com
cinco plantas cada totalizando 25 plantas por tratamento
num total de 100 plantas por experimento Os tratamentos
consistiram de quatro niacuteveis de irrigaccedilatildeo equivalentes agraves
lacircminas de 10 (L1) 20 (L
2) 30 (L
3) e 40 (L
4) miliacutemetros de
aacutegua tambeacutem parcelada em duas aplicaccedilotildees diaacuterias agraves 9 h
e agraves 16h
Os dados foram coletados em duas ocasiotildees apoacutes
a diferenciaccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo A primeira coleta
de dados ocorreu em 04 de abril aos 60 dias apoacutes o
transplantio (DAT) e a segunda em 19 de abril (aos 75
DAT) As variaacuteveis analisadas foram nuacutemero de folhas
(NF) altura da planta (AP) e diacircmetro do caule (DC) O
nuacutemero de folhas foi contado visualmente em todas as
mudas transplantadas Todas as folhas foram consideradas
na contagem exceto as totalmente secas A altura da planta
foi medida a partir da base ateacute a abertura das folhas por
meio de um escaliacutemetro graduado em centiacutemetros
subdividido em miliacutemetros O diacircmetro do caule foi
mensurado com o auxiacutelio de um paquiacutemetro digital
graduado em centiacutemetros considerando a base do caule
como padratildeo de contagem
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos aplicativos Microsoft Office Excel e SISVAR
versatildeo 46 (FERREIRA 2003)
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os valores meacutedios mensais de temperatura do ar
umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidade
do vento a 2 m de altura registrados durante o experimento
pela estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade
Federal do Cearaacute (UFC) encontram-se na Tabela 1 cuja
temperatura meacutedia do periacuteodo foi de 23 ordmC e umidade relativa
meacutedia de 93 caracterizando um periacuteodo de temperaturas
amenas
AZEVEDO B M de et al58
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
TABELA 1 Valores meacutedios mensais de temperatura do ar umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidadedo vento a 2m de altura Fortaleza-CE 2006
Mecircs Temperatura (ordmC) U R () Rad solar global (W m-2) Vel do vento (m s-1)
Fevereiro 23 95 1329 173
Marccedilo 24 84 1291 125
Abril 23 99 1162 094
Fonte Estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade Federal do Cearaacute (UFC)
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Tanto o deacuteficit quanto o excesso hiacutedrico afetaram o
crescimento das mudas Isso pode ter ocorrido pelo fato
da deficiecircncia hiacutedrica ocasionar o fechamento dos
estocircmatos diminuindo a concentraccedilatildeo intracelular de CO2
e consequumlentemente gerando decreacutescimo na assimilaccedilatildeo
do mesmo (BERNARDO et al 2005) Jaacute o excesso hiacutedrico
ocasiona a falta de oxigecircnio que provoca a reduccedilatildeo da
fotossiacutentese e prejudica a conversatildeo da mateacuteria orgacircnica
pelos microorganismos em formas soluacuteveis que a planta
possa reutilizar Esses fatores podem proporcionar um
TABELA 2 Anaacutelise de variacircncia das caracteriacutesticas de desenvolvimento altura da planta (AP) diacircmetro do caule(DC) e nuacutemero de folhas (NF) de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das laminas aplicadas aos 60e 75 DAT
(ns) natildeo significativo significativo a 5 de probabilidade pelo teste F
Quadrado meacutedio Variaacutevel FV GL
60 DAT 75 DAT
Bloco 4 03966ns 02946ns
Tratamento 3 23675 31348 AP
Resiacuteduo 12 03593 06279
Bloco 4 06407ns 02754ns
Tratamento 3 16645 41102 DC
Resiacuteduo 12 06222 06728
Bloco 4 04377 01829ns
Tratamento 3 03421 05204 NF
Resiacuteduo 12 0773 01081
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 59
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
menor crescimento das plantas devido agrave diminuiccedilatildeo da
eficiecircncia de transformaccedilatildeo de fotoassimilados nessas
condiccedilotildees (REGO et al 2004)
A anaacutelise de regressatildeo indica que o modelo que
melhor se ajustou agrave relaccedilatildeo altura de planta em funccedilatildeo da
lacircmina de irrigaccedilatildeo aos 60 e 75 DAT foi o polinomial
quadraacutetico apresentando valores para R2 de 0997 e 0966
respectivamente (Figuras 1 e 2) Observa-se que aos 60 e 75
DAT a altura da planta aumentou com a lacircmina aplicada ateacute
FIGURA 1 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 60 DATFortaleza-CE 2005 (ns natildeo significativo pelo teste F significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
FIGURA 2 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 75 DATFortaleza-CE 2005 (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
um ponto maacuteximo de 247 e 250 mm dia-1 respectivamente
representando a lacircmina que proporcionou maior
desenvolvimento das mudas em relaccedilatildeo agrave altura da planta
sendo obtida 896 e 1012 cm respectivamente Lacircminas acima
desse valor causaram reduccedilatildeo no crescimento
possivelmente devido ao excesso de aacutegua
Soares et al (1998) salientam que a aacutegua em excesso
proporciona aumentos nos custo de produccedilatildeo e do risco
de lixiviaccedilatildeo da aacutegua e dos nutrientes nela diluiacutedos o que
AP = -05934LI2 + 29273LI + 53519R2 = 0997
700
740
780
820
860
900
940
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1)
Altu
ra d
a pl
anta
(cm
)
AP = -06728L2 + 33294L + 59869
R2 = 0966
80
84
88
92
96
100
104
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Alt
ura
da p
lant
a (c
m)
AZEVEDO B M de et al60
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
pode prejudicar o desenvolvimento radicular Aleacutem disso
o excesso de aacutegua compromete os processos de
fotossiacutentese e respiraccedilatildeo os quais envolvem a utilizaccedilatildeo
de determinadas concentraccedilotildees de oxigecircnio (RAVEN et
al 2001) Jaacute em casos de deacuteficit hiacutedrico podem ocorrer
problemas de ordem fisioloacutegica ou seja afetar
negativamente o desenvolvimento das plantas
Em ambos os periacuteodos avaliados observou-se que
as lacircminas aplicadas influenciaram o diacircmetro de caule
das mudas de helicocircnia com valores meacutedios de 97 e 103
cm aos 60 e 75 DAT respectivamente A anaacutelise de
regressatildeo indicou que aos 60 DAT o modelo polinomial
quadraacutetico foi o que melhor representou o diacircmetro do
caule em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo com R2 de 0746
(Figura 3) O maacuteximo valor do diacircmetro de caule (1022
cm) calculado por derivaccedilatildeo da curva de ajuste foi obtido
aplicando-se uma lacircmina de 264 mm dia-1 A partir dessa
lacircmina houve uma diminuiccedilatildeo no diacircmetro de caule
ocasionado possivelmente pelo excesso de aacutegua Aos
75 DAT o modelo matemaacutetico ajustado para relacionar o
diacircmetro de caule em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo
apresentou coeficiente de determinaccedilatildeo (R2) muito baixo
natildeo sendo representativo
Modelos polinomiais quadraacuteticos para explicar o
efeito da lacircmina de irrigaccedilatildeo sobre a altura e diacircmetro de
caule tambeacutem foram obtidos por Pieter et al (2007) na
produccedilatildeo da flor da fortuna por Lopes et al (2005) em
mudas de Eucalyptus grandis W Hill por Pereira et al
(2003) e Recircgo et al (2004) na cultura do crisacircntemo
A anaacutelise de variacircncia (Tabela2) indicou que o
nuacutemero de folhas nas mudas de helicocircnia foi influenciado
pelas lacircminas de irrigaccedilatildeo nas duas eacutepocas analisadas (60
e 75 DAT) com valores meacutedios de 325 e 345 folhas nas
respectivas eacutepocas poreacutem o modelo matemaacutetico para
representar essa relaccedilatildeo apresentou coeficiente de
determinaccedilatildeo (R2) muito baixo e natildeo foi estatisticamente
significativo
As anaacutelises mostraram que aos 60 e 75 DAT a
lacircmina de irrigaccedilatildeo ideal que proporcionou o melhor
desenvolvimento das plantas encontra-se na faixa
compreendida de 247 a 264 mm dia-1 Valores
semelhantes foram obtidos por Gomes et al (2006) que
verificaram que a taxa de evapotranspiraccedilatildeo meacutedia da
Heliconia psittacorum L f x HSpatho-circinada
Aristeg cultivada em ambiente protegido foi de 22 mm
dia-1
FIGURA 3 Diacircmetro de caule de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) aos 60 DAT em funccedilatildeo das lacircminas deirrigaccedilatildeo Fortaleza CE (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
DC= -04111L2
+ 21726L + 73492
R2 = 0746
80
85
90
95
100
105
110
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Diacirc
met
ro d
o ca
ule(
cm)
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 61
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
CONCLUSOtildeES
As lacircminas de irrigaccedilatildeo influenciaram as
caracteriacutesticas de desenvolvimento avaliadas aos 60 e 75
DAT
A altura de planta e o diacircmetro de caule
apresentaram resposta quadraacutetica em relaccedilatildeo agraves lacircminas
aplicadas
Nas condiccedilotildees em que foi desenvolvido este
trabalho para a aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas
de helicocircnia recomenda-se irrigar com 25 mm dia-1 com o
intuito de se obter mudas mais vigorosas para serem
transplantadas para condiccedilotildees de campo
AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pela concessatildeo da bolsa de estudo
Agrave Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaacuteria
CNPAT pela oportunidade de realizaccedilatildeo desta pesquisa
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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ALEXANDRE R S et al62
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
(Recebido em 4 de marccedilo de 2008 e aprovado em 1 de setembro de 2008)
IN VITRO ORGANOGENESIS OF PASSION FRUIT (PASSIFLORAEDULIS SIMS F FLAVICARPA DEG) AFFECTED BYIRRADIANCE SUCROSE AND EXPLANT POSITION
ORGANOGEcircNESE IN VITRO DO MARACUJAZEIRO (PASSIFLORA EDULIS SIMSF FLAVICARPA DEGENER) AFETADO POR IRRADIAcircNCIA SACAROSE E
POSICcedilAtildeO DOS EXPLANTES
RODRIGO SOBREIRA ALEXANDRE1 FLAacuteVIO ALENCAR D
ARAUacuteJO COUTO1 JOSEacute MARIA MOREIRA DIAS1WAGNER CAMPOS OTONI2 RITA DE CAacuteSSIA MENDES3 PAULO ROBERTO CECON4
1Professor Doutor Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG rsalexandreclick21combr2Doutor Departamento de Biologia Vegetal Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG3Teacutecnica em Quiacutemica Graduanda em Agronomia Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
4Doutor Departamento de Informaacutetica Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
ABSTRACTThe culture of the tissues has helped considerably the
Passiflora genus development achieving successfully themorphogenic responses in different in vitro explants Theobjective this work was to assess the in vitro morphogenicresponses of hypocotyl segments of passion fruit collected from5 positions (apical sub-apical median sub-basal and basalnamely 1-5 respectively) along the hypocotyls axis and culturedin medium with different concentrations of sucrose and exposedto irradiance levels The experiments were performed as acompletely randomized blocks design with 15 repetitions in 4 x4 x 5 factorial scheme (irradiance x sucrose x explant positions)totalizing 80 treatments on which every experimental parcelwas comprised of a flask containing five hypocotyls Thehypocotyl segment from positions 1 and 3 at their extremedistal ends cultured onto medium of culture with 30 g L-1 sucroseand under 100 micromol m-2 s-1 irradiance enable the greatest numberof buds and shoots differentiated The distal extremity from thesegments of hypocotyl farthest from the cotyledonary nodes(position 1) cultivated in 20 g L-1 sucrose and exposed to 50micromol m-2 s-1 irradiance result in the best condition for shootdevelopment
Index terms Passiflora edulis f flavicarpa in vitro propagationyellow passion fruit
RESUMOA cultura de tecidos tem auxiliado no desenvolvimento
do gecircnero Passiflora alcanccedilando sucesso morfogecircnico emdiferentes explantes in vitro Objetivou-se neste trabalho avaliarrespostas morfogecircnicas in vitro de segmentos de hipocoacutetilo domaracujazeiro coletados de 5 posiccedilotildees (apical sub-apicalmediana sub-basal e basal isto eacute 1-5 respectivamente) ao longodo eixo dos hipocoacutetilos e cultivados em meios com diferentesconcentraccedilotildees de sacarose e expostos a niacuteveis de irradiacircncia Oexperimento foi instalado em blocos casualizados com 15
repeticcedilotildees em esquema fatorial 4 x 4 x 5 (irradiacircncia x sacarose xposiccedilatildeo dos explantes) totalizando 80 tratamentos nos quaistoda parcela experimental foi constituiacuteda de um frasco contendocinco hipocoacutetilos As posiccedilotildees 1 e 3 no extremo distal dossegmentos de hipocoacutetilo cultivados em meio de cultura com 30 gL-1 de sacarose e sob 100 micromol m-2 s-1 de irradiacircncia proporcionamaior nuacutemero de brotos e brotos diferenciados A extremidadedistal dos segmentos de hipocoacutetilo extraiacutedos mais distantes donoacute cotiledonar (posiccedilatildeo 1) cultivados em 20 g L-1 de sacarose eexpostos agrave irradiacircncia de 50 micromol m-2 s-1 resulta na melhorcondiccedilatildeo para o desenvolvimento do broto
Termos para indexaccedilatildeo Passiflora edulis f flavicarpapropagaccedilatildeo in vitro maracujazeiro amarelo
INTRODUCTION
The genus of Passiflora was originated at South
America and comprises more than 580 species most of them
belonging to the Tropical America mainly from Brazil
(OLIVEIRA 1987) Among them the most commercially used
is the passion fruit plant P edulis Sims f flavicarpa Deg
The culture of the tissue has been reaching with
the Passiflora genus answers satisfactory morphogenic in
different in vitro explants (BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1993 1994 MORAN-ROBLES 1979 SCORZA
amp JANICK 1980)
The explant morphogenic capability has
relationship with the polarity effect such factor is
responsible for the shoot emergence Several studies were
researched to assess the effect of the position of the
In vitro organogenesis of passion fruit 63
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
explants extracted from the hypocotyl and roots of Citrus
plantlets during the shoot-bud proliferation (BURGER amp
HACKETT 1986 COSTA et al 2004 DIAS 1998
GARCIA-LUIS et al 1999) as well as the effect of the
polarity in the formation the buds and shoots
(McCLELLAND amp SMITH 1990 YAE et al 1987)
In the in vitro organogenesis of plants of the genus
Passiflora several factors influence among them among
them the irradiance for which different types of explants
were spared for the essays 58 micromol m-2 s-1 in internodes
(MORAN-ROBLES 1979) 20 micromol m-2 s-1 in mesophyll-
derived protoplasts (OTONI et al 1995) 30 or 23 micromol m-
2 s-1 in leaf (KAWATA et al 1995 APPEZZATO-DA-
GLOacuteRIA et al 1999 respectively) 50 micromol m-2 s-1 in
endosperm (MOHAMED et al 1996) 80 30 or 24 micromol m-
2 s-1 in shoot cultures (FARIA amp SEGURA 1997
KURIYAMA et al 1998 BARBOSA et al 2001
respectively) 20-55 micromol m-2 s-1 in cotyledons (HALL et
al 2000) 60 or 54 micromol m-2 s-1 in hipocotyl (COUCEIRO
2002 FELISMINO 2005 respectively) Although different
irradiances have been studied in these works in none of
them the effect of difference irradiances was studied during
the in vitro organogenic process of passion fruit plant
Other important factor for the in vitro
organogenesis is the source of carbon The in vitro
organogenesis works affirm that sucrose has been the most
employed source of carbon in the culture for Passiflora
(APPEZZATO-DA-GLOacuteRIA et al 1999 HALL et al 2000)
its concentration varies from 10 to 30 g L-1
The present work aimed to evaluate the in vitro
morphogenic responses of hypocotyledonary explants of
passion fruit plants throughout the use of different levels
of irradiance sucrose concentration and positions of the
segments of hypocotyls derived from in vitro germinated
plantlets
MATERIALS AND METHODS
Axenic and vigorous etiolated plantlets were
obtained from in vitro germinated seeds and used as
explants sources
In vitro-grown seedlings (25-30 days-old) were
transversally cut into 1-12 cm long were cultured on
different conditions of incubation The explants were
cultured in 300 mL glass flasks (Santa Marina Satildeo Paulo
Brazil) containing 30 mL aliquots of MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) medium salts 100 mg L-1 mio-inositol 10
mg L-1 6-benzylaminopurine (BAP) vitamins of White
(1951) and 80 g L-1 of agar (Isofarreg Brazil) The medium
pH was adjusted to 57 plusmn 01 before the addition of agar
Several concentrations of sucrose (0 10 20 or 30 g L-1)
were added to this medium The culture flasks were sealed
with polypropylene lids and the medium was autoclaved
at 121ordmC 15 kgf cm-2 during 20 minutes
The segments of hypocotyls were cut in five
segments numbered from 1 to 5 follows 1 basal the first
segment adjacent to the root collar 2 sub-apical the
second segment adjacent to the hypocotyl root 3 median
the central segment in relation to the hypocotyl region 4
sub-apical the second segment that is adjacent to the
cotyledonary node 5 - apical the first segment that is
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
Axenic plantlets Segments of hypocotyls in the
medium of culture
DE
PE
FIGURE 1 The segments of hypocotyls numbered from1 to 5 were characterized as follows 1 basal the firstsegment adjacent to the root collar 2 sub-apical thesecond segment adjacent to the hypocotyl root 3 median the central segment in relation to the hypocotylregion 4 sub-apical the second segment that is adjacentto the cotyledonary node 5 - apical the first segment thatis adjacent to the cotyledonary node () ED = distalextremity EP = proximal extremity
ALEXANDRE R S et al64
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
adjacent to the cotyledonary node (Figure 1) In this order
the five hypocotyl explants were placed horizontally on
the media maintaining the proximal extremity towards the
wall of the flask and having the distal extremity facing the
centre of the flask
The flasks were distributed 5 cm far from each other
on the shelves at the growth room to avoid shadowiness
at these flasks The explants were kept at the temperature
of 27 plusmn 2ordmC photoperiod of 168-h lightdark regime and
irradiances of 25 50 100 and 150 micromol m-2 s-1
The irradiance levels were provided by the
utilization of 40 W daylight fluorescent light tubes (Osramreg
Brazil) as follows I - 25 micromol m-2 s-1 (1 light on without
on without dislocating the luminous panel) III - 100 micromol
m-2 s-1 (4 lights on setting the luminous panel at 20 cm
from the shelf surface) IV - 150 micromol m-2 s-1 (5 lights on
setting the luminous panel at 16 cm from the shelf surface)
Copper strings were used to support the fluorescent
incandescent lamps
After 45 days of incubation regeneration frequencies
and number of shoots per explant were assessed which
were formed at the distal and proximal ends The
organogenesis was assessed regarding shoot lengths from
the evaluated positions at the proximal and distal ends
The experiment was performed under complete
randomized blocks design with 15 replicates in a 4 x 4 x 5
factorial scheme (irradiance levels 25 50 100 and 150 igravemol
m-2 s-1 x sucrose concentrations 0 10 20 and 30 g L-1 x
position of the explants at the hypocotyl 1 2 3 4 and 5)
totalizing 80 treatments being the experiment plot
comprised of a flask containing five segments of
hypocotyl Considering the three factors studied were made
by analysis of test average (Tukey) and regression to
concentrations of sucrose and levels of irradiance The
experiments were repeated at least once
RESULTS AND DISCUSSION
In vitro organogenesis at the distal extremity The
differentiation of buds and shoots as influenced by
irradiance levels and distinct positions of explants along
the hypocotyls axis and the mean values and the standard
deviation of the total number of buds and shoots formed
at the distal extremity are shown in figures 2 and 3
respectively
Independently from the other factors at the medium
without sucrose there was no morphogenic response in
the explants (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The number of structures formed at the distal
extremity reached the highest means when there was added
30 g L-1 sucrose to the medium under 100 micromol m-2 s-1
irradiance at the positions 1 and 3 (Figure 3a) Considering
the means of the five explant positions an average of 592
structures per explant was obtained Similarly Couceiro
(2002) has obtained 590 structures per explant at the distal
extremity when cultivating them horizontally under 60 micromol
m-2 s-1 of irradiance in MS medium containing 50 mg L-1 of
BAP and 30 g L-1 of sucrose Garcia-Luis et al (1999) have
shown in Citrange Troyer that despite the explants being
horizontally placed on the medium surface there was an
additional effect of polarity evidenced by the larger number
of shoots differentiated at the apical extremity and the
distance among the cotyledonary node has affected the
morphogenesis These results confirmed the studies of
Ziv et al (1970) and Fari amp Czako (1981) evidencing that
normally in stem and root sections the shoot-buds are
formed at the distal extremity and the roots at the proximal
extremity In the present work structures formed at both
explant extremities but in a higher degree at the distal
extremity
The largest value found for the average length of
the shoot a was 364 mm for the explants that were extracted
farthest from the cotyledonary node (position 1) and
cultured in medium containing 20 g L-1 of sucrose and
submitted to 50 micromol m-2 s-1 of irradiance (Figure 4a)
However in Passiflora actinia the inclusion of auxins to
the medium favoured the development of the shoot-buds
that consequently presented larger lengths when the
hypocotyl segments were cultivated in MS medium
containing 001 mg L-1 de IBA (KOCH et al 2001)
In vitro organogenesis of passion fruit 65
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
In vitro organogenesis at the proximal extremity
The mean values and the standard deviation of the total
number of buds and shoots formed at the proximal extremity
of the explants are presented in Figure 3b Likewise to the
distal extremity the formation of buds and shoots did not
happen when the explants were cultured in medium without
sucrose (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The differentiation and development of the buds
and shoots at the proximal extremity reached the highest
FIGURE 2 In vitro organogenesis in hypocotyl segments that are characterized by the positions that variesfrom 1 to 5 under effect of different irradiance levels A 25 micromol m-2 s-1 B 50 micromol m-2 s-1 C 100 micromol m-2 s-1 andD 150 micromol m-2 s-1 and sucrose concentrations (a 0 b 10 c 20 d 30 g L-1) for 45 days
A 1
2
3
4
5
a
1
2
3
4
5
b 1
2
3
4
5
c 1
2
3
4
5
d
B
a
b
c
d
C
a
b
c
d
D
a
b
c
d
Distal extremity
Proximal extremity
averages (35) at 25 micromol m-2 s-1 of irradiance in MS medium
containing 20 g L-1 sucrose for explants derived from the
position 4 (Figure 3b) Concurrently the work by Baccarin
(1988) pointed out the best bud and shoot proliferation in
explants from the regions closer to the cotyledonary nodes
The presence of BAP in the medium was essential to
the organogenic process as observed in works with Passiflora
spp (BECERRA et al 2004 BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1994 FERNANDO 2005 HALL et al 2000)
ALEXANDRE R S et al66
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
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Sucrose
(g L-1)
a
b
FIGURE 3 Mean values and standard deviation of the total number of structures (buds and shoots) formed at thedistal (a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
In vitro organogenesis of passion fruit 67
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
FIGURE 4 Mean values and standard deviation of the lengths of structures (buds and shoots) formed at the distal(a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
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Sucrose
(g L-1)
a
b
ALEXANDRE R S et al68
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Independently from the irradiance levels different
sucrose concentrations and explant positions at the
hypocotyl the shoot elongation was considered to be
lower (Figure 4b) than the minimum recommended
(approximately 2-3 cm) for the in vitro rooting process It
highlights the need of previous submission of the explants
to an adequate medium for the elongation process
CONCLUSIONS
The morphogenic response for bud and shoot
formation was remarkably superior at the distal extremity
The maximum concentration among the sucrose
and the irradiance of 100 micromol m-2 s-1 has proportioned
better morphogenic responses at the distal extremity
regardless the position of the explants
The buds and shoots differentiated at the distal
extremity farthest to the cotyledonary node developed
better under 50 micromol m-2 s-1 of irradiance in medium
supplemented with 20 g L-1 sucrose
The use of a carbon source is essential for in vitro
morphogenesis
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
(Recebido em 15 de maio de 2008 e aprovado em 2 de setembro de 2008)
AVALIACcedilAtildeO DE SUBSTRATOS NA PRODUCcedilAtildeO DE MUDASDO ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL [Ananaacutes comosus (L) Merr
var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] EM CONDICcedilOtildeESDE CASA DE VEGETACcedilAtildeO
SUBSTRATES EVALUATION FOR PRODUCTION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE[Ananas comosus (L) Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] PLANTS
UNDER GREENHOUSE CONDITIONS
FRANCISCO NUNES DA CUNHA FILHO1 ANTONIO CARLOS TORRES1 JOAtildeO MARIA CHARCHAR1
1Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF francisconunescnphembrapabr torrescnphembrapabr
RESUMOA utilizaccedilatildeo de substratos na aclimataccedilatildeo de mudas
micropropagadas oferece consideraacutevel vantagem no custo e napossibilidade de obtenccedilatildeo de alta porcentagem de sobrevivecircnciados propaacutegulos ex vitro aliado agrave obtenccedilatildeo de mudas maisuniformes vigorosas precoces e com alta qualidade fitossanitaacuteriaAvaliaram-se quatro diferentes tipos de substratos (fibra de cococomercial fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxe substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas) na aclimataccedilatildeode mudas do abacaxizeiro ornamental As variaacuteveis massa frescatotal massa fresca da parte aeacuterea massa fresca de raiacutezescomprimento de raiacutezes altura de plantas e nuacutemero total de folhasforam avaliadas O delineamento experimental utilizado foi ointeiramente casualizado com quatro tratamentos e com quatrorepeticcedilotildees Pela anaacutelise dos resultados o substrato padronizadoda Embrapa Hortaliccedilas o de fibra de coco comercial e o Plantmaxforam os mais eficientes na produccedilatildeo de mudas de abacaxizeiroornamental para fins comerciais O substrato de coco-verde daEmbrapa Hortaliccedilas foi o menos indicado
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatus plantaornamental substrato
ABSTRACTThe use of substrate in the acclimatization of
micropropagated plants offers considerable cost advantages andthe possibility to obtain high percentage of ex vitro survivingplants as well as in the production of uniform vigorous precociousand healthy plants Four different substrates (commercial coconutfiber green-coconut fiber from Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxand the standardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas) wereevaluated for acclimatization of ornamental pineapple plantsTotal fresh mass fresh mass of shoots fresh mass of roots rootlength plant height and total number of leaves were obtainedThe experiment followed a complete randomized design withfour treatments and four replicates The results showed that thestandardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas commercialcoconut fiber and Plantmax were the most efficient for theproduction of ornamental pineapple plants for commercialpurpose Green-coconut fiber substrate from Embrapa was lessindicated
Index terms Ananas comosus var bracteatus ornamental plantgrowth substrate
INTRODUCcedilAtildeO
Os abacaxizeiros ornamentais apresentam flores e
infrutescecircncias de beleza atrativa muito usadas em arranjos
decorativos e ornamentais no Brasil e exterior
representando um segmento de grande potencial para
exportaccedilatildeo (CABRAL 2000 SOUZA et al 2004) No
comeacutercio de flores nativas o abacaxi ornamental jaacute obteve
valores agregados da ordem de 5000 em relaccedilatildeo ao
abacaxi de fruta natildeo ornamental (SOUZA et al 2004)
A propagaccedilatildeo vegetativa do abacaxizeiro ornamental
para fins de comercializaccedilatildeo eacute feita por mudas oriundas da
planta-matildee Poreacutem essa propagaccedilatildeo apresenta o
inconveniente de disseminar agentes patogecircnicos e pragas
pela utilizaccedilatildeo de mudas contaminadas Dentre os patoacutegenos
e pragas mais comuns destacam-se o fungo Fusarium
subglutinans (Wollenw amp Reinking) PE Nelson (TOUSSON
amp MARASAS 1983) e a cochonilha Dysmicoccus brevipes
turfa casca curtida de eucalipto ou Pinus palha de arroz
carbonizada poacute de carvatildeo (GRATTAPAGLIA amp
MACHADO 1998) casca de arroz carbonizada poacute de
casca de coco seco e verde (SANTOS et al 2006) mistura
de areiaxaximhuacutemus (SOUZA JUNIOR et al 2001) solo
esterco bovino Plantmax e composto orgacircnico em
diferentes proporccedilotildees (MOREIRA et al 2006) dentre
outros Entretanto para o genoacutetipo em estudo as
tecnologias disponiacuteveis necessitam de adequaccedilatildeo para
serem mais eficientes e de baixo custo na produccedilatildeo
comercial de mudas
Objetivou-se neste trabalho avaliar quatro
diferentes substratos na produccedilatildeo de mudas do
abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L) Merr var
bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] para fins comerciais
utilizando-se propaacutegulos produzidos in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
Produccedilatildeo de mudas in vitro
Foram utilizados como fonte de explantes
propaacutegulos produzidos in vitro subcultivados a cada 60
dias utilizando-se o meacutetodo proposto por Correia et al
(1999) Os explantes consistiram de brotaccedilotildees com 2 cm de
comprimento transferidos para meio baacutesico de cultura
contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 3 de sacarose e em mg L-1 incluiacuteram-
se i-inositol 100 tiaminaHCl 02 aacutecido nicotiacutenico 005
piridoxinaHCl 005 e glicina 02 O meio de cultura foi
solidificado com 06 de aacutegar e o pH do meio foi ajustado
para 57 O meio foi distribuiacutedo em tubos de ensaio de 25 x
150 mm na quantidade de 125 mL por tubo
Os tubos foram esterilizados em autoclave a 121ordmC
e a 104 Kpa de pressatildeo por 15 minutos Apoacutes a inoculaccedilatildeo
as culturas foram mantidas em cacircmara de crescimento com
fotoperiacuteodo de 16 horas irradiacircncia de 32 mmol m-2 s-1
temperatura de 27oC durante 30 dias
As mudas foram preacute-aclimatizadas mediante
abertura das tampas dos frascos de cultura cinco dias
antes do transplantio para os respectivos substratos
Transplante e desenvolvimento de mudas micropropagadas
Mudas enraizadas e preacute-aclimatizadas de
abacaxizeiro ornamental foram retiradas dos tubos de
cultura e transplantadas em bandejas de isopor com 72
ceacutelulas contendo quatro diferentes substratos utilizados
como tratamentos 1) substrato comercial de fibra de coco
2) substrato de fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas
3) substrato Plantmax e 4) substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas composto por solo de cerrado areia
lavada esterco de gado curtido e palha de arroz
carbonizada em proporccedilotildees de 3111 vv com adiccedilatildeo de
300 g de calcaacuterio dolomiacutetico e de 300 g da formulaccedilatildeo 4-
30-16
Apenas 30 ceacutelulas por bandeja foram
transplantadas com mudas de abacaxizeiro ornamental (uma
muda por ceacutelula) deixando-se 42 ceacutelulas livres (sem planta)
para que natildeo houvesse competiccedilatildeo entre plantas nas
bandejas As bandejas permaneceram cobertas com
envoltoacuterio plaacutestico nos primeiros trecircs dias apoacutes o
transplante
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado com 10 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca
de raiz e tamanho de raiz e 30 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
altura e nuacutemero de folhas Os dados foram coletados aos
90 dias apoacutes o transplantio A anaacutelise de variacircncia do
experimento foi realizada com o auxiacutelio do programa
estatiacutestico SAS Institute Inc (SAS INSTITUTE 1988) e a
CUNHA FILHO F N da et al72
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
diferenciaccedilatildeo de meacutedias pelo teste de Tukey p 001 e
p 005
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
A anaacutelise conjunta do experimento indicou que
existiu homogeneidade de variacircncia natildeo sendo necessaacuteria
a transformaccedilatildeo de dados para a realizaccedilatildeo das anaacutelises A
anaacutelise de variacircncia (Tabelas 1 e 2) indicou que houve
efeito significativo dos diferentes substratos (teste de
Tukey p 005) sobre a massa fresca total massa fresca da
parte aeacuterea altura de plantas e nuacutemero total de folhas e
que natildeo houve diferenccedila significativa entre os diferentes
substratos com relaccedilatildeo agrave massa fresca de raiacutezes e o
comprimento de raiacutezes (Figuras 1 A-F)
Embora natildeo tenha havido diferenccedila significativa
(teste de Tukey p 005) entre os valores de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea nos tratamentos com
os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
comercial de fibra de coco e o Plantmax os valores
absolutos mais elevados desses paracircmetros foram obtidos
com o substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
(Figuras 1 A-B)
No substrato de fibra de coco-verde da Embrapa
Hortaliccedilas as plantas de abacaxizeiro ornamental tiveram
sempre pior performance em produccedilatildeo de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea natildeo se diferenciando
estatisticamente dos valores obtidos com o uso dos
substratos comerciais da Plantmax e de fibra de coco
Entretanto esses substratos foram significativamente
inferiores (teste de Tukey p 005) em relaccedilatildeo aos valores
obtidos com o uso do substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas (Figuras 1 A-B)
Os valores obtidos para as variaacuteveis massa fresca
de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes natildeo diferiram
estatisticamente entre si (teste de Tukey p 005) em
relaccedilatildeo aos quatro tratamentos (substratos analisados)
Os maiores valores absolutos dessas variaacuteveis foram obtidos
para a massa fresca de raiacutezes no substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e para o comprimento de raiacutezes no
substrato comercial de fibra de coco (Figuras 1 C-D)
TABELA 1 Resumo da anaacutelise de variacircncia para massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca deraiacutezes e comprimento de raiacutezes de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio
Fontes de variaccedilatildeo GL Massa fresca total
Massa fresca
da parte aeacuterea Massa fresca
de raiacutezes Comprimento
de raiacutezes
Tipo de substrato 03 673536 518934 02201ns 22382ns
Resiacuteduo 36 115108 80557 01328 13107
Total 39 - - - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade (ns) natildeo significativo
TABELA 2 Resumo da anaacutelise de variacircncia para altura e nuacutemero de folhas de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio Fontes de variaccedilatildeo GL
Altura de plantas Nuacutemero total de folhas
Tipo de substrato 003 1424357 526854
Resiacuteduo 124 50188 16807
Total 127 - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas 73
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
FIGURA 1 Variaacuteveis avaliadas na determinaccedilatildeo de eficiecircncia dos substratos Plantmax Embrapa Hortaliccedilas fibra decoco e fibra de coco-verde na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental -em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo A)massa fresca total B) massa fresca da parte aeacuterea C) massa fresca de raiacutezes D) comprimento de raiacutezes E) altura deplantas e F) nuacutemero total de folhas Meacutedias seguidas da mesma letra natildeo diferem significativamente entre si pelo testede Tukey Plt005
3653+b 0688
7459+ab 1414
9894+a 1229
6254+ab 0789
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a to
tal (
g)
A
3421+b 0664
6822+ab 1152
8930+a 0933
6002+ab 0763
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax Embrapa Hortaliccedilas Fibra de coco Fibra de coco verde
Tipo de substratos
Mas
sa fr
sca
da p
arte
aeacuter
ea (
g)
B
0568 + 0178 a
0298 + 0007 a0363 + 0120 a
0222 + 0039 a
0
02
04
06
08
1
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a de
rai
zes
(g)
C
12000 + 0338 a
12800 + 0387 a
11690 + 0468 a12020 + 0204 a
10
11
12
13
14
15
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Com
prim
ento
de
raiz
es (c
m)
D
11789 + 0412 a13800 + 0406 b
11088 + 0381 a
8797 + 0385 c
02468
1012141618
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Alt
ura
de p
lant
as (c
m)
E
5882 + 0173 c
7727 + 0191 b8818 + 0259 a
8143 + 0294 ab
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Nuacutem
ero
tota
l de
folh
as
F
Houve diferenccedila significativa (teste de Tukey
p 005) entre os valores meacutedios obtidos para a altura de
plantas e para o nuacutemero total de folhas nos quatro
tratamentos avaliados As plantas tiveram
significativamente maior desenvolvimento em altura no
substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas Natildeo houve
diferenccedila significativa entre os valores meacutedios em altura
de plantas nos substratos comerciais da Plantmax e de
fibra de coco Esses poreacutem foram diferentes dos valores
obtidos no substrato de fibra de coco-verde que
proporcionou significativamente o menor crescimento das
plantas (Figura 1 E)
Maiores meacutedias da variaacutevel nuacutemero total de folhas
foram obtidas com a utilizaccedilatildeo do substrato padronizado
CUNHA FILHO F N da et al74
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
da Embrapa Hortaliccedilas e do Plantmax Natildeo houve diferenccedila
significativa entre os valores meacutedios do nuacutemero total de
folhas nos substratos Plantmax e de fibra de coco comercial
mas esses diferiram estatisticamente dos obtidos no
substrato fibra de coco-verde O substrato de fibra de coco-
verde foi o que propiciou os menores valores da variaacutevel
nuacutemero total de folhas (Figura 1 F) Esses resultados
contradizem os relatados por Carrijo et al (2002) que
verificaram que os substratos contendo fibra de coco-verde
satildeo os mais indicados para produccedilatildeo de mudas de
hortaliccedilas e ornamentais em cultivo sem solo Correia et al
(2003) natildeo observaram diferenccedila significativa entre os
valores da massa fresca de raiacutezes de mudas de cajueiro
anatildeo precoce crescidas em substratos com adiccedilatildeo de poacute
de coco-verde ou de poacute de coco-maduro Santos et al
(2006) relataram que os substratos orgacircnicos contendo as
combinaccedilotildees de fibras de coco seco ou verde
proporcionaram baixo desenvolvimento na aclimatizaccedilatildeo
de mudas Heliconia rostrata Ruiz amp Pav provenientes
da micropropagaccedilatildeo Poreacutem Bezerra et al (2001) discordam
dos autores acima mencionados informando que os
substratos contendo fibras de coco-verde ou seco foram
os mais indicados respectivamente para o enraizamento
de mudas de crisacircntemo (Chrysanthemum sp) e de violeta
africana (Saintpaulia ionantha H Wendl)
Tambeacutem substrato contendo casca de arroz
carbonizada tem sido utilizado na produccedilatildeo de mudas
micropropagadas Weber et al (2003) relataram que o
substrato contendo esse componente misturado com
vermiculita e vermicomposto em proporccedilotildees de 111 foi a
melhor opccedilatildeo para aclimataccedilatildeo de mudas de abacaxizeiro
ornamental oriundas da cultura in vitro e transplantadas
para tubetes Esses autores ainda observaram que o uso
da mistura contendo casca de arroz carbonizada e poacute de
casca de coco em proporccedilotildees de 11 resultou em baixo
desempenho de mudas do abacaxizeiro ornamental em
funccedilatildeo da maacute agregaccedilatildeo fiacutesica baixa retenccedilatildeo de aacutegua e
limitaccedilatildeo nutricional da planta
Neste trabalho os resultados com o uso de substrato
contendo casca de arroz carbonizada sem a presenccedila de
fibras de coco seco ou verde tambeacutem proporcionou
excelente desenvolvimento de mudas do abacaxizeiro
ornamental o que indica uma provaacutevel incompatibilidade
das fibras de coco com outros componentes de substratos
na produccedilatildeo de mudas dessa ornamental
Natildeo houve diferenccedila significativa entre valores de
massa fresca de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes de
abacaxizeiro ornamental em relaccedilatildeo aos quatro substratos
analisados Poreacutem o maior valor absoluto em massa fresca
de raiacutezes foi obtido no substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas enquanto que o maior valor em comprimento
de raiacutezes no substrato comercial de fibra de coco
Com relaccedilatildeo agraves demais variaacuteveis analisadas
observou-se que a massa fresca total e a massa fresca da
parte aeacuterea tiveram performances mais significativas nos
substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas comercial
de fibra de coco e o da Plantmax enquanto que a altura de
plantas foi significativamente mais elevada no substrato
padronizado da Embrapa Hortaliccedilas e o nuacutemero total de
folhas mais significativo nos substratos padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e o Plantmax
CONCLUSOtildeES
Os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
fibra de coco comercial e o da Plantmax satildeo os mais
indicados para a produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro
ornamental para fins comerciais
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) as bolsas concedidas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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SANTOS M do D M dos et al76
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(Recebido em 8 de abril de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFEITO DE ISOPENTENILADENINA POR QUATROSUBCULTIVOS NA MULTIPLICACcedilAtildeO DE BROTACcedilOtildeES
DE ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL IN VITRO
EFFECT OF ISOPENTENYL ADENINE IN FOUR SUBCULTURES DURING THEIN VITRO MULTIPLICATION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE SHOOT
MARIA DO DESTERRO MENDES DOS SANTOS1 JOSEacute GETUacuteLIO DA SILVA FILHO2ANTONIO CARLOS TORRES3
1Bioacuteloga MSc em Botacircnica Departamento de Botacircnica Universidade de BrasiacuteliaUnB Cx P 4457 709190-970 Brasiacutelia DF mariacnphembrapabr2Engenheiro Agrocircnomo Especialista em Biotecnologia de Plantas Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF jgetuliocnphembrapabr3Engenheiro Agrocircnomo Embrapa Hortaliccedilas CxP 218 70359-970 Brasiacutelia DF
RESUMOObjetivou-se no presente trabalho foi o de avaliar o
efeito da adiccedilatildeo de concentraccedilotildees de 2iP em diferentes subcultivosna micropropagaccedilatildeo do abacaxizeiro ornamental var bracteatusBrotaccedilotildees com aproximadamente 10 cm de tamanho oriundosda cultura in vitro foram utilizados como explantes Os explantesforam inoculados em meio baacutesico liquido contendo sais mineraisMS 3 sacarose e em mg L-1 i-inositol 100 tiaminaHCl 01piridoxina HCl 05 aacutecido nicotiacutenico 005 glicina 20 formulaccedilatildeoliacutequida A esse meio foram adicionados concentraccedilotildees de 2iP(00 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro subcultivos(30 60 90 e 120 dias) Maacuteximo nuacutemero de brotaccedilotildees por explante(139) foi obtido em meio baacutesico com 16 mg L-1 de 2iP e no quartosubcultivo aos 120 dias Apoacutes a transferecircncia de brotaccedilotildeesindividualizadas para meio contendo ANA (00 05 10 15 2025 30 e 40 mg L-1) verificou-se a diferenciaccedilatildeo de raiacutezesadventiacutecias na porccedilatildeo basilar dos explantes
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatusmicropropagaccedilatildeo cultivo in vitro
ABSTRACTThe objective of this work was to evaluate the effect of
2iP addition in different subcultures during the micropropagationof ornamental pineapple var bracteatus Shoots with 10 cm inlength originated from in vitro culture were used as explantsThe explants were inoculated in liquid basal medium containingMS salts 3 sucrose 100 mg L-1 i-inositol 01 mg L-1
thiamineHCl 05 mg L-1 pyridoxineHCl 005 mg L-1 nicotinicacid and 20 mg L-1 glycine Different concentrations of 2iP (0005 10 and 20 mg L-1) in combination with four subcultures (3060 90 e 120 days) were used Maximum number of shoot formedper explant (139) was observed in basal medium with 16 mg L-1
2iP at the fourth subculture (120 days) After transferringindividual shoots to medium containing different concentrationsof NAA (00 05 10 15 20 25 30 and 40 mg L-1) mediaadventitious root formed in the basal portion of the explants
Index terms Ananas comosus var bracteatus micropropagationin vitro culture
INTRODUCcedilAtildeO
O abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L)
Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] eacute uma
planta de propagaccedilatildeo vegetativa com grande potencial
ornamental (D EECKENBRUGGE amp LEAL 2003) A
qualidade fitossanitaacuteria do campo de produccedilatildeo dessa
espeacutecie depende do material utilizado para sua propagaccedilatildeo
Assim sendo pode haver acuacutemulo entre plantios
sucessivos de patoacutegenos que satildeo transmitidos de um ciclo
de produccedilatildeo a outro via mudas contaminadas A
micropropagaccedilatildeo em larga escala de mudas sadias via
cultura de tecidos eacute uma estrateacutegia que possibilita
contornar a limitaccedilatildeo de mudas com alta qualidade
fitossanitaacuteria principalmente isentas de fusariose
(REINHARDT amp CUNHA 1999)
Em espeacutecies do gecircnero Ananaacutes os explantes mais
utilizados satildeo as gemas axilares das mudas do tipo coroa
ou filhote embora outros tipos de mudas possam ser usadas
A vantagem do uso de gemas axilares incluem boa
sobrevivecircncia em meio de cultura e com a quebra da
dominacircncia apical do broto haacute estiacutemulo para a formaccedilatildeo de
gemas muacuteltiplas (DREW 1980) A adiccedilatildeo de
fitorreguladores em geral eacute necessaacuteria para suprir as
possiacuteveis deficiecircncias dos niacuteveis endoacutegenos de hormocircnios
nos explantes in vitro Assim sendo recomenda-se a
combinaccedilatildeo de uma auxina com uma citocinina (SKOOG amp
MILLER 1957) Em geral a benzilaminopurina (BAP)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 77
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(ALMEIDA et al 2002 BARBOZA et al 2001 BE amp
DEBERG 2006) ou essa substacircncia em combinaccedilatildeo auxina
e aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (COSTA amp ZAFFARI 2005
GUERRA et al 1999) tecircm sido a(s) substacircncia(s)
reguladora(s) de crescimento mais usada(s) na formaccedilatildeo
de brotaccedilotildees de Ananas sp Entretanto em abacaxizeiro
ornamental a inclusatildeo de BAP no meio pode induzir o
aparecimento de variaccedilotildees somaclonais (RODRIGUES et
al 2007 SANTOS et al 2008) Tambeacutem a combinaccedilatildeo de
cinetina ANA e AIB (aacutecido indolbutiacuterico) foi empregada
para proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees em abacaxizeiro (KISS et
al 1995 MATHEWS amp RANGAN 1979)
Dada a escassez de informaccedilotildees sobre o efeito de
isopenteniladenina (2iP) na propagaccedilatildeo in vitro de espeacutecies
do gecircnero Ananas neste trabalho procurou-se otimizar a
concentraccedilatildeo de 2iP na produccedilatildeo de brotaccedilotildees de
abacaxizeiro ornamental em diferentes subcultivos e seu
subsequumlente enraizamento
MATERIAL E MEacuteTODOS
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Brotaccedilotildees
individualizadas com aproximadamente 1 cm de
comprimento estabelecidas a partir da cultura de gemas
axilares de mudas tipo coroa foram utilizadas como fonte
de explantes Os explantes foram cultivados em meio baacutesico
liacutequido contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) 3 sacarose e em mg L-1 tiaminaHCl 01
piridoxinaHCl 005 aacutecido nicotiacutenico 005 e glicina 20
(SANTOS 2008) O delineamento experimental empregado
foi o inteiramente ao acaso em esquema fatorial 4x4
referentes concentraccedilotildees de 2iP e subcultivos Ao meio
baacutesico foram adicionadas quatro concentraccedilotildees de BAP
(0 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro
subcultivos (30 60 90 e 120 dias) O pH dos meios foi
ajustado a 57 Foram utilizadas nove repeticcedilotildees por
tratamento sendo que cada parcela foi constituiacuteda por um
explante Inicialmente os explantes foram inoculados em
frascos de 250 mL de capacidade com 40mL de meio No
segundo subcultivo os propaacutegulos foram transferidos para
frascos idecircnticos com meio receacutem-preparado No terceiro
e quarto subcultivos foram utilizados frascos de 1000 mL
com 100 mL de meio As culturas foram mantidas em sala
de crescimento sob fotoperiacutedo de 16 horas com densidade
de fluxo de foacutetons de 32 mmol m-2 s-1 a 27plusmn2oC Em cada
subcultivo foi determinado o nuacutemero e a massa de mateacuteria
fresca das brotaccedilotildees formadas por explante inoculado
Os dados foram transformados para 1X e as
anaacutelises estatiacutestica foram realizadas com o auxiacutelio dos
programas SASStat e SISVAR versatildeo 301 Aplicou-se a
anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo grau para
avaliar o efeito da concentraccedilatildeo de 2iP sobre o nuacutemero e
massa da mateacuteria fresca de brotaccedilotildees em cada subcultivo
Enraizamento das brotaccedilotildees Foram utilizadas
brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental regeneradas in vitro
Os explantes com 10 a 20 cm de comprimento foram
inoculados em tubos de ensaio (25x150 mm) com 20 ml de
meio baacutesico 07 de aacutegar suplementado com diferentes
concentraccedilotildees de aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (00 05
10 15 20 25 30 e 40 mg L-1)
Apoacutes inoculaccedilatildeo as culturas foram mantidas em
cacircmara de crescimento nas condiccedilotildees descritas
anteriormente Apoacutes 30 dias da inoculaccedilatildeo foram avaliados
a percentagem de brotaccedilotildees enraizadas nuacutemero e massa
fresca das raiacutezes desenvolvida por brotaccedilatildeo altura da
planta e massa da mateacuteria fresca da parte aeacuterea O
delineamento experimental foi inteiramente casualizado com
29 repeticcedilotildees Cada parcela foi constituiacuteda de um tubo de
ensaio com um explante
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos programas SASStat e SISVAR versatildeo 301
Aplicou-se a anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo
grau para avaliar a variaccedilatildeo das variaacuteveis em funccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de ANA
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Na proliferaccedilatildeo de
brotaccedilotildees observou-se que os fatores concentraccedilatildeo de
2iP e o subcultivo isoladamente e em interaccedilatildeo afetam
significativamente (P 005) as variaacuteveis nuacutemero e massa
da mateacuteria fresca das brotaccedilotildees formadas A equaccedilatildeo que
SANTOS M do D M dos et al78
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
melhor se ajustou para explicar o efeito de 2iP nos diferentes
subcultivos para a variaacutevel nuacutemero de brotaccedilotildees foi a de
segundo grau (Figuras 1 e 2) A multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees
de abacaxizeiro ornamental in vitro eacute dependente de 2iP
no meio de cultura O nuacutemero de brotaccedilotildees por explante
responsivo de tamanho maior que 05 cm de comprimento
foi pequeno na primeira subcultura (30 dias) em todas as
concentraccedilotildees de 2iP testadas aumentando-se nos demais
subcultivos Aos 30 60 90 e 120 dias estimou-se que a
concentraccedilatildeo de 16 mg L-1 de 2iP produziu o maacuteximo de
brotaccedilotildees por explante inoculado respectivamente 20 42
64 e 139 (Figuras 1 e 2) Esses resultados estatildeo em
consonacircncia com a importacircncia da citocinina em vaacuterios
aspectos do crescimento e desenvolvimento da planta
tais como divisatildeo celular (SKOOG amp MILLER 1957) quebra
da dominacircncia apical e desenvolvimento das gemas laterais
(SACHS amp THIMMAN 1964) induccedilatildeo e multiplicaccedilatildeo de
brotaccedilotildees in vitro (GRATTAPAGLIA amp MACHADO
1998 JOSHI amp DHAWAN 2007 MURASHIGE 1974)
Tambeacutem o tipo de citocinina e a sua concentraccedilatildeo satildeo
determinantes no processo de micropropagaccedilatildeo
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998 MURASHIGE
1974) Em Ananas sp o BAP tem sido preferencialmente
usado na proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees in vitro (ALMEIDA
1994 ALMEIDA et al 2002 CRUZ 2000 ESCALONA et
al 1999 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
GUERRA et al 1999 MATHEWS et al 1976) Entretanto
Kiss et al (1995) relataram que tanto o BAP quanto a
cinetina foram efetivos para formaccedilatildeo de brotaccedilotildees em
abacaxizeiro comercial No presente trabalho o 2iP foi
adicionado ao meio devido a sua maior atividade bioloacutegica
comparada com o BAP e a cinetina (MURASHIGE 1974)
Tambeacutem para a variaacutevel massa da mateacuteria fresca
foi constatada a resposta quadraacutetica das doses de 2iP
(Figuras 3 e 4) Pelas equaccedilotildees de regressatildeo infere-se
que o 2iP estimula o acuacutemulo de massa fresca nas
brotaccedilotildees com o maacuteximo obtido com a concentraccedilatildeo de
18 mgL-1 desse fator nos subcultivos de 30 60 e 120 dias
com a produccedilatildeo de respectivamente 9 17 e 77 g por
explante inoculado No terceiro subcultivo aos 90 dias a
concentraccedilatildeo de 17 gL-1 de 2iP produziu o total de
biomassa de 45 g por explante Essa observaccedilatildeo estaacute em
concordacircncia com os trabalhos do efeito beneacutefico de
citocininas na produccedilatildeo de parte aeacuterea ateacute uma
concentraccedilatildeo oacutetima acima da qual seu excesso eacute inibitoacuterio
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1988)
FIGURA 1 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
y)dias 60(14585x = -247661x + 31353 +
R 20999 =
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e bo
taccedilotilde
es p
or
expl
ante
s
30 dias
60 dias
y (60 dias) = 14585x2 - 47661x + 31353
R2 = 0999
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 79
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 2 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
FIGURA 3 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
FIGURA 4 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa mateacuteria fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
y)dias 90(22847x = -2 73196x + 55784
R209477 =
y)dias 120(5072x = -21623x + 9464 +
R20954 =
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero m
eacutedio
de
brot
accedilatildeo
por
expl
ante
90 dias
120 dias
y (120 dias) = 50725x2 - 1623x + 9464
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
R2 = 0954
y(60 dias) = -38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (
g)
30 dias
60 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (60 dias) = - 38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
y)dias 90(12255x = -243239x + 75847 +
R209717 =
y)dias 120(19075x = -271029x + 11295 +
R2096 =
0
10
2030
40
50
6070
80
90
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (g
)
90 dias
120 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (120 dias) = 19075x2 - 71029x + 11295
R2 = 096
y (90 dias) = 12255x2 - 43239x + 75847R2 = 09717
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e br
otaccedil
atildeo p
or e
xpla
nte
SANTOS M do D M dos et al80
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
Enraizamento das brotaccedilotildees A induccedilatildeo
emergecircncia e alongamento das raiacutezes ocorreram em todos
os tratamentos Em meio sem regulador de crescimento
os propaacutegulos apresentaram raiacutezes desenvolvendo-se
de maneira pontual na extremidade seccionada dos
explantes (Figura 5) Em meio com ANA as raiacutezes
desenvolveram-se na porccedilatildeo basilar dos propaacutegulos em
forma de roseta Em geral a auxina eacute utilizada na fase de
enraizamento de propaacutegulos oriundos da cultura in vitro
de Ananas (BARBOZA et al 2004 CORREIA et al
2000 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
PRAXEDES et al 2001 TENG 1997) Entretanto o
enraizamento pode ser feito em meio sem regulador de
crescimento (KISS et al 1995 ZEPEDA amp SAGAWA
1981) A utilizaccedilatildeo de uma auxina na fase de enraizamento
induz agrave formaccedilatildeo de um sistema radicular mais
pronunciado que facilitaraacute a fase de aclimataccedilatildeo (Figura
5) Observou-se que a concentraccedilatildeo de ANA afetou
significativamente (P 005) o nuacutemero de raiacutezes massa
fresca das raiacutezes e da parte aeacuterea A altura da planta natildeo
foi afetada pela concentraccedilatildeo de ANA sendo o valor
de F natildeo significativo
Constatou-se uma relaccedilatildeo quadraacutetica entre as
variaacuteveis nuacutemero e massa da mateacuteria fresca das raiacutezes e da
parte aeacuterea e a concentraccedilatildeo de ANA A estimativa da
proliferaccedilatildeo de raiacutezes baseando-se no nuacutemero de raiacutezes
por explante aumentou com a concentraccedilatildeo de ANA
atingindo um maacuteximo de 119 com 22 mg L-1 de ANA
Concentraccedilotildees acima de 22 mg L-1 tendem a apresentar
um efeito inibitoacuterio na produccedilatildeo de raiacutezes (Figura 6)
Tambeacutem a massa da mateacuteria fresca das raiacutezes aumentou
com a concentraccedilatildeo de ANA com um maacuteximo de 023 g
obtida com a concentraccedilatildeo de 24 mg L-1 de ANA (Figura
7) Essa tendecircncia foi observada para a massa fresca da
parte aeacuterea onde a estimativa maacutexima da produccedilatildeo de
biomassa foi de 046 g por explante em meio com 19 mg L-1
de ANA (Figura 8)
Com relaccedilatildeo agrave altura das plantas natildeo houve
diferenccedila significativa entre as diferentes concentraccedilotildees
de ANA e essa variaacutevel
FIGURA 5 Brotaccedilotildees enraizadas em meio MS contendo diferentes concentraccedilotildees de ANA (mg L-1) aos 30 dias apoacutesa inoculaccedilatildeo
00 05 10 15 20 25 30 40
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 81
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 6 Variaccedilatildeo do nuacutemero de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 7 Variaccedilatildeo na massa da mateacuteria fresca de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 8 Variaccedilatildeo da massa de mateacuteria fresca da parte aeacuterea por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
y = -1202x2 + 5291x + 61504
R2 = 06865
0
2
4
6
8
10
12
14
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Nordm
de r
aiacuteze
s
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00282x2 + 01359x + 00704
R2 = 07573
0
005
01
015
02
025
03
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Mas
sa fr
esca
das
raiacutez
es
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00363x2 + 01407x + 03255
R2 = 0857
0
01
02
03
04
05
06
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Mas
sa fr
esca
da
part
e aeacute
rea
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
SANTOS M do D M dos et al82
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
CONCLUSOtildeES
No meio liacutequido contendo MS vitaminas 3 de
sacarose e 16 mg L-1 de 2iP obteacutem-se uma estimativa meacutedia
de 139 brotaccedilotildees por explante inoculado no final do quarto
subcultivo (120 dias)
Maior nuacutemero de raiacutezes adventiacutecias por explante eacute
estimado com a concentraccedilatildeo de 22 mg L-1 de ANA
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) pelas bolsas concedidas
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MOTHEacute G P B et al84
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
(Recebido em 25 de marccedilo de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFICIEcircNCIA FOTOQUIacuteMICA E CARACTERIacuteSTICAS DECRESCIMENTO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR (Saccharum officinarum L)CULTIVADA IN VITRO EM DIFERENTES CONCENTRACcedilOtildeES DE
SACAROSE E QUALIDADE DE LUZ
PHOTOCHEMICAL EFFICIENCY AND GROWTH CHARACTERISTICS OF SUGARCANE (Saccharum officinarum L) PLANTS CULTIVATED IN VITRO UNDER
DIFFERENT SUCROSE CONCENTRATIONS AND LIGHT QUALITY
1Bioacuteloga Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000 28015-620
Campos dos Goytacazes RJ georgiabecharayahoocombr2Engenheiro Agrocircnomo Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA
Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000
28015-620 Campos dos Goytacazes RJ alenauenfbr crespouenfbr campostuenfbr
RESUMODentre os diversos produtos agriacutecolas cultivados no
Estado do Rio de Janeiro a cana-de-accediluacutecar (Saccharumofficinarum L) eacute a cultura de maior importacircncia econocircmicaDiante dessa importacircncia na regiatildeo fluminense torna-senecessaacuteria cada vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividadedessa espeacutecie A produccedilatildeo em escala comercial de plantas decana-de-accediluacutecar pode ser beneficiada pela obtenccedilatildeo de mudas dealta qualidade e homogeneidade em curtos periacuteodos de tempo oque pode ocorrer pelo uso da micropropagaccedilatildeo A presenccedila decarboidrato eacute essencial para o enraizamento de muitas espeacuteciesin vitro sendo a sacarose o accediluacutecar mais utilizado namicropropagaccedilatildeo Poreacutem a necessidade desse composto nomeio de cultivo vem sendo discutida por alguns autoresObjetivou-se neste trabalho verificar o efeito da concentraccedilatildeode sacarose no meio de cultivo e a qualidade da luz sobre acapacidade fotossinteacutetica e as caracteriacutesticas de crescimentoem plantas de cana de accediluacutecar cultivadas in vitro Para tanto foiquantificada a emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila determinadaa massa seca de raiz e da parte aeacuterea a massa foliar especiacutefica eestimada a concentraccedilatildeo de clorofilas Os resultados obtidosmostraram que em cana de accediluacutecar cultivada in vitro em frascosfechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de sacarose no meio decultivo promoveu aumentos na mateacuteria seca da parte aeacuterea e daraiz na massa foliar especiacutefica e na intensidade de cor verde dasfolhas estudadas Natildeo houve modificaccedilatildeo na capacidadefotoquiacutemica maacutexima do PSII A justificativa para o natildeo-comprometimento da sacarose sobre as caracteriacutesticasrelacionadas agrave fotossiacutentese estudadas neste trabalho como oteor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o rendimentoquacircntico maacuteximo do PSII pode estar relacionada com a altacapacidade dessa espeacutecie em armazenar sacarose nos tecidos
Termos para indexaccedilatildeo Saccharum officinarum aclimatizaccedilatildeomeio de cultura fotossiacutentese
ABSTRACTThe State of Rio de Janeiro was one of the pioneers in
Brazil to set out the sugar cane activity which still represents animportant segment in the regional economy The production ofplants in commercial scale would be benefited by the attainmentof seedlings of high quality and homogeneity in short periods oftime which can be obtained using the micropropagation Thepresence of carbohydrate is essential for in vitro rooting of manyspecies with the sucrose being considered the most used sugarduring micropropagation despite the discussion by some authorsregarding its requirement The objective of this work was toevaluate the effect of sucrose concentrations in the culture mediumand light quality on the photosynthetic capacity and biometriccharacteristics on micropropagated sugar cane plants Chlorophyllfluorescence and contents were quantified root and shoot drymass and specific leaf mass were determined and chlorophyllconcentrations were estimated The results showed that theincrease in sucrose concentration during the in vitro cultivationof sugar cane in closed flasks promotes increase in the shootand root dry matter specific leaf mass and chlorophyll contentsNo modification of maximum PSII photochemistry capacity wasobserved The lack of sucrose effects on photosyntheticcharacteristics such chlorophyll contents and PSII yield may berelated to the high capacity of this specie to storage sucrose inthe tissues
Index terms Saccharum officinarum aclimatization culturemedium photosynthesis
Siacutembolos PSII fotossistema II SPAD Soil Plant AnalysisDevelopment BAP benzilaminopurina FFF fluxo de foacutetonsfotossinteacuteticos MPC medidor portaacutetil de clorofilas MFE massafoliar especiacutefica F
vF
maacutex Rendimento quacircntico maacuteximo do
fotossistema II MSPA massa seca parte aeacuterea MSR massaseca raiz AIB acido indol butirico ANAacido naftaleno aceacutetico
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 85
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
INTRODUCcedilAtildeO
A cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) foi
introduzida no Brasil no seacuteculo XVII com o objetivo de
quebrar o monopoacutelio mundial exercido pela Franccedila no
comeacutercio do accediluacutecar produzido nas Ilhas do Caribe O cultivo
da cana-de-accediluacutecar teve um grande aumento quando em
meados da deacutecada de 70 o Brasil criou o Programa Nacional
do Aacutelcool o qual teve como objetivo estimular a produccedilatildeo
do aacutelcool visando o atendimento das necessidades do
mercado interno e externo e da poliacutetica de combustiacuteveis
automotivos (MENEZES VEIGA et al 2006)
Atualmente a cana-de-accediluacutecar eacute uma das principais
culturas do panorama brasileiro e continua crescendo em
funccedilatildeo do consumo como fonte de energia e accediluacutecar Dentre
os diversos produtos agriacutecolas cultivados no estado do Rio
de Janeiro a cana-de-accediluacutecar eacute a cultura de maior importacircncia
econocircmica (MENEZES VEIGA et al 2006) Diante dessa
importacircncia na regiatildeo fluminense torna-se necessaacuteria cada
vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividade dessa espeacutecie
Uma das alternativas para essa elevaccedilatildeo eacute a formaccedilatildeo de
lavouras por meio do uso de mudas de excelente qualidade
Assim a micropropagaccedilatildeo eacute uma teacutecnica que pode contribuir
significativamente para a produccedilatildeo de mudas de cana de
accediluacutecar de alta qualidade Entre as diversas vantagens que
essa teacutecnica apresenta estaacute a produccedilatildeo raacutepida de mudas em
larga escala e a eliminaccedilatildeo de microrganismos potencialmente
fitopatogecircnicos
A micropropagaccedilatildeo tradicional tem como premissa
a presenccedila de sacarose no meio de cultivo uma vez que
esse composto eleva a produccedilatildeo de biomassa e pode
contribuir para aumentar o enraizamento de muitas espeacutecies
in vitro (GRATTAPAGALIA amp MACHADO 1990)
Entretanto vaacuterios autores tecircm sugerido que a fonte de
carboidrato no meio de cultura inibe o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono A adiccedilatildeo da sacarose ao meio
inibiu a fotossiacutentese potencial in vitro (LEES et al 1991)
reduziu a atividade da Rubisco (GROUT amp DONKIN 1987)
inibiu o acuacutemulo de clorofila (LA ROSA et al 1984) e
diminuiu a fixaccedilatildeo do carbono inorgacircnico por meio da
inibiccedilatildeo da atividade da carboxilase do fosfoenol-piruvato
e do Ciclo de Calvin (NEUMANN amp BENDER 1987)
Entretanto Khan et al (2006) trabalhando com cana-de-
accediluacutecar relataram que a maacutexima taxa de multiplicaccedilatildeo de
dois clones (AEC82-223 e NIA-2004) foi nas concentraccedilotildees
de 4 e 6 de sacarose no meio mostrando que nesses
clones cultivados em frascos fechados in vitro a sacarose
foi de fundamental importacircncia para a otimizaccedilatildeo do
crescimento da parte aeacuterea Esses autores mostraram que
a maior taxa de enraizamento foi em meio MS com 1 mg L-
1 de AIB e 6 de sacarose
Alguns autores para facilitar a aclimatizaccedilatildeo da
planta micropropagada sugerem adotar na uacuteltima fase da
cultura in vitro diminuir a concentraccedilatildeo de sacarose com
o objetivo de tentar elevar a taxa fotossinteacutetica e capacitar
a planta agrave nutriccedilatildeo autotroacutefica uma vez que a fonte de
carboidrato no meio de cultura pode inibir o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono Em vista disso Simmonds (1983)
obteve melhores resultados no enraizamento de porta-
enxerto de macieira ao reduzir a concentraccedilatildeo de sacarose
no meio de cultura para apenas 1 Contudo Wainwright
amp Scrace (1989) sugerem manter a sacarose no niacutevel
normalmente utilizado (3) ou ateacute mesmo aumentaacute-lo numa
fase anterior agrave aclimatizaccedilatildeo visando melhorar a qualidade
da planta Segundo esses autores o preacute-condicionamento
em altas concentraccedilotildees de sacarose aumentaria as reservas
de carboidratos armazenadas pelas folhas aumentando
assim a energia disponiacutevel para as placircntulas durante o
processo de aclimataccedilatildeo Para George amp Sherrington (1984)
no desenvolvimento in vitro de muitas espeacutecies a
assimilaccedilatildeo fotossinteacutetica eacute baixa fazendo com que as
culturas sejam dependentes do suporte externo de
carboidratos
Objetivou-se neste trabalho verificar o efeito da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo e da qualidade
de luz sobre a eficiecircncia fotoquiacutemica e as caracteriacutesticas de
crescimento da cana-de-accediluacutecar cultivada in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
O experimento foi realizado na unidade de pesquisa
em fotossiacutentese de plantas in vitro no Setor de Fisiologia
MOTHEacute G P B et al86
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
Vegetal Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal
na UENF Campos dos GoytacazesRJ
Como fonte de explante foram utilizadas placircntulas
de cana-de-accediluacutecar com dois a trecircs centiacutemetros de altura
proveniente de material vegetal jaacute em fase de multiplicaccedilatildeo
contendo meio MS modificado (02 mg L-1 de fonte de
nitrogecircnio combinado 01 mg L-1 de cinetina 02 mg L-1 de
BAP 1 mg L-1 de Tiamina 100 mg L-1 de mio-inositol e 20 g
L-1 de sacarose) em condiccedilotildees de perfilhamento O material
foi obtido no Laboratoacuterio de Cultura de Tecido do Campus
Dr Leonel Miranda UFRRJ O meio de cultura utilizado
para o recultivo foi o MS padratildeo (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 100 mg L-1 de mio-inositol 7 g L-1 de
Agar (Vetec) e sem adiccedilatildeo de reguladores de crescimento
Os tratamentos consistiram de uma combinaccedilatildeo bifatorial
de seis concentraccedilotildees de sacarose no meio (0 10 20 30
40 e 50 g L-1) e dois tipos de luz (lacircmpada fluorescente
branca 40w luz branca com irradiacircncia de 948 igravemol m-2 s-
1 e lacircmpada fluorescente tipo Grolux 40w luz vermelha
com irradiacircncia de 966 igravemol m-2 s-1) O pH do meio foi
ajustado para 58 antes da inclusatildeo do aacutegar e da
autoclavagem (15 atm a 120ordmC por 20 min) A parcela
experimental consistiu de frascos tipo baby food
contendo 50 mL do meio MS nas diferentes
concentraccedilotildees de sacarose O delineamento experimental
foi inteiramente casualizado com trecircs repeticcedilotildees em que
cada parcela consistiu de um frasco com duas plantas
Apoacutes a inoculaccedilatildeo os explantes foram cultivados em
sala de crescimento a uma temperatura 25ordm C plusmn 10 a um
fluxo de foacutetons fotossinteacuteticos de 120 a 150 igravemol m-2 s-1
com 16h de fotoperiacuteodo
Aos vinte e oito dias apoacutes a inoculaccedilatildeo (DAI) foi
utilizada a 2ordm eou 3ordm folha mais expandida para as anaacutelises
para determinaccedilatildeo do rendimento quacircntico maacuteximo do PSII
(FvF
max) (apoacutes adaptaccedilatildeo da folha ao escuro por 30
minutos com auxiacutelio de pinccedilas) por meio de um fluoriacutemetro
natildeo modulado PEA (Plant Efficiency Analyser - Hansatech
Ltd King s Lynn Norfolk UK)
A medida de intensidade de verde (relacionada com
o teor de clorofilas totais) foi feita nesta mesma eacutepoca por
meio do medidor portaacutetil do teor de clorofila SPAD 502
Chlorophyll Meter Minolta Japatildeo Os valores da
intensidade do verde foram provenientes da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha
A massa foliar especiacutefica feita aos 28 dias apoacutes o
cultivo in vitro foi determinada a partir da divisatildeo da massa
seca da folha de uma parte do limbo foliar pela respectiva
aacuterea dessa parte
No final do experimento foi determinada a massa
seca das partes aeacuterea e da raiz das plantas Essas partes
foram colocadas em estufa com ventilaccedilatildeo forccedilada a 70ordm C
por 48 h A partir dos dados da massa seca estimou-se a
relaccedilatildeo parte aeacuterearaiz (massa seca da parte aeacuterea massa
seca das raiacutezes)
Os dados experimentais foram submetidos a uma
anaacutelise de variacircncia e para cada tratamento foram
avaliados trecircs frascos Foram realizadas duas repeticcedilotildees
para cada frasco e seis plantas foram utilizadas
provenientes de trecircs frascos Os dados de cada avaliaccedilatildeo
foram analisados estatisticamente por teste Tukey a 5
e os resultados expressos como meacutedia (plusmn erro-padratildeo) de
seis repeticcedilotildees
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os diferentes tratamentos de luz e dosagem de
sacarose no meio de cultura influenciaram a produccedilatildeo de
biomassa na parte aeacuterea mostrando que maiores
concentraccedilotildees de sacarose produziram maior biomassa
(figuras 2 e 3) O tratamento controle (0 g L-1 de sacarose)
natildeo produziu biomassa suficiente para as anaacutelises
Portanto as plantas-controle cultivadas nessas
condiccedilotildees requerem a adiccedilatildeo de carboidratos para suprir
suas necessidades metaboacutelicas quer participando na
geraccedilatildeo de energia ou como fonte de esqueletos
carbocircnicos para vaacuterios processos bioquiacutemicos sugerindo
que as condiccedilotildees encontradas no frasco de cultivo e na
sala de crescimento foram ineficientes para as plantas-
controle desenvolverem condiccedilotildees de realizar
fotossiacutentese e consequumlentemente produzir biomassa
(Figura 1)
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 87
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 1 Plantas de cana-de-accediluacutecar cultivada em diferentes concentraccedilotildees de sacarose apoacutes 28 dias de cultivo (A)0 g L-1 (B) 10 g L-1 (C) 20 g L-1 (D) 30 g L-1 (E) 40 g L-1 e (F) 50 g L-1
Os resultados obtidos por meio da anaacutelise de
variacircncia para as cinco diferentes concentraccedilotildees de
sacarose (10 20 30 40 e 50 g L-1) no meio demonstraram
que para a caracteriacutestica massa seca da parte aeacuterea (MSPA)
houve uma resposta crescente em que doses crescentes
de sacarose promoveram acreacutescimos de biomassa seca
(Figura 2A) A concentraccedilatildeo 10 g L-1 diferenciou
significativamente das concentraccedilotildees de 40 g L-1 e 50 g L-
1 produzindo uma menor MSPA 0039 0101 e 0135g
respectivamente (Figura 2A) Dados semelhantes foram
obtidos em morangueiros batata menta e videira por
(RIQUELME et al 1991) e por (NICOLOSO 2003) em que
nesse trabalho a elevaccedilatildeo da concentraccedilatildeo de sacarose
de 30 ateacute 60 g L-1 promoveu maior produccedilatildeo de biomassa
dos oacutergatildeos de Pfaffia glomerata (Spreng) Pedersen
Com relaccedilatildeo agrave mateacuteria seca da raiz (MSR) as
diferenccedilas de concentraccedilatildeo de sacarose influenciaram
significativamente os resultados As menores
concentraccedilotildees (10 20 e 30 g L-1) somente diferenciaram
significativamente da maior concentraccedilatildeo (50 g L-1) que
produziu valores 0084g de MSR (Figura 2b) Pelos
resultados foi verificado que a presenccedila de sacarose
mostrou-se fundamental para o desenvolvimento da parte
aeacuterea e das raiacutezes da cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro
De fato Khan et al (2008) mostraram que o meio MS com
meia forccedila suplementado com reguladores de crescimento
(AIB e ANA) e 60 g L-1 de sacarose proporcionou maior
enraizamento em 3 variedades elite de cana-de-accediluacutecar Khan
et al (2006) tambeacutem indicaram a importacircncia da sacarose
no crescimento da parte aeacuterea em clones dessa espeacutecie
George (1996) relata que para formaccedilatildeo de raiacutezes in vitro
haacute necessidade de energia e carboidratos sendo esses
fornecidos por meio da fotossiacutentese (em condiccedilotildees
autotroacuteficas) ou oriunda de uma fonte exoacutegena de accediluacutecar
(em sistemas heterotroacuteficos ou mixotroacuteficos) O autor
verificou ainda que o aumento da concentraccedilatildeo de
sacarose de modo geral estimula o crescimento e a
formaccedilatildeo de raiacutezes de algumas espeacutecies Jaacute em outros
trabalhos na fase de enraizamento a reduccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultura vem sendo
citada como beneacutefica na melhoria da qualidade do sistema
radicular bem como na sobrevivecircncia das placircntulas
transplantadas (ANDRADE 1998)
Com relaccedilatildeo agrave MSPAMSR os tratamentos natildeo
apresentaram diferenccedila significativa apontando uma
relaccedilatildeo direta entre o crescimento das raiacutezes e da parte
MOTHEacute G P B et al88
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 2 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e as diferentes concentraccedilotildees de sacarose no meio de cultivoindependente da luz (A) Massa seca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa seca raiz (MSR) (C) Razatildeo massa seca da parteaeacuterearaiacutezes (MSPAMSR) (D) Massa foliar especiacutefica (MFE) (E) Teor estimado de clorofilas totais (valores de MPC)(F) Rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (F
vF
m) em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Cada
siacutembolo representa a meacutedia de seis repeticcedilotildees em MSPA MSR MSPA MSR e MFE e oito repeticcedilotildees em Valores deMPC e da relaccedilatildeo F
vF
m Meacutedias seguidas pela mesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
aeacuterea Essa relaccedilatildeo eacute de fundamental importacircncia para a
organizaccedilatildeo dos processos fisioloacutegicos e desenvolvimento
das plantas (TAIZ amp ZEIGER 2002) Essas partes estatildeo
relacionadas entre si e essa relaccedilatildeo eacute devida agrave dependecircncia
nutricional e fitohormonal da parte aeacuterea com a raiz
(SALISBURY amp ROSS 1992) (Figura 2c)
As diferentes concentraccedilotildees de sacarose
influenciaram a massa foliar especiacutefica (MFE) a qual
representa a quantidade de massa seca por unidade de
aacuterea da folha estimando a proporccedilatildeo relativa da superfiacutecie
assimilatoacuteria e os tecidos de sustentaccedilatildeo e condutores da
folha aleacutem de poder ser correlacionada positivamente com
a taxa fotossinteacutetica (CRUZ et al 2004) A menor
concentraccedilatildeo de sacarose apresentou o menor valor (148
g m-2) o que indica que a ausecircncia de sacarose pode
comprometer a espessura foliar bem como a capacidade
da maquinaria fotossinteacutetica (Figura 2d)
O teor de clorofila foi estimado por meio do medidor
portatil de clorofila (MPC) Os valores encontrados da
intensidade do verde foram oriundos da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha As diferentes concentraccedilotildees de
sacarose no meio de cultivo influenciaram a intensidade
de verde (Figura 2e) em que a maior concentraccedilatildeo de
sacarose apresentou o maior valor do MPC (336)
0
003
006
009
012
015
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
A (g
)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MFE
(gm
2)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
0
002
004
006
008
01
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSR
(g)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
20
22
24
26
28
30
32
34
36
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
Val
ores
de
MPC
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
000
100
200
300
400
500
600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
AM
SR
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
062
064
066
068
07
072
074
076
078
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
FvF
m
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
A
B
D
C
E
F
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 89
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
diferenciando significativamente dos demais tratamentos
Esses valores estatildeo relacionados com uma maior
quantidade de clorofilas totais em maiores teores de
sacarose Nesse caso em plantas de cana-de-accediluacutecar a
elevaccedilatildeo no teor de sacarose contribui para o incremento
do teor de clorofilas a partir de 30 g L-1 desse composto no
meio de cultivo
Com relaccedilatildeo agrave atividade do PSII avaliada por meio
da emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila a as plantas de
cana-de-accediluacutecar apresentaram alteraccedilotildees com relaccedilatildeo aos
tratamentos utilizados Estatisticamente os valores
menores da eficiecircncia fotoquiacutemica maacutexima do PSII (FvF
m)
foram verificados na concentraccedilatildeo de 20 g L-1 de sacarose
(Figura 2f) Com exceccedilatildeo das plantas crescidas nessa
concentraccedilatildeo de sacarose as demais plantas cultivadas
em meios com maiores concentraccedilotildees de sacarose natildeo
apresentaram diferenccedilas significativas para a caracteriacutestica
FvF
m Por meio dos resultados relacionados aos efeitos
da concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo sobre as
caracteriacutesticas de crescimento a produccedilatildeo de biomassa
estaria mais relacionada agrave oferta de carbono no meio de
cultivo do que a eficiecircncia na maquinaria fotoquiacutemica das
plantas
A qualidade do fluxo de foacutetons fotossinteacutetico (FFF)
teve influecircncia relevante nas caracteriacutesticas MSPA MSR
MFE e valores do MPC A luz considerada vermelha emitida
pelas lacircmpadas GroLux proporcionou maiores valores das
caracteriacutesticas supracitadas Tais resultados poderiam estar
relacionados a um maior ganho de carbono por meio de um
aumento da taxa fotossinteacutetica liacutequida eou indiretamente
causado por alteraccedilotildees fitormonais causadas pela
modificaccedilatildeo no espectro luminoso (CAMPELL amp
BONNER 1986) Ainda na presenccedila da luz vermelha houve
favorecimento para a produccedilatildeo de biomassa tanto na parte
FIGURA 3 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e os diferentes tipos de luz (Branca e Vermelha) (A) Massaseca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa foliar especifico (MFE) (C) Massa seca raiz (MSR) e (D) Teor estimado declorofilas totais (Valores de MPC) Cada siacutembolo representa a meacutedia sendo 15 repeticcedilotildees em MSPA MSR e valores deMPC e 20 repeticcedilotildees em MFE em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Meacutedias seguidas pelamesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
14
16
18
20
22
LUZ
MFE
(gm
2)
Luz branca
Luz vermelha
0
001
002
003
004
005
LUZ
MSR
(g)
Luz branca
Luz vermelha
002
004
006
008
01
012
014
LUZ
MSP
A (g
)
Luz branca
Luz vermelha
20
22
24
26
28
30
LUZ
Val
ores
de
MP
C
Luz branca
Luz vermelha
A
C
B
D
MOTHEacute G P B et al90
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
aeacuterea como no sistema radicular A luz branca apresenta
uma composiccedilatildeo espectral que pode variar e causar
respostas diferenciadas na cultura in vitro A
predominacircncia na emissatildeo de foacutetons na regiatildeo do vermelho
ateacute o azul pode estimular a induccedilatildeo de calos quebrar a
moleacutecula de AIA e ainda estimular a induccedilatildeo de brotos
(BARRUETO CID 2001 CHAMOVITZ amp DENG 1996)
As plantas cultivadas em maiores concentraccedilotildees
(40 e 50 gL-1) de sacarose e aclimatadas em luz vermelha
tiveram melhores resultados do que nos outros tratamentos
(Figura 2 e 3)
CONCLUSOtildeES
Em cana-de-accediluacutecar cultivada em condiccedilotildees in vitro
e em frascos fechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de
sacarose no meio de cultivo promoveu aumentos na
mateacuteria seca da parte aeacuterea e da raiz na massa foliar
especiacutefica e na intensidade de cor verde das folhas
estudadas Natildeo houve alteraccedilatildeo na eficiecircncia fotoquiacutemica
maacutexima do PSII A luz vermelha associada agrave concentraccedilotildees
de sacarose de 40 e 50gL-1 parece ter uma resposta
somatoacuteria tanto na produccedilatildeo de parte aeacuterea e raiz quanto
na massa foliar especiacutefica e no teor de clorofila
A justificativa para o natildeo-comprometimento da
sacarose no meio sobre as caracteriacutesticas relacionadas agrave
fotossiacutentese estudadas neste trabalho como exemplo o
teor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o
rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (FvF
m) pode estar
relacionada com a alta capacidade dessa espeacutecie em
armazenar sacarose nos tecidos
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
(Recebido em 20 de junho de 2008 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EFFECTS OF AUXINS AND CYTOKININS ON IN VITRODEVELOPMENT OF Alpinia purpurata K SCHUM AND
PHENOLIC COMPOUNDS PRODUCTION
EFEITO DE AUXINAS E CITOCININAS NO DESENVOLVIMENTO IN VITRO DEAlpinia purpurata K SCHUM E PRODUCcedilAtildeO DE SUBSTAcircNCIAS FENOacuteLICAS
CRISTIANE PIMENTEL VICTOacuteRIO1 IACINETE PAMPLONA DA CRUZ2 ALICE SATO3RICARDO MACHADO KUSTER4 CELSO LUIZ SALGUEIRO LAGE5
1Doutora em Ciecircncias Bioloacutegicas (Biofiacutesica) Instituto de Biofiacutesica Carlos Chagas FilhoLab Fisiologia Vegetal Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050 21952-590 Rio de Janeiro RJ crispvbiofufrjbr
2Estudante de Farmaacutecia bolsista PIBICUFRJ3Doutora em Biotecnologia Vegetal Prof Dep Botacircnica Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro Av Pasteur 458
22290-040 Rio de Janeiro RJ alicesatouniriobr4Doutor Prof Laboratoacuterio de Fitoquiacutemica Nuacutecleo de Pesquisas de Produtos Naturais (NPPN) Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco H 21941-902 Rio de Janeiro RJ kusternppnufrjbr
5Doutor Prof IBCCFo Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050
21952-590 Rio de Janeiro RJ clslagebiofufrjbr
ABSTRACTAlpinia purpurata K Schum is largely used in
ornamentation and scarcely present itself in folk medicine Studiesusing plant tissue culture technique under standardized conditionpermit to evaluate plant physiological morphological andphytochemical responses to exogenous plant growth regulatorThis work consisted in the establishment of in vitro A purpurataplants using different concentrations of auxin and cytokinins inmg L-1 IAA 2 TDZ 2 and 4 IAA 2 + TDZ 2 IAA 2 + BAP 2Additionally it was determined the content of phenoliccompounds in the leaves of field and in vitro plants using Folin-Ciocalteau method Buds from inflorescence A purpurata weredisinfested and introduced in solid MS medium to initiate culturesThe direct organogenesis process was fast and satisfactoryproducing elongated plants with a developed radicular systemThe rooting percentage reached 100 for all treatments after 2months Cytokinins and auxins were important for the increasingof the leaves quantity (42 to 51) and shoot elongation (40 cm)Liquid MS0 presented the favorable results for fastmicropropagation and higher production of shoots providingplants ready to be acclimatized In vitro plants cultivated underMS0 produced 93 of phenolic compounds in comparison withfield plants (100) Through High Performance LiquidChromatographic it was verified similar chromatographic profilesbetween field and in vitro plant extracts
Index terms Folin-Ciocalteau HPLC micropropagation tissueculture Zingiberaceae Alpinia purpurata
RESUMOAlpinia purpurata K Schum eacute uma espeacutecie muito
utilizada como ornamental e possui escassas indicaccedilotildees de usona medicina popular Estudos utilizando teacutecnicas de cultura detecidos vegetais permitem a partir de condiccedilotildees padronizadas
avaliar as respostas fisioloacutegicas morfoloacutegicas e fitoquiacutemicas dosvegetais aos fitorreguladores exoacutegenos Este trabalho consistiuno estabelecimento de plantas de A purpurata in vitro utilizando-se diferentes concentraccedilotildees de auxina e citocininas (mg L-1) AIA2 TDZ 2 e 4 AIA 2 + TDZ 2 AIA 2 + BAP 2 Verificou-setambeacutem o conteuacutedo de substacircncias fenoacutelicas nas folhas de plantasde campo e in vitro atraveacutes do meacutetodo de Folin-CiocalteauBrotos oriundos da inflorescecircncia de A purpurata foramdesinfestados e introduzidos em meio MS soacutelido para iniciar asculturas O processo de organogecircnese direta foi raacutepido esatisfatoacuterio produzindo plantas alongadas e com sistema radiculardesenvolvido A porcentagem de enraizamento atingiu 100 paratodos os tratamentos ao final de 2 meses As citocininas e auxinasforam importantes para incrementar o nuacutemero de folhas (42 a51) e alongamento dos brotos (40 cm) em comparaccedilatildeo com omeio controle O MS0 liacutequido foi o mais favoraacutevel para raacutepidapropagaccedilatildeo in vitro e maior produccedilatildeo de brotos com suprimentode plantas aptas a serem aclimatizadas Plantas in vitro cultivadasem meio MS0 produziram 93 de fenoacuteis totais em relaccedilatildeo agravesplantas de campo (100) Atraveacutes da Cromatografia Liacutequida deAlta Eficiecircncia foi verificada semelhanccedila entre os perfiscromatograacuteficos dos extratos de plantas de campo e in vitro
Termos para indexaccedilatildeo Folin-Ciocalteau CLAEmicropropagaccedilatildeo cultura de tecidos vegetais ZingiberaceaeAlpinia purpurata
INTRODUCTION
Alpinia purpurata K Schum is widely used as
ornamental plant in several tropical and subtropical areas
with high international market demand (KRESS et al 2002
SANGWANANGKUL et al 2008) In folk medicine it is
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 93
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
used for cough in Venezuela and presents antibacterial
activity (BERMUacuteDEZ amp VELAacuteSQUEZ 2002 ZOGHBI et
al 1999) Recent studies have showed the phytochemical
potential of this species (VICTOacuteRIO et al 2007 2008)
The vegetative propagation through rhizome is the
main way of reproduction of this species According to
Moroacuten (1987) for the propagation of A purpurata in
greenhouse the time is twice more than in in vitro systems
Plant tissue culture techniques have been employed in
Brazil since 1950 and the main advantages include the
continuous and fast production of aseptic and selected
plants These techniques permit a commercial-scale
production of plants (ROUT et al 2006) and some studies
have showed them as an alternative for optimizing
secondary metabolites production (RAO amp
RAVISHANKAR 2002) The micropropagation of A
purpurata supplies may be a source for ornamental and
medicinal raw material (MULABAGAL amp TSAY 2004
POMPELLI et al 2007)
Addition of auxins and cytokinins in the culture
media are essential to improve and regulate growth and
morphogenesis of the cultures (CHITRA amp PADMAJA
2005 KYOZUKA 2007) Besides several studies have
reported the effects of plant growth regulators in in vitro
phenolic production (SANTOS-GOMES et al 2002
THIEM 2003) We intended to develop a protocol for in
vitro production of A purpurata plants and to evaluate
the effects of auxins and cytokinins on plant development
and compounds phenolic production
MATERIAL AND METHODS
Plant Material
Buds from inflorescence of donor plants of Alpinia
purpurata red inflorescence were used as source of plant
material to initiate in vitro cultures Voucher specimen was
deposited at the Herbarium of Rio de Janeiro Botanical
Garden under accession number RB 433484 Buds were
collected and washed with running water using nylon
brush for removing residues The sterilization process was
concluded in four steps in sterile ambient after dissection
of leaves 20 of commercial bleach solution for 40 min
followed by immersion in distilled water plus commercial
detergent solution for 15 min dipped in 70 ethanol
washed for 10 min in 30 of commercial bleach solution
and rinsed with sterile distilled water three after each step
Establishment of in vitro cultures
Explants were subcultured into glasses (16 x 8 cm)
containing 50 ml of culture medium Murashige amp Skoog
(1962) supplemented with 3 of sucrose 148 igraveM thiamine-
Different letters indicate significant differences at plt 005 level Tukey s test n e 30
VICTOacuteRIO C P et al96
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
FIGURE 2 In vitro development of Alpinia purpurata plants in MS medium under different plant growth regulators(mgl-1) (A) Sequence of development 1 month (I) 2 months (II) and 3 months (III) (B) shoot height after 2 months (C)shoot height and (D) percentage of shoots after 3 months Different letters indicate significant differences at plt 005level Tukey s test n e 30 100 correspond to 30 shoots per explant within 1 year
advantage of in vitro production of secondary metabolites
is the possibility to control environment and nutritional
factors Data show high level of phenolics in in vitro
cultures of A purpurata (93) compared with field plants
(100) (Figure 3A) Through reversed-phase HPLC was
found similarity between field and in vitro plants profiles
(Figure 3B-C) The peaks 1 2 and 3 presented
characteristics of phenolic compounds verified through
UV spectra obtained by HPLC A purpurata is not currently
used in folk medicine and these results may indicate the
presence of therapeutic resource in its phytochemistry
The preliminary investigation of phenolic in
organogenic cultures of A purpurata using Folin-
Ciocalteau reagent and HPLC analysis brings perspectives
about the production of antioxidant compounds by this
species In addition the establishment of tissue culture of
A purpurata may be a good alternative to produce aseptic
plants and its bioactive metabolites
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 97
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
ACKNOWLEDGEMENTS
C P Victoacuterio acknowledges the fellowship from
CAPES and PROEX financial support
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Curva de crescimento atividade da fenilalanina 99
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
(Recebido em 23 de janeiro de 2008 e aprovado em 7 de outubro de 2008)
CURVA DE CRESCIMENTO ATIVIDADE DA FENILALANINA AMOcircNIA-LIASE E TEORES DE FENOacuteIS E TANINOS TOTAIS EM CALOS DE
GROWTH CURVE PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE ACTIVITY AND TOTALPHENOL LEVELS IN CALLUS OF Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville
(FABACEAE-MIMOSOIDEAE)
ANA HORTEcircNCIA FONSEcircCA CASTRO1 MILLER MARANI LIMA2 RENATO PAIVA3 AMAURI ALVES DE ALVARENGA4 MIRELLE OLIVEIRA SOacuteTER5
1Doutora Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG2Bolsista ICFAPEMIG Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG3PhD Universidade Federal de LavrasUFLA 37200-000 Lavras MG4Doutor Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 37200-000 Lavras MG renpaivauflabr5Acadecircmica Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG
RESUMOObjetivou-se estabelecer a curva de crescimento e avaliar
a atividade da fenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis etaninos totais em calos de barbatimatildeo explantes foliares foraminoculados em meio MS suplementado com 30 g L-1 sacarose eacrescidos de 905 M de 24-D O crescimento a atividade dafenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis e taninos totaisforam avaliados a cada 10 dias durante 110 dias A curva decrescimento dos calos apresentou um padratildeo sigmoidal com cincofases distintas Os teores meacutedios de fenoacuteis totais acompanharamas variaccedilotildees observadas para a atividade enzimaacutetica Alta atividadee maiores teores de fenoacuteis totais foram observados no explanteinicial com reduccedilotildees progressivas ateacute a fase linear Na faseestacionaacuteria observaram-se incrementos importantes naatividadeda fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais Natildeo foidetectada a presenccedila de taninos totais nos calos
Termos para indexaccedilatildeo Barbatimatildeo cultivo in vitro plantamedicinal Stryphnodendron adstringens
ABSTRACTIn order to establish growth curve phenylalanine ammonia-
lyase (PAL) activity and total phenol and tannin levels inStryphnodendron adstringens leaf explants were inoculated inMS medium supplemented with 30 g L-1 sucrose and 905 M24-D The growth PAL activity and total phenol and tanninlevels were evaluated at 10 days intervals during 110 days Callusgrowth curve presented a sigmoid shape with five different phasesAverage levels of total phenol followed the changes observed forenzymatic activity High activity and higher levels of total phenolwere observed in initial explants with progressive reductions untilthe linear phase Increases in phenylalanine ammonia-lyase activityand total phenols levels were observed in stationary phase Notannins were observed on callus
Index terms Stryphnodendron adstringens In vitro CultureMedicinal Plant
INTRODUCcedilAtildeO
Atualmente um consideraacutevel esforccedilo tem sido feito
com o intuito de se produzir fitoteraacutepicos com maiores
concentraccedilotildees de substacircncias ativas vegetais atraveacutes de
culturas de ceacutelulas ou tecidos Segundo Taniguchi et al
(2002) dentre as diferentes teacutecnicas de cultivo in vitro a
cultura de calos tem apresentado grande importacircncia para
a propagaccedilatildeo e produccedilatildeo in vitro de espeacutecies de interesse
medicinal A desdiferenciaccedilatildeo e induccedilatildeo de regeneraccedilatildeo
das plantas a partir de calos satildeo muitas vezes processos
difiacuteceis de serem obtidos e podem demandar algum tempo
As auxinas tecircm sido amplamente utilizadas nos meios de
cultivo para a induccedilatildeo de calos e geralmente dependendo
da concentraccedilatildeo causam elongaccedilatildeo celular e expansatildeo ou
divisatildeo celular Em geral com o uso de baixas
concentraccedilotildees de auxinas predomina a formaccedilatildeo de raiacutezes
adventiacutecias enquanto que altas concentraccedilotildees induzem a
formaccedilatildeo de calos A interaccedilatildeo entre auxinas e citocininas
tambeacutem eacute muito utilizada para a induccedilatildeo de calogecircnese
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998)
Durante a calogecircnese eacute importante estabelecer-se
a curva de crescimento de calos o que propicia a
identificaccedilatildeo das fases distintas de crescimento da espeacutecie
A partir deste estudo pocircde-se determinar o momento exato
de repicagem dos calos para um meio fresco ou a
CASTRO A H F et al100
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
possibilidade de sua utilizaccedilatildeo em suspensotildees celulares
visando a otimizaccedilatildeo da produccedilatildeo de metaboacutelitos
secundaacuterios em espeacutecies medicinais (GEORGE 1996) O
crescimento in vitro de calos geralmente apresenta um
padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas Segundo Smith
(1992) a fase lag se caracteriza como fase de maior produccedilatildeo
de energia correspondendo ao periacuteodo em que as ceacutelulas
se preparam para a divisatildeo visando sua expansatildeo Ocorre o
iniacutecio da mobilizaccedilatildeo de metaboacutelitos primaacuterios sem qualquer
divisatildeo celular siacutentese de proteiacutenas e de compostos
especiacuteficos Essa fase resulta em um pequeno crescimento
dos calos A fase exponencial eacute biossinteacutetica Observa-se o
maior crescimento dos calos devido agrave maacutexima taxa de divisatildeo
celular caracteriacutestica desse periacuteodo O nuacutemero de ceacutelulas
aumenta Na fase linear haacute diminuiccedilatildeo da divisatildeo celular
mas aumento de volume celular e a fase de desaceleraccedilatildeo eacute
o momento em que as culturas devem ser transferidas para
outro meio devido agrave reduccedilatildeo de nutrientes produccedilatildeo de
produtos toacutexicos secagem do aacutegar e reduccedilatildeo do oxigecircnio
no interior das ceacutelulas Na fase estacionaacuteria ocorre maior
acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
O barbatimatildeo [Stryphnodendron adstringens
(Mart) Coville Fabaceae-Mimosoideae) eacute uma importante
espeacutecie medicinal do cerrado com altos teores de
compostos polifenoacutelicos em especial os taninos Possui
grande distribuiccedilatildeo e importacircncia econocircmica para o estado
de Minas Gerais sendo empregado como adstringente e
cicatrizante no combate de amidalite faringite
hemorroacuteidas leucorreacuteias erupccedilotildees cutacircneas diarreacuteias e
como agentes antiinflamatoacuterios (LIMA et al 1998)
A fenilalanina amocircnia-liase (EC 4315) eacute uma
enzima-chave e regulatoacuteria da rota biossinteacutetica dos
fenilpropanoacuteides e de seus derivados e catalisa a
desaminaccedilatildeo do aminoaacutecido L-fenilalanina em aacutecido trans-
cinacircmico sendo esse o primeiro passo para a biossiacutentese
dos fenoacutelicos vegetais (ASSIS et al 2001) De acordo com
Rivero et al (2001) os niacuteveis dessa enzima podem flutuar
significativamente em intervalos relativamente curtos em
resposta a uma ampla variedade de estiacutemulos como o
fotoperiacuteodo fitocromo mudanccedilas de temperatura radiaccedilatildeo
UV deficiecircncia de nutrientes reguladores de crescimento
virais e ataque de insetos bem como o estaacutedio de
desenvolvimento vegetal e o grau de diferenciaccedilatildeo de
ceacutelulas e tecidos (SOLECKA amp KACPERSKA 1995)
Devido agrave exploraccedilatildeo irracional pelas induacutestrias de
curtimento do couro o barbatimatildeo encontra-se ameaccedilado
de extinccedilatildeo Assim devem-se melhorar as teacutecnicas de
propagaccedilatildeo encorajar seu cultivo e criar vias alternativas
para a produccedilatildeo de tanino em larga escala a partir de
fontes naturais
Objetivou-se estabelecer a curva de crescimento e
avaliar a atividade da fenilalananina amocircnia-liase e os teores
de fenoacuteis e taninos totais em calos de barbatimatildeo
MATERIAL E MEacuteTODOS
As etapas experimentais foram realizadas entre
fevereiro de 2007 e janeiro de 2008 no Centro Universitaacuterio
de Lavras (UNILAVRAS) e na Universidade Federal de
Lavras (UFLA)
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento foi obtida a partir da
inoculaccedilatildeo de segmentos foliares de 025 cm2 de aacuterea
empregados como explantes em meio MS (MURASHIGE
amp SKOOG 1962) suplementado com 30 g L-1 sacarose e
acrescidos de 905 M de 24-D Os meios foram
solidificados com aacutegar na proporccedilatildeo de 7 g L-1 e o pH
ajustado para 57 plusmn 01 antes da autoclavagem por 20 min
Apoacutes inoculaccedilatildeo os explantes foram transferidos para sala
de crescimento onde foram incubados na presenccedila de luz
agrave temperatura de 27 plusmn 1 oC fotoperiacuteodo de 16 horas e
DFFFA= 25 mol m-2 s-1
Foram feitas pesagens do material inoculado fresco
a partir do dia da inoculaccedilatildeo (tempo 0) ateacute ser atingida a
fase de desaceleraccedilatildeo em intervalos de 10 dias O
porcentual de crescimento dos calos foi determinado pela
equaccedilatildeo proposta por Lameira (1997)
crescimento = Pf Pi
Pf
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 101
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
onde
Pf = Mateacuteria seca final
Pi = Mateacuteria seca inicial
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado sendo cada pesagem composta
por duas repeticcedilotildees e cada repeticcedilatildeo pela meacutedia de 10
tubos cada tubo contendo um explante Os dados obtidos
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia e analisados
estatisticamente utilizando-se o Sistema de Anaacutelise de
Variacircncia para Dados Balanceados (FERREIRA 2000)
Determinaccedilotildees da atividade da fenilalanina amocircnia-liasee teores de fenoacuteis e taninos totais
Calos obtidos na curva de crescimento foram
imersos em nitrogecircnio liacutequido e posteriormente
armazenados em Freezer Forma Scientific a -86 oC ateacute o
momento de serem utilizados na determinaccedilatildeo da atividade
enzimaacutetica Outros calos assim como aqueles obtidos no
experimento com a sacarose foram liofilizados para
determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis e taninos totais
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase
O procedimento descrito por Cheng amp Breen (1991)
com algumas modificaccedilotildees foi utilizado para extraccedilatildeo e
determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica
Calos congelados (5 g) foram triturados
homogeneizadas com acetona 80 e congelados por 15
minutos O homogenato foi filtrado e o pelet foi seco atraveacutes
de vaacutecuo
O extrato proteacuteico foi obtido homogeneizando-se
05 g do pelet seco em 5 mL de tampatildeo borato de soacutedio 01
M pH= 88 contendo 5 mM de -mercaptoetanol 2 mM
de EDTA e 4 (pv) de PVP a 4oC Depois de 1h o
homogenato foi centrifugado a 27000 g por 30 minutos a
4 oC A mistura de reaccedilatildeo foi constituiacuteda por 05 mL de L-
fenilalanina 30 M 30 mM de tampatildeo borato de soacutedio pH=
88 e 1 mL de extrato cru num volume total de 3 mL O
substrato foi adicionado apoacutes 10 minutos de preacute-incubaccedilatildeo
e a reaccedilatildeo foi interrompida com 01 mL de HCl 6 N A
atividade da fenilalanina amocircnia-liase foi determinada pela
produccedilatildeo de cinamato apoacutes 90 minutos agrave 30 oC sob
agitaccedilatildeo contiacutenua medida pela variaccedilatildeo da absorbacircncia a
290 nm A atividade especiacutefica da enzima foi definida em
nmol de aacutecido cinacircmicohmg de proteiacutena
Fenoacuteis totais
Amostras de calos liofilizados foram trituradas em
micromoinho e armazenadas em frascos fechados
protegidos da luz
Aproximadamente 500 mg de calos liofilizados e
triturados foram extraiacutedos cinco vezes com 5 mL de uma
mistura de metanolaacutegua (11) sob refluxo O volume final
do extrato foi completado para 25 mL
Uma aliacutequota de 100 L do extrato foi utilizada para
a determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis totais atraveacutes do
meacutetodo de Folin-Dennis segundo as normas da AOAC
(1970) As determinaccedilotildees foram feitas em triplicata e o
resultado foi expresso em porcentagem de aacutecido tacircnico
por grama de calo seco
Taninos Totais
A determinaccedilatildeo dos teores de taninos totais foi
realizada atraveacutes do Meacutetodo de Difusatildeo Radial de acordo
com Hagerman (1987)
Um volume de 5 mL do extrato foi concentrado a 37oC e posteriormente retomado com 05 mL de uma mistura
de metanolaacutegua (11) Uma aliacutequota de 15 mL foi utilizada
para a determinaccedilatildeo Todas as determinaccedilotildees foram feitas
em triplicata O resultado foi expresso em percentagem de
tanino por grama de calo seco
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento dos calos seguiu o padratildeo
sigmoidal apresentando cinco fases distintas lag
exponencial linear desaceleraccedilatildeo e estacionaacuteria (Figura
1) A fase lag onde as ceacutelulas do explante se preparam para
a divisatildeo celular e produccedilatildeo de energia ocorreu ateacute o 30o
dia apoacutes a inoculaccedilatildeo com calos apresentando um
crescimento de aproximadamente 73 A segunda fase
exponencial estendeu-se do 31o
ao 50o
dia de cultivo
com 70 de crescimento periacuteodo esse caracterizado pela
CASTRO A H F et al102
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
maacutexima divisatildeo celular A fase linear ocorreu entre o 51o ao
70o
dia e natildeo se verificou crescimento dos calos nesse
periacuteodo Entre o 71o
e 100o
dia observou-se a fase de
desaceleraccedilatildeo com 28 de crescimento e a partir do 101o
dia a cultura entrou na fase estacionaacuteria Segundo Smith
(1992) na fase de desaceleraccedilatildeo os calos devem ser
transferidos para um novo meio de cultura devido agrave
reduccedilatildeo de nutrientes secagem do aacutegar e acuacutemulo de
substacircncias toacutexicas
FIGURA 1 Curva de crescimento de calos deStryphnodendron adstringens obtidos a partir de segmentosfoliares inoculados em meio MS contendo 905 M de 24-D e 30 g L-1 de sacarose
0
002
004
006
008
01
012
014
016
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Mat
eacuteria
sec
a (g
)
De maneira semelhante essa mesma curva de
crescimento pode ser dividida em trecircs fases fase de
crescimento lento (do dia da inoculaccedilatildeo ateacute o 30o dia) fase
de crescimento ativo (do 31o
ao 70o
dia) e fase de
estabilizaccedilatildeo (71o
dia em diante) sendo indicada a
repicagem entre o 71o ao 100o dia
A curva de crescimento para calos de
barbatimatildeo apresentou um padratildeo semelhante ao de outras
espeacutecies medicinais de cerrado como Byrsonima
intermeacutedia A Juss (NOGUEIRA et al 2008) Croton
(BONILLA 2002) e Derris sp (CONCEICcedilAtildeO 2000)
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteise taninos totais
Na figura 2 encontram-se representados os
resultados da atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase
e dos teores de fenoacuteis totais verificados durante o periacuteodo
experimental O explante inicial apresentou um teor meacutedio
de 065 de taninos totais natildeo se detectando entretanto
a presenccedila de taninos nos demais calos formados
Conforme pode-se observar a atividade da
fenilalanina amocircnia-liase situou-se entre 016 e 196 mol
de aacutecido cinacircmico h-1 g-1 de mateacuteria fresca (plt005) (figura
2A) A atividade apresentou-se maacutexima no explante inicial
(dia 0) e reduziu progressivamente ateacute o 70o dia periacuteodo
esse correspondente agraves fases lag exponencial e linear
Entre o 71o ao 100o dia ou seja na fase de desaceleraccedilatildeo a
atividade enzimaacutetica indicou uma tendecircncia em se manter
constante e a partir do 101o dia (fase estacionaacuteria) verificou-
se um pequeno incremento nessa atividade da ordem de
26 De maneira semelhante os teores meacutedios de fenoacuteis
totais acompanharam as variaccedilotildees observadas para a
atividade enzimaacutetica e situaram-se em uma faixa de 029 a
399 sendo o teor meacutedio maacuteximo observado no explante
inicial (figura 2B) Os teores de fenoacuteis totais reduziram
significativamente ateacute o 60o dia (fase lag e exponencial) e a
partir do 61o
ao 90o
dia permaneceram praticamente
constantes com os menores niacuteveis observados durante o
periacuteodo experimental em torno de 037 em meacutedia A partir
da fase estacionaacuteria (100o dia) verificou-se um aumento de
65 nos teores meacutedios de fenoacuteis totais
Estes resultados mostraram-se muito interessantes
do ponto de vista fisioloacutegico e fitoquiacutemico e corroboram
com relatos de Conceiccedilatildeo (2000) e Lameira (1997) os quais
citam que a fase estacionaacuteria corresponde ao periacuteodo em
que ocorre maior acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
Apesar de esses teores serem baixos eacute importante ressaltar
que o meio de cultura pode ser otimizado para produccedilatildeo
em larga escala de fenoacuteis totais e taninos uma vez que
foram obtidos in vitro a partir de segmentos foliares e de
forma convencional satildeo extraiacutedos da casca da planta adulta
cultivada in vivo
A presenccedila de baixos teores de fenoacuteis e a ausecircncia
de taninos pode estar associada agrave alta atividade metaboacutelica
relacionada ao crescimento dos calos (mitose) o que
demanda elevada quantidade de substrato necessaacuterio agrave
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 103
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
FIGURA 2 Valores meacutedios de atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase (A) e teores de fenoacuteis totais (B) emStryphnodendron adstringens durante o periacuteodo experimental
0
05
1
15
2
25
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Ativ
idad
e da
Fen
ilala
nina
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mm
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e aacutec
cin
acircmic
o h-1
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A
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120Dias
Fenoacute
is T
otai
s (
)
B
produccedilatildeo de energia Segundo Botta et al (2001) a
diferenciaccedilatildeo celular assim como a desaceleraccedilatildeo da
atividade mitoacutetica progressivamente permite o acuacutemulo de
compostos derivados do metabolismo secundaacuterio Para
Lavola et al (2000) e Pentildeuelas et al (1997) variaccedilotildees nos
teores de metaboacutelitos secundaacuterios natildeo podem ser explicadas
somente pelas diferenccedilas na disponibilidade de carboidratos
devendo-se considerar tambeacutem a disponibilidade de
precursores para a sua siacutentese e as mudanccedilas nos padrotildees
de siacutentese e catabolismo desses compostos
CONCLUSOtildeES
A curva de crescimento para calos de barbatimatildeo
apresentou um padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas
sendo indicada a repicagem entre o 71o ao 100o dia
Alta atividade e maiores teores de fenoacuteis totais
foram observados no explante inicial com reduccedilotildees
progressivas ateacute a fase linear Na fase estacionaacuteria
observaram-se incrementos importantes na atividade da
fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais
Natildeo se detectou a presenccedila de taninos totais nos
calos durante a determinaccedilatildeo da curva de crescimento na
presenccedila de 904 M de 24-D
AGRADECIMENTOS
Agrave Fundaccedilatildeo de Amparo agrave Pesquisa do Estado de
Minas Gerais (FAPEMIG) pelo suporte financeiro ao
projeto e concessatildeo de bolsa de iniciaccedilatildeo cientiacutefica
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
(Recebido em 14 de fevereiro de 2007 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EMBRIOGEcircNESE SOMAacuteTICA DIRETA DE Coffea arabica LCONCENTRACcedilOtildeES DE NH4NO3 E DE KNO3 NO
DESENVOLVIMENTO DE EMBRIOtildeES1
DIRECT SOMATIC EMBRYOGENESIS OF Coffea arabica L CONCENTRATIONS OFNH4NO3 AND KNO3 ON THE DEVELOPMENT OF EMBRYOS
JULIANA COSTA DE REZENDE2 MOACIR PASQUAL3 SAMUEL PEREIRA DE CARVALHO3ESTER ALICE FERREIRA4 FLAVIA CARVALHO SANTOS5
1Artigo extraiacutedo da dissertaccedilatildeo de mestrado da primeira autora apresentada a Universidade Federal de LavrasUFLA2Pesquisadora MSc Epamig Campus da UFLA Cx P 176 372000-000 Lavras MG julianacostaepamigbr3Professor Dr Titular do Departamento de AgriculturaDAG Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 372000-000
Lavras MG pasqualuflabr samuelpcuflabr4Pesquisadora Dra Epamig Cx P 351 Uberaba MG esterepamigbr5Doutoranda em Fitotecnia Bolsista Capes flavinha3010yahoocombr
RESUMOO melhoramento geneacutetico do cafeeiro tem incorporado
atraveacutes de cruzamentos ganhos geneacuteticos para produtividade eoutras caracteriacutesticas de interesse agronocircmico A introduccedilatildeo demeacutetodos biotecnoloacutegicos para auxiliar os programas demelhoramento geneacutetico tem-se mostrado bastante uacutetilprincipalmente em culturas perenes como eacute o caso do cafeeiroUm importante meacutetodo de propagaccedilatildeo in vitro de plantas deCoffea eacute a embriogecircnese somaacutetica direta Objetivou-se com estetrabalho avaliar os efeitos de diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3 no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos
diretos de C arabica L cv Rubi Os tratamentos foramconstituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH
4NO
3 (0 4125 825
12375 e 1650 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3 (0 475
950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS O experimentofoi mantido por 150 dias em sala de crescimento com irradiacircnciaem torno de 32 igraveM m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas comtemperatura de 25 plusmn 1oC As variaacuteveis avaliadas foram nuacutemero defolhas comprimento da parte aeacuterea e massa fresca da parte aeacutereaOs resultados indicaram que a utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO
3combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de NH
4NO
3 como a mais
indicada para o desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos de Carabica L Os resultados apontam ainda que a ausecircncia denitrogecircnio promove o maior peso das placircntulas
Termos para indexaccedilatildeo Nitrogecircnio cafeacute cv Rubi Coffeaarabica
ABSTRACTCoffee breeding programs have incorporated using
artificial crossings genetic benefits for productivity and othercharacteristics of agronomic interest The introduction ofbiotechnology methods to improve genetic breeding programshas demonstrated to be useful mainly in perennial cultures ascoffee species An important method of in vitro propagation ofCoffea plants is somatic embryogenesis Therefore the objectiveof this work was to obtain the most adequate combinations ofculture medium components for plantlets growth The influence
of NH4NO
3 (0 4125 825 12375 and 1650 mg L-sup1) of MS
formulation x KNO3
(0 475 950 1425 and 1900 mg L-sup1) MSformulation were tested for the development of somatic embryosThe experiments were maintained in a growth room under lightintensity of 32 microMol m-2 s-1 photoperiods of 16 hours andtemperature of 25 plusmn 1o C The characteristics evaluated were leafnumber shoot length and shoot fresh matter The results indicatedthat the use of 950 mgL-sup1 KNO
3 combined with 1155 to 2475
mg L-sup1 NH4NO
3 is the most indicated for the development of
somatic embryos of C arabica L The absence of nitrogenpromotes the largest weight of plantlets
Index Terms Nitrogen Coffee cv Rubi Coffea arabica
INTRODUCcedilAtildeO
O nitrogecircnio eacute um dos elementos necessaacuterios e
ativos para diversos processos metaboacutelicos da planta pois
eacute constituinte de vaacuterias biomoleacuteculas essenciais tais como
aminoaacutecidos aacutecidos nucleacuteicos enzimas e proteiacutenas e
juntamente com a sacarose eacute o principal componente em
quantidade no meio de cultura
O nitrogecircnio difere dos demais macronutrientes por
apresentar-se na forma de caacutetion (amocircnio) e acircnion (nitrito
e nitrato) contribuindo de forma efetiva tanto no
metabolismo celular como na regulaccedilatildeo do seu potencial
osmoacutetico Atua como agente tamponante e favorece a
absorccedilatildeo de outros iacuteons presentes no meio (NAGAO et
al 1994) A vantagem dos tecidos vegetais receberem pelo
menos parte do nitrogecircnio sob uma forma prontamente
reduzida eacute que haveria uma diminuiccedilatildeo no gasto de energia
REZENDE J C de et al106
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
que ocorre na conversatildeo enzimaacutetica de nitrato a amocircnio
(GEORGE et al 1987) O efeito dessas diferentes formas
inorgacircnicas separadamente pode promover ou natildeo o
crescimento e desenvolvimento de determinadas espeacutecies
de plantas enquanto a combinaccedilatildeo das duas estimula o
crescimento de muitas espeacutecies in vitro (CALDAS et al
1998)
De acordo com George amp Sherrington (1984) o
desenvolvimento e morfogecircnese em cultura de tecidos satildeo
acentuadamente influenciados pela disponibilidade de
nitrogecircnio e pela forma como o mesmo eacute fornecido Alta
concentraccedilatildeo de sais do meio MS comparada a outros
meios especificamente dos niacuteveis de amocircnio (-NH4) e
nitrato (-NO3) pode ser criacutetica no processo de morfogecircnese
e crescimento (SAKUTA amp KOMAMINE 1987) estando
pois a demanda energeacutetica fornecida pelo metabolismo de
carboidratos e a assimilaccedilatildeo destes iacuteons diretamente
relacionada com o sucesso da cultura in vitro
Sato (1994) estudou o efeito de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio sobre a propagaccedilatildeo de trecircs
diferentes clones de geacuterbera de vaso (Gerbera jamesonii
Adlam) e concluiu que a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio do
MS completo inibe a regeneraccedilatildeo de brotos enquanto a
utilizaccedilatildeo de concentraccedilotildees diluiacutedas favorece a induccedilatildeo
dos brotos Bespalhok et al (1992) estudaram a
concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia na induccedilatildeo de brotos
em estevia (Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni) e
constataram que a concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia do
MS eacute toacutexica Obteve maior induccedilatildeo de brotaccedilotildees usando
frac14 de nitrato de amocircnia no meio MS Por outro lado Tadesse
et al (2000) verificaram que a accedilatildeo de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio promoveu um incremento
inicial da aacuterea foliar das placircntulas formadas mas ocasionou
efeitos relativamente negativos no aumento da aacuterea foliar
das placircntulas durante a aclimatizaccedilatildeo
O nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio sustenta
boa taxa de crescimento em algumas culturas como roseira
(Rosa gallica L) (NASH amp DAVIES 1972) e trigo (Triticum
que natildeo crescem bem com o nitrato no meio como por
exemplo o arroz (Oriza sativa L) (SARGENT amp KING 1974
YATAZAWA amp FURUHASHI 1968)
Grewal et al (1980) citados por Grattapaglia amp
Machado (1990) verificaram em culturas de eucalipto
(Eucaliptus citriodora Hook) que ao se reduzir pela
metade as concentraccedilotildees de nitrato de amocircnio e de
potaacutessio do meio MS a taxa de multiplicaccedilatildeo dobrava
Essa mesma concentraccedilatildeo proporcionou o melhor
comprimento da parte aeacuterea em embriotildees zigoacuteticos de C
arabica L (RIBEIRO 2001)
A maioria das plantas prioriza a absorccedilatildeo de NH4
+ a
NO3
- poreacutem eacute necessaacuterio encontrar o balanccedilo ideal de
NH4+NO
3- para o oacutetimo crescimento in vitro (SATO 1994)
Objetivou-se com este trabalho estudar os efeitos de
diferentes concentraccedilotildees de NH4NO
3 e KNO
3 do meio MS
no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos diretos de C
arabica L cv Rubi
MATERIAL E MEacuteTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos Vegetais do Departamento de
Agricultura da Universidade Federal de Lavras MG Foram
utilizados como explantes embriotildees de C arabica cv
Rubi provenientes da embriogecircnese somaacutetica direta Os
embriotildees somaacuteticos foram induzidos em meio MS
(MURASHIGE amp SKOOG 1962) com 50 dos sais
acrescido de 20 mg L-1 de GA3 6 mg L-1 de cinetina 8 mg
L-1 de ANA 100mg L-1 de caseiacutena hidrolisada e 400mg L-
1 de extrato de malte Os tubos de ensaio foram mantidos
durante 150 dias sob condiccedilotildees de obscuridade com
temperatura de 25 plusmn 1oC Os embriotildees somaacuteticos induzidos
nesse processo foram individualizados em tubos de
ensaio e mantidos durante 30 dias em meio MS
objetivando a homogeneizaccedilatildeo do material para a
realizaccedilatildeo deste experimento
No preparo do meio foram utilizadas soluccedilotildees-
estoque armazenadas em frascos de vidro escuro a
temperaturas em torno de 5degC Os tratamentos foram
constituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH4NO
3 (0 475
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 107
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
950 1425 e 1900 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3
(0 475 950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS
O meio foi solidificado com 5g L -1 de aacutegar e o pH
ajustado para 58 plusmn 01 utilizando NaOH 05 e 01 N ou HCl
05 N e 01 N e distribuiacutedo em tubos de ensaio cada um
recebendo 15 mL do mesmo Os tubos foram vedados com
tampas plaacutesticas transluacutecidas antes do processo de
autoclavagem a 121degC e 1 atm por 20 minutos Apoacutes o
resfriamento o meio foi levado agrave cacircmara de fluxo laminar
desinfestada com aacutelcool 70 (etanol) onde foi feita a
inoculaccedilatildeo dos explantes
Os tubos foram vedados com parafilme e mantidos
em sala de crescimento com irradiacircncia em torno de 32 igraveM
m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas com temperatura de 25 plusmn
1oC O delineamento experimental utilizado foi inteiramente
casualizado com quatro repeticcedilotildees e trecircs tubos por
parcela cada tubo contendo um explante
Aos 150 dias apoacutes a instalaccedilatildeo foram avaliadas as
variaacuteveis nuacutemero de folhas comprimento da parte aeacuterea e
peso da mateacuteria fresca das placircntulas Os valores observados
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia para dados
desbalanceados Utilizou-se o procedimento GLM
disponiacutevel no aplicativo computacional SASreg (SAS
INSTITUTE 1990)
Em situaccedilotildees em que a anaacutelise de variacircncia natildeo
confirmou a normalidade dos resiacuteduos para o comprimento
da parte aeacuterea e peso da mateacuteria fresca os dados sofreram
uma transformaccedilatildeo para garantir que essa pressuposiccedilatildeo
fosse atendida As transformaccedilotildees utilizadas foram x e5 1 02x respectivamente A variaacutevel nuacutemero de folhas
atendeu agraves pressuposiccedilotildees de normalidade A anaacutelise de
variacircncia do peso da mateacuteria fresca foi realizada por meio
do meacutetodo dos quadrados miacutenimos ponderados pelo
inverso das variacircncias de cada tratamento uma vez que
esses apresentaram heterogeneidade de variacircncias
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Houve efeito significativo das concentraccedilotildees de
NH4NO
3 e KNO
3 para o nuacutemero de folhas e peso da mateacuteria
fresca das placircntulas (Tabela 1) Observa-se que a interaccedilatildeo
entre os fatores mostrou-se significativa em relaccedilatildeo a todas
as caracteriacutesticas avaliadas a 5 de probabilidade pelo
teste F
Nuacutemero de folhas
Analisando-se as curvas de regressatildeo observa-
se na Figura 1 que houve formaccedilatildeo de maior nuacutemero
de folhas quando foram adicionados ao meio de cultura
1900 mg L-sup1 de KNO3
combinado com 12985 mg L-sup1 de
NH4NO
3 (meacutedia de 1163 folhas) Com a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 87879 mg L-sup1 de NH
4NO
3
pocircde-se observar a formaccedilatildeo meacutedia de 1001 folhas
Dessa forma como a diferenccedila eacute miacutenima justifica-se a
utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 com o objetivo de
reduccedilatildeo dos custos
TABELA 1 Anaacutelise de variacircncia dos dados relativos ao nuacutemero de folhas (NF) comprimento da parte aeacuterea (CPA) epeso da mateacuteria fresca (PMF) das placircntulas de Coffea arabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3
QM Fonte de variaccedilatildeo GL
NF CPA (cm) PMF (g)
NH4NO3 4 458337 01152 17450
KNO3 4 230014 00837 22117
NH4NO3 x KNO3 16 20447 01215 15139
Erro 135 91386 00584 05871
CV () 5162 2357 912
Significativo a 5 pelo teste F
REZENDE J C de et al108
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
FIGURA 1 Nuacutemero folhas de placircntulas de Coffea arabicacv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 combinadas com 0950 e 1900 mg L-sup1 de KNO
3
Contudo concentraccedilotildees acima de 87879 mg L-sup1 de
NH4NO
3 combinadas com 950 mg L-sup1 de NH
4NO
3 ou na
ausecircncia desse provocaram reduccedilatildeo no nuacutemero de folhas
possivelmente por toxidez causada pelo amocircnio devido agrave
sua concentraccedilatildeo mais elevada em relaccedilatildeo ao nitrato no
meio de cultura Quando o nitrogecircnio eacute fornecido somente
na forma de sais inorgacircnicos de amocircnio as ceacutelulas in vitro
apresentam sintomas de toxidez (GAMBORG amp SHYLUK
1970 YATAZAWA amp FURUHASHI 1968) demonstrando
assim a necessidade de combinaccedilatildeo dessas duas fontes
no meio de cultura
Segundo Raab amp Terry (1994) em virtude do grande
requerimento de energia fotoquiacutemica para a reduccedilatildeo
bioquiacutemica do nitrato era de se esperar que as plantas
crescessem melhor em meios com amocircnia do que em meios
com nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio no entanto
observou-se o inverso Esses mesmos autores apontam
como causa desse paradoxo o efluxo de iacuteons H+ que ocorre
devido agrave absorccedilatildeo do iacuteon amocircnio provocando acidificaccedilatildeo
do meio impedindo a absorccedilatildeo de nutrientes Segundo
Hashimoto et al (1992) a presenccedila de amocircnio in vitro
poderia acidificar o meio favorecendo a siacutentese de
carbamatos e tambeacutem a atividade de anidrase carbocircnica
Esses autores conseguiram diminuir o efeito toacutexico do
amocircnio apenas diminuindo a concentraccedilatildeo de nitrato de
amocircnio no meio MS
O nuacutemero de folhas obtidas na ausecircncia de KNO3
foi inferior quando comparado aos demais tratamentos (a
maior meacutedia observada foi 658 folhas na concentraccedilatildeo de
37626 mg L-sup1 de NH4NO
3) evidenciando assim a
importacircncia desse sal para o desenvolvimento de folhas
em placircntulas de C arabica cv Rubi Os resultados obtidos
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 109
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
concordam em parte com os obtidos por Ribeiro (2001)
trabalhando com embriotildees zigoacuteticos de C arabica que
recomenda a adiccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de NH4NO
3 e KNO
3 no
meio de cultura para comprimento da parte aeacuterea
Observa-se ainda que utilizando-se a concentraccedilatildeo
de 1425 mg L-sup1 de KNO3 haacute reduccedilatildeo no comprimento da
parte aeacuterea das placircntulas ateacute a concentraccedilatildeo de 42091 mg
L-sup1 de NH4NO
3 havendo a partir desse ponto incremento
no desenvolvimento da variaacutevel ateacute a concentraccedilatildeo de
149131 mg L-sup1 de KNO3 (132 cm dados transformados)
Esses resultados demonstram que as respostas de
interaccedilatildeo entre fontes de nitrogecircnio variam em funccedilatildeo das
concentraccedilotildees utilizadas
Na ausecircncia de NH4NO
3 em ambas as
concentraccedilotildees estudadas o comprimento da parte aeacuterea
foi inferior (09 e 097 cm respectivamente nas
concentraccedilotildees de 950 e 1425 mg L-sup1 de KNO3) evidenciando
mais uma vez a importacircncia desse sal no desenvolvimento
de embriotildees em C arabica cv Rubi
Peso da mateacuteria fresca
FIGURA 3
Peso da mateacuteria fresca de placircntulas de Carabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildeesde NH
4NO
3 combinadas com 0950 mg L-sup1 de KNO
3
6
65
7
75
8
85
9
95
10
105
0 4125 825 12375 1650NH4NO3 (mg L-1)
Peso
da
mat
eacuteria
fre
sca
(g)
Y KNO3 475 Y KNO3 1425 Y KNO3 1900 = ns Y KNO3 0 = 968811 - 006491X + 000061019X2 R2 = 09017 Y KNO3 950 = 800708 + 002278X 000022883X2 R2 =09053
Na ausecircncia de KNO3 houve decreacutescimo do peso
da mateacuteria fresca associado ao incremento das
concentraccedilotildees de NH4NO
3 ateacute a concentraccedilatildeo de 91775
mg L-sup1 de NH4NO
3 (Figura 3) observando-se aumento do
peso da mateacuteria fresca a partir deste ponto Para a
concentraccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 ocorreu aumento do
peso da mateacuteria fresca ateacute a concentraccedilatildeo de 100221 mg L-
sup1 de NH4NO
3 Poreacutem o maior valor foi registrado na
ausecircncia de ambos os sais estudados (976 g)
Da mesma forma Grossi (2000) trabalhando com
bromeacutelia observou que a menor concentraccedilatildeo de
nitrogecircnio promoveu maior produccedilatildeo de massa fresca
Kanashiro et al (2007) observou decreacutescimo linear na
massa fresca de folhas de bromeacutelia agrave medida que se
aumentou a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio (entre 75 e 120
mM) sendo que para cada mM de nitrogecircnio acrescido ao
meio houve um decreacutescimo de 00018 g na massa fresca
Provavelmente o cultivo em concentraccedilotildees maiores de
nitrogecircnio tenderia a diminuir a produccedilatildeo de massa fresca
como foi observado no presente experimento
CONCLUSOtildeES
Com base no crescimento da parte aeacuterea e na
formaccedilatildeo do maior nuacutemero de folhas a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de
NH4NO
3 eacute mais indicada para o desenvolvimento de
embriotildees somaacuteticos de Coffea arabica L Os resultados
indicam ainda que a ausecircncia de nitrogecircnio promove o
maior peso das placircntulas
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NORMAS PARA PUBLICACcedilAtildeO DE ARTIGOS E COMUNICACcedilOtildeES CIENTIacuteFICAS
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagationeacute editada semestralmente pela Editora da UniversidadeFederal de Lavras (Editora UFLA) publica artigoscientiacuteficos e comunicaccedilotildees cientiacuteficas da aacuterea de culturade tecidos de plantas elaborados por membros dacomunidade cientiacutefica nacional e internacional Natildeo eacutecobrada taxa para publicaccedilatildeo de trabalhos desde que umdos autores seja soacutecio e esteja em dia com a ABCTP(Associaccedilatildeo de Cultura de Cultura de Tecidos de Plantas)Eacute condiccedilatildeo fundamental que os artigoscomunicaccedilotildeessubmetidos agrave apreciaccedilatildeo da revista Plant Cell Culture ampMicropropagation natildeo foram e nem seratildeo publicadossimultaneamente em outro lugar Com a aceitaccedilatildeo do artigopara publicaccedilatildeo os editores adquirem amplos e exclusivosdireitos sobre o artigo para todas as liacutenguas e paiacuteses Apublicaccedilatildeo de artigoscomunicaccedilotildees dependeraacute daobservacircncia das Normas Editoriais dos pareceres do CorpoEditorial e da Comissatildeo ad hoc Todos os pareceres tecircmcaraacuteter sigiloso e imparcial e tanto os autores quanto osmembros do Corpo Editorial eou Comissatildeo ad hoc natildeoobtecircm informaccedilotildees identificadoras entre si
Os conceitos e afirmaccedilotildees contidos nos artigos ecomunicaccedilotildees seratildeo de inteira responsabilidade do(s)autor(es)
1 SUBMISSAtildeO
Cada trabalho deveraacute ter no maacuteximo 14 paacuteginas ejunto do mesmo deveraacute ser encaminhado ofiacutecio dirigido aoEditor Chefe da revista solicitando a publicaccedilatildeo do artigo
Esse ofiacutecio deveraacute conter o pedido de apreciaccedilatildeona revista ao editor chefe a declaraccedilatildeo de ser um trabalhooriginal e natildeo ter sido submetido a nenhuma outra revistaser assinado por todos os autores constar o endereccedilocompleto telefone e e-mail de todos Qualquer inclusatildeoexclusatildeo ou alteraccedilatildeo na ordem dos autores deveraacute sernotificada mediante ofiacutecio assinado por todos os autores(inclusive do autor excluiacutedo)
Originais quatro vias impressas e uma via em CDR comtexto e ilustraccedilotildees e graacuteficos Das 4 vias impressas apenas1 deve conter os nomes completos dos autores e rodapeacutena primeira paacuteginaProcessador de texto Word for Windows (version 98 2000XP ou 2003)Redigido em portuguecircs inglecircs ou espanholEspaccedilamento do texto Duplo Margens esquerda (3cm)direita (2cm) inferior e superiores (25cm) Cabeccedilalho eRodapeacute (25cm)Papel formato A4Fonte Times New Roman tamanho 12Nuacutemero de paacuteginas ateacute 14 paacuteginas numeradasconsecutivamente incluindo as ilustraccedilotildees
Tabelas devem fazer parte do corpo do artigo e serapresentadas no moacutedulo tabela do Word O tiacutetulo deveficar acimaGraacuteficos Figuras e Fotografias devem ser apresentadosem preto e branco niacutetidos e com contraste escaneadosinseridos no texto apoacutes a citaccedilatildeo dos mesmos e tambeacutemem um arquivo agrave parte salvos em extensatildeo tif ou jpg com resoluccedilatildeo de 300 dpi Os graacuteficos devem vir tambeacutemem excel com letra Times New Roman tamanho 10 semnegrito sem caixa de textos e agrupados em arquivo agraveparteSiacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitos emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker sem perda de suas formas originais
2 ESTRUTURA E ORGANIZACcedilAtildeO
21 O artigo cientiacutefico deve ser apresentado na seguintesequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfulas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumo
Index terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
INTRODUCcedilAtildeO
Deve apresentar uma visatildeo concisa do estado atualdo conhecimento sobre o assunto que o manuscritoaborda e enfatizar a relevacircncia do estudo sem constituir-se em extensa revisatildeo e na parte final os objetivos dapesquisa Deve incluir a revisatildeo de literatura
MATERIAL E MEacuteTODOS
Esta seccedilatildeo pode ser dividida em subtiacutetulosindicados em negrito
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Podem ser divididas em subseccedilotildees com subtiacutetulosconcisos e descritivos e conter tabelas e figuras
CONCLUSOtildeES
Finalizar com os resultados de acordo com osobjetivos do trabalho
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e naseccedilatildeo proacutepria
22 A comunicaccedilatildeo cientiacutefica deve ser apresentada naseguinte sequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfluas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumoIndex terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
Texto sem subdivisatildeo poreacutem com introduccedilatildeo material emeacutetodos resultados e discussatildeo (podendo conter tabelase graacuteficos e conclusatildeo subentendidas
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e na seccedilatildeoproacutepria
3 CASO O ARTIGO CONTENHA FOTOGRAFIASGRAacuteFICOS FIGURAS SIacuteMBOLOS E FOacuteRMULASESSAS DEVERAtildeO OBEDECER AgraveS SEGUINTESNORMAS
31 Fotografias deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpi
32 Figuras deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpiAs figuras deveratildeo ser elaboradas com letra Times NewRoman tamanho 10 sem negrito sem caixa de textos eagrupadas
33 Graacuteficos deveratildeo ser inseridos apoacutes citaccedilatildeo dosmesmos dentro do proacuteprio texto elaboradopreferencialmente em Excel com letra Times New Romantamanho 10 sem negrito sem caixa de textos e agrupadas
34 Siacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitas emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker (ex MathType Equation) sem perda de suasformas originais
OBS A formataccedilatildeo correta eacute parte imprescindiacutevel para queo trabalho seja devidamente protocolado Caso este natildeoesteja nas normas o mesmo seraacute recusado
4 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS as referecircnciasbibliograacuteficas devem ser citadas conforme a NBR60232002da ABNT
A exatidatildeo das referecircncias constantes da listagem e acorreta citaccedilatildeo no texto satildeo de responsabilidade do(s)autor(es) do artigo
41 Orientaccedilotildees gerais- Deve-se apresentar todos os autores do documentocientiacutefico (fonte)- O nome do perioacutedico deve ser descrito por extenso natildeodeve ser abreviado- Em todas as referecircncias deve-se apresentar o local depublicaccedilatildeo (cidade) a ser descrito no lugar adequado paracada tipo de documento- As referecircncias devem ser ordenadas alfabeticamente
42 Exemplificaccedilatildeo (tipos mais comuns)
ARTIGO DE PERIOacuteDICO
VIEIRA R F RESENDE M A V de Eacutepocas de plantio deervilha em Patos de Minas Uberaba e Janauacuteba MinasGerais Ciecircncia e Agrotecnologia Lavras v 24 n 1 p 74-80 janmar 2000
LIVRO
a) livro no todo
STEEL R G D TORRIE J H Principles andprocedures of statistics New York McGraw-Hill Bookl960 481 p
b) Parte de livro com autoria especiacutefica
FLEURY J A Anaacutelise ao niacutevel de empresa dos impactosda automaccedilatildeo sobre a organizaccedilatildeo da produccedilatildeo de trabalhoIn SOARES R M S M Gestatildeo da empresa Brasiacutelia IPEAIPLAN 1980 p 149-159
c) Parte de livro sem autoria especiacutefica
MARTIM L C T Nutriccedilatildeo de bovino de corte emconfinamento In ______ Confinamento de bovino decorte 2 ed Satildeo Paulo Nobel 1986 cap 3 p 29-89
DISSERTACcedilAtildeO E TESE
GONCcedilALVES R A Preservaccedilatildeo da qualidade tecnoloacutegicade trigo (Triticum aestivum L) e controle de Rhyzoperthadominica (F) durante o armazenamento em atmosferacontrolada com Co2 e N2 1997 52 f Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Ciecircncia dos Alimentos) Universidade Federal deLavras Lavras 1997
MATIOLI G P Influecircncia do leite proveniente de vacasmastiacuteticas no rendimento de queijo frescal 2000 55 pDissertaccedilatildeo (Mestrado em Ciecircncias dos Alimentos) -Universidade Federal de Lavras Lavras 2000
Nota A folha eacute composta de duas paacuteginas anverso everso Alguns trabalhos como teses e dissertaccedilotildees satildeoimpressos apenas no anverso e neste caso indica-se f(ABNT NBR60232002 p 18)
TRABALHOS DE CONGRESSO E OUTROS EVENTOS
SILVA J N M Possibilidades de produccedilatildeo sustentada demadeira em floresta densa de terra firme da Amazocircniabrasileira In CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO 61990 Campos do Jordatildeo Anais Campos do Jordatildeo SBSSBEF 1990 p 39-45
DOCUMENTOS ELETROcircNICOS
As obras consultadas online satildeo referenciadas conformenormas especiacuteficas para cada tipo de documento(monografia no todo e em parte trabalho apresentado emevento artigo de perioacutedico artigo de jornal etc)acrescidas de informaccedilotildees sobre o endereccedilo eletrocircnicoapresentado entre braquetes (lt gt) precedido da expressatildeo
Disponiacutevel em e da data de acesso ao documentoprecedida da expressatildeo Acesso em Nota Natildeo se recomenda referenciar material eletrocircnico decurta duraccedilatildeo nas redes (ABNT NBR60232000 p 4)Segundo padrotildees internacionais a divisatildeo de endereccediloeletrocircnico no fim da linha deve ocorrer sempre apoacutes barra ()
Monografia (acesso online)
a) livro no todo
TAKAHASHI T (Coord) Tecnologia em foco BrasiacuteliaSocinfoMCT 2000 90 p Disponiacutevel em lthttpwwwsocinfoorgbrgt Acesso em 22 ago 2000
b) parte de livro
TAKAHASHI T Mercado trabalho e oportunidades In______ Sociedade da informaccedilatildeo no Brasil livro verdeBrasiacutelia SocinfoMCT 2000 cap 2 p 13-24 Disponiacutevelem lthttpwwwsocinfogovbrgt Acesso em 22 ago 2000
c) Parte de congresso seminaacuterio etc
GIESBRECHT H O Avaliaccedilatildeo de desempenho deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica a experiecircncia deprojeto excelecircncia na pesquisa tecnoloacutegica InCONGRESSO ABIPTI 2000 Fortaleza Gestatildeo deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica Fortaleza Nutec 2000Disponiacutevel em lthttpwwwabiptiorgbrgt Acesso em01 dez 2000
d) Tese
SILVA E M Arbitrariedade do signo a liacutengua brasileirade sinais (LIBRAS) 1997 144 p Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Linguumliacutestica Aplicada e Estudo de Liacutengua) - PontifiacuteciaUniversidade Catoacutelica de Satildeo Paulo Satildeo Paulo 1997Disponiacutevel em lthttpwwwterracombrvirtualbooksfreebookportdid teseshtmgt Acesso em 28 nov 2000
Artigo de perioacutedico (acesso online)
RESENDE A M G Hipertexto tramas e trilhas de umconceito contemporacircneo Informaccedilatildeo e Sociedade Recifev 10 n 1 2000 Seccedilatildeo Educaccedilatildeo Disponiacutevel em lthttpwwwinformaccedilatildeoesociedadeufpbbrgt Acesso em 30 nov2000
CITACcedilAtildeO PELO SISTEMA ALFABEacuteTICO (AUTOR-DATA) (conforme ABNT NBR105202002)Dois autores - Steel amp Torrie (1960) ou (STEEL amp TORRIE1960)Trecircs ou mais autores - Valle et al (l945) ou (VALLE et al1945)Obs Quando forem citados dois autores de uma mesmaobra deve-se separaacute-los pelo sinal amp (comercial)
5 O EDITOR CHEFE NOTIFICARAacute O AUTOR DORECEBIMENTO DO ORIGINAL E POSTERIORMENTE
O INFORMARAacute SOBRE SUA PUBLICACcedilAtildeO OSARTIGOS QUE NECESSITAREM DE MODIFICACcedilOtildeESSERAtildeO DEVOLVIDOS AO AUTOR PARA A DEVIDAREVISAtildeO
6 OS ARTIGOS NAtildeO APROVADOS SERAtildeODEVOLVIDOS
7 OS ARTIGOS SERAtildeO PUBLICADOS EM ORDEMDE APROVACcedilAtildeO
8 O NAtildeO-CUMPRIMENTO DESSAS NORMASIMPLICARAacute NA DEVOLUCcedilAtildeO DO ARTIGO AOAUTOR
9 OS CASOS OMISSOS SERAtildeO RESOLVIDOS PELACOMISSAtildeO EDITORIAL
10 O ARTIGO DEVERAacute SER ENVIADO PARA
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepartamento de BiologiaSetor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 3037CEP 37200-000Lavras MG
INSTRUCTIONS FOR AUTHORS
Plant Cell Culture amp Micropropagation asemestral journal edited by Editora UFLA of theUniversidade Federal de Lavras publishes scientificarticles and communications in the area of plant tissueculture elaborated by researchers of the national andinternational scientific community One of the authors mustbe associated and have paid all charges required by theABCTP (Plant Tissue Culture Association) in order to betax free for publication in Plant Cell Culture ampMicropropagation Submission of a manuscript implies thatit is neither under consideration for publication elsewherenor has appeared previously in part or in whole Onacceptance for publication authors assign to the Editorsfull copyright of the manuscript in all languages andcountries Publications will depend on editorial rules andon the review of experts and ad hoc commission Reviewerand editorial opinions will be anonymously communicatedto authors
Concepts and affirmations included in articles andcommunications are of the entire responsibility of theauthors
1 SUBMISSION
The manuscript must present a maximum of 14pages At the time of submission a cover letter must besent with the manuscript copies to the Editor requestingpublication of the article This cover letter must be signedby all authors
and also contain the full addresstelephone number and e-mail of the authors Anyinclusion exclusion or alteration in the authors order mustbe notified and signed by all authors including the oneexcluded
Original Four copies and CD with text and illustrationsOnly one of the 4 printed copies must contain the fullnames of the authors and footnote in the first pageFormat Word for Windows (version 98 2000 XP ou 2003)Spacing of the text Double Margin on the left hand sideand 20 cm margin on the right hand side 25 cm upper andlower margin 25 cm for the heading and 25 cm for thefootnotePaper A4 formatSource Times New Roman size 12Number of pages up to 14 pages including the illustrationsTables Tables should be part of the body of the paper andthey must be presented in Word or Excel The title shouldbe above and be presented in the language in which thearticle was written and in English The vertical linesseparating the columns should not appearGraphsFiguresPhotographs must be presented in blackand white clear and with contrast scanned inserted in
the text after citation and also in a separate file (on thesame diskette as the article) saved in extension tif orjpg with resolution of 300 dpi The title should be below
and presented in the language in which the article waswritten and in EnglishSymbols and Chemical Formula must be presented usinga word processor that permits a format Page Maker
2 STRUCTURE AND ORGANIZATION
21 The article should be presented in the followingsequence
TITLE
In English language containing no more than 15 words incapital letters and bold
AUTHORS
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copies Footnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTshould be informative and condensed and should
explain the objectives material and methods results andconclusion of the work in a maximum of 250 words all writtenin one paragraphFor articles written in English the abstract should also bepresented in Portuguese
Key words minimum of three and maximum of five Theyshould not repeat words that are already in the title Thesemay include phrases as well as individual words and shouldbe separate by commasFor articles written in English the key-words should alsobe presented in Portuguese
INTRODUCTION
Should present a concise vision of the current level ofknowledge that has been achieved within the subject areathat the paper will discuss It should neither give anextensive review nor should it include details about theresults and discussion It should clearly indicate theobjectives of the research that was carried out
MATERIAL AND METHODS
This section can contain subdivisions with subtitles inbold print
RESULTS AND DISCUSSION
This section can have subsection which begins withconcise descriptive titles in bold print
CONCLUSIONS
Finishing agree of objectives of work
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
22 The Communication should be presented in thefollowing sequence
TITLE
Sufficiently clear conspicuous and complete withoutsuperfluous words It is recommended to initiate with theterm that represent the most important aspect with otherterms in decreasing of importance
TITLE IN PORTUGUESE
FULL NAME(S) OF THE AUTHOR(S)
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copiesFootnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTWritten continuously without paragraph It must
not exceed 250 words Index terms must be enclosed afterthe abstract using terms different from those used in thetitle and separated by comma
Index terms (3 to 5) must be described in capital and smallletters and express the content of the article
ABSTRACT AND INDEX TERMS IN PORTUGUESE
Text with no division but must include introductionmaterial and methods results and discussion andconclusion (it may include tables and figures)
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
3 PHOTOGRAPHS GRAPHS FIGURES SYMBOLSOR FORMULA CONTAINED IN THE ARTICLE SHOULDOBEY THE FOLLOWING RULES
31 Photographs must be presented in black and whiteclear and with contrast inserted in the text after their citationand also in a separate file (on the same diskette as thearticle) saved in extension TIFF
or JPEG withresolution of 300 dpi
32 Figures must be presented in black and white clearand with contrast inserted in the text after their citation andalso in a separate file (on the same diskette as the article)saved in extension TIFF
or JPEG with resolution of300 dpi They must be elaborated using Times New Romanfont size 10 without bold without text box and arranged
33 Graphs must be inserted in the text after their citationelaborated preferentially in Excel using Times New Romanfont size 10 without bold
34 Symbols and Chemical Formula must be presentedusing a word processor that permits a format for Page Maker(ex MathType Equation) without loss of its original form
4 REFERENCES references must be cited according toNBR60232002 of ABNT All references and their correctcitation in the text are of the entire responsibility of theauthor(s)
5 THE BRAZILIAN ASSOCIATION OF PLANT TISSUECULTURE (ABCTP) WILL INFORM THE AUTHOR THERECEIPT OF THE ORIGINAL MANUSCRIPT ANDEVENTUALLY IT WILL ALSO SEND INFORMATIONREGARDING ITS PUBLICATION MANUSCRIPTSTHAT REQUIRE MODIFICATIONS WILL BERETURNED TO THE AUTHOR FOR THE RESPECTIVEREVISION ANDCORRECTIONS
6 MANUSCRIPTS NOT APPROVED WON T BERETURNED TO THE AUTHOR
7 ARTICLES WILL BE PUBLISHED ACCORDING TOTHE ORDER OF RECEIPT AND APPROVAL
8 IF ANY OF THESE RULES ARE NOT ATTENDED THEMANUSCRIPT WILL BE RETURNED TO THE AUTHOR
9 THE NEGLECTFUL CASES WILL BE SOLVED BYTHE EDITORIAL COMMITTEE
10 MANUSCRIPTS SHOULD BE SENT TO THEFOLLOWING ADDRESS
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepto de Biologia - Setor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 303737200-000 Lavras MG BRAZIL
Diretoria
Presidente Renato Paiva UFLASecretaacuterio Moacir Pasqual UFLA
Secretaacuterio Adjunto Antocircnio Carlos Torres EMBRAPA HortaliccedilasTesoureiro Guilherme Augusto Canella Gomes Benger do Brasil
Comissatildeo Editorial
Editor ChefeRenato Paiva UFLA
Conselho EditorialAntocircnio Carlos Torres EMBRAPA Hortaliccedilas
Consultoria Cientiacutefica(Vol 4 N2)Ana da Silva Ledo EMBRAPA
Antonio Carlos Torres EMBRAPAAparecida Gomes de Arauacutejo UFLA
Elka Fabiana Aparecida Almeida EMBRAPAEvaristo Mauro de Castro UFLA
Fabiano Guimaratildees Silva CEFET Rio VerdeFernanda Pereira Soares MAPA
Jonny Everson Scherwinski Pereira EMBRAPAJoseacute Eduardo Brasil Pereira Pinto UFLANatoniel Franklin de Melo EMBRAPA
Raiacuterys Cravo Nogueira UFPA
Plant Cell Culture amp Micropropagation
ISSN 1808-9909
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-110 2008
CONTEUacuteDO
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia lingulata Ruiz amp Pav em ambiente protegido em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo Acclimatization of micropropagated plants of Heliconia Lingulata Ruiz amp Pav in protected environments as a function of irrigation depth Benito Moreira de Azevedo Eliana Lee Jorge Rocha Thales Viniacutecius de Arauacutejo Viana Albanise Barbosa Mariho Ana Cristina Portugal Pito de Carvalho Denise Vieira Vasconcelos 55
In vitro organogenesis of passion fruit (Passiflora edulis Sims F flavicarpa Deg) affected by irradiance sucrose and explant position Organogecircnese in vitro do maracujazeiro (Passiflora edulis Sims F flavicarpa Degener) afetado por irradiacircncia sacarose e posiccedilatildeo dos explantes Rodrigo Sobreira Alexandre Flaacutevio Alencar D Arauacutejo Couto Joseacute Maria Moreira Dias Wagner Campos Otoni Rita De Caacutessia Mendes Paulo Roberto Cecon 62
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental [Ananas Comosus (L) Merr Var Bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo Substrates evaluation for production of ornamental pineapple [Ananas Comosus (L) Merr Var Bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] plants under greenhouse conditions Francisco Nunes da Cunha Filho Antonio Carlos Torres Joatildeo Maria Charchar
70
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos na multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental in vitro Effect of isopentenyl adenine in four subcultures during the in vitro multiplication of ornamental pineapple shoot Maria do Desterro Mendes dos Santos Joseacute Getuacutelio Da Silva Filho Antonio Carlos Torres 76
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento da cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) cultivada in vitro em diferentes concentraccedilotildees de sacarose e qualidade de luz Photochemical efficiency and growth characteristics of sugar cane (Saccharum officinarum L) plants cultivated in vitro under different sucrose concentrations and light quality Geoacutergia Peixoto Bechara Motheacute Alena Netto Torres Luis Eduardo Campos Crespo Eliemar Campostrini 84
Effects of auxins and cytokinins on in vitro development of Alpinia purpurata K Schum and phenolic compounds production Efeito de auxinas e citocininas no desenvolvimento in vitro de Alpinia purpurata K Schum e produccedilatildeo de substacircncias fenoacutelicas Cristiane Pimentel Victoacuterio Iacinete Pamplona da Cruz Alice Sato Ricardo Machado Kuster Celso Luiz Salgueiro Lage 92
Curva de crescimento atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteis e taninos totais em calos de Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville (Fabaceae-Mimosoideae) Growth curve phenylalanine ammonia-lyase activity and total phenol levels in callus of Stryphnodendron Adstringens (Mart) Coville - (Fabaceae-Mimosoideae) Ana Hortecircncia Fonsecircca Castro Miller Marani Lima Renato Paiva Amauri Alves de Alvarenga Mirelle Oliveira Soacuteter 99
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica L concentraccedilotildees de NH4NO3 e de KNO3 no desenvolvimento de embriotildees Direct somatic embryogenesis of Coffea arabica L concentrations of NH4NO3 and KNO3 on the development of embryos Juliana Costa de Rezende Moacir Pasqual Samuel Pereira de Carvalho Ester Alice Ferreira Flavia Carvalho Santos 105
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 55
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
(Recebido em 17 de abril de 2008 e aprovado em 22 de julho de 2008)
ACLIMATIZACcedilAtildeO DE MUDAS MICROPROPAGADAS DE Heliconialingulata Ruiz amp Pav EM AMBIENTE PROTEGIDO EM FUNCcedilAtildeO
DA LAcircMINA DE IRRIGACcedilAtildeO1
ACCLIMATIZATION OF MICROPROPAGATED PLANTS OF Heliconia lingulata Ruiz ampPav IN PROTECTED ENVIRONMENTS AS A FUNCTION OF IRRIGATION DEPTH
BENITO MOREIRA DE AZEVEDO2 ELIANA LEE JORGE ROCHA3 THALES VINIacuteCIUS DE ARAUJO VIANA4ALBANISE BARBOSA MARINHO5 ANA CRISTINA PORTUGAL PINTO DE CARVALHO6
DENISE VIEIRA VASCONCELOS7
1Parte da dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade Federal do Cearaacute pelo primeiro autor para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem2Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC benitoazevedohotmailcom
3Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem (In memoacuteria)4Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC thalesufcbr
5Doutora em Produccedilatildeo Vegetal Pesquisadora CNPqFUNCAP albanisebmgmailcom6Doutora Embrapa Agroinduacutestria Tropical Cx P l 3761 60511-110 Fortaleza CE cristinacnpatembrapabr7Engenheira Agrocircnoma Mestre Universidade Federal do CearaacuteUFC denisevasconceloshotmailcom
RESUMOAs helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com sua beleza
e exotismo constituem uma das maiores riquezas da flora brasileiraEm decorrecircncia da alta demanda do mercado consumidor as mudasvecircm sendo produzidas em escala comercial por meio damicropropagaccedilatildeo uma teacutecnica importante da cultura de tecidosque apresenta diversas etapas A etapa de aclimatizaccedilatildeo eacute a fasemais criacutetica e importante pois se natildeo for bem executada podeproporcionar altos iacutendices de mortalidade e baixas taxas decrescimento e desuniformidade das plantas com consequumlentequeda na produccedilatildeo Para minimizar esse problema e atender agravesexigecircncias do mercado consumidor eacute preciso buscar informaccedilotildeesteacutecnicas e cientiacuteficas sobre o adequado manejo das plantas nafase de aclimatizaccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliaro efeito de distintas lacircminas de irrigaccedilatildeo na aclimatizaccedilatildeo demudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata Ruizamp Pav) A pesquisa foi conduzida em um ambiente protegidopertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical Fortaleza CE(3ordm44 S e 38ordm33 W) Foram analisadas quatro lacircminas de irrigaccedilatildeo1 2 3 e 4 mm de aacutegua As variaacuteveis agronocircmicas avaliadas nosexperimentos foram altura da planta nuacutemero de folhas e diacircmetrodo caule Os resultados dos experimentos evidenciaram o melhordesenvolvimento das mudas micropropagadas de helicocircniaquando irrigadas com lacircmina de 25 mm dia-1
Termos para indexaccedilatildeo Floricultura Heliconia lingulatamanejo de irrigaccedilatildeo
ABSTRACTHeliconias are beautiful and exotic ornamental plants of
the wealthy Brazilian flora Due to a high demand of theconsuming market plants are being produced in a commercial
scale using the technique of micropropagation In this techniqueacclimatization is the most important and critical phase forpromoting high rates of mortality reduced growth and plantuniformity which reduce its production The objective of thiswork was to evaluate the effect of different irrigation depth inthe acclimatization of micropropagated heliconia (Heliconialingulata) The experiments were in a protected environmentlocated at Embrapa Tropical Agroindustry Fortaleza CearaBrazil (3ordm44 S and 38ordm33 W) The agronomic variables evaluatedwere plant height leaf number and stem diameter The resultsshowed the best development of micropropagated heliconia plantsusing water depth of 25 mm day-1
Index terms floraculture Heliconia lingulata irrigationmanagement
INTRODUCcedilAtildeO
As helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com
sua beleza e exotismo assemelham-se a verdadeiras
esculturas lembrando em sua forma piracircmides bicos de
aves cascatas de flores pinhais ou cachos de banana As
helicocircnias constituem uma das maiores riquezas da flora
brasileira Atualmente sabe-se que o mercado internacional
tem proporcionado muitas oportunidades de negoacutecios para
os produtores dessas flores tropicais
A floricultura eacute uma atividade desenvolvida em
geral em ambientes protegidos estufas ou tuacuteneis plaacutesticos
AZEVEDO B M de et al56
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
combinando alta produtividade com maior qualidade
garantindo ao agricultor uma colheita satisfatoacuteria e
reduzindo ao maacuteximo as perdas por danos proporcionados
por variaccedilotildees climaacuteticas adversas (GONDIM et al 2004)
De acordo com Terceiro Neto et al (2004) uma etapa
importante na produccedilatildeo de flores e plantas ornamentais
estaacute relacionada agrave utilizaccedilatildeo de mudas de qualidade Nesse
contexto a produccedilatildeo de mudas atraveacutes da
micropropagaccedilatildeo surge como uma alternativa viaacutevel para
obtenccedilatildeo de mudas em escala comercial com alta qualidade
geneacutetica e fitossanitaacuteria em um curto espaccedilo de tempo
atendendo dessa forma agraves necessidades dos produtores
Dentre as etapas da micropropagaccedilatildeo pode-se destacar a
aclimatizaccedilatildeo que eacute a fase mais criacutetica e importante
A irrigaccedilatildeo eacute uma praacutetica de suma importacircncia no
processo de aclimatizaccedilatildeo jaacute que a aacutegua eacute um dos fatores
que mais limitam a produccedilatildeo das plantas Seu manejo ou
seja a quantidade de aacutegua e sua frequumlecircncia de aplicaccedilatildeo eacute
um fator fundamental para o estabelecimento e o adequado
desenvolvimento das mudas micropropagadas Para se
alcanccedilar todos os objetivos da praacutetica de irrigaccedilatildeo que
englobam a maximizaccedilatildeo da produccedilatildeo racionalizaccedilatildeo do
uso da matildeo-de-obra energia aacutegua e fertilizante e a
aplicaccedilatildeo correta da aacutegua eacute imprescindiacutevel adotar um
correto manejo desse sistema (PEREIRA et al 1997)
Para Pieter et al (2007) os efeitos de aplicaccedilotildees
excessivas ou deficitaacuterias satildeo irreversiacuteveis e variam de
acordo com a intensidade e tempo de duraccedilatildeo do
procedimento imposto Nesses casos os processos
fisioloacutegicos da planta relacionados ao crescimento satildeo
afetados e sob condiccedilotildees severas o deacuteficit pode provocar
a murcha permanente do vegetal Conforme a Embrapa
(2007) em regiotildees de calor intenso com inverno ameno
normalmente a exigecircncia das mudas por aacutegua em qualquer
fase de desenvolvimento eacute maior que em regiotildees de clima
temperado Por outro lado alguns tipos de substrato por
terem menor capacidade de retenccedilatildeo de aacutegua exigem que
se aplique mais aacutegua a cada irrigaccedilatildeo ou que se aumente a
frequumlecircncia das mesmas Eacute recomendaacutevel que as lacircminas
sejam aplicadas nas primeiras horas da manhatilde e ao
entardecer uma vez que irrigaccedilatildeo nas horas mais quentes
pode danificar as mudas principalmente quando
fertirrigadas (CESP 2000)
Para Bernardo et al (2005) eacute necessaacuterio conhecer o
comportamento da cultura em funccedilatildeo das diferentes
quantidades de aacutegua fornecidas e identificar as fases de
desenvolvimento de maior consumo de aacutegua e os periacuteodos
criacuteticos quando a falta ou o excesso provocaria quedas de
produccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliar o
efeito de lacircminas de irrigaccedilatildeo sobre o desenvolvimento de
mudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata
Ruiz amp Pav) em fase de aclimatizaccedilatildeo em ambiente
protegido
MATERIAL E MEacuteTODOS
O presente trabalho foi conduzido em um ambiente
protegido pertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical
no periacuteodo de fevereiro a abril de 2006 A aacuterea estaacute situada
no municiacutepio de Fortaleza Cearaacute com as coordenadas
geograacuteficas correspondentes agrave 3ordm44 S 38ordm33 W e 195 m
de altitude De acordo com a classificaccedilatildeo climaacutetica de
Koppen o clima da regiatildeo eacute do tipo Aw caracterizado
como clima tropical chuvoso de savana tropical com a
eacutepoca mais seca no inverno e maacuteximo de chuvas no veratildeo-
outono
O tuacutenel alto de cultivo forccedilado de formato
semicircular e orientaccedilatildeo leste-oeste foi instalado com as
seguintes dimensotildees 45 m de comprimento 5 m de largura
e 2 m de altura comportando aproximadamente uma aacuterea
de 225 msup2 e um volume de 357 m3 Toda a sua estrutura foi
completamente coberto por uma tela de sombreamento
para reduzir 50 da luminosidade
O sistema de irrigaccedilatildeo empregado foi do tipo
microaspersatildeo suspenso sendo constituiacutedo por um
conjunto motobomba uma linha principal uma linha de
derivaccedilatildeo e uma linha lateral de 10 m com emissores
espaccedilados de 24 m e a uma altura de 05 m das bandejas
Os microaspersores foram do tipo nebulizador modelo
Tietze com bocal violeta em posiccedilatildeo invertida a vazatildeo do
emissor era de 43 l h-1 na pressatildeo de 30 kgf cm-2
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 57
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
As mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata)
utilizadas nesse experimento foram obtidas atraveacutes do
processo de micropropagaccedilatildeo realizado no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos e Geneacutetica Vegetal da Embrapa
Agroinduacutestria Tropical Na ocasiatildeo do plantio as mudas
apresentavam-se completamente enraizadas e com alturas
variando de 26 a 35 cm
As plantas provenientes do material in vitro foram
retiradas dos frascos e suas raiacutezes lavadas em aacutegua
corrente para a retirada do excesso do meio de cultura
Apoacutes a lavagem as mudas foram colocadas em bandejas e
suas raiacutezes podadas com o auxiacutelio de uma tesoura com o
objetivo de uniformizar o material facilitar o plantio e
estimular o desenvolvimento de um sistema radicular mais
funcional
As mudas foram transplantadas para tubetes de
capacidade volumeacutetrica de 180 cm3 contendo o substrato
formado pela mistura poacute-de-coco seco + huacutemus de
minhoca + solo (PCS+H+S) na proporccedilatildeo de 111
misturado no Laboratoacuterio de Solos da Embrapa e sem
fornecimento de fertilizantes durante o periacuteodo
experimental Para promover o completo umedecimento
do substrato e aumentar a umidade relativa do ambiente
momentos antes da transferecircncia das mudas para os
tubetes o sistema de irrigaccedilatildeo foi acionado
proporcionando assim um ambiente favoraacutevel ao
estabelecimento das mudas Com os recipientes em seus
devidos lugares as mudas foram acondicionadas e
levadas em bandejas ateacute o tuacutenel alto de cultivo forccedilado
iniciando a etapa de plantio As mudas foram inseridas
numa profundidade meacutedia de 5 cm de forma que as raiacutezes
e a parte inicial do caule ficaram enterradas As mudas
foram transferidas para os respectivos substratos no dia
3 de fevereiro de 2006
Para promover melhores condiccedilotildees para o
estabelecimento das mudas do primeiro ao quadrageacutesimo
quinto dia apoacutes o transplantio (DAT) essas receberam
uma irrigaccedilatildeo padratildeo com a aplicaccedilatildeo de uma lacircmina
correspondente a 3 mm de aacutegua parcelada duas vezes ao
dia sendo uma aplicaccedilatildeo pela manhatilde iniciando-se
aproximadamente agraves 9 h e a outra agrave tarde a partir das 16 h
A partir do 45ordm DAT foi adotada a diferenciaccedilatildeo das lacircminas
de irrigaccedilatildeo
O delineamento experimental foi em blocos
casualizados composto por quatro tratamentos e cinco
repeticcedilotildees constituiacutedas por cinco fileiras verticais com
cinco plantas cada totalizando 25 plantas por tratamento
num total de 100 plantas por experimento Os tratamentos
consistiram de quatro niacuteveis de irrigaccedilatildeo equivalentes agraves
lacircminas de 10 (L1) 20 (L
2) 30 (L
3) e 40 (L
4) miliacutemetros de
aacutegua tambeacutem parcelada em duas aplicaccedilotildees diaacuterias agraves 9 h
e agraves 16h
Os dados foram coletados em duas ocasiotildees apoacutes
a diferenciaccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo A primeira coleta
de dados ocorreu em 04 de abril aos 60 dias apoacutes o
transplantio (DAT) e a segunda em 19 de abril (aos 75
DAT) As variaacuteveis analisadas foram nuacutemero de folhas
(NF) altura da planta (AP) e diacircmetro do caule (DC) O
nuacutemero de folhas foi contado visualmente em todas as
mudas transplantadas Todas as folhas foram consideradas
na contagem exceto as totalmente secas A altura da planta
foi medida a partir da base ateacute a abertura das folhas por
meio de um escaliacutemetro graduado em centiacutemetros
subdividido em miliacutemetros O diacircmetro do caule foi
mensurado com o auxiacutelio de um paquiacutemetro digital
graduado em centiacutemetros considerando a base do caule
como padratildeo de contagem
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos aplicativos Microsoft Office Excel e SISVAR
versatildeo 46 (FERREIRA 2003)
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os valores meacutedios mensais de temperatura do ar
umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidade
do vento a 2 m de altura registrados durante o experimento
pela estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade
Federal do Cearaacute (UFC) encontram-se na Tabela 1 cuja
temperatura meacutedia do periacuteodo foi de 23 ordmC e umidade relativa
meacutedia de 93 caracterizando um periacuteodo de temperaturas
amenas
AZEVEDO B M de et al58
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
TABELA 1 Valores meacutedios mensais de temperatura do ar umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidadedo vento a 2m de altura Fortaleza-CE 2006
Mecircs Temperatura (ordmC) U R () Rad solar global (W m-2) Vel do vento (m s-1)
Fevereiro 23 95 1329 173
Marccedilo 24 84 1291 125
Abril 23 99 1162 094
Fonte Estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade Federal do Cearaacute (UFC)
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Tanto o deacuteficit quanto o excesso hiacutedrico afetaram o
crescimento das mudas Isso pode ter ocorrido pelo fato
da deficiecircncia hiacutedrica ocasionar o fechamento dos
estocircmatos diminuindo a concentraccedilatildeo intracelular de CO2
e consequumlentemente gerando decreacutescimo na assimilaccedilatildeo
do mesmo (BERNARDO et al 2005) Jaacute o excesso hiacutedrico
ocasiona a falta de oxigecircnio que provoca a reduccedilatildeo da
fotossiacutentese e prejudica a conversatildeo da mateacuteria orgacircnica
pelos microorganismos em formas soluacuteveis que a planta
possa reutilizar Esses fatores podem proporcionar um
TABELA 2 Anaacutelise de variacircncia das caracteriacutesticas de desenvolvimento altura da planta (AP) diacircmetro do caule(DC) e nuacutemero de folhas (NF) de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das laminas aplicadas aos 60e 75 DAT
(ns) natildeo significativo significativo a 5 de probabilidade pelo teste F
Quadrado meacutedio Variaacutevel FV GL
60 DAT 75 DAT
Bloco 4 03966ns 02946ns
Tratamento 3 23675 31348 AP
Resiacuteduo 12 03593 06279
Bloco 4 06407ns 02754ns
Tratamento 3 16645 41102 DC
Resiacuteduo 12 06222 06728
Bloco 4 04377 01829ns
Tratamento 3 03421 05204 NF
Resiacuteduo 12 0773 01081
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 59
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
menor crescimento das plantas devido agrave diminuiccedilatildeo da
eficiecircncia de transformaccedilatildeo de fotoassimilados nessas
condiccedilotildees (REGO et al 2004)
A anaacutelise de regressatildeo indica que o modelo que
melhor se ajustou agrave relaccedilatildeo altura de planta em funccedilatildeo da
lacircmina de irrigaccedilatildeo aos 60 e 75 DAT foi o polinomial
quadraacutetico apresentando valores para R2 de 0997 e 0966
respectivamente (Figuras 1 e 2) Observa-se que aos 60 e 75
DAT a altura da planta aumentou com a lacircmina aplicada ateacute
FIGURA 1 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 60 DATFortaleza-CE 2005 (ns natildeo significativo pelo teste F significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
FIGURA 2 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 75 DATFortaleza-CE 2005 (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
um ponto maacuteximo de 247 e 250 mm dia-1 respectivamente
representando a lacircmina que proporcionou maior
desenvolvimento das mudas em relaccedilatildeo agrave altura da planta
sendo obtida 896 e 1012 cm respectivamente Lacircminas acima
desse valor causaram reduccedilatildeo no crescimento
possivelmente devido ao excesso de aacutegua
Soares et al (1998) salientam que a aacutegua em excesso
proporciona aumentos nos custo de produccedilatildeo e do risco
de lixiviaccedilatildeo da aacutegua e dos nutrientes nela diluiacutedos o que
AP = -05934LI2 + 29273LI + 53519R2 = 0997
700
740
780
820
860
900
940
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1)
Altu
ra d
a pl
anta
(cm
)
AP = -06728L2 + 33294L + 59869
R2 = 0966
80
84
88
92
96
100
104
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Alt
ura
da p
lant
a (c
m)
AZEVEDO B M de et al60
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
pode prejudicar o desenvolvimento radicular Aleacutem disso
o excesso de aacutegua compromete os processos de
fotossiacutentese e respiraccedilatildeo os quais envolvem a utilizaccedilatildeo
de determinadas concentraccedilotildees de oxigecircnio (RAVEN et
al 2001) Jaacute em casos de deacuteficit hiacutedrico podem ocorrer
problemas de ordem fisioloacutegica ou seja afetar
negativamente o desenvolvimento das plantas
Em ambos os periacuteodos avaliados observou-se que
as lacircminas aplicadas influenciaram o diacircmetro de caule
das mudas de helicocircnia com valores meacutedios de 97 e 103
cm aos 60 e 75 DAT respectivamente A anaacutelise de
regressatildeo indicou que aos 60 DAT o modelo polinomial
quadraacutetico foi o que melhor representou o diacircmetro do
caule em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo com R2 de 0746
(Figura 3) O maacuteximo valor do diacircmetro de caule (1022
cm) calculado por derivaccedilatildeo da curva de ajuste foi obtido
aplicando-se uma lacircmina de 264 mm dia-1 A partir dessa
lacircmina houve uma diminuiccedilatildeo no diacircmetro de caule
ocasionado possivelmente pelo excesso de aacutegua Aos
75 DAT o modelo matemaacutetico ajustado para relacionar o
diacircmetro de caule em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo
apresentou coeficiente de determinaccedilatildeo (R2) muito baixo
natildeo sendo representativo
Modelos polinomiais quadraacuteticos para explicar o
efeito da lacircmina de irrigaccedilatildeo sobre a altura e diacircmetro de
caule tambeacutem foram obtidos por Pieter et al (2007) na
produccedilatildeo da flor da fortuna por Lopes et al (2005) em
mudas de Eucalyptus grandis W Hill por Pereira et al
(2003) e Recircgo et al (2004) na cultura do crisacircntemo
A anaacutelise de variacircncia (Tabela2) indicou que o
nuacutemero de folhas nas mudas de helicocircnia foi influenciado
pelas lacircminas de irrigaccedilatildeo nas duas eacutepocas analisadas (60
e 75 DAT) com valores meacutedios de 325 e 345 folhas nas
respectivas eacutepocas poreacutem o modelo matemaacutetico para
representar essa relaccedilatildeo apresentou coeficiente de
determinaccedilatildeo (R2) muito baixo e natildeo foi estatisticamente
significativo
As anaacutelises mostraram que aos 60 e 75 DAT a
lacircmina de irrigaccedilatildeo ideal que proporcionou o melhor
desenvolvimento das plantas encontra-se na faixa
compreendida de 247 a 264 mm dia-1 Valores
semelhantes foram obtidos por Gomes et al (2006) que
verificaram que a taxa de evapotranspiraccedilatildeo meacutedia da
Heliconia psittacorum L f x HSpatho-circinada
Aristeg cultivada em ambiente protegido foi de 22 mm
dia-1
FIGURA 3 Diacircmetro de caule de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) aos 60 DAT em funccedilatildeo das lacircminas deirrigaccedilatildeo Fortaleza CE (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
DC= -04111L2
+ 21726L + 73492
R2 = 0746
80
85
90
95
100
105
110
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Diacirc
met
ro d
o ca
ule(
cm)
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 61
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
CONCLUSOtildeES
As lacircminas de irrigaccedilatildeo influenciaram as
caracteriacutesticas de desenvolvimento avaliadas aos 60 e 75
DAT
A altura de planta e o diacircmetro de caule
apresentaram resposta quadraacutetica em relaccedilatildeo agraves lacircminas
aplicadas
Nas condiccedilotildees em que foi desenvolvido este
trabalho para a aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas
de helicocircnia recomenda-se irrigar com 25 mm dia-1 com o
intuito de se obter mudas mais vigorosas para serem
transplantadas para condiccedilotildees de campo
AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pela concessatildeo da bolsa de estudo
Agrave Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaacuteria
CNPAT pela oportunidade de realizaccedilatildeo desta pesquisa
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
BERNARDO S SOARES A A MANTOVANI E CManual de irrigaccedilatildeo 7 ed Viccedilosa MG UFV 2005
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ALEXANDRE R S et al62
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
(Recebido em 4 de marccedilo de 2008 e aprovado em 1 de setembro de 2008)
IN VITRO ORGANOGENESIS OF PASSION FRUIT (PASSIFLORAEDULIS SIMS F FLAVICARPA DEG) AFFECTED BYIRRADIANCE SUCROSE AND EXPLANT POSITION
ORGANOGEcircNESE IN VITRO DO MARACUJAZEIRO (PASSIFLORA EDULIS SIMSF FLAVICARPA DEGENER) AFETADO POR IRRADIAcircNCIA SACAROSE E
POSICcedilAtildeO DOS EXPLANTES
RODRIGO SOBREIRA ALEXANDRE1 FLAacuteVIO ALENCAR D
ARAUacuteJO COUTO1 JOSEacute MARIA MOREIRA DIAS1WAGNER CAMPOS OTONI2 RITA DE CAacuteSSIA MENDES3 PAULO ROBERTO CECON4
1Professor Doutor Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG rsalexandreclick21combr2Doutor Departamento de Biologia Vegetal Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG3Teacutecnica em Quiacutemica Graduanda em Agronomia Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
4Doutor Departamento de Informaacutetica Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
ABSTRACTThe culture of the tissues has helped considerably the
Passiflora genus development achieving successfully themorphogenic responses in different in vitro explants Theobjective this work was to assess the in vitro morphogenicresponses of hypocotyl segments of passion fruit collected from5 positions (apical sub-apical median sub-basal and basalnamely 1-5 respectively) along the hypocotyls axis and culturedin medium with different concentrations of sucrose and exposedto irradiance levels The experiments were performed as acompletely randomized blocks design with 15 repetitions in 4 x4 x 5 factorial scheme (irradiance x sucrose x explant positions)totalizing 80 treatments on which every experimental parcelwas comprised of a flask containing five hypocotyls Thehypocotyl segment from positions 1 and 3 at their extremedistal ends cultured onto medium of culture with 30 g L-1 sucroseand under 100 micromol m-2 s-1 irradiance enable the greatest numberof buds and shoots differentiated The distal extremity from thesegments of hypocotyl farthest from the cotyledonary nodes(position 1) cultivated in 20 g L-1 sucrose and exposed to 50micromol m-2 s-1 irradiance result in the best condition for shootdevelopment
Index terms Passiflora edulis f flavicarpa in vitro propagationyellow passion fruit
RESUMOA cultura de tecidos tem auxiliado no desenvolvimento
do gecircnero Passiflora alcanccedilando sucesso morfogecircnico emdiferentes explantes in vitro Objetivou-se neste trabalho avaliarrespostas morfogecircnicas in vitro de segmentos de hipocoacutetilo domaracujazeiro coletados de 5 posiccedilotildees (apical sub-apicalmediana sub-basal e basal isto eacute 1-5 respectivamente) ao longodo eixo dos hipocoacutetilos e cultivados em meios com diferentesconcentraccedilotildees de sacarose e expostos a niacuteveis de irradiacircncia Oexperimento foi instalado em blocos casualizados com 15
repeticcedilotildees em esquema fatorial 4 x 4 x 5 (irradiacircncia x sacarose xposiccedilatildeo dos explantes) totalizando 80 tratamentos nos quaistoda parcela experimental foi constituiacuteda de um frasco contendocinco hipocoacutetilos As posiccedilotildees 1 e 3 no extremo distal dossegmentos de hipocoacutetilo cultivados em meio de cultura com 30 gL-1 de sacarose e sob 100 micromol m-2 s-1 de irradiacircncia proporcionamaior nuacutemero de brotos e brotos diferenciados A extremidadedistal dos segmentos de hipocoacutetilo extraiacutedos mais distantes donoacute cotiledonar (posiccedilatildeo 1) cultivados em 20 g L-1 de sacarose eexpostos agrave irradiacircncia de 50 micromol m-2 s-1 resulta na melhorcondiccedilatildeo para o desenvolvimento do broto
Termos para indexaccedilatildeo Passiflora edulis f flavicarpapropagaccedilatildeo in vitro maracujazeiro amarelo
INTRODUCTION
The genus of Passiflora was originated at South
America and comprises more than 580 species most of them
belonging to the Tropical America mainly from Brazil
(OLIVEIRA 1987) Among them the most commercially used
is the passion fruit plant P edulis Sims f flavicarpa Deg
The culture of the tissue has been reaching with
the Passiflora genus answers satisfactory morphogenic in
different in vitro explants (BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1993 1994 MORAN-ROBLES 1979 SCORZA
amp JANICK 1980)
The explant morphogenic capability has
relationship with the polarity effect such factor is
responsible for the shoot emergence Several studies were
researched to assess the effect of the position of the
In vitro organogenesis of passion fruit 63
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
explants extracted from the hypocotyl and roots of Citrus
plantlets during the shoot-bud proliferation (BURGER amp
HACKETT 1986 COSTA et al 2004 DIAS 1998
GARCIA-LUIS et al 1999) as well as the effect of the
polarity in the formation the buds and shoots
(McCLELLAND amp SMITH 1990 YAE et al 1987)
In the in vitro organogenesis of plants of the genus
Passiflora several factors influence among them among
them the irradiance for which different types of explants
were spared for the essays 58 micromol m-2 s-1 in internodes
(MORAN-ROBLES 1979) 20 micromol m-2 s-1 in mesophyll-
derived protoplasts (OTONI et al 1995) 30 or 23 micromol m-
2 s-1 in leaf (KAWATA et al 1995 APPEZZATO-DA-
GLOacuteRIA et al 1999 respectively) 50 micromol m-2 s-1 in
endosperm (MOHAMED et al 1996) 80 30 or 24 micromol m-
2 s-1 in shoot cultures (FARIA amp SEGURA 1997
KURIYAMA et al 1998 BARBOSA et al 2001
respectively) 20-55 micromol m-2 s-1 in cotyledons (HALL et
al 2000) 60 or 54 micromol m-2 s-1 in hipocotyl (COUCEIRO
2002 FELISMINO 2005 respectively) Although different
irradiances have been studied in these works in none of
them the effect of difference irradiances was studied during
the in vitro organogenic process of passion fruit plant
Other important factor for the in vitro
organogenesis is the source of carbon The in vitro
organogenesis works affirm that sucrose has been the most
employed source of carbon in the culture for Passiflora
(APPEZZATO-DA-GLOacuteRIA et al 1999 HALL et al 2000)
its concentration varies from 10 to 30 g L-1
The present work aimed to evaluate the in vitro
morphogenic responses of hypocotyledonary explants of
passion fruit plants throughout the use of different levels
of irradiance sucrose concentration and positions of the
segments of hypocotyls derived from in vitro germinated
plantlets
MATERIALS AND METHODS
Axenic and vigorous etiolated plantlets were
obtained from in vitro germinated seeds and used as
explants sources
In vitro-grown seedlings (25-30 days-old) were
transversally cut into 1-12 cm long were cultured on
different conditions of incubation The explants were
cultured in 300 mL glass flasks (Santa Marina Satildeo Paulo
Brazil) containing 30 mL aliquots of MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) medium salts 100 mg L-1 mio-inositol 10
mg L-1 6-benzylaminopurine (BAP) vitamins of White
(1951) and 80 g L-1 of agar (Isofarreg Brazil) The medium
pH was adjusted to 57 plusmn 01 before the addition of agar
Several concentrations of sucrose (0 10 20 or 30 g L-1)
were added to this medium The culture flasks were sealed
with polypropylene lids and the medium was autoclaved
at 121ordmC 15 kgf cm-2 during 20 minutes
The segments of hypocotyls were cut in five
segments numbered from 1 to 5 follows 1 basal the first
segment adjacent to the root collar 2 sub-apical the
second segment adjacent to the hypocotyl root 3 median
the central segment in relation to the hypocotyl region 4
sub-apical the second segment that is adjacent to the
cotyledonary node 5 - apical the first segment that is
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
Axenic plantlets Segments of hypocotyls in the
medium of culture
DE
PE
FIGURE 1 The segments of hypocotyls numbered from1 to 5 were characterized as follows 1 basal the firstsegment adjacent to the root collar 2 sub-apical thesecond segment adjacent to the hypocotyl root 3 median the central segment in relation to the hypocotylregion 4 sub-apical the second segment that is adjacentto the cotyledonary node 5 - apical the first segment thatis adjacent to the cotyledonary node () ED = distalextremity EP = proximal extremity
ALEXANDRE R S et al64
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
adjacent to the cotyledonary node (Figure 1) In this order
the five hypocotyl explants were placed horizontally on
the media maintaining the proximal extremity towards the
wall of the flask and having the distal extremity facing the
centre of the flask
The flasks were distributed 5 cm far from each other
on the shelves at the growth room to avoid shadowiness
at these flasks The explants were kept at the temperature
of 27 plusmn 2ordmC photoperiod of 168-h lightdark regime and
irradiances of 25 50 100 and 150 micromol m-2 s-1
The irradiance levels were provided by the
utilization of 40 W daylight fluorescent light tubes (Osramreg
Brazil) as follows I - 25 micromol m-2 s-1 (1 light on without
on without dislocating the luminous panel) III - 100 micromol
m-2 s-1 (4 lights on setting the luminous panel at 20 cm
from the shelf surface) IV - 150 micromol m-2 s-1 (5 lights on
setting the luminous panel at 16 cm from the shelf surface)
Copper strings were used to support the fluorescent
incandescent lamps
After 45 days of incubation regeneration frequencies
and number of shoots per explant were assessed which
were formed at the distal and proximal ends The
organogenesis was assessed regarding shoot lengths from
the evaluated positions at the proximal and distal ends
The experiment was performed under complete
randomized blocks design with 15 replicates in a 4 x 4 x 5
factorial scheme (irradiance levels 25 50 100 and 150 igravemol
m-2 s-1 x sucrose concentrations 0 10 20 and 30 g L-1 x
position of the explants at the hypocotyl 1 2 3 4 and 5)
totalizing 80 treatments being the experiment plot
comprised of a flask containing five segments of
hypocotyl Considering the three factors studied were made
by analysis of test average (Tukey) and regression to
concentrations of sucrose and levels of irradiance The
experiments were repeated at least once
RESULTS AND DISCUSSION
In vitro organogenesis at the distal extremity The
differentiation of buds and shoots as influenced by
irradiance levels and distinct positions of explants along
the hypocotyls axis and the mean values and the standard
deviation of the total number of buds and shoots formed
at the distal extremity are shown in figures 2 and 3
respectively
Independently from the other factors at the medium
without sucrose there was no morphogenic response in
the explants (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The number of structures formed at the distal
extremity reached the highest means when there was added
30 g L-1 sucrose to the medium under 100 micromol m-2 s-1
irradiance at the positions 1 and 3 (Figure 3a) Considering
the means of the five explant positions an average of 592
structures per explant was obtained Similarly Couceiro
(2002) has obtained 590 structures per explant at the distal
extremity when cultivating them horizontally under 60 micromol
m-2 s-1 of irradiance in MS medium containing 50 mg L-1 of
BAP and 30 g L-1 of sucrose Garcia-Luis et al (1999) have
shown in Citrange Troyer that despite the explants being
horizontally placed on the medium surface there was an
additional effect of polarity evidenced by the larger number
of shoots differentiated at the apical extremity and the
distance among the cotyledonary node has affected the
morphogenesis These results confirmed the studies of
Ziv et al (1970) and Fari amp Czako (1981) evidencing that
normally in stem and root sections the shoot-buds are
formed at the distal extremity and the roots at the proximal
extremity In the present work structures formed at both
explant extremities but in a higher degree at the distal
extremity
The largest value found for the average length of
the shoot a was 364 mm for the explants that were extracted
farthest from the cotyledonary node (position 1) and
cultured in medium containing 20 g L-1 of sucrose and
submitted to 50 micromol m-2 s-1 of irradiance (Figure 4a)
However in Passiflora actinia the inclusion of auxins to
the medium favoured the development of the shoot-buds
that consequently presented larger lengths when the
hypocotyl segments were cultivated in MS medium
containing 001 mg L-1 de IBA (KOCH et al 2001)
In vitro organogenesis of passion fruit 65
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
In vitro organogenesis at the proximal extremity
The mean values and the standard deviation of the total
number of buds and shoots formed at the proximal extremity
of the explants are presented in Figure 3b Likewise to the
distal extremity the formation of buds and shoots did not
happen when the explants were cultured in medium without
sucrose (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The differentiation and development of the buds
and shoots at the proximal extremity reached the highest
FIGURE 2 In vitro organogenesis in hypocotyl segments that are characterized by the positions that variesfrom 1 to 5 under effect of different irradiance levels A 25 micromol m-2 s-1 B 50 micromol m-2 s-1 C 100 micromol m-2 s-1 andD 150 micromol m-2 s-1 and sucrose concentrations (a 0 b 10 c 20 d 30 g L-1) for 45 days
A 1
2
3
4
5
a
1
2
3
4
5
b 1
2
3
4
5
c 1
2
3
4
5
d
B
a
b
c
d
C
a
b
c
d
D
a
b
c
d
Distal extremity
Proximal extremity
averages (35) at 25 micromol m-2 s-1 of irradiance in MS medium
containing 20 g L-1 sucrose for explants derived from the
position 4 (Figure 3b) Concurrently the work by Baccarin
(1988) pointed out the best bud and shoot proliferation in
explants from the regions closer to the cotyledonary nodes
The presence of BAP in the medium was essential to
the organogenic process as observed in works with Passiflora
spp (BECERRA et al 2004 BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1994 FERNANDO 2005 HALL et al 2000)
ALEXANDRE R S et al66
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Position 1
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 2
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 3
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Num
ber t
otal
of e
stru
ture
s
Position 4
0
2
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6
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25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 1
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
10
20
30
Position 2
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
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tota
l de
estr
utur
as
Position 3
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
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l de
estr
utur
as
Position 4
0
1
2
3
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5
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 5
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 5
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Sucrose
(g L-1)
a
b
FIGURE 3 Mean values and standard deviation of the total number of structures (buds and shoots) formed at thedistal (a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
In vitro organogenesis of passion fruit 67
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
FIGURE 4 Mean values and standard deviation of the lengths of structures (buds and shoots) formed at the distal(a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
Position 1
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 2
0
1
2
3
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25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 3
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Leng
th o
f sho
ots
(mm
)
Position 4
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 5
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 1
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1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os(m
m)
10
20
30
Position 2
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os(m
m)
Position 3
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 4
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
o (m
m)
Position 5
0
1
2
3
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Sucrose
(g L-1)
a
b
ALEXANDRE R S et al68
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Independently from the irradiance levels different
sucrose concentrations and explant positions at the
hypocotyl the shoot elongation was considered to be
lower (Figure 4b) than the minimum recommended
(approximately 2-3 cm) for the in vitro rooting process It
highlights the need of previous submission of the explants
to an adequate medium for the elongation process
CONCLUSIONS
The morphogenic response for bud and shoot
formation was remarkably superior at the distal extremity
The maximum concentration among the sucrose
and the irradiance of 100 micromol m-2 s-1 has proportioned
better morphogenic responses at the distal extremity
regardless the position of the explants
The buds and shoots differentiated at the distal
extremity farthest to the cotyledonary node developed
better under 50 micromol m-2 s-1 of irradiance in medium
supplemented with 20 g L-1 sucrose
The use of a carbon source is essential for in vitro
morphogenesis
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CUNHA FILHO F N da et al70
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
(Recebido em 15 de maio de 2008 e aprovado em 2 de setembro de 2008)
AVALIACcedilAtildeO DE SUBSTRATOS NA PRODUCcedilAtildeO DE MUDASDO ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL [Ananaacutes comosus (L) Merr
var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] EM CONDICcedilOtildeESDE CASA DE VEGETACcedilAtildeO
SUBSTRATES EVALUATION FOR PRODUCTION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE[Ananas comosus (L) Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] PLANTS
UNDER GREENHOUSE CONDITIONS
FRANCISCO NUNES DA CUNHA FILHO1 ANTONIO CARLOS TORRES1 JOAtildeO MARIA CHARCHAR1
1Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF francisconunescnphembrapabr torrescnphembrapabr
RESUMOA utilizaccedilatildeo de substratos na aclimataccedilatildeo de mudas
micropropagadas oferece consideraacutevel vantagem no custo e napossibilidade de obtenccedilatildeo de alta porcentagem de sobrevivecircnciados propaacutegulos ex vitro aliado agrave obtenccedilatildeo de mudas maisuniformes vigorosas precoces e com alta qualidade fitossanitaacuteriaAvaliaram-se quatro diferentes tipos de substratos (fibra de cococomercial fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxe substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas) na aclimataccedilatildeode mudas do abacaxizeiro ornamental As variaacuteveis massa frescatotal massa fresca da parte aeacuterea massa fresca de raiacutezescomprimento de raiacutezes altura de plantas e nuacutemero total de folhasforam avaliadas O delineamento experimental utilizado foi ointeiramente casualizado com quatro tratamentos e com quatrorepeticcedilotildees Pela anaacutelise dos resultados o substrato padronizadoda Embrapa Hortaliccedilas o de fibra de coco comercial e o Plantmaxforam os mais eficientes na produccedilatildeo de mudas de abacaxizeiroornamental para fins comerciais O substrato de coco-verde daEmbrapa Hortaliccedilas foi o menos indicado
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatus plantaornamental substrato
ABSTRACTThe use of substrate in the acclimatization of
micropropagated plants offers considerable cost advantages andthe possibility to obtain high percentage of ex vitro survivingplants as well as in the production of uniform vigorous precociousand healthy plants Four different substrates (commercial coconutfiber green-coconut fiber from Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxand the standardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas) wereevaluated for acclimatization of ornamental pineapple plantsTotal fresh mass fresh mass of shoots fresh mass of roots rootlength plant height and total number of leaves were obtainedThe experiment followed a complete randomized design withfour treatments and four replicates The results showed that thestandardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas commercialcoconut fiber and Plantmax were the most efficient for theproduction of ornamental pineapple plants for commercialpurpose Green-coconut fiber substrate from Embrapa was lessindicated
Index terms Ananas comosus var bracteatus ornamental plantgrowth substrate
INTRODUCcedilAtildeO
Os abacaxizeiros ornamentais apresentam flores e
infrutescecircncias de beleza atrativa muito usadas em arranjos
decorativos e ornamentais no Brasil e exterior
representando um segmento de grande potencial para
exportaccedilatildeo (CABRAL 2000 SOUZA et al 2004) No
comeacutercio de flores nativas o abacaxi ornamental jaacute obteve
valores agregados da ordem de 5000 em relaccedilatildeo ao
abacaxi de fruta natildeo ornamental (SOUZA et al 2004)
A propagaccedilatildeo vegetativa do abacaxizeiro ornamental
para fins de comercializaccedilatildeo eacute feita por mudas oriundas da
planta-matildee Poreacutem essa propagaccedilatildeo apresenta o
inconveniente de disseminar agentes patogecircnicos e pragas
pela utilizaccedilatildeo de mudas contaminadas Dentre os patoacutegenos
e pragas mais comuns destacam-se o fungo Fusarium
subglutinans (Wollenw amp Reinking) PE Nelson (TOUSSON
amp MARASAS 1983) e a cochonilha Dysmicoccus brevipes
turfa casca curtida de eucalipto ou Pinus palha de arroz
carbonizada poacute de carvatildeo (GRATTAPAGLIA amp
MACHADO 1998) casca de arroz carbonizada poacute de
casca de coco seco e verde (SANTOS et al 2006) mistura
de areiaxaximhuacutemus (SOUZA JUNIOR et al 2001) solo
esterco bovino Plantmax e composto orgacircnico em
diferentes proporccedilotildees (MOREIRA et al 2006) dentre
outros Entretanto para o genoacutetipo em estudo as
tecnologias disponiacuteveis necessitam de adequaccedilatildeo para
serem mais eficientes e de baixo custo na produccedilatildeo
comercial de mudas
Objetivou-se neste trabalho avaliar quatro
diferentes substratos na produccedilatildeo de mudas do
abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L) Merr var
bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] para fins comerciais
utilizando-se propaacutegulos produzidos in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
Produccedilatildeo de mudas in vitro
Foram utilizados como fonte de explantes
propaacutegulos produzidos in vitro subcultivados a cada 60
dias utilizando-se o meacutetodo proposto por Correia et al
(1999) Os explantes consistiram de brotaccedilotildees com 2 cm de
comprimento transferidos para meio baacutesico de cultura
contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 3 de sacarose e em mg L-1 incluiacuteram-
se i-inositol 100 tiaminaHCl 02 aacutecido nicotiacutenico 005
piridoxinaHCl 005 e glicina 02 O meio de cultura foi
solidificado com 06 de aacutegar e o pH do meio foi ajustado
para 57 O meio foi distribuiacutedo em tubos de ensaio de 25 x
150 mm na quantidade de 125 mL por tubo
Os tubos foram esterilizados em autoclave a 121ordmC
e a 104 Kpa de pressatildeo por 15 minutos Apoacutes a inoculaccedilatildeo
as culturas foram mantidas em cacircmara de crescimento com
fotoperiacuteodo de 16 horas irradiacircncia de 32 mmol m-2 s-1
temperatura de 27oC durante 30 dias
As mudas foram preacute-aclimatizadas mediante
abertura das tampas dos frascos de cultura cinco dias
antes do transplantio para os respectivos substratos
Transplante e desenvolvimento de mudas micropropagadas
Mudas enraizadas e preacute-aclimatizadas de
abacaxizeiro ornamental foram retiradas dos tubos de
cultura e transplantadas em bandejas de isopor com 72
ceacutelulas contendo quatro diferentes substratos utilizados
como tratamentos 1) substrato comercial de fibra de coco
2) substrato de fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas
3) substrato Plantmax e 4) substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas composto por solo de cerrado areia
lavada esterco de gado curtido e palha de arroz
carbonizada em proporccedilotildees de 3111 vv com adiccedilatildeo de
300 g de calcaacuterio dolomiacutetico e de 300 g da formulaccedilatildeo 4-
30-16
Apenas 30 ceacutelulas por bandeja foram
transplantadas com mudas de abacaxizeiro ornamental (uma
muda por ceacutelula) deixando-se 42 ceacutelulas livres (sem planta)
para que natildeo houvesse competiccedilatildeo entre plantas nas
bandejas As bandejas permaneceram cobertas com
envoltoacuterio plaacutestico nos primeiros trecircs dias apoacutes o
transplante
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado com 10 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca
de raiz e tamanho de raiz e 30 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
altura e nuacutemero de folhas Os dados foram coletados aos
90 dias apoacutes o transplantio A anaacutelise de variacircncia do
experimento foi realizada com o auxiacutelio do programa
estatiacutestico SAS Institute Inc (SAS INSTITUTE 1988) e a
CUNHA FILHO F N da et al72
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
diferenciaccedilatildeo de meacutedias pelo teste de Tukey p 001 e
p 005
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
A anaacutelise conjunta do experimento indicou que
existiu homogeneidade de variacircncia natildeo sendo necessaacuteria
a transformaccedilatildeo de dados para a realizaccedilatildeo das anaacutelises A
anaacutelise de variacircncia (Tabelas 1 e 2) indicou que houve
efeito significativo dos diferentes substratos (teste de
Tukey p 005) sobre a massa fresca total massa fresca da
parte aeacuterea altura de plantas e nuacutemero total de folhas e
que natildeo houve diferenccedila significativa entre os diferentes
substratos com relaccedilatildeo agrave massa fresca de raiacutezes e o
comprimento de raiacutezes (Figuras 1 A-F)
Embora natildeo tenha havido diferenccedila significativa
(teste de Tukey p 005) entre os valores de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea nos tratamentos com
os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
comercial de fibra de coco e o Plantmax os valores
absolutos mais elevados desses paracircmetros foram obtidos
com o substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
(Figuras 1 A-B)
No substrato de fibra de coco-verde da Embrapa
Hortaliccedilas as plantas de abacaxizeiro ornamental tiveram
sempre pior performance em produccedilatildeo de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea natildeo se diferenciando
estatisticamente dos valores obtidos com o uso dos
substratos comerciais da Plantmax e de fibra de coco
Entretanto esses substratos foram significativamente
inferiores (teste de Tukey p 005) em relaccedilatildeo aos valores
obtidos com o uso do substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas (Figuras 1 A-B)
Os valores obtidos para as variaacuteveis massa fresca
de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes natildeo diferiram
estatisticamente entre si (teste de Tukey p 005) em
relaccedilatildeo aos quatro tratamentos (substratos analisados)
Os maiores valores absolutos dessas variaacuteveis foram obtidos
para a massa fresca de raiacutezes no substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e para o comprimento de raiacutezes no
substrato comercial de fibra de coco (Figuras 1 C-D)
TABELA 1 Resumo da anaacutelise de variacircncia para massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca deraiacutezes e comprimento de raiacutezes de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio
Fontes de variaccedilatildeo GL Massa fresca total
Massa fresca
da parte aeacuterea Massa fresca
de raiacutezes Comprimento
de raiacutezes
Tipo de substrato 03 673536 518934 02201ns 22382ns
Resiacuteduo 36 115108 80557 01328 13107
Total 39 - - - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade (ns) natildeo significativo
TABELA 2 Resumo da anaacutelise de variacircncia para altura e nuacutemero de folhas de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio Fontes de variaccedilatildeo GL
Altura de plantas Nuacutemero total de folhas
Tipo de substrato 003 1424357 526854
Resiacuteduo 124 50188 16807
Total 127 - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas 73
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
FIGURA 1 Variaacuteveis avaliadas na determinaccedilatildeo de eficiecircncia dos substratos Plantmax Embrapa Hortaliccedilas fibra decoco e fibra de coco-verde na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental -em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo A)massa fresca total B) massa fresca da parte aeacuterea C) massa fresca de raiacutezes D) comprimento de raiacutezes E) altura deplantas e F) nuacutemero total de folhas Meacutedias seguidas da mesma letra natildeo diferem significativamente entre si pelo testede Tukey Plt005
3653+b 0688
7459+ab 1414
9894+a 1229
6254+ab 0789
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a to
tal (
g)
A
3421+b 0664
6822+ab 1152
8930+a 0933
6002+ab 0763
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax Embrapa Hortaliccedilas Fibra de coco Fibra de coco verde
Tipo de substratos
Mas
sa fr
sca
da p
arte
aeacuter
ea (
g)
B
0568 + 0178 a
0298 + 0007 a0363 + 0120 a
0222 + 0039 a
0
02
04
06
08
1
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a de
rai
zes
(g)
C
12000 + 0338 a
12800 + 0387 a
11690 + 0468 a12020 + 0204 a
10
11
12
13
14
15
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Com
prim
ento
de
raiz
es (c
m)
D
11789 + 0412 a13800 + 0406 b
11088 + 0381 a
8797 + 0385 c
02468
1012141618
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Alt
ura
de p
lant
as (c
m)
E
5882 + 0173 c
7727 + 0191 b8818 + 0259 a
8143 + 0294 ab
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Nuacutem
ero
tota
l de
folh
as
F
Houve diferenccedila significativa (teste de Tukey
p 005) entre os valores meacutedios obtidos para a altura de
plantas e para o nuacutemero total de folhas nos quatro
tratamentos avaliados As plantas tiveram
significativamente maior desenvolvimento em altura no
substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas Natildeo houve
diferenccedila significativa entre os valores meacutedios em altura
de plantas nos substratos comerciais da Plantmax e de
fibra de coco Esses poreacutem foram diferentes dos valores
obtidos no substrato de fibra de coco-verde que
proporcionou significativamente o menor crescimento das
plantas (Figura 1 E)
Maiores meacutedias da variaacutevel nuacutemero total de folhas
foram obtidas com a utilizaccedilatildeo do substrato padronizado
CUNHA FILHO F N da et al74
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
da Embrapa Hortaliccedilas e do Plantmax Natildeo houve diferenccedila
significativa entre os valores meacutedios do nuacutemero total de
folhas nos substratos Plantmax e de fibra de coco comercial
mas esses diferiram estatisticamente dos obtidos no
substrato fibra de coco-verde O substrato de fibra de coco-
verde foi o que propiciou os menores valores da variaacutevel
nuacutemero total de folhas (Figura 1 F) Esses resultados
contradizem os relatados por Carrijo et al (2002) que
verificaram que os substratos contendo fibra de coco-verde
satildeo os mais indicados para produccedilatildeo de mudas de
hortaliccedilas e ornamentais em cultivo sem solo Correia et al
(2003) natildeo observaram diferenccedila significativa entre os
valores da massa fresca de raiacutezes de mudas de cajueiro
anatildeo precoce crescidas em substratos com adiccedilatildeo de poacute
de coco-verde ou de poacute de coco-maduro Santos et al
(2006) relataram que os substratos orgacircnicos contendo as
combinaccedilotildees de fibras de coco seco ou verde
proporcionaram baixo desenvolvimento na aclimatizaccedilatildeo
de mudas Heliconia rostrata Ruiz amp Pav provenientes
da micropropagaccedilatildeo Poreacutem Bezerra et al (2001) discordam
dos autores acima mencionados informando que os
substratos contendo fibras de coco-verde ou seco foram
os mais indicados respectivamente para o enraizamento
de mudas de crisacircntemo (Chrysanthemum sp) e de violeta
africana (Saintpaulia ionantha H Wendl)
Tambeacutem substrato contendo casca de arroz
carbonizada tem sido utilizado na produccedilatildeo de mudas
micropropagadas Weber et al (2003) relataram que o
substrato contendo esse componente misturado com
vermiculita e vermicomposto em proporccedilotildees de 111 foi a
melhor opccedilatildeo para aclimataccedilatildeo de mudas de abacaxizeiro
ornamental oriundas da cultura in vitro e transplantadas
para tubetes Esses autores ainda observaram que o uso
da mistura contendo casca de arroz carbonizada e poacute de
casca de coco em proporccedilotildees de 11 resultou em baixo
desempenho de mudas do abacaxizeiro ornamental em
funccedilatildeo da maacute agregaccedilatildeo fiacutesica baixa retenccedilatildeo de aacutegua e
limitaccedilatildeo nutricional da planta
Neste trabalho os resultados com o uso de substrato
contendo casca de arroz carbonizada sem a presenccedila de
fibras de coco seco ou verde tambeacutem proporcionou
excelente desenvolvimento de mudas do abacaxizeiro
ornamental o que indica uma provaacutevel incompatibilidade
das fibras de coco com outros componentes de substratos
na produccedilatildeo de mudas dessa ornamental
Natildeo houve diferenccedila significativa entre valores de
massa fresca de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes de
abacaxizeiro ornamental em relaccedilatildeo aos quatro substratos
analisados Poreacutem o maior valor absoluto em massa fresca
de raiacutezes foi obtido no substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas enquanto que o maior valor em comprimento
de raiacutezes no substrato comercial de fibra de coco
Com relaccedilatildeo agraves demais variaacuteveis analisadas
observou-se que a massa fresca total e a massa fresca da
parte aeacuterea tiveram performances mais significativas nos
substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas comercial
de fibra de coco e o da Plantmax enquanto que a altura de
plantas foi significativamente mais elevada no substrato
padronizado da Embrapa Hortaliccedilas e o nuacutemero total de
folhas mais significativo nos substratos padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e o Plantmax
CONCLUSOtildeES
Os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
fibra de coco comercial e o da Plantmax satildeo os mais
indicados para a produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro
ornamental para fins comerciais
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) as bolsas concedidas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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SANTOS M do D M dos et al76
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(Recebido em 8 de abril de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFEITO DE ISOPENTENILADENINA POR QUATROSUBCULTIVOS NA MULTIPLICACcedilAtildeO DE BROTACcedilOtildeES
DE ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL IN VITRO
EFFECT OF ISOPENTENYL ADENINE IN FOUR SUBCULTURES DURING THEIN VITRO MULTIPLICATION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE SHOOT
MARIA DO DESTERRO MENDES DOS SANTOS1 JOSEacute GETUacuteLIO DA SILVA FILHO2ANTONIO CARLOS TORRES3
1Bioacuteloga MSc em Botacircnica Departamento de Botacircnica Universidade de BrasiacuteliaUnB Cx P 4457 709190-970 Brasiacutelia DF mariacnphembrapabr2Engenheiro Agrocircnomo Especialista em Biotecnologia de Plantas Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF jgetuliocnphembrapabr3Engenheiro Agrocircnomo Embrapa Hortaliccedilas CxP 218 70359-970 Brasiacutelia DF
RESUMOObjetivou-se no presente trabalho foi o de avaliar o
efeito da adiccedilatildeo de concentraccedilotildees de 2iP em diferentes subcultivosna micropropagaccedilatildeo do abacaxizeiro ornamental var bracteatusBrotaccedilotildees com aproximadamente 10 cm de tamanho oriundosda cultura in vitro foram utilizados como explantes Os explantesforam inoculados em meio baacutesico liquido contendo sais mineraisMS 3 sacarose e em mg L-1 i-inositol 100 tiaminaHCl 01piridoxina HCl 05 aacutecido nicotiacutenico 005 glicina 20 formulaccedilatildeoliacutequida A esse meio foram adicionados concentraccedilotildees de 2iP(00 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro subcultivos(30 60 90 e 120 dias) Maacuteximo nuacutemero de brotaccedilotildees por explante(139) foi obtido em meio baacutesico com 16 mg L-1 de 2iP e no quartosubcultivo aos 120 dias Apoacutes a transferecircncia de brotaccedilotildeesindividualizadas para meio contendo ANA (00 05 10 15 2025 30 e 40 mg L-1) verificou-se a diferenciaccedilatildeo de raiacutezesadventiacutecias na porccedilatildeo basilar dos explantes
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatusmicropropagaccedilatildeo cultivo in vitro
ABSTRACTThe objective of this work was to evaluate the effect of
2iP addition in different subcultures during the micropropagationof ornamental pineapple var bracteatus Shoots with 10 cm inlength originated from in vitro culture were used as explantsThe explants were inoculated in liquid basal medium containingMS salts 3 sucrose 100 mg L-1 i-inositol 01 mg L-1
thiamineHCl 05 mg L-1 pyridoxineHCl 005 mg L-1 nicotinicacid and 20 mg L-1 glycine Different concentrations of 2iP (0005 10 and 20 mg L-1) in combination with four subcultures (3060 90 e 120 days) were used Maximum number of shoot formedper explant (139) was observed in basal medium with 16 mg L-1
2iP at the fourth subculture (120 days) After transferringindividual shoots to medium containing different concentrationsof NAA (00 05 10 15 20 25 30 and 40 mg L-1) mediaadventitious root formed in the basal portion of the explants
Index terms Ananas comosus var bracteatus micropropagationin vitro culture
INTRODUCcedilAtildeO
O abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L)
Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] eacute uma
planta de propagaccedilatildeo vegetativa com grande potencial
ornamental (D EECKENBRUGGE amp LEAL 2003) A
qualidade fitossanitaacuteria do campo de produccedilatildeo dessa
espeacutecie depende do material utilizado para sua propagaccedilatildeo
Assim sendo pode haver acuacutemulo entre plantios
sucessivos de patoacutegenos que satildeo transmitidos de um ciclo
de produccedilatildeo a outro via mudas contaminadas A
micropropagaccedilatildeo em larga escala de mudas sadias via
cultura de tecidos eacute uma estrateacutegia que possibilita
contornar a limitaccedilatildeo de mudas com alta qualidade
fitossanitaacuteria principalmente isentas de fusariose
(REINHARDT amp CUNHA 1999)
Em espeacutecies do gecircnero Ananaacutes os explantes mais
utilizados satildeo as gemas axilares das mudas do tipo coroa
ou filhote embora outros tipos de mudas possam ser usadas
A vantagem do uso de gemas axilares incluem boa
sobrevivecircncia em meio de cultura e com a quebra da
dominacircncia apical do broto haacute estiacutemulo para a formaccedilatildeo de
gemas muacuteltiplas (DREW 1980) A adiccedilatildeo de
fitorreguladores em geral eacute necessaacuteria para suprir as
possiacuteveis deficiecircncias dos niacuteveis endoacutegenos de hormocircnios
nos explantes in vitro Assim sendo recomenda-se a
combinaccedilatildeo de uma auxina com uma citocinina (SKOOG amp
MILLER 1957) Em geral a benzilaminopurina (BAP)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 77
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(ALMEIDA et al 2002 BARBOZA et al 2001 BE amp
DEBERG 2006) ou essa substacircncia em combinaccedilatildeo auxina
e aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (COSTA amp ZAFFARI 2005
GUERRA et al 1999) tecircm sido a(s) substacircncia(s)
reguladora(s) de crescimento mais usada(s) na formaccedilatildeo
de brotaccedilotildees de Ananas sp Entretanto em abacaxizeiro
ornamental a inclusatildeo de BAP no meio pode induzir o
aparecimento de variaccedilotildees somaclonais (RODRIGUES et
al 2007 SANTOS et al 2008) Tambeacutem a combinaccedilatildeo de
cinetina ANA e AIB (aacutecido indolbutiacuterico) foi empregada
para proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees em abacaxizeiro (KISS et
al 1995 MATHEWS amp RANGAN 1979)
Dada a escassez de informaccedilotildees sobre o efeito de
isopenteniladenina (2iP) na propagaccedilatildeo in vitro de espeacutecies
do gecircnero Ananas neste trabalho procurou-se otimizar a
concentraccedilatildeo de 2iP na produccedilatildeo de brotaccedilotildees de
abacaxizeiro ornamental em diferentes subcultivos e seu
subsequumlente enraizamento
MATERIAL E MEacuteTODOS
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Brotaccedilotildees
individualizadas com aproximadamente 1 cm de
comprimento estabelecidas a partir da cultura de gemas
axilares de mudas tipo coroa foram utilizadas como fonte
de explantes Os explantes foram cultivados em meio baacutesico
liacutequido contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) 3 sacarose e em mg L-1 tiaminaHCl 01
piridoxinaHCl 005 aacutecido nicotiacutenico 005 e glicina 20
(SANTOS 2008) O delineamento experimental empregado
foi o inteiramente ao acaso em esquema fatorial 4x4
referentes concentraccedilotildees de 2iP e subcultivos Ao meio
baacutesico foram adicionadas quatro concentraccedilotildees de BAP
(0 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro
subcultivos (30 60 90 e 120 dias) O pH dos meios foi
ajustado a 57 Foram utilizadas nove repeticcedilotildees por
tratamento sendo que cada parcela foi constituiacuteda por um
explante Inicialmente os explantes foram inoculados em
frascos de 250 mL de capacidade com 40mL de meio No
segundo subcultivo os propaacutegulos foram transferidos para
frascos idecircnticos com meio receacutem-preparado No terceiro
e quarto subcultivos foram utilizados frascos de 1000 mL
com 100 mL de meio As culturas foram mantidas em sala
de crescimento sob fotoperiacutedo de 16 horas com densidade
de fluxo de foacutetons de 32 mmol m-2 s-1 a 27plusmn2oC Em cada
subcultivo foi determinado o nuacutemero e a massa de mateacuteria
fresca das brotaccedilotildees formadas por explante inoculado
Os dados foram transformados para 1X e as
anaacutelises estatiacutestica foram realizadas com o auxiacutelio dos
programas SASStat e SISVAR versatildeo 301 Aplicou-se a
anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo grau para
avaliar o efeito da concentraccedilatildeo de 2iP sobre o nuacutemero e
massa da mateacuteria fresca de brotaccedilotildees em cada subcultivo
Enraizamento das brotaccedilotildees Foram utilizadas
brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental regeneradas in vitro
Os explantes com 10 a 20 cm de comprimento foram
inoculados em tubos de ensaio (25x150 mm) com 20 ml de
meio baacutesico 07 de aacutegar suplementado com diferentes
concentraccedilotildees de aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (00 05
10 15 20 25 30 e 40 mg L-1)
Apoacutes inoculaccedilatildeo as culturas foram mantidas em
cacircmara de crescimento nas condiccedilotildees descritas
anteriormente Apoacutes 30 dias da inoculaccedilatildeo foram avaliados
a percentagem de brotaccedilotildees enraizadas nuacutemero e massa
fresca das raiacutezes desenvolvida por brotaccedilatildeo altura da
planta e massa da mateacuteria fresca da parte aeacuterea O
delineamento experimental foi inteiramente casualizado com
29 repeticcedilotildees Cada parcela foi constituiacuteda de um tubo de
ensaio com um explante
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos programas SASStat e SISVAR versatildeo 301
Aplicou-se a anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo
grau para avaliar a variaccedilatildeo das variaacuteveis em funccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de ANA
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Na proliferaccedilatildeo de
brotaccedilotildees observou-se que os fatores concentraccedilatildeo de
2iP e o subcultivo isoladamente e em interaccedilatildeo afetam
significativamente (P 005) as variaacuteveis nuacutemero e massa
da mateacuteria fresca das brotaccedilotildees formadas A equaccedilatildeo que
SANTOS M do D M dos et al78
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
melhor se ajustou para explicar o efeito de 2iP nos diferentes
subcultivos para a variaacutevel nuacutemero de brotaccedilotildees foi a de
segundo grau (Figuras 1 e 2) A multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees
de abacaxizeiro ornamental in vitro eacute dependente de 2iP
no meio de cultura O nuacutemero de brotaccedilotildees por explante
responsivo de tamanho maior que 05 cm de comprimento
foi pequeno na primeira subcultura (30 dias) em todas as
concentraccedilotildees de 2iP testadas aumentando-se nos demais
subcultivos Aos 30 60 90 e 120 dias estimou-se que a
concentraccedilatildeo de 16 mg L-1 de 2iP produziu o maacuteximo de
brotaccedilotildees por explante inoculado respectivamente 20 42
64 e 139 (Figuras 1 e 2) Esses resultados estatildeo em
consonacircncia com a importacircncia da citocinina em vaacuterios
aspectos do crescimento e desenvolvimento da planta
tais como divisatildeo celular (SKOOG amp MILLER 1957) quebra
da dominacircncia apical e desenvolvimento das gemas laterais
(SACHS amp THIMMAN 1964) induccedilatildeo e multiplicaccedilatildeo de
brotaccedilotildees in vitro (GRATTAPAGLIA amp MACHADO
1998 JOSHI amp DHAWAN 2007 MURASHIGE 1974)
Tambeacutem o tipo de citocinina e a sua concentraccedilatildeo satildeo
determinantes no processo de micropropagaccedilatildeo
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998 MURASHIGE
1974) Em Ananas sp o BAP tem sido preferencialmente
usado na proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees in vitro (ALMEIDA
1994 ALMEIDA et al 2002 CRUZ 2000 ESCALONA et
al 1999 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
GUERRA et al 1999 MATHEWS et al 1976) Entretanto
Kiss et al (1995) relataram que tanto o BAP quanto a
cinetina foram efetivos para formaccedilatildeo de brotaccedilotildees em
abacaxizeiro comercial No presente trabalho o 2iP foi
adicionado ao meio devido a sua maior atividade bioloacutegica
comparada com o BAP e a cinetina (MURASHIGE 1974)
Tambeacutem para a variaacutevel massa da mateacuteria fresca
foi constatada a resposta quadraacutetica das doses de 2iP
(Figuras 3 e 4) Pelas equaccedilotildees de regressatildeo infere-se
que o 2iP estimula o acuacutemulo de massa fresca nas
brotaccedilotildees com o maacuteximo obtido com a concentraccedilatildeo de
18 mgL-1 desse fator nos subcultivos de 30 60 e 120 dias
com a produccedilatildeo de respectivamente 9 17 e 77 g por
explante inoculado No terceiro subcultivo aos 90 dias a
concentraccedilatildeo de 17 gL-1 de 2iP produziu o total de
biomassa de 45 g por explante Essa observaccedilatildeo estaacute em
concordacircncia com os trabalhos do efeito beneacutefico de
citocininas na produccedilatildeo de parte aeacuterea ateacute uma
concentraccedilatildeo oacutetima acima da qual seu excesso eacute inibitoacuterio
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1988)
FIGURA 1 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
y)dias 60(14585x = -247661x + 31353 +
R 20999 =
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e bo
taccedilotilde
es p
or
expl
ante
s
30 dias
60 dias
y (60 dias) = 14585x2 - 47661x + 31353
R2 = 0999
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 79
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 2 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
FIGURA 3 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
FIGURA 4 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa mateacuteria fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
y)dias 90(22847x = -2 73196x + 55784
R209477 =
y)dias 120(5072x = -21623x + 9464 +
R20954 =
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero m
eacutedio
de
brot
accedilatildeo
por
expl
ante
90 dias
120 dias
y (120 dias) = 50725x2 - 1623x + 9464
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
R2 = 0954
y(60 dias) = -38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (
g)
30 dias
60 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (60 dias) = - 38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
y)dias 90(12255x = -243239x + 75847 +
R209717 =
y)dias 120(19075x = -271029x + 11295 +
R2096 =
0
10
2030
40
50
6070
80
90
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (g
)
90 dias
120 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (120 dias) = 19075x2 - 71029x + 11295
R2 = 096
y (90 dias) = 12255x2 - 43239x + 75847R2 = 09717
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e br
otaccedil
atildeo p
or e
xpla
nte
SANTOS M do D M dos et al80
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
Enraizamento das brotaccedilotildees A induccedilatildeo
emergecircncia e alongamento das raiacutezes ocorreram em todos
os tratamentos Em meio sem regulador de crescimento
os propaacutegulos apresentaram raiacutezes desenvolvendo-se
de maneira pontual na extremidade seccionada dos
explantes (Figura 5) Em meio com ANA as raiacutezes
desenvolveram-se na porccedilatildeo basilar dos propaacutegulos em
forma de roseta Em geral a auxina eacute utilizada na fase de
enraizamento de propaacutegulos oriundos da cultura in vitro
de Ananas (BARBOZA et al 2004 CORREIA et al
2000 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
PRAXEDES et al 2001 TENG 1997) Entretanto o
enraizamento pode ser feito em meio sem regulador de
crescimento (KISS et al 1995 ZEPEDA amp SAGAWA
1981) A utilizaccedilatildeo de uma auxina na fase de enraizamento
induz agrave formaccedilatildeo de um sistema radicular mais
pronunciado que facilitaraacute a fase de aclimataccedilatildeo (Figura
5) Observou-se que a concentraccedilatildeo de ANA afetou
significativamente (P 005) o nuacutemero de raiacutezes massa
fresca das raiacutezes e da parte aeacuterea A altura da planta natildeo
foi afetada pela concentraccedilatildeo de ANA sendo o valor
de F natildeo significativo
Constatou-se uma relaccedilatildeo quadraacutetica entre as
variaacuteveis nuacutemero e massa da mateacuteria fresca das raiacutezes e da
parte aeacuterea e a concentraccedilatildeo de ANA A estimativa da
proliferaccedilatildeo de raiacutezes baseando-se no nuacutemero de raiacutezes
por explante aumentou com a concentraccedilatildeo de ANA
atingindo um maacuteximo de 119 com 22 mg L-1 de ANA
Concentraccedilotildees acima de 22 mg L-1 tendem a apresentar
um efeito inibitoacuterio na produccedilatildeo de raiacutezes (Figura 6)
Tambeacutem a massa da mateacuteria fresca das raiacutezes aumentou
com a concentraccedilatildeo de ANA com um maacuteximo de 023 g
obtida com a concentraccedilatildeo de 24 mg L-1 de ANA (Figura
7) Essa tendecircncia foi observada para a massa fresca da
parte aeacuterea onde a estimativa maacutexima da produccedilatildeo de
biomassa foi de 046 g por explante em meio com 19 mg L-1
de ANA (Figura 8)
Com relaccedilatildeo agrave altura das plantas natildeo houve
diferenccedila significativa entre as diferentes concentraccedilotildees
de ANA e essa variaacutevel
FIGURA 5 Brotaccedilotildees enraizadas em meio MS contendo diferentes concentraccedilotildees de ANA (mg L-1) aos 30 dias apoacutesa inoculaccedilatildeo
00 05 10 15 20 25 30 40
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 81
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 6 Variaccedilatildeo do nuacutemero de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 7 Variaccedilatildeo na massa da mateacuteria fresca de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 8 Variaccedilatildeo da massa de mateacuteria fresca da parte aeacuterea por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
y = -1202x2 + 5291x + 61504
R2 = 06865
0
2
4
6
8
10
12
14
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Nordm
de r
aiacuteze
s
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00282x2 + 01359x + 00704
R2 = 07573
0
005
01
015
02
025
03
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Mas
sa fr
esca
das
raiacutez
es
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00363x2 + 01407x + 03255
R2 = 0857
0
01
02
03
04
05
06
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Mas
sa fr
esca
da
part
e aeacute
rea
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
SANTOS M do D M dos et al82
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
CONCLUSOtildeES
No meio liacutequido contendo MS vitaminas 3 de
sacarose e 16 mg L-1 de 2iP obteacutem-se uma estimativa meacutedia
de 139 brotaccedilotildees por explante inoculado no final do quarto
subcultivo (120 dias)
Maior nuacutemero de raiacutezes adventiacutecias por explante eacute
estimado com a concentraccedilatildeo de 22 mg L-1 de ANA
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) pelas bolsas concedidas
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MOTHEacute G P B et al84
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
(Recebido em 25 de marccedilo de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFICIEcircNCIA FOTOQUIacuteMICA E CARACTERIacuteSTICAS DECRESCIMENTO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR (Saccharum officinarum L)CULTIVADA IN VITRO EM DIFERENTES CONCENTRACcedilOtildeES DE
SACAROSE E QUALIDADE DE LUZ
PHOTOCHEMICAL EFFICIENCY AND GROWTH CHARACTERISTICS OF SUGARCANE (Saccharum officinarum L) PLANTS CULTIVATED IN VITRO UNDER
DIFFERENT SUCROSE CONCENTRATIONS AND LIGHT QUALITY
1Bioacuteloga Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000 28015-620
Campos dos Goytacazes RJ georgiabecharayahoocombr2Engenheiro Agrocircnomo Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA
Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000
28015-620 Campos dos Goytacazes RJ alenauenfbr crespouenfbr campostuenfbr
RESUMODentre os diversos produtos agriacutecolas cultivados no
Estado do Rio de Janeiro a cana-de-accediluacutecar (Saccharumofficinarum L) eacute a cultura de maior importacircncia econocircmicaDiante dessa importacircncia na regiatildeo fluminense torna-senecessaacuteria cada vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividadedessa espeacutecie A produccedilatildeo em escala comercial de plantas decana-de-accediluacutecar pode ser beneficiada pela obtenccedilatildeo de mudas dealta qualidade e homogeneidade em curtos periacuteodos de tempo oque pode ocorrer pelo uso da micropropagaccedilatildeo A presenccedila decarboidrato eacute essencial para o enraizamento de muitas espeacuteciesin vitro sendo a sacarose o accediluacutecar mais utilizado namicropropagaccedilatildeo Poreacutem a necessidade desse composto nomeio de cultivo vem sendo discutida por alguns autoresObjetivou-se neste trabalho verificar o efeito da concentraccedilatildeode sacarose no meio de cultivo e a qualidade da luz sobre acapacidade fotossinteacutetica e as caracteriacutesticas de crescimentoem plantas de cana de accediluacutecar cultivadas in vitro Para tanto foiquantificada a emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila determinadaa massa seca de raiz e da parte aeacuterea a massa foliar especiacutefica eestimada a concentraccedilatildeo de clorofilas Os resultados obtidosmostraram que em cana de accediluacutecar cultivada in vitro em frascosfechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de sacarose no meio decultivo promoveu aumentos na mateacuteria seca da parte aeacuterea e daraiz na massa foliar especiacutefica e na intensidade de cor verde dasfolhas estudadas Natildeo houve modificaccedilatildeo na capacidadefotoquiacutemica maacutexima do PSII A justificativa para o natildeo-comprometimento da sacarose sobre as caracteriacutesticasrelacionadas agrave fotossiacutentese estudadas neste trabalho como oteor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o rendimentoquacircntico maacuteximo do PSII pode estar relacionada com a altacapacidade dessa espeacutecie em armazenar sacarose nos tecidos
Termos para indexaccedilatildeo Saccharum officinarum aclimatizaccedilatildeomeio de cultura fotossiacutentese
ABSTRACTThe State of Rio de Janeiro was one of the pioneers in
Brazil to set out the sugar cane activity which still represents animportant segment in the regional economy The production ofplants in commercial scale would be benefited by the attainmentof seedlings of high quality and homogeneity in short periods oftime which can be obtained using the micropropagation Thepresence of carbohydrate is essential for in vitro rooting of manyspecies with the sucrose being considered the most used sugarduring micropropagation despite the discussion by some authorsregarding its requirement The objective of this work was toevaluate the effect of sucrose concentrations in the culture mediumand light quality on the photosynthetic capacity and biometriccharacteristics on micropropagated sugar cane plants Chlorophyllfluorescence and contents were quantified root and shoot drymass and specific leaf mass were determined and chlorophyllconcentrations were estimated The results showed that theincrease in sucrose concentration during the in vitro cultivationof sugar cane in closed flasks promotes increase in the shootand root dry matter specific leaf mass and chlorophyll contentsNo modification of maximum PSII photochemistry capacity wasobserved The lack of sucrose effects on photosyntheticcharacteristics such chlorophyll contents and PSII yield may berelated to the high capacity of this specie to storage sucrose inthe tissues
Index terms Saccharum officinarum aclimatization culturemedium photosynthesis
Siacutembolos PSII fotossistema II SPAD Soil Plant AnalysisDevelopment BAP benzilaminopurina FFF fluxo de foacutetonsfotossinteacuteticos MPC medidor portaacutetil de clorofilas MFE massafoliar especiacutefica F
vF
maacutex Rendimento quacircntico maacuteximo do
fotossistema II MSPA massa seca parte aeacuterea MSR massaseca raiz AIB acido indol butirico ANAacido naftaleno aceacutetico
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 85
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
INTRODUCcedilAtildeO
A cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) foi
introduzida no Brasil no seacuteculo XVII com o objetivo de
quebrar o monopoacutelio mundial exercido pela Franccedila no
comeacutercio do accediluacutecar produzido nas Ilhas do Caribe O cultivo
da cana-de-accediluacutecar teve um grande aumento quando em
meados da deacutecada de 70 o Brasil criou o Programa Nacional
do Aacutelcool o qual teve como objetivo estimular a produccedilatildeo
do aacutelcool visando o atendimento das necessidades do
mercado interno e externo e da poliacutetica de combustiacuteveis
automotivos (MENEZES VEIGA et al 2006)
Atualmente a cana-de-accediluacutecar eacute uma das principais
culturas do panorama brasileiro e continua crescendo em
funccedilatildeo do consumo como fonte de energia e accediluacutecar Dentre
os diversos produtos agriacutecolas cultivados no estado do Rio
de Janeiro a cana-de-accediluacutecar eacute a cultura de maior importacircncia
econocircmica (MENEZES VEIGA et al 2006) Diante dessa
importacircncia na regiatildeo fluminense torna-se necessaacuteria cada
vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividade dessa espeacutecie
Uma das alternativas para essa elevaccedilatildeo eacute a formaccedilatildeo de
lavouras por meio do uso de mudas de excelente qualidade
Assim a micropropagaccedilatildeo eacute uma teacutecnica que pode contribuir
significativamente para a produccedilatildeo de mudas de cana de
accediluacutecar de alta qualidade Entre as diversas vantagens que
essa teacutecnica apresenta estaacute a produccedilatildeo raacutepida de mudas em
larga escala e a eliminaccedilatildeo de microrganismos potencialmente
fitopatogecircnicos
A micropropagaccedilatildeo tradicional tem como premissa
a presenccedila de sacarose no meio de cultivo uma vez que
esse composto eleva a produccedilatildeo de biomassa e pode
contribuir para aumentar o enraizamento de muitas espeacutecies
in vitro (GRATTAPAGALIA amp MACHADO 1990)
Entretanto vaacuterios autores tecircm sugerido que a fonte de
carboidrato no meio de cultura inibe o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono A adiccedilatildeo da sacarose ao meio
inibiu a fotossiacutentese potencial in vitro (LEES et al 1991)
reduziu a atividade da Rubisco (GROUT amp DONKIN 1987)
inibiu o acuacutemulo de clorofila (LA ROSA et al 1984) e
diminuiu a fixaccedilatildeo do carbono inorgacircnico por meio da
inibiccedilatildeo da atividade da carboxilase do fosfoenol-piruvato
e do Ciclo de Calvin (NEUMANN amp BENDER 1987)
Entretanto Khan et al (2006) trabalhando com cana-de-
accediluacutecar relataram que a maacutexima taxa de multiplicaccedilatildeo de
dois clones (AEC82-223 e NIA-2004) foi nas concentraccedilotildees
de 4 e 6 de sacarose no meio mostrando que nesses
clones cultivados em frascos fechados in vitro a sacarose
foi de fundamental importacircncia para a otimizaccedilatildeo do
crescimento da parte aeacuterea Esses autores mostraram que
a maior taxa de enraizamento foi em meio MS com 1 mg L-
1 de AIB e 6 de sacarose
Alguns autores para facilitar a aclimatizaccedilatildeo da
planta micropropagada sugerem adotar na uacuteltima fase da
cultura in vitro diminuir a concentraccedilatildeo de sacarose com
o objetivo de tentar elevar a taxa fotossinteacutetica e capacitar
a planta agrave nutriccedilatildeo autotroacutefica uma vez que a fonte de
carboidrato no meio de cultura pode inibir o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono Em vista disso Simmonds (1983)
obteve melhores resultados no enraizamento de porta-
enxerto de macieira ao reduzir a concentraccedilatildeo de sacarose
no meio de cultura para apenas 1 Contudo Wainwright
amp Scrace (1989) sugerem manter a sacarose no niacutevel
normalmente utilizado (3) ou ateacute mesmo aumentaacute-lo numa
fase anterior agrave aclimatizaccedilatildeo visando melhorar a qualidade
da planta Segundo esses autores o preacute-condicionamento
em altas concentraccedilotildees de sacarose aumentaria as reservas
de carboidratos armazenadas pelas folhas aumentando
assim a energia disponiacutevel para as placircntulas durante o
processo de aclimataccedilatildeo Para George amp Sherrington (1984)
no desenvolvimento in vitro de muitas espeacutecies a
assimilaccedilatildeo fotossinteacutetica eacute baixa fazendo com que as
culturas sejam dependentes do suporte externo de
carboidratos
Objetivou-se neste trabalho verificar o efeito da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo e da qualidade
de luz sobre a eficiecircncia fotoquiacutemica e as caracteriacutesticas de
crescimento da cana-de-accediluacutecar cultivada in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
O experimento foi realizado na unidade de pesquisa
em fotossiacutentese de plantas in vitro no Setor de Fisiologia
MOTHEacute G P B et al86
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
Vegetal Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal
na UENF Campos dos GoytacazesRJ
Como fonte de explante foram utilizadas placircntulas
de cana-de-accediluacutecar com dois a trecircs centiacutemetros de altura
proveniente de material vegetal jaacute em fase de multiplicaccedilatildeo
contendo meio MS modificado (02 mg L-1 de fonte de
nitrogecircnio combinado 01 mg L-1 de cinetina 02 mg L-1 de
BAP 1 mg L-1 de Tiamina 100 mg L-1 de mio-inositol e 20 g
L-1 de sacarose) em condiccedilotildees de perfilhamento O material
foi obtido no Laboratoacuterio de Cultura de Tecido do Campus
Dr Leonel Miranda UFRRJ O meio de cultura utilizado
para o recultivo foi o MS padratildeo (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 100 mg L-1 de mio-inositol 7 g L-1 de
Agar (Vetec) e sem adiccedilatildeo de reguladores de crescimento
Os tratamentos consistiram de uma combinaccedilatildeo bifatorial
de seis concentraccedilotildees de sacarose no meio (0 10 20 30
40 e 50 g L-1) e dois tipos de luz (lacircmpada fluorescente
branca 40w luz branca com irradiacircncia de 948 igravemol m-2 s-
1 e lacircmpada fluorescente tipo Grolux 40w luz vermelha
com irradiacircncia de 966 igravemol m-2 s-1) O pH do meio foi
ajustado para 58 antes da inclusatildeo do aacutegar e da
autoclavagem (15 atm a 120ordmC por 20 min) A parcela
experimental consistiu de frascos tipo baby food
contendo 50 mL do meio MS nas diferentes
concentraccedilotildees de sacarose O delineamento experimental
foi inteiramente casualizado com trecircs repeticcedilotildees em que
cada parcela consistiu de um frasco com duas plantas
Apoacutes a inoculaccedilatildeo os explantes foram cultivados em
sala de crescimento a uma temperatura 25ordm C plusmn 10 a um
fluxo de foacutetons fotossinteacuteticos de 120 a 150 igravemol m-2 s-1
com 16h de fotoperiacuteodo
Aos vinte e oito dias apoacutes a inoculaccedilatildeo (DAI) foi
utilizada a 2ordm eou 3ordm folha mais expandida para as anaacutelises
para determinaccedilatildeo do rendimento quacircntico maacuteximo do PSII
(FvF
max) (apoacutes adaptaccedilatildeo da folha ao escuro por 30
minutos com auxiacutelio de pinccedilas) por meio de um fluoriacutemetro
natildeo modulado PEA (Plant Efficiency Analyser - Hansatech
Ltd King s Lynn Norfolk UK)
A medida de intensidade de verde (relacionada com
o teor de clorofilas totais) foi feita nesta mesma eacutepoca por
meio do medidor portaacutetil do teor de clorofila SPAD 502
Chlorophyll Meter Minolta Japatildeo Os valores da
intensidade do verde foram provenientes da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha
A massa foliar especiacutefica feita aos 28 dias apoacutes o
cultivo in vitro foi determinada a partir da divisatildeo da massa
seca da folha de uma parte do limbo foliar pela respectiva
aacuterea dessa parte
No final do experimento foi determinada a massa
seca das partes aeacuterea e da raiz das plantas Essas partes
foram colocadas em estufa com ventilaccedilatildeo forccedilada a 70ordm C
por 48 h A partir dos dados da massa seca estimou-se a
relaccedilatildeo parte aeacuterearaiz (massa seca da parte aeacuterea massa
seca das raiacutezes)
Os dados experimentais foram submetidos a uma
anaacutelise de variacircncia e para cada tratamento foram
avaliados trecircs frascos Foram realizadas duas repeticcedilotildees
para cada frasco e seis plantas foram utilizadas
provenientes de trecircs frascos Os dados de cada avaliaccedilatildeo
foram analisados estatisticamente por teste Tukey a 5
e os resultados expressos como meacutedia (plusmn erro-padratildeo) de
seis repeticcedilotildees
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os diferentes tratamentos de luz e dosagem de
sacarose no meio de cultura influenciaram a produccedilatildeo de
biomassa na parte aeacuterea mostrando que maiores
concentraccedilotildees de sacarose produziram maior biomassa
(figuras 2 e 3) O tratamento controle (0 g L-1 de sacarose)
natildeo produziu biomassa suficiente para as anaacutelises
Portanto as plantas-controle cultivadas nessas
condiccedilotildees requerem a adiccedilatildeo de carboidratos para suprir
suas necessidades metaboacutelicas quer participando na
geraccedilatildeo de energia ou como fonte de esqueletos
carbocircnicos para vaacuterios processos bioquiacutemicos sugerindo
que as condiccedilotildees encontradas no frasco de cultivo e na
sala de crescimento foram ineficientes para as plantas-
controle desenvolverem condiccedilotildees de realizar
fotossiacutentese e consequumlentemente produzir biomassa
(Figura 1)
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 87
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 1 Plantas de cana-de-accediluacutecar cultivada em diferentes concentraccedilotildees de sacarose apoacutes 28 dias de cultivo (A)0 g L-1 (B) 10 g L-1 (C) 20 g L-1 (D) 30 g L-1 (E) 40 g L-1 e (F) 50 g L-1
Os resultados obtidos por meio da anaacutelise de
variacircncia para as cinco diferentes concentraccedilotildees de
sacarose (10 20 30 40 e 50 g L-1) no meio demonstraram
que para a caracteriacutestica massa seca da parte aeacuterea (MSPA)
houve uma resposta crescente em que doses crescentes
de sacarose promoveram acreacutescimos de biomassa seca
(Figura 2A) A concentraccedilatildeo 10 g L-1 diferenciou
significativamente das concentraccedilotildees de 40 g L-1 e 50 g L-
1 produzindo uma menor MSPA 0039 0101 e 0135g
respectivamente (Figura 2A) Dados semelhantes foram
obtidos em morangueiros batata menta e videira por
(RIQUELME et al 1991) e por (NICOLOSO 2003) em que
nesse trabalho a elevaccedilatildeo da concentraccedilatildeo de sacarose
de 30 ateacute 60 g L-1 promoveu maior produccedilatildeo de biomassa
dos oacutergatildeos de Pfaffia glomerata (Spreng) Pedersen
Com relaccedilatildeo agrave mateacuteria seca da raiz (MSR) as
diferenccedilas de concentraccedilatildeo de sacarose influenciaram
significativamente os resultados As menores
concentraccedilotildees (10 20 e 30 g L-1) somente diferenciaram
significativamente da maior concentraccedilatildeo (50 g L-1) que
produziu valores 0084g de MSR (Figura 2b) Pelos
resultados foi verificado que a presenccedila de sacarose
mostrou-se fundamental para o desenvolvimento da parte
aeacuterea e das raiacutezes da cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro
De fato Khan et al (2008) mostraram que o meio MS com
meia forccedila suplementado com reguladores de crescimento
(AIB e ANA) e 60 g L-1 de sacarose proporcionou maior
enraizamento em 3 variedades elite de cana-de-accediluacutecar Khan
et al (2006) tambeacutem indicaram a importacircncia da sacarose
no crescimento da parte aeacuterea em clones dessa espeacutecie
George (1996) relata que para formaccedilatildeo de raiacutezes in vitro
haacute necessidade de energia e carboidratos sendo esses
fornecidos por meio da fotossiacutentese (em condiccedilotildees
autotroacuteficas) ou oriunda de uma fonte exoacutegena de accediluacutecar
(em sistemas heterotroacuteficos ou mixotroacuteficos) O autor
verificou ainda que o aumento da concentraccedilatildeo de
sacarose de modo geral estimula o crescimento e a
formaccedilatildeo de raiacutezes de algumas espeacutecies Jaacute em outros
trabalhos na fase de enraizamento a reduccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultura vem sendo
citada como beneacutefica na melhoria da qualidade do sistema
radicular bem como na sobrevivecircncia das placircntulas
transplantadas (ANDRADE 1998)
Com relaccedilatildeo agrave MSPAMSR os tratamentos natildeo
apresentaram diferenccedila significativa apontando uma
relaccedilatildeo direta entre o crescimento das raiacutezes e da parte
MOTHEacute G P B et al88
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 2 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e as diferentes concentraccedilotildees de sacarose no meio de cultivoindependente da luz (A) Massa seca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa seca raiz (MSR) (C) Razatildeo massa seca da parteaeacuterearaiacutezes (MSPAMSR) (D) Massa foliar especiacutefica (MFE) (E) Teor estimado de clorofilas totais (valores de MPC)(F) Rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (F
vF
m) em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Cada
siacutembolo representa a meacutedia de seis repeticcedilotildees em MSPA MSR MSPA MSR e MFE e oito repeticcedilotildees em Valores deMPC e da relaccedilatildeo F
vF
m Meacutedias seguidas pela mesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
aeacuterea Essa relaccedilatildeo eacute de fundamental importacircncia para a
organizaccedilatildeo dos processos fisioloacutegicos e desenvolvimento
das plantas (TAIZ amp ZEIGER 2002) Essas partes estatildeo
relacionadas entre si e essa relaccedilatildeo eacute devida agrave dependecircncia
nutricional e fitohormonal da parte aeacuterea com a raiz
(SALISBURY amp ROSS 1992) (Figura 2c)
As diferentes concentraccedilotildees de sacarose
influenciaram a massa foliar especiacutefica (MFE) a qual
representa a quantidade de massa seca por unidade de
aacuterea da folha estimando a proporccedilatildeo relativa da superfiacutecie
assimilatoacuteria e os tecidos de sustentaccedilatildeo e condutores da
folha aleacutem de poder ser correlacionada positivamente com
a taxa fotossinteacutetica (CRUZ et al 2004) A menor
concentraccedilatildeo de sacarose apresentou o menor valor (148
g m-2) o que indica que a ausecircncia de sacarose pode
comprometer a espessura foliar bem como a capacidade
da maquinaria fotossinteacutetica (Figura 2d)
O teor de clorofila foi estimado por meio do medidor
portatil de clorofila (MPC) Os valores encontrados da
intensidade do verde foram oriundos da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha As diferentes concentraccedilotildees de
sacarose no meio de cultivo influenciaram a intensidade
de verde (Figura 2e) em que a maior concentraccedilatildeo de
sacarose apresentou o maior valor do MPC (336)
0
003
006
009
012
015
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
A (g
)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MFE
(gm
2)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
0
002
004
006
008
01
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSR
(g)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
20
22
24
26
28
30
32
34
36
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
Val
ores
de
MPC
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
000
100
200
300
400
500
600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
AM
SR
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
062
064
066
068
07
072
074
076
078
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
FvF
m
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
A
B
D
C
E
F
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 89
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
diferenciando significativamente dos demais tratamentos
Esses valores estatildeo relacionados com uma maior
quantidade de clorofilas totais em maiores teores de
sacarose Nesse caso em plantas de cana-de-accediluacutecar a
elevaccedilatildeo no teor de sacarose contribui para o incremento
do teor de clorofilas a partir de 30 g L-1 desse composto no
meio de cultivo
Com relaccedilatildeo agrave atividade do PSII avaliada por meio
da emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila a as plantas de
cana-de-accediluacutecar apresentaram alteraccedilotildees com relaccedilatildeo aos
tratamentos utilizados Estatisticamente os valores
menores da eficiecircncia fotoquiacutemica maacutexima do PSII (FvF
m)
foram verificados na concentraccedilatildeo de 20 g L-1 de sacarose
(Figura 2f) Com exceccedilatildeo das plantas crescidas nessa
concentraccedilatildeo de sacarose as demais plantas cultivadas
em meios com maiores concentraccedilotildees de sacarose natildeo
apresentaram diferenccedilas significativas para a caracteriacutestica
FvF
m Por meio dos resultados relacionados aos efeitos
da concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo sobre as
caracteriacutesticas de crescimento a produccedilatildeo de biomassa
estaria mais relacionada agrave oferta de carbono no meio de
cultivo do que a eficiecircncia na maquinaria fotoquiacutemica das
plantas
A qualidade do fluxo de foacutetons fotossinteacutetico (FFF)
teve influecircncia relevante nas caracteriacutesticas MSPA MSR
MFE e valores do MPC A luz considerada vermelha emitida
pelas lacircmpadas GroLux proporcionou maiores valores das
caracteriacutesticas supracitadas Tais resultados poderiam estar
relacionados a um maior ganho de carbono por meio de um
aumento da taxa fotossinteacutetica liacutequida eou indiretamente
causado por alteraccedilotildees fitormonais causadas pela
modificaccedilatildeo no espectro luminoso (CAMPELL amp
BONNER 1986) Ainda na presenccedila da luz vermelha houve
favorecimento para a produccedilatildeo de biomassa tanto na parte
FIGURA 3 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e os diferentes tipos de luz (Branca e Vermelha) (A) Massaseca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa foliar especifico (MFE) (C) Massa seca raiz (MSR) e (D) Teor estimado declorofilas totais (Valores de MPC) Cada siacutembolo representa a meacutedia sendo 15 repeticcedilotildees em MSPA MSR e valores deMPC e 20 repeticcedilotildees em MFE em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Meacutedias seguidas pelamesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
14
16
18
20
22
LUZ
MFE
(gm
2)
Luz branca
Luz vermelha
0
001
002
003
004
005
LUZ
MSR
(g)
Luz branca
Luz vermelha
002
004
006
008
01
012
014
LUZ
MSP
A (g
)
Luz branca
Luz vermelha
20
22
24
26
28
30
LUZ
Val
ores
de
MP
C
Luz branca
Luz vermelha
A
C
B
D
MOTHEacute G P B et al90
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
aeacuterea como no sistema radicular A luz branca apresenta
uma composiccedilatildeo espectral que pode variar e causar
respostas diferenciadas na cultura in vitro A
predominacircncia na emissatildeo de foacutetons na regiatildeo do vermelho
ateacute o azul pode estimular a induccedilatildeo de calos quebrar a
moleacutecula de AIA e ainda estimular a induccedilatildeo de brotos
(BARRUETO CID 2001 CHAMOVITZ amp DENG 1996)
As plantas cultivadas em maiores concentraccedilotildees
(40 e 50 gL-1) de sacarose e aclimatadas em luz vermelha
tiveram melhores resultados do que nos outros tratamentos
(Figura 2 e 3)
CONCLUSOtildeES
Em cana-de-accediluacutecar cultivada em condiccedilotildees in vitro
e em frascos fechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de
sacarose no meio de cultivo promoveu aumentos na
mateacuteria seca da parte aeacuterea e da raiz na massa foliar
especiacutefica e na intensidade de cor verde das folhas
estudadas Natildeo houve alteraccedilatildeo na eficiecircncia fotoquiacutemica
maacutexima do PSII A luz vermelha associada agrave concentraccedilotildees
de sacarose de 40 e 50gL-1 parece ter uma resposta
somatoacuteria tanto na produccedilatildeo de parte aeacuterea e raiz quanto
na massa foliar especiacutefica e no teor de clorofila
A justificativa para o natildeo-comprometimento da
sacarose no meio sobre as caracteriacutesticas relacionadas agrave
fotossiacutentese estudadas neste trabalho como exemplo o
teor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o
rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (FvF
m) pode estar
relacionada com a alta capacidade dessa espeacutecie em
armazenar sacarose nos tecidos
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
(Recebido em 20 de junho de 2008 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EFFECTS OF AUXINS AND CYTOKININS ON IN VITRODEVELOPMENT OF Alpinia purpurata K SCHUM AND
PHENOLIC COMPOUNDS PRODUCTION
EFEITO DE AUXINAS E CITOCININAS NO DESENVOLVIMENTO IN VITRO DEAlpinia purpurata K SCHUM E PRODUCcedilAtildeO DE SUBSTAcircNCIAS FENOacuteLICAS
CRISTIANE PIMENTEL VICTOacuteRIO1 IACINETE PAMPLONA DA CRUZ2 ALICE SATO3RICARDO MACHADO KUSTER4 CELSO LUIZ SALGUEIRO LAGE5
1Doutora em Ciecircncias Bioloacutegicas (Biofiacutesica) Instituto de Biofiacutesica Carlos Chagas FilhoLab Fisiologia Vegetal Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050 21952-590 Rio de Janeiro RJ crispvbiofufrjbr
2Estudante de Farmaacutecia bolsista PIBICUFRJ3Doutora em Biotecnologia Vegetal Prof Dep Botacircnica Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro Av Pasteur 458
22290-040 Rio de Janeiro RJ alicesatouniriobr4Doutor Prof Laboratoacuterio de Fitoquiacutemica Nuacutecleo de Pesquisas de Produtos Naturais (NPPN) Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco H 21941-902 Rio de Janeiro RJ kusternppnufrjbr
5Doutor Prof IBCCFo Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050
21952-590 Rio de Janeiro RJ clslagebiofufrjbr
ABSTRACTAlpinia purpurata K Schum is largely used in
ornamentation and scarcely present itself in folk medicine Studiesusing plant tissue culture technique under standardized conditionpermit to evaluate plant physiological morphological andphytochemical responses to exogenous plant growth regulatorThis work consisted in the establishment of in vitro A purpurataplants using different concentrations of auxin and cytokinins inmg L-1 IAA 2 TDZ 2 and 4 IAA 2 + TDZ 2 IAA 2 + BAP 2Additionally it was determined the content of phenoliccompounds in the leaves of field and in vitro plants using Folin-Ciocalteau method Buds from inflorescence A purpurata weredisinfested and introduced in solid MS medium to initiate culturesThe direct organogenesis process was fast and satisfactoryproducing elongated plants with a developed radicular systemThe rooting percentage reached 100 for all treatments after 2months Cytokinins and auxins were important for the increasingof the leaves quantity (42 to 51) and shoot elongation (40 cm)Liquid MS0 presented the favorable results for fastmicropropagation and higher production of shoots providingplants ready to be acclimatized In vitro plants cultivated underMS0 produced 93 of phenolic compounds in comparison withfield plants (100) Through High Performance LiquidChromatographic it was verified similar chromatographic profilesbetween field and in vitro plant extracts
Index terms Folin-Ciocalteau HPLC micropropagation tissueculture Zingiberaceae Alpinia purpurata
RESUMOAlpinia purpurata K Schum eacute uma espeacutecie muito
utilizada como ornamental e possui escassas indicaccedilotildees de usona medicina popular Estudos utilizando teacutecnicas de cultura detecidos vegetais permitem a partir de condiccedilotildees padronizadas
avaliar as respostas fisioloacutegicas morfoloacutegicas e fitoquiacutemicas dosvegetais aos fitorreguladores exoacutegenos Este trabalho consistiuno estabelecimento de plantas de A purpurata in vitro utilizando-se diferentes concentraccedilotildees de auxina e citocininas (mg L-1) AIA2 TDZ 2 e 4 AIA 2 + TDZ 2 AIA 2 + BAP 2 Verificou-setambeacutem o conteuacutedo de substacircncias fenoacutelicas nas folhas de plantasde campo e in vitro atraveacutes do meacutetodo de Folin-CiocalteauBrotos oriundos da inflorescecircncia de A purpurata foramdesinfestados e introduzidos em meio MS soacutelido para iniciar asculturas O processo de organogecircnese direta foi raacutepido esatisfatoacuterio produzindo plantas alongadas e com sistema radiculardesenvolvido A porcentagem de enraizamento atingiu 100 paratodos os tratamentos ao final de 2 meses As citocininas e auxinasforam importantes para incrementar o nuacutemero de folhas (42 a51) e alongamento dos brotos (40 cm) em comparaccedilatildeo com omeio controle O MS0 liacutequido foi o mais favoraacutevel para raacutepidapropagaccedilatildeo in vitro e maior produccedilatildeo de brotos com suprimentode plantas aptas a serem aclimatizadas Plantas in vitro cultivadasem meio MS0 produziram 93 de fenoacuteis totais em relaccedilatildeo agravesplantas de campo (100) Atraveacutes da Cromatografia Liacutequida deAlta Eficiecircncia foi verificada semelhanccedila entre os perfiscromatograacuteficos dos extratos de plantas de campo e in vitro
Termos para indexaccedilatildeo Folin-Ciocalteau CLAEmicropropagaccedilatildeo cultura de tecidos vegetais ZingiberaceaeAlpinia purpurata
INTRODUCTION
Alpinia purpurata K Schum is widely used as
ornamental plant in several tropical and subtropical areas
with high international market demand (KRESS et al 2002
SANGWANANGKUL et al 2008) In folk medicine it is
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 93
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
used for cough in Venezuela and presents antibacterial
activity (BERMUacuteDEZ amp VELAacuteSQUEZ 2002 ZOGHBI et
al 1999) Recent studies have showed the phytochemical
potential of this species (VICTOacuteRIO et al 2007 2008)
The vegetative propagation through rhizome is the
main way of reproduction of this species According to
Moroacuten (1987) for the propagation of A purpurata in
greenhouse the time is twice more than in in vitro systems
Plant tissue culture techniques have been employed in
Brazil since 1950 and the main advantages include the
continuous and fast production of aseptic and selected
plants These techniques permit a commercial-scale
production of plants (ROUT et al 2006) and some studies
have showed them as an alternative for optimizing
secondary metabolites production (RAO amp
RAVISHANKAR 2002) The micropropagation of A
purpurata supplies may be a source for ornamental and
medicinal raw material (MULABAGAL amp TSAY 2004
POMPELLI et al 2007)
Addition of auxins and cytokinins in the culture
media are essential to improve and regulate growth and
morphogenesis of the cultures (CHITRA amp PADMAJA
2005 KYOZUKA 2007) Besides several studies have
reported the effects of plant growth regulators in in vitro
phenolic production (SANTOS-GOMES et al 2002
THIEM 2003) We intended to develop a protocol for in
vitro production of A purpurata plants and to evaluate
the effects of auxins and cytokinins on plant development
and compounds phenolic production
MATERIAL AND METHODS
Plant Material
Buds from inflorescence of donor plants of Alpinia
purpurata red inflorescence were used as source of plant
material to initiate in vitro cultures Voucher specimen was
deposited at the Herbarium of Rio de Janeiro Botanical
Garden under accession number RB 433484 Buds were
collected and washed with running water using nylon
brush for removing residues The sterilization process was
concluded in four steps in sterile ambient after dissection
of leaves 20 of commercial bleach solution for 40 min
followed by immersion in distilled water plus commercial
detergent solution for 15 min dipped in 70 ethanol
washed for 10 min in 30 of commercial bleach solution
and rinsed with sterile distilled water three after each step
Establishment of in vitro cultures
Explants were subcultured into glasses (16 x 8 cm)
containing 50 ml of culture medium Murashige amp Skoog
(1962) supplemented with 3 of sucrose 148 igraveM thiamine-
Different letters indicate significant differences at plt 005 level Tukey s test n e 30
VICTOacuteRIO C P et al96
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
FIGURE 2 In vitro development of Alpinia purpurata plants in MS medium under different plant growth regulators(mgl-1) (A) Sequence of development 1 month (I) 2 months (II) and 3 months (III) (B) shoot height after 2 months (C)shoot height and (D) percentage of shoots after 3 months Different letters indicate significant differences at plt 005level Tukey s test n e 30 100 correspond to 30 shoots per explant within 1 year
advantage of in vitro production of secondary metabolites
is the possibility to control environment and nutritional
factors Data show high level of phenolics in in vitro
cultures of A purpurata (93) compared with field plants
(100) (Figure 3A) Through reversed-phase HPLC was
found similarity between field and in vitro plants profiles
(Figure 3B-C) The peaks 1 2 and 3 presented
characteristics of phenolic compounds verified through
UV spectra obtained by HPLC A purpurata is not currently
used in folk medicine and these results may indicate the
presence of therapeutic resource in its phytochemistry
The preliminary investigation of phenolic in
organogenic cultures of A purpurata using Folin-
Ciocalteau reagent and HPLC analysis brings perspectives
about the production of antioxidant compounds by this
species In addition the establishment of tissue culture of
A purpurata may be a good alternative to produce aseptic
plants and its bioactive metabolites
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 97
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
ACKNOWLEDGEMENTS
C P Victoacuterio acknowledges the fellowship from
CAPES and PROEX financial support
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Curva de crescimento atividade da fenilalanina 99
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
(Recebido em 23 de janeiro de 2008 e aprovado em 7 de outubro de 2008)
CURVA DE CRESCIMENTO ATIVIDADE DA FENILALANINA AMOcircNIA-LIASE E TEORES DE FENOacuteIS E TANINOS TOTAIS EM CALOS DE
GROWTH CURVE PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE ACTIVITY AND TOTALPHENOL LEVELS IN CALLUS OF Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville
(FABACEAE-MIMOSOIDEAE)
ANA HORTEcircNCIA FONSEcircCA CASTRO1 MILLER MARANI LIMA2 RENATO PAIVA3 AMAURI ALVES DE ALVARENGA4 MIRELLE OLIVEIRA SOacuteTER5
1Doutora Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG2Bolsista ICFAPEMIG Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG3PhD Universidade Federal de LavrasUFLA 37200-000 Lavras MG4Doutor Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 37200-000 Lavras MG renpaivauflabr5Acadecircmica Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG
RESUMOObjetivou-se estabelecer a curva de crescimento e avaliar
a atividade da fenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis etaninos totais em calos de barbatimatildeo explantes foliares foraminoculados em meio MS suplementado com 30 g L-1 sacarose eacrescidos de 905 M de 24-D O crescimento a atividade dafenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis e taninos totaisforam avaliados a cada 10 dias durante 110 dias A curva decrescimento dos calos apresentou um padratildeo sigmoidal com cincofases distintas Os teores meacutedios de fenoacuteis totais acompanharamas variaccedilotildees observadas para a atividade enzimaacutetica Alta atividadee maiores teores de fenoacuteis totais foram observados no explanteinicial com reduccedilotildees progressivas ateacute a fase linear Na faseestacionaacuteria observaram-se incrementos importantes naatividadeda fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais Natildeo foidetectada a presenccedila de taninos totais nos calos
Termos para indexaccedilatildeo Barbatimatildeo cultivo in vitro plantamedicinal Stryphnodendron adstringens
ABSTRACTIn order to establish growth curve phenylalanine ammonia-
lyase (PAL) activity and total phenol and tannin levels inStryphnodendron adstringens leaf explants were inoculated inMS medium supplemented with 30 g L-1 sucrose and 905 M24-D The growth PAL activity and total phenol and tanninlevels were evaluated at 10 days intervals during 110 days Callusgrowth curve presented a sigmoid shape with five different phasesAverage levels of total phenol followed the changes observed forenzymatic activity High activity and higher levels of total phenolwere observed in initial explants with progressive reductions untilthe linear phase Increases in phenylalanine ammonia-lyase activityand total phenols levels were observed in stationary phase Notannins were observed on callus
Index terms Stryphnodendron adstringens In vitro CultureMedicinal Plant
INTRODUCcedilAtildeO
Atualmente um consideraacutevel esforccedilo tem sido feito
com o intuito de se produzir fitoteraacutepicos com maiores
concentraccedilotildees de substacircncias ativas vegetais atraveacutes de
culturas de ceacutelulas ou tecidos Segundo Taniguchi et al
(2002) dentre as diferentes teacutecnicas de cultivo in vitro a
cultura de calos tem apresentado grande importacircncia para
a propagaccedilatildeo e produccedilatildeo in vitro de espeacutecies de interesse
medicinal A desdiferenciaccedilatildeo e induccedilatildeo de regeneraccedilatildeo
das plantas a partir de calos satildeo muitas vezes processos
difiacuteceis de serem obtidos e podem demandar algum tempo
As auxinas tecircm sido amplamente utilizadas nos meios de
cultivo para a induccedilatildeo de calos e geralmente dependendo
da concentraccedilatildeo causam elongaccedilatildeo celular e expansatildeo ou
divisatildeo celular Em geral com o uso de baixas
concentraccedilotildees de auxinas predomina a formaccedilatildeo de raiacutezes
adventiacutecias enquanto que altas concentraccedilotildees induzem a
formaccedilatildeo de calos A interaccedilatildeo entre auxinas e citocininas
tambeacutem eacute muito utilizada para a induccedilatildeo de calogecircnese
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998)
Durante a calogecircnese eacute importante estabelecer-se
a curva de crescimento de calos o que propicia a
identificaccedilatildeo das fases distintas de crescimento da espeacutecie
A partir deste estudo pocircde-se determinar o momento exato
de repicagem dos calos para um meio fresco ou a
CASTRO A H F et al100
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
possibilidade de sua utilizaccedilatildeo em suspensotildees celulares
visando a otimizaccedilatildeo da produccedilatildeo de metaboacutelitos
secundaacuterios em espeacutecies medicinais (GEORGE 1996) O
crescimento in vitro de calos geralmente apresenta um
padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas Segundo Smith
(1992) a fase lag se caracteriza como fase de maior produccedilatildeo
de energia correspondendo ao periacuteodo em que as ceacutelulas
se preparam para a divisatildeo visando sua expansatildeo Ocorre o
iniacutecio da mobilizaccedilatildeo de metaboacutelitos primaacuterios sem qualquer
divisatildeo celular siacutentese de proteiacutenas e de compostos
especiacuteficos Essa fase resulta em um pequeno crescimento
dos calos A fase exponencial eacute biossinteacutetica Observa-se o
maior crescimento dos calos devido agrave maacutexima taxa de divisatildeo
celular caracteriacutestica desse periacuteodo O nuacutemero de ceacutelulas
aumenta Na fase linear haacute diminuiccedilatildeo da divisatildeo celular
mas aumento de volume celular e a fase de desaceleraccedilatildeo eacute
o momento em que as culturas devem ser transferidas para
outro meio devido agrave reduccedilatildeo de nutrientes produccedilatildeo de
produtos toacutexicos secagem do aacutegar e reduccedilatildeo do oxigecircnio
no interior das ceacutelulas Na fase estacionaacuteria ocorre maior
acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
O barbatimatildeo [Stryphnodendron adstringens
(Mart) Coville Fabaceae-Mimosoideae) eacute uma importante
espeacutecie medicinal do cerrado com altos teores de
compostos polifenoacutelicos em especial os taninos Possui
grande distribuiccedilatildeo e importacircncia econocircmica para o estado
de Minas Gerais sendo empregado como adstringente e
cicatrizante no combate de amidalite faringite
hemorroacuteidas leucorreacuteias erupccedilotildees cutacircneas diarreacuteias e
como agentes antiinflamatoacuterios (LIMA et al 1998)
A fenilalanina amocircnia-liase (EC 4315) eacute uma
enzima-chave e regulatoacuteria da rota biossinteacutetica dos
fenilpropanoacuteides e de seus derivados e catalisa a
desaminaccedilatildeo do aminoaacutecido L-fenilalanina em aacutecido trans-
cinacircmico sendo esse o primeiro passo para a biossiacutentese
dos fenoacutelicos vegetais (ASSIS et al 2001) De acordo com
Rivero et al (2001) os niacuteveis dessa enzima podem flutuar
significativamente em intervalos relativamente curtos em
resposta a uma ampla variedade de estiacutemulos como o
fotoperiacuteodo fitocromo mudanccedilas de temperatura radiaccedilatildeo
UV deficiecircncia de nutrientes reguladores de crescimento
virais e ataque de insetos bem como o estaacutedio de
desenvolvimento vegetal e o grau de diferenciaccedilatildeo de
ceacutelulas e tecidos (SOLECKA amp KACPERSKA 1995)
Devido agrave exploraccedilatildeo irracional pelas induacutestrias de
curtimento do couro o barbatimatildeo encontra-se ameaccedilado
de extinccedilatildeo Assim devem-se melhorar as teacutecnicas de
propagaccedilatildeo encorajar seu cultivo e criar vias alternativas
para a produccedilatildeo de tanino em larga escala a partir de
fontes naturais
Objetivou-se estabelecer a curva de crescimento e
avaliar a atividade da fenilalananina amocircnia-liase e os teores
de fenoacuteis e taninos totais em calos de barbatimatildeo
MATERIAL E MEacuteTODOS
As etapas experimentais foram realizadas entre
fevereiro de 2007 e janeiro de 2008 no Centro Universitaacuterio
de Lavras (UNILAVRAS) e na Universidade Federal de
Lavras (UFLA)
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento foi obtida a partir da
inoculaccedilatildeo de segmentos foliares de 025 cm2 de aacuterea
empregados como explantes em meio MS (MURASHIGE
amp SKOOG 1962) suplementado com 30 g L-1 sacarose e
acrescidos de 905 M de 24-D Os meios foram
solidificados com aacutegar na proporccedilatildeo de 7 g L-1 e o pH
ajustado para 57 plusmn 01 antes da autoclavagem por 20 min
Apoacutes inoculaccedilatildeo os explantes foram transferidos para sala
de crescimento onde foram incubados na presenccedila de luz
agrave temperatura de 27 plusmn 1 oC fotoperiacuteodo de 16 horas e
DFFFA= 25 mol m-2 s-1
Foram feitas pesagens do material inoculado fresco
a partir do dia da inoculaccedilatildeo (tempo 0) ateacute ser atingida a
fase de desaceleraccedilatildeo em intervalos de 10 dias O
porcentual de crescimento dos calos foi determinado pela
equaccedilatildeo proposta por Lameira (1997)
crescimento = Pf Pi
Pf
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 101
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
onde
Pf = Mateacuteria seca final
Pi = Mateacuteria seca inicial
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado sendo cada pesagem composta
por duas repeticcedilotildees e cada repeticcedilatildeo pela meacutedia de 10
tubos cada tubo contendo um explante Os dados obtidos
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia e analisados
estatisticamente utilizando-se o Sistema de Anaacutelise de
Variacircncia para Dados Balanceados (FERREIRA 2000)
Determinaccedilotildees da atividade da fenilalanina amocircnia-liasee teores de fenoacuteis e taninos totais
Calos obtidos na curva de crescimento foram
imersos em nitrogecircnio liacutequido e posteriormente
armazenados em Freezer Forma Scientific a -86 oC ateacute o
momento de serem utilizados na determinaccedilatildeo da atividade
enzimaacutetica Outros calos assim como aqueles obtidos no
experimento com a sacarose foram liofilizados para
determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis e taninos totais
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase
O procedimento descrito por Cheng amp Breen (1991)
com algumas modificaccedilotildees foi utilizado para extraccedilatildeo e
determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica
Calos congelados (5 g) foram triturados
homogeneizadas com acetona 80 e congelados por 15
minutos O homogenato foi filtrado e o pelet foi seco atraveacutes
de vaacutecuo
O extrato proteacuteico foi obtido homogeneizando-se
05 g do pelet seco em 5 mL de tampatildeo borato de soacutedio 01
M pH= 88 contendo 5 mM de -mercaptoetanol 2 mM
de EDTA e 4 (pv) de PVP a 4oC Depois de 1h o
homogenato foi centrifugado a 27000 g por 30 minutos a
4 oC A mistura de reaccedilatildeo foi constituiacuteda por 05 mL de L-
fenilalanina 30 M 30 mM de tampatildeo borato de soacutedio pH=
88 e 1 mL de extrato cru num volume total de 3 mL O
substrato foi adicionado apoacutes 10 minutos de preacute-incubaccedilatildeo
e a reaccedilatildeo foi interrompida com 01 mL de HCl 6 N A
atividade da fenilalanina amocircnia-liase foi determinada pela
produccedilatildeo de cinamato apoacutes 90 minutos agrave 30 oC sob
agitaccedilatildeo contiacutenua medida pela variaccedilatildeo da absorbacircncia a
290 nm A atividade especiacutefica da enzima foi definida em
nmol de aacutecido cinacircmicohmg de proteiacutena
Fenoacuteis totais
Amostras de calos liofilizados foram trituradas em
micromoinho e armazenadas em frascos fechados
protegidos da luz
Aproximadamente 500 mg de calos liofilizados e
triturados foram extraiacutedos cinco vezes com 5 mL de uma
mistura de metanolaacutegua (11) sob refluxo O volume final
do extrato foi completado para 25 mL
Uma aliacutequota de 100 L do extrato foi utilizada para
a determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis totais atraveacutes do
meacutetodo de Folin-Dennis segundo as normas da AOAC
(1970) As determinaccedilotildees foram feitas em triplicata e o
resultado foi expresso em porcentagem de aacutecido tacircnico
por grama de calo seco
Taninos Totais
A determinaccedilatildeo dos teores de taninos totais foi
realizada atraveacutes do Meacutetodo de Difusatildeo Radial de acordo
com Hagerman (1987)
Um volume de 5 mL do extrato foi concentrado a 37oC e posteriormente retomado com 05 mL de uma mistura
de metanolaacutegua (11) Uma aliacutequota de 15 mL foi utilizada
para a determinaccedilatildeo Todas as determinaccedilotildees foram feitas
em triplicata O resultado foi expresso em percentagem de
tanino por grama de calo seco
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento dos calos seguiu o padratildeo
sigmoidal apresentando cinco fases distintas lag
exponencial linear desaceleraccedilatildeo e estacionaacuteria (Figura
1) A fase lag onde as ceacutelulas do explante se preparam para
a divisatildeo celular e produccedilatildeo de energia ocorreu ateacute o 30o
dia apoacutes a inoculaccedilatildeo com calos apresentando um
crescimento de aproximadamente 73 A segunda fase
exponencial estendeu-se do 31o
ao 50o
dia de cultivo
com 70 de crescimento periacuteodo esse caracterizado pela
CASTRO A H F et al102
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
maacutexima divisatildeo celular A fase linear ocorreu entre o 51o ao
70o
dia e natildeo se verificou crescimento dos calos nesse
periacuteodo Entre o 71o
e 100o
dia observou-se a fase de
desaceleraccedilatildeo com 28 de crescimento e a partir do 101o
dia a cultura entrou na fase estacionaacuteria Segundo Smith
(1992) na fase de desaceleraccedilatildeo os calos devem ser
transferidos para um novo meio de cultura devido agrave
reduccedilatildeo de nutrientes secagem do aacutegar e acuacutemulo de
substacircncias toacutexicas
FIGURA 1 Curva de crescimento de calos deStryphnodendron adstringens obtidos a partir de segmentosfoliares inoculados em meio MS contendo 905 M de 24-D e 30 g L-1 de sacarose
0
002
004
006
008
01
012
014
016
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Mat
eacuteria
sec
a (g
)
De maneira semelhante essa mesma curva de
crescimento pode ser dividida em trecircs fases fase de
crescimento lento (do dia da inoculaccedilatildeo ateacute o 30o dia) fase
de crescimento ativo (do 31o
ao 70o
dia) e fase de
estabilizaccedilatildeo (71o
dia em diante) sendo indicada a
repicagem entre o 71o ao 100o dia
A curva de crescimento para calos de
barbatimatildeo apresentou um padratildeo semelhante ao de outras
espeacutecies medicinais de cerrado como Byrsonima
intermeacutedia A Juss (NOGUEIRA et al 2008) Croton
(BONILLA 2002) e Derris sp (CONCEICcedilAtildeO 2000)
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteise taninos totais
Na figura 2 encontram-se representados os
resultados da atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase
e dos teores de fenoacuteis totais verificados durante o periacuteodo
experimental O explante inicial apresentou um teor meacutedio
de 065 de taninos totais natildeo se detectando entretanto
a presenccedila de taninos nos demais calos formados
Conforme pode-se observar a atividade da
fenilalanina amocircnia-liase situou-se entre 016 e 196 mol
de aacutecido cinacircmico h-1 g-1 de mateacuteria fresca (plt005) (figura
2A) A atividade apresentou-se maacutexima no explante inicial
(dia 0) e reduziu progressivamente ateacute o 70o dia periacuteodo
esse correspondente agraves fases lag exponencial e linear
Entre o 71o ao 100o dia ou seja na fase de desaceleraccedilatildeo a
atividade enzimaacutetica indicou uma tendecircncia em se manter
constante e a partir do 101o dia (fase estacionaacuteria) verificou-
se um pequeno incremento nessa atividade da ordem de
26 De maneira semelhante os teores meacutedios de fenoacuteis
totais acompanharam as variaccedilotildees observadas para a
atividade enzimaacutetica e situaram-se em uma faixa de 029 a
399 sendo o teor meacutedio maacuteximo observado no explante
inicial (figura 2B) Os teores de fenoacuteis totais reduziram
significativamente ateacute o 60o dia (fase lag e exponencial) e a
partir do 61o
ao 90o
dia permaneceram praticamente
constantes com os menores niacuteveis observados durante o
periacuteodo experimental em torno de 037 em meacutedia A partir
da fase estacionaacuteria (100o dia) verificou-se um aumento de
65 nos teores meacutedios de fenoacuteis totais
Estes resultados mostraram-se muito interessantes
do ponto de vista fisioloacutegico e fitoquiacutemico e corroboram
com relatos de Conceiccedilatildeo (2000) e Lameira (1997) os quais
citam que a fase estacionaacuteria corresponde ao periacuteodo em
que ocorre maior acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
Apesar de esses teores serem baixos eacute importante ressaltar
que o meio de cultura pode ser otimizado para produccedilatildeo
em larga escala de fenoacuteis totais e taninos uma vez que
foram obtidos in vitro a partir de segmentos foliares e de
forma convencional satildeo extraiacutedos da casca da planta adulta
cultivada in vivo
A presenccedila de baixos teores de fenoacuteis e a ausecircncia
de taninos pode estar associada agrave alta atividade metaboacutelica
relacionada ao crescimento dos calos (mitose) o que
demanda elevada quantidade de substrato necessaacuterio agrave
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 103
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
FIGURA 2 Valores meacutedios de atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase (A) e teores de fenoacuteis totais (B) emStryphnodendron adstringens durante o periacuteodo experimental
0
05
1
15
2
25
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Ativ
idad
e da
Fen
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o h-1
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0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120Dias
Fenoacute
is T
otai
s (
)
B
produccedilatildeo de energia Segundo Botta et al (2001) a
diferenciaccedilatildeo celular assim como a desaceleraccedilatildeo da
atividade mitoacutetica progressivamente permite o acuacutemulo de
compostos derivados do metabolismo secundaacuterio Para
Lavola et al (2000) e Pentildeuelas et al (1997) variaccedilotildees nos
teores de metaboacutelitos secundaacuterios natildeo podem ser explicadas
somente pelas diferenccedilas na disponibilidade de carboidratos
devendo-se considerar tambeacutem a disponibilidade de
precursores para a sua siacutentese e as mudanccedilas nos padrotildees
de siacutentese e catabolismo desses compostos
CONCLUSOtildeES
A curva de crescimento para calos de barbatimatildeo
apresentou um padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas
sendo indicada a repicagem entre o 71o ao 100o dia
Alta atividade e maiores teores de fenoacuteis totais
foram observados no explante inicial com reduccedilotildees
progressivas ateacute a fase linear Na fase estacionaacuteria
observaram-se incrementos importantes na atividade da
fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais
Natildeo se detectou a presenccedila de taninos totais nos
calos durante a determinaccedilatildeo da curva de crescimento na
presenccedila de 904 M de 24-D
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Minas Gerais (FAPEMIG) pelo suporte financeiro ao
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Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 105
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
(Recebido em 14 de fevereiro de 2007 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EMBRIOGEcircNESE SOMAacuteTICA DIRETA DE Coffea arabica LCONCENTRACcedilOtildeES DE NH4NO3 E DE KNO3 NO
DESENVOLVIMENTO DE EMBRIOtildeES1
DIRECT SOMATIC EMBRYOGENESIS OF Coffea arabica L CONCENTRATIONS OFNH4NO3 AND KNO3 ON THE DEVELOPMENT OF EMBRYOS
JULIANA COSTA DE REZENDE2 MOACIR PASQUAL3 SAMUEL PEREIRA DE CARVALHO3ESTER ALICE FERREIRA4 FLAVIA CARVALHO SANTOS5
1Artigo extraiacutedo da dissertaccedilatildeo de mestrado da primeira autora apresentada a Universidade Federal de LavrasUFLA2Pesquisadora MSc Epamig Campus da UFLA Cx P 176 372000-000 Lavras MG julianacostaepamigbr3Professor Dr Titular do Departamento de AgriculturaDAG Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 372000-000
Lavras MG pasqualuflabr samuelpcuflabr4Pesquisadora Dra Epamig Cx P 351 Uberaba MG esterepamigbr5Doutoranda em Fitotecnia Bolsista Capes flavinha3010yahoocombr
RESUMOO melhoramento geneacutetico do cafeeiro tem incorporado
atraveacutes de cruzamentos ganhos geneacuteticos para produtividade eoutras caracteriacutesticas de interesse agronocircmico A introduccedilatildeo demeacutetodos biotecnoloacutegicos para auxiliar os programas demelhoramento geneacutetico tem-se mostrado bastante uacutetilprincipalmente em culturas perenes como eacute o caso do cafeeiroUm importante meacutetodo de propagaccedilatildeo in vitro de plantas deCoffea eacute a embriogecircnese somaacutetica direta Objetivou-se com estetrabalho avaliar os efeitos de diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3 no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos
diretos de C arabica L cv Rubi Os tratamentos foramconstituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH
4NO
3 (0 4125 825
12375 e 1650 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3 (0 475
950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS O experimentofoi mantido por 150 dias em sala de crescimento com irradiacircnciaem torno de 32 igraveM m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas comtemperatura de 25 plusmn 1oC As variaacuteveis avaliadas foram nuacutemero defolhas comprimento da parte aeacuterea e massa fresca da parte aeacutereaOs resultados indicaram que a utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO
3combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de NH
4NO
3 como a mais
indicada para o desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos de Carabica L Os resultados apontam ainda que a ausecircncia denitrogecircnio promove o maior peso das placircntulas
Termos para indexaccedilatildeo Nitrogecircnio cafeacute cv Rubi Coffeaarabica
ABSTRACTCoffee breeding programs have incorporated using
artificial crossings genetic benefits for productivity and othercharacteristics of agronomic interest The introduction ofbiotechnology methods to improve genetic breeding programshas demonstrated to be useful mainly in perennial cultures ascoffee species An important method of in vitro propagation ofCoffea plants is somatic embryogenesis Therefore the objectiveof this work was to obtain the most adequate combinations ofculture medium components for plantlets growth The influence
of NH4NO
3 (0 4125 825 12375 and 1650 mg L-sup1) of MS
formulation x KNO3
(0 475 950 1425 and 1900 mg L-sup1) MSformulation were tested for the development of somatic embryosThe experiments were maintained in a growth room under lightintensity of 32 microMol m-2 s-1 photoperiods of 16 hours andtemperature of 25 plusmn 1o C The characteristics evaluated were leafnumber shoot length and shoot fresh matter The results indicatedthat the use of 950 mgL-sup1 KNO
3 combined with 1155 to 2475
mg L-sup1 NH4NO
3 is the most indicated for the development of
somatic embryos of C arabica L The absence of nitrogenpromotes the largest weight of plantlets
Index Terms Nitrogen Coffee cv Rubi Coffea arabica
INTRODUCcedilAtildeO
O nitrogecircnio eacute um dos elementos necessaacuterios e
ativos para diversos processos metaboacutelicos da planta pois
eacute constituinte de vaacuterias biomoleacuteculas essenciais tais como
aminoaacutecidos aacutecidos nucleacuteicos enzimas e proteiacutenas e
juntamente com a sacarose eacute o principal componente em
quantidade no meio de cultura
O nitrogecircnio difere dos demais macronutrientes por
apresentar-se na forma de caacutetion (amocircnio) e acircnion (nitrito
e nitrato) contribuindo de forma efetiva tanto no
metabolismo celular como na regulaccedilatildeo do seu potencial
osmoacutetico Atua como agente tamponante e favorece a
absorccedilatildeo de outros iacuteons presentes no meio (NAGAO et
al 1994) A vantagem dos tecidos vegetais receberem pelo
menos parte do nitrogecircnio sob uma forma prontamente
reduzida eacute que haveria uma diminuiccedilatildeo no gasto de energia
REZENDE J C de et al106
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
que ocorre na conversatildeo enzimaacutetica de nitrato a amocircnio
(GEORGE et al 1987) O efeito dessas diferentes formas
inorgacircnicas separadamente pode promover ou natildeo o
crescimento e desenvolvimento de determinadas espeacutecies
de plantas enquanto a combinaccedilatildeo das duas estimula o
crescimento de muitas espeacutecies in vitro (CALDAS et al
1998)
De acordo com George amp Sherrington (1984) o
desenvolvimento e morfogecircnese em cultura de tecidos satildeo
acentuadamente influenciados pela disponibilidade de
nitrogecircnio e pela forma como o mesmo eacute fornecido Alta
concentraccedilatildeo de sais do meio MS comparada a outros
meios especificamente dos niacuteveis de amocircnio (-NH4) e
nitrato (-NO3) pode ser criacutetica no processo de morfogecircnese
e crescimento (SAKUTA amp KOMAMINE 1987) estando
pois a demanda energeacutetica fornecida pelo metabolismo de
carboidratos e a assimilaccedilatildeo destes iacuteons diretamente
relacionada com o sucesso da cultura in vitro
Sato (1994) estudou o efeito de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio sobre a propagaccedilatildeo de trecircs
diferentes clones de geacuterbera de vaso (Gerbera jamesonii
Adlam) e concluiu que a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio do
MS completo inibe a regeneraccedilatildeo de brotos enquanto a
utilizaccedilatildeo de concentraccedilotildees diluiacutedas favorece a induccedilatildeo
dos brotos Bespalhok et al (1992) estudaram a
concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia na induccedilatildeo de brotos
em estevia (Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni) e
constataram que a concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia do
MS eacute toacutexica Obteve maior induccedilatildeo de brotaccedilotildees usando
frac14 de nitrato de amocircnia no meio MS Por outro lado Tadesse
et al (2000) verificaram que a accedilatildeo de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio promoveu um incremento
inicial da aacuterea foliar das placircntulas formadas mas ocasionou
efeitos relativamente negativos no aumento da aacuterea foliar
das placircntulas durante a aclimatizaccedilatildeo
O nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio sustenta
boa taxa de crescimento em algumas culturas como roseira
(Rosa gallica L) (NASH amp DAVIES 1972) e trigo (Triticum
que natildeo crescem bem com o nitrato no meio como por
exemplo o arroz (Oriza sativa L) (SARGENT amp KING 1974
YATAZAWA amp FURUHASHI 1968)
Grewal et al (1980) citados por Grattapaglia amp
Machado (1990) verificaram em culturas de eucalipto
(Eucaliptus citriodora Hook) que ao se reduzir pela
metade as concentraccedilotildees de nitrato de amocircnio e de
potaacutessio do meio MS a taxa de multiplicaccedilatildeo dobrava
Essa mesma concentraccedilatildeo proporcionou o melhor
comprimento da parte aeacuterea em embriotildees zigoacuteticos de C
arabica L (RIBEIRO 2001)
A maioria das plantas prioriza a absorccedilatildeo de NH4
+ a
NO3
- poreacutem eacute necessaacuterio encontrar o balanccedilo ideal de
NH4+NO
3- para o oacutetimo crescimento in vitro (SATO 1994)
Objetivou-se com este trabalho estudar os efeitos de
diferentes concentraccedilotildees de NH4NO
3 e KNO
3 do meio MS
no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos diretos de C
arabica L cv Rubi
MATERIAL E MEacuteTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos Vegetais do Departamento de
Agricultura da Universidade Federal de Lavras MG Foram
utilizados como explantes embriotildees de C arabica cv
Rubi provenientes da embriogecircnese somaacutetica direta Os
embriotildees somaacuteticos foram induzidos em meio MS
(MURASHIGE amp SKOOG 1962) com 50 dos sais
acrescido de 20 mg L-1 de GA3 6 mg L-1 de cinetina 8 mg
L-1 de ANA 100mg L-1 de caseiacutena hidrolisada e 400mg L-
1 de extrato de malte Os tubos de ensaio foram mantidos
durante 150 dias sob condiccedilotildees de obscuridade com
temperatura de 25 plusmn 1oC Os embriotildees somaacuteticos induzidos
nesse processo foram individualizados em tubos de
ensaio e mantidos durante 30 dias em meio MS
objetivando a homogeneizaccedilatildeo do material para a
realizaccedilatildeo deste experimento
No preparo do meio foram utilizadas soluccedilotildees-
estoque armazenadas em frascos de vidro escuro a
temperaturas em torno de 5degC Os tratamentos foram
constituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH4NO
3 (0 475
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 107
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
950 1425 e 1900 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3
(0 475 950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS
O meio foi solidificado com 5g L -1 de aacutegar e o pH
ajustado para 58 plusmn 01 utilizando NaOH 05 e 01 N ou HCl
05 N e 01 N e distribuiacutedo em tubos de ensaio cada um
recebendo 15 mL do mesmo Os tubos foram vedados com
tampas plaacutesticas transluacutecidas antes do processo de
autoclavagem a 121degC e 1 atm por 20 minutos Apoacutes o
resfriamento o meio foi levado agrave cacircmara de fluxo laminar
desinfestada com aacutelcool 70 (etanol) onde foi feita a
inoculaccedilatildeo dos explantes
Os tubos foram vedados com parafilme e mantidos
em sala de crescimento com irradiacircncia em torno de 32 igraveM
m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas com temperatura de 25 plusmn
1oC O delineamento experimental utilizado foi inteiramente
casualizado com quatro repeticcedilotildees e trecircs tubos por
parcela cada tubo contendo um explante
Aos 150 dias apoacutes a instalaccedilatildeo foram avaliadas as
variaacuteveis nuacutemero de folhas comprimento da parte aeacuterea e
peso da mateacuteria fresca das placircntulas Os valores observados
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia para dados
desbalanceados Utilizou-se o procedimento GLM
disponiacutevel no aplicativo computacional SASreg (SAS
INSTITUTE 1990)
Em situaccedilotildees em que a anaacutelise de variacircncia natildeo
confirmou a normalidade dos resiacuteduos para o comprimento
da parte aeacuterea e peso da mateacuteria fresca os dados sofreram
uma transformaccedilatildeo para garantir que essa pressuposiccedilatildeo
fosse atendida As transformaccedilotildees utilizadas foram x e5 1 02x respectivamente A variaacutevel nuacutemero de folhas
atendeu agraves pressuposiccedilotildees de normalidade A anaacutelise de
variacircncia do peso da mateacuteria fresca foi realizada por meio
do meacutetodo dos quadrados miacutenimos ponderados pelo
inverso das variacircncias de cada tratamento uma vez que
esses apresentaram heterogeneidade de variacircncias
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Houve efeito significativo das concentraccedilotildees de
NH4NO
3 e KNO
3 para o nuacutemero de folhas e peso da mateacuteria
fresca das placircntulas (Tabela 1) Observa-se que a interaccedilatildeo
entre os fatores mostrou-se significativa em relaccedilatildeo a todas
as caracteriacutesticas avaliadas a 5 de probabilidade pelo
teste F
Nuacutemero de folhas
Analisando-se as curvas de regressatildeo observa-
se na Figura 1 que houve formaccedilatildeo de maior nuacutemero
de folhas quando foram adicionados ao meio de cultura
1900 mg L-sup1 de KNO3
combinado com 12985 mg L-sup1 de
NH4NO
3 (meacutedia de 1163 folhas) Com a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 87879 mg L-sup1 de NH
4NO
3
pocircde-se observar a formaccedilatildeo meacutedia de 1001 folhas
Dessa forma como a diferenccedila eacute miacutenima justifica-se a
utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 com o objetivo de
reduccedilatildeo dos custos
TABELA 1 Anaacutelise de variacircncia dos dados relativos ao nuacutemero de folhas (NF) comprimento da parte aeacuterea (CPA) epeso da mateacuteria fresca (PMF) das placircntulas de Coffea arabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3
QM Fonte de variaccedilatildeo GL
NF CPA (cm) PMF (g)
NH4NO3 4 458337 01152 17450
KNO3 4 230014 00837 22117
NH4NO3 x KNO3 16 20447 01215 15139
Erro 135 91386 00584 05871
CV () 5162 2357 912
Significativo a 5 pelo teste F
REZENDE J C de et al108
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
FIGURA 1 Nuacutemero folhas de placircntulas de Coffea arabicacv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 combinadas com 0950 e 1900 mg L-sup1 de KNO
3
Contudo concentraccedilotildees acima de 87879 mg L-sup1 de
NH4NO
3 combinadas com 950 mg L-sup1 de NH
4NO
3 ou na
ausecircncia desse provocaram reduccedilatildeo no nuacutemero de folhas
possivelmente por toxidez causada pelo amocircnio devido agrave
sua concentraccedilatildeo mais elevada em relaccedilatildeo ao nitrato no
meio de cultura Quando o nitrogecircnio eacute fornecido somente
na forma de sais inorgacircnicos de amocircnio as ceacutelulas in vitro
apresentam sintomas de toxidez (GAMBORG amp SHYLUK
1970 YATAZAWA amp FURUHASHI 1968) demonstrando
assim a necessidade de combinaccedilatildeo dessas duas fontes
no meio de cultura
Segundo Raab amp Terry (1994) em virtude do grande
requerimento de energia fotoquiacutemica para a reduccedilatildeo
bioquiacutemica do nitrato era de se esperar que as plantas
crescessem melhor em meios com amocircnia do que em meios
com nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio no entanto
observou-se o inverso Esses mesmos autores apontam
como causa desse paradoxo o efluxo de iacuteons H+ que ocorre
devido agrave absorccedilatildeo do iacuteon amocircnio provocando acidificaccedilatildeo
do meio impedindo a absorccedilatildeo de nutrientes Segundo
Hashimoto et al (1992) a presenccedila de amocircnio in vitro
poderia acidificar o meio favorecendo a siacutentese de
carbamatos e tambeacutem a atividade de anidrase carbocircnica
Esses autores conseguiram diminuir o efeito toacutexico do
amocircnio apenas diminuindo a concentraccedilatildeo de nitrato de
amocircnio no meio MS
O nuacutemero de folhas obtidas na ausecircncia de KNO3
foi inferior quando comparado aos demais tratamentos (a
maior meacutedia observada foi 658 folhas na concentraccedilatildeo de
37626 mg L-sup1 de NH4NO
3) evidenciando assim a
importacircncia desse sal para o desenvolvimento de folhas
em placircntulas de C arabica cv Rubi Os resultados obtidos
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 109
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
concordam em parte com os obtidos por Ribeiro (2001)
trabalhando com embriotildees zigoacuteticos de C arabica que
recomenda a adiccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de NH4NO
3 e KNO
3 no
meio de cultura para comprimento da parte aeacuterea
Observa-se ainda que utilizando-se a concentraccedilatildeo
de 1425 mg L-sup1 de KNO3 haacute reduccedilatildeo no comprimento da
parte aeacuterea das placircntulas ateacute a concentraccedilatildeo de 42091 mg
L-sup1 de NH4NO
3 havendo a partir desse ponto incremento
no desenvolvimento da variaacutevel ateacute a concentraccedilatildeo de
149131 mg L-sup1 de KNO3 (132 cm dados transformados)
Esses resultados demonstram que as respostas de
interaccedilatildeo entre fontes de nitrogecircnio variam em funccedilatildeo das
concentraccedilotildees utilizadas
Na ausecircncia de NH4NO
3 em ambas as
concentraccedilotildees estudadas o comprimento da parte aeacuterea
foi inferior (09 e 097 cm respectivamente nas
concentraccedilotildees de 950 e 1425 mg L-sup1 de KNO3) evidenciando
mais uma vez a importacircncia desse sal no desenvolvimento
de embriotildees em C arabica cv Rubi
Peso da mateacuteria fresca
FIGURA 3
Peso da mateacuteria fresca de placircntulas de Carabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildeesde NH
4NO
3 combinadas com 0950 mg L-sup1 de KNO
3
6
65
7
75
8
85
9
95
10
105
0 4125 825 12375 1650NH4NO3 (mg L-1)
Peso
da
mat
eacuteria
fre
sca
(g)
Y KNO3 475 Y KNO3 1425 Y KNO3 1900 = ns Y KNO3 0 = 968811 - 006491X + 000061019X2 R2 = 09017 Y KNO3 950 = 800708 + 002278X 000022883X2 R2 =09053
Na ausecircncia de KNO3 houve decreacutescimo do peso
da mateacuteria fresca associado ao incremento das
concentraccedilotildees de NH4NO
3 ateacute a concentraccedilatildeo de 91775
mg L-sup1 de NH4NO
3 (Figura 3) observando-se aumento do
peso da mateacuteria fresca a partir deste ponto Para a
concentraccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 ocorreu aumento do
peso da mateacuteria fresca ateacute a concentraccedilatildeo de 100221 mg L-
sup1 de NH4NO
3 Poreacutem o maior valor foi registrado na
ausecircncia de ambos os sais estudados (976 g)
Da mesma forma Grossi (2000) trabalhando com
bromeacutelia observou que a menor concentraccedilatildeo de
nitrogecircnio promoveu maior produccedilatildeo de massa fresca
Kanashiro et al (2007) observou decreacutescimo linear na
massa fresca de folhas de bromeacutelia agrave medida que se
aumentou a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio (entre 75 e 120
mM) sendo que para cada mM de nitrogecircnio acrescido ao
meio houve um decreacutescimo de 00018 g na massa fresca
Provavelmente o cultivo em concentraccedilotildees maiores de
nitrogecircnio tenderia a diminuir a produccedilatildeo de massa fresca
como foi observado no presente experimento
CONCLUSOtildeES
Com base no crescimento da parte aeacuterea e na
formaccedilatildeo do maior nuacutemero de folhas a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de
NH4NO
3 eacute mais indicada para o desenvolvimento de
embriotildees somaacuteticos de Coffea arabica L Os resultados
indicam ainda que a ausecircncia de nitrogecircnio promove o
maior peso das placircntulas
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NAGAO E O PASQUAL M RAMOS J D Efeitos dasacarose e do nitrogecircnio inorgacircnico sobre a multiplicaccedilatildeoin vitro de brotaccedilotildees de porta-enxerto de citros BragantiaCampinas v 53 n 1 p 25-31 1994
NASH D T DAVIES M E Some aspects of growth andmetabolism of Paul s Scarlet Rose cell suspensions Journalof Experimental Botany Oxford v 23 p 75-91 1972
RAAB T K TERRY N Nitrogen source regulation ofgrowth and photosynthesis in Beta vulgaris L PlantPhysiology Washington v 105 p 1159-1166 1994
RIBEIRO L S Cultura in vitro de embriotildees e segmentosnodais do cafeeiro (Coffea arabica L) 2001 73 pDissertaccedilatildeo (Mestrado em Fitotecnia) - UniversidadeFederal de Lavras Lavras 2001
SAKUTA M KOMAMINE A Cell grow andaccumulation of secondary In CONSTABEL F VASIL IK (Eds) Cell culture and somatic cell genetics of plantascell culture in phytochemestry San Diego Academic 1987v 4 cap 5 p 97-114
SARGENT P A KING J Investigations of growth-promoting factors in conditioned soybean root cells andin the liquid medium in whitch they grow ammoniumglutamine e aminoacids Canadian Journal of BotanyOttawa v 52 n 7 p 1747-1755 1974
SAS INSTITUTE Statystical Analysis System proceduresguide Version 6 Cary 1990 705 p
SATO A Y Propagaccedilatildeo de geacuterbera de vaso atraveacutes decultura de tecidos 1994 106 p Dissertaccedilatildeo (Mestrado emFitotecnia) - Universidade Federal de Lavras Lavras 1994
TADESSE M LOMMEN W J M STRUIK P C Effectsof in vitro treatments on leaf area growth of potatotransplants during acclimatization Plant Cell Tissue andOrgan Culture Dordrecht v 61 n 1 p 59-67 2000
YATAZAWA M FURUHASHI K Nitrogen sources forthe growth of rice callus tissue Soil Science and PlantNutrition v 14 p 73-79 1968
NORMAS PARA PUBLICACcedilAtildeO DE ARTIGOS E COMUNICACcedilOtildeES CIENTIacuteFICAS
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagationeacute editada semestralmente pela Editora da UniversidadeFederal de Lavras (Editora UFLA) publica artigoscientiacuteficos e comunicaccedilotildees cientiacuteficas da aacuterea de culturade tecidos de plantas elaborados por membros dacomunidade cientiacutefica nacional e internacional Natildeo eacutecobrada taxa para publicaccedilatildeo de trabalhos desde que umdos autores seja soacutecio e esteja em dia com a ABCTP(Associaccedilatildeo de Cultura de Cultura de Tecidos de Plantas)Eacute condiccedilatildeo fundamental que os artigoscomunicaccedilotildeessubmetidos agrave apreciaccedilatildeo da revista Plant Cell Culture ampMicropropagation natildeo foram e nem seratildeo publicadossimultaneamente em outro lugar Com a aceitaccedilatildeo do artigopara publicaccedilatildeo os editores adquirem amplos e exclusivosdireitos sobre o artigo para todas as liacutenguas e paiacuteses Apublicaccedilatildeo de artigoscomunicaccedilotildees dependeraacute daobservacircncia das Normas Editoriais dos pareceres do CorpoEditorial e da Comissatildeo ad hoc Todos os pareceres tecircmcaraacuteter sigiloso e imparcial e tanto os autores quanto osmembros do Corpo Editorial eou Comissatildeo ad hoc natildeoobtecircm informaccedilotildees identificadoras entre si
Os conceitos e afirmaccedilotildees contidos nos artigos ecomunicaccedilotildees seratildeo de inteira responsabilidade do(s)autor(es)
1 SUBMISSAtildeO
Cada trabalho deveraacute ter no maacuteximo 14 paacuteginas ejunto do mesmo deveraacute ser encaminhado ofiacutecio dirigido aoEditor Chefe da revista solicitando a publicaccedilatildeo do artigo
Esse ofiacutecio deveraacute conter o pedido de apreciaccedilatildeona revista ao editor chefe a declaraccedilatildeo de ser um trabalhooriginal e natildeo ter sido submetido a nenhuma outra revistaser assinado por todos os autores constar o endereccedilocompleto telefone e e-mail de todos Qualquer inclusatildeoexclusatildeo ou alteraccedilatildeo na ordem dos autores deveraacute sernotificada mediante ofiacutecio assinado por todos os autores(inclusive do autor excluiacutedo)
Originais quatro vias impressas e uma via em CDR comtexto e ilustraccedilotildees e graacuteficos Das 4 vias impressas apenas1 deve conter os nomes completos dos autores e rodapeacutena primeira paacuteginaProcessador de texto Word for Windows (version 98 2000XP ou 2003)Redigido em portuguecircs inglecircs ou espanholEspaccedilamento do texto Duplo Margens esquerda (3cm)direita (2cm) inferior e superiores (25cm) Cabeccedilalho eRodapeacute (25cm)Papel formato A4Fonte Times New Roman tamanho 12Nuacutemero de paacuteginas ateacute 14 paacuteginas numeradasconsecutivamente incluindo as ilustraccedilotildees
Tabelas devem fazer parte do corpo do artigo e serapresentadas no moacutedulo tabela do Word O tiacutetulo deveficar acimaGraacuteficos Figuras e Fotografias devem ser apresentadosem preto e branco niacutetidos e com contraste escaneadosinseridos no texto apoacutes a citaccedilatildeo dos mesmos e tambeacutemem um arquivo agrave parte salvos em extensatildeo tif ou jpg com resoluccedilatildeo de 300 dpi Os graacuteficos devem vir tambeacutemem excel com letra Times New Roman tamanho 10 semnegrito sem caixa de textos e agrupados em arquivo agraveparteSiacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitos emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker sem perda de suas formas originais
2 ESTRUTURA E ORGANIZACcedilAtildeO
21 O artigo cientiacutefico deve ser apresentado na seguintesequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfulas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumo
Index terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
INTRODUCcedilAtildeO
Deve apresentar uma visatildeo concisa do estado atualdo conhecimento sobre o assunto que o manuscritoaborda e enfatizar a relevacircncia do estudo sem constituir-se em extensa revisatildeo e na parte final os objetivos dapesquisa Deve incluir a revisatildeo de literatura
MATERIAL E MEacuteTODOS
Esta seccedilatildeo pode ser dividida em subtiacutetulosindicados em negrito
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Podem ser divididas em subseccedilotildees com subtiacutetulosconcisos e descritivos e conter tabelas e figuras
CONCLUSOtildeES
Finalizar com os resultados de acordo com osobjetivos do trabalho
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e naseccedilatildeo proacutepria
22 A comunicaccedilatildeo cientiacutefica deve ser apresentada naseguinte sequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfluas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumoIndex terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
Texto sem subdivisatildeo poreacutem com introduccedilatildeo material emeacutetodos resultados e discussatildeo (podendo conter tabelase graacuteficos e conclusatildeo subentendidas
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e na seccedilatildeoproacutepria
3 CASO O ARTIGO CONTENHA FOTOGRAFIASGRAacuteFICOS FIGURAS SIacuteMBOLOS E FOacuteRMULASESSAS DEVERAtildeO OBEDECER AgraveS SEGUINTESNORMAS
31 Fotografias deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpi
32 Figuras deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpiAs figuras deveratildeo ser elaboradas com letra Times NewRoman tamanho 10 sem negrito sem caixa de textos eagrupadas
33 Graacuteficos deveratildeo ser inseridos apoacutes citaccedilatildeo dosmesmos dentro do proacuteprio texto elaboradopreferencialmente em Excel com letra Times New Romantamanho 10 sem negrito sem caixa de textos e agrupadas
34 Siacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitas emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker (ex MathType Equation) sem perda de suasformas originais
OBS A formataccedilatildeo correta eacute parte imprescindiacutevel para queo trabalho seja devidamente protocolado Caso este natildeoesteja nas normas o mesmo seraacute recusado
4 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS as referecircnciasbibliograacuteficas devem ser citadas conforme a NBR60232002da ABNT
A exatidatildeo das referecircncias constantes da listagem e acorreta citaccedilatildeo no texto satildeo de responsabilidade do(s)autor(es) do artigo
41 Orientaccedilotildees gerais- Deve-se apresentar todos os autores do documentocientiacutefico (fonte)- O nome do perioacutedico deve ser descrito por extenso natildeodeve ser abreviado- Em todas as referecircncias deve-se apresentar o local depublicaccedilatildeo (cidade) a ser descrito no lugar adequado paracada tipo de documento- As referecircncias devem ser ordenadas alfabeticamente
42 Exemplificaccedilatildeo (tipos mais comuns)
ARTIGO DE PERIOacuteDICO
VIEIRA R F RESENDE M A V de Eacutepocas de plantio deervilha em Patos de Minas Uberaba e Janauacuteba MinasGerais Ciecircncia e Agrotecnologia Lavras v 24 n 1 p 74-80 janmar 2000
LIVRO
a) livro no todo
STEEL R G D TORRIE J H Principles andprocedures of statistics New York McGraw-Hill Bookl960 481 p
b) Parte de livro com autoria especiacutefica
FLEURY J A Anaacutelise ao niacutevel de empresa dos impactosda automaccedilatildeo sobre a organizaccedilatildeo da produccedilatildeo de trabalhoIn SOARES R M S M Gestatildeo da empresa Brasiacutelia IPEAIPLAN 1980 p 149-159
c) Parte de livro sem autoria especiacutefica
MARTIM L C T Nutriccedilatildeo de bovino de corte emconfinamento In ______ Confinamento de bovino decorte 2 ed Satildeo Paulo Nobel 1986 cap 3 p 29-89
DISSERTACcedilAtildeO E TESE
GONCcedilALVES R A Preservaccedilatildeo da qualidade tecnoloacutegicade trigo (Triticum aestivum L) e controle de Rhyzoperthadominica (F) durante o armazenamento em atmosferacontrolada com Co2 e N2 1997 52 f Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Ciecircncia dos Alimentos) Universidade Federal deLavras Lavras 1997
MATIOLI G P Influecircncia do leite proveniente de vacasmastiacuteticas no rendimento de queijo frescal 2000 55 pDissertaccedilatildeo (Mestrado em Ciecircncias dos Alimentos) -Universidade Federal de Lavras Lavras 2000
Nota A folha eacute composta de duas paacuteginas anverso everso Alguns trabalhos como teses e dissertaccedilotildees satildeoimpressos apenas no anverso e neste caso indica-se f(ABNT NBR60232002 p 18)
TRABALHOS DE CONGRESSO E OUTROS EVENTOS
SILVA J N M Possibilidades de produccedilatildeo sustentada demadeira em floresta densa de terra firme da Amazocircniabrasileira In CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO 61990 Campos do Jordatildeo Anais Campos do Jordatildeo SBSSBEF 1990 p 39-45
DOCUMENTOS ELETROcircNICOS
As obras consultadas online satildeo referenciadas conformenormas especiacuteficas para cada tipo de documento(monografia no todo e em parte trabalho apresentado emevento artigo de perioacutedico artigo de jornal etc)acrescidas de informaccedilotildees sobre o endereccedilo eletrocircnicoapresentado entre braquetes (lt gt) precedido da expressatildeo
Disponiacutevel em e da data de acesso ao documentoprecedida da expressatildeo Acesso em Nota Natildeo se recomenda referenciar material eletrocircnico decurta duraccedilatildeo nas redes (ABNT NBR60232000 p 4)Segundo padrotildees internacionais a divisatildeo de endereccediloeletrocircnico no fim da linha deve ocorrer sempre apoacutes barra ()
Monografia (acesso online)
a) livro no todo
TAKAHASHI T (Coord) Tecnologia em foco BrasiacuteliaSocinfoMCT 2000 90 p Disponiacutevel em lthttpwwwsocinfoorgbrgt Acesso em 22 ago 2000
b) parte de livro
TAKAHASHI T Mercado trabalho e oportunidades In______ Sociedade da informaccedilatildeo no Brasil livro verdeBrasiacutelia SocinfoMCT 2000 cap 2 p 13-24 Disponiacutevelem lthttpwwwsocinfogovbrgt Acesso em 22 ago 2000
c) Parte de congresso seminaacuterio etc
GIESBRECHT H O Avaliaccedilatildeo de desempenho deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica a experiecircncia deprojeto excelecircncia na pesquisa tecnoloacutegica InCONGRESSO ABIPTI 2000 Fortaleza Gestatildeo deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica Fortaleza Nutec 2000Disponiacutevel em lthttpwwwabiptiorgbrgt Acesso em01 dez 2000
d) Tese
SILVA E M Arbitrariedade do signo a liacutengua brasileirade sinais (LIBRAS) 1997 144 p Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Linguumliacutestica Aplicada e Estudo de Liacutengua) - PontifiacuteciaUniversidade Catoacutelica de Satildeo Paulo Satildeo Paulo 1997Disponiacutevel em lthttpwwwterracombrvirtualbooksfreebookportdid teseshtmgt Acesso em 28 nov 2000
Artigo de perioacutedico (acesso online)
RESENDE A M G Hipertexto tramas e trilhas de umconceito contemporacircneo Informaccedilatildeo e Sociedade Recifev 10 n 1 2000 Seccedilatildeo Educaccedilatildeo Disponiacutevel em lthttpwwwinformaccedilatildeoesociedadeufpbbrgt Acesso em 30 nov2000
CITACcedilAtildeO PELO SISTEMA ALFABEacuteTICO (AUTOR-DATA) (conforme ABNT NBR105202002)Dois autores - Steel amp Torrie (1960) ou (STEEL amp TORRIE1960)Trecircs ou mais autores - Valle et al (l945) ou (VALLE et al1945)Obs Quando forem citados dois autores de uma mesmaobra deve-se separaacute-los pelo sinal amp (comercial)
5 O EDITOR CHEFE NOTIFICARAacute O AUTOR DORECEBIMENTO DO ORIGINAL E POSTERIORMENTE
O INFORMARAacute SOBRE SUA PUBLICACcedilAtildeO OSARTIGOS QUE NECESSITAREM DE MODIFICACcedilOtildeESSERAtildeO DEVOLVIDOS AO AUTOR PARA A DEVIDAREVISAtildeO
6 OS ARTIGOS NAtildeO APROVADOS SERAtildeODEVOLVIDOS
7 OS ARTIGOS SERAtildeO PUBLICADOS EM ORDEMDE APROVACcedilAtildeO
8 O NAtildeO-CUMPRIMENTO DESSAS NORMASIMPLICARAacute NA DEVOLUCcedilAtildeO DO ARTIGO AOAUTOR
9 OS CASOS OMISSOS SERAtildeO RESOLVIDOS PELACOMISSAtildeO EDITORIAL
10 O ARTIGO DEVERAacute SER ENVIADO PARA
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepartamento de BiologiaSetor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 3037CEP 37200-000Lavras MG
INSTRUCTIONS FOR AUTHORS
Plant Cell Culture amp Micropropagation asemestral journal edited by Editora UFLA of theUniversidade Federal de Lavras publishes scientificarticles and communications in the area of plant tissueculture elaborated by researchers of the national andinternational scientific community One of the authors mustbe associated and have paid all charges required by theABCTP (Plant Tissue Culture Association) in order to betax free for publication in Plant Cell Culture ampMicropropagation Submission of a manuscript implies thatit is neither under consideration for publication elsewherenor has appeared previously in part or in whole Onacceptance for publication authors assign to the Editorsfull copyright of the manuscript in all languages andcountries Publications will depend on editorial rules andon the review of experts and ad hoc commission Reviewerand editorial opinions will be anonymously communicatedto authors
Concepts and affirmations included in articles andcommunications are of the entire responsibility of theauthors
1 SUBMISSION
The manuscript must present a maximum of 14pages At the time of submission a cover letter must besent with the manuscript copies to the Editor requestingpublication of the article This cover letter must be signedby all authors
and also contain the full addresstelephone number and e-mail of the authors Anyinclusion exclusion or alteration in the authors order mustbe notified and signed by all authors including the oneexcluded
Original Four copies and CD with text and illustrationsOnly one of the 4 printed copies must contain the fullnames of the authors and footnote in the first pageFormat Word for Windows (version 98 2000 XP ou 2003)Spacing of the text Double Margin on the left hand sideand 20 cm margin on the right hand side 25 cm upper andlower margin 25 cm for the heading and 25 cm for thefootnotePaper A4 formatSource Times New Roman size 12Number of pages up to 14 pages including the illustrationsTables Tables should be part of the body of the paper andthey must be presented in Word or Excel The title shouldbe above and be presented in the language in which thearticle was written and in English The vertical linesseparating the columns should not appearGraphsFiguresPhotographs must be presented in blackand white clear and with contrast scanned inserted in
the text after citation and also in a separate file (on thesame diskette as the article) saved in extension tif orjpg with resolution of 300 dpi The title should be below
and presented in the language in which the article waswritten and in EnglishSymbols and Chemical Formula must be presented usinga word processor that permits a format Page Maker
2 STRUCTURE AND ORGANIZATION
21 The article should be presented in the followingsequence
TITLE
In English language containing no more than 15 words incapital letters and bold
AUTHORS
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copies Footnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTshould be informative and condensed and should
explain the objectives material and methods results andconclusion of the work in a maximum of 250 words all writtenin one paragraphFor articles written in English the abstract should also bepresented in Portuguese
Key words minimum of three and maximum of five Theyshould not repeat words that are already in the title Thesemay include phrases as well as individual words and shouldbe separate by commasFor articles written in English the key-words should alsobe presented in Portuguese
INTRODUCTION
Should present a concise vision of the current level ofknowledge that has been achieved within the subject areathat the paper will discuss It should neither give anextensive review nor should it include details about theresults and discussion It should clearly indicate theobjectives of the research that was carried out
MATERIAL AND METHODS
This section can contain subdivisions with subtitles inbold print
RESULTS AND DISCUSSION
This section can have subsection which begins withconcise descriptive titles in bold print
CONCLUSIONS
Finishing agree of objectives of work
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
22 The Communication should be presented in thefollowing sequence
TITLE
Sufficiently clear conspicuous and complete withoutsuperfluous words It is recommended to initiate with theterm that represent the most important aspect with otherterms in decreasing of importance
TITLE IN PORTUGUESE
FULL NAME(S) OF THE AUTHOR(S)
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copiesFootnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTWritten continuously without paragraph It must
not exceed 250 words Index terms must be enclosed afterthe abstract using terms different from those used in thetitle and separated by comma
Index terms (3 to 5) must be described in capital and smallletters and express the content of the article
ABSTRACT AND INDEX TERMS IN PORTUGUESE
Text with no division but must include introductionmaterial and methods results and discussion andconclusion (it may include tables and figures)
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
3 PHOTOGRAPHS GRAPHS FIGURES SYMBOLSOR FORMULA CONTAINED IN THE ARTICLE SHOULDOBEY THE FOLLOWING RULES
31 Photographs must be presented in black and whiteclear and with contrast inserted in the text after their citationand also in a separate file (on the same diskette as thearticle) saved in extension TIFF
or JPEG withresolution of 300 dpi
32 Figures must be presented in black and white clearand with contrast inserted in the text after their citation andalso in a separate file (on the same diskette as the article)saved in extension TIFF
or JPEG with resolution of300 dpi They must be elaborated using Times New Romanfont size 10 without bold without text box and arranged
33 Graphs must be inserted in the text after their citationelaborated preferentially in Excel using Times New Romanfont size 10 without bold
34 Symbols and Chemical Formula must be presentedusing a word processor that permits a format for Page Maker(ex MathType Equation) without loss of its original form
4 REFERENCES references must be cited according toNBR60232002 of ABNT All references and their correctcitation in the text are of the entire responsibility of theauthor(s)
5 THE BRAZILIAN ASSOCIATION OF PLANT TISSUECULTURE (ABCTP) WILL INFORM THE AUTHOR THERECEIPT OF THE ORIGINAL MANUSCRIPT ANDEVENTUALLY IT WILL ALSO SEND INFORMATIONREGARDING ITS PUBLICATION MANUSCRIPTSTHAT REQUIRE MODIFICATIONS WILL BERETURNED TO THE AUTHOR FOR THE RESPECTIVEREVISION ANDCORRECTIONS
6 MANUSCRIPTS NOT APPROVED WON T BERETURNED TO THE AUTHOR
7 ARTICLES WILL BE PUBLISHED ACCORDING TOTHE ORDER OF RECEIPT AND APPROVAL
8 IF ANY OF THESE RULES ARE NOT ATTENDED THEMANUSCRIPT WILL BE RETURNED TO THE AUTHOR
9 THE NEGLECTFUL CASES WILL BE SOLVED BYTHE EDITORIAL COMMITTEE
10 MANUSCRIPTS SHOULD BE SENT TO THEFOLLOWING ADDRESS
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepto de Biologia - Setor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 303737200-000 Lavras MG BRAZIL
Consultoria Cientiacutefica(Vol 4 N2)Ana da Silva Ledo EMBRAPA
Antonio Carlos Torres EMBRAPAAparecida Gomes de Arauacutejo UFLA
Elka Fabiana Aparecida Almeida EMBRAPAEvaristo Mauro de Castro UFLA
Fabiano Guimaratildees Silva CEFET Rio VerdeFernanda Pereira Soares MAPA
Jonny Everson Scherwinski Pereira EMBRAPAJoseacute Eduardo Brasil Pereira Pinto UFLANatoniel Franklin de Melo EMBRAPA
Raiacuterys Cravo Nogueira UFPA
Plant Cell Culture amp Micropropagation
ISSN 1808-9909
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-110 2008
CONTEUacuteDO
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia lingulata Ruiz amp Pav em ambiente protegido em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo Acclimatization of micropropagated plants of Heliconia Lingulata Ruiz amp Pav in protected environments as a function of irrigation depth Benito Moreira de Azevedo Eliana Lee Jorge Rocha Thales Viniacutecius de Arauacutejo Viana Albanise Barbosa Mariho Ana Cristina Portugal Pito de Carvalho Denise Vieira Vasconcelos 55
In vitro organogenesis of passion fruit (Passiflora edulis Sims F flavicarpa Deg) affected by irradiance sucrose and explant position Organogecircnese in vitro do maracujazeiro (Passiflora edulis Sims F flavicarpa Degener) afetado por irradiacircncia sacarose e posiccedilatildeo dos explantes Rodrigo Sobreira Alexandre Flaacutevio Alencar D Arauacutejo Couto Joseacute Maria Moreira Dias Wagner Campos Otoni Rita De Caacutessia Mendes Paulo Roberto Cecon 62
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental [Ananas Comosus (L) Merr Var Bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo Substrates evaluation for production of ornamental pineapple [Ananas Comosus (L) Merr Var Bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] plants under greenhouse conditions Francisco Nunes da Cunha Filho Antonio Carlos Torres Joatildeo Maria Charchar
70
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos na multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental in vitro Effect of isopentenyl adenine in four subcultures during the in vitro multiplication of ornamental pineapple shoot Maria do Desterro Mendes dos Santos Joseacute Getuacutelio Da Silva Filho Antonio Carlos Torres 76
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento da cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) cultivada in vitro em diferentes concentraccedilotildees de sacarose e qualidade de luz Photochemical efficiency and growth characteristics of sugar cane (Saccharum officinarum L) plants cultivated in vitro under different sucrose concentrations and light quality Geoacutergia Peixoto Bechara Motheacute Alena Netto Torres Luis Eduardo Campos Crespo Eliemar Campostrini 84
Effects of auxins and cytokinins on in vitro development of Alpinia purpurata K Schum and phenolic compounds production Efeito de auxinas e citocininas no desenvolvimento in vitro de Alpinia purpurata K Schum e produccedilatildeo de substacircncias fenoacutelicas Cristiane Pimentel Victoacuterio Iacinete Pamplona da Cruz Alice Sato Ricardo Machado Kuster Celso Luiz Salgueiro Lage 92
Curva de crescimento atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteis e taninos totais em calos de Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville (Fabaceae-Mimosoideae) Growth curve phenylalanine ammonia-lyase activity and total phenol levels in callus of Stryphnodendron Adstringens (Mart) Coville - (Fabaceae-Mimosoideae) Ana Hortecircncia Fonsecircca Castro Miller Marani Lima Renato Paiva Amauri Alves de Alvarenga Mirelle Oliveira Soacuteter 99
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica L concentraccedilotildees de NH4NO3 e de KNO3 no desenvolvimento de embriotildees Direct somatic embryogenesis of Coffea arabica L concentrations of NH4NO3 and KNO3 on the development of embryos Juliana Costa de Rezende Moacir Pasqual Samuel Pereira de Carvalho Ester Alice Ferreira Flavia Carvalho Santos 105
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 55
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
(Recebido em 17 de abril de 2008 e aprovado em 22 de julho de 2008)
ACLIMATIZACcedilAtildeO DE MUDAS MICROPROPAGADAS DE Heliconialingulata Ruiz amp Pav EM AMBIENTE PROTEGIDO EM FUNCcedilAtildeO
DA LAcircMINA DE IRRIGACcedilAtildeO1
ACCLIMATIZATION OF MICROPROPAGATED PLANTS OF Heliconia lingulata Ruiz ampPav IN PROTECTED ENVIRONMENTS AS A FUNCTION OF IRRIGATION DEPTH
BENITO MOREIRA DE AZEVEDO2 ELIANA LEE JORGE ROCHA3 THALES VINIacuteCIUS DE ARAUJO VIANA4ALBANISE BARBOSA MARINHO5 ANA CRISTINA PORTUGAL PINTO DE CARVALHO6
DENISE VIEIRA VASCONCELOS7
1Parte da dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade Federal do Cearaacute pelo primeiro autor para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem2Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC benitoazevedohotmailcom
3Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem (In memoacuteria)4Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC thalesufcbr
5Doutora em Produccedilatildeo Vegetal Pesquisadora CNPqFUNCAP albanisebmgmailcom6Doutora Embrapa Agroinduacutestria Tropical Cx P l 3761 60511-110 Fortaleza CE cristinacnpatembrapabr7Engenheira Agrocircnoma Mestre Universidade Federal do CearaacuteUFC denisevasconceloshotmailcom
RESUMOAs helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com sua beleza
e exotismo constituem uma das maiores riquezas da flora brasileiraEm decorrecircncia da alta demanda do mercado consumidor as mudasvecircm sendo produzidas em escala comercial por meio damicropropagaccedilatildeo uma teacutecnica importante da cultura de tecidosque apresenta diversas etapas A etapa de aclimatizaccedilatildeo eacute a fasemais criacutetica e importante pois se natildeo for bem executada podeproporcionar altos iacutendices de mortalidade e baixas taxas decrescimento e desuniformidade das plantas com consequumlentequeda na produccedilatildeo Para minimizar esse problema e atender agravesexigecircncias do mercado consumidor eacute preciso buscar informaccedilotildeesteacutecnicas e cientiacuteficas sobre o adequado manejo das plantas nafase de aclimatizaccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliaro efeito de distintas lacircminas de irrigaccedilatildeo na aclimatizaccedilatildeo demudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata Ruizamp Pav) A pesquisa foi conduzida em um ambiente protegidopertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical Fortaleza CE(3ordm44 S e 38ordm33 W) Foram analisadas quatro lacircminas de irrigaccedilatildeo1 2 3 e 4 mm de aacutegua As variaacuteveis agronocircmicas avaliadas nosexperimentos foram altura da planta nuacutemero de folhas e diacircmetrodo caule Os resultados dos experimentos evidenciaram o melhordesenvolvimento das mudas micropropagadas de helicocircniaquando irrigadas com lacircmina de 25 mm dia-1
Termos para indexaccedilatildeo Floricultura Heliconia lingulatamanejo de irrigaccedilatildeo
ABSTRACTHeliconias are beautiful and exotic ornamental plants of
the wealthy Brazilian flora Due to a high demand of theconsuming market plants are being produced in a commercial
scale using the technique of micropropagation In this techniqueacclimatization is the most important and critical phase forpromoting high rates of mortality reduced growth and plantuniformity which reduce its production The objective of thiswork was to evaluate the effect of different irrigation depth inthe acclimatization of micropropagated heliconia (Heliconialingulata) The experiments were in a protected environmentlocated at Embrapa Tropical Agroindustry Fortaleza CearaBrazil (3ordm44 S and 38ordm33 W) The agronomic variables evaluatedwere plant height leaf number and stem diameter The resultsshowed the best development of micropropagated heliconia plantsusing water depth of 25 mm day-1
Index terms floraculture Heliconia lingulata irrigationmanagement
INTRODUCcedilAtildeO
As helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com
sua beleza e exotismo assemelham-se a verdadeiras
esculturas lembrando em sua forma piracircmides bicos de
aves cascatas de flores pinhais ou cachos de banana As
helicocircnias constituem uma das maiores riquezas da flora
brasileira Atualmente sabe-se que o mercado internacional
tem proporcionado muitas oportunidades de negoacutecios para
os produtores dessas flores tropicais
A floricultura eacute uma atividade desenvolvida em
geral em ambientes protegidos estufas ou tuacuteneis plaacutesticos
AZEVEDO B M de et al56
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
combinando alta produtividade com maior qualidade
garantindo ao agricultor uma colheita satisfatoacuteria e
reduzindo ao maacuteximo as perdas por danos proporcionados
por variaccedilotildees climaacuteticas adversas (GONDIM et al 2004)
De acordo com Terceiro Neto et al (2004) uma etapa
importante na produccedilatildeo de flores e plantas ornamentais
estaacute relacionada agrave utilizaccedilatildeo de mudas de qualidade Nesse
contexto a produccedilatildeo de mudas atraveacutes da
micropropagaccedilatildeo surge como uma alternativa viaacutevel para
obtenccedilatildeo de mudas em escala comercial com alta qualidade
geneacutetica e fitossanitaacuteria em um curto espaccedilo de tempo
atendendo dessa forma agraves necessidades dos produtores
Dentre as etapas da micropropagaccedilatildeo pode-se destacar a
aclimatizaccedilatildeo que eacute a fase mais criacutetica e importante
A irrigaccedilatildeo eacute uma praacutetica de suma importacircncia no
processo de aclimatizaccedilatildeo jaacute que a aacutegua eacute um dos fatores
que mais limitam a produccedilatildeo das plantas Seu manejo ou
seja a quantidade de aacutegua e sua frequumlecircncia de aplicaccedilatildeo eacute
um fator fundamental para o estabelecimento e o adequado
desenvolvimento das mudas micropropagadas Para se
alcanccedilar todos os objetivos da praacutetica de irrigaccedilatildeo que
englobam a maximizaccedilatildeo da produccedilatildeo racionalizaccedilatildeo do
uso da matildeo-de-obra energia aacutegua e fertilizante e a
aplicaccedilatildeo correta da aacutegua eacute imprescindiacutevel adotar um
correto manejo desse sistema (PEREIRA et al 1997)
Para Pieter et al (2007) os efeitos de aplicaccedilotildees
excessivas ou deficitaacuterias satildeo irreversiacuteveis e variam de
acordo com a intensidade e tempo de duraccedilatildeo do
procedimento imposto Nesses casos os processos
fisioloacutegicos da planta relacionados ao crescimento satildeo
afetados e sob condiccedilotildees severas o deacuteficit pode provocar
a murcha permanente do vegetal Conforme a Embrapa
(2007) em regiotildees de calor intenso com inverno ameno
normalmente a exigecircncia das mudas por aacutegua em qualquer
fase de desenvolvimento eacute maior que em regiotildees de clima
temperado Por outro lado alguns tipos de substrato por
terem menor capacidade de retenccedilatildeo de aacutegua exigem que
se aplique mais aacutegua a cada irrigaccedilatildeo ou que se aumente a
frequumlecircncia das mesmas Eacute recomendaacutevel que as lacircminas
sejam aplicadas nas primeiras horas da manhatilde e ao
entardecer uma vez que irrigaccedilatildeo nas horas mais quentes
pode danificar as mudas principalmente quando
fertirrigadas (CESP 2000)
Para Bernardo et al (2005) eacute necessaacuterio conhecer o
comportamento da cultura em funccedilatildeo das diferentes
quantidades de aacutegua fornecidas e identificar as fases de
desenvolvimento de maior consumo de aacutegua e os periacuteodos
criacuteticos quando a falta ou o excesso provocaria quedas de
produccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliar o
efeito de lacircminas de irrigaccedilatildeo sobre o desenvolvimento de
mudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata
Ruiz amp Pav) em fase de aclimatizaccedilatildeo em ambiente
protegido
MATERIAL E MEacuteTODOS
O presente trabalho foi conduzido em um ambiente
protegido pertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical
no periacuteodo de fevereiro a abril de 2006 A aacuterea estaacute situada
no municiacutepio de Fortaleza Cearaacute com as coordenadas
geograacuteficas correspondentes agrave 3ordm44 S 38ordm33 W e 195 m
de altitude De acordo com a classificaccedilatildeo climaacutetica de
Koppen o clima da regiatildeo eacute do tipo Aw caracterizado
como clima tropical chuvoso de savana tropical com a
eacutepoca mais seca no inverno e maacuteximo de chuvas no veratildeo-
outono
O tuacutenel alto de cultivo forccedilado de formato
semicircular e orientaccedilatildeo leste-oeste foi instalado com as
seguintes dimensotildees 45 m de comprimento 5 m de largura
e 2 m de altura comportando aproximadamente uma aacuterea
de 225 msup2 e um volume de 357 m3 Toda a sua estrutura foi
completamente coberto por uma tela de sombreamento
para reduzir 50 da luminosidade
O sistema de irrigaccedilatildeo empregado foi do tipo
microaspersatildeo suspenso sendo constituiacutedo por um
conjunto motobomba uma linha principal uma linha de
derivaccedilatildeo e uma linha lateral de 10 m com emissores
espaccedilados de 24 m e a uma altura de 05 m das bandejas
Os microaspersores foram do tipo nebulizador modelo
Tietze com bocal violeta em posiccedilatildeo invertida a vazatildeo do
emissor era de 43 l h-1 na pressatildeo de 30 kgf cm-2
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 57
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
As mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata)
utilizadas nesse experimento foram obtidas atraveacutes do
processo de micropropagaccedilatildeo realizado no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos e Geneacutetica Vegetal da Embrapa
Agroinduacutestria Tropical Na ocasiatildeo do plantio as mudas
apresentavam-se completamente enraizadas e com alturas
variando de 26 a 35 cm
As plantas provenientes do material in vitro foram
retiradas dos frascos e suas raiacutezes lavadas em aacutegua
corrente para a retirada do excesso do meio de cultura
Apoacutes a lavagem as mudas foram colocadas em bandejas e
suas raiacutezes podadas com o auxiacutelio de uma tesoura com o
objetivo de uniformizar o material facilitar o plantio e
estimular o desenvolvimento de um sistema radicular mais
funcional
As mudas foram transplantadas para tubetes de
capacidade volumeacutetrica de 180 cm3 contendo o substrato
formado pela mistura poacute-de-coco seco + huacutemus de
minhoca + solo (PCS+H+S) na proporccedilatildeo de 111
misturado no Laboratoacuterio de Solos da Embrapa e sem
fornecimento de fertilizantes durante o periacuteodo
experimental Para promover o completo umedecimento
do substrato e aumentar a umidade relativa do ambiente
momentos antes da transferecircncia das mudas para os
tubetes o sistema de irrigaccedilatildeo foi acionado
proporcionando assim um ambiente favoraacutevel ao
estabelecimento das mudas Com os recipientes em seus
devidos lugares as mudas foram acondicionadas e
levadas em bandejas ateacute o tuacutenel alto de cultivo forccedilado
iniciando a etapa de plantio As mudas foram inseridas
numa profundidade meacutedia de 5 cm de forma que as raiacutezes
e a parte inicial do caule ficaram enterradas As mudas
foram transferidas para os respectivos substratos no dia
3 de fevereiro de 2006
Para promover melhores condiccedilotildees para o
estabelecimento das mudas do primeiro ao quadrageacutesimo
quinto dia apoacutes o transplantio (DAT) essas receberam
uma irrigaccedilatildeo padratildeo com a aplicaccedilatildeo de uma lacircmina
correspondente a 3 mm de aacutegua parcelada duas vezes ao
dia sendo uma aplicaccedilatildeo pela manhatilde iniciando-se
aproximadamente agraves 9 h e a outra agrave tarde a partir das 16 h
A partir do 45ordm DAT foi adotada a diferenciaccedilatildeo das lacircminas
de irrigaccedilatildeo
O delineamento experimental foi em blocos
casualizados composto por quatro tratamentos e cinco
repeticcedilotildees constituiacutedas por cinco fileiras verticais com
cinco plantas cada totalizando 25 plantas por tratamento
num total de 100 plantas por experimento Os tratamentos
consistiram de quatro niacuteveis de irrigaccedilatildeo equivalentes agraves
lacircminas de 10 (L1) 20 (L
2) 30 (L
3) e 40 (L
4) miliacutemetros de
aacutegua tambeacutem parcelada em duas aplicaccedilotildees diaacuterias agraves 9 h
e agraves 16h
Os dados foram coletados em duas ocasiotildees apoacutes
a diferenciaccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo A primeira coleta
de dados ocorreu em 04 de abril aos 60 dias apoacutes o
transplantio (DAT) e a segunda em 19 de abril (aos 75
DAT) As variaacuteveis analisadas foram nuacutemero de folhas
(NF) altura da planta (AP) e diacircmetro do caule (DC) O
nuacutemero de folhas foi contado visualmente em todas as
mudas transplantadas Todas as folhas foram consideradas
na contagem exceto as totalmente secas A altura da planta
foi medida a partir da base ateacute a abertura das folhas por
meio de um escaliacutemetro graduado em centiacutemetros
subdividido em miliacutemetros O diacircmetro do caule foi
mensurado com o auxiacutelio de um paquiacutemetro digital
graduado em centiacutemetros considerando a base do caule
como padratildeo de contagem
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos aplicativos Microsoft Office Excel e SISVAR
versatildeo 46 (FERREIRA 2003)
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os valores meacutedios mensais de temperatura do ar
umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidade
do vento a 2 m de altura registrados durante o experimento
pela estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade
Federal do Cearaacute (UFC) encontram-se na Tabela 1 cuja
temperatura meacutedia do periacuteodo foi de 23 ordmC e umidade relativa
meacutedia de 93 caracterizando um periacuteodo de temperaturas
amenas
AZEVEDO B M de et al58
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
TABELA 1 Valores meacutedios mensais de temperatura do ar umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidadedo vento a 2m de altura Fortaleza-CE 2006
Mecircs Temperatura (ordmC) U R () Rad solar global (W m-2) Vel do vento (m s-1)
Fevereiro 23 95 1329 173
Marccedilo 24 84 1291 125
Abril 23 99 1162 094
Fonte Estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade Federal do Cearaacute (UFC)
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Tanto o deacuteficit quanto o excesso hiacutedrico afetaram o
crescimento das mudas Isso pode ter ocorrido pelo fato
da deficiecircncia hiacutedrica ocasionar o fechamento dos
estocircmatos diminuindo a concentraccedilatildeo intracelular de CO2
e consequumlentemente gerando decreacutescimo na assimilaccedilatildeo
do mesmo (BERNARDO et al 2005) Jaacute o excesso hiacutedrico
ocasiona a falta de oxigecircnio que provoca a reduccedilatildeo da
fotossiacutentese e prejudica a conversatildeo da mateacuteria orgacircnica
pelos microorganismos em formas soluacuteveis que a planta
possa reutilizar Esses fatores podem proporcionar um
TABELA 2 Anaacutelise de variacircncia das caracteriacutesticas de desenvolvimento altura da planta (AP) diacircmetro do caule(DC) e nuacutemero de folhas (NF) de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das laminas aplicadas aos 60e 75 DAT
(ns) natildeo significativo significativo a 5 de probabilidade pelo teste F
Quadrado meacutedio Variaacutevel FV GL
60 DAT 75 DAT
Bloco 4 03966ns 02946ns
Tratamento 3 23675 31348 AP
Resiacuteduo 12 03593 06279
Bloco 4 06407ns 02754ns
Tratamento 3 16645 41102 DC
Resiacuteduo 12 06222 06728
Bloco 4 04377 01829ns
Tratamento 3 03421 05204 NF
Resiacuteduo 12 0773 01081
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 59
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
menor crescimento das plantas devido agrave diminuiccedilatildeo da
eficiecircncia de transformaccedilatildeo de fotoassimilados nessas
condiccedilotildees (REGO et al 2004)
A anaacutelise de regressatildeo indica que o modelo que
melhor se ajustou agrave relaccedilatildeo altura de planta em funccedilatildeo da
lacircmina de irrigaccedilatildeo aos 60 e 75 DAT foi o polinomial
quadraacutetico apresentando valores para R2 de 0997 e 0966
respectivamente (Figuras 1 e 2) Observa-se que aos 60 e 75
DAT a altura da planta aumentou com a lacircmina aplicada ateacute
FIGURA 1 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 60 DATFortaleza-CE 2005 (ns natildeo significativo pelo teste F significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
FIGURA 2 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 75 DATFortaleza-CE 2005 (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
um ponto maacuteximo de 247 e 250 mm dia-1 respectivamente
representando a lacircmina que proporcionou maior
desenvolvimento das mudas em relaccedilatildeo agrave altura da planta
sendo obtida 896 e 1012 cm respectivamente Lacircminas acima
desse valor causaram reduccedilatildeo no crescimento
possivelmente devido ao excesso de aacutegua
Soares et al (1998) salientam que a aacutegua em excesso
proporciona aumentos nos custo de produccedilatildeo e do risco
de lixiviaccedilatildeo da aacutegua e dos nutrientes nela diluiacutedos o que
AP = -05934LI2 + 29273LI + 53519R2 = 0997
700
740
780
820
860
900
940
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1)
Altu
ra d
a pl
anta
(cm
)
AP = -06728L2 + 33294L + 59869
R2 = 0966
80
84
88
92
96
100
104
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Alt
ura
da p
lant
a (c
m)
AZEVEDO B M de et al60
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
pode prejudicar o desenvolvimento radicular Aleacutem disso
o excesso de aacutegua compromete os processos de
fotossiacutentese e respiraccedilatildeo os quais envolvem a utilizaccedilatildeo
de determinadas concentraccedilotildees de oxigecircnio (RAVEN et
al 2001) Jaacute em casos de deacuteficit hiacutedrico podem ocorrer
problemas de ordem fisioloacutegica ou seja afetar
negativamente o desenvolvimento das plantas
Em ambos os periacuteodos avaliados observou-se que
as lacircminas aplicadas influenciaram o diacircmetro de caule
das mudas de helicocircnia com valores meacutedios de 97 e 103
cm aos 60 e 75 DAT respectivamente A anaacutelise de
regressatildeo indicou que aos 60 DAT o modelo polinomial
quadraacutetico foi o que melhor representou o diacircmetro do
caule em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo com R2 de 0746
(Figura 3) O maacuteximo valor do diacircmetro de caule (1022
cm) calculado por derivaccedilatildeo da curva de ajuste foi obtido
aplicando-se uma lacircmina de 264 mm dia-1 A partir dessa
lacircmina houve uma diminuiccedilatildeo no diacircmetro de caule
ocasionado possivelmente pelo excesso de aacutegua Aos
75 DAT o modelo matemaacutetico ajustado para relacionar o
diacircmetro de caule em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo
apresentou coeficiente de determinaccedilatildeo (R2) muito baixo
natildeo sendo representativo
Modelos polinomiais quadraacuteticos para explicar o
efeito da lacircmina de irrigaccedilatildeo sobre a altura e diacircmetro de
caule tambeacutem foram obtidos por Pieter et al (2007) na
produccedilatildeo da flor da fortuna por Lopes et al (2005) em
mudas de Eucalyptus grandis W Hill por Pereira et al
(2003) e Recircgo et al (2004) na cultura do crisacircntemo
A anaacutelise de variacircncia (Tabela2) indicou que o
nuacutemero de folhas nas mudas de helicocircnia foi influenciado
pelas lacircminas de irrigaccedilatildeo nas duas eacutepocas analisadas (60
e 75 DAT) com valores meacutedios de 325 e 345 folhas nas
respectivas eacutepocas poreacutem o modelo matemaacutetico para
representar essa relaccedilatildeo apresentou coeficiente de
determinaccedilatildeo (R2) muito baixo e natildeo foi estatisticamente
significativo
As anaacutelises mostraram que aos 60 e 75 DAT a
lacircmina de irrigaccedilatildeo ideal que proporcionou o melhor
desenvolvimento das plantas encontra-se na faixa
compreendida de 247 a 264 mm dia-1 Valores
semelhantes foram obtidos por Gomes et al (2006) que
verificaram que a taxa de evapotranspiraccedilatildeo meacutedia da
Heliconia psittacorum L f x HSpatho-circinada
Aristeg cultivada em ambiente protegido foi de 22 mm
dia-1
FIGURA 3 Diacircmetro de caule de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) aos 60 DAT em funccedilatildeo das lacircminas deirrigaccedilatildeo Fortaleza CE (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
DC= -04111L2
+ 21726L + 73492
R2 = 0746
80
85
90
95
100
105
110
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Diacirc
met
ro d
o ca
ule(
cm)
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 61
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
CONCLUSOtildeES
As lacircminas de irrigaccedilatildeo influenciaram as
caracteriacutesticas de desenvolvimento avaliadas aos 60 e 75
DAT
A altura de planta e o diacircmetro de caule
apresentaram resposta quadraacutetica em relaccedilatildeo agraves lacircminas
aplicadas
Nas condiccedilotildees em que foi desenvolvido este
trabalho para a aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas
de helicocircnia recomenda-se irrigar com 25 mm dia-1 com o
intuito de se obter mudas mais vigorosas para serem
transplantadas para condiccedilotildees de campo
AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pela concessatildeo da bolsa de estudo
Agrave Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaacuteria
CNPAT pela oportunidade de realizaccedilatildeo desta pesquisa
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(Recebido em 4 de marccedilo de 2008 e aprovado em 1 de setembro de 2008)
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ORGANOGEcircNESE IN VITRO DO MARACUJAZEIRO (PASSIFLORA EDULIS SIMSF FLAVICARPA DEGENER) AFETADO POR IRRADIAcircNCIA SACAROSE E
POSICcedilAtildeO DOS EXPLANTES
RODRIGO SOBREIRA ALEXANDRE1 FLAacuteVIO ALENCAR D
ARAUacuteJO COUTO1 JOSEacute MARIA MOREIRA DIAS1WAGNER CAMPOS OTONI2 RITA DE CAacuteSSIA MENDES3 PAULO ROBERTO CECON4
1Professor Doutor Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG rsalexandreclick21combr2Doutor Departamento de Biologia Vegetal Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG3Teacutecnica em Quiacutemica Graduanda em Agronomia Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
4Doutor Departamento de Informaacutetica Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
ABSTRACTThe culture of the tissues has helped considerably the
Passiflora genus development achieving successfully themorphogenic responses in different in vitro explants Theobjective this work was to assess the in vitro morphogenicresponses of hypocotyl segments of passion fruit collected from5 positions (apical sub-apical median sub-basal and basalnamely 1-5 respectively) along the hypocotyls axis and culturedin medium with different concentrations of sucrose and exposedto irradiance levels The experiments were performed as acompletely randomized blocks design with 15 repetitions in 4 x4 x 5 factorial scheme (irradiance x sucrose x explant positions)totalizing 80 treatments on which every experimental parcelwas comprised of a flask containing five hypocotyls Thehypocotyl segment from positions 1 and 3 at their extremedistal ends cultured onto medium of culture with 30 g L-1 sucroseand under 100 micromol m-2 s-1 irradiance enable the greatest numberof buds and shoots differentiated The distal extremity from thesegments of hypocotyl farthest from the cotyledonary nodes(position 1) cultivated in 20 g L-1 sucrose and exposed to 50micromol m-2 s-1 irradiance result in the best condition for shootdevelopment
Index terms Passiflora edulis f flavicarpa in vitro propagationyellow passion fruit
RESUMOA cultura de tecidos tem auxiliado no desenvolvimento
do gecircnero Passiflora alcanccedilando sucesso morfogecircnico emdiferentes explantes in vitro Objetivou-se neste trabalho avaliarrespostas morfogecircnicas in vitro de segmentos de hipocoacutetilo domaracujazeiro coletados de 5 posiccedilotildees (apical sub-apicalmediana sub-basal e basal isto eacute 1-5 respectivamente) ao longodo eixo dos hipocoacutetilos e cultivados em meios com diferentesconcentraccedilotildees de sacarose e expostos a niacuteveis de irradiacircncia Oexperimento foi instalado em blocos casualizados com 15
repeticcedilotildees em esquema fatorial 4 x 4 x 5 (irradiacircncia x sacarose xposiccedilatildeo dos explantes) totalizando 80 tratamentos nos quaistoda parcela experimental foi constituiacuteda de um frasco contendocinco hipocoacutetilos As posiccedilotildees 1 e 3 no extremo distal dossegmentos de hipocoacutetilo cultivados em meio de cultura com 30 gL-1 de sacarose e sob 100 micromol m-2 s-1 de irradiacircncia proporcionamaior nuacutemero de brotos e brotos diferenciados A extremidadedistal dos segmentos de hipocoacutetilo extraiacutedos mais distantes donoacute cotiledonar (posiccedilatildeo 1) cultivados em 20 g L-1 de sacarose eexpostos agrave irradiacircncia de 50 micromol m-2 s-1 resulta na melhorcondiccedilatildeo para o desenvolvimento do broto
Termos para indexaccedilatildeo Passiflora edulis f flavicarpapropagaccedilatildeo in vitro maracujazeiro amarelo
INTRODUCTION
The genus of Passiflora was originated at South
America and comprises more than 580 species most of them
belonging to the Tropical America mainly from Brazil
(OLIVEIRA 1987) Among them the most commercially used
is the passion fruit plant P edulis Sims f flavicarpa Deg
The culture of the tissue has been reaching with
the Passiflora genus answers satisfactory morphogenic in
different in vitro explants (BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1993 1994 MORAN-ROBLES 1979 SCORZA
amp JANICK 1980)
The explant morphogenic capability has
relationship with the polarity effect such factor is
responsible for the shoot emergence Several studies were
researched to assess the effect of the position of the
In vitro organogenesis of passion fruit 63
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
explants extracted from the hypocotyl and roots of Citrus
plantlets during the shoot-bud proliferation (BURGER amp
HACKETT 1986 COSTA et al 2004 DIAS 1998
GARCIA-LUIS et al 1999) as well as the effect of the
polarity in the formation the buds and shoots
(McCLELLAND amp SMITH 1990 YAE et al 1987)
In the in vitro organogenesis of plants of the genus
Passiflora several factors influence among them among
them the irradiance for which different types of explants
were spared for the essays 58 micromol m-2 s-1 in internodes
(MORAN-ROBLES 1979) 20 micromol m-2 s-1 in mesophyll-
derived protoplasts (OTONI et al 1995) 30 or 23 micromol m-
2 s-1 in leaf (KAWATA et al 1995 APPEZZATO-DA-
GLOacuteRIA et al 1999 respectively) 50 micromol m-2 s-1 in
endosperm (MOHAMED et al 1996) 80 30 or 24 micromol m-
2 s-1 in shoot cultures (FARIA amp SEGURA 1997
KURIYAMA et al 1998 BARBOSA et al 2001
respectively) 20-55 micromol m-2 s-1 in cotyledons (HALL et
al 2000) 60 or 54 micromol m-2 s-1 in hipocotyl (COUCEIRO
2002 FELISMINO 2005 respectively) Although different
irradiances have been studied in these works in none of
them the effect of difference irradiances was studied during
the in vitro organogenic process of passion fruit plant
Other important factor for the in vitro
organogenesis is the source of carbon The in vitro
organogenesis works affirm that sucrose has been the most
employed source of carbon in the culture for Passiflora
(APPEZZATO-DA-GLOacuteRIA et al 1999 HALL et al 2000)
its concentration varies from 10 to 30 g L-1
The present work aimed to evaluate the in vitro
morphogenic responses of hypocotyledonary explants of
passion fruit plants throughout the use of different levels
of irradiance sucrose concentration and positions of the
segments of hypocotyls derived from in vitro germinated
plantlets
MATERIALS AND METHODS
Axenic and vigorous etiolated plantlets were
obtained from in vitro germinated seeds and used as
explants sources
In vitro-grown seedlings (25-30 days-old) were
transversally cut into 1-12 cm long were cultured on
different conditions of incubation The explants were
cultured in 300 mL glass flasks (Santa Marina Satildeo Paulo
Brazil) containing 30 mL aliquots of MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) medium salts 100 mg L-1 mio-inositol 10
mg L-1 6-benzylaminopurine (BAP) vitamins of White
(1951) and 80 g L-1 of agar (Isofarreg Brazil) The medium
pH was adjusted to 57 plusmn 01 before the addition of agar
Several concentrations of sucrose (0 10 20 or 30 g L-1)
were added to this medium The culture flasks were sealed
with polypropylene lids and the medium was autoclaved
at 121ordmC 15 kgf cm-2 during 20 minutes
The segments of hypocotyls were cut in five
segments numbered from 1 to 5 follows 1 basal the first
segment adjacent to the root collar 2 sub-apical the
second segment adjacent to the hypocotyl root 3 median
the central segment in relation to the hypocotyl region 4
sub-apical the second segment that is adjacent to the
cotyledonary node 5 - apical the first segment that is
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
Axenic plantlets Segments of hypocotyls in the
medium of culture
DE
PE
FIGURE 1 The segments of hypocotyls numbered from1 to 5 were characterized as follows 1 basal the firstsegment adjacent to the root collar 2 sub-apical thesecond segment adjacent to the hypocotyl root 3 median the central segment in relation to the hypocotylregion 4 sub-apical the second segment that is adjacentto the cotyledonary node 5 - apical the first segment thatis adjacent to the cotyledonary node () ED = distalextremity EP = proximal extremity
ALEXANDRE R S et al64
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
adjacent to the cotyledonary node (Figure 1) In this order
the five hypocotyl explants were placed horizontally on
the media maintaining the proximal extremity towards the
wall of the flask and having the distal extremity facing the
centre of the flask
The flasks were distributed 5 cm far from each other
on the shelves at the growth room to avoid shadowiness
at these flasks The explants were kept at the temperature
of 27 plusmn 2ordmC photoperiod of 168-h lightdark regime and
irradiances of 25 50 100 and 150 micromol m-2 s-1
The irradiance levels were provided by the
utilization of 40 W daylight fluorescent light tubes (Osramreg
Brazil) as follows I - 25 micromol m-2 s-1 (1 light on without
on without dislocating the luminous panel) III - 100 micromol
m-2 s-1 (4 lights on setting the luminous panel at 20 cm
from the shelf surface) IV - 150 micromol m-2 s-1 (5 lights on
setting the luminous panel at 16 cm from the shelf surface)
Copper strings were used to support the fluorescent
incandescent lamps
After 45 days of incubation regeneration frequencies
and number of shoots per explant were assessed which
were formed at the distal and proximal ends The
organogenesis was assessed regarding shoot lengths from
the evaluated positions at the proximal and distal ends
The experiment was performed under complete
randomized blocks design with 15 replicates in a 4 x 4 x 5
factorial scheme (irradiance levels 25 50 100 and 150 igravemol
m-2 s-1 x sucrose concentrations 0 10 20 and 30 g L-1 x
position of the explants at the hypocotyl 1 2 3 4 and 5)
totalizing 80 treatments being the experiment plot
comprised of a flask containing five segments of
hypocotyl Considering the three factors studied were made
by analysis of test average (Tukey) and regression to
concentrations of sucrose and levels of irradiance The
experiments were repeated at least once
RESULTS AND DISCUSSION
In vitro organogenesis at the distal extremity The
differentiation of buds and shoots as influenced by
irradiance levels and distinct positions of explants along
the hypocotyls axis and the mean values and the standard
deviation of the total number of buds and shoots formed
at the distal extremity are shown in figures 2 and 3
respectively
Independently from the other factors at the medium
without sucrose there was no morphogenic response in
the explants (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The number of structures formed at the distal
extremity reached the highest means when there was added
30 g L-1 sucrose to the medium under 100 micromol m-2 s-1
irradiance at the positions 1 and 3 (Figure 3a) Considering
the means of the five explant positions an average of 592
structures per explant was obtained Similarly Couceiro
(2002) has obtained 590 structures per explant at the distal
extremity when cultivating them horizontally under 60 micromol
m-2 s-1 of irradiance in MS medium containing 50 mg L-1 of
BAP and 30 g L-1 of sucrose Garcia-Luis et al (1999) have
shown in Citrange Troyer that despite the explants being
horizontally placed on the medium surface there was an
additional effect of polarity evidenced by the larger number
of shoots differentiated at the apical extremity and the
distance among the cotyledonary node has affected the
morphogenesis These results confirmed the studies of
Ziv et al (1970) and Fari amp Czako (1981) evidencing that
normally in stem and root sections the shoot-buds are
formed at the distal extremity and the roots at the proximal
extremity In the present work structures formed at both
explant extremities but in a higher degree at the distal
extremity
The largest value found for the average length of
the shoot a was 364 mm for the explants that were extracted
farthest from the cotyledonary node (position 1) and
cultured in medium containing 20 g L-1 of sucrose and
submitted to 50 micromol m-2 s-1 of irradiance (Figure 4a)
However in Passiflora actinia the inclusion of auxins to
the medium favoured the development of the shoot-buds
that consequently presented larger lengths when the
hypocotyl segments were cultivated in MS medium
containing 001 mg L-1 de IBA (KOCH et al 2001)
In vitro organogenesis of passion fruit 65
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
In vitro organogenesis at the proximal extremity
The mean values and the standard deviation of the total
number of buds and shoots formed at the proximal extremity
of the explants are presented in Figure 3b Likewise to the
distal extremity the formation of buds and shoots did not
happen when the explants were cultured in medium without
sucrose (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The differentiation and development of the buds
and shoots at the proximal extremity reached the highest
FIGURE 2 In vitro organogenesis in hypocotyl segments that are characterized by the positions that variesfrom 1 to 5 under effect of different irradiance levels A 25 micromol m-2 s-1 B 50 micromol m-2 s-1 C 100 micromol m-2 s-1 andD 150 micromol m-2 s-1 and sucrose concentrations (a 0 b 10 c 20 d 30 g L-1) for 45 days
A 1
2
3
4
5
a
1
2
3
4
5
b 1
2
3
4
5
c 1
2
3
4
5
d
B
a
b
c
d
C
a
b
c
d
D
a
b
c
d
Distal extremity
Proximal extremity
averages (35) at 25 micromol m-2 s-1 of irradiance in MS medium
containing 20 g L-1 sucrose for explants derived from the
position 4 (Figure 3b) Concurrently the work by Baccarin
(1988) pointed out the best bud and shoot proliferation in
explants from the regions closer to the cotyledonary nodes
The presence of BAP in the medium was essential to
the organogenic process as observed in works with Passiflora
spp (BECERRA et al 2004 BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1994 FERNANDO 2005 HALL et al 2000)
ALEXANDRE R S et al66
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Position 1
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 2
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 3
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Num
ber t
otal
of e
stru
ture
s
Position 4
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 1
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
10
20
30
Position 2
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
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utur
as
Position 3
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
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l de
estr
utur
as
Position 4
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
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l de
estr
utur
as
Position 5
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 5
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Sucrose
(g L-1)
a
b
FIGURE 3 Mean values and standard deviation of the total number of structures (buds and shoots) formed at thedistal (a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
In vitro organogenesis of passion fruit 67
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
FIGURE 4 Mean values and standard deviation of the lengths of structures (buds and shoots) formed at the distal(a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
Position 1
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
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0
1
2
3
4
25 50 100 150
Com
prim
ento
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brot
os
(mm
)
Position 3
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Leng
th o
f sho
ots
(mm
)
Position 4
0
1
2
3
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25 50 100 150
Com
prim
ento
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brot
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(mm
)
Position 5
0
1
2
3
4
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Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
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brot
os
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)
Position 1
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os(m
m)
10
20
30
Position 2
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os(m
m)
Position 3
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 4
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
o (m
m)
Position 5
0
1
2
3
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Sucrose
(g L-1)
a
b
ALEXANDRE R S et al68
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Independently from the irradiance levels different
sucrose concentrations and explant positions at the
hypocotyl the shoot elongation was considered to be
lower (Figure 4b) than the minimum recommended
(approximately 2-3 cm) for the in vitro rooting process It
highlights the need of previous submission of the explants
to an adequate medium for the elongation process
CONCLUSIONS
The morphogenic response for bud and shoot
formation was remarkably superior at the distal extremity
The maximum concentration among the sucrose
and the irradiance of 100 micromol m-2 s-1 has proportioned
better morphogenic responses at the distal extremity
regardless the position of the explants
The buds and shoots differentiated at the distal
extremity farthest to the cotyledonary node developed
better under 50 micromol m-2 s-1 of irradiance in medium
supplemented with 20 g L-1 sucrose
The use of a carbon source is essential for in vitro
morphogenesis
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var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] EM CONDICcedilOtildeESDE CASA DE VEGETACcedilAtildeO
SUBSTRATES EVALUATION FOR PRODUCTION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE[Ananas comosus (L) Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] PLANTS
UNDER GREENHOUSE CONDITIONS
FRANCISCO NUNES DA CUNHA FILHO1 ANTONIO CARLOS TORRES1 JOAtildeO MARIA CHARCHAR1
1Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF francisconunescnphembrapabr torrescnphembrapabr
RESUMOA utilizaccedilatildeo de substratos na aclimataccedilatildeo de mudas
micropropagadas oferece consideraacutevel vantagem no custo e napossibilidade de obtenccedilatildeo de alta porcentagem de sobrevivecircnciados propaacutegulos ex vitro aliado agrave obtenccedilatildeo de mudas maisuniformes vigorosas precoces e com alta qualidade fitossanitaacuteriaAvaliaram-se quatro diferentes tipos de substratos (fibra de cococomercial fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxe substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas) na aclimataccedilatildeode mudas do abacaxizeiro ornamental As variaacuteveis massa frescatotal massa fresca da parte aeacuterea massa fresca de raiacutezescomprimento de raiacutezes altura de plantas e nuacutemero total de folhasforam avaliadas O delineamento experimental utilizado foi ointeiramente casualizado com quatro tratamentos e com quatrorepeticcedilotildees Pela anaacutelise dos resultados o substrato padronizadoda Embrapa Hortaliccedilas o de fibra de coco comercial e o Plantmaxforam os mais eficientes na produccedilatildeo de mudas de abacaxizeiroornamental para fins comerciais O substrato de coco-verde daEmbrapa Hortaliccedilas foi o menos indicado
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatus plantaornamental substrato
ABSTRACTThe use of substrate in the acclimatization of
micropropagated plants offers considerable cost advantages andthe possibility to obtain high percentage of ex vitro survivingplants as well as in the production of uniform vigorous precociousand healthy plants Four different substrates (commercial coconutfiber green-coconut fiber from Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxand the standardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas) wereevaluated for acclimatization of ornamental pineapple plantsTotal fresh mass fresh mass of shoots fresh mass of roots rootlength plant height and total number of leaves were obtainedThe experiment followed a complete randomized design withfour treatments and four replicates The results showed that thestandardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas commercialcoconut fiber and Plantmax were the most efficient for theproduction of ornamental pineapple plants for commercialpurpose Green-coconut fiber substrate from Embrapa was lessindicated
Index terms Ananas comosus var bracteatus ornamental plantgrowth substrate
INTRODUCcedilAtildeO
Os abacaxizeiros ornamentais apresentam flores e
infrutescecircncias de beleza atrativa muito usadas em arranjos
decorativos e ornamentais no Brasil e exterior
representando um segmento de grande potencial para
exportaccedilatildeo (CABRAL 2000 SOUZA et al 2004) No
comeacutercio de flores nativas o abacaxi ornamental jaacute obteve
valores agregados da ordem de 5000 em relaccedilatildeo ao
abacaxi de fruta natildeo ornamental (SOUZA et al 2004)
A propagaccedilatildeo vegetativa do abacaxizeiro ornamental
para fins de comercializaccedilatildeo eacute feita por mudas oriundas da
planta-matildee Poreacutem essa propagaccedilatildeo apresenta o
inconveniente de disseminar agentes patogecircnicos e pragas
pela utilizaccedilatildeo de mudas contaminadas Dentre os patoacutegenos
e pragas mais comuns destacam-se o fungo Fusarium
subglutinans (Wollenw amp Reinking) PE Nelson (TOUSSON
amp MARASAS 1983) e a cochonilha Dysmicoccus brevipes
turfa casca curtida de eucalipto ou Pinus palha de arroz
carbonizada poacute de carvatildeo (GRATTAPAGLIA amp
MACHADO 1998) casca de arroz carbonizada poacute de
casca de coco seco e verde (SANTOS et al 2006) mistura
de areiaxaximhuacutemus (SOUZA JUNIOR et al 2001) solo
esterco bovino Plantmax e composto orgacircnico em
diferentes proporccedilotildees (MOREIRA et al 2006) dentre
outros Entretanto para o genoacutetipo em estudo as
tecnologias disponiacuteveis necessitam de adequaccedilatildeo para
serem mais eficientes e de baixo custo na produccedilatildeo
comercial de mudas
Objetivou-se neste trabalho avaliar quatro
diferentes substratos na produccedilatildeo de mudas do
abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L) Merr var
bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] para fins comerciais
utilizando-se propaacutegulos produzidos in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
Produccedilatildeo de mudas in vitro
Foram utilizados como fonte de explantes
propaacutegulos produzidos in vitro subcultivados a cada 60
dias utilizando-se o meacutetodo proposto por Correia et al
(1999) Os explantes consistiram de brotaccedilotildees com 2 cm de
comprimento transferidos para meio baacutesico de cultura
contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 3 de sacarose e em mg L-1 incluiacuteram-
se i-inositol 100 tiaminaHCl 02 aacutecido nicotiacutenico 005
piridoxinaHCl 005 e glicina 02 O meio de cultura foi
solidificado com 06 de aacutegar e o pH do meio foi ajustado
para 57 O meio foi distribuiacutedo em tubos de ensaio de 25 x
150 mm na quantidade de 125 mL por tubo
Os tubos foram esterilizados em autoclave a 121ordmC
e a 104 Kpa de pressatildeo por 15 minutos Apoacutes a inoculaccedilatildeo
as culturas foram mantidas em cacircmara de crescimento com
fotoperiacuteodo de 16 horas irradiacircncia de 32 mmol m-2 s-1
temperatura de 27oC durante 30 dias
As mudas foram preacute-aclimatizadas mediante
abertura das tampas dos frascos de cultura cinco dias
antes do transplantio para os respectivos substratos
Transplante e desenvolvimento de mudas micropropagadas
Mudas enraizadas e preacute-aclimatizadas de
abacaxizeiro ornamental foram retiradas dos tubos de
cultura e transplantadas em bandejas de isopor com 72
ceacutelulas contendo quatro diferentes substratos utilizados
como tratamentos 1) substrato comercial de fibra de coco
2) substrato de fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas
3) substrato Plantmax e 4) substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas composto por solo de cerrado areia
lavada esterco de gado curtido e palha de arroz
carbonizada em proporccedilotildees de 3111 vv com adiccedilatildeo de
300 g de calcaacuterio dolomiacutetico e de 300 g da formulaccedilatildeo 4-
30-16
Apenas 30 ceacutelulas por bandeja foram
transplantadas com mudas de abacaxizeiro ornamental (uma
muda por ceacutelula) deixando-se 42 ceacutelulas livres (sem planta)
para que natildeo houvesse competiccedilatildeo entre plantas nas
bandejas As bandejas permaneceram cobertas com
envoltoacuterio plaacutestico nos primeiros trecircs dias apoacutes o
transplante
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado com 10 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca
de raiz e tamanho de raiz e 30 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
altura e nuacutemero de folhas Os dados foram coletados aos
90 dias apoacutes o transplantio A anaacutelise de variacircncia do
experimento foi realizada com o auxiacutelio do programa
estatiacutestico SAS Institute Inc (SAS INSTITUTE 1988) e a
CUNHA FILHO F N da et al72
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
diferenciaccedilatildeo de meacutedias pelo teste de Tukey p 001 e
p 005
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
A anaacutelise conjunta do experimento indicou que
existiu homogeneidade de variacircncia natildeo sendo necessaacuteria
a transformaccedilatildeo de dados para a realizaccedilatildeo das anaacutelises A
anaacutelise de variacircncia (Tabelas 1 e 2) indicou que houve
efeito significativo dos diferentes substratos (teste de
Tukey p 005) sobre a massa fresca total massa fresca da
parte aeacuterea altura de plantas e nuacutemero total de folhas e
que natildeo houve diferenccedila significativa entre os diferentes
substratos com relaccedilatildeo agrave massa fresca de raiacutezes e o
comprimento de raiacutezes (Figuras 1 A-F)
Embora natildeo tenha havido diferenccedila significativa
(teste de Tukey p 005) entre os valores de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea nos tratamentos com
os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
comercial de fibra de coco e o Plantmax os valores
absolutos mais elevados desses paracircmetros foram obtidos
com o substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
(Figuras 1 A-B)
No substrato de fibra de coco-verde da Embrapa
Hortaliccedilas as plantas de abacaxizeiro ornamental tiveram
sempre pior performance em produccedilatildeo de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea natildeo se diferenciando
estatisticamente dos valores obtidos com o uso dos
substratos comerciais da Plantmax e de fibra de coco
Entretanto esses substratos foram significativamente
inferiores (teste de Tukey p 005) em relaccedilatildeo aos valores
obtidos com o uso do substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas (Figuras 1 A-B)
Os valores obtidos para as variaacuteveis massa fresca
de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes natildeo diferiram
estatisticamente entre si (teste de Tukey p 005) em
relaccedilatildeo aos quatro tratamentos (substratos analisados)
Os maiores valores absolutos dessas variaacuteveis foram obtidos
para a massa fresca de raiacutezes no substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e para o comprimento de raiacutezes no
substrato comercial de fibra de coco (Figuras 1 C-D)
TABELA 1 Resumo da anaacutelise de variacircncia para massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca deraiacutezes e comprimento de raiacutezes de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio
Fontes de variaccedilatildeo GL Massa fresca total
Massa fresca
da parte aeacuterea Massa fresca
de raiacutezes Comprimento
de raiacutezes
Tipo de substrato 03 673536 518934 02201ns 22382ns
Resiacuteduo 36 115108 80557 01328 13107
Total 39 - - - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade (ns) natildeo significativo
TABELA 2 Resumo da anaacutelise de variacircncia para altura e nuacutemero de folhas de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio Fontes de variaccedilatildeo GL
Altura de plantas Nuacutemero total de folhas
Tipo de substrato 003 1424357 526854
Resiacuteduo 124 50188 16807
Total 127 - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas 73
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
FIGURA 1 Variaacuteveis avaliadas na determinaccedilatildeo de eficiecircncia dos substratos Plantmax Embrapa Hortaliccedilas fibra decoco e fibra de coco-verde na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental -em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo A)massa fresca total B) massa fresca da parte aeacuterea C) massa fresca de raiacutezes D) comprimento de raiacutezes E) altura deplantas e F) nuacutemero total de folhas Meacutedias seguidas da mesma letra natildeo diferem significativamente entre si pelo testede Tukey Plt005
3653+b 0688
7459+ab 1414
9894+a 1229
6254+ab 0789
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a to
tal (
g)
A
3421+b 0664
6822+ab 1152
8930+a 0933
6002+ab 0763
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax Embrapa Hortaliccedilas Fibra de coco Fibra de coco verde
Tipo de substratos
Mas
sa fr
sca
da p
arte
aeacuter
ea (
g)
B
0568 + 0178 a
0298 + 0007 a0363 + 0120 a
0222 + 0039 a
0
02
04
06
08
1
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a de
rai
zes
(g)
C
12000 + 0338 a
12800 + 0387 a
11690 + 0468 a12020 + 0204 a
10
11
12
13
14
15
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Com
prim
ento
de
raiz
es (c
m)
D
11789 + 0412 a13800 + 0406 b
11088 + 0381 a
8797 + 0385 c
02468
1012141618
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Alt
ura
de p
lant
as (c
m)
E
5882 + 0173 c
7727 + 0191 b8818 + 0259 a
8143 + 0294 ab
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Nuacutem
ero
tota
l de
folh
as
F
Houve diferenccedila significativa (teste de Tukey
p 005) entre os valores meacutedios obtidos para a altura de
plantas e para o nuacutemero total de folhas nos quatro
tratamentos avaliados As plantas tiveram
significativamente maior desenvolvimento em altura no
substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas Natildeo houve
diferenccedila significativa entre os valores meacutedios em altura
de plantas nos substratos comerciais da Plantmax e de
fibra de coco Esses poreacutem foram diferentes dos valores
obtidos no substrato de fibra de coco-verde que
proporcionou significativamente o menor crescimento das
plantas (Figura 1 E)
Maiores meacutedias da variaacutevel nuacutemero total de folhas
foram obtidas com a utilizaccedilatildeo do substrato padronizado
CUNHA FILHO F N da et al74
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
da Embrapa Hortaliccedilas e do Plantmax Natildeo houve diferenccedila
significativa entre os valores meacutedios do nuacutemero total de
folhas nos substratos Plantmax e de fibra de coco comercial
mas esses diferiram estatisticamente dos obtidos no
substrato fibra de coco-verde O substrato de fibra de coco-
verde foi o que propiciou os menores valores da variaacutevel
nuacutemero total de folhas (Figura 1 F) Esses resultados
contradizem os relatados por Carrijo et al (2002) que
verificaram que os substratos contendo fibra de coco-verde
satildeo os mais indicados para produccedilatildeo de mudas de
hortaliccedilas e ornamentais em cultivo sem solo Correia et al
(2003) natildeo observaram diferenccedila significativa entre os
valores da massa fresca de raiacutezes de mudas de cajueiro
anatildeo precoce crescidas em substratos com adiccedilatildeo de poacute
de coco-verde ou de poacute de coco-maduro Santos et al
(2006) relataram que os substratos orgacircnicos contendo as
combinaccedilotildees de fibras de coco seco ou verde
proporcionaram baixo desenvolvimento na aclimatizaccedilatildeo
de mudas Heliconia rostrata Ruiz amp Pav provenientes
da micropropagaccedilatildeo Poreacutem Bezerra et al (2001) discordam
dos autores acima mencionados informando que os
substratos contendo fibras de coco-verde ou seco foram
os mais indicados respectivamente para o enraizamento
de mudas de crisacircntemo (Chrysanthemum sp) e de violeta
africana (Saintpaulia ionantha H Wendl)
Tambeacutem substrato contendo casca de arroz
carbonizada tem sido utilizado na produccedilatildeo de mudas
micropropagadas Weber et al (2003) relataram que o
substrato contendo esse componente misturado com
vermiculita e vermicomposto em proporccedilotildees de 111 foi a
melhor opccedilatildeo para aclimataccedilatildeo de mudas de abacaxizeiro
ornamental oriundas da cultura in vitro e transplantadas
para tubetes Esses autores ainda observaram que o uso
da mistura contendo casca de arroz carbonizada e poacute de
casca de coco em proporccedilotildees de 11 resultou em baixo
desempenho de mudas do abacaxizeiro ornamental em
funccedilatildeo da maacute agregaccedilatildeo fiacutesica baixa retenccedilatildeo de aacutegua e
limitaccedilatildeo nutricional da planta
Neste trabalho os resultados com o uso de substrato
contendo casca de arroz carbonizada sem a presenccedila de
fibras de coco seco ou verde tambeacutem proporcionou
excelente desenvolvimento de mudas do abacaxizeiro
ornamental o que indica uma provaacutevel incompatibilidade
das fibras de coco com outros componentes de substratos
na produccedilatildeo de mudas dessa ornamental
Natildeo houve diferenccedila significativa entre valores de
massa fresca de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes de
abacaxizeiro ornamental em relaccedilatildeo aos quatro substratos
analisados Poreacutem o maior valor absoluto em massa fresca
de raiacutezes foi obtido no substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas enquanto que o maior valor em comprimento
de raiacutezes no substrato comercial de fibra de coco
Com relaccedilatildeo agraves demais variaacuteveis analisadas
observou-se que a massa fresca total e a massa fresca da
parte aeacuterea tiveram performances mais significativas nos
substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas comercial
de fibra de coco e o da Plantmax enquanto que a altura de
plantas foi significativamente mais elevada no substrato
padronizado da Embrapa Hortaliccedilas e o nuacutemero total de
folhas mais significativo nos substratos padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e o Plantmax
CONCLUSOtildeES
Os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
fibra de coco comercial e o da Plantmax satildeo os mais
indicados para a produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro
ornamental para fins comerciais
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) as bolsas concedidas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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SANTOS M do D M dos et al76
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(Recebido em 8 de abril de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFEITO DE ISOPENTENILADENINA POR QUATROSUBCULTIVOS NA MULTIPLICACcedilAtildeO DE BROTACcedilOtildeES
DE ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL IN VITRO
EFFECT OF ISOPENTENYL ADENINE IN FOUR SUBCULTURES DURING THEIN VITRO MULTIPLICATION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE SHOOT
MARIA DO DESTERRO MENDES DOS SANTOS1 JOSEacute GETUacuteLIO DA SILVA FILHO2ANTONIO CARLOS TORRES3
1Bioacuteloga MSc em Botacircnica Departamento de Botacircnica Universidade de BrasiacuteliaUnB Cx P 4457 709190-970 Brasiacutelia DF mariacnphembrapabr2Engenheiro Agrocircnomo Especialista em Biotecnologia de Plantas Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF jgetuliocnphembrapabr3Engenheiro Agrocircnomo Embrapa Hortaliccedilas CxP 218 70359-970 Brasiacutelia DF
RESUMOObjetivou-se no presente trabalho foi o de avaliar o
efeito da adiccedilatildeo de concentraccedilotildees de 2iP em diferentes subcultivosna micropropagaccedilatildeo do abacaxizeiro ornamental var bracteatusBrotaccedilotildees com aproximadamente 10 cm de tamanho oriundosda cultura in vitro foram utilizados como explantes Os explantesforam inoculados em meio baacutesico liquido contendo sais mineraisMS 3 sacarose e em mg L-1 i-inositol 100 tiaminaHCl 01piridoxina HCl 05 aacutecido nicotiacutenico 005 glicina 20 formulaccedilatildeoliacutequida A esse meio foram adicionados concentraccedilotildees de 2iP(00 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro subcultivos(30 60 90 e 120 dias) Maacuteximo nuacutemero de brotaccedilotildees por explante(139) foi obtido em meio baacutesico com 16 mg L-1 de 2iP e no quartosubcultivo aos 120 dias Apoacutes a transferecircncia de brotaccedilotildeesindividualizadas para meio contendo ANA (00 05 10 15 2025 30 e 40 mg L-1) verificou-se a diferenciaccedilatildeo de raiacutezesadventiacutecias na porccedilatildeo basilar dos explantes
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatusmicropropagaccedilatildeo cultivo in vitro
ABSTRACTThe objective of this work was to evaluate the effect of
2iP addition in different subcultures during the micropropagationof ornamental pineapple var bracteatus Shoots with 10 cm inlength originated from in vitro culture were used as explantsThe explants were inoculated in liquid basal medium containingMS salts 3 sucrose 100 mg L-1 i-inositol 01 mg L-1
thiamineHCl 05 mg L-1 pyridoxineHCl 005 mg L-1 nicotinicacid and 20 mg L-1 glycine Different concentrations of 2iP (0005 10 and 20 mg L-1) in combination with four subcultures (3060 90 e 120 days) were used Maximum number of shoot formedper explant (139) was observed in basal medium with 16 mg L-1
2iP at the fourth subculture (120 days) After transferringindividual shoots to medium containing different concentrationsof NAA (00 05 10 15 20 25 30 and 40 mg L-1) mediaadventitious root formed in the basal portion of the explants
Index terms Ananas comosus var bracteatus micropropagationin vitro culture
INTRODUCcedilAtildeO
O abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L)
Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] eacute uma
planta de propagaccedilatildeo vegetativa com grande potencial
ornamental (D EECKENBRUGGE amp LEAL 2003) A
qualidade fitossanitaacuteria do campo de produccedilatildeo dessa
espeacutecie depende do material utilizado para sua propagaccedilatildeo
Assim sendo pode haver acuacutemulo entre plantios
sucessivos de patoacutegenos que satildeo transmitidos de um ciclo
de produccedilatildeo a outro via mudas contaminadas A
micropropagaccedilatildeo em larga escala de mudas sadias via
cultura de tecidos eacute uma estrateacutegia que possibilita
contornar a limitaccedilatildeo de mudas com alta qualidade
fitossanitaacuteria principalmente isentas de fusariose
(REINHARDT amp CUNHA 1999)
Em espeacutecies do gecircnero Ananaacutes os explantes mais
utilizados satildeo as gemas axilares das mudas do tipo coroa
ou filhote embora outros tipos de mudas possam ser usadas
A vantagem do uso de gemas axilares incluem boa
sobrevivecircncia em meio de cultura e com a quebra da
dominacircncia apical do broto haacute estiacutemulo para a formaccedilatildeo de
gemas muacuteltiplas (DREW 1980) A adiccedilatildeo de
fitorreguladores em geral eacute necessaacuteria para suprir as
possiacuteveis deficiecircncias dos niacuteveis endoacutegenos de hormocircnios
nos explantes in vitro Assim sendo recomenda-se a
combinaccedilatildeo de uma auxina com uma citocinina (SKOOG amp
MILLER 1957) Em geral a benzilaminopurina (BAP)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 77
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(ALMEIDA et al 2002 BARBOZA et al 2001 BE amp
DEBERG 2006) ou essa substacircncia em combinaccedilatildeo auxina
e aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (COSTA amp ZAFFARI 2005
GUERRA et al 1999) tecircm sido a(s) substacircncia(s)
reguladora(s) de crescimento mais usada(s) na formaccedilatildeo
de brotaccedilotildees de Ananas sp Entretanto em abacaxizeiro
ornamental a inclusatildeo de BAP no meio pode induzir o
aparecimento de variaccedilotildees somaclonais (RODRIGUES et
al 2007 SANTOS et al 2008) Tambeacutem a combinaccedilatildeo de
cinetina ANA e AIB (aacutecido indolbutiacuterico) foi empregada
para proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees em abacaxizeiro (KISS et
al 1995 MATHEWS amp RANGAN 1979)
Dada a escassez de informaccedilotildees sobre o efeito de
isopenteniladenina (2iP) na propagaccedilatildeo in vitro de espeacutecies
do gecircnero Ananas neste trabalho procurou-se otimizar a
concentraccedilatildeo de 2iP na produccedilatildeo de brotaccedilotildees de
abacaxizeiro ornamental em diferentes subcultivos e seu
subsequumlente enraizamento
MATERIAL E MEacuteTODOS
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Brotaccedilotildees
individualizadas com aproximadamente 1 cm de
comprimento estabelecidas a partir da cultura de gemas
axilares de mudas tipo coroa foram utilizadas como fonte
de explantes Os explantes foram cultivados em meio baacutesico
liacutequido contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) 3 sacarose e em mg L-1 tiaminaHCl 01
piridoxinaHCl 005 aacutecido nicotiacutenico 005 e glicina 20
(SANTOS 2008) O delineamento experimental empregado
foi o inteiramente ao acaso em esquema fatorial 4x4
referentes concentraccedilotildees de 2iP e subcultivos Ao meio
baacutesico foram adicionadas quatro concentraccedilotildees de BAP
(0 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro
subcultivos (30 60 90 e 120 dias) O pH dos meios foi
ajustado a 57 Foram utilizadas nove repeticcedilotildees por
tratamento sendo que cada parcela foi constituiacuteda por um
explante Inicialmente os explantes foram inoculados em
frascos de 250 mL de capacidade com 40mL de meio No
segundo subcultivo os propaacutegulos foram transferidos para
frascos idecircnticos com meio receacutem-preparado No terceiro
e quarto subcultivos foram utilizados frascos de 1000 mL
com 100 mL de meio As culturas foram mantidas em sala
de crescimento sob fotoperiacutedo de 16 horas com densidade
de fluxo de foacutetons de 32 mmol m-2 s-1 a 27plusmn2oC Em cada
subcultivo foi determinado o nuacutemero e a massa de mateacuteria
fresca das brotaccedilotildees formadas por explante inoculado
Os dados foram transformados para 1X e as
anaacutelises estatiacutestica foram realizadas com o auxiacutelio dos
programas SASStat e SISVAR versatildeo 301 Aplicou-se a
anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo grau para
avaliar o efeito da concentraccedilatildeo de 2iP sobre o nuacutemero e
massa da mateacuteria fresca de brotaccedilotildees em cada subcultivo
Enraizamento das brotaccedilotildees Foram utilizadas
brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental regeneradas in vitro
Os explantes com 10 a 20 cm de comprimento foram
inoculados em tubos de ensaio (25x150 mm) com 20 ml de
meio baacutesico 07 de aacutegar suplementado com diferentes
concentraccedilotildees de aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (00 05
10 15 20 25 30 e 40 mg L-1)
Apoacutes inoculaccedilatildeo as culturas foram mantidas em
cacircmara de crescimento nas condiccedilotildees descritas
anteriormente Apoacutes 30 dias da inoculaccedilatildeo foram avaliados
a percentagem de brotaccedilotildees enraizadas nuacutemero e massa
fresca das raiacutezes desenvolvida por brotaccedilatildeo altura da
planta e massa da mateacuteria fresca da parte aeacuterea O
delineamento experimental foi inteiramente casualizado com
29 repeticcedilotildees Cada parcela foi constituiacuteda de um tubo de
ensaio com um explante
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos programas SASStat e SISVAR versatildeo 301
Aplicou-se a anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo
grau para avaliar a variaccedilatildeo das variaacuteveis em funccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de ANA
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Na proliferaccedilatildeo de
brotaccedilotildees observou-se que os fatores concentraccedilatildeo de
2iP e o subcultivo isoladamente e em interaccedilatildeo afetam
significativamente (P 005) as variaacuteveis nuacutemero e massa
da mateacuteria fresca das brotaccedilotildees formadas A equaccedilatildeo que
SANTOS M do D M dos et al78
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
melhor se ajustou para explicar o efeito de 2iP nos diferentes
subcultivos para a variaacutevel nuacutemero de brotaccedilotildees foi a de
segundo grau (Figuras 1 e 2) A multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees
de abacaxizeiro ornamental in vitro eacute dependente de 2iP
no meio de cultura O nuacutemero de brotaccedilotildees por explante
responsivo de tamanho maior que 05 cm de comprimento
foi pequeno na primeira subcultura (30 dias) em todas as
concentraccedilotildees de 2iP testadas aumentando-se nos demais
subcultivos Aos 30 60 90 e 120 dias estimou-se que a
concentraccedilatildeo de 16 mg L-1 de 2iP produziu o maacuteximo de
brotaccedilotildees por explante inoculado respectivamente 20 42
64 e 139 (Figuras 1 e 2) Esses resultados estatildeo em
consonacircncia com a importacircncia da citocinina em vaacuterios
aspectos do crescimento e desenvolvimento da planta
tais como divisatildeo celular (SKOOG amp MILLER 1957) quebra
da dominacircncia apical e desenvolvimento das gemas laterais
(SACHS amp THIMMAN 1964) induccedilatildeo e multiplicaccedilatildeo de
brotaccedilotildees in vitro (GRATTAPAGLIA amp MACHADO
1998 JOSHI amp DHAWAN 2007 MURASHIGE 1974)
Tambeacutem o tipo de citocinina e a sua concentraccedilatildeo satildeo
determinantes no processo de micropropagaccedilatildeo
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998 MURASHIGE
1974) Em Ananas sp o BAP tem sido preferencialmente
usado na proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees in vitro (ALMEIDA
1994 ALMEIDA et al 2002 CRUZ 2000 ESCALONA et
al 1999 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
GUERRA et al 1999 MATHEWS et al 1976) Entretanto
Kiss et al (1995) relataram que tanto o BAP quanto a
cinetina foram efetivos para formaccedilatildeo de brotaccedilotildees em
abacaxizeiro comercial No presente trabalho o 2iP foi
adicionado ao meio devido a sua maior atividade bioloacutegica
comparada com o BAP e a cinetina (MURASHIGE 1974)
Tambeacutem para a variaacutevel massa da mateacuteria fresca
foi constatada a resposta quadraacutetica das doses de 2iP
(Figuras 3 e 4) Pelas equaccedilotildees de regressatildeo infere-se
que o 2iP estimula o acuacutemulo de massa fresca nas
brotaccedilotildees com o maacuteximo obtido com a concentraccedilatildeo de
18 mgL-1 desse fator nos subcultivos de 30 60 e 120 dias
com a produccedilatildeo de respectivamente 9 17 e 77 g por
explante inoculado No terceiro subcultivo aos 90 dias a
concentraccedilatildeo de 17 gL-1 de 2iP produziu o total de
biomassa de 45 g por explante Essa observaccedilatildeo estaacute em
concordacircncia com os trabalhos do efeito beneacutefico de
citocininas na produccedilatildeo de parte aeacuterea ateacute uma
concentraccedilatildeo oacutetima acima da qual seu excesso eacute inibitoacuterio
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1988)
FIGURA 1 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
y)dias 60(14585x = -247661x + 31353 +
R 20999 =
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e bo
taccedilotilde
es p
or
expl
ante
s
30 dias
60 dias
y (60 dias) = 14585x2 - 47661x + 31353
R2 = 0999
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 79
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 2 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
FIGURA 3 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
FIGURA 4 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa mateacuteria fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
y)dias 90(22847x = -2 73196x + 55784
R209477 =
y)dias 120(5072x = -21623x + 9464 +
R20954 =
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero m
eacutedio
de
brot
accedilatildeo
por
expl
ante
90 dias
120 dias
y (120 dias) = 50725x2 - 1623x + 9464
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
R2 = 0954
y(60 dias) = -38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (
g)
30 dias
60 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (60 dias) = - 38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
y)dias 90(12255x = -243239x + 75847 +
R209717 =
y)dias 120(19075x = -271029x + 11295 +
R2096 =
0
10
2030
40
50
6070
80
90
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (g
)
90 dias
120 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (120 dias) = 19075x2 - 71029x + 11295
R2 = 096
y (90 dias) = 12255x2 - 43239x + 75847R2 = 09717
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e br
otaccedil
atildeo p
or e
xpla
nte
SANTOS M do D M dos et al80
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
Enraizamento das brotaccedilotildees A induccedilatildeo
emergecircncia e alongamento das raiacutezes ocorreram em todos
os tratamentos Em meio sem regulador de crescimento
os propaacutegulos apresentaram raiacutezes desenvolvendo-se
de maneira pontual na extremidade seccionada dos
explantes (Figura 5) Em meio com ANA as raiacutezes
desenvolveram-se na porccedilatildeo basilar dos propaacutegulos em
forma de roseta Em geral a auxina eacute utilizada na fase de
enraizamento de propaacutegulos oriundos da cultura in vitro
de Ananas (BARBOZA et al 2004 CORREIA et al
2000 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
PRAXEDES et al 2001 TENG 1997) Entretanto o
enraizamento pode ser feito em meio sem regulador de
crescimento (KISS et al 1995 ZEPEDA amp SAGAWA
1981) A utilizaccedilatildeo de uma auxina na fase de enraizamento
induz agrave formaccedilatildeo de um sistema radicular mais
pronunciado que facilitaraacute a fase de aclimataccedilatildeo (Figura
5) Observou-se que a concentraccedilatildeo de ANA afetou
significativamente (P 005) o nuacutemero de raiacutezes massa
fresca das raiacutezes e da parte aeacuterea A altura da planta natildeo
foi afetada pela concentraccedilatildeo de ANA sendo o valor
de F natildeo significativo
Constatou-se uma relaccedilatildeo quadraacutetica entre as
variaacuteveis nuacutemero e massa da mateacuteria fresca das raiacutezes e da
parte aeacuterea e a concentraccedilatildeo de ANA A estimativa da
proliferaccedilatildeo de raiacutezes baseando-se no nuacutemero de raiacutezes
por explante aumentou com a concentraccedilatildeo de ANA
atingindo um maacuteximo de 119 com 22 mg L-1 de ANA
Concentraccedilotildees acima de 22 mg L-1 tendem a apresentar
um efeito inibitoacuterio na produccedilatildeo de raiacutezes (Figura 6)
Tambeacutem a massa da mateacuteria fresca das raiacutezes aumentou
com a concentraccedilatildeo de ANA com um maacuteximo de 023 g
obtida com a concentraccedilatildeo de 24 mg L-1 de ANA (Figura
7) Essa tendecircncia foi observada para a massa fresca da
parte aeacuterea onde a estimativa maacutexima da produccedilatildeo de
biomassa foi de 046 g por explante em meio com 19 mg L-1
de ANA (Figura 8)
Com relaccedilatildeo agrave altura das plantas natildeo houve
diferenccedila significativa entre as diferentes concentraccedilotildees
de ANA e essa variaacutevel
FIGURA 5 Brotaccedilotildees enraizadas em meio MS contendo diferentes concentraccedilotildees de ANA (mg L-1) aos 30 dias apoacutesa inoculaccedilatildeo
00 05 10 15 20 25 30 40
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 81
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 6 Variaccedilatildeo do nuacutemero de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 7 Variaccedilatildeo na massa da mateacuteria fresca de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 8 Variaccedilatildeo da massa de mateacuteria fresca da parte aeacuterea por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
y = -1202x2 + 5291x + 61504
R2 = 06865
0
2
4
6
8
10
12
14
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Nordm
de r
aiacuteze
s
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00282x2 + 01359x + 00704
R2 = 07573
0
005
01
015
02
025
03
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Mas
sa fr
esca
das
raiacutez
es
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00363x2 + 01407x + 03255
R2 = 0857
0
01
02
03
04
05
06
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Mas
sa fr
esca
da
part
e aeacute
rea
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
SANTOS M do D M dos et al82
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
CONCLUSOtildeES
No meio liacutequido contendo MS vitaminas 3 de
sacarose e 16 mg L-1 de 2iP obteacutem-se uma estimativa meacutedia
de 139 brotaccedilotildees por explante inoculado no final do quarto
subcultivo (120 dias)
Maior nuacutemero de raiacutezes adventiacutecias por explante eacute
estimado com a concentraccedilatildeo de 22 mg L-1 de ANA
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) pelas bolsas concedidas
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(Recebido em 25 de marccedilo de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFICIEcircNCIA FOTOQUIacuteMICA E CARACTERIacuteSTICAS DECRESCIMENTO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR (Saccharum officinarum L)CULTIVADA IN VITRO EM DIFERENTES CONCENTRACcedilOtildeES DE
SACAROSE E QUALIDADE DE LUZ
PHOTOCHEMICAL EFFICIENCY AND GROWTH CHARACTERISTICS OF SUGARCANE (Saccharum officinarum L) PLANTS CULTIVATED IN VITRO UNDER
DIFFERENT SUCROSE CONCENTRATIONS AND LIGHT QUALITY
1Bioacuteloga Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000 28015-620
Campos dos Goytacazes RJ georgiabecharayahoocombr2Engenheiro Agrocircnomo Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA
Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000
28015-620 Campos dos Goytacazes RJ alenauenfbr crespouenfbr campostuenfbr
RESUMODentre os diversos produtos agriacutecolas cultivados no
Estado do Rio de Janeiro a cana-de-accediluacutecar (Saccharumofficinarum L) eacute a cultura de maior importacircncia econocircmicaDiante dessa importacircncia na regiatildeo fluminense torna-senecessaacuteria cada vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividadedessa espeacutecie A produccedilatildeo em escala comercial de plantas decana-de-accediluacutecar pode ser beneficiada pela obtenccedilatildeo de mudas dealta qualidade e homogeneidade em curtos periacuteodos de tempo oque pode ocorrer pelo uso da micropropagaccedilatildeo A presenccedila decarboidrato eacute essencial para o enraizamento de muitas espeacuteciesin vitro sendo a sacarose o accediluacutecar mais utilizado namicropropagaccedilatildeo Poreacutem a necessidade desse composto nomeio de cultivo vem sendo discutida por alguns autoresObjetivou-se neste trabalho verificar o efeito da concentraccedilatildeode sacarose no meio de cultivo e a qualidade da luz sobre acapacidade fotossinteacutetica e as caracteriacutesticas de crescimentoem plantas de cana de accediluacutecar cultivadas in vitro Para tanto foiquantificada a emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila determinadaa massa seca de raiz e da parte aeacuterea a massa foliar especiacutefica eestimada a concentraccedilatildeo de clorofilas Os resultados obtidosmostraram que em cana de accediluacutecar cultivada in vitro em frascosfechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de sacarose no meio decultivo promoveu aumentos na mateacuteria seca da parte aeacuterea e daraiz na massa foliar especiacutefica e na intensidade de cor verde dasfolhas estudadas Natildeo houve modificaccedilatildeo na capacidadefotoquiacutemica maacutexima do PSII A justificativa para o natildeo-comprometimento da sacarose sobre as caracteriacutesticasrelacionadas agrave fotossiacutentese estudadas neste trabalho como oteor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o rendimentoquacircntico maacuteximo do PSII pode estar relacionada com a altacapacidade dessa espeacutecie em armazenar sacarose nos tecidos
Termos para indexaccedilatildeo Saccharum officinarum aclimatizaccedilatildeomeio de cultura fotossiacutentese
ABSTRACTThe State of Rio de Janeiro was one of the pioneers in
Brazil to set out the sugar cane activity which still represents animportant segment in the regional economy The production ofplants in commercial scale would be benefited by the attainmentof seedlings of high quality and homogeneity in short periods oftime which can be obtained using the micropropagation Thepresence of carbohydrate is essential for in vitro rooting of manyspecies with the sucrose being considered the most used sugarduring micropropagation despite the discussion by some authorsregarding its requirement The objective of this work was toevaluate the effect of sucrose concentrations in the culture mediumand light quality on the photosynthetic capacity and biometriccharacteristics on micropropagated sugar cane plants Chlorophyllfluorescence and contents were quantified root and shoot drymass and specific leaf mass were determined and chlorophyllconcentrations were estimated The results showed that theincrease in sucrose concentration during the in vitro cultivationof sugar cane in closed flasks promotes increase in the shootand root dry matter specific leaf mass and chlorophyll contentsNo modification of maximum PSII photochemistry capacity wasobserved The lack of sucrose effects on photosyntheticcharacteristics such chlorophyll contents and PSII yield may berelated to the high capacity of this specie to storage sucrose inthe tissues
Index terms Saccharum officinarum aclimatization culturemedium photosynthesis
Siacutembolos PSII fotossistema II SPAD Soil Plant AnalysisDevelopment BAP benzilaminopurina FFF fluxo de foacutetonsfotossinteacuteticos MPC medidor portaacutetil de clorofilas MFE massafoliar especiacutefica F
vF
maacutex Rendimento quacircntico maacuteximo do
fotossistema II MSPA massa seca parte aeacuterea MSR massaseca raiz AIB acido indol butirico ANAacido naftaleno aceacutetico
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 85
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
INTRODUCcedilAtildeO
A cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) foi
introduzida no Brasil no seacuteculo XVII com o objetivo de
quebrar o monopoacutelio mundial exercido pela Franccedila no
comeacutercio do accediluacutecar produzido nas Ilhas do Caribe O cultivo
da cana-de-accediluacutecar teve um grande aumento quando em
meados da deacutecada de 70 o Brasil criou o Programa Nacional
do Aacutelcool o qual teve como objetivo estimular a produccedilatildeo
do aacutelcool visando o atendimento das necessidades do
mercado interno e externo e da poliacutetica de combustiacuteveis
automotivos (MENEZES VEIGA et al 2006)
Atualmente a cana-de-accediluacutecar eacute uma das principais
culturas do panorama brasileiro e continua crescendo em
funccedilatildeo do consumo como fonte de energia e accediluacutecar Dentre
os diversos produtos agriacutecolas cultivados no estado do Rio
de Janeiro a cana-de-accediluacutecar eacute a cultura de maior importacircncia
econocircmica (MENEZES VEIGA et al 2006) Diante dessa
importacircncia na regiatildeo fluminense torna-se necessaacuteria cada
vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividade dessa espeacutecie
Uma das alternativas para essa elevaccedilatildeo eacute a formaccedilatildeo de
lavouras por meio do uso de mudas de excelente qualidade
Assim a micropropagaccedilatildeo eacute uma teacutecnica que pode contribuir
significativamente para a produccedilatildeo de mudas de cana de
accediluacutecar de alta qualidade Entre as diversas vantagens que
essa teacutecnica apresenta estaacute a produccedilatildeo raacutepida de mudas em
larga escala e a eliminaccedilatildeo de microrganismos potencialmente
fitopatogecircnicos
A micropropagaccedilatildeo tradicional tem como premissa
a presenccedila de sacarose no meio de cultivo uma vez que
esse composto eleva a produccedilatildeo de biomassa e pode
contribuir para aumentar o enraizamento de muitas espeacutecies
in vitro (GRATTAPAGALIA amp MACHADO 1990)
Entretanto vaacuterios autores tecircm sugerido que a fonte de
carboidrato no meio de cultura inibe o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono A adiccedilatildeo da sacarose ao meio
inibiu a fotossiacutentese potencial in vitro (LEES et al 1991)
reduziu a atividade da Rubisco (GROUT amp DONKIN 1987)
inibiu o acuacutemulo de clorofila (LA ROSA et al 1984) e
diminuiu a fixaccedilatildeo do carbono inorgacircnico por meio da
inibiccedilatildeo da atividade da carboxilase do fosfoenol-piruvato
e do Ciclo de Calvin (NEUMANN amp BENDER 1987)
Entretanto Khan et al (2006) trabalhando com cana-de-
accediluacutecar relataram que a maacutexima taxa de multiplicaccedilatildeo de
dois clones (AEC82-223 e NIA-2004) foi nas concentraccedilotildees
de 4 e 6 de sacarose no meio mostrando que nesses
clones cultivados em frascos fechados in vitro a sacarose
foi de fundamental importacircncia para a otimizaccedilatildeo do
crescimento da parte aeacuterea Esses autores mostraram que
a maior taxa de enraizamento foi em meio MS com 1 mg L-
1 de AIB e 6 de sacarose
Alguns autores para facilitar a aclimatizaccedilatildeo da
planta micropropagada sugerem adotar na uacuteltima fase da
cultura in vitro diminuir a concentraccedilatildeo de sacarose com
o objetivo de tentar elevar a taxa fotossinteacutetica e capacitar
a planta agrave nutriccedilatildeo autotroacutefica uma vez que a fonte de
carboidrato no meio de cultura pode inibir o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono Em vista disso Simmonds (1983)
obteve melhores resultados no enraizamento de porta-
enxerto de macieira ao reduzir a concentraccedilatildeo de sacarose
no meio de cultura para apenas 1 Contudo Wainwright
amp Scrace (1989) sugerem manter a sacarose no niacutevel
normalmente utilizado (3) ou ateacute mesmo aumentaacute-lo numa
fase anterior agrave aclimatizaccedilatildeo visando melhorar a qualidade
da planta Segundo esses autores o preacute-condicionamento
em altas concentraccedilotildees de sacarose aumentaria as reservas
de carboidratos armazenadas pelas folhas aumentando
assim a energia disponiacutevel para as placircntulas durante o
processo de aclimataccedilatildeo Para George amp Sherrington (1984)
no desenvolvimento in vitro de muitas espeacutecies a
assimilaccedilatildeo fotossinteacutetica eacute baixa fazendo com que as
culturas sejam dependentes do suporte externo de
carboidratos
Objetivou-se neste trabalho verificar o efeito da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo e da qualidade
de luz sobre a eficiecircncia fotoquiacutemica e as caracteriacutesticas de
crescimento da cana-de-accediluacutecar cultivada in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
O experimento foi realizado na unidade de pesquisa
em fotossiacutentese de plantas in vitro no Setor de Fisiologia
MOTHEacute G P B et al86
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
Vegetal Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal
na UENF Campos dos GoytacazesRJ
Como fonte de explante foram utilizadas placircntulas
de cana-de-accediluacutecar com dois a trecircs centiacutemetros de altura
proveniente de material vegetal jaacute em fase de multiplicaccedilatildeo
contendo meio MS modificado (02 mg L-1 de fonte de
nitrogecircnio combinado 01 mg L-1 de cinetina 02 mg L-1 de
BAP 1 mg L-1 de Tiamina 100 mg L-1 de mio-inositol e 20 g
L-1 de sacarose) em condiccedilotildees de perfilhamento O material
foi obtido no Laboratoacuterio de Cultura de Tecido do Campus
Dr Leonel Miranda UFRRJ O meio de cultura utilizado
para o recultivo foi o MS padratildeo (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 100 mg L-1 de mio-inositol 7 g L-1 de
Agar (Vetec) e sem adiccedilatildeo de reguladores de crescimento
Os tratamentos consistiram de uma combinaccedilatildeo bifatorial
de seis concentraccedilotildees de sacarose no meio (0 10 20 30
40 e 50 g L-1) e dois tipos de luz (lacircmpada fluorescente
branca 40w luz branca com irradiacircncia de 948 igravemol m-2 s-
1 e lacircmpada fluorescente tipo Grolux 40w luz vermelha
com irradiacircncia de 966 igravemol m-2 s-1) O pH do meio foi
ajustado para 58 antes da inclusatildeo do aacutegar e da
autoclavagem (15 atm a 120ordmC por 20 min) A parcela
experimental consistiu de frascos tipo baby food
contendo 50 mL do meio MS nas diferentes
concentraccedilotildees de sacarose O delineamento experimental
foi inteiramente casualizado com trecircs repeticcedilotildees em que
cada parcela consistiu de um frasco com duas plantas
Apoacutes a inoculaccedilatildeo os explantes foram cultivados em
sala de crescimento a uma temperatura 25ordm C plusmn 10 a um
fluxo de foacutetons fotossinteacuteticos de 120 a 150 igravemol m-2 s-1
com 16h de fotoperiacuteodo
Aos vinte e oito dias apoacutes a inoculaccedilatildeo (DAI) foi
utilizada a 2ordm eou 3ordm folha mais expandida para as anaacutelises
para determinaccedilatildeo do rendimento quacircntico maacuteximo do PSII
(FvF
max) (apoacutes adaptaccedilatildeo da folha ao escuro por 30
minutos com auxiacutelio de pinccedilas) por meio de um fluoriacutemetro
natildeo modulado PEA (Plant Efficiency Analyser - Hansatech
Ltd King s Lynn Norfolk UK)
A medida de intensidade de verde (relacionada com
o teor de clorofilas totais) foi feita nesta mesma eacutepoca por
meio do medidor portaacutetil do teor de clorofila SPAD 502
Chlorophyll Meter Minolta Japatildeo Os valores da
intensidade do verde foram provenientes da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha
A massa foliar especiacutefica feita aos 28 dias apoacutes o
cultivo in vitro foi determinada a partir da divisatildeo da massa
seca da folha de uma parte do limbo foliar pela respectiva
aacuterea dessa parte
No final do experimento foi determinada a massa
seca das partes aeacuterea e da raiz das plantas Essas partes
foram colocadas em estufa com ventilaccedilatildeo forccedilada a 70ordm C
por 48 h A partir dos dados da massa seca estimou-se a
relaccedilatildeo parte aeacuterearaiz (massa seca da parte aeacuterea massa
seca das raiacutezes)
Os dados experimentais foram submetidos a uma
anaacutelise de variacircncia e para cada tratamento foram
avaliados trecircs frascos Foram realizadas duas repeticcedilotildees
para cada frasco e seis plantas foram utilizadas
provenientes de trecircs frascos Os dados de cada avaliaccedilatildeo
foram analisados estatisticamente por teste Tukey a 5
e os resultados expressos como meacutedia (plusmn erro-padratildeo) de
seis repeticcedilotildees
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os diferentes tratamentos de luz e dosagem de
sacarose no meio de cultura influenciaram a produccedilatildeo de
biomassa na parte aeacuterea mostrando que maiores
concentraccedilotildees de sacarose produziram maior biomassa
(figuras 2 e 3) O tratamento controle (0 g L-1 de sacarose)
natildeo produziu biomassa suficiente para as anaacutelises
Portanto as plantas-controle cultivadas nessas
condiccedilotildees requerem a adiccedilatildeo de carboidratos para suprir
suas necessidades metaboacutelicas quer participando na
geraccedilatildeo de energia ou como fonte de esqueletos
carbocircnicos para vaacuterios processos bioquiacutemicos sugerindo
que as condiccedilotildees encontradas no frasco de cultivo e na
sala de crescimento foram ineficientes para as plantas-
controle desenvolverem condiccedilotildees de realizar
fotossiacutentese e consequumlentemente produzir biomassa
(Figura 1)
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 87
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 1 Plantas de cana-de-accediluacutecar cultivada em diferentes concentraccedilotildees de sacarose apoacutes 28 dias de cultivo (A)0 g L-1 (B) 10 g L-1 (C) 20 g L-1 (D) 30 g L-1 (E) 40 g L-1 e (F) 50 g L-1
Os resultados obtidos por meio da anaacutelise de
variacircncia para as cinco diferentes concentraccedilotildees de
sacarose (10 20 30 40 e 50 g L-1) no meio demonstraram
que para a caracteriacutestica massa seca da parte aeacuterea (MSPA)
houve uma resposta crescente em que doses crescentes
de sacarose promoveram acreacutescimos de biomassa seca
(Figura 2A) A concentraccedilatildeo 10 g L-1 diferenciou
significativamente das concentraccedilotildees de 40 g L-1 e 50 g L-
1 produzindo uma menor MSPA 0039 0101 e 0135g
respectivamente (Figura 2A) Dados semelhantes foram
obtidos em morangueiros batata menta e videira por
(RIQUELME et al 1991) e por (NICOLOSO 2003) em que
nesse trabalho a elevaccedilatildeo da concentraccedilatildeo de sacarose
de 30 ateacute 60 g L-1 promoveu maior produccedilatildeo de biomassa
dos oacutergatildeos de Pfaffia glomerata (Spreng) Pedersen
Com relaccedilatildeo agrave mateacuteria seca da raiz (MSR) as
diferenccedilas de concentraccedilatildeo de sacarose influenciaram
significativamente os resultados As menores
concentraccedilotildees (10 20 e 30 g L-1) somente diferenciaram
significativamente da maior concentraccedilatildeo (50 g L-1) que
produziu valores 0084g de MSR (Figura 2b) Pelos
resultados foi verificado que a presenccedila de sacarose
mostrou-se fundamental para o desenvolvimento da parte
aeacuterea e das raiacutezes da cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro
De fato Khan et al (2008) mostraram que o meio MS com
meia forccedila suplementado com reguladores de crescimento
(AIB e ANA) e 60 g L-1 de sacarose proporcionou maior
enraizamento em 3 variedades elite de cana-de-accediluacutecar Khan
et al (2006) tambeacutem indicaram a importacircncia da sacarose
no crescimento da parte aeacuterea em clones dessa espeacutecie
George (1996) relata que para formaccedilatildeo de raiacutezes in vitro
haacute necessidade de energia e carboidratos sendo esses
fornecidos por meio da fotossiacutentese (em condiccedilotildees
autotroacuteficas) ou oriunda de uma fonte exoacutegena de accediluacutecar
(em sistemas heterotroacuteficos ou mixotroacuteficos) O autor
verificou ainda que o aumento da concentraccedilatildeo de
sacarose de modo geral estimula o crescimento e a
formaccedilatildeo de raiacutezes de algumas espeacutecies Jaacute em outros
trabalhos na fase de enraizamento a reduccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultura vem sendo
citada como beneacutefica na melhoria da qualidade do sistema
radicular bem como na sobrevivecircncia das placircntulas
transplantadas (ANDRADE 1998)
Com relaccedilatildeo agrave MSPAMSR os tratamentos natildeo
apresentaram diferenccedila significativa apontando uma
relaccedilatildeo direta entre o crescimento das raiacutezes e da parte
MOTHEacute G P B et al88
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 2 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e as diferentes concentraccedilotildees de sacarose no meio de cultivoindependente da luz (A) Massa seca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa seca raiz (MSR) (C) Razatildeo massa seca da parteaeacuterearaiacutezes (MSPAMSR) (D) Massa foliar especiacutefica (MFE) (E) Teor estimado de clorofilas totais (valores de MPC)(F) Rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (F
vF
m) em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Cada
siacutembolo representa a meacutedia de seis repeticcedilotildees em MSPA MSR MSPA MSR e MFE e oito repeticcedilotildees em Valores deMPC e da relaccedilatildeo F
vF
m Meacutedias seguidas pela mesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
aeacuterea Essa relaccedilatildeo eacute de fundamental importacircncia para a
organizaccedilatildeo dos processos fisioloacutegicos e desenvolvimento
das plantas (TAIZ amp ZEIGER 2002) Essas partes estatildeo
relacionadas entre si e essa relaccedilatildeo eacute devida agrave dependecircncia
nutricional e fitohormonal da parte aeacuterea com a raiz
(SALISBURY amp ROSS 1992) (Figura 2c)
As diferentes concentraccedilotildees de sacarose
influenciaram a massa foliar especiacutefica (MFE) a qual
representa a quantidade de massa seca por unidade de
aacuterea da folha estimando a proporccedilatildeo relativa da superfiacutecie
assimilatoacuteria e os tecidos de sustentaccedilatildeo e condutores da
folha aleacutem de poder ser correlacionada positivamente com
a taxa fotossinteacutetica (CRUZ et al 2004) A menor
concentraccedilatildeo de sacarose apresentou o menor valor (148
g m-2) o que indica que a ausecircncia de sacarose pode
comprometer a espessura foliar bem como a capacidade
da maquinaria fotossinteacutetica (Figura 2d)
O teor de clorofila foi estimado por meio do medidor
portatil de clorofila (MPC) Os valores encontrados da
intensidade do verde foram oriundos da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha As diferentes concentraccedilotildees de
sacarose no meio de cultivo influenciaram a intensidade
de verde (Figura 2e) em que a maior concentraccedilatildeo de
sacarose apresentou o maior valor do MPC (336)
0
003
006
009
012
015
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
A (g
)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MFE
(gm
2)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
0
002
004
006
008
01
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSR
(g)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
20
22
24
26
28
30
32
34
36
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
Val
ores
de
MPC
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
000
100
200
300
400
500
600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
AM
SR
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
062
064
066
068
07
072
074
076
078
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
FvF
m
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
A
B
D
C
E
F
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 89
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
diferenciando significativamente dos demais tratamentos
Esses valores estatildeo relacionados com uma maior
quantidade de clorofilas totais em maiores teores de
sacarose Nesse caso em plantas de cana-de-accediluacutecar a
elevaccedilatildeo no teor de sacarose contribui para o incremento
do teor de clorofilas a partir de 30 g L-1 desse composto no
meio de cultivo
Com relaccedilatildeo agrave atividade do PSII avaliada por meio
da emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila a as plantas de
cana-de-accediluacutecar apresentaram alteraccedilotildees com relaccedilatildeo aos
tratamentos utilizados Estatisticamente os valores
menores da eficiecircncia fotoquiacutemica maacutexima do PSII (FvF
m)
foram verificados na concentraccedilatildeo de 20 g L-1 de sacarose
(Figura 2f) Com exceccedilatildeo das plantas crescidas nessa
concentraccedilatildeo de sacarose as demais plantas cultivadas
em meios com maiores concentraccedilotildees de sacarose natildeo
apresentaram diferenccedilas significativas para a caracteriacutestica
FvF
m Por meio dos resultados relacionados aos efeitos
da concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo sobre as
caracteriacutesticas de crescimento a produccedilatildeo de biomassa
estaria mais relacionada agrave oferta de carbono no meio de
cultivo do que a eficiecircncia na maquinaria fotoquiacutemica das
plantas
A qualidade do fluxo de foacutetons fotossinteacutetico (FFF)
teve influecircncia relevante nas caracteriacutesticas MSPA MSR
MFE e valores do MPC A luz considerada vermelha emitida
pelas lacircmpadas GroLux proporcionou maiores valores das
caracteriacutesticas supracitadas Tais resultados poderiam estar
relacionados a um maior ganho de carbono por meio de um
aumento da taxa fotossinteacutetica liacutequida eou indiretamente
causado por alteraccedilotildees fitormonais causadas pela
modificaccedilatildeo no espectro luminoso (CAMPELL amp
BONNER 1986) Ainda na presenccedila da luz vermelha houve
favorecimento para a produccedilatildeo de biomassa tanto na parte
FIGURA 3 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e os diferentes tipos de luz (Branca e Vermelha) (A) Massaseca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa foliar especifico (MFE) (C) Massa seca raiz (MSR) e (D) Teor estimado declorofilas totais (Valores de MPC) Cada siacutembolo representa a meacutedia sendo 15 repeticcedilotildees em MSPA MSR e valores deMPC e 20 repeticcedilotildees em MFE em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Meacutedias seguidas pelamesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
14
16
18
20
22
LUZ
MFE
(gm
2)
Luz branca
Luz vermelha
0
001
002
003
004
005
LUZ
MSR
(g)
Luz branca
Luz vermelha
002
004
006
008
01
012
014
LUZ
MSP
A (g
)
Luz branca
Luz vermelha
20
22
24
26
28
30
LUZ
Val
ores
de
MP
C
Luz branca
Luz vermelha
A
C
B
D
MOTHEacute G P B et al90
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
aeacuterea como no sistema radicular A luz branca apresenta
uma composiccedilatildeo espectral que pode variar e causar
respostas diferenciadas na cultura in vitro A
predominacircncia na emissatildeo de foacutetons na regiatildeo do vermelho
ateacute o azul pode estimular a induccedilatildeo de calos quebrar a
moleacutecula de AIA e ainda estimular a induccedilatildeo de brotos
(BARRUETO CID 2001 CHAMOVITZ amp DENG 1996)
As plantas cultivadas em maiores concentraccedilotildees
(40 e 50 gL-1) de sacarose e aclimatadas em luz vermelha
tiveram melhores resultados do que nos outros tratamentos
(Figura 2 e 3)
CONCLUSOtildeES
Em cana-de-accediluacutecar cultivada em condiccedilotildees in vitro
e em frascos fechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de
sacarose no meio de cultivo promoveu aumentos na
mateacuteria seca da parte aeacuterea e da raiz na massa foliar
especiacutefica e na intensidade de cor verde das folhas
estudadas Natildeo houve alteraccedilatildeo na eficiecircncia fotoquiacutemica
maacutexima do PSII A luz vermelha associada agrave concentraccedilotildees
de sacarose de 40 e 50gL-1 parece ter uma resposta
somatoacuteria tanto na produccedilatildeo de parte aeacuterea e raiz quanto
na massa foliar especiacutefica e no teor de clorofila
A justificativa para o natildeo-comprometimento da
sacarose no meio sobre as caracteriacutesticas relacionadas agrave
fotossiacutentese estudadas neste trabalho como exemplo o
teor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o
rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (FvF
m) pode estar
relacionada com a alta capacidade dessa espeacutecie em
armazenar sacarose nos tecidos
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
(Recebido em 20 de junho de 2008 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EFFECTS OF AUXINS AND CYTOKININS ON IN VITRODEVELOPMENT OF Alpinia purpurata K SCHUM AND
PHENOLIC COMPOUNDS PRODUCTION
EFEITO DE AUXINAS E CITOCININAS NO DESENVOLVIMENTO IN VITRO DEAlpinia purpurata K SCHUM E PRODUCcedilAtildeO DE SUBSTAcircNCIAS FENOacuteLICAS
CRISTIANE PIMENTEL VICTOacuteRIO1 IACINETE PAMPLONA DA CRUZ2 ALICE SATO3RICARDO MACHADO KUSTER4 CELSO LUIZ SALGUEIRO LAGE5
1Doutora em Ciecircncias Bioloacutegicas (Biofiacutesica) Instituto de Biofiacutesica Carlos Chagas FilhoLab Fisiologia Vegetal Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050 21952-590 Rio de Janeiro RJ crispvbiofufrjbr
2Estudante de Farmaacutecia bolsista PIBICUFRJ3Doutora em Biotecnologia Vegetal Prof Dep Botacircnica Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro Av Pasteur 458
22290-040 Rio de Janeiro RJ alicesatouniriobr4Doutor Prof Laboratoacuterio de Fitoquiacutemica Nuacutecleo de Pesquisas de Produtos Naturais (NPPN) Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco H 21941-902 Rio de Janeiro RJ kusternppnufrjbr
5Doutor Prof IBCCFo Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050
21952-590 Rio de Janeiro RJ clslagebiofufrjbr
ABSTRACTAlpinia purpurata K Schum is largely used in
ornamentation and scarcely present itself in folk medicine Studiesusing plant tissue culture technique under standardized conditionpermit to evaluate plant physiological morphological andphytochemical responses to exogenous plant growth regulatorThis work consisted in the establishment of in vitro A purpurataplants using different concentrations of auxin and cytokinins inmg L-1 IAA 2 TDZ 2 and 4 IAA 2 + TDZ 2 IAA 2 + BAP 2Additionally it was determined the content of phenoliccompounds in the leaves of field and in vitro plants using Folin-Ciocalteau method Buds from inflorescence A purpurata weredisinfested and introduced in solid MS medium to initiate culturesThe direct organogenesis process was fast and satisfactoryproducing elongated plants with a developed radicular systemThe rooting percentage reached 100 for all treatments after 2months Cytokinins and auxins were important for the increasingof the leaves quantity (42 to 51) and shoot elongation (40 cm)Liquid MS0 presented the favorable results for fastmicropropagation and higher production of shoots providingplants ready to be acclimatized In vitro plants cultivated underMS0 produced 93 of phenolic compounds in comparison withfield plants (100) Through High Performance LiquidChromatographic it was verified similar chromatographic profilesbetween field and in vitro plant extracts
Index terms Folin-Ciocalteau HPLC micropropagation tissueculture Zingiberaceae Alpinia purpurata
RESUMOAlpinia purpurata K Schum eacute uma espeacutecie muito
utilizada como ornamental e possui escassas indicaccedilotildees de usona medicina popular Estudos utilizando teacutecnicas de cultura detecidos vegetais permitem a partir de condiccedilotildees padronizadas
avaliar as respostas fisioloacutegicas morfoloacutegicas e fitoquiacutemicas dosvegetais aos fitorreguladores exoacutegenos Este trabalho consistiuno estabelecimento de plantas de A purpurata in vitro utilizando-se diferentes concentraccedilotildees de auxina e citocininas (mg L-1) AIA2 TDZ 2 e 4 AIA 2 + TDZ 2 AIA 2 + BAP 2 Verificou-setambeacutem o conteuacutedo de substacircncias fenoacutelicas nas folhas de plantasde campo e in vitro atraveacutes do meacutetodo de Folin-CiocalteauBrotos oriundos da inflorescecircncia de A purpurata foramdesinfestados e introduzidos em meio MS soacutelido para iniciar asculturas O processo de organogecircnese direta foi raacutepido esatisfatoacuterio produzindo plantas alongadas e com sistema radiculardesenvolvido A porcentagem de enraizamento atingiu 100 paratodos os tratamentos ao final de 2 meses As citocininas e auxinasforam importantes para incrementar o nuacutemero de folhas (42 a51) e alongamento dos brotos (40 cm) em comparaccedilatildeo com omeio controle O MS0 liacutequido foi o mais favoraacutevel para raacutepidapropagaccedilatildeo in vitro e maior produccedilatildeo de brotos com suprimentode plantas aptas a serem aclimatizadas Plantas in vitro cultivadasem meio MS0 produziram 93 de fenoacuteis totais em relaccedilatildeo agravesplantas de campo (100) Atraveacutes da Cromatografia Liacutequida deAlta Eficiecircncia foi verificada semelhanccedila entre os perfiscromatograacuteficos dos extratos de plantas de campo e in vitro
Termos para indexaccedilatildeo Folin-Ciocalteau CLAEmicropropagaccedilatildeo cultura de tecidos vegetais ZingiberaceaeAlpinia purpurata
INTRODUCTION
Alpinia purpurata K Schum is widely used as
ornamental plant in several tropical and subtropical areas
with high international market demand (KRESS et al 2002
SANGWANANGKUL et al 2008) In folk medicine it is
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 93
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
used for cough in Venezuela and presents antibacterial
activity (BERMUacuteDEZ amp VELAacuteSQUEZ 2002 ZOGHBI et
al 1999) Recent studies have showed the phytochemical
potential of this species (VICTOacuteRIO et al 2007 2008)
The vegetative propagation through rhizome is the
main way of reproduction of this species According to
Moroacuten (1987) for the propagation of A purpurata in
greenhouse the time is twice more than in in vitro systems
Plant tissue culture techniques have been employed in
Brazil since 1950 and the main advantages include the
continuous and fast production of aseptic and selected
plants These techniques permit a commercial-scale
production of plants (ROUT et al 2006) and some studies
have showed them as an alternative for optimizing
secondary metabolites production (RAO amp
RAVISHANKAR 2002) The micropropagation of A
purpurata supplies may be a source for ornamental and
medicinal raw material (MULABAGAL amp TSAY 2004
POMPELLI et al 2007)
Addition of auxins and cytokinins in the culture
media are essential to improve and regulate growth and
morphogenesis of the cultures (CHITRA amp PADMAJA
2005 KYOZUKA 2007) Besides several studies have
reported the effects of plant growth regulators in in vitro
phenolic production (SANTOS-GOMES et al 2002
THIEM 2003) We intended to develop a protocol for in
vitro production of A purpurata plants and to evaluate
the effects of auxins and cytokinins on plant development
and compounds phenolic production
MATERIAL AND METHODS
Plant Material
Buds from inflorescence of donor plants of Alpinia
purpurata red inflorescence were used as source of plant
material to initiate in vitro cultures Voucher specimen was
deposited at the Herbarium of Rio de Janeiro Botanical
Garden under accession number RB 433484 Buds were
collected and washed with running water using nylon
brush for removing residues The sterilization process was
concluded in four steps in sterile ambient after dissection
of leaves 20 of commercial bleach solution for 40 min
followed by immersion in distilled water plus commercial
detergent solution for 15 min dipped in 70 ethanol
washed for 10 min in 30 of commercial bleach solution
and rinsed with sterile distilled water three after each step
Establishment of in vitro cultures
Explants were subcultured into glasses (16 x 8 cm)
containing 50 ml of culture medium Murashige amp Skoog
(1962) supplemented with 3 of sucrose 148 igraveM thiamine-
Different letters indicate significant differences at plt 005 level Tukey s test n e 30
VICTOacuteRIO C P et al96
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
FIGURE 2 In vitro development of Alpinia purpurata plants in MS medium under different plant growth regulators(mgl-1) (A) Sequence of development 1 month (I) 2 months (II) and 3 months (III) (B) shoot height after 2 months (C)shoot height and (D) percentage of shoots after 3 months Different letters indicate significant differences at plt 005level Tukey s test n e 30 100 correspond to 30 shoots per explant within 1 year
advantage of in vitro production of secondary metabolites
is the possibility to control environment and nutritional
factors Data show high level of phenolics in in vitro
cultures of A purpurata (93) compared with field plants
(100) (Figure 3A) Through reversed-phase HPLC was
found similarity between field and in vitro plants profiles
(Figure 3B-C) The peaks 1 2 and 3 presented
characteristics of phenolic compounds verified through
UV spectra obtained by HPLC A purpurata is not currently
used in folk medicine and these results may indicate the
presence of therapeutic resource in its phytochemistry
The preliminary investigation of phenolic in
organogenic cultures of A purpurata using Folin-
Ciocalteau reagent and HPLC analysis brings perspectives
about the production of antioxidant compounds by this
species In addition the establishment of tissue culture of
A purpurata may be a good alternative to produce aseptic
plants and its bioactive metabolites
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 97
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
ACKNOWLEDGEMENTS
C P Victoacuterio acknowledges the fellowship from
CAPES and PROEX financial support
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VICTOacuteRIO C P et al98
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Curva de crescimento atividade da fenilalanina 99
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
(Recebido em 23 de janeiro de 2008 e aprovado em 7 de outubro de 2008)
CURVA DE CRESCIMENTO ATIVIDADE DA FENILALANINA AMOcircNIA-LIASE E TEORES DE FENOacuteIS E TANINOS TOTAIS EM CALOS DE
GROWTH CURVE PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE ACTIVITY AND TOTALPHENOL LEVELS IN CALLUS OF Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville
(FABACEAE-MIMOSOIDEAE)
ANA HORTEcircNCIA FONSEcircCA CASTRO1 MILLER MARANI LIMA2 RENATO PAIVA3 AMAURI ALVES DE ALVARENGA4 MIRELLE OLIVEIRA SOacuteTER5
1Doutora Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG2Bolsista ICFAPEMIG Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG3PhD Universidade Federal de LavrasUFLA 37200-000 Lavras MG4Doutor Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 37200-000 Lavras MG renpaivauflabr5Acadecircmica Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG
RESUMOObjetivou-se estabelecer a curva de crescimento e avaliar
a atividade da fenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis etaninos totais em calos de barbatimatildeo explantes foliares foraminoculados em meio MS suplementado com 30 g L-1 sacarose eacrescidos de 905 M de 24-D O crescimento a atividade dafenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis e taninos totaisforam avaliados a cada 10 dias durante 110 dias A curva decrescimento dos calos apresentou um padratildeo sigmoidal com cincofases distintas Os teores meacutedios de fenoacuteis totais acompanharamas variaccedilotildees observadas para a atividade enzimaacutetica Alta atividadee maiores teores de fenoacuteis totais foram observados no explanteinicial com reduccedilotildees progressivas ateacute a fase linear Na faseestacionaacuteria observaram-se incrementos importantes naatividadeda fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais Natildeo foidetectada a presenccedila de taninos totais nos calos
Termos para indexaccedilatildeo Barbatimatildeo cultivo in vitro plantamedicinal Stryphnodendron adstringens
ABSTRACTIn order to establish growth curve phenylalanine ammonia-
lyase (PAL) activity and total phenol and tannin levels inStryphnodendron adstringens leaf explants were inoculated inMS medium supplemented with 30 g L-1 sucrose and 905 M24-D The growth PAL activity and total phenol and tanninlevels were evaluated at 10 days intervals during 110 days Callusgrowth curve presented a sigmoid shape with five different phasesAverage levels of total phenol followed the changes observed forenzymatic activity High activity and higher levels of total phenolwere observed in initial explants with progressive reductions untilthe linear phase Increases in phenylalanine ammonia-lyase activityand total phenols levels were observed in stationary phase Notannins were observed on callus
Index terms Stryphnodendron adstringens In vitro CultureMedicinal Plant
INTRODUCcedilAtildeO
Atualmente um consideraacutevel esforccedilo tem sido feito
com o intuito de se produzir fitoteraacutepicos com maiores
concentraccedilotildees de substacircncias ativas vegetais atraveacutes de
culturas de ceacutelulas ou tecidos Segundo Taniguchi et al
(2002) dentre as diferentes teacutecnicas de cultivo in vitro a
cultura de calos tem apresentado grande importacircncia para
a propagaccedilatildeo e produccedilatildeo in vitro de espeacutecies de interesse
medicinal A desdiferenciaccedilatildeo e induccedilatildeo de regeneraccedilatildeo
das plantas a partir de calos satildeo muitas vezes processos
difiacuteceis de serem obtidos e podem demandar algum tempo
As auxinas tecircm sido amplamente utilizadas nos meios de
cultivo para a induccedilatildeo de calos e geralmente dependendo
da concentraccedilatildeo causam elongaccedilatildeo celular e expansatildeo ou
divisatildeo celular Em geral com o uso de baixas
concentraccedilotildees de auxinas predomina a formaccedilatildeo de raiacutezes
adventiacutecias enquanto que altas concentraccedilotildees induzem a
formaccedilatildeo de calos A interaccedilatildeo entre auxinas e citocininas
tambeacutem eacute muito utilizada para a induccedilatildeo de calogecircnese
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998)
Durante a calogecircnese eacute importante estabelecer-se
a curva de crescimento de calos o que propicia a
identificaccedilatildeo das fases distintas de crescimento da espeacutecie
A partir deste estudo pocircde-se determinar o momento exato
de repicagem dos calos para um meio fresco ou a
CASTRO A H F et al100
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
possibilidade de sua utilizaccedilatildeo em suspensotildees celulares
visando a otimizaccedilatildeo da produccedilatildeo de metaboacutelitos
secundaacuterios em espeacutecies medicinais (GEORGE 1996) O
crescimento in vitro de calos geralmente apresenta um
padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas Segundo Smith
(1992) a fase lag se caracteriza como fase de maior produccedilatildeo
de energia correspondendo ao periacuteodo em que as ceacutelulas
se preparam para a divisatildeo visando sua expansatildeo Ocorre o
iniacutecio da mobilizaccedilatildeo de metaboacutelitos primaacuterios sem qualquer
divisatildeo celular siacutentese de proteiacutenas e de compostos
especiacuteficos Essa fase resulta em um pequeno crescimento
dos calos A fase exponencial eacute biossinteacutetica Observa-se o
maior crescimento dos calos devido agrave maacutexima taxa de divisatildeo
celular caracteriacutestica desse periacuteodo O nuacutemero de ceacutelulas
aumenta Na fase linear haacute diminuiccedilatildeo da divisatildeo celular
mas aumento de volume celular e a fase de desaceleraccedilatildeo eacute
o momento em que as culturas devem ser transferidas para
outro meio devido agrave reduccedilatildeo de nutrientes produccedilatildeo de
produtos toacutexicos secagem do aacutegar e reduccedilatildeo do oxigecircnio
no interior das ceacutelulas Na fase estacionaacuteria ocorre maior
acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
O barbatimatildeo [Stryphnodendron adstringens
(Mart) Coville Fabaceae-Mimosoideae) eacute uma importante
espeacutecie medicinal do cerrado com altos teores de
compostos polifenoacutelicos em especial os taninos Possui
grande distribuiccedilatildeo e importacircncia econocircmica para o estado
de Minas Gerais sendo empregado como adstringente e
cicatrizante no combate de amidalite faringite
hemorroacuteidas leucorreacuteias erupccedilotildees cutacircneas diarreacuteias e
como agentes antiinflamatoacuterios (LIMA et al 1998)
A fenilalanina amocircnia-liase (EC 4315) eacute uma
enzima-chave e regulatoacuteria da rota biossinteacutetica dos
fenilpropanoacuteides e de seus derivados e catalisa a
desaminaccedilatildeo do aminoaacutecido L-fenilalanina em aacutecido trans-
cinacircmico sendo esse o primeiro passo para a biossiacutentese
dos fenoacutelicos vegetais (ASSIS et al 2001) De acordo com
Rivero et al (2001) os niacuteveis dessa enzima podem flutuar
significativamente em intervalos relativamente curtos em
resposta a uma ampla variedade de estiacutemulos como o
fotoperiacuteodo fitocromo mudanccedilas de temperatura radiaccedilatildeo
UV deficiecircncia de nutrientes reguladores de crescimento
virais e ataque de insetos bem como o estaacutedio de
desenvolvimento vegetal e o grau de diferenciaccedilatildeo de
ceacutelulas e tecidos (SOLECKA amp KACPERSKA 1995)
Devido agrave exploraccedilatildeo irracional pelas induacutestrias de
curtimento do couro o barbatimatildeo encontra-se ameaccedilado
de extinccedilatildeo Assim devem-se melhorar as teacutecnicas de
propagaccedilatildeo encorajar seu cultivo e criar vias alternativas
para a produccedilatildeo de tanino em larga escala a partir de
fontes naturais
Objetivou-se estabelecer a curva de crescimento e
avaliar a atividade da fenilalananina amocircnia-liase e os teores
de fenoacuteis e taninos totais em calos de barbatimatildeo
MATERIAL E MEacuteTODOS
As etapas experimentais foram realizadas entre
fevereiro de 2007 e janeiro de 2008 no Centro Universitaacuterio
de Lavras (UNILAVRAS) e na Universidade Federal de
Lavras (UFLA)
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento foi obtida a partir da
inoculaccedilatildeo de segmentos foliares de 025 cm2 de aacuterea
empregados como explantes em meio MS (MURASHIGE
amp SKOOG 1962) suplementado com 30 g L-1 sacarose e
acrescidos de 905 M de 24-D Os meios foram
solidificados com aacutegar na proporccedilatildeo de 7 g L-1 e o pH
ajustado para 57 plusmn 01 antes da autoclavagem por 20 min
Apoacutes inoculaccedilatildeo os explantes foram transferidos para sala
de crescimento onde foram incubados na presenccedila de luz
agrave temperatura de 27 plusmn 1 oC fotoperiacuteodo de 16 horas e
DFFFA= 25 mol m-2 s-1
Foram feitas pesagens do material inoculado fresco
a partir do dia da inoculaccedilatildeo (tempo 0) ateacute ser atingida a
fase de desaceleraccedilatildeo em intervalos de 10 dias O
porcentual de crescimento dos calos foi determinado pela
equaccedilatildeo proposta por Lameira (1997)
crescimento = Pf Pi
Pf
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 101
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
onde
Pf = Mateacuteria seca final
Pi = Mateacuteria seca inicial
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado sendo cada pesagem composta
por duas repeticcedilotildees e cada repeticcedilatildeo pela meacutedia de 10
tubos cada tubo contendo um explante Os dados obtidos
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia e analisados
estatisticamente utilizando-se o Sistema de Anaacutelise de
Variacircncia para Dados Balanceados (FERREIRA 2000)
Determinaccedilotildees da atividade da fenilalanina amocircnia-liasee teores de fenoacuteis e taninos totais
Calos obtidos na curva de crescimento foram
imersos em nitrogecircnio liacutequido e posteriormente
armazenados em Freezer Forma Scientific a -86 oC ateacute o
momento de serem utilizados na determinaccedilatildeo da atividade
enzimaacutetica Outros calos assim como aqueles obtidos no
experimento com a sacarose foram liofilizados para
determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis e taninos totais
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase
O procedimento descrito por Cheng amp Breen (1991)
com algumas modificaccedilotildees foi utilizado para extraccedilatildeo e
determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica
Calos congelados (5 g) foram triturados
homogeneizadas com acetona 80 e congelados por 15
minutos O homogenato foi filtrado e o pelet foi seco atraveacutes
de vaacutecuo
O extrato proteacuteico foi obtido homogeneizando-se
05 g do pelet seco em 5 mL de tampatildeo borato de soacutedio 01
M pH= 88 contendo 5 mM de -mercaptoetanol 2 mM
de EDTA e 4 (pv) de PVP a 4oC Depois de 1h o
homogenato foi centrifugado a 27000 g por 30 minutos a
4 oC A mistura de reaccedilatildeo foi constituiacuteda por 05 mL de L-
fenilalanina 30 M 30 mM de tampatildeo borato de soacutedio pH=
88 e 1 mL de extrato cru num volume total de 3 mL O
substrato foi adicionado apoacutes 10 minutos de preacute-incubaccedilatildeo
e a reaccedilatildeo foi interrompida com 01 mL de HCl 6 N A
atividade da fenilalanina amocircnia-liase foi determinada pela
produccedilatildeo de cinamato apoacutes 90 minutos agrave 30 oC sob
agitaccedilatildeo contiacutenua medida pela variaccedilatildeo da absorbacircncia a
290 nm A atividade especiacutefica da enzima foi definida em
nmol de aacutecido cinacircmicohmg de proteiacutena
Fenoacuteis totais
Amostras de calos liofilizados foram trituradas em
micromoinho e armazenadas em frascos fechados
protegidos da luz
Aproximadamente 500 mg de calos liofilizados e
triturados foram extraiacutedos cinco vezes com 5 mL de uma
mistura de metanolaacutegua (11) sob refluxo O volume final
do extrato foi completado para 25 mL
Uma aliacutequota de 100 L do extrato foi utilizada para
a determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis totais atraveacutes do
meacutetodo de Folin-Dennis segundo as normas da AOAC
(1970) As determinaccedilotildees foram feitas em triplicata e o
resultado foi expresso em porcentagem de aacutecido tacircnico
por grama de calo seco
Taninos Totais
A determinaccedilatildeo dos teores de taninos totais foi
realizada atraveacutes do Meacutetodo de Difusatildeo Radial de acordo
com Hagerman (1987)
Um volume de 5 mL do extrato foi concentrado a 37oC e posteriormente retomado com 05 mL de uma mistura
de metanolaacutegua (11) Uma aliacutequota de 15 mL foi utilizada
para a determinaccedilatildeo Todas as determinaccedilotildees foram feitas
em triplicata O resultado foi expresso em percentagem de
tanino por grama de calo seco
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento dos calos seguiu o padratildeo
sigmoidal apresentando cinco fases distintas lag
exponencial linear desaceleraccedilatildeo e estacionaacuteria (Figura
1) A fase lag onde as ceacutelulas do explante se preparam para
a divisatildeo celular e produccedilatildeo de energia ocorreu ateacute o 30o
dia apoacutes a inoculaccedilatildeo com calos apresentando um
crescimento de aproximadamente 73 A segunda fase
exponencial estendeu-se do 31o
ao 50o
dia de cultivo
com 70 de crescimento periacuteodo esse caracterizado pela
CASTRO A H F et al102
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
maacutexima divisatildeo celular A fase linear ocorreu entre o 51o ao
70o
dia e natildeo se verificou crescimento dos calos nesse
periacuteodo Entre o 71o
e 100o
dia observou-se a fase de
desaceleraccedilatildeo com 28 de crescimento e a partir do 101o
dia a cultura entrou na fase estacionaacuteria Segundo Smith
(1992) na fase de desaceleraccedilatildeo os calos devem ser
transferidos para um novo meio de cultura devido agrave
reduccedilatildeo de nutrientes secagem do aacutegar e acuacutemulo de
substacircncias toacutexicas
FIGURA 1 Curva de crescimento de calos deStryphnodendron adstringens obtidos a partir de segmentosfoliares inoculados em meio MS contendo 905 M de 24-D e 30 g L-1 de sacarose
0
002
004
006
008
01
012
014
016
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Mat
eacuteria
sec
a (g
)
De maneira semelhante essa mesma curva de
crescimento pode ser dividida em trecircs fases fase de
crescimento lento (do dia da inoculaccedilatildeo ateacute o 30o dia) fase
de crescimento ativo (do 31o
ao 70o
dia) e fase de
estabilizaccedilatildeo (71o
dia em diante) sendo indicada a
repicagem entre o 71o ao 100o dia
A curva de crescimento para calos de
barbatimatildeo apresentou um padratildeo semelhante ao de outras
espeacutecies medicinais de cerrado como Byrsonima
intermeacutedia A Juss (NOGUEIRA et al 2008) Croton
(BONILLA 2002) e Derris sp (CONCEICcedilAtildeO 2000)
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteise taninos totais
Na figura 2 encontram-se representados os
resultados da atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase
e dos teores de fenoacuteis totais verificados durante o periacuteodo
experimental O explante inicial apresentou um teor meacutedio
de 065 de taninos totais natildeo se detectando entretanto
a presenccedila de taninos nos demais calos formados
Conforme pode-se observar a atividade da
fenilalanina amocircnia-liase situou-se entre 016 e 196 mol
de aacutecido cinacircmico h-1 g-1 de mateacuteria fresca (plt005) (figura
2A) A atividade apresentou-se maacutexima no explante inicial
(dia 0) e reduziu progressivamente ateacute o 70o dia periacuteodo
esse correspondente agraves fases lag exponencial e linear
Entre o 71o ao 100o dia ou seja na fase de desaceleraccedilatildeo a
atividade enzimaacutetica indicou uma tendecircncia em se manter
constante e a partir do 101o dia (fase estacionaacuteria) verificou-
se um pequeno incremento nessa atividade da ordem de
26 De maneira semelhante os teores meacutedios de fenoacuteis
totais acompanharam as variaccedilotildees observadas para a
atividade enzimaacutetica e situaram-se em uma faixa de 029 a
399 sendo o teor meacutedio maacuteximo observado no explante
inicial (figura 2B) Os teores de fenoacuteis totais reduziram
significativamente ateacute o 60o dia (fase lag e exponencial) e a
partir do 61o
ao 90o
dia permaneceram praticamente
constantes com os menores niacuteveis observados durante o
periacuteodo experimental em torno de 037 em meacutedia A partir
da fase estacionaacuteria (100o dia) verificou-se um aumento de
65 nos teores meacutedios de fenoacuteis totais
Estes resultados mostraram-se muito interessantes
do ponto de vista fisioloacutegico e fitoquiacutemico e corroboram
com relatos de Conceiccedilatildeo (2000) e Lameira (1997) os quais
citam que a fase estacionaacuteria corresponde ao periacuteodo em
que ocorre maior acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
Apesar de esses teores serem baixos eacute importante ressaltar
que o meio de cultura pode ser otimizado para produccedilatildeo
em larga escala de fenoacuteis totais e taninos uma vez que
foram obtidos in vitro a partir de segmentos foliares e de
forma convencional satildeo extraiacutedos da casca da planta adulta
cultivada in vivo
A presenccedila de baixos teores de fenoacuteis e a ausecircncia
de taninos pode estar associada agrave alta atividade metaboacutelica
relacionada ao crescimento dos calos (mitose) o que
demanda elevada quantidade de substrato necessaacuterio agrave
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 103
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
FIGURA 2 Valores meacutedios de atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase (A) e teores de fenoacuteis totais (B) emStryphnodendron adstringens durante o periacuteodo experimental
0
05
1
15
2
25
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Ativ
idad
e da
Fen
ilala
nina
Am
ocircnia
-Lia
se (
mm
ol d
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cin
acircmic
o h-1
g-1 M
F)
A
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120Dias
Fenoacute
is T
otai
s (
)
B
produccedilatildeo de energia Segundo Botta et al (2001) a
diferenciaccedilatildeo celular assim como a desaceleraccedilatildeo da
atividade mitoacutetica progressivamente permite o acuacutemulo de
compostos derivados do metabolismo secundaacuterio Para
Lavola et al (2000) e Pentildeuelas et al (1997) variaccedilotildees nos
teores de metaboacutelitos secundaacuterios natildeo podem ser explicadas
somente pelas diferenccedilas na disponibilidade de carboidratos
devendo-se considerar tambeacutem a disponibilidade de
precursores para a sua siacutentese e as mudanccedilas nos padrotildees
de siacutentese e catabolismo desses compostos
CONCLUSOtildeES
A curva de crescimento para calos de barbatimatildeo
apresentou um padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas
sendo indicada a repicagem entre o 71o ao 100o dia
Alta atividade e maiores teores de fenoacuteis totais
foram observados no explante inicial com reduccedilotildees
progressivas ateacute a fase linear Na fase estacionaacuteria
observaram-se incrementos importantes na atividade da
fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais
Natildeo se detectou a presenccedila de taninos totais nos
calos durante a determinaccedilatildeo da curva de crescimento na
presenccedila de 904 M de 24-D
AGRADECIMENTOS
Agrave Fundaccedilatildeo de Amparo agrave Pesquisa do Estado de
Minas Gerais (FAPEMIG) pelo suporte financeiro ao
projeto e concessatildeo de bolsa de iniciaccedilatildeo cientiacutefica
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Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 105
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
(Recebido em 14 de fevereiro de 2007 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EMBRIOGEcircNESE SOMAacuteTICA DIRETA DE Coffea arabica LCONCENTRACcedilOtildeES DE NH4NO3 E DE KNO3 NO
DESENVOLVIMENTO DE EMBRIOtildeES1
DIRECT SOMATIC EMBRYOGENESIS OF Coffea arabica L CONCENTRATIONS OFNH4NO3 AND KNO3 ON THE DEVELOPMENT OF EMBRYOS
JULIANA COSTA DE REZENDE2 MOACIR PASQUAL3 SAMUEL PEREIRA DE CARVALHO3ESTER ALICE FERREIRA4 FLAVIA CARVALHO SANTOS5
1Artigo extraiacutedo da dissertaccedilatildeo de mestrado da primeira autora apresentada a Universidade Federal de LavrasUFLA2Pesquisadora MSc Epamig Campus da UFLA Cx P 176 372000-000 Lavras MG julianacostaepamigbr3Professor Dr Titular do Departamento de AgriculturaDAG Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 372000-000
Lavras MG pasqualuflabr samuelpcuflabr4Pesquisadora Dra Epamig Cx P 351 Uberaba MG esterepamigbr5Doutoranda em Fitotecnia Bolsista Capes flavinha3010yahoocombr
RESUMOO melhoramento geneacutetico do cafeeiro tem incorporado
atraveacutes de cruzamentos ganhos geneacuteticos para produtividade eoutras caracteriacutesticas de interesse agronocircmico A introduccedilatildeo demeacutetodos biotecnoloacutegicos para auxiliar os programas demelhoramento geneacutetico tem-se mostrado bastante uacutetilprincipalmente em culturas perenes como eacute o caso do cafeeiroUm importante meacutetodo de propagaccedilatildeo in vitro de plantas deCoffea eacute a embriogecircnese somaacutetica direta Objetivou-se com estetrabalho avaliar os efeitos de diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3 no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos
diretos de C arabica L cv Rubi Os tratamentos foramconstituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH
4NO
3 (0 4125 825
12375 e 1650 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3 (0 475
950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS O experimentofoi mantido por 150 dias em sala de crescimento com irradiacircnciaem torno de 32 igraveM m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas comtemperatura de 25 plusmn 1oC As variaacuteveis avaliadas foram nuacutemero defolhas comprimento da parte aeacuterea e massa fresca da parte aeacutereaOs resultados indicaram que a utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO
3combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de NH
4NO
3 como a mais
indicada para o desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos de Carabica L Os resultados apontam ainda que a ausecircncia denitrogecircnio promove o maior peso das placircntulas
Termos para indexaccedilatildeo Nitrogecircnio cafeacute cv Rubi Coffeaarabica
ABSTRACTCoffee breeding programs have incorporated using
artificial crossings genetic benefits for productivity and othercharacteristics of agronomic interest The introduction ofbiotechnology methods to improve genetic breeding programshas demonstrated to be useful mainly in perennial cultures ascoffee species An important method of in vitro propagation ofCoffea plants is somatic embryogenesis Therefore the objectiveof this work was to obtain the most adequate combinations ofculture medium components for plantlets growth The influence
of NH4NO
3 (0 4125 825 12375 and 1650 mg L-sup1) of MS
formulation x KNO3
(0 475 950 1425 and 1900 mg L-sup1) MSformulation were tested for the development of somatic embryosThe experiments were maintained in a growth room under lightintensity of 32 microMol m-2 s-1 photoperiods of 16 hours andtemperature of 25 plusmn 1o C The characteristics evaluated were leafnumber shoot length and shoot fresh matter The results indicatedthat the use of 950 mgL-sup1 KNO
3 combined with 1155 to 2475
mg L-sup1 NH4NO
3 is the most indicated for the development of
somatic embryos of C arabica L The absence of nitrogenpromotes the largest weight of plantlets
Index Terms Nitrogen Coffee cv Rubi Coffea arabica
INTRODUCcedilAtildeO
O nitrogecircnio eacute um dos elementos necessaacuterios e
ativos para diversos processos metaboacutelicos da planta pois
eacute constituinte de vaacuterias biomoleacuteculas essenciais tais como
aminoaacutecidos aacutecidos nucleacuteicos enzimas e proteiacutenas e
juntamente com a sacarose eacute o principal componente em
quantidade no meio de cultura
O nitrogecircnio difere dos demais macronutrientes por
apresentar-se na forma de caacutetion (amocircnio) e acircnion (nitrito
e nitrato) contribuindo de forma efetiva tanto no
metabolismo celular como na regulaccedilatildeo do seu potencial
osmoacutetico Atua como agente tamponante e favorece a
absorccedilatildeo de outros iacuteons presentes no meio (NAGAO et
al 1994) A vantagem dos tecidos vegetais receberem pelo
menos parte do nitrogecircnio sob uma forma prontamente
reduzida eacute que haveria uma diminuiccedilatildeo no gasto de energia
REZENDE J C de et al106
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
que ocorre na conversatildeo enzimaacutetica de nitrato a amocircnio
(GEORGE et al 1987) O efeito dessas diferentes formas
inorgacircnicas separadamente pode promover ou natildeo o
crescimento e desenvolvimento de determinadas espeacutecies
de plantas enquanto a combinaccedilatildeo das duas estimula o
crescimento de muitas espeacutecies in vitro (CALDAS et al
1998)
De acordo com George amp Sherrington (1984) o
desenvolvimento e morfogecircnese em cultura de tecidos satildeo
acentuadamente influenciados pela disponibilidade de
nitrogecircnio e pela forma como o mesmo eacute fornecido Alta
concentraccedilatildeo de sais do meio MS comparada a outros
meios especificamente dos niacuteveis de amocircnio (-NH4) e
nitrato (-NO3) pode ser criacutetica no processo de morfogecircnese
e crescimento (SAKUTA amp KOMAMINE 1987) estando
pois a demanda energeacutetica fornecida pelo metabolismo de
carboidratos e a assimilaccedilatildeo destes iacuteons diretamente
relacionada com o sucesso da cultura in vitro
Sato (1994) estudou o efeito de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio sobre a propagaccedilatildeo de trecircs
diferentes clones de geacuterbera de vaso (Gerbera jamesonii
Adlam) e concluiu que a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio do
MS completo inibe a regeneraccedilatildeo de brotos enquanto a
utilizaccedilatildeo de concentraccedilotildees diluiacutedas favorece a induccedilatildeo
dos brotos Bespalhok et al (1992) estudaram a
concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia na induccedilatildeo de brotos
em estevia (Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni) e
constataram que a concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia do
MS eacute toacutexica Obteve maior induccedilatildeo de brotaccedilotildees usando
frac14 de nitrato de amocircnia no meio MS Por outro lado Tadesse
et al (2000) verificaram que a accedilatildeo de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio promoveu um incremento
inicial da aacuterea foliar das placircntulas formadas mas ocasionou
efeitos relativamente negativos no aumento da aacuterea foliar
das placircntulas durante a aclimatizaccedilatildeo
O nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio sustenta
boa taxa de crescimento em algumas culturas como roseira
(Rosa gallica L) (NASH amp DAVIES 1972) e trigo (Triticum
que natildeo crescem bem com o nitrato no meio como por
exemplo o arroz (Oriza sativa L) (SARGENT amp KING 1974
YATAZAWA amp FURUHASHI 1968)
Grewal et al (1980) citados por Grattapaglia amp
Machado (1990) verificaram em culturas de eucalipto
(Eucaliptus citriodora Hook) que ao se reduzir pela
metade as concentraccedilotildees de nitrato de amocircnio e de
potaacutessio do meio MS a taxa de multiplicaccedilatildeo dobrava
Essa mesma concentraccedilatildeo proporcionou o melhor
comprimento da parte aeacuterea em embriotildees zigoacuteticos de C
arabica L (RIBEIRO 2001)
A maioria das plantas prioriza a absorccedilatildeo de NH4
+ a
NO3
- poreacutem eacute necessaacuterio encontrar o balanccedilo ideal de
NH4+NO
3- para o oacutetimo crescimento in vitro (SATO 1994)
Objetivou-se com este trabalho estudar os efeitos de
diferentes concentraccedilotildees de NH4NO
3 e KNO
3 do meio MS
no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos diretos de C
arabica L cv Rubi
MATERIAL E MEacuteTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos Vegetais do Departamento de
Agricultura da Universidade Federal de Lavras MG Foram
utilizados como explantes embriotildees de C arabica cv
Rubi provenientes da embriogecircnese somaacutetica direta Os
embriotildees somaacuteticos foram induzidos em meio MS
(MURASHIGE amp SKOOG 1962) com 50 dos sais
acrescido de 20 mg L-1 de GA3 6 mg L-1 de cinetina 8 mg
L-1 de ANA 100mg L-1 de caseiacutena hidrolisada e 400mg L-
1 de extrato de malte Os tubos de ensaio foram mantidos
durante 150 dias sob condiccedilotildees de obscuridade com
temperatura de 25 plusmn 1oC Os embriotildees somaacuteticos induzidos
nesse processo foram individualizados em tubos de
ensaio e mantidos durante 30 dias em meio MS
objetivando a homogeneizaccedilatildeo do material para a
realizaccedilatildeo deste experimento
No preparo do meio foram utilizadas soluccedilotildees-
estoque armazenadas em frascos de vidro escuro a
temperaturas em torno de 5degC Os tratamentos foram
constituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH4NO
3 (0 475
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 107
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
950 1425 e 1900 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3
(0 475 950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS
O meio foi solidificado com 5g L -1 de aacutegar e o pH
ajustado para 58 plusmn 01 utilizando NaOH 05 e 01 N ou HCl
05 N e 01 N e distribuiacutedo em tubos de ensaio cada um
recebendo 15 mL do mesmo Os tubos foram vedados com
tampas plaacutesticas transluacutecidas antes do processo de
autoclavagem a 121degC e 1 atm por 20 minutos Apoacutes o
resfriamento o meio foi levado agrave cacircmara de fluxo laminar
desinfestada com aacutelcool 70 (etanol) onde foi feita a
inoculaccedilatildeo dos explantes
Os tubos foram vedados com parafilme e mantidos
em sala de crescimento com irradiacircncia em torno de 32 igraveM
m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas com temperatura de 25 plusmn
1oC O delineamento experimental utilizado foi inteiramente
casualizado com quatro repeticcedilotildees e trecircs tubos por
parcela cada tubo contendo um explante
Aos 150 dias apoacutes a instalaccedilatildeo foram avaliadas as
variaacuteveis nuacutemero de folhas comprimento da parte aeacuterea e
peso da mateacuteria fresca das placircntulas Os valores observados
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia para dados
desbalanceados Utilizou-se o procedimento GLM
disponiacutevel no aplicativo computacional SASreg (SAS
INSTITUTE 1990)
Em situaccedilotildees em que a anaacutelise de variacircncia natildeo
confirmou a normalidade dos resiacuteduos para o comprimento
da parte aeacuterea e peso da mateacuteria fresca os dados sofreram
uma transformaccedilatildeo para garantir que essa pressuposiccedilatildeo
fosse atendida As transformaccedilotildees utilizadas foram x e5 1 02x respectivamente A variaacutevel nuacutemero de folhas
atendeu agraves pressuposiccedilotildees de normalidade A anaacutelise de
variacircncia do peso da mateacuteria fresca foi realizada por meio
do meacutetodo dos quadrados miacutenimos ponderados pelo
inverso das variacircncias de cada tratamento uma vez que
esses apresentaram heterogeneidade de variacircncias
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Houve efeito significativo das concentraccedilotildees de
NH4NO
3 e KNO
3 para o nuacutemero de folhas e peso da mateacuteria
fresca das placircntulas (Tabela 1) Observa-se que a interaccedilatildeo
entre os fatores mostrou-se significativa em relaccedilatildeo a todas
as caracteriacutesticas avaliadas a 5 de probabilidade pelo
teste F
Nuacutemero de folhas
Analisando-se as curvas de regressatildeo observa-
se na Figura 1 que houve formaccedilatildeo de maior nuacutemero
de folhas quando foram adicionados ao meio de cultura
1900 mg L-sup1 de KNO3
combinado com 12985 mg L-sup1 de
NH4NO
3 (meacutedia de 1163 folhas) Com a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 87879 mg L-sup1 de NH
4NO
3
pocircde-se observar a formaccedilatildeo meacutedia de 1001 folhas
Dessa forma como a diferenccedila eacute miacutenima justifica-se a
utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 com o objetivo de
reduccedilatildeo dos custos
TABELA 1 Anaacutelise de variacircncia dos dados relativos ao nuacutemero de folhas (NF) comprimento da parte aeacuterea (CPA) epeso da mateacuteria fresca (PMF) das placircntulas de Coffea arabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3
QM Fonte de variaccedilatildeo GL
NF CPA (cm) PMF (g)
NH4NO3 4 458337 01152 17450
KNO3 4 230014 00837 22117
NH4NO3 x KNO3 16 20447 01215 15139
Erro 135 91386 00584 05871
CV () 5162 2357 912
Significativo a 5 pelo teste F
REZENDE J C de et al108
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
FIGURA 1 Nuacutemero folhas de placircntulas de Coffea arabicacv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 combinadas com 0950 e 1900 mg L-sup1 de KNO
3
Contudo concentraccedilotildees acima de 87879 mg L-sup1 de
NH4NO
3 combinadas com 950 mg L-sup1 de NH
4NO
3 ou na
ausecircncia desse provocaram reduccedilatildeo no nuacutemero de folhas
possivelmente por toxidez causada pelo amocircnio devido agrave
sua concentraccedilatildeo mais elevada em relaccedilatildeo ao nitrato no
meio de cultura Quando o nitrogecircnio eacute fornecido somente
na forma de sais inorgacircnicos de amocircnio as ceacutelulas in vitro
apresentam sintomas de toxidez (GAMBORG amp SHYLUK
1970 YATAZAWA amp FURUHASHI 1968) demonstrando
assim a necessidade de combinaccedilatildeo dessas duas fontes
no meio de cultura
Segundo Raab amp Terry (1994) em virtude do grande
requerimento de energia fotoquiacutemica para a reduccedilatildeo
bioquiacutemica do nitrato era de se esperar que as plantas
crescessem melhor em meios com amocircnia do que em meios
com nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio no entanto
observou-se o inverso Esses mesmos autores apontam
como causa desse paradoxo o efluxo de iacuteons H+ que ocorre
devido agrave absorccedilatildeo do iacuteon amocircnio provocando acidificaccedilatildeo
do meio impedindo a absorccedilatildeo de nutrientes Segundo
Hashimoto et al (1992) a presenccedila de amocircnio in vitro
poderia acidificar o meio favorecendo a siacutentese de
carbamatos e tambeacutem a atividade de anidrase carbocircnica
Esses autores conseguiram diminuir o efeito toacutexico do
amocircnio apenas diminuindo a concentraccedilatildeo de nitrato de
amocircnio no meio MS
O nuacutemero de folhas obtidas na ausecircncia de KNO3
foi inferior quando comparado aos demais tratamentos (a
maior meacutedia observada foi 658 folhas na concentraccedilatildeo de
37626 mg L-sup1 de NH4NO
3) evidenciando assim a
importacircncia desse sal para o desenvolvimento de folhas
em placircntulas de C arabica cv Rubi Os resultados obtidos
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 109
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
concordam em parte com os obtidos por Ribeiro (2001)
trabalhando com embriotildees zigoacuteticos de C arabica que
recomenda a adiccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de NH4NO
3 e KNO
3 no
meio de cultura para comprimento da parte aeacuterea
Observa-se ainda que utilizando-se a concentraccedilatildeo
de 1425 mg L-sup1 de KNO3 haacute reduccedilatildeo no comprimento da
parte aeacuterea das placircntulas ateacute a concentraccedilatildeo de 42091 mg
L-sup1 de NH4NO
3 havendo a partir desse ponto incremento
no desenvolvimento da variaacutevel ateacute a concentraccedilatildeo de
149131 mg L-sup1 de KNO3 (132 cm dados transformados)
Esses resultados demonstram que as respostas de
interaccedilatildeo entre fontes de nitrogecircnio variam em funccedilatildeo das
concentraccedilotildees utilizadas
Na ausecircncia de NH4NO
3 em ambas as
concentraccedilotildees estudadas o comprimento da parte aeacuterea
foi inferior (09 e 097 cm respectivamente nas
concentraccedilotildees de 950 e 1425 mg L-sup1 de KNO3) evidenciando
mais uma vez a importacircncia desse sal no desenvolvimento
de embriotildees em C arabica cv Rubi
Peso da mateacuteria fresca
FIGURA 3
Peso da mateacuteria fresca de placircntulas de Carabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildeesde NH
4NO
3 combinadas com 0950 mg L-sup1 de KNO
3
6
65
7
75
8
85
9
95
10
105
0 4125 825 12375 1650NH4NO3 (mg L-1)
Peso
da
mat
eacuteria
fre
sca
(g)
Y KNO3 475 Y KNO3 1425 Y KNO3 1900 = ns Y KNO3 0 = 968811 - 006491X + 000061019X2 R2 = 09017 Y KNO3 950 = 800708 + 002278X 000022883X2 R2 =09053
Na ausecircncia de KNO3 houve decreacutescimo do peso
da mateacuteria fresca associado ao incremento das
concentraccedilotildees de NH4NO
3 ateacute a concentraccedilatildeo de 91775
mg L-sup1 de NH4NO
3 (Figura 3) observando-se aumento do
peso da mateacuteria fresca a partir deste ponto Para a
concentraccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 ocorreu aumento do
peso da mateacuteria fresca ateacute a concentraccedilatildeo de 100221 mg L-
sup1 de NH4NO
3 Poreacutem o maior valor foi registrado na
ausecircncia de ambos os sais estudados (976 g)
Da mesma forma Grossi (2000) trabalhando com
bromeacutelia observou que a menor concentraccedilatildeo de
nitrogecircnio promoveu maior produccedilatildeo de massa fresca
Kanashiro et al (2007) observou decreacutescimo linear na
massa fresca de folhas de bromeacutelia agrave medida que se
aumentou a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio (entre 75 e 120
mM) sendo que para cada mM de nitrogecircnio acrescido ao
meio houve um decreacutescimo de 00018 g na massa fresca
Provavelmente o cultivo em concentraccedilotildees maiores de
nitrogecircnio tenderia a diminuir a produccedilatildeo de massa fresca
como foi observado no presente experimento
CONCLUSOtildeES
Com base no crescimento da parte aeacuterea e na
formaccedilatildeo do maior nuacutemero de folhas a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de
NH4NO
3 eacute mais indicada para o desenvolvimento de
embriotildees somaacuteticos de Coffea arabica L Os resultados
indicam ainda que a ausecircncia de nitrogecircnio promove o
maior peso das placircntulas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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NORMAS PARA PUBLICACcedilAtildeO DE ARTIGOS E COMUNICACcedilOtildeES CIENTIacuteFICAS
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagationeacute editada semestralmente pela Editora da UniversidadeFederal de Lavras (Editora UFLA) publica artigoscientiacuteficos e comunicaccedilotildees cientiacuteficas da aacuterea de culturade tecidos de plantas elaborados por membros dacomunidade cientiacutefica nacional e internacional Natildeo eacutecobrada taxa para publicaccedilatildeo de trabalhos desde que umdos autores seja soacutecio e esteja em dia com a ABCTP(Associaccedilatildeo de Cultura de Cultura de Tecidos de Plantas)Eacute condiccedilatildeo fundamental que os artigoscomunicaccedilotildeessubmetidos agrave apreciaccedilatildeo da revista Plant Cell Culture ampMicropropagation natildeo foram e nem seratildeo publicadossimultaneamente em outro lugar Com a aceitaccedilatildeo do artigopara publicaccedilatildeo os editores adquirem amplos e exclusivosdireitos sobre o artigo para todas as liacutenguas e paiacuteses Apublicaccedilatildeo de artigoscomunicaccedilotildees dependeraacute daobservacircncia das Normas Editoriais dos pareceres do CorpoEditorial e da Comissatildeo ad hoc Todos os pareceres tecircmcaraacuteter sigiloso e imparcial e tanto os autores quanto osmembros do Corpo Editorial eou Comissatildeo ad hoc natildeoobtecircm informaccedilotildees identificadoras entre si
Os conceitos e afirmaccedilotildees contidos nos artigos ecomunicaccedilotildees seratildeo de inteira responsabilidade do(s)autor(es)
1 SUBMISSAtildeO
Cada trabalho deveraacute ter no maacuteximo 14 paacuteginas ejunto do mesmo deveraacute ser encaminhado ofiacutecio dirigido aoEditor Chefe da revista solicitando a publicaccedilatildeo do artigo
Esse ofiacutecio deveraacute conter o pedido de apreciaccedilatildeona revista ao editor chefe a declaraccedilatildeo de ser um trabalhooriginal e natildeo ter sido submetido a nenhuma outra revistaser assinado por todos os autores constar o endereccedilocompleto telefone e e-mail de todos Qualquer inclusatildeoexclusatildeo ou alteraccedilatildeo na ordem dos autores deveraacute sernotificada mediante ofiacutecio assinado por todos os autores(inclusive do autor excluiacutedo)
Originais quatro vias impressas e uma via em CDR comtexto e ilustraccedilotildees e graacuteficos Das 4 vias impressas apenas1 deve conter os nomes completos dos autores e rodapeacutena primeira paacuteginaProcessador de texto Word for Windows (version 98 2000XP ou 2003)Redigido em portuguecircs inglecircs ou espanholEspaccedilamento do texto Duplo Margens esquerda (3cm)direita (2cm) inferior e superiores (25cm) Cabeccedilalho eRodapeacute (25cm)Papel formato A4Fonte Times New Roman tamanho 12Nuacutemero de paacuteginas ateacute 14 paacuteginas numeradasconsecutivamente incluindo as ilustraccedilotildees
Tabelas devem fazer parte do corpo do artigo e serapresentadas no moacutedulo tabela do Word O tiacutetulo deveficar acimaGraacuteficos Figuras e Fotografias devem ser apresentadosem preto e branco niacutetidos e com contraste escaneadosinseridos no texto apoacutes a citaccedilatildeo dos mesmos e tambeacutemem um arquivo agrave parte salvos em extensatildeo tif ou jpg com resoluccedilatildeo de 300 dpi Os graacuteficos devem vir tambeacutemem excel com letra Times New Roman tamanho 10 semnegrito sem caixa de textos e agrupados em arquivo agraveparteSiacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitos emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker sem perda de suas formas originais
2 ESTRUTURA E ORGANIZACcedilAtildeO
21 O artigo cientiacutefico deve ser apresentado na seguintesequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfulas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumo
Index terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
INTRODUCcedilAtildeO
Deve apresentar uma visatildeo concisa do estado atualdo conhecimento sobre o assunto que o manuscritoaborda e enfatizar a relevacircncia do estudo sem constituir-se em extensa revisatildeo e na parte final os objetivos dapesquisa Deve incluir a revisatildeo de literatura
MATERIAL E MEacuteTODOS
Esta seccedilatildeo pode ser dividida em subtiacutetulosindicados em negrito
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Podem ser divididas em subseccedilotildees com subtiacutetulosconcisos e descritivos e conter tabelas e figuras
CONCLUSOtildeES
Finalizar com os resultados de acordo com osobjetivos do trabalho
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e naseccedilatildeo proacutepria
22 A comunicaccedilatildeo cientiacutefica deve ser apresentada naseguinte sequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfluas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumoIndex terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
Texto sem subdivisatildeo poreacutem com introduccedilatildeo material emeacutetodos resultados e discussatildeo (podendo conter tabelase graacuteficos e conclusatildeo subentendidas
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e na seccedilatildeoproacutepria
3 CASO O ARTIGO CONTENHA FOTOGRAFIASGRAacuteFICOS FIGURAS SIacuteMBOLOS E FOacuteRMULASESSAS DEVERAtildeO OBEDECER AgraveS SEGUINTESNORMAS
31 Fotografias deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpi
32 Figuras deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpiAs figuras deveratildeo ser elaboradas com letra Times NewRoman tamanho 10 sem negrito sem caixa de textos eagrupadas
33 Graacuteficos deveratildeo ser inseridos apoacutes citaccedilatildeo dosmesmos dentro do proacuteprio texto elaboradopreferencialmente em Excel com letra Times New Romantamanho 10 sem negrito sem caixa de textos e agrupadas
34 Siacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitas emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker (ex MathType Equation) sem perda de suasformas originais
OBS A formataccedilatildeo correta eacute parte imprescindiacutevel para queo trabalho seja devidamente protocolado Caso este natildeoesteja nas normas o mesmo seraacute recusado
4 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS as referecircnciasbibliograacuteficas devem ser citadas conforme a NBR60232002da ABNT
A exatidatildeo das referecircncias constantes da listagem e acorreta citaccedilatildeo no texto satildeo de responsabilidade do(s)autor(es) do artigo
41 Orientaccedilotildees gerais- Deve-se apresentar todos os autores do documentocientiacutefico (fonte)- O nome do perioacutedico deve ser descrito por extenso natildeodeve ser abreviado- Em todas as referecircncias deve-se apresentar o local depublicaccedilatildeo (cidade) a ser descrito no lugar adequado paracada tipo de documento- As referecircncias devem ser ordenadas alfabeticamente
42 Exemplificaccedilatildeo (tipos mais comuns)
ARTIGO DE PERIOacuteDICO
VIEIRA R F RESENDE M A V de Eacutepocas de plantio deervilha em Patos de Minas Uberaba e Janauacuteba MinasGerais Ciecircncia e Agrotecnologia Lavras v 24 n 1 p 74-80 janmar 2000
LIVRO
a) livro no todo
STEEL R G D TORRIE J H Principles andprocedures of statistics New York McGraw-Hill Bookl960 481 p
b) Parte de livro com autoria especiacutefica
FLEURY J A Anaacutelise ao niacutevel de empresa dos impactosda automaccedilatildeo sobre a organizaccedilatildeo da produccedilatildeo de trabalhoIn SOARES R M S M Gestatildeo da empresa Brasiacutelia IPEAIPLAN 1980 p 149-159
c) Parte de livro sem autoria especiacutefica
MARTIM L C T Nutriccedilatildeo de bovino de corte emconfinamento In ______ Confinamento de bovino decorte 2 ed Satildeo Paulo Nobel 1986 cap 3 p 29-89
DISSERTACcedilAtildeO E TESE
GONCcedilALVES R A Preservaccedilatildeo da qualidade tecnoloacutegicade trigo (Triticum aestivum L) e controle de Rhyzoperthadominica (F) durante o armazenamento em atmosferacontrolada com Co2 e N2 1997 52 f Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Ciecircncia dos Alimentos) Universidade Federal deLavras Lavras 1997
MATIOLI G P Influecircncia do leite proveniente de vacasmastiacuteticas no rendimento de queijo frescal 2000 55 pDissertaccedilatildeo (Mestrado em Ciecircncias dos Alimentos) -Universidade Federal de Lavras Lavras 2000
Nota A folha eacute composta de duas paacuteginas anverso everso Alguns trabalhos como teses e dissertaccedilotildees satildeoimpressos apenas no anverso e neste caso indica-se f(ABNT NBR60232002 p 18)
TRABALHOS DE CONGRESSO E OUTROS EVENTOS
SILVA J N M Possibilidades de produccedilatildeo sustentada demadeira em floresta densa de terra firme da Amazocircniabrasileira In CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO 61990 Campos do Jordatildeo Anais Campos do Jordatildeo SBSSBEF 1990 p 39-45
DOCUMENTOS ELETROcircNICOS
As obras consultadas online satildeo referenciadas conformenormas especiacuteficas para cada tipo de documento(monografia no todo e em parte trabalho apresentado emevento artigo de perioacutedico artigo de jornal etc)acrescidas de informaccedilotildees sobre o endereccedilo eletrocircnicoapresentado entre braquetes (lt gt) precedido da expressatildeo
Disponiacutevel em e da data de acesso ao documentoprecedida da expressatildeo Acesso em Nota Natildeo se recomenda referenciar material eletrocircnico decurta duraccedilatildeo nas redes (ABNT NBR60232000 p 4)Segundo padrotildees internacionais a divisatildeo de endereccediloeletrocircnico no fim da linha deve ocorrer sempre apoacutes barra ()
Monografia (acesso online)
a) livro no todo
TAKAHASHI T (Coord) Tecnologia em foco BrasiacuteliaSocinfoMCT 2000 90 p Disponiacutevel em lthttpwwwsocinfoorgbrgt Acesso em 22 ago 2000
b) parte de livro
TAKAHASHI T Mercado trabalho e oportunidades In______ Sociedade da informaccedilatildeo no Brasil livro verdeBrasiacutelia SocinfoMCT 2000 cap 2 p 13-24 Disponiacutevelem lthttpwwwsocinfogovbrgt Acesso em 22 ago 2000
c) Parte de congresso seminaacuterio etc
GIESBRECHT H O Avaliaccedilatildeo de desempenho deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica a experiecircncia deprojeto excelecircncia na pesquisa tecnoloacutegica InCONGRESSO ABIPTI 2000 Fortaleza Gestatildeo deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica Fortaleza Nutec 2000Disponiacutevel em lthttpwwwabiptiorgbrgt Acesso em01 dez 2000
d) Tese
SILVA E M Arbitrariedade do signo a liacutengua brasileirade sinais (LIBRAS) 1997 144 p Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Linguumliacutestica Aplicada e Estudo de Liacutengua) - PontifiacuteciaUniversidade Catoacutelica de Satildeo Paulo Satildeo Paulo 1997Disponiacutevel em lthttpwwwterracombrvirtualbooksfreebookportdid teseshtmgt Acesso em 28 nov 2000
Artigo de perioacutedico (acesso online)
RESENDE A M G Hipertexto tramas e trilhas de umconceito contemporacircneo Informaccedilatildeo e Sociedade Recifev 10 n 1 2000 Seccedilatildeo Educaccedilatildeo Disponiacutevel em lthttpwwwinformaccedilatildeoesociedadeufpbbrgt Acesso em 30 nov2000
CITACcedilAtildeO PELO SISTEMA ALFABEacuteTICO (AUTOR-DATA) (conforme ABNT NBR105202002)Dois autores - Steel amp Torrie (1960) ou (STEEL amp TORRIE1960)Trecircs ou mais autores - Valle et al (l945) ou (VALLE et al1945)Obs Quando forem citados dois autores de uma mesmaobra deve-se separaacute-los pelo sinal amp (comercial)
5 O EDITOR CHEFE NOTIFICARAacute O AUTOR DORECEBIMENTO DO ORIGINAL E POSTERIORMENTE
O INFORMARAacute SOBRE SUA PUBLICACcedilAtildeO OSARTIGOS QUE NECESSITAREM DE MODIFICACcedilOtildeESSERAtildeO DEVOLVIDOS AO AUTOR PARA A DEVIDAREVISAtildeO
6 OS ARTIGOS NAtildeO APROVADOS SERAtildeODEVOLVIDOS
7 OS ARTIGOS SERAtildeO PUBLICADOS EM ORDEMDE APROVACcedilAtildeO
8 O NAtildeO-CUMPRIMENTO DESSAS NORMASIMPLICARAacute NA DEVOLUCcedilAtildeO DO ARTIGO AOAUTOR
9 OS CASOS OMISSOS SERAtildeO RESOLVIDOS PELACOMISSAtildeO EDITORIAL
10 O ARTIGO DEVERAacute SER ENVIADO PARA
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepartamento de BiologiaSetor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 3037CEP 37200-000Lavras MG
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Plant Cell Culture amp Micropropagation asemestral journal edited by Editora UFLA of theUniversidade Federal de Lavras publishes scientificarticles and communications in the area of plant tissueculture elaborated by researchers of the national andinternational scientific community One of the authors mustbe associated and have paid all charges required by theABCTP (Plant Tissue Culture Association) in order to betax free for publication in Plant Cell Culture ampMicropropagation Submission of a manuscript implies thatit is neither under consideration for publication elsewherenor has appeared previously in part or in whole Onacceptance for publication authors assign to the Editorsfull copyright of the manuscript in all languages andcountries Publications will depend on editorial rules andon the review of experts and ad hoc commission Reviewerand editorial opinions will be anonymously communicatedto authors
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the text after citation and also in a separate file (on thesame diskette as the article) saved in extension tif orjpg with resolution of 300 dpi The title should be below
and presented in the language in which the article waswritten and in EnglishSymbols and Chemical Formula must be presented usinga word processor that permits a format Page Maker
2 STRUCTURE AND ORGANIZATION
21 The article should be presented in the followingsequence
TITLE
In English language containing no more than 15 words incapital letters and bold
AUTHORS
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copies Footnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTshould be informative and condensed and should
explain the objectives material and methods results andconclusion of the work in a maximum of 250 words all writtenin one paragraphFor articles written in English the abstract should also bepresented in Portuguese
Key words minimum of three and maximum of five Theyshould not repeat words that are already in the title Thesemay include phrases as well as individual words and shouldbe separate by commasFor articles written in English the key-words should alsobe presented in Portuguese
INTRODUCTION
Should present a concise vision of the current level ofknowledge that has been achieved within the subject areathat the paper will discuss It should neither give anextensive review nor should it include details about theresults and discussion It should clearly indicate theobjectives of the research that was carried out
MATERIAL AND METHODS
This section can contain subdivisions with subtitles inbold print
RESULTS AND DISCUSSION
This section can have subsection which begins withconcise descriptive titles in bold print
CONCLUSIONS
Finishing agree of objectives of work
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
22 The Communication should be presented in thefollowing sequence
TITLE
Sufficiently clear conspicuous and complete withoutsuperfluous words It is recommended to initiate with theterm that represent the most important aspect with otherterms in decreasing of importance
TITLE IN PORTUGUESE
FULL NAME(S) OF THE AUTHOR(S)
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copiesFootnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTWritten continuously without paragraph It must
not exceed 250 words Index terms must be enclosed afterthe abstract using terms different from those used in thetitle and separated by comma
Index terms (3 to 5) must be described in capital and smallletters and express the content of the article
ABSTRACT AND INDEX TERMS IN PORTUGUESE
Text with no division but must include introductionmaterial and methods results and discussion andconclusion (it may include tables and figures)
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
3 PHOTOGRAPHS GRAPHS FIGURES SYMBOLSOR FORMULA CONTAINED IN THE ARTICLE SHOULDOBEY THE FOLLOWING RULES
31 Photographs must be presented in black and whiteclear and with contrast inserted in the text after their citationand also in a separate file (on the same diskette as thearticle) saved in extension TIFF
or JPEG withresolution of 300 dpi
32 Figures must be presented in black and white clearand with contrast inserted in the text after their citation andalso in a separate file (on the same diskette as the article)saved in extension TIFF
or JPEG with resolution of300 dpi They must be elaborated using Times New Romanfont size 10 without bold without text box and arranged
33 Graphs must be inserted in the text after their citationelaborated preferentially in Excel using Times New Romanfont size 10 without bold
34 Symbols and Chemical Formula must be presentedusing a word processor that permits a format for Page Maker(ex MathType Equation) without loss of its original form
4 REFERENCES references must be cited according toNBR60232002 of ABNT All references and their correctcitation in the text are of the entire responsibility of theauthor(s)
5 THE BRAZILIAN ASSOCIATION OF PLANT TISSUECULTURE (ABCTP) WILL INFORM THE AUTHOR THERECEIPT OF THE ORIGINAL MANUSCRIPT ANDEVENTUALLY IT WILL ALSO SEND INFORMATIONREGARDING ITS PUBLICATION MANUSCRIPTSTHAT REQUIRE MODIFICATIONS WILL BERETURNED TO THE AUTHOR FOR THE RESPECTIVEREVISION ANDCORRECTIONS
6 MANUSCRIPTS NOT APPROVED WON T BERETURNED TO THE AUTHOR
7 ARTICLES WILL BE PUBLISHED ACCORDING TOTHE ORDER OF RECEIPT AND APPROVAL
8 IF ANY OF THESE RULES ARE NOT ATTENDED THEMANUSCRIPT WILL BE RETURNED TO THE AUTHOR
9 THE NEGLECTFUL CASES WILL BE SOLVED BYTHE EDITORIAL COMMITTEE
10 MANUSCRIPTS SHOULD BE SENT TO THEFOLLOWING ADDRESS
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepto de Biologia - Setor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 303737200-000 Lavras MG BRAZIL
Plant Cell Culture amp Micropropagation
ISSN 1808-9909
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-110 2008
CONTEUacuteDO
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia lingulata Ruiz amp Pav em ambiente protegido em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo Acclimatization of micropropagated plants of Heliconia Lingulata Ruiz amp Pav in protected environments as a function of irrigation depth Benito Moreira de Azevedo Eliana Lee Jorge Rocha Thales Viniacutecius de Arauacutejo Viana Albanise Barbosa Mariho Ana Cristina Portugal Pito de Carvalho Denise Vieira Vasconcelos 55
In vitro organogenesis of passion fruit (Passiflora edulis Sims F flavicarpa Deg) affected by irradiance sucrose and explant position Organogecircnese in vitro do maracujazeiro (Passiflora edulis Sims F flavicarpa Degener) afetado por irradiacircncia sacarose e posiccedilatildeo dos explantes Rodrigo Sobreira Alexandre Flaacutevio Alencar D Arauacutejo Couto Joseacute Maria Moreira Dias Wagner Campos Otoni Rita De Caacutessia Mendes Paulo Roberto Cecon 62
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental [Ananas Comosus (L) Merr Var Bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo Substrates evaluation for production of ornamental pineapple [Ananas Comosus (L) Merr Var Bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] plants under greenhouse conditions Francisco Nunes da Cunha Filho Antonio Carlos Torres Joatildeo Maria Charchar
70
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos na multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental in vitro Effect of isopentenyl adenine in four subcultures during the in vitro multiplication of ornamental pineapple shoot Maria do Desterro Mendes dos Santos Joseacute Getuacutelio Da Silva Filho Antonio Carlos Torres 76
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento da cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) cultivada in vitro em diferentes concentraccedilotildees de sacarose e qualidade de luz Photochemical efficiency and growth characteristics of sugar cane (Saccharum officinarum L) plants cultivated in vitro under different sucrose concentrations and light quality Geoacutergia Peixoto Bechara Motheacute Alena Netto Torres Luis Eduardo Campos Crespo Eliemar Campostrini 84
Effects of auxins and cytokinins on in vitro development of Alpinia purpurata K Schum and phenolic compounds production Efeito de auxinas e citocininas no desenvolvimento in vitro de Alpinia purpurata K Schum e produccedilatildeo de substacircncias fenoacutelicas Cristiane Pimentel Victoacuterio Iacinete Pamplona da Cruz Alice Sato Ricardo Machado Kuster Celso Luiz Salgueiro Lage 92
Curva de crescimento atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteis e taninos totais em calos de Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville (Fabaceae-Mimosoideae) Growth curve phenylalanine ammonia-lyase activity and total phenol levels in callus of Stryphnodendron Adstringens (Mart) Coville - (Fabaceae-Mimosoideae) Ana Hortecircncia Fonsecircca Castro Miller Marani Lima Renato Paiva Amauri Alves de Alvarenga Mirelle Oliveira Soacuteter 99
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica L concentraccedilotildees de NH4NO3 e de KNO3 no desenvolvimento de embriotildees Direct somatic embryogenesis of Coffea arabica L concentrations of NH4NO3 and KNO3 on the development of embryos Juliana Costa de Rezende Moacir Pasqual Samuel Pereira de Carvalho Ester Alice Ferreira Flavia Carvalho Santos 105
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 55
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
(Recebido em 17 de abril de 2008 e aprovado em 22 de julho de 2008)
ACLIMATIZACcedilAtildeO DE MUDAS MICROPROPAGADAS DE Heliconialingulata Ruiz amp Pav EM AMBIENTE PROTEGIDO EM FUNCcedilAtildeO
DA LAcircMINA DE IRRIGACcedilAtildeO1
ACCLIMATIZATION OF MICROPROPAGATED PLANTS OF Heliconia lingulata Ruiz ampPav IN PROTECTED ENVIRONMENTS AS A FUNCTION OF IRRIGATION DEPTH
BENITO MOREIRA DE AZEVEDO2 ELIANA LEE JORGE ROCHA3 THALES VINIacuteCIUS DE ARAUJO VIANA4ALBANISE BARBOSA MARINHO5 ANA CRISTINA PORTUGAL PINTO DE CARVALHO6
DENISE VIEIRA VASCONCELOS7
1Parte da dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade Federal do Cearaacute pelo primeiro autor para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem2Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC benitoazevedohotmailcom
3Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem (In memoacuteria)4Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC thalesufcbr
5Doutora em Produccedilatildeo Vegetal Pesquisadora CNPqFUNCAP albanisebmgmailcom6Doutora Embrapa Agroinduacutestria Tropical Cx P l 3761 60511-110 Fortaleza CE cristinacnpatembrapabr7Engenheira Agrocircnoma Mestre Universidade Federal do CearaacuteUFC denisevasconceloshotmailcom
RESUMOAs helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com sua beleza
e exotismo constituem uma das maiores riquezas da flora brasileiraEm decorrecircncia da alta demanda do mercado consumidor as mudasvecircm sendo produzidas em escala comercial por meio damicropropagaccedilatildeo uma teacutecnica importante da cultura de tecidosque apresenta diversas etapas A etapa de aclimatizaccedilatildeo eacute a fasemais criacutetica e importante pois se natildeo for bem executada podeproporcionar altos iacutendices de mortalidade e baixas taxas decrescimento e desuniformidade das plantas com consequumlentequeda na produccedilatildeo Para minimizar esse problema e atender agravesexigecircncias do mercado consumidor eacute preciso buscar informaccedilotildeesteacutecnicas e cientiacuteficas sobre o adequado manejo das plantas nafase de aclimatizaccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliaro efeito de distintas lacircminas de irrigaccedilatildeo na aclimatizaccedilatildeo demudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata Ruizamp Pav) A pesquisa foi conduzida em um ambiente protegidopertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical Fortaleza CE(3ordm44 S e 38ordm33 W) Foram analisadas quatro lacircminas de irrigaccedilatildeo1 2 3 e 4 mm de aacutegua As variaacuteveis agronocircmicas avaliadas nosexperimentos foram altura da planta nuacutemero de folhas e diacircmetrodo caule Os resultados dos experimentos evidenciaram o melhordesenvolvimento das mudas micropropagadas de helicocircniaquando irrigadas com lacircmina de 25 mm dia-1
Termos para indexaccedilatildeo Floricultura Heliconia lingulatamanejo de irrigaccedilatildeo
ABSTRACTHeliconias are beautiful and exotic ornamental plants of
the wealthy Brazilian flora Due to a high demand of theconsuming market plants are being produced in a commercial
scale using the technique of micropropagation In this techniqueacclimatization is the most important and critical phase forpromoting high rates of mortality reduced growth and plantuniformity which reduce its production The objective of thiswork was to evaluate the effect of different irrigation depth inthe acclimatization of micropropagated heliconia (Heliconialingulata) The experiments were in a protected environmentlocated at Embrapa Tropical Agroindustry Fortaleza CearaBrazil (3ordm44 S and 38ordm33 W) The agronomic variables evaluatedwere plant height leaf number and stem diameter The resultsshowed the best development of micropropagated heliconia plantsusing water depth of 25 mm day-1
Index terms floraculture Heliconia lingulata irrigationmanagement
INTRODUCcedilAtildeO
As helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com
sua beleza e exotismo assemelham-se a verdadeiras
esculturas lembrando em sua forma piracircmides bicos de
aves cascatas de flores pinhais ou cachos de banana As
helicocircnias constituem uma das maiores riquezas da flora
brasileira Atualmente sabe-se que o mercado internacional
tem proporcionado muitas oportunidades de negoacutecios para
os produtores dessas flores tropicais
A floricultura eacute uma atividade desenvolvida em
geral em ambientes protegidos estufas ou tuacuteneis plaacutesticos
AZEVEDO B M de et al56
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
combinando alta produtividade com maior qualidade
garantindo ao agricultor uma colheita satisfatoacuteria e
reduzindo ao maacuteximo as perdas por danos proporcionados
por variaccedilotildees climaacuteticas adversas (GONDIM et al 2004)
De acordo com Terceiro Neto et al (2004) uma etapa
importante na produccedilatildeo de flores e plantas ornamentais
estaacute relacionada agrave utilizaccedilatildeo de mudas de qualidade Nesse
contexto a produccedilatildeo de mudas atraveacutes da
micropropagaccedilatildeo surge como uma alternativa viaacutevel para
obtenccedilatildeo de mudas em escala comercial com alta qualidade
geneacutetica e fitossanitaacuteria em um curto espaccedilo de tempo
atendendo dessa forma agraves necessidades dos produtores
Dentre as etapas da micropropagaccedilatildeo pode-se destacar a
aclimatizaccedilatildeo que eacute a fase mais criacutetica e importante
A irrigaccedilatildeo eacute uma praacutetica de suma importacircncia no
processo de aclimatizaccedilatildeo jaacute que a aacutegua eacute um dos fatores
que mais limitam a produccedilatildeo das plantas Seu manejo ou
seja a quantidade de aacutegua e sua frequumlecircncia de aplicaccedilatildeo eacute
um fator fundamental para o estabelecimento e o adequado
desenvolvimento das mudas micropropagadas Para se
alcanccedilar todos os objetivos da praacutetica de irrigaccedilatildeo que
englobam a maximizaccedilatildeo da produccedilatildeo racionalizaccedilatildeo do
uso da matildeo-de-obra energia aacutegua e fertilizante e a
aplicaccedilatildeo correta da aacutegua eacute imprescindiacutevel adotar um
correto manejo desse sistema (PEREIRA et al 1997)
Para Pieter et al (2007) os efeitos de aplicaccedilotildees
excessivas ou deficitaacuterias satildeo irreversiacuteveis e variam de
acordo com a intensidade e tempo de duraccedilatildeo do
procedimento imposto Nesses casos os processos
fisioloacutegicos da planta relacionados ao crescimento satildeo
afetados e sob condiccedilotildees severas o deacuteficit pode provocar
a murcha permanente do vegetal Conforme a Embrapa
(2007) em regiotildees de calor intenso com inverno ameno
normalmente a exigecircncia das mudas por aacutegua em qualquer
fase de desenvolvimento eacute maior que em regiotildees de clima
temperado Por outro lado alguns tipos de substrato por
terem menor capacidade de retenccedilatildeo de aacutegua exigem que
se aplique mais aacutegua a cada irrigaccedilatildeo ou que se aumente a
frequumlecircncia das mesmas Eacute recomendaacutevel que as lacircminas
sejam aplicadas nas primeiras horas da manhatilde e ao
entardecer uma vez que irrigaccedilatildeo nas horas mais quentes
pode danificar as mudas principalmente quando
fertirrigadas (CESP 2000)
Para Bernardo et al (2005) eacute necessaacuterio conhecer o
comportamento da cultura em funccedilatildeo das diferentes
quantidades de aacutegua fornecidas e identificar as fases de
desenvolvimento de maior consumo de aacutegua e os periacuteodos
criacuteticos quando a falta ou o excesso provocaria quedas de
produccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliar o
efeito de lacircminas de irrigaccedilatildeo sobre o desenvolvimento de
mudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata
Ruiz amp Pav) em fase de aclimatizaccedilatildeo em ambiente
protegido
MATERIAL E MEacuteTODOS
O presente trabalho foi conduzido em um ambiente
protegido pertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical
no periacuteodo de fevereiro a abril de 2006 A aacuterea estaacute situada
no municiacutepio de Fortaleza Cearaacute com as coordenadas
geograacuteficas correspondentes agrave 3ordm44 S 38ordm33 W e 195 m
de altitude De acordo com a classificaccedilatildeo climaacutetica de
Koppen o clima da regiatildeo eacute do tipo Aw caracterizado
como clima tropical chuvoso de savana tropical com a
eacutepoca mais seca no inverno e maacuteximo de chuvas no veratildeo-
outono
O tuacutenel alto de cultivo forccedilado de formato
semicircular e orientaccedilatildeo leste-oeste foi instalado com as
seguintes dimensotildees 45 m de comprimento 5 m de largura
e 2 m de altura comportando aproximadamente uma aacuterea
de 225 msup2 e um volume de 357 m3 Toda a sua estrutura foi
completamente coberto por uma tela de sombreamento
para reduzir 50 da luminosidade
O sistema de irrigaccedilatildeo empregado foi do tipo
microaspersatildeo suspenso sendo constituiacutedo por um
conjunto motobomba uma linha principal uma linha de
derivaccedilatildeo e uma linha lateral de 10 m com emissores
espaccedilados de 24 m e a uma altura de 05 m das bandejas
Os microaspersores foram do tipo nebulizador modelo
Tietze com bocal violeta em posiccedilatildeo invertida a vazatildeo do
emissor era de 43 l h-1 na pressatildeo de 30 kgf cm-2
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 57
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
As mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata)
utilizadas nesse experimento foram obtidas atraveacutes do
processo de micropropagaccedilatildeo realizado no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos e Geneacutetica Vegetal da Embrapa
Agroinduacutestria Tropical Na ocasiatildeo do plantio as mudas
apresentavam-se completamente enraizadas e com alturas
variando de 26 a 35 cm
As plantas provenientes do material in vitro foram
retiradas dos frascos e suas raiacutezes lavadas em aacutegua
corrente para a retirada do excesso do meio de cultura
Apoacutes a lavagem as mudas foram colocadas em bandejas e
suas raiacutezes podadas com o auxiacutelio de uma tesoura com o
objetivo de uniformizar o material facilitar o plantio e
estimular o desenvolvimento de um sistema radicular mais
funcional
As mudas foram transplantadas para tubetes de
capacidade volumeacutetrica de 180 cm3 contendo o substrato
formado pela mistura poacute-de-coco seco + huacutemus de
minhoca + solo (PCS+H+S) na proporccedilatildeo de 111
misturado no Laboratoacuterio de Solos da Embrapa e sem
fornecimento de fertilizantes durante o periacuteodo
experimental Para promover o completo umedecimento
do substrato e aumentar a umidade relativa do ambiente
momentos antes da transferecircncia das mudas para os
tubetes o sistema de irrigaccedilatildeo foi acionado
proporcionando assim um ambiente favoraacutevel ao
estabelecimento das mudas Com os recipientes em seus
devidos lugares as mudas foram acondicionadas e
levadas em bandejas ateacute o tuacutenel alto de cultivo forccedilado
iniciando a etapa de plantio As mudas foram inseridas
numa profundidade meacutedia de 5 cm de forma que as raiacutezes
e a parte inicial do caule ficaram enterradas As mudas
foram transferidas para os respectivos substratos no dia
3 de fevereiro de 2006
Para promover melhores condiccedilotildees para o
estabelecimento das mudas do primeiro ao quadrageacutesimo
quinto dia apoacutes o transplantio (DAT) essas receberam
uma irrigaccedilatildeo padratildeo com a aplicaccedilatildeo de uma lacircmina
correspondente a 3 mm de aacutegua parcelada duas vezes ao
dia sendo uma aplicaccedilatildeo pela manhatilde iniciando-se
aproximadamente agraves 9 h e a outra agrave tarde a partir das 16 h
A partir do 45ordm DAT foi adotada a diferenciaccedilatildeo das lacircminas
de irrigaccedilatildeo
O delineamento experimental foi em blocos
casualizados composto por quatro tratamentos e cinco
repeticcedilotildees constituiacutedas por cinco fileiras verticais com
cinco plantas cada totalizando 25 plantas por tratamento
num total de 100 plantas por experimento Os tratamentos
consistiram de quatro niacuteveis de irrigaccedilatildeo equivalentes agraves
lacircminas de 10 (L1) 20 (L
2) 30 (L
3) e 40 (L
4) miliacutemetros de
aacutegua tambeacutem parcelada em duas aplicaccedilotildees diaacuterias agraves 9 h
e agraves 16h
Os dados foram coletados em duas ocasiotildees apoacutes
a diferenciaccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo A primeira coleta
de dados ocorreu em 04 de abril aos 60 dias apoacutes o
transplantio (DAT) e a segunda em 19 de abril (aos 75
DAT) As variaacuteveis analisadas foram nuacutemero de folhas
(NF) altura da planta (AP) e diacircmetro do caule (DC) O
nuacutemero de folhas foi contado visualmente em todas as
mudas transplantadas Todas as folhas foram consideradas
na contagem exceto as totalmente secas A altura da planta
foi medida a partir da base ateacute a abertura das folhas por
meio de um escaliacutemetro graduado em centiacutemetros
subdividido em miliacutemetros O diacircmetro do caule foi
mensurado com o auxiacutelio de um paquiacutemetro digital
graduado em centiacutemetros considerando a base do caule
como padratildeo de contagem
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos aplicativos Microsoft Office Excel e SISVAR
versatildeo 46 (FERREIRA 2003)
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os valores meacutedios mensais de temperatura do ar
umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidade
do vento a 2 m de altura registrados durante o experimento
pela estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade
Federal do Cearaacute (UFC) encontram-se na Tabela 1 cuja
temperatura meacutedia do periacuteodo foi de 23 ordmC e umidade relativa
meacutedia de 93 caracterizando um periacuteodo de temperaturas
amenas
AZEVEDO B M de et al58
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
TABELA 1 Valores meacutedios mensais de temperatura do ar umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidadedo vento a 2m de altura Fortaleza-CE 2006
Mecircs Temperatura (ordmC) U R () Rad solar global (W m-2) Vel do vento (m s-1)
Fevereiro 23 95 1329 173
Marccedilo 24 84 1291 125
Abril 23 99 1162 094
Fonte Estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade Federal do Cearaacute (UFC)
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Tanto o deacuteficit quanto o excesso hiacutedrico afetaram o
crescimento das mudas Isso pode ter ocorrido pelo fato
da deficiecircncia hiacutedrica ocasionar o fechamento dos
estocircmatos diminuindo a concentraccedilatildeo intracelular de CO2
e consequumlentemente gerando decreacutescimo na assimilaccedilatildeo
do mesmo (BERNARDO et al 2005) Jaacute o excesso hiacutedrico
ocasiona a falta de oxigecircnio que provoca a reduccedilatildeo da
fotossiacutentese e prejudica a conversatildeo da mateacuteria orgacircnica
pelos microorganismos em formas soluacuteveis que a planta
possa reutilizar Esses fatores podem proporcionar um
TABELA 2 Anaacutelise de variacircncia das caracteriacutesticas de desenvolvimento altura da planta (AP) diacircmetro do caule(DC) e nuacutemero de folhas (NF) de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das laminas aplicadas aos 60e 75 DAT
(ns) natildeo significativo significativo a 5 de probabilidade pelo teste F
Quadrado meacutedio Variaacutevel FV GL
60 DAT 75 DAT
Bloco 4 03966ns 02946ns
Tratamento 3 23675 31348 AP
Resiacuteduo 12 03593 06279
Bloco 4 06407ns 02754ns
Tratamento 3 16645 41102 DC
Resiacuteduo 12 06222 06728
Bloco 4 04377 01829ns
Tratamento 3 03421 05204 NF
Resiacuteduo 12 0773 01081
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 59
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
menor crescimento das plantas devido agrave diminuiccedilatildeo da
eficiecircncia de transformaccedilatildeo de fotoassimilados nessas
condiccedilotildees (REGO et al 2004)
A anaacutelise de regressatildeo indica que o modelo que
melhor se ajustou agrave relaccedilatildeo altura de planta em funccedilatildeo da
lacircmina de irrigaccedilatildeo aos 60 e 75 DAT foi o polinomial
quadraacutetico apresentando valores para R2 de 0997 e 0966
respectivamente (Figuras 1 e 2) Observa-se que aos 60 e 75
DAT a altura da planta aumentou com a lacircmina aplicada ateacute
FIGURA 1 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 60 DATFortaleza-CE 2005 (ns natildeo significativo pelo teste F significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
FIGURA 2 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 75 DATFortaleza-CE 2005 (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
um ponto maacuteximo de 247 e 250 mm dia-1 respectivamente
representando a lacircmina que proporcionou maior
desenvolvimento das mudas em relaccedilatildeo agrave altura da planta
sendo obtida 896 e 1012 cm respectivamente Lacircminas acima
desse valor causaram reduccedilatildeo no crescimento
possivelmente devido ao excesso de aacutegua
Soares et al (1998) salientam que a aacutegua em excesso
proporciona aumentos nos custo de produccedilatildeo e do risco
de lixiviaccedilatildeo da aacutegua e dos nutrientes nela diluiacutedos o que
AP = -05934LI2 + 29273LI + 53519R2 = 0997
700
740
780
820
860
900
940
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1)
Altu
ra d
a pl
anta
(cm
)
AP = -06728L2 + 33294L + 59869
R2 = 0966
80
84
88
92
96
100
104
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Alt
ura
da p
lant
a (c
m)
AZEVEDO B M de et al60
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
pode prejudicar o desenvolvimento radicular Aleacutem disso
o excesso de aacutegua compromete os processos de
fotossiacutentese e respiraccedilatildeo os quais envolvem a utilizaccedilatildeo
de determinadas concentraccedilotildees de oxigecircnio (RAVEN et
al 2001) Jaacute em casos de deacuteficit hiacutedrico podem ocorrer
problemas de ordem fisioloacutegica ou seja afetar
negativamente o desenvolvimento das plantas
Em ambos os periacuteodos avaliados observou-se que
as lacircminas aplicadas influenciaram o diacircmetro de caule
das mudas de helicocircnia com valores meacutedios de 97 e 103
cm aos 60 e 75 DAT respectivamente A anaacutelise de
regressatildeo indicou que aos 60 DAT o modelo polinomial
quadraacutetico foi o que melhor representou o diacircmetro do
caule em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo com R2 de 0746
(Figura 3) O maacuteximo valor do diacircmetro de caule (1022
cm) calculado por derivaccedilatildeo da curva de ajuste foi obtido
aplicando-se uma lacircmina de 264 mm dia-1 A partir dessa
lacircmina houve uma diminuiccedilatildeo no diacircmetro de caule
ocasionado possivelmente pelo excesso de aacutegua Aos
75 DAT o modelo matemaacutetico ajustado para relacionar o
diacircmetro de caule em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo
apresentou coeficiente de determinaccedilatildeo (R2) muito baixo
natildeo sendo representativo
Modelos polinomiais quadraacuteticos para explicar o
efeito da lacircmina de irrigaccedilatildeo sobre a altura e diacircmetro de
caule tambeacutem foram obtidos por Pieter et al (2007) na
produccedilatildeo da flor da fortuna por Lopes et al (2005) em
mudas de Eucalyptus grandis W Hill por Pereira et al
(2003) e Recircgo et al (2004) na cultura do crisacircntemo
A anaacutelise de variacircncia (Tabela2) indicou que o
nuacutemero de folhas nas mudas de helicocircnia foi influenciado
pelas lacircminas de irrigaccedilatildeo nas duas eacutepocas analisadas (60
e 75 DAT) com valores meacutedios de 325 e 345 folhas nas
respectivas eacutepocas poreacutem o modelo matemaacutetico para
representar essa relaccedilatildeo apresentou coeficiente de
determinaccedilatildeo (R2) muito baixo e natildeo foi estatisticamente
significativo
As anaacutelises mostraram que aos 60 e 75 DAT a
lacircmina de irrigaccedilatildeo ideal que proporcionou o melhor
desenvolvimento das plantas encontra-se na faixa
compreendida de 247 a 264 mm dia-1 Valores
semelhantes foram obtidos por Gomes et al (2006) que
verificaram que a taxa de evapotranspiraccedilatildeo meacutedia da
Heliconia psittacorum L f x HSpatho-circinada
Aristeg cultivada em ambiente protegido foi de 22 mm
dia-1
FIGURA 3 Diacircmetro de caule de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) aos 60 DAT em funccedilatildeo das lacircminas deirrigaccedilatildeo Fortaleza CE (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
DC= -04111L2
+ 21726L + 73492
R2 = 0746
80
85
90
95
100
105
110
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Diacirc
met
ro d
o ca
ule(
cm)
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 61
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
CONCLUSOtildeES
As lacircminas de irrigaccedilatildeo influenciaram as
caracteriacutesticas de desenvolvimento avaliadas aos 60 e 75
DAT
A altura de planta e o diacircmetro de caule
apresentaram resposta quadraacutetica em relaccedilatildeo agraves lacircminas
aplicadas
Nas condiccedilotildees em que foi desenvolvido este
trabalho para a aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas
de helicocircnia recomenda-se irrigar com 25 mm dia-1 com o
intuito de se obter mudas mais vigorosas para serem
transplantadas para condiccedilotildees de campo
AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pela concessatildeo da bolsa de estudo
Agrave Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaacuteria
CNPAT pela oportunidade de realizaccedilatildeo desta pesquisa
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
BERNARDO S SOARES A A MANTOVANI E CManual de irrigaccedilatildeo 7 ed Viccedilosa MG UFV 2005
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ALEXANDRE R S et al62
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
(Recebido em 4 de marccedilo de 2008 e aprovado em 1 de setembro de 2008)
IN VITRO ORGANOGENESIS OF PASSION FRUIT (PASSIFLORAEDULIS SIMS F FLAVICARPA DEG) AFFECTED BYIRRADIANCE SUCROSE AND EXPLANT POSITION
ORGANOGEcircNESE IN VITRO DO MARACUJAZEIRO (PASSIFLORA EDULIS SIMSF FLAVICARPA DEGENER) AFETADO POR IRRADIAcircNCIA SACAROSE E
POSICcedilAtildeO DOS EXPLANTES
RODRIGO SOBREIRA ALEXANDRE1 FLAacuteVIO ALENCAR D
ARAUacuteJO COUTO1 JOSEacute MARIA MOREIRA DIAS1WAGNER CAMPOS OTONI2 RITA DE CAacuteSSIA MENDES3 PAULO ROBERTO CECON4
1Professor Doutor Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG rsalexandreclick21combr2Doutor Departamento de Biologia Vegetal Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG3Teacutecnica em Quiacutemica Graduanda em Agronomia Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
4Doutor Departamento de Informaacutetica Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
ABSTRACTThe culture of the tissues has helped considerably the
Passiflora genus development achieving successfully themorphogenic responses in different in vitro explants Theobjective this work was to assess the in vitro morphogenicresponses of hypocotyl segments of passion fruit collected from5 positions (apical sub-apical median sub-basal and basalnamely 1-5 respectively) along the hypocotyls axis and culturedin medium with different concentrations of sucrose and exposedto irradiance levels The experiments were performed as acompletely randomized blocks design with 15 repetitions in 4 x4 x 5 factorial scheme (irradiance x sucrose x explant positions)totalizing 80 treatments on which every experimental parcelwas comprised of a flask containing five hypocotyls Thehypocotyl segment from positions 1 and 3 at their extremedistal ends cultured onto medium of culture with 30 g L-1 sucroseand under 100 micromol m-2 s-1 irradiance enable the greatest numberof buds and shoots differentiated The distal extremity from thesegments of hypocotyl farthest from the cotyledonary nodes(position 1) cultivated in 20 g L-1 sucrose and exposed to 50micromol m-2 s-1 irradiance result in the best condition for shootdevelopment
Index terms Passiflora edulis f flavicarpa in vitro propagationyellow passion fruit
RESUMOA cultura de tecidos tem auxiliado no desenvolvimento
do gecircnero Passiflora alcanccedilando sucesso morfogecircnico emdiferentes explantes in vitro Objetivou-se neste trabalho avaliarrespostas morfogecircnicas in vitro de segmentos de hipocoacutetilo domaracujazeiro coletados de 5 posiccedilotildees (apical sub-apicalmediana sub-basal e basal isto eacute 1-5 respectivamente) ao longodo eixo dos hipocoacutetilos e cultivados em meios com diferentesconcentraccedilotildees de sacarose e expostos a niacuteveis de irradiacircncia Oexperimento foi instalado em blocos casualizados com 15
repeticcedilotildees em esquema fatorial 4 x 4 x 5 (irradiacircncia x sacarose xposiccedilatildeo dos explantes) totalizando 80 tratamentos nos quaistoda parcela experimental foi constituiacuteda de um frasco contendocinco hipocoacutetilos As posiccedilotildees 1 e 3 no extremo distal dossegmentos de hipocoacutetilo cultivados em meio de cultura com 30 gL-1 de sacarose e sob 100 micromol m-2 s-1 de irradiacircncia proporcionamaior nuacutemero de brotos e brotos diferenciados A extremidadedistal dos segmentos de hipocoacutetilo extraiacutedos mais distantes donoacute cotiledonar (posiccedilatildeo 1) cultivados em 20 g L-1 de sacarose eexpostos agrave irradiacircncia de 50 micromol m-2 s-1 resulta na melhorcondiccedilatildeo para o desenvolvimento do broto
Termos para indexaccedilatildeo Passiflora edulis f flavicarpapropagaccedilatildeo in vitro maracujazeiro amarelo
INTRODUCTION
The genus of Passiflora was originated at South
America and comprises more than 580 species most of them
belonging to the Tropical America mainly from Brazil
(OLIVEIRA 1987) Among them the most commercially used
is the passion fruit plant P edulis Sims f flavicarpa Deg
The culture of the tissue has been reaching with
the Passiflora genus answers satisfactory morphogenic in
different in vitro explants (BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1993 1994 MORAN-ROBLES 1979 SCORZA
amp JANICK 1980)
The explant morphogenic capability has
relationship with the polarity effect such factor is
responsible for the shoot emergence Several studies were
researched to assess the effect of the position of the
In vitro organogenesis of passion fruit 63
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
explants extracted from the hypocotyl and roots of Citrus
plantlets during the shoot-bud proliferation (BURGER amp
HACKETT 1986 COSTA et al 2004 DIAS 1998
GARCIA-LUIS et al 1999) as well as the effect of the
polarity in the formation the buds and shoots
(McCLELLAND amp SMITH 1990 YAE et al 1987)
In the in vitro organogenesis of plants of the genus
Passiflora several factors influence among them among
them the irradiance for which different types of explants
were spared for the essays 58 micromol m-2 s-1 in internodes
(MORAN-ROBLES 1979) 20 micromol m-2 s-1 in mesophyll-
derived protoplasts (OTONI et al 1995) 30 or 23 micromol m-
2 s-1 in leaf (KAWATA et al 1995 APPEZZATO-DA-
GLOacuteRIA et al 1999 respectively) 50 micromol m-2 s-1 in
endosperm (MOHAMED et al 1996) 80 30 or 24 micromol m-
2 s-1 in shoot cultures (FARIA amp SEGURA 1997
KURIYAMA et al 1998 BARBOSA et al 2001
respectively) 20-55 micromol m-2 s-1 in cotyledons (HALL et
al 2000) 60 or 54 micromol m-2 s-1 in hipocotyl (COUCEIRO
2002 FELISMINO 2005 respectively) Although different
irradiances have been studied in these works in none of
them the effect of difference irradiances was studied during
the in vitro organogenic process of passion fruit plant
Other important factor for the in vitro
organogenesis is the source of carbon The in vitro
organogenesis works affirm that sucrose has been the most
employed source of carbon in the culture for Passiflora
(APPEZZATO-DA-GLOacuteRIA et al 1999 HALL et al 2000)
its concentration varies from 10 to 30 g L-1
The present work aimed to evaluate the in vitro
morphogenic responses of hypocotyledonary explants of
passion fruit plants throughout the use of different levels
of irradiance sucrose concentration and positions of the
segments of hypocotyls derived from in vitro germinated
plantlets
MATERIALS AND METHODS
Axenic and vigorous etiolated plantlets were
obtained from in vitro germinated seeds and used as
explants sources
In vitro-grown seedlings (25-30 days-old) were
transversally cut into 1-12 cm long were cultured on
different conditions of incubation The explants were
cultured in 300 mL glass flasks (Santa Marina Satildeo Paulo
Brazil) containing 30 mL aliquots of MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) medium salts 100 mg L-1 mio-inositol 10
mg L-1 6-benzylaminopurine (BAP) vitamins of White
(1951) and 80 g L-1 of agar (Isofarreg Brazil) The medium
pH was adjusted to 57 plusmn 01 before the addition of agar
Several concentrations of sucrose (0 10 20 or 30 g L-1)
were added to this medium The culture flasks were sealed
with polypropylene lids and the medium was autoclaved
at 121ordmC 15 kgf cm-2 during 20 minutes
The segments of hypocotyls were cut in five
segments numbered from 1 to 5 follows 1 basal the first
segment adjacent to the root collar 2 sub-apical the
second segment adjacent to the hypocotyl root 3 median
the central segment in relation to the hypocotyl region 4
sub-apical the second segment that is adjacent to the
cotyledonary node 5 - apical the first segment that is
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
Axenic plantlets Segments of hypocotyls in the
medium of culture
DE
PE
FIGURE 1 The segments of hypocotyls numbered from1 to 5 were characterized as follows 1 basal the firstsegment adjacent to the root collar 2 sub-apical thesecond segment adjacent to the hypocotyl root 3 median the central segment in relation to the hypocotylregion 4 sub-apical the second segment that is adjacentto the cotyledonary node 5 - apical the first segment thatis adjacent to the cotyledonary node () ED = distalextremity EP = proximal extremity
ALEXANDRE R S et al64
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
adjacent to the cotyledonary node (Figure 1) In this order
the five hypocotyl explants were placed horizontally on
the media maintaining the proximal extremity towards the
wall of the flask and having the distal extremity facing the
centre of the flask
The flasks were distributed 5 cm far from each other
on the shelves at the growth room to avoid shadowiness
at these flasks The explants were kept at the temperature
of 27 plusmn 2ordmC photoperiod of 168-h lightdark regime and
irradiances of 25 50 100 and 150 micromol m-2 s-1
The irradiance levels were provided by the
utilization of 40 W daylight fluorescent light tubes (Osramreg
Brazil) as follows I - 25 micromol m-2 s-1 (1 light on without
on without dislocating the luminous panel) III - 100 micromol
m-2 s-1 (4 lights on setting the luminous panel at 20 cm
from the shelf surface) IV - 150 micromol m-2 s-1 (5 lights on
setting the luminous panel at 16 cm from the shelf surface)
Copper strings were used to support the fluorescent
incandescent lamps
After 45 days of incubation regeneration frequencies
and number of shoots per explant were assessed which
were formed at the distal and proximal ends The
organogenesis was assessed regarding shoot lengths from
the evaluated positions at the proximal and distal ends
The experiment was performed under complete
randomized blocks design with 15 replicates in a 4 x 4 x 5
factorial scheme (irradiance levels 25 50 100 and 150 igravemol
m-2 s-1 x sucrose concentrations 0 10 20 and 30 g L-1 x
position of the explants at the hypocotyl 1 2 3 4 and 5)
totalizing 80 treatments being the experiment plot
comprised of a flask containing five segments of
hypocotyl Considering the three factors studied were made
by analysis of test average (Tukey) and regression to
concentrations of sucrose and levels of irradiance The
experiments were repeated at least once
RESULTS AND DISCUSSION
In vitro organogenesis at the distal extremity The
differentiation of buds and shoots as influenced by
irradiance levels and distinct positions of explants along
the hypocotyls axis and the mean values and the standard
deviation of the total number of buds and shoots formed
at the distal extremity are shown in figures 2 and 3
respectively
Independently from the other factors at the medium
without sucrose there was no morphogenic response in
the explants (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The number of structures formed at the distal
extremity reached the highest means when there was added
30 g L-1 sucrose to the medium under 100 micromol m-2 s-1
irradiance at the positions 1 and 3 (Figure 3a) Considering
the means of the five explant positions an average of 592
structures per explant was obtained Similarly Couceiro
(2002) has obtained 590 structures per explant at the distal
extremity when cultivating them horizontally under 60 micromol
m-2 s-1 of irradiance in MS medium containing 50 mg L-1 of
BAP and 30 g L-1 of sucrose Garcia-Luis et al (1999) have
shown in Citrange Troyer that despite the explants being
horizontally placed on the medium surface there was an
additional effect of polarity evidenced by the larger number
of shoots differentiated at the apical extremity and the
distance among the cotyledonary node has affected the
morphogenesis These results confirmed the studies of
Ziv et al (1970) and Fari amp Czako (1981) evidencing that
normally in stem and root sections the shoot-buds are
formed at the distal extremity and the roots at the proximal
extremity In the present work structures formed at both
explant extremities but in a higher degree at the distal
extremity
The largest value found for the average length of
the shoot a was 364 mm for the explants that were extracted
farthest from the cotyledonary node (position 1) and
cultured in medium containing 20 g L-1 of sucrose and
submitted to 50 micromol m-2 s-1 of irradiance (Figure 4a)
However in Passiflora actinia the inclusion of auxins to
the medium favoured the development of the shoot-buds
that consequently presented larger lengths when the
hypocotyl segments were cultivated in MS medium
containing 001 mg L-1 de IBA (KOCH et al 2001)
In vitro organogenesis of passion fruit 65
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
In vitro organogenesis at the proximal extremity
The mean values and the standard deviation of the total
number of buds and shoots formed at the proximal extremity
of the explants are presented in Figure 3b Likewise to the
distal extremity the formation of buds and shoots did not
happen when the explants were cultured in medium without
sucrose (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The differentiation and development of the buds
and shoots at the proximal extremity reached the highest
FIGURE 2 In vitro organogenesis in hypocotyl segments that are characterized by the positions that variesfrom 1 to 5 under effect of different irradiance levels A 25 micromol m-2 s-1 B 50 micromol m-2 s-1 C 100 micromol m-2 s-1 andD 150 micromol m-2 s-1 and sucrose concentrations (a 0 b 10 c 20 d 30 g L-1) for 45 days
A 1
2
3
4
5
a
1
2
3
4
5
b 1
2
3
4
5
c 1
2
3
4
5
d
B
a
b
c
d
C
a
b
c
d
D
a
b
c
d
Distal extremity
Proximal extremity
averages (35) at 25 micromol m-2 s-1 of irradiance in MS medium
containing 20 g L-1 sucrose for explants derived from the
position 4 (Figure 3b) Concurrently the work by Baccarin
(1988) pointed out the best bud and shoot proliferation in
explants from the regions closer to the cotyledonary nodes
The presence of BAP in the medium was essential to
the organogenic process as observed in works with Passiflora
spp (BECERRA et al 2004 BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1994 FERNANDO 2005 HALL et al 2000)
ALEXANDRE R S et al66
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Position 1
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 2
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2
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6
8
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25 50 100 150
Nuacutem
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l de
estr
utur
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0
2
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Num
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otal
of e
stru
ture
s
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Nuacutem
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Nuacutem
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l de
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utur
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20
30
Position 2
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Nuacutem
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0
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Nuacutem
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Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
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estr
utur
as
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2
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4
5
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Sucrose
(g L-1)
a
b
FIGURE 3 Mean values and standard deviation of the total number of structures (buds and shoots) formed at thedistal (a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
In vitro organogenesis of passion fruit 67
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
FIGURE 4 Mean values and standard deviation of the lengths of structures (buds and shoots) formed at the distal(a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
Position 1
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 2
0
1
2
3
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25 50 100 150
Com
prim
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brot
os
(mm
)
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0
1
2
3
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25 50 100 150
Leng
th o
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ots
(mm
)
Position 4
0
1
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25 50 100 150
Com
prim
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brot
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Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
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brot
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1
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Com
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brot
os(m
m)
10
20
30
Position 2
0
1
2
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25 50 100 150
Com
prim
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brot
os(m
m)
Position 3
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
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brot
os
(mm
)
Position 4
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
o (m
m)
Position 5
0
1
2
3
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Sucrose
(g L-1)
a
b
ALEXANDRE R S et al68
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Independently from the irradiance levels different
sucrose concentrations and explant positions at the
hypocotyl the shoot elongation was considered to be
lower (Figure 4b) than the minimum recommended
(approximately 2-3 cm) for the in vitro rooting process It
highlights the need of previous submission of the explants
to an adequate medium for the elongation process
CONCLUSIONS
The morphogenic response for bud and shoot
formation was remarkably superior at the distal extremity
The maximum concentration among the sucrose
and the irradiance of 100 micromol m-2 s-1 has proportioned
better morphogenic responses at the distal extremity
regardless the position of the explants
The buds and shoots differentiated at the distal
extremity farthest to the cotyledonary node developed
better under 50 micromol m-2 s-1 of irradiance in medium
supplemented with 20 g L-1 sucrose
The use of a carbon source is essential for in vitro
morphogenesis
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
(Recebido em 15 de maio de 2008 e aprovado em 2 de setembro de 2008)
AVALIACcedilAtildeO DE SUBSTRATOS NA PRODUCcedilAtildeO DE MUDASDO ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL [Ananaacutes comosus (L) Merr
var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] EM CONDICcedilOtildeESDE CASA DE VEGETACcedilAtildeO
SUBSTRATES EVALUATION FOR PRODUCTION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE[Ananas comosus (L) Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] PLANTS
UNDER GREENHOUSE CONDITIONS
FRANCISCO NUNES DA CUNHA FILHO1 ANTONIO CARLOS TORRES1 JOAtildeO MARIA CHARCHAR1
1Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF francisconunescnphembrapabr torrescnphembrapabr
RESUMOA utilizaccedilatildeo de substratos na aclimataccedilatildeo de mudas
micropropagadas oferece consideraacutevel vantagem no custo e napossibilidade de obtenccedilatildeo de alta porcentagem de sobrevivecircnciados propaacutegulos ex vitro aliado agrave obtenccedilatildeo de mudas maisuniformes vigorosas precoces e com alta qualidade fitossanitaacuteriaAvaliaram-se quatro diferentes tipos de substratos (fibra de cococomercial fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxe substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas) na aclimataccedilatildeode mudas do abacaxizeiro ornamental As variaacuteveis massa frescatotal massa fresca da parte aeacuterea massa fresca de raiacutezescomprimento de raiacutezes altura de plantas e nuacutemero total de folhasforam avaliadas O delineamento experimental utilizado foi ointeiramente casualizado com quatro tratamentos e com quatrorepeticcedilotildees Pela anaacutelise dos resultados o substrato padronizadoda Embrapa Hortaliccedilas o de fibra de coco comercial e o Plantmaxforam os mais eficientes na produccedilatildeo de mudas de abacaxizeiroornamental para fins comerciais O substrato de coco-verde daEmbrapa Hortaliccedilas foi o menos indicado
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatus plantaornamental substrato
ABSTRACTThe use of substrate in the acclimatization of
micropropagated plants offers considerable cost advantages andthe possibility to obtain high percentage of ex vitro survivingplants as well as in the production of uniform vigorous precociousand healthy plants Four different substrates (commercial coconutfiber green-coconut fiber from Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxand the standardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas) wereevaluated for acclimatization of ornamental pineapple plantsTotal fresh mass fresh mass of shoots fresh mass of roots rootlength plant height and total number of leaves were obtainedThe experiment followed a complete randomized design withfour treatments and four replicates The results showed that thestandardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas commercialcoconut fiber and Plantmax were the most efficient for theproduction of ornamental pineapple plants for commercialpurpose Green-coconut fiber substrate from Embrapa was lessindicated
Index terms Ananas comosus var bracteatus ornamental plantgrowth substrate
INTRODUCcedilAtildeO
Os abacaxizeiros ornamentais apresentam flores e
infrutescecircncias de beleza atrativa muito usadas em arranjos
decorativos e ornamentais no Brasil e exterior
representando um segmento de grande potencial para
exportaccedilatildeo (CABRAL 2000 SOUZA et al 2004) No
comeacutercio de flores nativas o abacaxi ornamental jaacute obteve
valores agregados da ordem de 5000 em relaccedilatildeo ao
abacaxi de fruta natildeo ornamental (SOUZA et al 2004)
A propagaccedilatildeo vegetativa do abacaxizeiro ornamental
para fins de comercializaccedilatildeo eacute feita por mudas oriundas da
planta-matildee Poreacutem essa propagaccedilatildeo apresenta o
inconveniente de disseminar agentes patogecircnicos e pragas
pela utilizaccedilatildeo de mudas contaminadas Dentre os patoacutegenos
e pragas mais comuns destacam-se o fungo Fusarium
subglutinans (Wollenw amp Reinking) PE Nelson (TOUSSON
amp MARASAS 1983) e a cochonilha Dysmicoccus brevipes
turfa casca curtida de eucalipto ou Pinus palha de arroz
carbonizada poacute de carvatildeo (GRATTAPAGLIA amp
MACHADO 1998) casca de arroz carbonizada poacute de
casca de coco seco e verde (SANTOS et al 2006) mistura
de areiaxaximhuacutemus (SOUZA JUNIOR et al 2001) solo
esterco bovino Plantmax e composto orgacircnico em
diferentes proporccedilotildees (MOREIRA et al 2006) dentre
outros Entretanto para o genoacutetipo em estudo as
tecnologias disponiacuteveis necessitam de adequaccedilatildeo para
serem mais eficientes e de baixo custo na produccedilatildeo
comercial de mudas
Objetivou-se neste trabalho avaliar quatro
diferentes substratos na produccedilatildeo de mudas do
abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L) Merr var
bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] para fins comerciais
utilizando-se propaacutegulos produzidos in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
Produccedilatildeo de mudas in vitro
Foram utilizados como fonte de explantes
propaacutegulos produzidos in vitro subcultivados a cada 60
dias utilizando-se o meacutetodo proposto por Correia et al
(1999) Os explantes consistiram de brotaccedilotildees com 2 cm de
comprimento transferidos para meio baacutesico de cultura
contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 3 de sacarose e em mg L-1 incluiacuteram-
se i-inositol 100 tiaminaHCl 02 aacutecido nicotiacutenico 005
piridoxinaHCl 005 e glicina 02 O meio de cultura foi
solidificado com 06 de aacutegar e o pH do meio foi ajustado
para 57 O meio foi distribuiacutedo em tubos de ensaio de 25 x
150 mm na quantidade de 125 mL por tubo
Os tubos foram esterilizados em autoclave a 121ordmC
e a 104 Kpa de pressatildeo por 15 minutos Apoacutes a inoculaccedilatildeo
as culturas foram mantidas em cacircmara de crescimento com
fotoperiacuteodo de 16 horas irradiacircncia de 32 mmol m-2 s-1
temperatura de 27oC durante 30 dias
As mudas foram preacute-aclimatizadas mediante
abertura das tampas dos frascos de cultura cinco dias
antes do transplantio para os respectivos substratos
Transplante e desenvolvimento de mudas micropropagadas
Mudas enraizadas e preacute-aclimatizadas de
abacaxizeiro ornamental foram retiradas dos tubos de
cultura e transplantadas em bandejas de isopor com 72
ceacutelulas contendo quatro diferentes substratos utilizados
como tratamentos 1) substrato comercial de fibra de coco
2) substrato de fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas
3) substrato Plantmax e 4) substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas composto por solo de cerrado areia
lavada esterco de gado curtido e palha de arroz
carbonizada em proporccedilotildees de 3111 vv com adiccedilatildeo de
300 g de calcaacuterio dolomiacutetico e de 300 g da formulaccedilatildeo 4-
30-16
Apenas 30 ceacutelulas por bandeja foram
transplantadas com mudas de abacaxizeiro ornamental (uma
muda por ceacutelula) deixando-se 42 ceacutelulas livres (sem planta)
para que natildeo houvesse competiccedilatildeo entre plantas nas
bandejas As bandejas permaneceram cobertas com
envoltoacuterio plaacutestico nos primeiros trecircs dias apoacutes o
transplante
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado com 10 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca
de raiz e tamanho de raiz e 30 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
altura e nuacutemero de folhas Os dados foram coletados aos
90 dias apoacutes o transplantio A anaacutelise de variacircncia do
experimento foi realizada com o auxiacutelio do programa
estatiacutestico SAS Institute Inc (SAS INSTITUTE 1988) e a
CUNHA FILHO F N da et al72
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
diferenciaccedilatildeo de meacutedias pelo teste de Tukey p 001 e
p 005
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
A anaacutelise conjunta do experimento indicou que
existiu homogeneidade de variacircncia natildeo sendo necessaacuteria
a transformaccedilatildeo de dados para a realizaccedilatildeo das anaacutelises A
anaacutelise de variacircncia (Tabelas 1 e 2) indicou que houve
efeito significativo dos diferentes substratos (teste de
Tukey p 005) sobre a massa fresca total massa fresca da
parte aeacuterea altura de plantas e nuacutemero total de folhas e
que natildeo houve diferenccedila significativa entre os diferentes
substratos com relaccedilatildeo agrave massa fresca de raiacutezes e o
comprimento de raiacutezes (Figuras 1 A-F)
Embora natildeo tenha havido diferenccedila significativa
(teste de Tukey p 005) entre os valores de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea nos tratamentos com
os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
comercial de fibra de coco e o Plantmax os valores
absolutos mais elevados desses paracircmetros foram obtidos
com o substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
(Figuras 1 A-B)
No substrato de fibra de coco-verde da Embrapa
Hortaliccedilas as plantas de abacaxizeiro ornamental tiveram
sempre pior performance em produccedilatildeo de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea natildeo se diferenciando
estatisticamente dos valores obtidos com o uso dos
substratos comerciais da Plantmax e de fibra de coco
Entretanto esses substratos foram significativamente
inferiores (teste de Tukey p 005) em relaccedilatildeo aos valores
obtidos com o uso do substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas (Figuras 1 A-B)
Os valores obtidos para as variaacuteveis massa fresca
de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes natildeo diferiram
estatisticamente entre si (teste de Tukey p 005) em
relaccedilatildeo aos quatro tratamentos (substratos analisados)
Os maiores valores absolutos dessas variaacuteveis foram obtidos
para a massa fresca de raiacutezes no substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e para o comprimento de raiacutezes no
substrato comercial de fibra de coco (Figuras 1 C-D)
TABELA 1 Resumo da anaacutelise de variacircncia para massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca deraiacutezes e comprimento de raiacutezes de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio
Fontes de variaccedilatildeo GL Massa fresca total
Massa fresca
da parte aeacuterea Massa fresca
de raiacutezes Comprimento
de raiacutezes
Tipo de substrato 03 673536 518934 02201ns 22382ns
Resiacuteduo 36 115108 80557 01328 13107
Total 39 - - - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade (ns) natildeo significativo
TABELA 2 Resumo da anaacutelise de variacircncia para altura e nuacutemero de folhas de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio Fontes de variaccedilatildeo GL
Altura de plantas Nuacutemero total de folhas
Tipo de substrato 003 1424357 526854
Resiacuteduo 124 50188 16807
Total 127 - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas 73
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
FIGURA 1 Variaacuteveis avaliadas na determinaccedilatildeo de eficiecircncia dos substratos Plantmax Embrapa Hortaliccedilas fibra decoco e fibra de coco-verde na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental -em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo A)massa fresca total B) massa fresca da parte aeacuterea C) massa fresca de raiacutezes D) comprimento de raiacutezes E) altura deplantas e F) nuacutemero total de folhas Meacutedias seguidas da mesma letra natildeo diferem significativamente entre si pelo testede Tukey Plt005
3653+b 0688
7459+ab 1414
9894+a 1229
6254+ab 0789
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a to
tal (
g)
A
3421+b 0664
6822+ab 1152
8930+a 0933
6002+ab 0763
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax Embrapa Hortaliccedilas Fibra de coco Fibra de coco verde
Tipo de substratos
Mas
sa fr
sca
da p
arte
aeacuter
ea (
g)
B
0568 + 0178 a
0298 + 0007 a0363 + 0120 a
0222 + 0039 a
0
02
04
06
08
1
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a de
rai
zes
(g)
C
12000 + 0338 a
12800 + 0387 a
11690 + 0468 a12020 + 0204 a
10
11
12
13
14
15
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Com
prim
ento
de
raiz
es (c
m)
D
11789 + 0412 a13800 + 0406 b
11088 + 0381 a
8797 + 0385 c
02468
1012141618
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Alt
ura
de p
lant
as (c
m)
E
5882 + 0173 c
7727 + 0191 b8818 + 0259 a
8143 + 0294 ab
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Nuacutem
ero
tota
l de
folh
as
F
Houve diferenccedila significativa (teste de Tukey
p 005) entre os valores meacutedios obtidos para a altura de
plantas e para o nuacutemero total de folhas nos quatro
tratamentos avaliados As plantas tiveram
significativamente maior desenvolvimento em altura no
substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas Natildeo houve
diferenccedila significativa entre os valores meacutedios em altura
de plantas nos substratos comerciais da Plantmax e de
fibra de coco Esses poreacutem foram diferentes dos valores
obtidos no substrato de fibra de coco-verde que
proporcionou significativamente o menor crescimento das
plantas (Figura 1 E)
Maiores meacutedias da variaacutevel nuacutemero total de folhas
foram obtidas com a utilizaccedilatildeo do substrato padronizado
CUNHA FILHO F N da et al74
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
da Embrapa Hortaliccedilas e do Plantmax Natildeo houve diferenccedila
significativa entre os valores meacutedios do nuacutemero total de
folhas nos substratos Plantmax e de fibra de coco comercial
mas esses diferiram estatisticamente dos obtidos no
substrato fibra de coco-verde O substrato de fibra de coco-
verde foi o que propiciou os menores valores da variaacutevel
nuacutemero total de folhas (Figura 1 F) Esses resultados
contradizem os relatados por Carrijo et al (2002) que
verificaram que os substratos contendo fibra de coco-verde
satildeo os mais indicados para produccedilatildeo de mudas de
hortaliccedilas e ornamentais em cultivo sem solo Correia et al
(2003) natildeo observaram diferenccedila significativa entre os
valores da massa fresca de raiacutezes de mudas de cajueiro
anatildeo precoce crescidas em substratos com adiccedilatildeo de poacute
de coco-verde ou de poacute de coco-maduro Santos et al
(2006) relataram que os substratos orgacircnicos contendo as
combinaccedilotildees de fibras de coco seco ou verde
proporcionaram baixo desenvolvimento na aclimatizaccedilatildeo
de mudas Heliconia rostrata Ruiz amp Pav provenientes
da micropropagaccedilatildeo Poreacutem Bezerra et al (2001) discordam
dos autores acima mencionados informando que os
substratos contendo fibras de coco-verde ou seco foram
os mais indicados respectivamente para o enraizamento
de mudas de crisacircntemo (Chrysanthemum sp) e de violeta
africana (Saintpaulia ionantha H Wendl)
Tambeacutem substrato contendo casca de arroz
carbonizada tem sido utilizado na produccedilatildeo de mudas
micropropagadas Weber et al (2003) relataram que o
substrato contendo esse componente misturado com
vermiculita e vermicomposto em proporccedilotildees de 111 foi a
melhor opccedilatildeo para aclimataccedilatildeo de mudas de abacaxizeiro
ornamental oriundas da cultura in vitro e transplantadas
para tubetes Esses autores ainda observaram que o uso
da mistura contendo casca de arroz carbonizada e poacute de
casca de coco em proporccedilotildees de 11 resultou em baixo
desempenho de mudas do abacaxizeiro ornamental em
funccedilatildeo da maacute agregaccedilatildeo fiacutesica baixa retenccedilatildeo de aacutegua e
limitaccedilatildeo nutricional da planta
Neste trabalho os resultados com o uso de substrato
contendo casca de arroz carbonizada sem a presenccedila de
fibras de coco seco ou verde tambeacutem proporcionou
excelente desenvolvimento de mudas do abacaxizeiro
ornamental o que indica uma provaacutevel incompatibilidade
das fibras de coco com outros componentes de substratos
na produccedilatildeo de mudas dessa ornamental
Natildeo houve diferenccedila significativa entre valores de
massa fresca de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes de
abacaxizeiro ornamental em relaccedilatildeo aos quatro substratos
analisados Poreacutem o maior valor absoluto em massa fresca
de raiacutezes foi obtido no substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas enquanto que o maior valor em comprimento
de raiacutezes no substrato comercial de fibra de coco
Com relaccedilatildeo agraves demais variaacuteveis analisadas
observou-se que a massa fresca total e a massa fresca da
parte aeacuterea tiveram performances mais significativas nos
substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas comercial
de fibra de coco e o da Plantmax enquanto que a altura de
plantas foi significativamente mais elevada no substrato
padronizado da Embrapa Hortaliccedilas e o nuacutemero total de
folhas mais significativo nos substratos padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e o Plantmax
CONCLUSOtildeES
Os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
fibra de coco comercial e o da Plantmax satildeo os mais
indicados para a produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro
ornamental para fins comerciais
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) as bolsas concedidas
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SANTOS M do D M dos et al76
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(Recebido em 8 de abril de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFEITO DE ISOPENTENILADENINA POR QUATROSUBCULTIVOS NA MULTIPLICACcedilAtildeO DE BROTACcedilOtildeES
DE ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL IN VITRO
EFFECT OF ISOPENTENYL ADENINE IN FOUR SUBCULTURES DURING THEIN VITRO MULTIPLICATION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE SHOOT
MARIA DO DESTERRO MENDES DOS SANTOS1 JOSEacute GETUacuteLIO DA SILVA FILHO2ANTONIO CARLOS TORRES3
1Bioacuteloga MSc em Botacircnica Departamento de Botacircnica Universidade de BrasiacuteliaUnB Cx P 4457 709190-970 Brasiacutelia DF mariacnphembrapabr2Engenheiro Agrocircnomo Especialista em Biotecnologia de Plantas Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF jgetuliocnphembrapabr3Engenheiro Agrocircnomo Embrapa Hortaliccedilas CxP 218 70359-970 Brasiacutelia DF
RESUMOObjetivou-se no presente trabalho foi o de avaliar o
efeito da adiccedilatildeo de concentraccedilotildees de 2iP em diferentes subcultivosna micropropagaccedilatildeo do abacaxizeiro ornamental var bracteatusBrotaccedilotildees com aproximadamente 10 cm de tamanho oriundosda cultura in vitro foram utilizados como explantes Os explantesforam inoculados em meio baacutesico liquido contendo sais mineraisMS 3 sacarose e em mg L-1 i-inositol 100 tiaminaHCl 01piridoxina HCl 05 aacutecido nicotiacutenico 005 glicina 20 formulaccedilatildeoliacutequida A esse meio foram adicionados concentraccedilotildees de 2iP(00 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro subcultivos(30 60 90 e 120 dias) Maacuteximo nuacutemero de brotaccedilotildees por explante(139) foi obtido em meio baacutesico com 16 mg L-1 de 2iP e no quartosubcultivo aos 120 dias Apoacutes a transferecircncia de brotaccedilotildeesindividualizadas para meio contendo ANA (00 05 10 15 2025 30 e 40 mg L-1) verificou-se a diferenciaccedilatildeo de raiacutezesadventiacutecias na porccedilatildeo basilar dos explantes
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatusmicropropagaccedilatildeo cultivo in vitro
ABSTRACTThe objective of this work was to evaluate the effect of
2iP addition in different subcultures during the micropropagationof ornamental pineapple var bracteatus Shoots with 10 cm inlength originated from in vitro culture were used as explantsThe explants were inoculated in liquid basal medium containingMS salts 3 sucrose 100 mg L-1 i-inositol 01 mg L-1
thiamineHCl 05 mg L-1 pyridoxineHCl 005 mg L-1 nicotinicacid and 20 mg L-1 glycine Different concentrations of 2iP (0005 10 and 20 mg L-1) in combination with four subcultures (3060 90 e 120 days) were used Maximum number of shoot formedper explant (139) was observed in basal medium with 16 mg L-1
2iP at the fourth subculture (120 days) After transferringindividual shoots to medium containing different concentrationsof NAA (00 05 10 15 20 25 30 and 40 mg L-1) mediaadventitious root formed in the basal portion of the explants
Index terms Ananas comosus var bracteatus micropropagationin vitro culture
INTRODUCcedilAtildeO
O abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L)
Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] eacute uma
planta de propagaccedilatildeo vegetativa com grande potencial
ornamental (D EECKENBRUGGE amp LEAL 2003) A
qualidade fitossanitaacuteria do campo de produccedilatildeo dessa
espeacutecie depende do material utilizado para sua propagaccedilatildeo
Assim sendo pode haver acuacutemulo entre plantios
sucessivos de patoacutegenos que satildeo transmitidos de um ciclo
de produccedilatildeo a outro via mudas contaminadas A
micropropagaccedilatildeo em larga escala de mudas sadias via
cultura de tecidos eacute uma estrateacutegia que possibilita
contornar a limitaccedilatildeo de mudas com alta qualidade
fitossanitaacuteria principalmente isentas de fusariose
(REINHARDT amp CUNHA 1999)
Em espeacutecies do gecircnero Ananaacutes os explantes mais
utilizados satildeo as gemas axilares das mudas do tipo coroa
ou filhote embora outros tipos de mudas possam ser usadas
A vantagem do uso de gemas axilares incluem boa
sobrevivecircncia em meio de cultura e com a quebra da
dominacircncia apical do broto haacute estiacutemulo para a formaccedilatildeo de
gemas muacuteltiplas (DREW 1980) A adiccedilatildeo de
fitorreguladores em geral eacute necessaacuteria para suprir as
possiacuteveis deficiecircncias dos niacuteveis endoacutegenos de hormocircnios
nos explantes in vitro Assim sendo recomenda-se a
combinaccedilatildeo de uma auxina com uma citocinina (SKOOG amp
MILLER 1957) Em geral a benzilaminopurina (BAP)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 77
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(ALMEIDA et al 2002 BARBOZA et al 2001 BE amp
DEBERG 2006) ou essa substacircncia em combinaccedilatildeo auxina
e aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (COSTA amp ZAFFARI 2005
GUERRA et al 1999) tecircm sido a(s) substacircncia(s)
reguladora(s) de crescimento mais usada(s) na formaccedilatildeo
de brotaccedilotildees de Ananas sp Entretanto em abacaxizeiro
ornamental a inclusatildeo de BAP no meio pode induzir o
aparecimento de variaccedilotildees somaclonais (RODRIGUES et
al 2007 SANTOS et al 2008) Tambeacutem a combinaccedilatildeo de
cinetina ANA e AIB (aacutecido indolbutiacuterico) foi empregada
para proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees em abacaxizeiro (KISS et
al 1995 MATHEWS amp RANGAN 1979)
Dada a escassez de informaccedilotildees sobre o efeito de
isopenteniladenina (2iP) na propagaccedilatildeo in vitro de espeacutecies
do gecircnero Ananas neste trabalho procurou-se otimizar a
concentraccedilatildeo de 2iP na produccedilatildeo de brotaccedilotildees de
abacaxizeiro ornamental em diferentes subcultivos e seu
subsequumlente enraizamento
MATERIAL E MEacuteTODOS
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Brotaccedilotildees
individualizadas com aproximadamente 1 cm de
comprimento estabelecidas a partir da cultura de gemas
axilares de mudas tipo coroa foram utilizadas como fonte
de explantes Os explantes foram cultivados em meio baacutesico
liacutequido contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) 3 sacarose e em mg L-1 tiaminaHCl 01
piridoxinaHCl 005 aacutecido nicotiacutenico 005 e glicina 20
(SANTOS 2008) O delineamento experimental empregado
foi o inteiramente ao acaso em esquema fatorial 4x4
referentes concentraccedilotildees de 2iP e subcultivos Ao meio
baacutesico foram adicionadas quatro concentraccedilotildees de BAP
(0 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro
subcultivos (30 60 90 e 120 dias) O pH dos meios foi
ajustado a 57 Foram utilizadas nove repeticcedilotildees por
tratamento sendo que cada parcela foi constituiacuteda por um
explante Inicialmente os explantes foram inoculados em
frascos de 250 mL de capacidade com 40mL de meio No
segundo subcultivo os propaacutegulos foram transferidos para
frascos idecircnticos com meio receacutem-preparado No terceiro
e quarto subcultivos foram utilizados frascos de 1000 mL
com 100 mL de meio As culturas foram mantidas em sala
de crescimento sob fotoperiacutedo de 16 horas com densidade
de fluxo de foacutetons de 32 mmol m-2 s-1 a 27plusmn2oC Em cada
subcultivo foi determinado o nuacutemero e a massa de mateacuteria
fresca das brotaccedilotildees formadas por explante inoculado
Os dados foram transformados para 1X e as
anaacutelises estatiacutestica foram realizadas com o auxiacutelio dos
programas SASStat e SISVAR versatildeo 301 Aplicou-se a
anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo grau para
avaliar o efeito da concentraccedilatildeo de 2iP sobre o nuacutemero e
massa da mateacuteria fresca de brotaccedilotildees em cada subcultivo
Enraizamento das brotaccedilotildees Foram utilizadas
brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental regeneradas in vitro
Os explantes com 10 a 20 cm de comprimento foram
inoculados em tubos de ensaio (25x150 mm) com 20 ml de
meio baacutesico 07 de aacutegar suplementado com diferentes
concentraccedilotildees de aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (00 05
10 15 20 25 30 e 40 mg L-1)
Apoacutes inoculaccedilatildeo as culturas foram mantidas em
cacircmara de crescimento nas condiccedilotildees descritas
anteriormente Apoacutes 30 dias da inoculaccedilatildeo foram avaliados
a percentagem de brotaccedilotildees enraizadas nuacutemero e massa
fresca das raiacutezes desenvolvida por brotaccedilatildeo altura da
planta e massa da mateacuteria fresca da parte aeacuterea O
delineamento experimental foi inteiramente casualizado com
29 repeticcedilotildees Cada parcela foi constituiacuteda de um tubo de
ensaio com um explante
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos programas SASStat e SISVAR versatildeo 301
Aplicou-se a anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo
grau para avaliar a variaccedilatildeo das variaacuteveis em funccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de ANA
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Na proliferaccedilatildeo de
brotaccedilotildees observou-se que os fatores concentraccedilatildeo de
2iP e o subcultivo isoladamente e em interaccedilatildeo afetam
significativamente (P 005) as variaacuteveis nuacutemero e massa
da mateacuteria fresca das brotaccedilotildees formadas A equaccedilatildeo que
SANTOS M do D M dos et al78
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
melhor se ajustou para explicar o efeito de 2iP nos diferentes
subcultivos para a variaacutevel nuacutemero de brotaccedilotildees foi a de
segundo grau (Figuras 1 e 2) A multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees
de abacaxizeiro ornamental in vitro eacute dependente de 2iP
no meio de cultura O nuacutemero de brotaccedilotildees por explante
responsivo de tamanho maior que 05 cm de comprimento
foi pequeno na primeira subcultura (30 dias) em todas as
concentraccedilotildees de 2iP testadas aumentando-se nos demais
subcultivos Aos 30 60 90 e 120 dias estimou-se que a
concentraccedilatildeo de 16 mg L-1 de 2iP produziu o maacuteximo de
brotaccedilotildees por explante inoculado respectivamente 20 42
64 e 139 (Figuras 1 e 2) Esses resultados estatildeo em
consonacircncia com a importacircncia da citocinina em vaacuterios
aspectos do crescimento e desenvolvimento da planta
tais como divisatildeo celular (SKOOG amp MILLER 1957) quebra
da dominacircncia apical e desenvolvimento das gemas laterais
(SACHS amp THIMMAN 1964) induccedilatildeo e multiplicaccedilatildeo de
brotaccedilotildees in vitro (GRATTAPAGLIA amp MACHADO
1998 JOSHI amp DHAWAN 2007 MURASHIGE 1974)
Tambeacutem o tipo de citocinina e a sua concentraccedilatildeo satildeo
determinantes no processo de micropropagaccedilatildeo
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998 MURASHIGE
1974) Em Ananas sp o BAP tem sido preferencialmente
usado na proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees in vitro (ALMEIDA
1994 ALMEIDA et al 2002 CRUZ 2000 ESCALONA et
al 1999 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
GUERRA et al 1999 MATHEWS et al 1976) Entretanto
Kiss et al (1995) relataram que tanto o BAP quanto a
cinetina foram efetivos para formaccedilatildeo de brotaccedilotildees em
abacaxizeiro comercial No presente trabalho o 2iP foi
adicionado ao meio devido a sua maior atividade bioloacutegica
comparada com o BAP e a cinetina (MURASHIGE 1974)
Tambeacutem para a variaacutevel massa da mateacuteria fresca
foi constatada a resposta quadraacutetica das doses de 2iP
(Figuras 3 e 4) Pelas equaccedilotildees de regressatildeo infere-se
que o 2iP estimula o acuacutemulo de massa fresca nas
brotaccedilotildees com o maacuteximo obtido com a concentraccedilatildeo de
18 mgL-1 desse fator nos subcultivos de 30 60 e 120 dias
com a produccedilatildeo de respectivamente 9 17 e 77 g por
explante inoculado No terceiro subcultivo aos 90 dias a
concentraccedilatildeo de 17 gL-1 de 2iP produziu o total de
biomassa de 45 g por explante Essa observaccedilatildeo estaacute em
concordacircncia com os trabalhos do efeito beneacutefico de
citocininas na produccedilatildeo de parte aeacuterea ateacute uma
concentraccedilatildeo oacutetima acima da qual seu excesso eacute inibitoacuterio
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1988)
FIGURA 1 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
y)dias 60(14585x = -247661x + 31353 +
R 20999 =
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e bo
taccedilotilde
es p
or
expl
ante
s
30 dias
60 dias
y (60 dias) = 14585x2 - 47661x + 31353
R2 = 0999
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 79
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 2 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
FIGURA 3 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
FIGURA 4 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa mateacuteria fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
y)dias 90(22847x = -2 73196x + 55784
R209477 =
y)dias 120(5072x = -21623x + 9464 +
R20954 =
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero m
eacutedio
de
brot
accedilatildeo
por
expl
ante
90 dias
120 dias
y (120 dias) = 50725x2 - 1623x + 9464
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
R2 = 0954
y(60 dias) = -38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (
g)
30 dias
60 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (60 dias) = - 38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
y)dias 90(12255x = -243239x + 75847 +
R209717 =
y)dias 120(19075x = -271029x + 11295 +
R2096 =
0
10
2030
40
50
6070
80
90
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (g
)
90 dias
120 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (120 dias) = 19075x2 - 71029x + 11295
R2 = 096
y (90 dias) = 12255x2 - 43239x + 75847R2 = 09717
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e br
otaccedil
atildeo p
or e
xpla
nte
SANTOS M do D M dos et al80
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
Enraizamento das brotaccedilotildees A induccedilatildeo
emergecircncia e alongamento das raiacutezes ocorreram em todos
os tratamentos Em meio sem regulador de crescimento
os propaacutegulos apresentaram raiacutezes desenvolvendo-se
de maneira pontual na extremidade seccionada dos
explantes (Figura 5) Em meio com ANA as raiacutezes
desenvolveram-se na porccedilatildeo basilar dos propaacutegulos em
forma de roseta Em geral a auxina eacute utilizada na fase de
enraizamento de propaacutegulos oriundos da cultura in vitro
de Ananas (BARBOZA et al 2004 CORREIA et al
2000 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
PRAXEDES et al 2001 TENG 1997) Entretanto o
enraizamento pode ser feito em meio sem regulador de
crescimento (KISS et al 1995 ZEPEDA amp SAGAWA
1981) A utilizaccedilatildeo de uma auxina na fase de enraizamento
induz agrave formaccedilatildeo de um sistema radicular mais
pronunciado que facilitaraacute a fase de aclimataccedilatildeo (Figura
5) Observou-se que a concentraccedilatildeo de ANA afetou
significativamente (P 005) o nuacutemero de raiacutezes massa
fresca das raiacutezes e da parte aeacuterea A altura da planta natildeo
foi afetada pela concentraccedilatildeo de ANA sendo o valor
de F natildeo significativo
Constatou-se uma relaccedilatildeo quadraacutetica entre as
variaacuteveis nuacutemero e massa da mateacuteria fresca das raiacutezes e da
parte aeacuterea e a concentraccedilatildeo de ANA A estimativa da
proliferaccedilatildeo de raiacutezes baseando-se no nuacutemero de raiacutezes
por explante aumentou com a concentraccedilatildeo de ANA
atingindo um maacuteximo de 119 com 22 mg L-1 de ANA
Concentraccedilotildees acima de 22 mg L-1 tendem a apresentar
um efeito inibitoacuterio na produccedilatildeo de raiacutezes (Figura 6)
Tambeacutem a massa da mateacuteria fresca das raiacutezes aumentou
com a concentraccedilatildeo de ANA com um maacuteximo de 023 g
obtida com a concentraccedilatildeo de 24 mg L-1 de ANA (Figura
7) Essa tendecircncia foi observada para a massa fresca da
parte aeacuterea onde a estimativa maacutexima da produccedilatildeo de
biomassa foi de 046 g por explante em meio com 19 mg L-1
de ANA (Figura 8)
Com relaccedilatildeo agrave altura das plantas natildeo houve
diferenccedila significativa entre as diferentes concentraccedilotildees
de ANA e essa variaacutevel
FIGURA 5 Brotaccedilotildees enraizadas em meio MS contendo diferentes concentraccedilotildees de ANA (mg L-1) aos 30 dias apoacutesa inoculaccedilatildeo
00 05 10 15 20 25 30 40
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 81
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 6 Variaccedilatildeo do nuacutemero de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 7 Variaccedilatildeo na massa da mateacuteria fresca de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 8 Variaccedilatildeo da massa de mateacuteria fresca da parte aeacuterea por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
y = -1202x2 + 5291x + 61504
R2 = 06865
0
2
4
6
8
10
12
14
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Nordm
de r
aiacuteze
s
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00282x2 + 01359x + 00704
R2 = 07573
0
005
01
015
02
025
03
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Mas
sa fr
esca
das
raiacutez
es
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00363x2 + 01407x + 03255
R2 = 0857
0
01
02
03
04
05
06
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Mas
sa fr
esca
da
part
e aeacute
rea
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
SANTOS M do D M dos et al82
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
CONCLUSOtildeES
No meio liacutequido contendo MS vitaminas 3 de
sacarose e 16 mg L-1 de 2iP obteacutem-se uma estimativa meacutedia
de 139 brotaccedilotildees por explante inoculado no final do quarto
subcultivo (120 dias)
Maior nuacutemero de raiacutezes adventiacutecias por explante eacute
estimado com a concentraccedilatildeo de 22 mg L-1 de ANA
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) pelas bolsas concedidas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
(Recebido em 25 de marccedilo de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFICIEcircNCIA FOTOQUIacuteMICA E CARACTERIacuteSTICAS DECRESCIMENTO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR (Saccharum officinarum L)CULTIVADA IN VITRO EM DIFERENTES CONCENTRACcedilOtildeES DE
SACAROSE E QUALIDADE DE LUZ
PHOTOCHEMICAL EFFICIENCY AND GROWTH CHARACTERISTICS OF SUGARCANE (Saccharum officinarum L) PLANTS CULTIVATED IN VITRO UNDER
DIFFERENT SUCROSE CONCENTRATIONS AND LIGHT QUALITY
1Bioacuteloga Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000 28015-620
Campos dos Goytacazes RJ georgiabecharayahoocombr2Engenheiro Agrocircnomo Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA
Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000
28015-620 Campos dos Goytacazes RJ alenauenfbr crespouenfbr campostuenfbr
RESUMODentre os diversos produtos agriacutecolas cultivados no
Estado do Rio de Janeiro a cana-de-accediluacutecar (Saccharumofficinarum L) eacute a cultura de maior importacircncia econocircmicaDiante dessa importacircncia na regiatildeo fluminense torna-senecessaacuteria cada vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividadedessa espeacutecie A produccedilatildeo em escala comercial de plantas decana-de-accediluacutecar pode ser beneficiada pela obtenccedilatildeo de mudas dealta qualidade e homogeneidade em curtos periacuteodos de tempo oque pode ocorrer pelo uso da micropropagaccedilatildeo A presenccedila decarboidrato eacute essencial para o enraizamento de muitas espeacuteciesin vitro sendo a sacarose o accediluacutecar mais utilizado namicropropagaccedilatildeo Poreacutem a necessidade desse composto nomeio de cultivo vem sendo discutida por alguns autoresObjetivou-se neste trabalho verificar o efeito da concentraccedilatildeode sacarose no meio de cultivo e a qualidade da luz sobre acapacidade fotossinteacutetica e as caracteriacutesticas de crescimentoem plantas de cana de accediluacutecar cultivadas in vitro Para tanto foiquantificada a emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila determinadaa massa seca de raiz e da parte aeacuterea a massa foliar especiacutefica eestimada a concentraccedilatildeo de clorofilas Os resultados obtidosmostraram que em cana de accediluacutecar cultivada in vitro em frascosfechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de sacarose no meio decultivo promoveu aumentos na mateacuteria seca da parte aeacuterea e daraiz na massa foliar especiacutefica e na intensidade de cor verde dasfolhas estudadas Natildeo houve modificaccedilatildeo na capacidadefotoquiacutemica maacutexima do PSII A justificativa para o natildeo-comprometimento da sacarose sobre as caracteriacutesticasrelacionadas agrave fotossiacutentese estudadas neste trabalho como oteor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o rendimentoquacircntico maacuteximo do PSII pode estar relacionada com a altacapacidade dessa espeacutecie em armazenar sacarose nos tecidos
Termos para indexaccedilatildeo Saccharum officinarum aclimatizaccedilatildeomeio de cultura fotossiacutentese
ABSTRACTThe State of Rio de Janeiro was one of the pioneers in
Brazil to set out the sugar cane activity which still represents animportant segment in the regional economy The production ofplants in commercial scale would be benefited by the attainmentof seedlings of high quality and homogeneity in short periods oftime which can be obtained using the micropropagation Thepresence of carbohydrate is essential for in vitro rooting of manyspecies with the sucrose being considered the most used sugarduring micropropagation despite the discussion by some authorsregarding its requirement The objective of this work was toevaluate the effect of sucrose concentrations in the culture mediumand light quality on the photosynthetic capacity and biometriccharacteristics on micropropagated sugar cane plants Chlorophyllfluorescence and contents were quantified root and shoot drymass and specific leaf mass were determined and chlorophyllconcentrations were estimated The results showed that theincrease in sucrose concentration during the in vitro cultivationof sugar cane in closed flasks promotes increase in the shootand root dry matter specific leaf mass and chlorophyll contentsNo modification of maximum PSII photochemistry capacity wasobserved The lack of sucrose effects on photosyntheticcharacteristics such chlorophyll contents and PSII yield may berelated to the high capacity of this specie to storage sucrose inthe tissues
Index terms Saccharum officinarum aclimatization culturemedium photosynthesis
Siacutembolos PSII fotossistema II SPAD Soil Plant AnalysisDevelopment BAP benzilaminopurina FFF fluxo de foacutetonsfotossinteacuteticos MPC medidor portaacutetil de clorofilas MFE massafoliar especiacutefica F
vF
maacutex Rendimento quacircntico maacuteximo do
fotossistema II MSPA massa seca parte aeacuterea MSR massaseca raiz AIB acido indol butirico ANAacido naftaleno aceacutetico
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 85
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
INTRODUCcedilAtildeO
A cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) foi
introduzida no Brasil no seacuteculo XVII com o objetivo de
quebrar o monopoacutelio mundial exercido pela Franccedila no
comeacutercio do accediluacutecar produzido nas Ilhas do Caribe O cultivo
da cana-de-accediluacutecar teve um grande aumento quando em
meados da deacutecada de 70 o Brasil criou o Programa Nacional
do Aacutelcool o qual teve como objetivo estimular a produccedilatildeo
do aacutelcool visando o atendimento das necessidades do
mercado interno e externo e da poliacutetica de combustiacuteveis
automotivos (MENEZES VEIGA et al 2006)
Atualmente a cana-de-accediluacutecar eacute uma das principais
culturas do panorama brasileiro e continua crescendo em
funccedilatildeo do consumo como fonte de energia e accediluacutecar Dentre
os diversos produtos agriacutecolas cultivados no estado do Rio
de Janeiro a cana-de-accediluacutecar eacute a cultura de maior importacircncia
econocircmica (MENEZES VEIGA et al 2006) Diante dessa
importacircncia na regiatildeo fluminense torna-se necessaacuteria cada
vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividade dessa espeacutecie
Uma das alternativas para essa elevaccedilatildeo eacute a formaccedilatildeo de
lavouras por meio do uso de mudas de excelente qualidade
Assim a micropropagaccedilatildeo eacute uma teacutecnica que pode contribuir
significativamente para a produccedilatildeo de mudas de cana de
accediluacutecar de alta qualidade Entre as diversas vantagens que
essa teacutecnica apresenta estaacute a produccedilatildeo raacutepida de mudas em
larga escala e a eliminaccedilatildeo de microrganismos potencialmente
fitopatogecircnicos
A micropropagaccedilatildeo tradicional tem como premissa
a presenccedila de sacarose no meio de cultivo uma vez que
esse composto eleva a produccedilatildeo de biomassa e pode
contribuir para aumentar o enraizamento de muitas espeacutecies
in vitro (GRATTAPAGALIA amp MACHADO 1990)
Entretanto vaacuterios autores tecircm sugerido que a fonte de
carboidrato no meio de cultura inibe o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono A adiccedilatildeo da sacarose ao meio
inibiu a fotossiacutentese potencial in vitro (LEES et al 1991)
reduziu a atividade da Rubisco (GROUT amp DONKIN 1987)
inibiu o acuacutemulo de clorofila (LA ROSA et al 1984) e
diminuiu a fixaccedilatildeo do carbono inorgacircnico por meio da
inibiccedilatildeo da atividade da carboxilase do fosfoenol-piruvato
e do Ciclo de Calvin (NEUMANN amp BENDER 1987)
Entretanto Khan et al (2006) trabalhando com cana-de-
accediluacutecar relataram que a maacutexima taxa de multiplicaccedilatildeo de
dois clones (AEC82-223 e NIA-2004) foi nas concentraccedilotildees
de 4 e 6 de sacarose no meio mostrando que nesses
clones cultivados em frascos fechados in vitro a sacarose
foi de fundamental importacircncia para a otimizaccedilatildeo do
crescimento da parte aeacuterea Esses autores mostraram que
a maior taxa de enraizamento foi em meio MS com 1 mg L-
1 de AIB e 6 de sacarose
Alguns autores para facilitar a aclimatizaccedilatildeo da
planta micropropagada sugerem adotar na uacuteltima fase da
cultura in vitro diminuir a concentraccedilatildeo de sacarose com
o objetivo de tentar elevar a taxa fotossinteacutetica e capacitar
a planta agrave nutriccedilatildeo autotroacutefica uma vez que a fonte de
carboidrato no meio de cultura pode inibir o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono Em vista disso Simmonds (1983)
obteve melhores resultados no enraizamento de porta-
enxerto de macieira ao reduzir a concentraccedilatildeo de sacarose
no meio de cultura para apenas 1 Contudo Wainwright
amp Scrace (1989) sugerem manter a sacarose no niacutevel
normalmente utilizado (3) ou ateacute mesmo aumentaacute-lo numa
fase anterior agrave aclimatizaccedilatildeo visando melhorar a qualidade
da planta Segundo esses autores o preacute-condicionamento
em altas concentraccedilotildees de sacarose aumentaria as reservas
de carboidratos armazenadas pelas folhas aumentando
assim a energia disponiacutevel para as placircntulas durante o
processo de aclimataccedilatildeo Para George amp Sherrington (1984)
no desenvolvimento in vitro de muitas espeacutecies a
assimilaccedilatildeo fotossinteacutetica eacute baixa fazendo com que as
culturas sejam dependentes do suporte externo de
carboidratos
Objetivou-se neste trabalho verificar o efeito da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo e da qualidade
de luz sobre a eficiecircncia fotoquiacutemica e as caracteriacutesticas de
crescimento da cana-de-accediluacutecar cultivada in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
O experimento foi realizado na unidade de pesquisa
em fotossiacutentese de plantas in vitro no Setor de Fisiologia
MOTHEacute G P B et al86
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
Vegetal Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal
na UENF Campos dos GoytacazesRJ
Como fonte de explante foram utilizadas placircntulas
de cana-de-accediluacutecar com dois a trecircs centiacutemetros de altura
proveniente de material vegetal jaacute em fase de multiplicaccedilatildeo
contendo meio MS modificado (02 mg L-1 de fonte de
nitrogecircnio combinado 01 mg L-1 de cinetina 02 mg L-1 de
BAP 1 mg L-1 de Tiamina 100 mg L-1 de mio-inositol e 20 g
L-1 de sacarose) em condiccedilotildees de perfilhamento O material
foi obtido no Laboratoacuterio de Cultura de Tecido do Campus
Dr Leonel Miranda UFRRJ O meio de cultura utilizado
para o recultivo foi o MS padratildeo (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 100 mg L-1 de mio-inositol 7 g L-1 de
Agar (Vetec) e sem adiccedilatildeo de reguladores de crescimento
Os tratamentos consistiram de uma combinaccedilatildeo bifatorial
de seis concentraccedilotildees de sacarose no meio (0 10 20 30
40 e 50 g L-1) e dois tipos de luz (lacircmpada fluorescente
branca 40w luz branca com irradiacircncia de 948 igravemol m-2 s-
1 e lacircmpada fluorescente tipo Grolux 40w luz vermelha
com irradiacircncia de 966 igravemol m-2 s-1) O pH do meio foi
ajustado para 58 antes da inclusatildeo do aacutegar e da
autoclavagem (15 atm a 120ordmC por 20 min) A parcela
experimental consistiu de frascos tipo baby food
contendo 50 mL do meio MS nas diferentes
concentraccedilotildees de sacarose O delineamento experimental
foi inteiramente casualizado com trecircs repeticcedilotildees em que
cada parcela consistiu de um frasco com duas plantas
Apoacutes a inoculaccedilatildeo os explantes foram cultivados em
sala de crescimento a uma temperatura 25ordm C plusmn 10 a um
fluxo de foacutetons fotossinteacuteticos de 120 a 150 igravemol m-2 s-1
com 16h de fotoperiacuteodo
Aos vinte e oito dias apoacutes a inoculaccedilatildeo (DAI) foi
utilizada a 2ordm eou 3ordm folha mais expandida para as anaacutelises
para determinaccedilatildeo do rendimento quacircntico maacuteximo do PSII
(FvF
max) (apoacutes adaptaccedilatildeo da folha ao escuro por 30
minutos com auxiacutelio de pinccedilas) por meio de um fluoriacutemetro
natildeo modulado PEA (Plant Efficiency Analyser - Hansatech
Ltd King s Lynn Norfolk UK)
A medida de intensidade de verde (relacionada com
o teor de clorofilas totais) foi feita nesta mesma eacutepoca por
meio do medidor portaacutetil do teor de clorofila SPAD 502
Chlorophyll Meter Minolta Japatildeo Os valores da
intensidade do verde foram provenientes da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha
A massa foliar especiacutefica feita aos 28 dias apoacutes o
cultivo in vitro foi determinada a partir da divisatildeo da massa
seca da folha de uma parte do limbo foliar pela respectiva
aacuterea dessa parte
No final do experimento foi determinada a massa
seca das partes aeacuterea e da raiz das plantas Essas partes
foram colocadas em estufa com ventilaccedilatildeo forccedilada a 70ordm C
por 48 h A partir dos dados da massa seca estimou-se a
relaccedilatildeo parte aeacuterearaiz (massa seca da parte aeacuterea massa
seca das raiacutezes)
Os dados experimentais foram submetidos a uma
anaacutelise de variacircncia e para cada tratamento foram
avaliados trecircs frascos Foram realizadas duas repeticcedilotildees
para cada frasco e seis plantas foram utilizadas
provenientes de trecircs frascos Os dados de cada avaliaccedilatildeo
foram analisados estatisticamente por teste Tukey a 5
e os resultados expressos como meacutedia (plusmn erro-padratildeo) de
seis repeticcedilotildees
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os diferentes tratamentos de luz e dosagem de
sacarose no meio de cultura influenciaram a produccedilatildeo de
biomassa na parte aeacuterea mostrando que maiores
concentraccedilotildees de sacarose produziram maior biomassa
(figuras 2 e 3) O tratamento controle (0 g L-1 de sacarose)
natildeo produziu biomassa suficiente para as anaacutelises
Portanto as plantas-controle cultivadas nessas
condiccedilotildees requerem a adiccedilatildeo de carboidratos para suprir
suas necessidades metaboacutelicas quer participando na
geraccedilatildeo de energia ou como fonte de esqueletos
carbocircnicos para vaacuterios processos bioquiacutemicos sugerindo
que as condiccedilotildees encontradas no frasco de cultivo e na
sala de crescimento foram ineficientes para as plantas-
controle desenvolverem condiccedilotildees de realizar
fotossiacutentese e consequumlentemente produzir biomassa
(Figura 1)
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 87
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 1 Plantas de cana-de-accediluacutecar cultivada em diferentes concentraccedilotildees de sacarose apoacutes 28 dias de cultivo (A)0 g L-1 (B) 10 g L-1 (C) 20 g L-1 (D) 30 g L-1 (E) 40 g L-1 e (F) 50 g L-1
Os resultados obtidos por meio da anaacutelise de
variacircncia para as cinco diferentes concentraccedilotildees de
sacarose (10 20 30 40 e 50 g L-1) no meio demonstraram
que para a caracteriacutestica massa seca da parte aeacuterea (MSPA)
houve uma resposta crescente em que doses crescentes
de sacarose promoveram acreacutescimos de biomassa seca
(Figura 2A) A concentraccedilatildeo 10 g L-1 diferenciou
significativamente das concentraccedilotildees de 40 g L-1 e 50 g L-
1 produzindo uma menor MSPA 0039 0101 e 0135g
respectivamente (Figura 2A) Dados semelhantes foram
obtidos em morangueiros batata menta e videira por
(RIQUELME et al 1991) e por (NICOLOSO 2003) em que
nesse trabalho a elevaccedilatildeo da concentraccedilatildeo de sacarose
de 30 ateacute 60 g L-1 promoveu maior produccedilatildeo de biomassa
dos oacutergatildeos de Pfaffia glomerata (Spreng) Pedersen
Com relaccedilatildeo agrave mateacuteria seca da raiz (MSR) as
diferenccedilas de concentraccedilatildeo de sacarose influenciaram
significativamente os resultados As menores
concentraccedilotildees (10 20 e 30 g L-1) somente diferenciaram
significativamente da maior concentraccedilatildeo (50 g L-1) que
produziu valores 0084g de MSR (Figura 2b) Pelos
resultados foi verificado que a presenccedila de sacarose
mostrou-se fundamental para o desenvolvimento da parte
aeacuterea e das raiacutezes da cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro
De fato Khan et al (2008) mostraram que o meio MS com
meia forccedila suplementado com reguladores de crescimento
(AIB e ANA) e 60 g L-1 de sacarose proporcionou maior
enraizamento em 3 variedades elite de cana-de-accediluacutecar Khan
et al (2006) tambeacutem indicaram a importacircncia da sacarose
no crescimento da parte aeacuterea em clones dessa espeacutecie
George (1996) relata que para formaccedilatildeo de raiacutezes in vitro
haacute necessidade de energia e carboidratos sendo esses
fornecidos por meio da fotossiacutentese (em condiccedilotildees
autotroacuteficas) ou oriunda de uma fonte exoacutegena de accediluacutecar
(em sistemas heterotroacuteficos ou mixotroacuteficos) O autor
verificou ainda que o aumento da concentraccedilatildeo de
sacarose de modo geral estimula o crescimento e a
formaccedilatildeo de raiacutezes de algumas espeacutecies Jaacute em outros
trabalhos na fase de enraizamento a reduccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultura vem sendo
citada como beneacutefica na melhoria da qualidade do sistema
radicular bem como na sobrevivecircncia das placircntulas
transplantadas (ANDRADE 1998)
Com relaccedilatildeo agrave MSPAMSR os tratamentos natildeo
apresentaram diferenccedila significativa apontando uma
relaccedilatildeo direta entre o crescimento das raiacutezes e da parte
MOTHEacute G P B et al88
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 2 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e as diferentes concentraccedilotildees de sacarose no meio de cultivoindependente da luz (A) Massa seca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa seca raiz (MSR) (C) Razatildeo massa seca da parteaeacuterearaiacutezes (MSPAMSR) (D) Massa foliar especiacutefica (MFE) (E) Teor estimado de clorofilas totais (valores de MPC)(F) Rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (F
vF
m) em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Cada
siacutembolo representa a meacutedia de seis repeticcedilotildees em MSPA MSR MSPA MSR e MFE e oito repeticcedilotildees em Valores deMPC e da relaccedilatildeo F
vF
m Meacutedias seguidas pela mesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
aeacuterea Essa relaccedilatildeo eacute de fundamental importacircncia para a
organizaccedilatildeo dos processos fisioloacutegicos e desenvolvimento
das plantas (TAIZ amp ZEIGER 2002) Essas partes estatildeo
relacionadas entre si e essa relaccedilatildeo eacute devida agrave dependecircncia
nutricional e fitohormonal da parte aeacuterea com a raiz
(SALISBURY amp ROSS 1992) (Figura 2c)
As diferentes concentraccedilotildees de sacarose
influenciaram a massa foliar especiacutefica (MFE) a qual
representa a quantidade de massa seca por unidade de
aacuterea da folha estimando a proporccedilatildeo relativa da superfiacutecie
assimilatoacuteria e os tecidos de sustentaccedilatildeo e condutores da
folha aleacutem de poder ser correlacionada positivamente com
a taxa fotossinteacutetica (CRUZ et al 2004) A menor
concentraccedilatildeo de sacarose apresentou o menor valor (148
g m-2) o que indica que a ausecircncia de sacarose pode
comprometer a espessura foliar bem como a capacidade
da maquinaria fotossinteacutetica (Figura 2d)
O teor de clorofila foi estimado por meio do medidor
portatil de clorofila (MPC) Os valores encontrados da
intensidade do verde foram oriundos da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha As diferentes concentraccedilotildees de
sacarose no meio de cultivo influenciaram a intensidade
de verde (Figura 2e) em que a maior concentraccedilatildeo de
sacarose apresentou o maior valor do MPC (336)
0
003
006
009
012
015
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
A (g
)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MFE
(gm
2)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
0
002
004
006
008
01
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSR
(g)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
20
22
24
26
28
30
32
34
36
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
Val
ores
de
MPC
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
000
100
200
300
400
500
600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
AM
SR
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
062
064
066
068
07
072
074
076
078
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
FvF
m
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
A
B
D
C
E
F
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 89
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
diferenciando significativamente dos demais tratamentos
Esses valores estatildeo relacionados com uma maior
quantidade de clorofilas totais em maiores teores de
sacarose Nesse caso em plantas de cana-de-accediluacutecar a
elevaccedilatildeo no teor de sacarose contribui para o incremento
do teor de clorofilas a partir de 30 g L-1 desse composto no
meio de cultivo
Com relaccedilatildeo agrave atividade do PSII avaliada por meio
da emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila a as plantas de
cana-de-accediluacutecar apresentaram alteraccedilotildees com relaccedilatildeo aos
tratamentos utilizados Estatisticamente os valores
menores da eficiecircncia fotoquiacutemica maacutexima do PSII (FvF
m)
foram verificados na concentraccedilatildeo de 20 g L-1 de sacarose
(Figura 2f) Com exceccedilatildeo das plantas crescidas nessa
concentraccedilatildeo de sacarose as demais plantas cultivadas
em meios com maiores concentraccedilotildees de sacarose natildeo
apresentaram diferenccedilas significativas para a caracteriacutestica
FvF
m Por meio dos resultados relacionados aos efeitos
da concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo sobre as
caracteriacutesticas de crescimento a produccedilatildeo de biomassa
estaria mais relacionada agrave oferta de carbono no meio de
cultivo do que a eficiecircncia na maquinaria fotoquiacutemica das
plantas
A qualidade do fluxo de foacutetons fotossinteacutetico (FFF)
teve influecircncia relevante nas caracteriacutesticas MSPA MSR
MFE e valores do MPC A luz considerada vermelha emitida
pelas lacircmpadas GroLux proporcionou maiores valores das
caracteriacutesticas supracitadas Tais resultados poderiam estar
relacionados a um maior ganho de carbono por meio de um
aumento da taxa fotossinteacutetica liacutequida eou indiretamente
causado por alteraccedilotildees fitormonais causadas pela
modificaccedilatildeo no espectro luminoso (CAMPELL amp
BONNER 1986) Ainda na presenccedila da luz vermelha houve
favorecimento para a produccedilatildeo de biomassa tanto na parte
FIGURA 3 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e os diferentes tipos de luz (Branca e Vermelha) (A) Massaseca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa foliar especifico (MFE) (C) Massa seca raiz (MSR) e (D) Teor estimado declorofilas totais (Valores de MPC) Cada siacutembolo representa a meacutedia sendo 15 repeticcedilotildees em MSPA MSR e valores deMPC e 20 repeticcedilotildees em MFE em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Meacutedias seguidas pelamesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
14
16
18
20
22
LUZ
MFE
(gm
2)
Luz branca
Luz vermelha
0
001
002
003
004
005
LUZ
MSR
(g)
Luz branca
Luz vermelha
002
004
006
008
01
012
014
LUZ
MSP
A (g
)
Luz branca
Luz vermelha
20
22
24
26
28
30
LUZ
Val
ores
de
MP
C
Luz branca
Luz vermelha
A
C
B
D
MOTHEacute G P B et al90
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
aeacuterea como no sistema radicular A luz branca apresenta
uma composiccedilatildeo espectral que pode variar e causar
respostas diferenciadas na cultura in vitro A
predominacircncia na emissatildeo de foacutetons na regiatildeo do vermelho
ateacute o azul pode estimular a induccedilatildeo de calos quebrar a
moleacutecula de AIA e ainda estimular a induccedilatildeo de brotos
(BARRUETO CID 2001 CHAMOVITZ amp DENG 1996)
As plantas cultivadas em maiores concentraccedilotildees
(40 e 50 gL-1) de sacarose e aclimatadas em luz vermelha
tiveram melhores resultados do que nos outros tratamentos
(Figura 2 e 3)
CONCLUSOtildeES
Em cana-de-accediluacutecar cultivada em condiccedilotildees in vitro
e em frascos fechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de
sacarose no meio de cultivo promoveu aumentos na
mateacuteria seca da parte aeacuterea e da raiz na massa foliar
especiacutefica e na intensidade de cor verde das folhas
estudadas Natildeo houve alteraccedilatildeo na eficiecircncia fotoquiacutemica
maacutexima do PSII A luz vermelha associada agrave concentraccedilotildees
de sacarose de 40 e 50gL-1 parece ter uma resposta
somatoacuteria tanto na produccedilatildeo de parte aeacuterea e raiz quanto
na massa foliar especiacutefica e no teor de clorofila
A justificativa para o natildeo-comprometimento da
sacarose no meio sobre as caracteriacutesticas relacionadas agrave
fotossiacutentese estudadas neste trabalho como exemplo o
teor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o
rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (FvF
m) pode estar
relacionada com a alta capacidade dessa espeacutecie em
armazenar sacarose nos tecidos
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
(Recebido em 20 de junho de 2008 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EFFECTS OF AUXINS AND CYTOKININS ON IN VITRODEVELOPMENT OF Alpinia purpurata K SCHUM AND
PHENOLIC COMPOUNDS PRODUCTION
EFEITO DE AUXINAS E CITOCININAS NO DESENVOLVIMENTO IN VITRO DEAlpinia purpurata K SCHUM E PRODUCcedilAtildeO DE SUBSTAcircNCIAS FENOacuteLICAS
CRISTIANE PIMENTEL VICTOacuteRIO1 IACINETE PAMPLONA DA CRUZ2 ALICE SATO3RICARDO MACHADO KUSTER4 CELSO LUIZ SALGUEIRO LAGE5
1Doutora em Ciecircncias Bioloacutegicas (Biofiacutesica) Instituto de Biofiacutesica Carlos Chagas FilhoLab Fisiologia Vegetal Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050 21952-590 Rio de Janeiro RJ crispvbiofufrjbr
2Estudante de Farmaacutecia bolsista PIBICUFRJ3Doutora em Biotecnologia Vegetal Prof Dep Botacircnica Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro Av Pasteur 458
22290-040 Rio de Janeiro RJ alicesatouniriobr4Doutor Prof Laboratoacuterio de Fitoquiacutemica Nuacutecleo de Pesquisas de Produtos Naturais (NPPN) Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco H 21941-902 Rio de Janeiro RJ kusternppnufrjbr
5Doutor Prof IBCCFo Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050
21952-590 Rio de Janeiro RJ clslagebiofufrjbr
ABSTRACTAlpinia purpurata K Schum is largely used in
ornamentation and scarcely present itself in folk medicine Studiesusing plant tissue culture technique under standardized conditionpermit to evaluate plant physiological morphological andphytochemical responses to exogenous plant growth regulatorThis work consisted in the establishment of in vitro A purpurataplants using different concentrations of auxin and cytokinins inmg L-1 IAA 2 TDZ 2 and 4 IAA 2 + TDZ 2 IAA 2 + BAP 2Additionally it was determined the content of phenoliccompounds in the leaves of field and in vitro plants using Folin-Ciocalteau method Buds from inflorescence A purpurata weredisinfested and introduced in solid MS medium to initiate culturesThe direct organogenesis process was fast and satisfactoryproducing elongated plants with a developed radicular systemThe rooting percentage reached 100 for all treatments after 2months Cytokinins and auxins were important for the increasingof the leaves quantity (42 to 51) and shoot elongation (40 cm)Liquid MS0 presented the favorable results for fastmicropropagation and higher production of shoots providingplants ready to be acclimatized In vitro plants cultivated underMS0 produced 93 of phenolic compounds in comparison withfield plants (100) Through High Performance LiquidChromatographic it was verified similar chromatographic profilesbetween field and in vitro plant extracts
Index terms Folin-Ciocalteau HPLC micropropagation tissueculture Zingiberaceae Alpinia purpurata
RESUMOAlpinia purpurata K Schum eacute uma espeacutecie muito
utilizada como ornamental e possui escassas indicaccedilotildees de usona medicina popular Estudos utilizando teacutecnicas de cultura detecidos vegetais permitem a partir de condiccedilotildees padronizadas
avaliar as respostas fisioloacutegicas morfoloacutegicas e fitoquiacutemicas dosvegetais aos fitorreguladores exoacutegenos Este trabalho consistiuno estabelecimento de plantas de A purpurata in vitro utilizando-se diferentes concentraccedilotildees de auxina e citocininas (mg L-1) AIA2 TDZ 2 e 4 AIA 2 + TDZ 2 AIA 2 + BAP 2 Verificou-setambeacutem o conteuacutedo de substacircncias fenoacutelicas nas folhas de plantasde campo e in vitro atraveacutes do meacutetodo de Folin-CiocalteauBrotos oriundos da inflorescecircncia de A purpurata foramdesinfestados e introduzidos em meio MS soacutelido para iniciar asculturas O processo de organogecircnese direta foi raacutepido esatisfatoacuterio produzindo plantas alongadas e com sistema radiculardesenvolvido A porcentagem de enraizamento atingiu 100 paratodos os tratamentos ao final de 2 meses As citocininas e auxinasforam importantes para incrementar o nuacutemero de folhas (42 a51) e alongamento dos brotos (40 cm) em comparaccedilatildeo com omeio controle O MS0 liacutequido foi o mais favoraacutevel para raacutepidapropagaccedilatildeo in vitro e maior produccedilatildeo de brotos com suprimentode plantas aptas a serem aclimatizadas Plantas in vitro cultivadasem meio MS0 produziram 93 de fenoacuteis totais em relaccedilatildeo agravesplantas de campo (100) Atraveacutes da Cromatografia Liacutequida deAlta Eficiecircncia foi verificada semelhanccedila entre os perfiscromatograacuteficos dos extratos de plantas de campo e in vitro
Termos para indexaccedilatildeo Folin-Ciocalteau CLAEmicropropagaccedilatildeo cultura de tecidos vegetais ZingiberaceaeAlpinia purpurata
INTRODUCTION
Alpinia purpurata K Schum is widely used as
ornamental plant in several tropical and subtropical areas
with high international market demand (KRESS et al 2002
SANGWANANGKUL et al 2008) In folk medicine it is
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 93
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
used for cough in Venezuela and presents antibacterial
activity (BERMUacuteDEZ amp VELAacuteSQUEZ 2002 ZOGHBI et
al 1999) Recent studies have showed the phytochemical
potential of this species (VICTOacuteRIO et al 2007 2008)
The vegetative propagation through rhizome is the
main way of reproduction of this species According to
Moroacuten (1987) for the propagation of A purpurata in
greenhouse the time is twice more than in in vitro systems
Plant tissue culture techniques have been employed in
Brazil since 1950 and the main advantages include the
continuous and fast production of aseptic and selected
plants These techniques permit a commercial-scale
production of plants (ROUT et al 2006) and some studies
have showed them as an alternative for optimizing
secondary metabolites production (RAO amp
RAVISHANKAR 2002) The micropropagation of A
purpurata supplies may be a source for ornamental and
medicinal raw material (MULABAGAL amp TSAY 2004
POMPELLI et al 2007)
Addition of auxins and cytokinins in the culture
media are essential to improve and regulate growth and
morphogenesis of the cultures (CHITRA amp PADMAJA
2005 KYOZUKA 2007) Besides several studies have
reported the effects of plant growth regulators in in vitro
phenolic production (SANTOS-GOMES et al 2002
THIEM 2003) We intended to develop a protocol for in
vitro production of A purpurata plants and to evaluate
the effects of auxins and cytokinins on plant development
and compounds phenolic production
MATERIAL AND METHODS
Plant Material
Buds from inflorescence of donor plants of Alpinia
purpurata red inflorescence were used as source of plant
material to initiate in vitro cultures Voucher specimen was
deposited at the Herbarium of Rio de Janeiro Botanical
Garden under accession number RB 433484 Buds were
collected and washed with running water using nylon
brush for removing residues The sterilization process was
concluded in four steps in sterile ambient after dissection
of leaves 20 of commercial bleach solution for 40 min
followed by immersion in distilled water plus commercial
detergent solution for 15 min dipped in 70 ethanol
washed for 10 min in 30 of commercial bleach solution
and rinsed with sterile distilled water three after each step
Establishment of in vitro cultures
Explants were subcultured into glasses (16 x 8 cm)
containing 50 ml of culture medium Murashige amp Skoog
(1962) supplemented with 3 of sucrose 148 igraveM thiamine-
Different letters indicate significant differences at plt 005 level Tukey s test n e 30
VICTOacuteRIO C P et al96
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
FIGURE 2 In vitro development of Alpinia purpurata plants in MS medium under different plant growth regulators(mgl-1) (A) Sequence of development 1 month (I) 2 months (II) and 3 months (III) (B) shoot height after 2 months (C)shoot height and (D) percentage of shoots after 3 months Different letters indicate significant differences at plt 005level Tukey s test n e 30 100 correspond to 30 shoots per explant within 1 year
advantage of in vitro production of secondary metabolites
is the possibility to control environment and nutritional
factors Data show high level of phenolics in in vitro
cultures of A purpurata (93) compared with field plants
(100) (Figure 3A) Through reversed-phase HPLC was
found similarity between field and in vitro plants profiles
(Figure 3B-C) The peaks 1 2 and 3 presented
characteristics of phenolic compounds verified through
UV spectra obtained by HPLC A purpurata is not currently
used in folk medicine and these results may indicate the
presence of therapeutic resource in its phytochemistry
The preliminary investigation of phenolic in
organogenic cultures of A purpurata using Folin-
Ciocalteau reagent and HPLC analysis brings perspectives
about the production of antioxidant compounds by this
species In addition the establishment of tissue culture of
A purpurata may be a good alternative to produce aseptic
plants and its bioactive metabolites
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 97
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
ACKNOWLEDGEMENTS
C P Victoacuterio acknowledges the fellowship from
CAPES and PROEX financial support
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Curva de crescimento atividade da fenilalanina 99
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
(Recebido em 23 de janeiro de 2008 e aprovado em 7 de outubro de 2008)
CURVA DE CRESCIMENTO ATIVIDADE DA FENILALANINA AMOcircNIA-LIASE E TEORES DE FENOacuteIS E TANINOS TOTAIS EM CALOS DE
GROWTH CURVE PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE ACTIVITY AND TOTALPHENOL LEVELS IN CALLUS OF Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville
(FABACEAE-MIMOSOIDEAE)
ANA HORTEcircNCIA FONSEcircCA CASTRO1 MILLER MARANI LIMA2 RENATO PAIVA3 AMAURI ALVES DE ALVARENGA4 MIRELLE OLIVEIRA SOacuteTER5
1Doutora Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG2Bolsista ICFAPEMIG Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG3PhD Universidade Federal de LavrasUFLA 37200-000 Lavras MG4Doutor Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 37200-000 Lavras MG renpaivauflabr5Acadecircmica Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG
RESUMOObjetivou-se estabelecer a curva de crescimento e avaliar
a atividade da fenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis etaninos totais em calos de barbatimatildeo explantes foliares foraminoculados em meio MS suplementado com 30 g L-1 sacarose eacrescidos de 905 M de 24-D O crescimento a atividade dafenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis e taninos totaisforam avaliados a cada 10 dias durante 110 dias A curva decrescimento dos calos apresentou um padratildeo sigmoidal com cincofases distintas Os teores meacutedios de fenoacuteis totais acompanharamas variaccedilotildees observadas para a atividade enzimaacutetica Alta atividadee maiores teores de fenoacuteis totais foram observados no explanteinicial com reduccedilotildees progressivas ateacute a fase linear Na faseestacionaacuteria observaram-se incrementos importantes naatividadeda fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais Natildeo foidetectada a presenccedila de taninos totais nos calos
Termos para indexaccedilatildeo Barbatimatildeo cultivo in vitro plantamedicinal Stryphnodendron adstringens
ABSTRACTIn order to establish growth curve phenylalanine ammonia-
lyase (PAL) activity and total phenol and tannin levels inStryphnodendron adstringens leaf explants were inoculated inMS medium supplemented with 30 g L-1 sucrose and 905 M24-D The growth PAL activity and total phenol and tanninlevels were evaluated at 10 days intervals during 110 days Callusgrowth curve presented a sigmoid shape with five different phasesAverage levels of total phenol followed the changes observed forenzymatic activity High activity and higher levels of total phenolwere observed in initial explants with progressive reductions untilthe linear phase Increases in phenylalanine ammonia-lyase activityand total phenols levels were observed in stationary phase Notannins were observed on callus
Index terms Stryphnodendron adstringens In vitro CultureMedicinal Plant
INTRODUCcedilAtildeO
Atualmente um consideraacutevel esforccedilo tem sido feito
com o intuito de se produzir fitoteraacutepicos com maiores
concentraccedilotildees de substacircncias ativas vegetais atraveacutes de
culturas de ceacutelulas ou tecidos Segundo Taniguchi et al
(2002) dentre as diferentes teacutecnicas de cultivo in vitro a
cultura de calos tem apresentado grande importacircncia para
a propagaccedilatildeo e produccedilatildeo in vitro de espeacutecies de interesse
medicinal A desdiferenciaccedilatildeo e induccedilatildeo de regeneraccedilatildeo
das plantas a partir de calos satildeo muitas vezes processos
difiacuteceis de serem obtidos e podem demandar algum tempo
As auxinas tecircm sido amplamente utilizadas nos meios de
cultivo para a induccedilatildeo de calos e geralmente dependendo
da concentraccedilatildeo causam elongaccedilatildeo celular e expansatildeo ou
divisatildeo celular Em geral com o uso de baixas
concentraccedilotildees de auxinas predomina a formaccedilatildeo de raiacutezes
adventiacutecias enquanto que altas concentraccedilotildees induzem a
formaccedilatildeo de calos A interaccedilatildeo entre auxinas e citocininas
tambeacutem eacute muito utilizada para a induccedilatildeo de calogecircnese
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998)
Durante a calogecircnese eacute importante estabelecer-se
a curva de crescimento de calos o que propicia a
identificaccedilatildeo das fases distintas de crescimento da espeacutecie
A partir deste estudo pocircde-se determinar o momento exato
de repicagem dos calos para um meio fresco ou a
CASTRO A H F et al100
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
possibilidade de sua utilizaccedilatildeo em suspensotildees celulares
visando a otimizaccedilatildeo da produccedilatildeo de metaboacutelitos
secundaacuterios em espeacutecies medicinais (GEORGE 1996) O
crescimento in vitro de calos geralmente apresenta um
padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas Segundo Smith
(1992) a fase lag se caracteriza como fase de maior produccedilatildeo
de energia correspondendo ao periacuteodo em que as ceacutelulas
se preparam para a divisatildeo visando sua expansatildeo Ocorre o
iniacutecio da mobilizaccedilatildeo de metaboacutelitos primaacuterios sem qualquer
divisatildeo celular siacutentese de proteiacutenas e de compostos
especiacuteficos Essa fase resulta em um pequeno crescimento
dos calos A fase exponencial eacute biossinteacutetica Observa-se o
maior crescimento dos calos devido agrave maacutexima taxa de divisatildeo
celular caracteriacutestica desse periacuteodo O nuacutemero de ceacutelulas
aumenta Na fase linear haacute diminuiccedilatildeo da divisatildeo celular
mas aumento de volume celular e a fase de desaceleraccedilatildeo eacute
o momento em que as culturas devem ser transferidas para
outro meio devido agrave reduccedilatildeo de nutrientes produccedilatildeo de
produtos toacutexicos secagem do aacutegar e reduccedilatildeo do oxigecircnio
no interior das ceacutelulas Na fase estacionaacuteria ocorre maior
acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
O barbatimatildeo [Stryphnodendron adstringens
(Mart) Coville Fabaceae-Mimosoideae) eacute uma importante
espeacutecie medicinal do cerrado com altos teores de
compostos polifenoacutelicos em especial os taninos Possui
grande distribuiccedilatildeo e importacircncia econocircmica para o estado
de Minas Gerais sendo empregado como adstringente e
cicatrizante no combate de amidalite faringite
hemorroacuteidas leucorreacuteias erupccedilotildees cutacircneas diarreacuteias e
como agentes antiinflamatoacuterios (LIMA et al 1998)
A fenilalanina amocircnia-liase (EC 4315) eacute uma
enzima-chave e regulatoacuteria da rota biossinteacutetica dos
fenilpropanoacuteides e de seus derivados e catalisa a
desaminaccedilatildeo do aminoaacutecido L-fenilalanina em aacutecido trans-
cinacircmico sendo esse o primeiro passo para a biossiacutentese
dos fenoacutelicos vegetais (ASSIS et al 2001) De acordo com
Rivero et al (2001) os niacuteveis dessa enzima podem flutuar
significativamente em intervalos relativamente curtos em
resposta a uma ampla variedade de estiacutemulos como o
fotoperiacuteodo fitocromo mudanccedilas de temperatura radiaccedilatildeo
UV deficiecircncia de nutrientes reguladores de crescimento
virais e ataque de insetos bem como o estaacutedio de
desenvolvimento vegetal e o grau de diferenciaccedilatildeo de
ceacutelulas e tecidos (SOLECKA amp KACPERSKA 1995)
Devido agrave exploraccedilatildeo irracional pelas induacutestrias de
curtimento do couro o barbatimatildeo encontra-se ameaccedilado
de extinccedilatildeo Assim devem-se melhorar as teacutecnicas de
propagaccedilatildeo encorajar seu cultivo e criar vias alternativas
para a produccedilatildeo de tanino em larga escala a partir de
fontes naturais
Objetivou-se estabelecer a curva de crescimento e
avaliar a atividade da fenilalananina amocircnia-liase e os teores
de fenoacuteis e taninos totais em calos de barbatimatildeo
MATERIAL E MEacuteTODOS
As etapas experimentais foram realizadas entre
fevereiro de 2007 e janeiro de 2008 no Centro Universitaacuterio
de Lavras (UNILAVRAS) e na Universidade Federal de
Lavras (UFLA)
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento foi obtida a partir da
inoculaccedilatildeo de segmentos foliares de 025 cm2 de aacuterea
empregados como explantes em meio MS (MURASHIGE
amp SKOOG 1962) suplementado com 30 g L-1 sacarose e
acrescidos de 905 M de 24-D Os meios foram
solidificados com aacutegar na proporccedilatildeo de 7 g L-1 e o pH
ajustado para 57 plusmn 01 antes da autoclavagem por 20 min
Apoacutes inoculaccedilatildeo os explantes foram transferidos para sala
de crescimento onde foram incubados na presenccedila de luz
agrave temperatura de 27 plusmn 1 oC fotoperiacuteodo de 16 horas e
DFFFA= 25 mol m-2 s-1
Foram feitas pesagens do material inoculado fresco
a partir do dia da inoculaccedilatildeo (tempo 0) ateacute ser atingida a
fase de desaceleraccedilatildeo em intervalos de 10 dias O
porcentual de crescimento dos calos foi determinado pela
equaccedilatildeo proposta por Lameira (1997)
crescimento = Pf Pi
Pf
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 101
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
onde
Pf = Mateacuteria seca final
Pi = Mateacuteria seca inicial
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado sendo cada pesagem composta
por duas repeticcedilotildees e cada repeticcedilatildeo pela meacutedia de 10
tubos cada tubo contendo um explante Os dados obtidos
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia e analisados
estatisticamente utilizando-se o Sistema de Anaacutelise de
Variacircncia para Dados Balanceados (FERREIRA 2000)
Determinaccedilotildees da atividade da fenilalanina amocircnia-liasee teores de fenoacuteis e taninos totais
Calos obtidos na curva de crescimento foram
imersos em nitrogecircnio liacutequido e posteriormente
armazenados em Freezer Forma Scientific a -86 oC ateacute o
momento de serem utilizados na determinaccedilatildeo da atividade
enzimaacutetica Outros calos assim como aqueles obtidos no
experimento com a sacarose foram liofilizados para
determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis e taninos totais
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase
O procedimento descrito por Cheng amp Breen (1991)
com algumas modificaccedilotildees foi utilizado para extraccedilatildeo e
determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica
Calos congelados (5 g) foram triturados
homogeneizadas com acetona 80 e congelados por 15
minutos O homogenato foi filtrado e o pelet foi seco atraveacutes
de vaacutecuo
O extrato proteacuteico foi obtido homogeneizando-se
05 g do pelet seco em 5 mL de tampatildeo borato de soacutedio 01
M pH= 88 contendo 5 mM de -mercaptoetanol 2 mM
de EDTA e 4 (pv) de PVP a 4oC Depois de 1h o
homogenato foi centrifugado a 27000 g por 30 minutos a
4 oC A mistura de reaccedilatildeo foi constituiacuteda por 05 mL de L-
fenilalanina 30 M 30 mM de tampatildeo borato de soacutedio pH=
88 e 1 mL de extrato cru num volume total de 3 mL O
substrato foi adicionado apoacutes 10 minutos de preacute-incubaccedilatildeo
e a reaccedilatildeo foi interrompida com 01 mL de HCl 6 N A
atividade da fenilalanina amocircnia-liase foi determinada pela
produccedilatildeo de cinamato apoacutes 90 minutos agrave 30 oC sob
agitaccedilatildeo contiacutenua medida pela variaccedilatildeo da absorbacircncia a
290 nm A atividade especiacutefica da enzima foi definida em
nmol de aacutecido cinacircmicohmg de proteiacutena
Fenoacuteis totais
Amostras de calos liofilizados foram trituradas em
micromoinho e armazenadas em frascos fechados
protegidos da luz
Aproximadamente 500 mg de calos liofilizados e
triturados foram extraiacutedos cinco vezes com 5 mL de uma
mistura de metanolaacutegua (11) sob refluxo O volume final
do extrato foi completado para 25 mL
Uma aliacutequota de 100 L do extrato foi utilizada para
a determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis totais atraveacutes do
meacutetodo de Folin-Dennis segundo as normas da AOAC
(1970) As determinaccedilotildees foram feitas em triplicata e o
resultado foi expresso em porcentagem de aacutecido tacircnico
por grama de calo seco
Taninos Totais
A determinaccedilatildeo dos teores de taninos totais foi
realizada atraveacutes do Meacutetodo de Difusatildeo Radial de acordo
com Hagerman (1987)
Um volume de 5 mL do extrato foi concentrado a 37oC e posteriormente retomado com 05 mL de uma mistura
de metanolaacutegua (11) Uma aliacutequota de 15 mL foi utilizada
para a determinaccedilatildeo Todas as determinaccedilotildees foram feitas
em triplicata O resultado foi expresso em percentagem de
tanino por grama de calo seco
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento dos calos seguiu o padratildeo
sigmoidal apresentando cinco fases distintas lag
exponencial linear desaceleraccedilatildeo e estacionaacuteria (Figura
1) A fase lag onde as ceacutelulas do explante se preparam para
a divisatildeo celular e produccedilatildeo de energia ocorreu ateacute o 30o
dia apoacutes a inoculaccedilatildeo com calos apresentando um
crescimento de aproximadamente 73 A segunda fase
exponencial estendeu-se do 31o
ao 50o
dia de cultivo
com 70 de crescimento periacuteodo esse caracterizado pela
CASTRO A H F et al102
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
maacutexima divisatildeo celular A fase linear ocorreu entre o 51o ao
70o
dia e natildeo se verificou crescimento dos calos nesse
periacuteodo Entre o 71o
e 100o
dia observou-se a fase de
desaceleraccedilatildeo com 28 de crescimento e a partir do 101o
dia a cultura entrou na fase estacionaacuteria Segundo Smith
(1992) na fase de desaceleraccedilatildeo os calos devem ser
transferidos para um novo meio de cultura devido agrave
reduccedilatildeo de nutrientes secagem do aacutegar e acuacutemulo de
substacircncias toacutexicas
FIGURA 1 Curva de crescimento de calos deStryphnodendron adstringens obtidos a partir de segmentosfoliares inoculados em meio MS contendo 905 M de 24-D e 30 g L-1 de sacarose
0
002
004
006
008
01
012
014
016
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Mat
eacuteria
sec
a (g
)
De maneira semelhante essa mesma curva de
crescimento pode ser dividida em trecircs fases fase de
crescimento lento (do dia da inoculaccedilatildeo ateacute o 30o dia) fase
de crescimento ativo (do 31o
ao 70o
dia) e fase de
estabilizaccedilatildeo (71o
dia em diante) sendo indicada a
repicagem entre o 71o ao 100o dia
A curva de crescimento para calos de
barbatimatildeo apresentou um padratildeo semelhante ao de outras
espeacutecies medicinais de cerrado como Byrsonima
intermeacutedia A Juss (NOGUEIRA et al 2008) Croton
(BONILLA 2002) e Derris sp (CONCEICcedilAtildeO 2000)
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteise taninos totais
Na figura 2 encontram-se representados os
resultados da atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase
e dos teores de fenoacuteis totais verificados durante o periacuteodo
experimental O explante inicial apresentou um teor meacutedio
de 065 de taninos totais natildeo se detectando entretanto
a presenccedila de taninos nos demais calos formados
Conforme pode-se observar a atividade da
fenilalanina amocircnia-liase situou-se entre 016 e 196 mol
de aacutecido cinacircmico h-1 g-1 de mateacuteria fresca (plt005) (figura
2A) A atividade apresentou-se maacutexima no explante inicial
(dia 0) e reduziu progressivamente ateacute o 70o dia periacuteodo
esse correspondente agraves fases lag exponencial e linear
Entre o 71o ao 100o dia ou seja na fase de desaceleraccedilatildeo a
atividade enzimaacutetica indicou uma tendecircncia em se manter
constante e a partir do 101o dia (fase estacionaacuteria) verificou-
se um pequeno incremento nessa atividade da ordem de
26 De maneira semelhante os teores meacutedios de fenoacuteis
totais acompanharam as variaccedilotildees observadas para a
atividade enzimaacutetica e situaram-se em uma faixa de 029 a
399 sendo o teor meacutedio maacuteximo observado no explante
inicial (figura 2B) Os teores de fenoacuteis totais reduziram
significativamente ateacute o 60o dia (fase lag e exponencial) e a
partir do 61o
ao 90o
dia permaneceram praticamente
constantes com os menores niacuteveis observados durante o
periacuteodo experimental em torno de 037 em meacutedia A partir
da fase estacionaacuteria (100o dia) verificou-se um aumento de
65 nos teores meacutedios de fenoacuteis totais
Estes resultados mostraram-se muito interessantes
do ponto de vista fisioloacutegico e fitoquiacutemico e corroboram
com relatos de Conceiccedilatildeo (2000) e Lameira (1997) os quais
citam que a fase estacionaacuteria corresponde ao periacuteodo em
que ocorre maior acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
Apesar de esses teores serem baixos eacute importante ressaltar
que o meio de cultura pode ser otimizado para produccedilatildeo
em larga escala de fenoacuteis totais e taninos uma vez que
foram obtidos in vitro a partir de segmentos foliares e de
forma convencional satildeo extraiacutedos da casca da planta adulta
cultivada in vivo
A presenccedila de baixos teores de fenoacuteis e a ausecircncia
de taninos pode estar associada agrave alta atividade metaboacutelica
relacionada ao crescimento dos calos (mitose) o que
demanda elevada quantidade de substrato necessaacuterio agrave
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 103
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
FIGURA 2 Valores meacutedios de atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase (A) e teores de fenoacuteis totais (B) emStryphnodendron adstringens durante o periacuteodo experimental
0
05
1
15
2
25
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Ativ
idad
e da
Fen
ilala
nina
Am
ocircnia
-Lia
se (
mm
ol d
e aacutec
cin
acircmic
o h-1
g-1 M
F)
A
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120Dias
Fenoacute
is T
otai
s (
)
B
produccedilatildeo de energia Segundo Botta et al (2001) a
diferenciaccedilatildeo celular assim como a desaceleraccedilatildeo da
atividade mitoacutetica progressivamente permite o acuacutemulo de
compostos derivados do metabolismo secundaacuterio Para
Lavola et al (2000) e Pentildeuelas et al (1997) variaccedilotildees nos
teores de metaboacutelitos secundaacuterios natildeo podem ser explicadas
somente pelas diferenccedilas na disponibilidade de carboidratos
devendo-se considerar tambeacutem a disponibilidade de
precursores para a sua siacutentese e as mudanccedilas nos padrotildees
de siacutentese e catabolismo desses compostos
CONCLUSOtildeES
A curva de crescimento para calos de barbatimatildeo
apresentou um padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas
sendo indicada a repicagem entre o 71o ao 100o dia
Alta atividade e maiores teores de fenoacuteis totais
foram observados no explante inicial com reduccedilotildees
progressivas ateacute a fase linear Na fase estacionaacuteria
observaram-se incrementos importantes na atividade da
fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais
Natildeo se detectou a presenccedila de taninos totais nos
calos durante a determinaccedilatildeo da curva de crescimento na
presenccedila de 904 M de 24-D
AGRADECIMENTOS
Agrave Fundaccedilatildeo de Amparo agrave Pesquisa do Estado de
Minas Gerais (FAPEMIG) pelo suporte financeiro ao
projeto e concessatildeo de bolsa de iniciaccedilatildeo cientiacutefica
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Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 105
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
(Recebido em 14 de fevereiro de 2007 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EMBRIOGEcircNESE SOMAacuteTICA DIRETA DE Coffea arabica LCONCENTRACcedilOtildeES DE NH4NO3 E DE KNO3 NO
DESENVOLVIMENTO DE EMBRIOtildeES1
DIRECT SOMATIC EMBRYOGENESIS OF Coffea arabica L CONCENTRATIONS OFNH4NO3 AND KNO3 ON THE DEVELOPMENT OF EMBRYOS
JULIANA COSTA DE REZENDE2 MOACIR PASQUAL3 SAMUEL PEREIRA DE CARVALHO3ESTER ALICE FERREIRA4 FLAVIA CARVALHO SANTOS5
1Artigo extraiacutedo da dissertaccedilatildeo de mestrado da primeira autora apresentada a Universidade Federal de LavrasUFLA2Pesquisadora MSc Epamig Campus da UFLA Cx P 176 372000-000 Lavras MG julianacostaepamigbr3Professor Dr Titular do Departamento de AgriculturaDAG Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 372000-000
Lavras MG pasqualuflabr samuelpcuflabr4Pesquisadora Dra Epamig Cx P 351 Uberaba MG esterepamigbr5Doutoranda em Fitotecnia Bolsista Capes flavinha3010yahoocombr
RESUMOO melhoramento geneacutetico do cafeeiro tem incorporado
atraveacutes de cruzamentos ganhos geneacuteticos para produtividade eoutras caracteriacutesticas de interesse agronocircmico A introduccedilatildeo demeacutetodos biotecnoloacutegicos para auxiliar os programas demelhoramento geneacutetico tem-se mostrado bastante uacutetilprincipalmente em culturas perenes como eacute o caso do cafeeiroUm importante meacutetodo de propagaccedilatildeo in vitro de plantas deCoffea eacute a embriogecircnese somaacutetica direta Objetivou-se com estetrabalho avaliar os efeitos de diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3 no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos
diretos de C arabica L cv Rubi Os tratamentos foramconstituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH
4NO
3 (0 4125 825
12375 e 1650 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3 (0 475
950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS O experimentofoi mantido por 150 dias em sala de crescimento com irradiacircnciaem torno de 32 igraveM m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas comtemperatura de 25 plusmn 1oC As variaacuteveis avaliadas foram nuacutemero defolhas comprimento da parte aeacuterea e massa fresca da parte aeacutereaOs resultados indicaram que a utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO
3combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de NH
4NO
3 como a mais
indicada para o desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos de Carabica L Os resultados apontam ainda que a ausecircncia denitrogecircnio promove o maior peso das placircntulas
Termos para indexaccedilatildeo Nitrogecircnio cafeacute cv Rubi Coffeaarabica
ABSTRACTCoffee breeding programs have incorporated using
artificial crossings genetic benefits for productivity and othercharacteristics of agronomic interest The introduction ofbiotechnology methods to improve genetic breeding programshas demonstrated to be useful mainly in perennial cultures ascoffee species An important method of in vitro propagation ofCoffea plants is somatic embryogenesis Therefore the objectiveof this work was to obtain the most adequate combinations ofculture medium components for plantlets growth The influence
of NH4NO
3 (0 4125 825 12375 and 1650 mg L-sup1) of MS
formulation x KNO3
(0 475 950 1425 and 1900 mg L-sup1) MSformulation were tested for the development of somatic embryosThe experiments were maintained in a growth room under lightintensity of 32 microMol m-2 s-1 photoperiods of 16 hours andtemperature of 25 plusmn 1o C The characteristics evaluated were leafnumber shoot length and shoot fresh matter The results indicatedthat the use of 950 mgL-sup1 KNO
3 combined with 1155 to 2475
mg L-sup1 NH4NO
3 is the most indicated for the development of
somatic embryos of C arabica L The absence of nitrogenpromotes the largest weight of plantlets
Index Terms Nitrogen Coffee cv Rubi Coffea arabica
INTRODUCcedilAtildeO
O nitrogecircnio eacute um dos elementos necessaacuterios e
ativos para diversos processos metaboacutelicos da planta pois
eacute constituinte de vaacuterias biomoleacuteculas essenciais tais como
aminoaacutecidos aacutecidos nucleacuteicos enzimas e proteiacutenas e
juntamente com a sacarose eacute o principal componente em
quantidade no meio de cultura
O nitrogecircnio difere dos demais macronutrientes por
apresentar-se na forma de caacutetion (amocircnio) e acircnion (nitrito
e nitrato) contribuindo de forma efetiva tanto no
metabolismo celular como na regulaccedilatildeo do seu potencial
osmoacutetico Atua como agente tamponante e favorece a
absorccedilatildeo de outros iacuteons presentes no meio (NAGAO et
al 1994) A vantagem dos tecidos vegetais receberem pelo
menos parte do nitrogecircnio sob uma forma prontamente
reduzida eacute que haveria uma diminuiccedilatildeo no gasto de energia
REZENDE J C de et al106
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
que ocorre na conversatildeo enzimaacutetica de nitrato a amocircnio
(GEORGE et al 1987) O efeito dessas diferentes formas
inorgacircnicas separadamente pode promover ou natildeo o
crescimento e desenvolvimento de determinadas espeacutecies
de plantas enquanto a combinaccedilatildeo das duas estimula o
crescimento de muitas espeacutecies in vitro (CALDAS et al
1998)
De acordo com George amp Sherrington (1984) o
desenvolvimento e morfogecircnese em cultura de tecidos satildeo
acentuadamente influenciados pela disponibilidade de
nitrogecircnio e pela forma como o mesmo eacute fornecido Alta
concentraccedilatildeo de sais do meio MS comparada a outros
meios especificamente dos niacuteveis de amocircnio (-NH4) e
nitrato (-NO3) pode ser criacutetica no processo de morfogecircnese
e crescimento (SAKUTA amp KOMAMINE 1987) estando
pois a demanda energeacutetica fornecida pelo metabolismo de
carboidratos e a assimilaccedilatildeo destes iacuteons diretamente
relacionada com o sucesso da cultura in vitro
Sato (1994) estudou o efeito de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio sobre a propagaccedilatildeo de trecircs
diferentes clones de geacuterbera de vaso (Gerbera jamesonii
Adlam) e concluiu que a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio do
MS completo inibe a regeneraccedilatildeo de brotos enquanto a
utilizaccedilatildeo de concentraccedilotildees diluiacutedas favorece a induccedilatildeo
dos brotos Bespalhok et al (1992) estudaram a
concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia na induccedilatildeo de brotos
em estevia (Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni) e
constataram que a concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia do
MS eacute toacutexica Obteve maior induccedilatildeo de brotaccedilotildees usando
frac14 de nitrato de amocircnia no meio MS Por outro lado Tadesse
et al (2000) verificaram que a accedilatildeo de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio promoveu um incremento
inicial da aacuterea foliar das placircntulas formadas mas ocasionou
efeitos relativamente negativos no aumento da aacuterea foliar
das placircntulas durante a aclimatizaccedilatildeo
O nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio sustenta
boa taxa de crescimento em algumas culturas como roseira
(Rosa gallica L) (NASH amp DAVIES 1972) e trigo (Triticum
que natildeo crescem bem com o nitrato no meio como por
exemplo o arroz (Oriza sativa L) (SARGENT amp KING 1974
YATAZAWA amp FURUHASHI 1968)
Grewal et al (1980) citados por Grattapaglia amp
Machado (1990) verificaram em culturas de eucalipto
(Eucaliptus citriodora Hook) que ao se reduzir pela
metade as concentraccedilotildees de nitrato de amocircnio e de
potaacutessio do meio MS a taxa de multiplicaccedilatildeo dobrava
Essa mesma concentraccedilatildeo proporcionou o melhor
comprimento da parte aeacuterea em embriotildees zigoacuteticos de C
arabica L (RIBEIRO 2001)
A maioria das plantas prioriza a absorccedilatildeo de NH4
+ a
NO3
- poreacutem eacute necessaacuterio encontrar o balanccedilo ideal de
NH4+NO
3- para o oacutetimo crescimento in vitro (SATO 1994)
Objetivou-se com este trabalho estudar os efeitos de
diferentes concentraccedilotildees de NH4NO
3 e KNO
3 do meio MS
no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos diretos de C
arabica L cv Rubi
MATERIAL E MEacuteTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos Vegetais do Departamento de
Agricultura da Universidade Federal de Lavras MG Foram
utilizados como explantes embriotildees de C arabica cv
Rubi provenientes da embriogecircnese somaacutetica direta Os
embriotildees somaacuteticos foram induzidos em meio MS
(MURASHIGE amp SKOOG 1962) com 50 dos sais
acrescido de 20 mg L-1 de GA3 6 mg L-1 de cinetina 8 mg
L-1 de ANA 100mg L-1 de caseiacutena hidrolisada e 400mg L-
1 de extrato de malte Os tubos de ensaio foram mantidos
durante 150 dias sob condiccedilotildees de obscuridade com
temperatura de 25 plusmn 1oC Os embriotildees somaacuteticos induzidos
nesse processo foram individualizados em tubos de
ensaio e mantidos durante 30 dias em meio MS
objetivando a homogeneizaccedilatildeo do material para a
realizaccedilatildeo deste experimento
No preparo do meio foram utilizadas soluccedilotildees-
estoque armazenadas em frascos de vidro escuro a
temperaturas em torno de 5degC Os tratamentos foram
constituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH4NO
3 (0 475
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 107
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
950 1425 e 1900 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3
(0 475 950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS
O meio foi solidificado com 5g L -1 de aacutegar e o pH
ajustado para 58 plusmn 01 utilizando NaOH 05 e 01 N ou HCl
05 N e 01 N e distribuiacutedo em tubos de ensaio cada um
recebendo 15 mL do mesmo Os tubos foram vedados com
tampas plaacutesticas transluacutecidas antes do processo de
autoclavagem a 121degC e 1 atm por 20 minutos Apoacutes o
resfriamento o meio foi levado agrave cacircmara de fluxo laminar
desinfestada com aacutelcool 70 (etanol) onde foi feita a
inoculaccedilatildeo dos explantes
Os tubos foram vedados com parafilme e mantidos
em sala de crescimento com irradiacircncia em torno de 32 igraveM
m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas com temperatura de 25 plusmn
1oC O delineamento experimental utilizado foi inteiramente
casualizado com quatro repeticcedilotildees e trecircs tubos por
parcela cada tubo contendo um explante
Aos 150 dias apoacutes a instalaccedilatildeo foram avaliadas as
variaacuteveis nuacutemero de folhas comprimento da parte aeacuterea e
peso da mateacuteria fresca das placircntulas Os valores observados
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia para dados
desbalanceados Utilizou-se o procedimento GLM
disponiacutevel no aplicativo computacional SASreg (SAS
INSTITUTE 1990)
Em situaccedilotildees em que a anaacutelise de variacircncia natildeo
confirmou a normalidade dos resiacuteduos para o comprimento
da parte aeacuterea e peso da mateacuteria fresca os dados sofreram
uma transformaccedilatildeo para garantir que essa pressuposiccedilatildeo
fosse atendida As transformaccedilotildees utilizadas foram x e5 1 02x respectivamente A variaacutevel nuacutemero de folhas
atendeu agraves pressuposiccedilotildees de normalidade A anaacutelise de
variacircncia do peso da mateacuteria fresca foi realizada por meio
do meacutetodo dos quadrados miacutenimos ponderados pelo
inverso das variacircncias de cada tratamento uma vez que
esses apresentaram heterogeneidade de variacircncias
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Houve efeito significativo das concentraccedilotildees de
NH4NO
3 e KNO
3 para o nuacutemero de folhas e peso da mateacuteria
fresca das placircntulas (Tabela 1) Observa-se que a interaccedilatildeo
entre os fatores mostrou-se significativa em relaccedilatildeo a todas
as caracteriacutesticas avaliadas a 5 de probabilidade pelo
teste F
Nuacutemero de folhas
Analisando-se as curvas de regressatildeo observa-
se na Figura 1 que houve formaccedilatildeo de maior nuacutemero
de folhas quando foram adicionados ao meio de cultura
1900 mg L-sup1 de KNO3
combinado com 12985 mg L-sup1 de
NH4NO
3 (meacutedia de 1163 folhas) Com a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 87879 mg L-sup1 de NH
4NO
3
pocircde-se observar a formaccedilatildeo meacutedia de 1001 folhas
Dessa forma como a diferenccedila eacute miacutenima justifica-se a
utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 com o objetivo de
reduccedilatildeo dos custos
TABELA 1 Anaacutelise de variacircncia dos dados relativos ao nuacutemero de folhas (NF) comprimento da parte aeacuterea (CPA) epeso da mateacuteria fresca (PMF) das placircntulas de Coffea arabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3
QM Fonte de variaccedilatildeo GL
NF CPA (cm) PMF (g)
NH4NO3 4 458337 01152 17450
KNO3 4 230014 00837 22117
NH4NO3 x KNO3 16 20447 01215 15139
Erro 135 91386 00584 05871
CV () 5162 2357 912
Significativo a 5 pelo teste F
REZENDE J C de et al108
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
FIGURA 1 Nuacutemero folhas de placircntulas de Coffea arabicacv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 combinadas com 0950 e 1900 mg L-sup1 de KNO
3
Contudo concentraccedilotildees acima de 87879 mg L-sup1 de
NH4NO
3 combinadas com 950 mg L-sup1 de NH
4NO
3 ou na
ausecircncia desse provocaram reduccedilatildeo no nuacutemero de folhas
possivelmente por toxidez causada pelo amocircnio devido agrave
sua concentraccedilatildeo mais elevada em relaccedilatildeo ao nitrato no
meio de cultura Quando o nitrogecircnio eacute fornecido somente
na forma de sais inorgacircnicos de amocircnio as ceacutelulas in vitro
apresentam sintomas de toxidez (GAMBORG amp SHYLUK
1970 YATAZAWA amp FURUHASHI 1968) demonstrando
assim a necessidade de combinaccedilatildeo dessas duas fontes
no meio de cultura
Segundo Raab amp Terry (1994) em virtude do grande
requerimento de energia fotoquiacutemica para a reduccedilatildeo
bioquiacutemica do nitrato era de se esperar que as plantas
crescessem melhor em meios com amocircnia do que em meios
com nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio no entanto
observou-se o inverso Esses mesmos autores apontam
como causa desse paradoxo o efluxo de iacuteons H+ que ocorre
devido agrave absorccedilatildeo do iacuteon amocircnio provocando acidificaccedilatildeo
do meio impedindo a absorccedilatildeo de nutrientes Segundo
Hashimoto et al (1992) a presenccedila de amocircnio in vitro
poderia acidificar o meio favorecendo a siacutentese de
carbamatos e tambeacutem a atividade de anidrase carbocircnica
Esses autores conseguiram diminuir o efeito toacutexico do
amocircnio apenas diminuindo a concentraccedilatildeo de nitrato de
amocircnio no meio MS
O nuacutemero de folhas obtidas na ausecircncia de KNO3
foi inferior quando comparado aos demais tratamentos (a
maior meacutedia observada foi 658 folhas na concentraccedilatildeo de
37626 mg L-sup1 de NH4NO
3) evidenciando assim a
importacircncia desse sal para o desenvolvimento de folhas
em placircntulas de C arabica cv Rubi Os resultados obtidos
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 109
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
concordam em parte com os obtidos por Ribeiro (2001)
trabalhando com embriotildees zigoacuteticos de C arabica que
recomenda a adiccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de NH4NO
3 e KNO
3 no
meio de cultura para comprimento da parte aeacuterea
Observa-se ainda que utilizando-se a concentraccedilatildeo
de 1425 mg L-sup1 de KNO3 haacute reduccedilatildeo no comprimento da
parte aeacuterea das placircntulas ateacute a concentraccedilatildeo de 42091 mg
L-sup1 de NH4NO
3 havendo a partir desse ponto incremento
no desenvolvimento da variaacutevel ateacute a concentraccedilatildeo de
149131 mg L-sup1 de KNO3 (132 cm dados transformados)
Esses resultados demonstram que as respostas de
interaccedilatildeo entre fontes de nitrogecircnio variam em funccedilatildeo das
concentraccedilotildees utilizadas
Na ausecircncia de NH4NO
3 em ambas as
concentraccedilotildees estudadas o comprimento da parte aeacuterea
foi inferior (09 e 097 cm respectivamente nas
concentraccedilotildees de 950 e 1425 mg L-sup1 de KNO3) evidenciando
mais uma vez a importacircncia desse sal no desenvolvimento
de embriotildees em C arabica cv Rubi
Peso da mateacuteria fresca
FIGURA 3
Peso da mateacuteria fresca de placircntulas de Carabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildeesde NH
4NO
3 combinadas com 0950 mg L-sup1 de KNO
3
6
65
7
75
8
85
9
95
10
105
0 4125 825 12375 1650NH4NO3 (mg L-1)
Peso
da
mat
eacuteria
fre
sca
(g)
Y KNO3 475 Y KNO3 1425 Y KNO3 1900 = ns Y KNO3 0 = 968811 - 006491X + 000061019X2 R2 = 09017 Y KNO3 950 = 800708 + 002278X 000022883X2 R2 =09053
Na ausecircncia de KNO3 houve decreacutescimo do peso
da mateacuteria fresca associado ao incremento das
concentraccedilotildees de NH4NO
3 ateacute a concentraccedilatildeo de 91775
mg L-sup1 de NH4NO
3 (Figura 3) observando-se aumento do
peso da mateacuteria fresca a partir deste ponto Para a
concentraccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 ocorreu aumento do
peso da mateacuteria fresca ateacute a concentraccedilatildeo de 100221 mg L-
sup1 de NH4NO
3 Poreacutem o maior valor foi registrado na
ausecircncia de ambos os sais estudados (976 g)
Da mesma forma Grossi (2000) trabalhando com
bromeacutelia observou que a menor concentraccedilatildeo de
nitrogecircnio promoveu maior produccedilatildeo de massa fresca
Kanashiro et al (2007) observou decreacutescimo linear na
massa fresca de folhas de bromeacutelia agrave medida que se
aumentou a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio (entre 75 e 120
mM) sendo que para cada mM de nitrogecircnio acrescido ao
meio houve um decreacutescimo de 00018 g na massa fresca
Provavelmente o cultivo em concentraccedilotildees maiores de
nitrogecircnio tenderia a diminuir a produccedilatildeo de massa fresca
como foi observado no presente experimento
CONCLUSOtildeES
Com base no crescimento da parte aeacuterea e na
formaccedilatildeo do maior nuacutemero de folhas a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de
NH4NO
3 eacute mais indicada para o desenvolvimento de
embriotildees somaacuteticos de Coffea arabica L Os resultados
indicam ainda que a ausecircncia de nitrogecircnio promove o
maior peso das placircntulas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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NORMAS PARA PUBLICACcedilAtildeO DE ARTIGOS E COMUNICACcedilOtildeES CIENTIacuteFICAS
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagationeacute editada semestralmente pela Editora da UniversidadeFederal de Lavras (Editora UFLA) publica artigoscientiacuteficos e comunicaccedilotildees cientiacuteficas da aacuterea de culturade tecidos de plantas elaborados por membros dacomunidade cientiacutefica nacional e internacional Natildeo eacutecobrada taxa para publicaccedilatildeo de trabalhos desde que umdos autores seja soacutecio e esteja em dia com a ABCTP(Associaccedilatildeo de Cultura de Cultura de Tecidos de Plantas)Eacute condiccedilatildeo fundamental que os artigoscomunicaccedilotildeessubmetidos agrave apreciaccedilatildeo da revista Plant Cell Culture ampMicropropagation natildeo foram e nem seratildeo publicadossimultaneamente em outro lugar Com a aceitaccedilatildeo do artigopara publicaccedilatildeo os editores adquirem amplos e exclusivosdireitos sobre o artigo para todas as liacutenguas e paiacuteses Apublicaccedilatildeo de artigoscomunicaccedilotildees dependeraacute daobservacircncia das Normas Editoriais dos pareceres do CorpoEditorial e da Comissatildeo ad hoc Todos os pareceres tecircmcaraacuteter sigiloso e imparcial e tanto os autores quanto osmembros do Corpo Editorial eou Comissatildeo ad hoc natildeoobtecircm informaccedilotildees identificadoras entre si
Os conceitos e afirmaccedilotildees contidos nos artigos ecomunicaccedilotildees seratildeo de inteira responsabilidade do(s)autor(es)
1 SUBMISSAtildeO
Cada trabalho deveraacute ter no maacuteximo 14 paacuteginas ejunto do mesmo deveraacute ser encaminhado ofiacutecio dirigido aoEditor Chefe da revista solicitando a publicaccedilatildeo do artigo
Esse ofiacutecio deveraacute conter o pedido de apreciaccedilatildeona revista ao editor chefe a declaraccedilatildeo de ser um trabalhooriginal e natildeo ter sido submetido a nenhuma outra revistaser assinado por todos os autores constar o endereccedilocompleto telefone e e-mail de todos Qualquer inclusatildeoexclusatildeo ou alteraccedilatildeo na ordem dos autores deveraacute sernotificada mediante ofiacutecio assinado por todos os autores(inclusive do autor excluiacutedo)
Originais quatro vias impressas e uma via em CDR comtexto e ilustraccedilotildees e graacuteficos Das 4 vias impressas apenas1 deve conter os nomes completos dos autores e rodapeacutena primeira paacuteginaProcessador de texto Word for Windows (version 98 2000XP ou 2003)Redigido em portuguecircs inglecircs ou espanholEspaccedilamento do texto Duplo Margens esquerda (3cm)direita (2cm) inferior e superiores (25cm) Cabeccedilalho eRodapeacute (25cm)Papel formato A4Fonte Times New Roman tamanho 12Nuacutemero de paacuteginas ateacute 14 paacuteginas numeradasconsecutivamente incluindo as ilustraccedilotildees
Tabelas devem fazer parte do corpo do artigo e serapresentadas no moacutedulo tabela do Word O tiacutetulo deveficar acimaGraacuteficos Figuras e Fotografias devem ser apresentadosem preto e branco niacutetidos e com contraste escaneadosinseridos no texto apoacutes a citaccedilatildeo dos mesmos e tambeacutemem um arquivo agrave parte salvos em extensatildeo tif ou jpg com resoluccedilatildeo de 300 dpi Os graacuteficos devem vir tambeacutemem excel com letra Times New Roman tamanho 10 semnegrito sem caixa de textos e agrupados em arquivo agraveparteSiacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitos emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker sem perda de suas formas originais
2 ESTRUTURA E ORGANIZACcedilAtildeO
21 O artigo cientiacutefico deve ser apresentado na seguintesequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfulas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumo
Index terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
INTRODUCcedilAtildeO
Deve apresentar uma visatildeo concisa do estado atualdo conhecimento sobre o assunto que o manuscritoaborda e enfatizar a relevacircncia do estudo sem constituir-se em extensa revisatildeo e na parte final os objetivos dapesquisa Deve incluir a revisatildeo de literatura
MATERIAL E MEacuteTODOS
Esta seccedilatildeo pode ser dividida em subtiacutetulosindicados em negrito
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Podem ser divididas em subseccedilotildees com subtiacutetulosconcisos e descritivos e conter tabelas e figuras
CONCLUSOtildeES
Finalizar com os resultados de acordo com osobjetivos do trabalho
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e naseccedilatildeo proacutepria
22 A comunicaccedilatildeo cientiacutefica deve ser apresentada naseguinte sequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfluas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumoIndex terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
Texto sem subdivisatildeo poreacutem com introduccedilatildeo material emeacutetodos resultados e discussatildeo (podendo conter tabelase graacuteficos e conclusatildeo subentendidas
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e na seccedilatildeoproacutepria
3 CASO O ARTIGO CONTENHA FOTOGRAFIASGRAacuteFICOS FIGURAS SIacuteMBOLOS E FOacuteRMULASESSAS DEVERAtildeO OBEDECER AgraveS SEGUINTESNORMAS
31 Fotografias deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpi
32 Figuras deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpiAs figuras deveratildeo ser elaboradas com letra Times NewRoman tamanho 10 sem negrito sem caixa de textos eagrupadas
33 Graacuteficos deveratildeo ser inseridos apoacutes citaccedilatildeo dosmesmos dentro do proacuteprio texto elaboradopreferencialmente em Excel com letra Times New Romantamanho 10 sem negrito sem caixa de textos e agrupadas
34 Siacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitas emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker (ex MathType Equation) sem perda de suasformas originais
OBS A formataccedilatildeo correta eacute parte imprescindiacutevel para queo trabalho seja devidamente protocolado Caso este natildeoesteja nas normas o mesmo seraacute recusado
4 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS as referecircnciasbibliograacuteficas devem ser citadas conforme a NBR60232002da ABNT
A exatidatildeo das referecircncias constantes da listagem e acorreta citaccedilatildeo no texto satildeo de responsabilidade do(s)autor(es) do artigo
41 Orientaccedilotildees gerais- Deve-se apresentar todos os autores do documentocientiacutefico (fonte)- O nome do perioacutedico deve ser descrito por extenso natildeodeve ser abreviado- Em todas as referecircncias deve-se apresentar o local depublicaccedilatildeo (cidade) a ser descrito no lugar adequado paracada tipo de documento- As referecircncias devem ser ordenadas alfabeticamente
42 Exemplificaccedilatildeo (tipos mais comuns)
ARTIGO DE PERIOacuteDICO
VIEIRA R F RESENDE M A V de Eacutepocas de plantio deervilha em Patos de Minas Uberaba e Janauacuteba MinasGerais Ciecircncia e Agrotecnologia Lavras v 24 n 1 p 74-80 janmar 2000
LIVRO
a) livro no todo
STEEL R G D TORRIE J H Principles andprocedures of statistics New York McGraw-Hill Bookl960 481 p
b) Parte de livro com autoria especiacutefica
FLEURY J A Anaacutelise ao niacutevel de empresa dos impactosda automaccedilatildeo sobre a organizaccedilatildeo da produccedilatildeo de trabalhoIn SOARES R M S M Gestatildeo da empresa Brasiacutelia IPEAIPLAN 1980 p 149-159
c) Parte de livro sem autoria especiacutefica
MARTIM L C T Nutriccedilatildeo de bovino de corte emconfinamento In ______ Confinamento de bovino decorte 2 ed Satildeo Paulo Nobel 1986 cap 3 p 29-89
DISSERTACcedilAtildeO E TESE
GONCcedilALVES R A Preservaccedilatildeo da qualidade tecnoloacutegicade trigo (Triticum aestivum L) e controle de Rhyzoperthadominica (F) durante o armazenamento em atmosferacontrolada com Co2 e N2 1997 52 f Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Ciecircncia dos Alimentos) Universidade Federal deLavras Lavras 1997
MATIOLI G P Influecircncia do leite proveniente de vacasmastiacuteticas no rendimento de queijo frescal 2000 55 pDissertaccedilatildeo (Mestrado em Ciecircncias dos Alimentos) -Universidade Federal de Lavras Lavras 2000
Nota A folha eacute composta de duas paacuteginas anverso everso Alguns trabalhos como teses e dissertaccedilotildees satildeoimpressos apenas no anverso e neste caso indica-se f(ABNT NBR60232002 p 18)
TRABALHOS DE CONGRESSO E OUTROS EVENTOS
SILVA J N M Possibilidades de produccedilatildeo sustentada demadeira em floresta densa de terra firme da Amazocircniabrasileira In CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO 61990 Campos do Jordatildeo Anais Campos do Jordatildeo SBSSBEF 1990 p 39-45
DOCUMENTOS ELETROcircNICOS
As obras consultadas online satildeo referenciadas conformenormas especiacuteficas para cada tipo de documento(monografia no todo e em parte trabalho apresentado emevento artigo de perioacutedico artigo de jornal etc)acrescidas de informaccedilotildees sobre o endereccedilo eletrocircnicoapresentado entre braquetes (lt gt) precedido da expressatildeo
Disponiacutevel em e da data de acesso ao documentoprecedida da expressatildeo Acesso em Nota Natildeo se recomenda referenciar material eletrocircnico decurta duraccedilatildeo nas redes (ABNT NBR60232000 p 4)Segundo padrotildees internacionais a divisatildeo de endereccediloeletrocircnico no fim da linha deve ocorrer sempre apoacutes barra ()
Monografia (acesso online)
a) livro no todo
TAKAHASHI T (Coord) Tecnologia em foco BrasiacuteliaSocinfoMCT 2000 90 p Disponiacutevel em lthttpwwwsocinfoorgbrgt Acesso em 22 ago 2000
b) parte de livro
TAKAHASHI T Mercado trabalho e oportunidades In______ Sociedade da informaccedilatildeo no Brasil livro verdeBrasiacutelia SocinfoMCT 2000 cap 2 p 13-24 Disponiacutevelem lthttpwwwsocinfogovbrgt Acesso em 22 ago 2000
c) Parte de congresso seminaacuterio etc
GIESBRECHT H O Avaliaccedilatildeo de desempenho deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica a experiecircncia deprojeto excelecircncia na pesquisa tecnoloacutegica InCONGRESSO ABIPTI 2000 Fortaleza Gestatildeo deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica Fortaleza Nutec 2000Disponiacutevel em lthttpwwwabiptiorgbrgt Acesso em01 dez 2000
d) Tese
SILVA E M Arbitrariedade do signo a liacutengua brasileirade sinais (LIBRAS) 1997 144 p Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Linguumliacutestica Aplicada e Estudo de Liacutengua) - PontifiacuteciaUniversidade Catoacutelica de Satildeo Paulo Satildeo Paulo 1997Disponiacutevel em lthttpwwwterracombrvirtualbooksfreebookportdid teseshtmgt Acesso em 28 nov 2000
Artigo de perioacutedico (acesso online)
RESENDE A M G Hipertexto tramas e trilhas de umconceito contemporacircneo Informaccedilatildeo e Sociedade Recifev 10 n 1 2000 Seccedilatildeo Educaccedilatildeo Disponiacutevel em lthttpwwwinformaccedilatildeoesociedadeufpbbrgt Acesso em 30 nov2000
CITACcedilAtildeO PELO SISTEMA ALFABEacuteTICO (AUTOR-DATA) (conforme ABNT NBR105202002)Dois autores - Steel amp Torrie (1960) ou (STEEL amp TORRIE1960)Trecircs ou mais autores - Valle et al (l945) ou (VALLE et al1945)Obs Quando forem citados dois autores de uma mesmaobra deve-se separaacute-los pelo sinal amp (comercial)
5 O EDITOR CHEFE NOTIFICARAacute O AUTOR DORECEBIMENTO DO ORIGINAL E POSTERIORMENTE
O INFORMARAacute SOBRE SUA PUBLICACcedilAtildeO OSARTIGOS QUE NECESSITAREM DE MODIFICACcedilOtildeESSERAtildeO DEVOLVIDOS AO AUTOR PARA A DEVIDAREVISAtildeO
6 OS ARTIGOS NAtildeO APROVADOS SERAtildeODEVOLVIDOS
7 OS ARTIGOS SERAtildeO PUBLICADOS EM ORDEMDE APROVACcedilAtildeO
8 O NAtildeO-CUMPRIMENTO DESSAS NORMASIMPLICARAacute NA DEVOLUCcedilAtildeO DO ARTIGO AOAUTOR
9 OS CASOS OMISSOS SERAtildeO RESOLVIDOS PELACOMISSAtildeO EDITORIAL
10 O ARTIGO DEVERAacute SER ENVIADO PARA
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepartamento de BiologiaSetor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 3037CEP 37200-000Lavras MG
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Plant Cell Culture amp Micropropagation asemestral journal edited by Editora UFLA of theUniversidade Federal de Lavras publishes scientificarticles and communications in the area of plant tissueculture elaborated by researchers of the national andinternational scientific community One of the authors mustbe associated and have paid all charges required by theABCTP (Plant Tissue Culture Association) in order to betax free for publication in Plant Cell Culture ampMicropropagation Submission of a manuscript implies thatit is neither under consideration for publication elsewherenor has appeared previously in part or in whole Onacceptance for publication authors assign to the Editorsfull copyright of the manuscript in all languages andcountries Publications will depend on editorial rules andon the review of experts and ad hoc commission Reviewerand editorial opinions will be anonymously communicatedto authors
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1 SUBMISSION
The manuscript must present a maximum of 14pages At the time of submission a cover letter must besent with the manuscript copies to the Editor requestingpublication of the article This cover letter must be signedby all authors
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Original Four copies and CD with text and illustrationsOnly one of the 4 printed copies must contain the fullnames of the authors and footnote in the first pageFormat Word for Windows (version 98 2000 XP ou 2003)Spacing of the text Double Margin on the left hand sideand 20 cm margin on the right hand side 25 cm upper andlower margin 25 cm for the heading and 25 cm for thefootnotePaper A4 formatSource Times New Roman size 12Number of pages up to 14 pages including the illustrationsTables Tables should be part of the body of the paper andthey must be presented in Word or Excel The title shouldbe above and be presented in the language in which thearticle was written and in English The vertical linesseparating the columns should not appearGraphsFiguresPhotographs must be presented in blackand white clear and with contrast scanned inserted in
the text after citation and also in a separate file (on thesame diskette as the article) saved in extension tif orjpg with resolution of 300 dpi The title should be below
and presented in the language in which the article waswritten and in EnglishSymbols and Chemical Formula must be presented usinga word processor that permits a format Page Maker
2 STRUCTURE AND ORGANIZATION
21 The article should be presented in the followingsequence
TITLE
In English language containing no more than 15 words incapital letters and bold
AUTHORS
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copies Footnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTshould be informative and condensed and should
explain the objectives material and methods results andconclusion of the work in a maximum of 250 words all writtenin one paragraphFor articles written in English the abstract should also bepresented in Portuguese
Key words minimum of three and maximum of five Theyshould not repeat words that are already in the title Thesemay include phrases as well as individual words and shouldbe separate by commasFor articles written in English the key-words should alsobe presented in Portuguese
INTRODUCTION
Should present a concise vision of the current level ofknowledge that has been achieved within the subject areathat the paper will discuss It should neither give anextensive review nor should it include details about theresults and discussion It should clearly indicate theobjectives of the research that was carried out
MATERIAL AND METHODS
This section can contain subdivisions with subtitles inbold print
RESULTS AND DISCUSSION
This section can have subsection which begins withconcise descriptive titles in bold print
CONCLUSIONS
Finishing agree of objectives of work
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
22 The Communication should be presented in thefollowing sequence
TITLE
Sufficiently clear conspicuous and complete withoutsuperfluous words It is recommended to initiate with theterm that represent the most important aspect with otherterms in decreasing of importance
TITLE IN PORTUGUESE
FULL NAME(S) OF THE AUTHOR(S)
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copiesFootnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTWritten continuously without paragraph It must
not exceed 250 words Index terms must be enclosed afterthe abstract using terms different from those used in thetitle and separated by comma
Index terms (3 to 5) must be described in capital and smallletters and express the content of the article
ABSTRACT AND INDEX TERMS IN PORTUGUESE
Text with no division but must include introductionmaterial and methods results and discussion andconclusion (it may include tables and figures)
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
3 PHOTOGRAPHS GRAPHS FIGURES SYMBOLSOR FORMULA CONTAINED IN THE ARTICLE SHOULDOBEY THE FOLLOWING RULES
31 Photographs must be presented in black and whiteclear and with contrast inserted in the text after their citationand also in a separate file (on the same diskette as thearticle) saved in extension TIFF
or JPEG withresolution of 300 dpi
32 Figures must be presented in black and white clearand with contrast inserted in the text after their citation andalso in a separate file (on the same diskette as the article)saved in extension TIFF
or JPEG with resolution of300 dpi They must be elaborated using Times New Romanfont size 10 without bold without text box and arranged
33 Graphs must be inserted in the text after their citationelaborated preferentially in Excel using Times New Romanfont size 10 without bold
34 Symbols and Chemical Formula must be presentedusing a word processor that permits a format for Page Maker(ex MathType Equation) without loss of its original form
4 REFERENCES references must be cited according toNBR60232002 of ABNT All references and their correctcitation in the text are of the entire responsibility of theauthor(s)
5 THE BRAZILIAN ASSOCIATION OF PLANT TISSUECULTURE (ABCTP) WILL INFORM THE AUTHOR THERECEIPT OF THE ORIGINAL MANUSCRIPT ANDEVENTUALLY IT WILL ALSO SEND INFORMATIONREGARDING ITS PUBLICATION MANUSCRIPTSTHAT REQUIRE MODIFICATIONS WILL BERETURNED TO THE AUTHOR FOR THE RESPECTIVEREVISION ANDCORRECTIONS
6 MANUSCRIPTS NOT APPROVED WON T BERETURNED TO THE AUTHOR
7 ARTICLES WILL BE PUBLISHED ACCORDING TOTHE ORDER OF RECEIPT AND APPROVAL
8 IF ANY OF THESE RULES ARE NOT ATTENDED THEMANUSCRIPT WILL BE RETURNED TO THE AUTHOR
9 THE NEGLECTFUL CASES WILL BE SOLVED BYTHE EDITORIAL COMMITTEE
10 MANUSCRIPTS SHOULD BE SENT TO THEFOLLOWING ADDRESS
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepto de Biologia - Setor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 303737200-000 Lavras MG BRAZIL
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica L concentraccedilotildees de NH4NO3 e de KNO3 no desenvolvimento de embriotildees Direct somatic embryogenesis of Coffea arabica L concentrations of NH4NO3 and KNO3 on the development of embryos Juliana Costa de Rezende Moacir Pasqual Samuel Pereira de Carvalho Ester Alice Ferreira Flavia Carvalho Santos 105
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 55
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
(Recebido em 17 de abril de 2008 e aprovado em 22 de julho de 2008)
ACLIMATIZACcedilAtildeO DE MUDAS MICROPROPAGADAS DE Heliconialingulata Ruiz amp Pav EM AMBIENTE PROTEGIDO EM FUNCcedilAtildeO
DA LAcircMINA DE IRRIGACcedilAtildeO1
ACCLIMATIZATION OF MICROPROPAGATED PLANTS OF Heliconia lingulata Ruiz ampPav IN PROTECTED ENVIRONMENTS AS A FUNCTION OF IRRIGATION DEPTH
BENITO MOREIRA DE AZEVEDO2 ELIANA LEE JORGE ROCHA3 THALES VINIacuteCIUS DE ARAUJO VIANA4ALBANISE BARBOSA MARINHO5 ANA CRISTINA PORTUGAL PINTO DE CARVALHO6
DENISE VIEIRA VASCONCELOS7
1Parte da dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade Federal do Cearaacute pelo primeiro autor para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem2Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC benitoazevedohotmailcom
3Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem (In memoacuteria)4Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC thalesufcbr
5Doutora em Produccedilatildeo Vegetal Pesquisadora CNPqFUNCAP albanisebmgmailcom6Doutora Embrapa Agroinduacutestria Tropical Cx P l 3761 60511-110 Fortaleza CE cristinacnpatembrapabr7Engenheira Agrocircnoma Mestre Universidade Federal do CearaacuteUFC denisevasconceloshotmailcom
RESUMOAs helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com sua beleza
e exotismo constituem uma das maiores riquezas da flora brasileiraEm decorrecircncia da alta demanda do mercado consumidor as mudasvecircm sendo produzidas em escala comercial por meio damicropropagaccedilatildeo uma teacutecnica importante da cultura de tecidosque apresenta diversas etapas A etapa de aclimatizaccedilatildeo eacute a fasemais criacutetica e importante pois se natildeo for bem executada podeproporcionar altos iacutendices de mortalidade e baixas taxas decrescimento e desuniformidade das plantas com consequumlentequeda na produccedilatildeo Para minimizar esse problema e atender agravesexigecircncias do mercado consumidor eacute preciso buscar informaccedilotildeesteacutecnicas e cientiacuteficas sobre o adequado manejo das plantas nafase de aclimatizaccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliaro efeito de distintas lacircminas de irrigaccedilatildeo na aclimatizaccedilatildeo demudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata Ruizamp Pav) A pesquisa foi conduzida em um ambiente protegidopertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical Fortaleza CE(3ordm44 S e 38ordm33 W) Foram analisadas quatro lacircminas de irrigaccedilatildeo1 2 3 e 4 mm de aacutegua As variaacuteveis agronocircmicas avaliadas nosexperimentos foram altura da planta nuacutemero de folhas e diacircmetrodo caule Os resultados dos experimentos evidenciaram o melhordesenvolvimento das mudas micropropagadas de helicocircniaquando irrigadas com lacircmina de 25 mm dia-1
Termos para indexaccedilatildeo Floricultura Heliconia lingulatamanejo de irrigaccedilatildeo
ABSTRACTHeliconias are beautiful and exotic ornamental plants of
the wealthy Brazilian flora Due to a high demand of theconsuming market plants are being produced in a commercial
scale using the technique of micropropagation In this techniqueacclimatization is the most important and critical phase forpromoting high rates of mortality reduced growth and plantuniformity which reduce its production The objective of thiswork was to evaluate the effect of different irrigation depth inthe acclimatization of micropropagated heliconia (Heliconialingulata) The experiments were in a protected environmentlocated at Embrapa Tropical Agroindustry Fortaleza CearaBrazil (3ordm44 S and 38ordm33 W) The agronomic variables evaluatedwere plant height leaf number and stem diameter The resultsshowed the best development of micropropagated heliconia plantsusing water depth of 25 mm day-1
Index terms floraculture Heliconia lingulata irrigationmanagement
INTRODUCcedilAtildeO
As helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com
sua beleza e exotismo assemelham-se a verdadeiras
esculturas lembrando em sua forma piracircmides bicos de
aves cascatas de flores pinhais ou cachos de banana As
helicocircnias constituem uma das maiores riquezas da flora
brasileira Atualmente sabe-se que o mercado internacional
tem proporcionado muitas oportunidades de negoacutecios para
os produtores dessas flores tropicais
A floricultura eacute uma atividade desenvolvida em
geral em ambientes protegidos estufas ou tuacuteneis plaacutesticos
AZEVEDO B M de et al56
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
combinando alta produtividade com maior qualidade
garantindo ao agricultor uma colheita satisfatoacuteria e
reduzindo ao maacuteximo as perdas por danos proporcionados
por variaccedilotildees climaacuteticas adversas (GONDIM et al 2004)
De acordo com Terceiro Neto et al (2004) uma etapa
importante na produccedilatildeo de flores e plantas ornamentais
estaacute relacionada agrave utilizaccedilatildeo de mudas de qualidade Nesse
contexto a produccedilatildeo de mudas atraveacutes da
micropropagaccedilatildeo surge como uma alternativa viaacutevel para
obtenccedilatildeo de mudas em escala comercial com alta qualidade
geneacutetica e fitossanitaacuteria em um curto espaccedilo de tempo
atendendo dessa forma agraves necessidades dos produtores
Dentre as etapas da micropropagaccedilatildeo pode-se destacar a
aclimatizaccedilatildeo que eacute a fase mais criacutetica e importante
A irrigaccedilatildeo eacute uma praacutetica de suma importacircncia no
processo de aclimatizaccedilatildeo jaacute que a aacutegua eacute um dos fatores
que mais limitam a produccedilatildeo das plantas Seu manejo ou
seja a quantidade de aacutegua e sua frequumlecircncia de aplicaccedilatildeo eacute
um fator fundamental para o estabelecimento e o adequado
desenvolvimento das mudas micropropagadas Para se
alcanccedilar todos os objetivos da praacutetica de irrigaccedilatildeo que
englobam a maximizaccedilatildeo da produccedilatildeo racionalizaccedilatildeo do
uso da matildeo-de-obra energia aacutegua e fertilizante e a
aplicaccedilatildeo correta da aacutegua eacute imprescindiacutevel adotar um
correto manejo desse sistema (PEREIRA et al 1997)
Para Pieter et al (2007) os efeitos de aplicaccedilotildees
excessivas ou deficitaacuterias satildeo irreversiacuteveis e variam de
acordo com a intensidade e tempo de duraccedilatildeo do
procedimento imposto Nesses casos os processos
fisioloacutegicos da planta relacionados ao crescimento satildeo
afetados e sob condiccedilotildees severas o deacuteficit pode provocar
a murcha permanente do vegetal Conforme a Embrapa
(2007) em regiotildees de calor intenso com inverno ameno
normalmente a exigecircncia das mudas por aacutegua em qualquer
fase de desenvolvimento eacute maior que em regiotildees de clima
temperado Por outro lado alguns tipos de substrato por
terem menor capacidade de retenccedilatildeo de aacutegua exigem que
se aplique mais aacutegua a cada irrigaccedilatildeo ou que se aumente a
frequumlecircncia das mesmas Eacute recomendaacutevel que as lacircminas
sejam aplicadas nas primeiras horas da manhatilde e ao
entardecer uma vez que irrigaccedilatildeo nas horas mais quentes
pode danificar as mudas principalmente quando
fertirrigadas (CESP 2000)
Para Bernardo et al (2005) eacute necessaacuterio conhecer o
comportamento da cultura em funccedilatildeo das diferentes
quantidades de aacutegua fornecidas e identificar as fases de
desenvolvimento de maior consumo de aacutegua e os periacuteodos
criacuteticos quando a falta ou o excesso provocaria quedas de
produccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliar o
efeito de lacircminas de irrigaccedilatildeo sobre o desenvolvimento de
mudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata
Ruiz amp Pav) em fase de aclimatizaccedilatildeo em ambiente
protegido
MATERIAL E MEacuteTODOS
O presente trabalho foi conduzido em um ambiente
protegido pertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical
no periacuteodo de fevereiro a abril de 2006 A aacuterea estaacute situada
no municiacutepio de Fortaleza Cearaacute com as coordenadas
geograacuteficas correspondentes agrave 3ordm44 S 38ordm33 W e 195 m
de altitude De acordo com a classificaccedilatildeo climaacutetica de
Koppen o clima da regiatildeo eacute do tipo Aw caracterizado
como clima tropical chuvoso de savana tropical com a
eacutepoca mais seca no inverno e maacuteximo de chuvas no veratildeo-
outono
O tuacutenel alto de cultivo forccedilado de formato
semicircular e orientaccedilatildeo leste-oeste foi instalado com as
seguintes dimensotildees 45 m de comprimento 5 m de largura
e 2 m de altura comportando aproximadamente uma aacuterea
de 225 msup2 e um volume de 357 m3 Toda a sua estrutura foi
completamente coberto por uma tela de sombreamento
para reduzir 50 da luminosidade
O sistema de irrigaccedilatildeo empregado foi do tipo
microaspersatildeo suspenso sendo constituiacutedo por um
conjunto motobomba uma linha principal uma linha de
derivaccedilatildeo e uma linha lateral de 10 m com emissores
espaccedilados de 24 m e a uma altura de 05 m das bandejas
Os microaspersores foram do tipo nebulizador modelo
Tietze com bocal violeta em posiccedilatildeo invertida a vazatildeo do
emissor era de 43 l h-1 na pressatildeo de 30 kgf cm-2
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 57
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
As mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata)
utilizadas nesse experimento foram obtidas atraveacutes do
processo de micropropagaccedilatildeo realizado no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos e Geneacutetica Vegetal da Embrapa
Agroinduacutestria Tropical Na ocasiatildeo do plantio as mudas
apresentavam-se completamente enraizadas e com alturas
variando de 26 a 35 cm
As plantas provenientes do material in vitro foram
retiradas dos frascos e suas raiacutezes lavadas em aacutegua
corrente para a retirada do excesso do meio de cultura
Apoacutes a lavagem as mudas foram colocadas em bandejas e
suas raiacutezes podadas com o auxiacutelio de uma tesoura com o
objetivo de uniformizar o material facilitar o plantio e
estimular o desenvolvimento de um sistema radicular mais
funcional
As mudas foram transplantadas para tubetes de
capacidade volumeacutetrica de 180 cm3 contendo o substrato
formado pela mistura poacute-de-coco seco + huacutemus de
minhoca + solo (PCS+H+S) na proporccedilatildeo de 111
misturado no Laboratoacuterio de Solos da Embrapa e sem
fornecimento de fertilizantes durante o periacuteodo
experimental Para promover o completo umedecimento
do substrato e aumentar a umidade relativa do ambiente
momentos antes da transferecircncia das mudas para os
tubetes o sistema de irrigaccedilatildeo foi acionado
proporcionando assim um ambiente favoraacutevel ao
estabelecimento das mudas Com os recipientes em seus
devidos lugares as mudas foram acondicionadas e
levadas em bandejas ateacute o tuacutenel alto de cultivo forccedilado
iniciando a etapa de plantio As mudas foram inseridas
numa profundidade meacutedia de 5 cm de forma que as raiacutezes
e a parte inicial do caule ficaram enterradas As mudas
foram transferidas para os respectivos substratos no dia
3 de fevereiro de 2006
Para promover melhores condiccedilotildees para o
estabelecimento das mudas do primeiro ao quadrageacutesimo
quinto dia apoacutes o transplantio (DAT) essas receberam
uma irrigaccedilatildeo padratildeo com a aplicaccedilatildeo de uma lacircmina
correspondente a 3 mm de aacutegua parcelada duas vezes ao
dia sendo uma aplicaccedilatildeo pela manhatilde iniciando-se
aproximadamente agraves 9 h e a outra agrave tarde a partir das 16 h
A partir do 45ordm DAT foi adotada a diferenciaccedilatildeo das lacircminas
de irrigaccedilatildeo
O delineamento experimental foi em blocos
casualizados composto por quatro tratamentos e cinco
repeticcedilotildees constituiacutedas por cinco fileiras verticais com
cinco plantas cada totalizando 25 plantas por tratamento
num total de 100 plantas por experimento Os tratamentos
consistiram de quatro niacuteveis de irrigaccedilatildeo equivalentes agraves
lacircminas de 10 (L1) 20 (L
2) 30 (L
3) e 40 (L
4) miliacutemetros de
aacutegua tambeacutem parcelada em duas aplicaccedilotildees diaacuterias agraves 9 h
e agraves 16h
Os dados foram coletados em duas ocasiotildees apoacutes
a diferenciaccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo A primeira coleta
de dados ocorreu em 04 de abril aos 60 dias apoacutes o
transplantio (DAT) e a segunda em 19 de abril (aos 75
DAT) As variaacuteveis analisadas foram nuacutemero de folhas
(NF) altura da planta (AP) e diacircmetro do caule (DC) O
nuacutemero de folhas foi contado visualmente em todas as
mudas transplantadas Todas as folhas foram consideradas
na contagem exceto as totalmente secas A altura da planta
foi medida a partir da base ateacute a abertura das folhas por
meio de um escaliacutemetro graduado em centiacutemetros
subdividido em miliacutemetros O diacircmetro do caule foi
mensurado com o auxiacutelio de um paquiacutemetro digital
graduado em centiacutemetros considerando a base do caule
como padratildeo de contagem
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos aplicativos Microsoft Office Excel e SISVAR
versatildeo 46 (FERREIRA 2003)
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os valores meacutedios mensais de temperatura do ar
umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidade
do vento a 2 m de altura registrados durante o experimento
pela estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade
Federal do Cearaacute (UFC) encontram-se na Tabela 1 cuja
temperatura meacutedia do periacuteodo foi de 23 ordmC e umidade relativa
meacutedia de 93 caracterizando um periacuteodo de temperaturas
amenas
AZEVEDO B M de et al58
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
TABELA 1 Valores meacutedios mensais de temperatura do ar umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidadedo vento a 2m de altura Fortaleza-CE 2006
Mecircs Temperatura (ordmC) U R () Rad solar global (W m-2) Vel do vento (m s-1)
Fevereiro 23 95 1329 173
Marccedilo 24 84 1291 125
Abril 23 99 1162 094
Fonte Estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade Federal do Cearaacute (UFC)
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Tanto o deacuteficit quanto o excesso hiacutedrico afetaram o
crescimento das mudas Isso pode ter ocorrido pelo fato
da deficiecircncia hiacutedrica ocasionar o fechamento dos
estocircmatos diminuindo a concentraccedilatildeo intracelular de CO2
e consequumlentemente gerando decreacutescimo na assimilaccedilatildeo
do mesmo (BERNARDO et al 2005) Jaacute o excesso hiacutedrico
ocasiona a falta de oxigecircnio que provoca a reduccedilatildeo da
fotossiacutentese e prejudica a conversatildeo da mateacuteria orgacircnica
pelos microorganismos em formas soluacuteveis que a planta
possa reutilizar Esses fatores podem proporcionar um
TABELA 2 Anaacutelise de variacircncia das caracteriacutesticas de desenvolvimento altura da planta (AP) diacircmetro do caule(DC) e nuacutemero de folhas (NF) de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das laminas aplicadas aos 60e 75 DAT
(ns) natildeo significativo significativo a 5 de probabilidade pelo teste F
Quadrado meacutedio Variaacutevel FV GL
60 DAT 75 DAT
Bloco 4 03966ns 02946ns
Tratamento 3 23675 31348 AP
Resiacuteduo 12 03593 06279
Bloco 4 06407ns 02754ns
Tratamento 3 16645 41102 DC
Resiacuteduo 12 06222 06728
Bloco 4 04377 01829ns
Tratamento 3 03421 05204 NF
Resiacuteduo 12 0773 01081
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 59
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
menor crescimento das plantas devido agrave diminuiccedilatildeo da
eficiecircncia de transformaccedilatildeo de fotoassimilados nessas
condiccedilotildees (REGO et al 2004)
A anaacutelise de regressatildeo indica que o modelo que
melhor se ajustou agrave relaccedilatildeo altura de planta em funccedilatildeo da
lacircmina de irrigaccedilatildeo aos 60 e 75 DAT foi o polinomial
quadraacutetico apresentando valores para R2 de 0997 e 0966
respectivamente (Figuras 1 e 2) Observa-se que aos 60 e 75
DAT a altura da planta aumentou com a lacircmina aplicada ateacute
FIGURA 1 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 60 DATFortaleza-CE 2005 (ns natildeo significativo pelo teste F significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
FIGURA 2 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 75 DATFortaleza-CE 2005 (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
um ponto maacuteximo de 247 e 250 mm dia-1 respectivamente
representando a lacircmina que proporcionou maior
desenvolvimento das mudas em relaccedilatildeo agrave altura da planta
sendo obtida 896 e 1012 cm respectivamente Lacircminas acima
desse valor causaram reduccedilatildeo no crescimento
possivelmente devido ao excesso de aacutegua
Soares et al (1998) salientam que a aacutegua em excesso
proporciona aumentos nos custo de produccedilatildeo e do risco
de lixiviaccedilatildeo da aacutegua e dos nutrientes nela diluiacutedos o que
AP = -05934LI2 + 29273LI + 53519R2 = 0997
700
740
780
820
860
900
940
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1)
Altu
ra d
a pl
anta
(cm
)
AP = -06728L2 + 33294L + 59869
R2 = 0966
80
84
88
92
96
100
104
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Alt
ura
da p
lant
a (c
m)
AZEVEDO B M de et al60
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
pode prejudicar o desenvolvimento radicular Aleacutem disso
o excesso de aacutegua compromete os processos de
fotossiacutentese e respiraccedilatildeo os quais envolvem a utilizaccedilatildeo
de determinadas concentraccedilotildees de oxigecircnio (RAVEN et
al 2001) Jaacute em casos de deacuteficit hiacutedrico podem ocorrer
problemas de ordem fisioloacutegica ou seja afetar
negativamente o desenvolvimento das plantas
Em ambos os periacuteodos avaliados observou-se que
as lacircminas aplicadas influenciaram o diacircmetro de caule
das mudas de helicocircnia com valores meacutedios de 97 e 103
cm aos 60 e 75 DAT respectivamente A anaacutelise de
regressatildeo indicou que aos 60 DAT o modelo polinomial
quadraacutetico foi o que melhor representou o diacircmetro do
caule em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo com R2 de 0746
(Figura 3) O maacuteximo valor do diacircmetro de caule (1022
cm) calculado por derivaccedilatildeo da curva de ajuste foi obtido
aplicando-se uma lacircmina de 264 mm dia-1 A partir dessa
lacircmina houve uma diminuiccedilatildeo no diacircmetro de caule
ocasionado possivelmente pelo excesso de aacutegua Aos
75 DAT o modelo matemaacutetico ajustado para relacionar o
diacircmetro de caule em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo
apresentou coeficiente de determinaccedilatildeo (R2) muito baixo
natildeo sendo representativo
Modelos polinomiais quadraacuteticos para explicar o
efeito da lacircmina de irrigaccedilatildeo sobre a altura e diacircmetro de
caule tambeacutem foram obtidos por Pieter et al (2007) na
produccedilatildeo da flor da fortuna por Lopes et al (2005) em
mudas de Eucalyptus grandis W Hill por Pereira et al
(2003) e Recircgo et al (2004) na cultura do crisacircntemo
A anaacutelise de variacircncia (Tabela2) indicou que o
nuacutemero de folhas nas mudas de helicocircnia foi influenciado
pelas lacircminas de irrigaccedilatildeo nas duas eacutepocas analisadas (60
e 75 DAT) com valores meacutedios de 325 e 345 folhas nas
respectivas eacutepocas poreacutem o modelo matemaacutetico para
representar essa relaccedilatildeo apresentou coeficiente de
determinaccedilatildeo (R2) muito baixo e natildeo foi estatisticamente
significativo
As anaacutelises mostraram que aos 60 e 75 DAT a
lacircmina de irrigaccedilatildeo ideal que proporcionou o melhor
desenvolvimento das plantas encontra-se na faixa
compreendida de 247 a 264 mm dia-1 Valores
semelhantes foram obtidos por Gomes et al (2006) que
verificaram que a taxa de evapotranspiraccedilatildeo meacutedia da
Heliconia psittacorum L f x HSpatho-circinada
Aristeg cultivada em ambiente protegido foi de 22 mm
dia-1
FIGURA 3 Diacircmetro de caule de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) aos 60 DAT em funccedilatildeo das lacircminas deirrigaccedilatildeo Fortaleza CE (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
DC= -04111L2
+ 21726L + 73492
R2 = 0746
80
85
90
95
100
105
110
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Diacirc
met
ro d
o ca
ule(
cm)
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 61
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
CONCLUSOtildeES
As lacircminas de irrigaccedilatildeo influenciaram as
caracteriacutesticas de desenvolvimento avaliadas aos 60 e 75
DAT
A altura de planta e o diacircmetro de caule
apresentaram resposta quadraacutetica em relaccedilatildeo agraves lacircminas
aplicadas
Nas condiccedilotildees em que foi desenvolvido este
trabalho para a aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas
de helicocircnia recomenda-se irrigar com 25 mm dia-1 com o
intuito de se obter mudas mais vigorosas para serem
transplantadas para condiccedilotildees de campo
AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pela concessatildeo da bolsa de estudo
Agrave Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaacuteria
CNPAT pela oportunidade de realizaccedilatildeo desta pesquisa
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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ALEXANDRE R S et al62
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
(Recebido em 4 de marccedilo de 2008 e aprovado em 1 de setembro de 2008)
IN VITRO ORGANOGENESIS OF PASSION FRUIT (PASSIFLORAEDULIS SIMS F FLAVICARPA DEG) AFFECTED BYIRRADIANCE SUCROSE AND EXPLANT POSITION
ORGANOGEcircNESE IN VITRO DO MARACUJAZEIRO (PASSIFLORA EDULIS SIMSF FLAVICARPA DEGENER) AFETADO POR IRRADIAcircNCIA SACAROSE E
POSICcedilAtildeO DOS EXPLANTES
RODRIGO SOBREIRA ALEXANDRE1 FLAacuteVIO ALENCAR D
ARAUacuteJO COUTO1 JOSEacute MARIA MOREIRA DIAS1WAGNER CAMPOS OTONI2 RITA DE CAacuteSSIA MENDES3 PAULO ROBERTO CECON4
1Professor Doutor Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG rsalexandreclick21combr2Doutor Departamento de Biologia Vegetal Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG3Teacutecnica em Quiacutemica Graduanda em Agronomia Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
4Doutor Departamento de Informaacutetica Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
ABSTRACTThe culture of the tissues has helped considerably the
Passiflora genus development achieving successfully themorphogenic responses in different in vitro explants Theobjective this work was to assess the in vitro morphogenicresponses of hypocotyl segments of passion fruit collected from5 positions (apical sub-apical median sub-basal and basalnamely 1-5 respectively) along the hypocotyls axis and culturedin medium with different concentrations of sucrose and exposedto irradiance levels The experiments were performed as acompletely randomized blocks design with 15 repetitions in 4 x4 x 5 factorial scheme (irradiance x sucrose x explant positions)totalizing 80 treatments on which every experimental parcelwas comprised of a flask containing five hypocotyls Thehypocotyl segment from positions 1 and 3 at their extremedistal ends cultured onto medium of culture with 30 g L-1 sucroseand under 100 micromol m-2 s-1 irradiance enable the greatest numberof buds and shoots differentiated The distal extremity from thesegments of hypocotyl farthest from the cotyledonary nodes(position 1) cultivated in 20 g L-1 sucrose and exposed to 50micromol m-2 s-1 irradiance result in the best condition for shootdevelopment
Index terms Passiflora edulis f flavicarpa in vitro propagationyellow passion fruit
RESUMOA cultura de tecidos tem auxiliado no desenvolvimento
do gecircnero Passiflora alcanccedilando sucesso morfogecircnico emdiferentes explantes in vitro Objetivou-se neste trabalho avaliarrespostas morfogecircnicas in vitro de segmentos de hipocoacutetilo domaracujazeiro coletados de 5 posiccedilotildees (apical sub-apicalmediana sub-basal e basal isto eacute 1-5 respectivamente) ao longodo eixo dos hipocoacutetilos e cultivados em meios com diferentesconcentraccedilotildees de sacarose e expostos a niacuteveis de irradiacircncia Oexperimento foi instalado em blocos casualizados com 15
repeticcedilotildees em esquema fatorial 4 x 4 x 5 (irradiacircncia x sacarose xposiccedilatildeo dos explantes) totalizando 80 tratamentos nos quaistoda parcela experimental foi constituiacuteda de um frasco contendocinco hipocoacutetilos As posiccedilotildees 1 e 3 no extremo distal dossegmentos de hipocoacutetilo cultivados em meio de cultura com 30 gL-1 de sacarose e sob 100 micromol m-2 s-1 de irradiacircncia proporcionamaior nuacutemero de brotos e brotos diferenciados A extremidadedistal dos segmentos de hipocoacutetilo extraiacutedos mais distantes donoacute cotiledonar (posiccedilatildeo 1) cultivados em 20 g L-1 de sacarose eexpostos agrave irradiacircncia de 50 micromol m-2 s-1 resulta na melhorcondiccedilatildeo para o desenvolvimento do broto
Termos para indexaccedilatildeo Passiflora edulis f flavicarpapropagaccedilatildeo in vitro maracujazeiro amarelo
INTRODUCTION
The genus of Passiflora was originated at South
America and comprises more than 580 species most of them
belonging to the Tropical America mainly from Brazil
(OLIVEIRA 1987) Among them the most commercially used
is the passion fruit plant P edulis Sims f flavicarpa Deg
The culture of the tissue has been reaching with
the Passiflora genus answers satisfactory morphogenic in
different in vitro explants (BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1993 1994 MORAN-ROBLES 1979 SCORZA
amp JANICK 1980)
The explant morphogenic capability has
relationship with the polarity effect such factor is
responsible for the shoot emergence Several studies were
researched to assess the effect of the position of the
In vitro organogenesis of passion fruit 63
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
explants extracted from the hypocotyl and roots of Citrus
plantlets during the shoot-bud proliferation (BURGER amp
HACKETT 1986 COSTA et al 2004 DIAS 1998
GARCIA-LUIS et al 1999) as well as the effect of the
polarity in the formation the buds and shoots
(McCLELLAND amp SMITH 1990 YAE et al 1987)
In the in vitro organogenesis of plants of the genus
Passiflora several factors influence among them among
them the irradiance for which different types of explants
were spared for the essays 58 micromol m-2 s-1 in internodes
(MORAN-ROBLES 1979) 20 micromol m-2 s-1 in mesophyll-
derived protoplasts (OTONI et al 1995) 30 or 23 micromol m-
2 s-1 in leaf (KAWATA et al 1995 APPEZZATO-DA-
GLOacuteRIA et al 1999 respectively) 50 micromol m-2 s-1 in
endosperm (MOHAMED et al 1996) 80 30 or 24 micromol m-
2 s-1 in shoot cultures (FARIA amp SEGURA 1997
KURIYAMA et al 1998 BARBOSA et al 2001
respectively) 20-55 micromol m-2 s-1 in cotyledons (HALL et
al 2000) 60 or 54 micromol m-2 s-1 in hipocotyl (COUCEIRO
2002 FELISMINO 2005 respectively) Although different
irradiances have been studied in these works in none of
them the effect of difference irradiances was studied during
the in vitro organogenic process of passion fruit plant
Other important factor for the in vitro
organogenesis is the source of carbon The in vitro
organogenesis works affirm that sucrose has been the most
employed source of carbon in the culture for Passiflora
(APPEZZATO-DA-GLOacuteRIA et al 1999 HALL et al 2000)
its concentration varies from 10 to 30 g L-1
The present work aimed to evaluate the in vitro
morphogenic responses of hypocotyledonary explants of
passion fruit plants throughout the use of different levels
of irradiance sucrose concentration and positions of the
segments of hypocotyls derived from in vitro germinated
plantlets
MATERIALS AND METHODS
Axenic and vigorous etiolated plantlets were
obtained from in vitro germinated seeds and used as
explants sources
In vitro-grown seedlings (25-30 days-old) were
transversally cut into 1-12 cm long were cultured on
different conditions of incubation The explants were
cultured in 300 mL glass flasks (Santa Marina Satildeo Paulo
Brazil) containing 30 mL aliquots of MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) medium salts 100 mg L-1 mio-inositol 10
mg L-1 6-benzylaminopurine (BAP) vitamins of White
(1951) and 80 g L-1 of agar (Isofarreg Brazil) The medium
pH was adjusted to 57 plusmn 01 before the addition of agar
Several concentrations of sucrose (0 10 20 or 30 g L-1)
were added to this medium The culture flasks were sealed
with polypropylene lids and the medium was autoclaved
at 121ordmC 15 kgf cm-2 during 20 minutes
The segments of hypocotyls were cut in five
segments numbered from 1 to 5 follows 1 basal the first
segment adjacent to the root collar 2 sub-apical the
second segment adjacent to the hypocotyl root 3 median
the central segment in relation to the hypocotyl region 4
sub-apical the second segment that is adjacent to the
cotyledonary node 5 - apical the first segment that is
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
Axenic plantlets Segments of hypocotyls in the
medium of culture
DE
PE
FIGURE 1 The segments of hypocotyls numbered from1 to 5 were characterized as follows 1 basal the firstsegment adjacent to the root collar 2 sub-apical thesecond segment adjacent to the hypocotyl root 3 median the central segment in relation to the hypocotylregion 4 sub-apical the second segment that is adjacentto the cotyledonary node 5 - apical the first segment thatis adjacent to the cotyledonary node () ED = distalextremity EP = proximal extremity
ALEXANDRE R S et al64
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
adjacent to the cotyledonary node (Figure 1) In this order
the five hypocotyl explants were placed horizontally on
the media maintaining the proximal extremity towards the
wall of the flask and having the distal extremity facing the
centre of the flask
The flasks were distributed 5 cm far from each other
on the shelves at the growth room to avoid shadowiness
at these flasks The explants were kept at the temperature
of 27 plusmn 2ordmC photoperiod of 168-h lightdark regime and
irradiances of 25 50 100 and 150 micromol m-2 s-1
The irradiance levels were provided by the
utilization of 40 W daylight fluorescent light tubes (Osramreg
Brazil) as follows I - 25 micromol m-2 s-1 (1 light on without
on without dislocating the luminous panel) III - 100 micromol
m-2 s-1 (4 lights on setting the luminous panel at 20 cm
from the shelf surface) IV - 150 micromol m-2 s-1 (5 lights on
setting the luminous panel at 16 cm from the shelf surface)
Copper strings were used to support the fluorescent
incandescent lamps
After 45 days of incubation regeneration frequencies
and number of shoots per explant were assessed which
were formed at the distal and proximal ends The
organogenesis was assessed regarding shoot lengths from
the evaluated positions at the proximal and distal ends
The experiment was performed under complete
randomized blocks design with 15 replicates in a 4 x 4 x 5
factorial scheme (irradiance levels 25 50 100 and 150 igravemol
m-2 s-1 x sucrose concentrations 0 10 20 and 30 g L-1 x
position of the explants at the hypocotyl 1 2 3 4 and 5)
totalizing 80 treatments being the experiment plot
comprised of a flask containing five segments of
hypocotyl Considering the three factors studied were made
by analysis of test average (Tukey) and regression to
concentrations of sucrose and levels of irradiance The
experiments were repeated at least once
RESULTS AND DISCUSSION
In vitro organogenesis at the distal extremity The
differentiation of buds and shoots as influenced by
irradiance levels and distinct positions of explants along
the hypocotyls axis and the mean values and the standard
deviation of the total number of buds and shoots formed
at the distal extremity are shown in figures 2 and 3
respectively
Independently from the other factors at the medium
without sucrose there was no morphogenic response in
the explants (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The number of structures formed at the distal
extremity reached the highest means when there was added
30 g L-1 sucrose to the medium under 100 micromol m-2 s-1
irradiance at the positions 1 and 3 (Figure 3a) Considering
the means of the five explant positions an average of 592
structures per explant was obtained Similarly Couceiro
(2002) has obtained 590 structures per explant at the distal
extremity when cultivating them horizontally under 60 micromol
m-2 s-1 of irradiance in MS medium containing 50 mg L-1 of
BAP and 30 g L-1 of sucrose Garcia-Luis et al (1999) have
shown in Citrange Troyer that despite the explants being
horizontally placed on the medium surface there was an
additional effect of polarity evidenced by the larger number
of shoots differentiated at the apical extremity and the
distance among the cotyledonary node has affected the
morphogenesis These results confirmed the studies of
Ziv et al (1970) and Fari amp Czako (1981) evidencing that
normally in stem and root sections the shoot-buds are
formed at the distal extremity and the roots at the proximal
extremity In the present work structures formed at both
explant extremities but in a higher degree at the distal
extremity
The largest value found for the average length of
the shoot a was 364 mm for the explants that were extracted
farthest from the cotyledonary node (position 1) and
cultured in medium containing 20 g L-1 of sucrose and
submitted to 50 micromol m-2 s-1 of irradiance (Figure 4a)
However in Passiflora actinia the inclusion of auxins to
the medium favoured the development of the shoot-buds
that consequently presented larger lengths when the
hypocotyl segments were cultivated in MS medium
containing 001 mg L-1 de IBA (KOCH et al 2001)
In vitro organogenesis of passion fruit 65
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
In vitro organogenesis at the proximal extremity
The mean values and the standard deviation of the total
number of buds and shoots formed at the proximal extremity
of the explants are presented in Figure 3b Likewise to the
distal extremity the formation of buds and shoots did not
happen when the explants were cultured in medium without
sucrose (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The differentiation and development of the buds
and shoots at the proximal extremity reached the highest
FIGURE 2 In vitro organogenesis in hypocotyl segments that are characterized by the positions that variesfrom 1 to 5 under effect of different irradiance levels A 25 micromol m-2 s-1 B 50 micromol m-2 s-1 C 100 micromol m-2 s-1 andD 150 micromol m-2 s-1 and sucrose concentrations (a 0 b 10 c 20 d 30 g L-1) for 45 days
A 1
2
3
4
5
a
1
2
3
4
5
b 1
2
3
4
5
c 1
2
3
4
5
d
B
a
b
c
d
C
a
b
c
d
D
a
b
c
d
Distal extremity
Proximal extremity
averages (35) at 25 micromol m-2 s-1 of irradiance in MS medium
containing 20 g L-1 sucrose for explants derived from the
position 4 (Figure 3b) Concurrently the work by Baccarin
(1988) pointed out the best bud and shoot proliferation in
explants from the regions closer to the cotyledonary nodes
The presence of BAP in the medium was essential to
the organogenic process as observed in works with Passiflora
spp (BECERRA et al 2004 BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1994 FERNANDO 2005 HALL et al 2000)
ALEXANDRE R S et al66
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Position 1
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 2
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 3
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Num
ber t
otal
of e
stru
ture
s
Position 4
0
2
4
6
8
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25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 1
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
ero
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l de
estr
utur
as
10
20
30
Position 2
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 3
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 4
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 5
0
2
4
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25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
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Position 5
0
1
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Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
tota
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as
Sucrose
(g L-1)
a
b
FIGURE 3 Mean values and standard deviation of the total number of structures (buds and shoots) formed at thedistal (a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
In vitro organogenesis of passion fruit 67
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
FIGURE 4 Mean values and standard deviation of the lengths of structures (buds and shoots) formed at the distal(a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
Position 1
0
1
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25 50 100 150
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brot
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(mm
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Irradiance (micromol m-2
s-1
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m)
Position 5
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Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
ento
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brot
os
(mm
)
Sucrose
(g L-1)
a
b
ALEXANDRE R S et al68
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Independently from the irradiance levels different
sucrose concentrations and explant positions at the
hypocotyl the shoot elongation was considered to be
lower (Figure 4b) than the minimum recommended
(approximately 2-3 cm) for the in vitro rooting process It
highlights the need of previous submission of the explants
to an adequate medium for the elongation process
CONCLUSIONS
The morphogenic response for bud and shoot
formation was remarkably superior at the distal extremity
The maximum concentration among the sucrose
and the irradiance of 100 micromol m-2 s-1 has proportioned
better morphogenic responses at the distal extremity
regardless the position of the explants
The buds and shoots differentiated at the distal
extremity farthest to the cotyledonary node developed
better under 50 micromol m-2 s-1 of irradiance in medium
supplemented with 20 g L-1 sucrose
The use of a carbon source is essential for in vitro
morphogenesis
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
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AVALIACcedilAtildeO DE SUBSTRATOS NA PRODUCcedilAtildeO DE MUDASDO ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL [Ananaacutes comosus (L) Merr
var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] EM CONDICcedilOtildeESDE CASA DE VEGETACcedilAtildeO
SUBSTRATES EVALUATION FOR PRODUCTION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE[Ananas comosus (L) Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] PLANTS
UNDER GREENHOUSE CONDITIONS
FRANCISCO NUNES DA CUNHA FILHO1 ANTONIO CARLOS TORRES1 JOAtildeO MARIA CHARCHAR1
1Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF francisconunescnphembrapabr torrescnphembrapabr
RESUMOA utilizaccedilatildeo de substratos na aclimataccedilatildeo de mudas
micropropagadas oferece consideraacutevel vantagem no custo e napossibilidade de obtenccedilatildeo de alta porcentagem de sobrevivecircnciados propaacutegulos ex vitro aliado agrave obtenccedilatildeo de mudas maisuniformes vigorosas precoces e com alta qualidade fitossanitaacuteriaAvaliaram-se quatro diferentes tipos de substratos (fibra de cococomercial fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxe substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas) na aclimataccedilatildeode mudas do abacaxizeiro ornamental As variaacuteveis massa frescatotal massa fresca da parte aeacuterea massa fresca de raiacutezescomprimento de raiacutezes altura de plantas e nuacutemero total de folhasforam avaliadas O delineamento experimental utilizado foi ointeiramente casualizado com quatro tratamentos e com quatrorepeticcedilotildees Pela anaacutelise dos resultados o substrato padronizadoda Embrapa Hortaliccedilas o de fibra de coco comercial e o Plantmaxforam os mais eficientes na produccedilatildeo de mudas de abacaxizeiroornamental para fins comerciais O substrato de coco-verde daEmbrapa Hortaliccedilas foi o menos indicado
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatus plantaornamental substrato
ABSTRACTThe use of substrate in the acclimatization of
micropropagated plants offers considerable cost advantages andthe possibility to obtain high percentage of ex vitro survivingplants as well as in the production of uniform vigorous precociousand healthy plants Four different substrates (commercial coconutfiber green-coconut fiber from Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxand the standardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas) wereevaluated for acclimatization of ornamental pineapple plantsTotal fresh mass fresh mass of shoots fresh mass of roots rootlength plant height and total number of leaves were obtainedThe experiment followed a complete randomized design withfour treatments and four replicates The results showed that thestandardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas commercialcoconut fiber and Plantmax were the most efficient for theproduction of ornamental pineapple plants for commercialpurpose Green-coconut fiber substrate from Embrapa was lessindicated
Index terms Ananas comosus var bracteatus ornamental plantgrowth substrate
INTRODUCcedilAtildeO
Os abacaxizeiros ornamentais apresentam flores e
infrutescecircncias de beleza atrativa muito usadas em arranjos
decorativos e ornamentais no Brasil e exterior
representando um segmento de grande potencial para
exportaccedilatildeo (CABRAL 2000 SOUZA et al 2004) No
comeacutercio de flores nativas o abacaxi ornamental jaacute obteve
valores agregados da ordem de 5000 em relaccedilatildeo ao
abacaxi de fruta natildeo ornamental (SOUZA et al 2004)
A propagaccedilatildeo vegetativa do abacaxizeiro ornamental
para fins de comercializaccedilatildeo eacute feita por mudas oriundas da
planta-matildee Poreacutem essa propagaccedilatildeo apresenta o
inconveniente de disseminar agentes patogecircnicos e pragas
pela utilizaccedilatildeo de mudas contaminadas Dentre os patoacutegenos
e pragas mais comuns destacam-se o fungo Fusarium
subglutinans (Wollenw amp Reinking) PE Nelson (TOUSSON
amp MARASAS 1983) e a cochonilha Dysmicoccus brevipes
turfa casca curtida de eucalipto ou Pinus palha de arroz
carbonizada poacute de carvatildeo (GRATTAPAGLIA amp
MACHADO 1998) casca de arroz carbonizada poacute de
casca de coco seco e verde (SANTOS et al 2006) mistura
de areiaxaximhuacutemus (SOUZA JUNIOR et al 2001) solo
esterco bovino Plantmax e composto orgacircnico em
diferentes proporccedilotildees (MOREIRA et al 2006) dentre
outros Entretanto para o genoacutetipo em estudo as
tecnologias disponiacuteveis necessitam de adequaccedilatildeo para
serem mais eficientes e de baixo custo na produccedilatildeo
comercial de mudas
Objetivou-se neste trabalho avaliar quatro
diferentes substratos na produccedilatildeo de mudas do
abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L) Merr var
bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] para fins comerciais
utilizando-se propaacutegulos produzidos in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
Produccedilatildeo de mudas in vitro
Foram utilizados como fonte de explantes
propaacutegulos produzidos in vitro subcultivados a cada 60
dias utilizando-se o meacutetodo proposto por Correia et al
(1999) Os explantes consistiram de brotaccedilotildees com 2 cm de
comprimento transferidos para meio baacutesico de cultura
contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 3 de sacarose e em mg L-1 incluiacuteram-
se i-inositol 100 tiaminaHCl 02 aacutecido nicotiacutenico 005
piridoxinaHCl 005 e glicina 02 O meio de cultura foi
solidificado com 06 de aacutegar e o pH do meio foi ajustado
para 57 O meio foi distribuiacutedo em tubos de ensaio de 25 x
150 mm na quantidade de 125 mL por tubo
Os tubos foram esterilizados em autoclave a 121ordmC
e a 104 Kpa de pressatildeo por 15 minutos Apoacutes a inoculaccedilatildeo
as culturas foram mantidas em cacircmara de crescimento com
fotoperiacuteodo de 16 horas irradiacircncia de 32 mmol m-2 s-1
temperatura de 27oC durante 30 dias
As mudas foram preacute-aclimatizadas mediante
abertura das tampas dos frascos de cultura cinco dias
antes do transplantio para os respectivos substratos
Transplante e desenvolvimento de mudas micropropagadas
Mudas enraizadas e preacute-aclimatizadas de
abacaxizeiro ornamental foram retiradas dos tubos de
cultura e transplantadas em bandejas de isopor com 72
ceacutelulas contendo quatro diferentes substratos utilizados
como tratamentos 1) substrato comercial de fibra de coco
2) substrato de fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas
3) substrato Plantmax e 4) substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas composto por solo de cerrado areia
lavada esterco de gado curtido e palha de arroz
carbonizada em proporccedilotildees de 3111 vv com adiccedilatildeo de
300 g de calcaacuterio dolomiacutetico e de 300 g da formulaccedilatildeo 4-
30-16
Apenas 30 ceacutelulas por bandeja foram
transplantadas com mudas de abacaxizeiro ornamental (uma
muda por ceacutelula) deixando-se 42 ceacutelulas livres (sem planta)
para que natildeo houvesse competiccedilatildeo entre plantas nas
bandejas As bandejas permaneceram cobertas com
envoltoacuterio plaacutestico nos primeiros trecircs dias apoacutes o
transplante
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado com 10 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca
de raiz e tamanho de raiz e 30 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
altura e nuacutemero de folhas Os dados foram coletados aos
90 dias apoacutes o transplantio A anaacutelise de variacircncia do
experimento foi realizada com o auxiacutelio do programa
estatiacutestico SAS Institute Inc (SAS INSTITUTE 1988) e a
CUNHA FILHO F N da et al72
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
diferenciaccedilatildeo de meacutedias pelo teste de Tukey p 001 e
p 005
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
A anaacutelise conjunta do experimento indicou que
existiu homogeneidade de variacircncia natildeo sendo necessaacuteria
a transformaccedilatildeo de dados para a realizaccedilatildeo das anaacutelises A
anaacutelise de variacircncia (Tabelas 1 e 2) indicou que houve
efeito significativo dos diferentes substratos (teste de
Tukey p 005) sobre a massa fresca total massa fresca da
parte aeacuterea altura de plantas e nuacutemero total de folhas e
que natildeo houve diferenccedila significativa entre os diferentes
substratos com relaccedilatildeo agrave massa fresca de raiacutezes e o
comprimento de raiacutezes (Figuras 1 A-F)
Embora natildeo tenha havido diferenccedila significativa
(teste de Tukey p 005) entre os valores de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea nos tratamentos com
os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
comercial de fibra de coco e o Plantmax os valores
absolutos mais elevados desses paracircmetros foram obtidos
com o substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
(Figuras 1 A-B)
No substrato de fibra de coco-verde da Embrapa
Hortaliccedilas as plantas de abacaxizeiro ornamental tiveram
sempre pior performance em produccedilatildeo de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea natildeo se diferenciando
estatisticamente dos valores obtidos com o uso dos
substratos comerciais da Plantmax e de fibra de coco
Entretanto esses substratos foram significativamente
inferiores (teste de Tukey p 005) em relaccedilatildeo aos valores
obtidos com o uso do substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas (Figuras 1 A-B)
Os valores obtidos para as variaacuteveis massa fresca
de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes natildeo diferiram
estatisticamente entre si (teste de Tukey p 005) em
relaccedilatildeo aos quatro tratamentos (substratos analisados)
Os maiores valores absolutos dessas variaacuteveis foram obtidos
para a massa fresca de raiacutezes no substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e para o comprimento de raiacutezes no
substrato comercial de fibra de coco (Figuras 1 C-D)
TABELA 1 Resumo da anaacutelise de variacircncia para massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca deraiacutezes e comprimento de raiacutezes de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio
Fontes de variaccedilatildeo GL Massa fresca total
Massa fresca
da parte aeacuterea Massa fresca
de raiacutezes Comprimento
de raiacutezes
Tipo de substrato 03 673536 518934 02201ns 22382ns
Resiacuteduo 36 115108 80557 01328 13107
Total 39 - - - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade (ns) natildeo significativo
TABELA 2 Resumo da anaacutelise de variacircncia para altura e nuacutemero de folhas de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio Fontes de variaccedilatildeo GL
Altura de plantas Nuacutemero total de folhas
Tipo de substrato 003 1424357 526854
Resiacuteduo 124 50188 16807
Total 127 - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas 73
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
FIGURA 1 Variaacuteveis avaliadas na determinaccedilatildeo de eficiecircncia dos substratos Plantmax Embrapa Hortaliccedilas fibra decoco e fibra de coco-verde na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental -em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo A)massa fresca total B) massa fresca da parte aeacuterea C) massa fresca de raiacutezes D) comprimento de raiacutezes E) altura deplantas e F) nuacutemero total de folhas Meacutedias seguidas da mesma letra natildeo diferem significativamente entre si pelo testede Tukey Plt005
3653+b 0688
7459+ab 1414
9894+a 1229
6254+ab 0789
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a to
tal (
g)
A
3421+b 0664
6822+ab 1152
8930+a 0933
6002+ab 0763
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax Embrapa Hortaliccedilas Fibra de coco Fibra de coco verde
Tipo de substratos
Mas
sa fr
sca
da p
arte
aeacuter
ea (
g)
B
0568 + 0178 a
0298 + 0007 a0363 + 0120 a
0222 + 0039 a
0
02
04
06
08
1
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a de
rai
zes
(g)
C
12000 + 0338 a
12800 + 0387 a
11690 + 0468 a12020 + 0204 a
10
11
12
13
14
15
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Com
prim
ento
de
raiz
es (c
m)
D
11789 + 0412 a13800 + 0406 b
11088 + 0381 a
8797 + 0385 c
02468
1012141618
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Alt
ura
de p
lant
as (c
m)
E
5882 + 0173 c
7727 + 0191 b8818 + 0259 a
8143 + 0294 ab
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Nuacutem
ero
tota
l de
folh
as
F
Houve diferenccedila significativa (teste de Tukey
p 005) entre os valores meacutedios obtidos para a altura de
plantas e para o nuacutemero total de folhas nos quatro
tratamentos avaliados As plantas tiveram
significativamente maior desenvolvimento em altura no
substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas Natildeo houve
diferenccedila significativa entre os valores meacutedios em altura
de plantas nos substratos comerciais da Plantmax e de
fibra de coco Esses poreacutem foram diferentes dos valores
obtidos no substrato de fibra de coco-verde que
proporcionou significativamente o menor crescimento das
plantas (Figura 1 E)
Maiores meacutedias da variaacutevel nuacutemero total de folhas
foram obtidas com a utilizaccedilatildeo do substrato padronizado
CUNHA FILHO F N da et al74
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
da Embrapa Hortaliccedilas e do Plantmax Natildeo houve diferenccedila
significativa entre os valores meacutedios do nuacutemero total de
folhas nos substratos Plantmax e de fibra de coco comercial
mas esses diferiram estatisticamente dos obtidos no
substrato fibra de coco-verde O substrato de fibra de coco-
verde foi o que propiciou os menores valores da variaacutevel
nuacutemero total de folhas (Figura 1 F) Esses resultados
contradizem os relatados por Carrijo et al (2002) que
verificaram que os substratos contendo fibra de coco-verde
satildeo os mais indicados para produccedilatildeo de mudas de
hortaliccedilas e ornamentais em cultivo sem solo Correia et al
(2003) natildeo observaram diferenccedila significativa entre os
valores da massa fresca de raiacutezes de mudas de cajueiro
anatildeo precoce crescidas em substratos com adiccedilatildeo de poacute
de coco-verde ou de poacute de coco-maduro Santos et al
(2006) relataram que os substratos orgacircnicos contendo as
combinaccedilotildees de fibras de coco seco ou verde
proporcionaram baixo desenvolvimento na aclimatizaccedilatildeo
de mudas Heliconia rostrata Ruiz amp Pav provenientes
da micropropagaccedilatildeo Poreacutem Bezerra et al (2001) discordam
dos autores acima mencionados informando que os
substratos contendo fibras de coco-verde ou seco foram
os mais indicados respectivamente para o enraizamento
de mudas de crisacircntemo (Chrysanthemum sp) e de violeta
africana (Saintpaulia ionantha H Wendl)
Tambeacutem substrato contendo casca de arroz
carbonizada tem sido utilizado na produccedilatildeo de mudas
micropropagadas Weber et al (2003) relataram que o
substrato contendo esse componente misturado com
vermiculita e vermicomposto em proporccedilotildees de 111 foi a
melhor opccedilatildeo para aclimataccedilatildeo de mudas de abacaxizeiro
ornamental oriundas da cultura in vitro e transplantadas
para tubetes Esses autores ainda observaram que o uso
da mistura contendo casca de arroz carbonizada e poacute de
casca de coco em proporccedilotildees de 11 resultou em baixo
desempenho de mudas do abacaxizeiro ornamental em
funccedilatildeo da maacute agregaccedilatildeo fiacutesica baixa retenccedilatildeo de aacutegua e
limitaccedilatildeo nutricional da planta
Neste trabalho os resultados com o uso de substrato
contendo casca de arroz carbonizada sem a presenccedila de
fibras de coco seco ou verde tambeacutem proporcionou
excelente desenvolvimento de mudas do abacaxizeiro
ornamental o que indica uma provaacutevel incompatibilidade
das fibras de coco com outros componentes de substratos
na produccedilatildeo de mudas dessa ornamental
Natildeo houve diferenccedila significativa entre valores de
massa fresca de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes de
abacaxizeiro ornamental em relaccedilatildeo aos quatro substratos
analisados Poreacutem o maior valor absoluto em massa fresca
de raiacutezes foi obtido no substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas enquanto que o maior valor em comprimento
de raiacutezes no substrato comercial de fibra de coco
Com relaccedilatildeo agraves demais variaacuteveis analisadas
observou-se que a massa fresca total e a massa fresca da
parte aeacuterea tiveram performances mais significativas nos
substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas comercial
de fibra de coco e o da Plantmax enquanto que a altura de
plantas foi significativamente mais elevada no substrato
padronizado da Embrapa Hortaliccedilas e o nuacutemero total de
folhas mais significativo nos substratos padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e o Plantmax
CONCLUSOtildeES
Os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
fibra de coco comercial e o da Plantmax satildeo os mais
indicados para a produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro
ornamental para fins comerciais
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) as bolsas concedidas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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SANTOS M do D M dos et al76
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(Recebido em 8 de abril de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFEITO DE ISOPENTENILADENINA POR QUATROSUBCULTIVOS NA MULTIPLICACcedilAtildeO DE BROTACcedilOtildeES
DE ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL IN VITRO
EFFECT OF ISOPENTENYL ADENINE IN FOUR SUBCULTURES DURING THEIN VITRO MULTIPLICATION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE SHOOT
MARIA DO DESTERRO MENDES DOS SANTOS1 JOSEacute GETUacuteLIO DA SILVA FILHO2ANTONIO CARLOS TORRES3
1Bioacuteloga MSc em Botacircnica Departamento de Botacircnica Universidade de BrasiacuteliaUnB Cx P 4457 709190-970 Brasiacutelia DF mariacnphembrapabr2Engenheiro Agrocircnomo Especialista em Biotecnologia de Plantas Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF jgetuliocnphembrapabr3Engenheiro Agrocircnomo Embrapa Hortaliccedilas CxP 218 70359-970 Brasiacutelia DF
RESUMOObjetivou-se no presente trabalho foi o de avaliar o
efeito da adiccedilatildeo de concentraccedilotildees de 2iP em diferentes subcultivosna micropropagaccedilatildeo do abacaxizeiro ornamental var bracteatusBrotaccedilotildees com aproximadamente 10 cm de tamanho oriundosda cultura in vitro foram utilizados como explantes Os explantesforam inoculados em meio baacutesico liquido contendo sais mineraisMS 3 sacarose e em mg L-1 i-inositol 100 tiaminaHCl 01piridoxina HCl 05 aacutecido nicotiacutenico 005 glicina 20 formulaccedilatildeoliacutequida A esse meio foram adicionados concentraccedilotildees de 2iP(00 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro subcultivos(30 60 90 e 120 dias) Maacuteximo nuacutemero de brotaccedilotildees por explante(139) foi obtido em meio baacutesico com 16 mg L-1 de 2iP e no quartosubcultivo aos 120 dias Apoacutes a transferecircncia de brotaccedilotildeesindividualizadas para meio contendo ANA (00 05 10 15 2025 30 e 40 mg L-1) verificou-se a diferenciaccedilatildeo de raiacutezesadventiacutecias na porccedilatildeo basilar dos explantes
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatusmicropropagaccedilatildeo cultivo in vitro
ABSTRACTThe objective of this work was to evaluate the effect of
2iP addition in different subcultures during the micropropagationof ornamental pineapple var bracteatus Shoots with 10 cm inlength originated from in vitro culture were used as explantsThe explants were inoculated in liquid basal medium containingMS salts 3 sucrose 100 mg L-1 i-inositol 01 mg L-1
thiamineHCl 05 mg L-1 pyridoxineHCl 005 mg L-1 nicotinicacid and 20 mg L-1 glycine Different concentrations of 2iP (0005 10 and 20 mg L-1) in combination with four subcultures (3060 90 e 120 days) were used Maximum number of shoot formedper explant (139) was observed in basal medium with 16 mg L-1
2iP at the fourth subculture (120 days) After transferringindividual shoots to medium containing different concentrationsof NAA (00 05 10 15 20 25 30 and 40 mg L-1) mediaadventitious root formed in the basal portion of the explants
Index terms Ananas comosus var bracteatus micropropagationin vitro culture
INTRODUCcedilAtildeO
O abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L)
Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] eacute uma
planta de propagaccedilatildeo vegetativa com grande potencial
ornamental (D EECKENBRUGGE amp LEAL 2003) A
qualidade fitossanitaacuteria do campo de produccedilatildeo dessa
espeacutecie depende do material utilizado para sua propagaccedilatildeo
Assim sendo pode haver acuacutemulo entre plantios
sucessivos de patoacutegenos que satildeo transmitidos de um ciclo
de produccedilatildeo a outro via mudas contaminadas A
micropropagaccedilatildeo em larga escala de mudas sadias via
cultura de tecidos eacute uma estrateacutegia que possibilita
contornar a limitaccedilatildeo de mudas com alta qualidade
fitossanitaacuteria principalmente isentas de fusariose
(REINHARDT amp CUNHA 1999)
Em espeacutecies do gecircnero Ananaacutes os explantes mais
utilizados satildeo as gemas axilares das mudas do tipo coroa
ou filhote embora outros tipos de mudas possam ser usadas
A vantagem do uso de gemas axilares incluem boa
sobrevivecircncia em meio de cultura e com a quebra da
dominacircncia apical do broto haacute estiacutemulo para a formaccedilatildeo de
gemas muacuteltiplas (DREW 1980) A adiccedilatildeo de
fitorreguladores em geral eacute necessaacuteria para suprir as
possiacuteveis deficiecircncias dos niacuteveis endoacutegenos de hormocircnios
nos explantes in vitro Assim sendo recomenda-se a
combinaccedilatildeo de uma auxina com uma citocinina (SKOOG amp
MILLER 1957) Em geral a benzilaminopurina (BAP)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 77
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(ALMEIDA et al 2002 BARBOZA et al 2001 BE amp
DEBERG 2006) ou essa substacircncia em combinaccedilatildeo auxina
e aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (COSTA amp ZAFFARI 2005
GUERRA et al 1999) tecircm sido a(s) substacircncia(s)
reguladora(s) de crescimento mais usada(s) na formaccedilatildeo
de brotaccedilotildees de Ananas sp Entretanto em abacaxizeiro
ornamental a inclusatildeo de BAP no meio pode induzir o
aparecimento de variaccedilotildees somaclonais (RODRIGUES et
al 2007 SANTOS et al 2008) Tambeacutem a combinaccedilatildeo de
cinetina ANA e AIB (aacutecido indolbutiacuterico) foi empregada
para proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees em abacaxizeiro (KISS et
al 1995 MATHEWS amp RANGAN 1979)
Dada a escassez de informaccedilotildees sobre o efeito de
isopenteniladenina (2iP) na propagaccedilatildeo in vitro de espeacutecies
do gecircnero Ananas neste trabalho procurou-se otimizar a
concentraccedilatildeo de 2iP na produccedilatildeo de brotaccedilotildees de
abacaxizeiro ornamental em diferentes subcultivos e seu
subsequumlente enraizamento
MATERIAL E MEacuteTODOS
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Brotaccedilotildees
individualizadas com aproximadamente 1 cm de
comprimento estabelecidas a partir da cultura de gemas
axilares de mudas tipo coroa foram utilizadas como fonte
de explantes Os explantes foram cultivados em meio baacutesico
liacutequido contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) 3 sacarose e em mg L-1 tiaminaHCl 01
piridoxinaHCl 005 aacutecido nicotiacutenico 005 e glicina 20
(SANTOS 2008) O delineamento experimental empregado
foi o inteiramente ao acaso em esquema fatorial 4x4
referentes concentraccedilotildees de 2iP e subcultivos Ao meio
baacutesico foram adicionadas quatro concentraccedilotildees de BAP
(0 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro
subcultivos (30 60 90 e 120 dias) O pH dos meios foi
ajustado a 57 Foram utilizadas nove repeticcedilotildees por
tratamento sendo que cada parcela foi constituiacuteda por um
explante Inicialmente os explantes foram inoculados em
frascos de 250 mL de capacidade com 40mL de meio No
segundo subcultivo os propaacutegulos foram transferidos para
frascos idecircnticos com meio receacutem-preparado No terceiro
e quarto subcultivos foram utilizados frascos de 1000 mL
com 100 mL de meio As culturas foram mantidas em sala
de crescimento sob fotoperiacutedo de 16 horas com densidade
de fluxo de foacutetons de 32 mmol m-2 s-1 a 27plusmn2oC Em cada
subcultivo foi determinado o nuacutemero e a massa de mateacuteria
fresca das brotaccedilotildees formadas por explante inoculado
Os dados foram transformados para 1X e as
anaacutelises estatiacutestica foram realizadas com o auxiacutelio dos
programas SASStat e SISVAR versatildeo 301 Aplicou-se a
anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo grau para
avaliar o efeito da concentraccedilatildeo de 2iP sobre o nuacutemero e
massa da mateacuteria fresca de brotaccedilotildees em cada subcultivo
Enraizamento das brotaccedilotildees Foram utilizadas
brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental regeneradas in vitro
Os explantes com 10 a 20 cm de comprimento foram
inoculados em tubos de ensaio (25x150 mm) com 20 ml de
meio baacutesico 07 de aacutegar suplementado com diferentes
concentraccedilotildees de aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (00 05
10 15 20 25 30 e 40 mg L-1)
Apoacutes inoculaccedilatildeo as culturas foram mantidas em
cacircmara de crescimento nas condiccedilotildees descritas
anteriormente Apoacutes 30 dias da inoculaccedilatildeo foram avaliados
a percentagem de brotaccedilotildees enraizadas nuacutemero e massa
fresca das raiacutezes desenvolvida por brotaccedilatildeo altura da
planta e massa da mateacuteria fresca da parte aeacuterea O
delineamento experimental foi inteiramente casualizado com
29 repeticcedilotildees Cada parcela foi constituiacuteda de um tubo de
ensaio com um explante
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos programas SASStat e SISVAR versatildeo 301
Aplicou-se a anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo
grau para avaliar a variaccedilatildeo das variaacuteveis em funccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de ANA
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Na proliferaccedilatildeo de
brotaccedilotildees observou-se que os fatores concentraccedilatildeo de
2iP e o subcultivo isoladamente e em interaccedilatildeo afetam
significativamente (P 005) as variaacuteveis nuacutemero e massa
da mateacuteria fresca das brotaccedilotildees formadas A equaccedilatildeo que
SANTOS M do D M dos et al78
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
melhor se ajustou para explicar o efeito de 2iP nos diferentes
subcultivos para a variaacutevel nuacutemero de brotaccedilotildees foi a de
segundo grau (Figuras 1 e 2) A multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees
de abacaxizeiro ornamental in vitro eacute dependente de 2iP
no meio de cultura O nuacutemero de brotaccedilotildees por explante
responsivo de tamanho maior que 05 cm de comprimento
foi pequeno na primeira subcultura (30 dias) em todas as
concentraccedilotildees de 2iP testadas aumentando-se nos demais
subcultivos Aos 30 60 90 e 120 dias estimou-se que a
concentraccedilatildeo de 16 mg L-1 de 2iP produziu o maacuteximo de
brotaccedilotildees por explante inoculado respectivamente 20 42
64 e 139 (Figuras 1 e 2) Esses resultados estatildeo em
consonacircncia com a importacircncia da citocinina em vaacuterios
aspectos do crescimento e desenvolvimento da planta
tais como divisatildeo celular (SKOOG amp MILLER 1957) quebra
da dominacircncia apical e desenvolvimento das gemas laterais
(SACHS amp THIMMAN 1964) induccedilatildeo e multiplicaccedilatildeo de
brotaccedilotildees in vitro (GRATTAPAGLIA amp MACHADO
1998 JOSHI amp DHAWAN 2007 MURASHIGE 1974)
Tambeacutem o tipo de citocinina e a sua concentraccedilatildeo satildeo
determinantes no processo de micropropagaccedilatildeo
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998 MURASHIGE
1974) Em Ananas sp o BAP tem sido preferencialmente
usado na proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees in vitro (ALMEIDA
1994 ALMEIDA et al 2002 CRUZ 2000 ESCALONA et
al 1999 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
GUERRA et al 1999 MATHEWS et al 1976) Entretanto
Kiss et al (1995) relataram que tanto o BAP quanto a
cinetina foram efetivos para formaccedilatildeo de brotaccedilotildees em
abacaxizeiro comercial No presente trabalho o 2iP foi
adicionado ao meio devido a sua maior atividade bioloacutegica
comparada com o BAP e a cinetina (MURASHIGE 1974)
Tambeacutem para a variaacutevel massa da mateacuteria fresca
foi constatada a resposta quadraacutetica das doses de 2iP
(Figuras 3 e 4) Pelas equaccedilotildees de regressatildeo infere-se
que o 2iP estimula o acuacutemulo de massa fresca nas
brotaccedilotildees com o maacuteximo obtido com a concentraccedilatildeo de
18 mgL-1 desse fator nos subcultivos de 30 60 e 120 dias
com a produccedilatildeo de respectivamente 9 17 e 77 g por
explante inoculado No terceiro subcultivo aos 90 dias a
concentraccedilatildeo de 17 gL-1 de 2iP produziu o total de
biomassa de 45 g por explante Essa observaccedilatildeo estaacute em
concordacircncia com os trabalhos do efeito beneacutefico de
citocininas na produccedilatildeo de parte aeacuterea ateacute uma
concentraccedilatildeo oacutetima acima da qual seu excesso eacute inibitoacuterio
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1988)
FIGURA 1 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
y)dias 60(14585x = -247661x + 31353 +
R 20999 =
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e bo
taccedilotilde
es p
or
expl
ante
s
30 dias
60 dias
y (60 dias) = 14585x2 - 47661x + 31353
R2 = 0999
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 79
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 2 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
FIGURA 3 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
FIGURA 4 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa mateacuteria fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
y)dias 90(22847x = -2 73196x + 55784
R209477 =
y)dias 120(5072x = -21623x + 9464 +
R20954 =
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero m
eacutedio
de
brot
accedilatildeo
por
expl
ante
90 dias
120 dias
y (120 dias) = 50725x2 - 1623x + 9464
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
R2 = 0954
y(60 dias) = -38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (
g)
30 dias
60 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (60 dias) = - 38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
y)dias 90(12255x = -243239x + 75847 +
R209717 =
y)dias 120(19075x = -271029x + 11295 +
R2096 =
0
10
2030
40
50
6070
80
90
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (g
)
90 dias
120 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (120 dias) = 19075x2 - 71029x + 11295
R2 = 096
y (90 dias) = 12255x2 - 43239x + 75847R2 = 09717
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e br
otaccedil
atildeo p
or e
xpla
nte
SANTOS M do D M dos et al80
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
Enraizamento das brotaccedilotildees A induccedilatildeo
emergecircncia e alongamento das raiacutezes ocorreram em todos
os tratamentos Em meio sem regulador de crescimento
os propaacutegulos apresentaram raiacutezes desenvolvendo-se
de maneira pontual na extremidade seccionada dos
explantes (Figura 5) Em meio com ANA as raiacutezes
desenvolveram-se na porccedilatildeo basilar dos propaacutegulos em
forma de roseta Em geral a auxina eacute utilizada na fase de
enraizamento de propaacutegulos oriundos da cultura in vitro
de Ananas (BARBOZA et al 2004 CORREIA et al
2000 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
PRAXEDES et al 2001 TENG 1997) Entretanto o
enraizamento pode ser feito em meio sem regulador de
crescimento (KISS et al 1995 ZEPEDA amp SAGAWA
1981) A utilizaccedilatildeo de uma auxina na fase de enraizamento
induz agrave formaccedilatildeo de um sistema radicular mais
pronunciado que facilitaraacute a fase de aclimataccedilatildeo (Figura
5) Observou-se que a concentraccedilatildeo de ANA afetou
significativamente (P 005) o nuacutemero de raiacutezes massa
fresca das raiacutezes e da parte aeacuterea A altura da planta natildeo
foi afetada pela concentraccedilatildeo de ANA sendo o valor
de F natildeo significativo
Constatou-se uma relaccedilatildeo quadraacutetica entre as
variaacuteveis nuacutemero e massa da mateacuteria fresca das raiacutezes e da
parte aeacuterea e a concentraccedilatildeo de ANA A estimativa da
proliferaccedilatildeo de raiacutezes baseando-se no nuacutemero de raiacutezes
por explante aumentou com a concentraccedilatildeo de ANA
atingindo um maacuteximo de 119 com 22 mg L-1 de ANA
Concentraccedilotildees acima de 22 mg L-1 tendem a apresentar
um efeito inibitoacuterio na produccedilatildeo de raiacutezes (Figura 6)
Tambeacutem a massa da mateacuteria fresca das raiacutezes aumentou
com a concentraccedilatildeo de ANA com um maacuteximo de 023 g
obtida com a concentraccedilatildeo de 24 mg L-1 de ANA (Figura
7) Essa tendecircncia foi observada para a massa fresca da
parte aeacuterea onde a estimativa maacutexima da produccedilatildeo de
biomassa foi de 046 g por explante em meio com 19 mg L-1
de ANA (Figura 8)
Com relaccedilatildeo agrave altura das plantas natildeo houve
diferenccedila significativa entre as diferentes concentraccedilotildees
de ANA e essa variaacutevel
FIGURA 5 Brotaccedilotildees enraizadas em meio MS contendo diferentes concentraccedilotildees de ANA (mg L-1) aos 30 dias apoacutesa inoculaccedilatildeo
00 05 10 15 20 25 30 40
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 81
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 6 Variaccedilatildeo do nuacutemero de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 7 Variaccedilatildeo na massa da mateacuteria fresca de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 8 Variaccedilatildeo da massa de mateacuteria fresca da parte aeacuterea por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
y = -1202x2 + 5291x + 61504
R2 = 06865
0
2
4
6
8
10
12
14
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Nordm
de r
aiacuteze
s
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00282x2 + 01359x + 00704
R2 = 07573
0
005
01
015
02
025
03
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Mas
sa fr
esca
das
raiacutez
es
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00363x2 + 01407x + 03255
R2 = 0857
0
01
02
03
04
05
06
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Mas
sa fr
esca
da
part
e aeacute
rea
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
SANTOS M do D M dos et al82
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
CONCLUSOtildeES
No meio liacutequido contendo MS vitaminas 3 de
sacarose e 16 mg L-1 de 2iP obteacutem-se uma estimativa meacutedia
de 139 brotaccedilotildees por explante inoculado no final do quarto
subcultivo (120 dias)
Maior nuacutemero de raiacutezes adventiacutecias por explante eacute
estimado com a concentraccedilatildeo de 22 mg L-1 de ANA
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) pelas bolsas concedidas
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MOTHEacute G P B et al84
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
(Recebido em 25 de marccedilo de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFICIEcircNCIA FOTOQUIacuteMICA E CARACTERIacuteSTICAS DECRESCIMENTO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR (Saccharum officinarum L)CULTIVADA IN VITRO EM DIFERENTES CONCENTRACcedilOtildeES DE
SACAROSE E QUALIDADE DE LUZ
PHOTOCHEMICAL EFFICIENCY AND GROWTH CHARACTERISTICS OF SUGARCANE (Saccharum officinarum L) PLANTS CULTIVATED IN VITRO UNDER
DIFFERENT SUCROSE CONCENTRATIONS AND LIGHT QUALITY
1Bioacuteloga Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000 28015-620
Campos dos Goytacazes RJ georgiabecharayahoocombr2Engenheiro Agrocircnomo Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA
Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000
28015-620 Campos dos Goytacazes RJ alenauenfbr crespouenfbr campostuenfbr
RESUMODentre os diversos produtos agriacutecolas cultivados no
Estado do Rio de Janeiro a cana-de-accediluacutecar (Saccharumofficinarum L) eacute a cultura de maior importacircncia econocircmicaDiante dessa importacircncia na regiatildeo fluminense torna-senecessaacuteria cada vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividadedessa espeacutecie A produccedilatildeo em escala comercial de plantas decana-de-accediluacutecar pode ser beneficiada pela obtenccedilatildeo de mudas dealta qualidade e homogeneidade em curtos periacuteodos de tempo oque pode ocorrer pelo uso da micropropagaccedilatildeo A presenccedila decarboidrato eacute essencial para o enraizamento de muitas espeacuteciesin vitro sendo a sacarose o accediluacutecar mais utilizado namicropropagaccedilatildeo Poreacutem a necessidade desse composto nomeio de cultivo vem sendo discutida por alguns autoresObjetivou-se neste trabalho verificar o efeito da concentraccedilatildeode sacarose no meio de cultivo e a qualidade da luz sobre acapacidade fotossinteacutetica e as caracteriacutesticas de crescimentoem plantas de cana de accediluacutecar cultivadas in vitro Para tanto foiquantificada a emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila determinadaa massa seca de raiz e da parte aeacuterea a massa foliar especiacutefica eestimada a concentraccedilatildeo de clorofilas Os resultados obtidosmostraram que em cana de accediluacutecar cultivada in vitro em frascosfechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de sacarose no meio decultivo promoveu aumentos na mateacuteria seca da parte aeacuterea e daraiz na massa foliar especiacutefica e na intensidade de cor verde dasfolhas estudadas Natildeo houve modificaccedilatildeo na capacidadefotoquiacutemica maacutexima do PSII A justificativa para o natildeo-comprometimento da sacarose sobre as caracteriacutesticasrelacionadas agrave fotossiacutentese estudadas neste trabalho como oteor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o rendimentoquacircntico maacuteximo do PSII pode estar relacionada com a altacapacidade dessa espeacutecie em armazenar sacarose nos tecidos
Termos para indexaccedilatildeo Saccharum officinarum aclimatizaccedilatildeomeio de cultura fotossiacutentese
ABSTRACTThe State of Rio de Janeiro was one of the pioneers in
Brazil to set out the sugar cane activity which still represents animportant segment in the regional economy The production ofplants in commercial scale would be benefited by the attainmentof seedlings of high quality and homogeneity in short periods oftime which can be obtained using the micropropagation Thepresence of carbohydrate is essential for in vitro rooting of manyspecies with the sucrose being considered the most used sugarduring micropropagation despite the discussion by some authorsregarding its requirement The objective of this work was toevaluate the effect of sucrose concentrations in the culture mediumand light quality on the photosynthetic capacity and biometriccharacteristics on micropropagated sugar cane plants Chlorophyllfluorescence and contents were quantified root and shoot drymass and specific leaf mass were determined and chlorophyllconcentrations were estimated The results showed that theincrease in sucrose concentration during the in vitro cultivationof sugar cane in closed flasks promotes increase in the shootand root dry matter specific leaf mass and chlorophyll contentsNo modification of maximum PSII photochemistry capacity wasobserved The lack of sucrose effects on photosyntheticcharacteristics such chlorophyll contents and PSII yield may berelated to the high capacity of this specie to storage sucrose inthe tissues
Index terms Saccharum officinarum aclimatization culturemedium photosynthesis
Siacutembolos PSII fotossistema II SPAD Soil Plant AnalysisDevelopment BAP benzilaminopurina FFF fluxo de foacutetonsfotossinteacuteticos MPC medidor portaacutetil de clorofilas MFE massafoliar especiacutefica F
vF
maacutex Rendimento quacircntico maacuteximo do
fotossistema II MSPA massa seca parte aeacuterea MSR massaseca raiz AIB acido indol butirico ANAacido naftaleno aceacutetico
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 85
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
INTRODUCcedilAtildeO
A cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) foi
introduzida no Brasil no seacuteculo XVII com o objetivo de
quebrar o monopoacutelio mundial exercido pela Franccedila no
comeacutercio do accediluacutecar produzido nas Ilhas do Caribe O cultivo
da cana-de-accediluacutecar teve um grande aumento quando em
meados da deacutecada de 70 o Brasil criou o Programa Nacional
do Aacutelcool o qual teve como objetivo estimular a produccedilatildeo
do aacutelcool visando o atendimento das necessidades do
mercado interno e externo e da poliacutetica de combustiacuteveis
automotivos (MENEZES VEIGA et al 2006)
Atualmente a cana-de-accediluacutecar eacute uma das principais
culturas do panorama brasileiro e continua crescendo em
funccedilatildeo do consumo como fonte de energia e accediluacutecar Dentre
os diversos produtos agriacutecolas cultivados no estado do Rio
de Janeiro a cana-de-accediluacutecar eacute a cultura de maior importacircncia
econocircmica (MENEZES VEIGA et al 2006) Diante dessa
importacircncia na regiatildeo fluminense torna-se necessaacuteria cada
vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividade dessa espeacutecie
Uma das alternativas para essa elevaccedilatildeo eacute a formaccedilatildeo de
lavouras por meio do uso de mudas de excelente qualidade
Assim a micropropagaccedilatildeo eacute uma teacutecnica que pode contribuir
significativamente para a produccedilatildeo de mudas de cana de
accediluacutecar de alta qualidade Entre as diversas vantagens que
essa teacutecnica apresenta estaacute a produccedilatildeo raacutepida de mudas em
larga escala e a eliminaccedilatildeo de microrganismos potencialmente
fitopatogecircnicos
A micropropagaccedilatildeo tradicional tem como premissa
a presenccedila de sacarose no meio de cultivo uma vez que
esse composto eleva a produccedilatildeo de biomassa e pode
contribuir para aumentar o enraizamento de muitas espeacutecies
in vitro (GRATTAPAGALIA amp MACHADO 1990)
Entretanto vaacuterios autores tecircm sugerido que a fonte de
carboidrato no meio de cultura inibe o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono A adiccedilatildeo da sacarose ao meio
inibiu a fotossiacutentese potencial in vitro (LEES et al 1991)
reduziu a atividade da Rubisco (GROUT amp DONKIN 1987)
inibiu o acuacutemulo de clorofila (LA ROSA et al 1984) e
diminuiu a fixaccedilatildeo do carbono inorgacircnico por meio da
inibiccedilatildeo da atividade da carboxilase do fosfoenol-piruvato
e do Ciclo de Calvin (NEUMANN amp BENDER 1987)
Entretanto Khan et al (2006) trabalhando com cana-de-
accediluacutecar relataram que a maacutexima taxa de multiplicaccedilatildeo de
dois clones (AEC82-223 e NIA-2004) foi nas concentraccedilotildees
de 4 e 6 de sacarose no meio mostrando que nesses
clones cultivados em frascos fechados in vitro a sacarose
foi de fundamental importacircncia para a otimizaccedilatildeo do
crescimento da parte aeacuterea Esses autores mostraram que
a maior taxa de enraizamento foi em meio MS com 1 mg L-
1 de AIB e 6 de sacarose
Alguns autores para facilitar a aclimatizaccedilatildeo da
planta micropropagada sugerem adotar na uacuteltima fase da
cultura in vitro diminuir a concentraccedilatildeo de sacarose com
o objetivo de tentar elevar a taxa fotossinteacutetica e capacitar
a planta agrave nutriccedilatildeo autotroacutefica uma vez que a fonte de
carboidrato no meio de cultura pode inibir o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono Em vista disso Simmonds (1983)
obteve melhores resultados no enraizamento de porta-
enxerto de macieira ao reduzir a concentraccedilatildeo de sacarose
no meio de cultura para apenas 1 Contudo Wainwright
amp Scrace (1989) sugerem manter a sacarose no niacutevel
normalmente utilizado (3) ou ateacute mesmo aumentaacute-lo numa
fase anterior agrave aclimatizaccedilatildeo visando melhorar a qualidade
da planta Segundo esses autores o preacute-condicionamento
em altas concentraccedilotildees de sacarose aumentaria as reservas
de carboidratos armazenadas pelas folhas aumentando
assim a energia disponiacutevel para as placircntulas durante o
processo de aclimataccedilatildeo Para George amp Sherrington (1984)
no desenvolvimento in vitro de muitas espeacutecies a
assimilaccedilatildeo fotossinteacutetica eacute baixa fazendo com que as
culturas sejam dependentes do suporte externo de
carboidratos
Objetivou-se neste trabalho verificar o efeito da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo e da qualidade
de luz sobre a eficiecircncia fotoquiacutemica e as caracteriacutesticas de
crescimento da cana-de-accediluacutecar cultivada in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
O experimento foi realizado na unidade de pesquisa
em fotossiacutentese de plantas in vitro no Setor de Fisiologia
MOTHEacute G P B et al86
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
Vegetal Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal
na UENF Campos dos GoytacazesRJ
Como fonte de explante foram utilizadas placircntulas
de cana-de-accediluacutecar com dois a trecircs centiacutemetros de altura
proveniente de material vegetal jaacute em fase de multiplicaccedilatildeo
contendo meio MS modificado (02 mg L-1 de fonte de
nitrogecircnio combinado 01 mg L-1 de cinetina 02 mg L-1 de
BAP 1 mg L-1 de Tiamina 100 mg L-1 de mio-inositol e 20 g
L-1 de sacarose) em condiccedilotildees de perfilhamento O material
foi obtido no Laboratoacuterio de Cultura de Tecido do Campus
Dr Leonel Miranda UFRRJ O meio de cultura utilizado
para o recultivo foi o MS padratildeo (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 100 mg L-1 de mio-inositol 7 g L-1 de
Agar (Vetec) e sem adiccedilatildeo de reguladores de crescimento
Os tratamentos consistiram de uma combinaccedilatildeo bifatorial
de seis concentraccedilotildees de sacarose no meio (0 10 20 30
40 e 50 g L-1) e dois tipos de luz (lacircmpada fluorescente
branca 40w luz branca com irradiacircncia de 948 igravemol m-2 s-
1 e lacircmpada fluorescente tipo Grolux 40w luz vermelha
com irradiacircncia de 966 igravemol m-2 s-1) O pH do meio foi
ajustado para 58 antes da inclusatildeo do aacutegar e da
autoclavagem (15 atm a 120ordmC por 20 min) A parcela
experimental consistiu de frascos tipo baby food
contendo 50 mL do meio MS nas diferentes
concentraccedilotildees de sacarose O delineamento experimental
foi inteiramente casualizado com trecircs repeticcedilotildees em que
cada parcela consistiu de um frasco com duas plantas
Apoacutes a inoculaccedilatildeo os explantes foram cultivados em
sala de crescimento a uma temperatura 25ordm C plusmn 10 a um
fluxo de foacutetons fotossinteacuteticos de 120 a 150 igravemol m-2 s-1
com 16h de fotoperiacuteodo
Aos vinte e oito dias apoacutes a inoculaccedilatildeo (DAI) foi
utilizada a 2ordm eou 3ordm folha mais expandida para as anaacutelises
para determinaccedilatildeo do rendimento quacircntico maacuteximo do PSII
(FvF
max) (apoacutes adaptaccedilatildeo da folha ao escuro por 30
minutos com auxiacutelio de pinccedilas) por meio de um fluoriacutemetro
natildeo modulado PEA (Plant Efficiency Analyser - Hansatech
Ltd King s Lynn Norfolk UK)
A medida de intensidade de verde (relacionada com
o teor de clorofilas totais) foi feita nesta mesma eacutepoca por
meio do medidor portaacutetil do teor de clorofila SPAD 502
Chlorophyll Meter Minolta Japatildeo Os valores da
intensidade do verde foram provenientes da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha
A massa foliar especiacutefica feita aos 28 dias apoacutes o
cultivo in vitro foi determinada a partir da divisatildeo da massa
seca da folha de uma parte do limbo foliar pela respectiva
aacuterea dessa parte
No final do experimento foi determinada a massa
seca das partes aeacuterea e da raiz das plantas Essas partes
foram colocadas em estufa com ventilaccedilatildeo forccedilada a 70ordm C
por 48 h A partir dos dados da massa seca estimou-se a
relaccedilatildeo parte aeacuterearaiz (massa seca da parte aeacuterea massa
seca das raiacutezes)
Os dados experimentais foram submetidos a uma
anaacutelise de variacircncia e para cada tratamento foram
avaliados trecircs frascos Foram realizadas duas repeticcedilotildees
para cada frasco e seis plantas foram utilizadas
provenientes de trecircs frascos Os dados de cada avaliaccedilatildeo
foram analisados estatisticamente por teste Tukey a 5
e os resultados expressos como meacutedia (plusmn erro-padratildeo) de
seis repeticcedilotildees
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os diferentes tratamentos de luz e dosagem de
sacarose no meio de cultura influenciaram a produccedilatildeo de
biomassa na parte aeacuterea mostrando que maiores
concentraccedilotildees de sacarose produziram maior biomassa
(figuras 2 e 3) O tratamento controle (0 g L-1 de sacarose)
natildeo produziu biomassa suficiente para as anaacutelises
Portanto as plantas-controle cultivadas nessas
condiccedilotildees requerem a adiccedilatildeo de carboidratos para suprir
suas necessidades metaboacutelicas quer participando na
geraccedilatildeo de energia ou como fonte de esqueletos
carbocircnicos para vaacuterios processos bioquiacutemicos sugerindo
que as condiccedilotildees encontradas no frasco de cultivo e na
sala de crescimento foram ineficientes para as plantas-
controle desenvolverem condiccedilotildees de realizar
fotossiacutentese e consequumlentemente produzir biomassa
(Figura 1)
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 87
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 1 Plantas de cana-de-accediluacutecar cultivada em diferentes concentraccedilotildees de sacarose apoacutes 28 dias de cultivo (A)0 g L-1 (B) 10 g L-1 (C) 20 g L-1 (D) 30 g L-1 (E) 40 g L-1 e (F) 50 g L-1
Os resultados obtidos por meio da anaacutelise de
variacircncia para as cinco diferentes concentraccedilotildees de
sacarose (10 20 30 40 e 50 g L-1) no meio demonstraram
que para a caracteriacutestica massa seca da parte aeacuterea (MSPA)
houve uma resposta crescente em que doses crescentes
de sacarose promoveram acreacutescimos de biomassa seca
(Figura 2A) A concentraccedilatildeo 10 g L-1 diferenciou
significativamente das concentraccedilotildees de 40 g L-1 e 50 g L-
1 produzindo uma menor MSPA 0039 0101 e 0135g
respectivamente (Figura 2A) Dados semelhantes foram
obtidos em morangueiros batata menta e videira por
(RIQUELME et al 1991) e por (NICOLOSO 2003) em que
nesse trabalho a elevaccedilatildeo da concentraccedilatildeo de sacarose
de 30 ateacute 60 g L-1 promoveu maior produccedilatildeo de biomassa
dos oacutergatildeos de Pfaffia glomerata (Spreng) Pedersen
Com relaccedilatildeo agrave mateacuteria seca da raiz (MSR) as
diferenccedilas de concentraccedilatildeo de sacarose influenciaram
significativamente os resultados As menores
concentraccedilotildees (10 20 e 30 g L-1) somente diferenciaram
significativamente da maior concentraccedilatildeo (50 g L-1) que
produziu valores 0084g de MSR (Figura 2b) Pelos
resultados foi verificado que a presenccedila de sacarose
mostrou-se fundamental para o desenvolvimento da parte
aeacuterea e das raiacutezes da cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro
De fato Khan et al (2008) mostraram que o meio MS com
meia forccedila suplementado com reguladores de crescimento
(AIB e ANA) e 60 g L-1 de sacarose proporcionou maior
enraizamento em 3 variedades elite de cana-de-accediluacutecar Khan
et al (2006) tambeacutem indicaram a importacircncia da sacarose
no crescimento da parte aeacuterea em clones dessa espeacutecie
George (1996) relata que para formaccedilatildeo de raiacutezes in vitro
haacute necessidade de energia e carboidratos sendo esses
fornecidos por meio da fotossiacutentese (em condiccedilotildees
autotroacuteficas) ou oriunda de uma fonte exoacutegena de accediluacutecar
(em sistemas heterotroacuteficos ou mixotroacuteficos) O autor
verificou ainda que o aumento da concentraccedilatildeo de
sacarose de modo geral estimula o crescimento e a
formaccedilatildeo de raiacutezes de algumas espeacutecies Jaacute em outros
trabalhos na fase de enraizamento a reduccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultura vem sendo
citada como beneacutefica na melhoria da qualidade do sistema
radicular bem como na sobrevivecircncia das placircntulas
transplantadas (ANDRADE 1998)
Com relaccedilatildeo agrave MSPAMSR os tratamentos natildeo
apresentaram diferenccedila significativa apontando uma
relaccedilatildeo direta entre o crescimento das raiacutezes e da parte
MOTHEacute G P B et al88
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 2 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e as diferentes concentraccedilotildees de sacarose no meio de cultivoindependente da luz (A) Massa seca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa seca raiz (MSR) (C) Razatildeo massa seca da parteaeacuterearaiacutezes (MSPAMSR) (D) Massa foliar especiacutefica (MFE) (E) Teor estimado de clorofilas totais (valores de MPC)(F) Rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (F
vF
m) em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Cada
siacutembolo representa a meacutedia de seis repeticcedilotildees em MSPA MSR MSPA MSR e MFE e oito repeticcedilotildees em Valores deMPC e da relaccedilatildeo F
vF
m Meacutedias seguidas pela mesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
aeacuterea Essa relaccedilatildeo eacute de fundamental importacircncia para a
organizaccedilatildeo dos processos fisioloacutegicos e desenvolvimento
das plantas (TAIZ amp ZEIGER 2002) Essas partes estatildeo
relacionadas entre si e essa relaccedilatildeo eacute devida agrave dependecircncia
nutricional e fitohormonal da parte aeacuterea com a raiz
(SALISBURY amp ROSS 1992) (Figura 2c)
As diferentes concentraccedilotildees de sacarose
influenciaram a massa foliar especiacutefica (MFE) a qual
representa a quantidade de massa seca por unidade de
aacuterea da folha estimando a proporccedilatildeo relativa da superfiacutecie
assimilatoacuteria e os tecidos de sustentaccedilatildeo e condutores da
folha aleacutem de poder ser correlacionada positivamente com
a taxa fotossinteacutetica (CRUZ et al 2004) A menor
concentraccedilatildeo de sacarose apresentou o menor valor (148
g m-2) o que indica que a ausecircncia de sacarose pode
comprometer a espessura foliar bem como a capacidade
da maquinaria fotossinteacutetica (Figura 2d)
O teor de clorofila foi estimado por meio do medidor
portatil de clorofila (MPC) Os valores encontrados da
intensidade do verde foram oriundos da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha As diferentes concentraccedilotildees de
sacarose no meio de cultivo influenciaram a intensidade
de verde (Figura 2e) em que a maior concentraccedilatildeo de
sacarose apresentou o maior valor do MPC (336)
0
003
006
009
012
015
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
A (g
)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MFE
(gm
2)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
0
002
004
006
008
01
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSR
(g)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
20
22
24
26
28
30
32
34
36
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
Val
ores
de
MPC
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
000
100
200
300
400
500
600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
AM
SR
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
062
064
066
068
07
072
074
076
078
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
FvF
m
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
A
B
D
C
E
F
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 89
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
diferenciando significativamente dos demais tratamentos
Esses valores estatildeo relacionados com uma maior
quantidade de clorofilas totais em maiores teores de
sacarose Nesse caso em plantas de cana-de-accediluacutecar a
elevaccedilatildeo no teor de sacarose contribui para o incremento
do teor de clorofilas a partir de 30 g L-1 desse composto no
meio de cultivo
Com relaccedilatildeo agrave atividade do PSII avaliada por meio
da emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila a as plantas de
cana-de-accediluacutecar apresentaram alteraccedilotildees com relaccedilatildeo aos
tratamentos utilizados Estatisticamente os valores
menores da eficiecircncia fotoquiacutemica maacutexima do PSII (FvF
m)
foram verificados na concentraccedilatildeo de 20 g L-1 de sacarose
(Figura 2f) Com exceccedilatildeo das plantas crescidas nessa
concentraccedilatildeo de sacarose as demais plantas cultivadas
em meios com maiores concentraccedilotildees de sacarose natildeo
apresentaram diferenccedilas significativas para a caracteriacutestica
FvF
m Por meio dos resultados relacionados aos efeitos
da concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo sobre as
caracteriacutesticas de crescimento a produccedilatildeo de biomassa
estaria mais relacionada agrave oferta de carbono no meio de
cultivo do que a eficiecircncia na maquinaria fotoquiacutemica das
plantas
A qualidade do fluxo de foacutetons fotossinteacutetico (FFF)
teve influecircncia relevante nas caracteriacutesticas MSPA MSR
MFE e valores do MPC A luz considerada vermelha emitida
pelas lacircmpadas GroLux proporcionou maiores valores das
caracteriacutesticas supracitadas Tais resultados poderiam estar
relacionados a um maior ganho de carbono por meio de um
aumento da taxa fotossinteacutetica liacutequida eou indiretamente
causado por alteraccedilotildees fitormonais causadas pela
modificaccedilatildeo no espectro luminoso (CAMPELL amp
BONNER 1986) Ainda na presenccedila da luz vermelha houve
favorecimento para a produccedilatildeo de biomassa tanto na parte
FIGURA 3 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e os diferentes tipos de luz (Branca e Vermelha) (A) Massaseca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa foliar especifico (MFE) (C) Massa seca raiz (MSR) e (D) Teor estimado declorofilas totais (Valores de MPC) Cada siacutembolo representa a meacutedia sendo 15 repeticcedilotildees em MSPA MSR e valores deMPC e 20 repeticcedilotildees em MFE em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Meacutedias seguidas pelamesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
14
16
18
20
22
LUZ
MFE
(gm
2)
Luz branca
Luz vermelha
0
001
002
003
004
005
LUZ
MSR
(g)
Luz branca
Luz vermelha
002
004
006
008
01
012
014
LUZ
MSP
A (g
)
Luz branca
Luz vermelha
20
22
24
26
28
30
LUZ
Val
ores
de
MP
C
Luz branca
Luz vermelha
A
C
B
D
MOTHEacute G P B et al90
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
aeacuterea como no sistema radicular A luz branca apresenta
uma composiccedilatildeo espectral que pode variar e causar
respostas diferenciadas na cultura in vitro A
predominacircncia na emissatildeo de foacutetons na regiatildeo do vermelho
ateacute o azul pode estimular a induccedilatildeo de calos quebrar a
moleacutecula de AIA e ainda estimular a induccedilatildeo de brotos
(BARRUETO CID 2001 CHAMOVITZ amp DENG 1996)
As plantas cultivadas em maiores concentraccedilotildees
(40 e 50 gL-1) de sacarose e aclimatadas em luz vermelha
tiveram melhores resultados do que nos outros tratamentos
(Figura 2 e 3)
CONCLUSOtildeES
Em cana-de-accediluacutecar cultivada em condiccedilotildees in vitro
e em frascos fechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de
sacarose no meio de cultivo promoveu aumentos na
mateacuteria seca da parte aeacuterea e da raiz na massa foliar
especiacutefica e na intensidade de cor verde das folhas
estudadas Natildeo houve alteraccedilatildeo na eficiecircncia fotoquiacutemica
maacutexima do PSII A luz vermelha associada agrave concentraccedilotildees
de sacarose de 40 e 50gL-1 parece ter uma resposta
somatoacuteria tanto na produccedilatildeo de parte aeacuterea e raiz quanto
na massa foliar especiacutefica e no teor de clorofila
A justificativa para o natildeo-comprometimento da
sacarose no meio sobre as caracteriacutesticas relacionadas agrave
fotossiacutentese estudadas neste trabalho como exemplo o
teor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o
rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (FvF
m) pode estar
relacionada com a alta capacidade dessa espeacutecie em
armazenar sacarose nos tecidos
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
(Recebido em 20 de junho de 2008 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EFFECTS OF AUXINS AND CYTOKININS ON IN VITRODEVELOPMENT OF Alpinia purpurata K SCHUM AND
PHENOLIC COMPOUNDS PRODUCTION
EFEITO DE AUXINAS E CITOCININAS NO DESENVOLVIMENTO IN VITRO DEAlpinia purpurata K SCHUM E PRODUCcedilAtildeO DE SUBSTAcircNCIAS FENOacuteLICAS
CRISTIANE PIMENTEL VICTOacuteRIO1 IACINETE PAMPLONA DA CRUZ2 ALICE SATO3RICARDO MACHADO KUSTER4 CELSO LUIZ SALGUEIRO LAGE5
1Doutora em Ciecircncias Bioloacutegicas (Biofiacutesica) Instituto de Biofiacutesica Carlos Chagas FilhoLab Fisiologia Vegetal Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050 21952-590 Rio de Janeiro RJ crispvbiofufrjbr
2Estudante de Farmaacutecia bolsista PIBICUFRJ3Doutora em Biotecnologia Vegetal Prof Dep Botacircnica Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro Av Pasteur 458
22290-040 Rio de Janeiro RJ alicesatouniriobr4Doutor Prof Laboratoacuterio de Fitoquiacutemica Nuacutecleo de Pesquisas de Produtos Naturais (NPPN) Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco H 21941-902 Rio de Janeiro RJ kusternppnufrjbr
5Doutor Prof IBCCFo Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050
21952-590 Rio de Janeiro RJ clslagebiofufrjbr
ABSTRACTAlpinia purpurata K Schum is largely used in
ornamentation and scarcely present itself in folk medicine Studiesusing plant tissue culture technique under standardized conditionpermit to evaluate plant physiological morphological andphytochemical responses to exogenous plant growth regulatorThis work consisted in the establishment of in vitro A purpurataplants using different concentrations of auxin and cytokinins inmg L-1 IAA 2 TDZ 2 and 4 IAA 2 + TDZ 2 IAA 2 + BAP 2Additionally it was determined the content of phenoliccompounds in the leaves of field and in vitro plants using Folin-Ciocalteau method Buds from inflorescence A purpurata weredisinfested and introduced in solid MS medium to initiate culturesThe direct organogenesis process was fast and satisfactoryproducing elongated plants with a developed radicular systemThe rooting percentage reached 100 for all treatments after 2months Cytokinins and auxins were important for the increasingof the leaves quantity (42 to 51) and shoot elongation (40 cm)Liquid MS0 presented the favorable results for fastmicropropagation and higher production of shoots providingplants ready to be acclimatized In vitro plants cultivated underMS0 produced 93 of phenolic compounds in comparison withfield plants (100) Through High Performance LiquidChromatographic it was verified similar chromatographic profilesbetween field and in vitro plant extracts
Index terms Folin-Ciocalteau HPLC micropropagation tissueculture Zingiberaceae Alpinia purpurata
RESUMOAlpinia purpurata K Schum eacute uma espeacutecie muito
utilizada como ornamental e possui escassas indicaccedilotildees de usona medicina popular Estudos utilizando teacutecnicas de cultura detecidos vegetais permitem a partir de condiccedilotildees padronizadas
avaliar as respostas fisioloacutegicas morfoloacutegicas e fitoquiacutemicas dosvegetais aos fitorreguladores exoacutegenos Este trabalho consistiuno estabelecimento de plantas de A purpurata in vitro utilizando-se diferentes concentraccedilotildees de auxina e citocininas (mg L-1) AIA2 TDZ 2 e 4 AIA 2 + TDZ 2 AIA 2 + BAP 2 Verificou-setambeacutem o conteuacutedo de substacircncias fenoacutelicas nas folhas de plantasde campo e in vitro atraveacutes do meacutetodo de Folin-CiocalteauBrotos oriundos da inflorescecircncia de A purpurata foramdesinfestados e introduzidos em meio MS soacutelido para iniciar asculturas O processo de organogecircnese direta foi raacutepido esatisfatoacuterio produzindo plantas alongadas e com sistema radiculardesenvolvido A porcentagem de enraizamento atingiu 100 paratodos os tratamentos ao final de 2 meses As citocininas e auxinasforam importantes para incrementar o nuacutemero de folhas (42 a51) e alongamento dos brotos (40 cm) em comparaccedilatildeo com omeio controle O MS0 liacutequido foi o mais favoraacutevel para raacutepidapropagaccedilatildeo in vitro e maior produccedilatildeo de brotos com suprimentode plantas aptas a serem aclimatizadas Plantas in vitro cultivadasem meio MS0 produziram 93 de fenoacuteis totais em relaccedilatildeo agravesplantas de campo (100) Atraveacutes da Cromatografia Liacutequida deAlta Eficiecircncia foi verificada semelhanccedila entre os perfiscromatograacuteficos dos extratos de plantas de campo e in vitro
Termos para indexaccedilatildeo Folin-Ciocalteau CLAEmicropropagaccedilatildeo cultura de tecidos vegetais ZingiberaceaeAlpinia purpurata
INTRODUCTION
Alpinia purpurata K Schum is widely used as
ornamental plant in several tropical and subtropical areas
with high international market demand (KRESS et al 2002
SANGWANANGKUL et al 2008) In folk medicine it is
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 93
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
used for cough in Venezuela and presents antibacterial
activity (BERMUacuteDEZ amp VELAacuteSQUEZ 2002 ZOGHBI et
al 1999) Recent studies have showed the phytochemical
potential of this species (VICTOacuteRIO et al 2007 2008)
The vegetative propagation through rhizome is the
main way of reproduction of this species According to
Moroacuten (1987) for the propagation of A purpurata in
greenhouse the time is twice more than in in vitro systems
Plant tissue culture techniques have been employed in
Brazil since 1950 and the main advantages include the
continuous and fast production of aseptic and selected
plants These techniques permit a commercial-scale
production of plants (ROUT et al 2006) and some studies
have showed them as an alternative for optimizing
secondary metabolites production (RAO amp
RAVISHANKAR 2002) The micropropagation of A
purpurata supplies may be a source for ornamental and
medicinal raw material (MULABAGAL amp TSAY 2004
POMPELLI et al 2007)
Addition of auxins and cytokinins in the culture
media are essential to improve and regulate growth and
morphogenesis of the cultures (CHITRA amp PADMAJA
2005 KYOZUKA 2007) Besides several studies have
reported the effects of plant growth regulators in in vitro
phenolic production (SANTOS-GOMES et al 2002
THIEM 2003) We intended to develop a protocol for in
vitro production of A purpurata plants and to evaluate
the effects of auxins and cytokinins on plant development
and compounds phenolic production
MATERIAL AND METHODS
Plant Material
Buds from inflorescence of donor plants of Alpinia
purpurata red inflorescence were used as source of plant
material to initiate in vitro cultures Voucher specimen was
deposited at the Herbarium of Rio de Janeiro Botanical
Garden under accession number RB 433484 Buds were
collected and washed with running water using nylon
brush for removing residues The sterilization process was
concluded in four steps in sterile ambient after dissection
of leaves 20 of commercial bleach solution for 40 min
followed by immersion in distilled water plus commercial
detergent solution for 15 min dipped in 70 ethanol
washed for 10 min in 30 of commercial bleach solution
and rinsed with sterile distilled water three after each step
Establishment of in vitro cultures
Explants were subcultured into glasses (16 x 8 cm)
containing 50 ml of culture medium Murashige amp Skoog
(1962) supplemented with 3 of sucrose 148 igraveM thiamine-
Different letters indicate significant differences at plt 005 level Tukey s test n e 30
VICTOacuteRIO C P et al96
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
FIGURE 2 In vitro development of Alpinia purpurata plants in MS medium under different plant growth regulators(mgl-1) (A) Sequence of development 1 month (I) 2 months (II) and 3 months (III) (B) shoot height after 2 months (C)shoot height and (D) percentage of shoots after 3 months Different letters indicate significant differences at plt 005level Tukey s test n e 30 100 correspond to 30 shoots per explant within 1 year
advantage of in vitro production of secondary metabolites
is the possibility to control environment and nutritional
factors Data show high level of phenolics in in vitro
cultures of A purpurata (93) compared with field plants
(100) (Figure 3A) Through reversed-phase HPLC was
found similarity between field and in vitro plants profiles
(Figure 3B-C) The peaks 1 2 and 3 presented
characteristics of phenolic compounds verified through
UV spectra obtained by HPLC A purpurata is not currently
used in folk medicine and these results may indicate the
presence of therapeutic resource in its phytochemistry
The preliminary investigation of phenolic in
organogenic cultures of A purpurata using Folin-
Ciocalteau reagent and HPLC analysis brings perspectives
about the production of antioxidant compounds by this
species In addition the establishment of tissue culture of
A purpurata may be a good alternative to produce aseptic
plants and its bioactive metabolites
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 97
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
ACKNOWLEDGEMENTS
C P Victoacuterio acknowledges the fellowship from
CAPES and PROEX financial support
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Curva de crescimento atividade da fenilalanina 99
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
(Recebido em 23 de janeiro de 2008 e aprovado em 7 de outubro de 2008)
CURVA DE CRESCIMENTO ATIVIDADE DA FENILALANINA AMOcircNIA-LIASE E TEORES DE FENOacuteIS E TANINOS TOTAIS EM CALOS DE
GROWTH CURVE PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE ACTIVITY AND TOTALPHENOL LEVELS IN CALLUS OF Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville
(FABACEAE-MIMOSOIDEAE)
ANA HORTEcircNCIA FONSEcircCA CASTRO1 MILLER MARANI LIMA2 RENATO PAIVA3 AMAURI ALVES DE ALVARENGA4 MIRELLE OLIVEIRA SOacuteTER5
1Doutora Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG2Bolsista ICFAPEMIG Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG3PhD Universidade Federal de LavrasUFLA 37200-000 Lavras MG4Doutor Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 37200-000 Lavras MG renpaivauflabr5Acadecircmica Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG
RESUMOObjetivou-se estabelecer a curva de crescimento e avaliar
a atividade da fenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis etaninos totais em calos de barbatimatildeo explantes foliares foraminoculados em meio MS suplementado com 30 g L-1 sacarose eacrescidos de 905 M de 24-D O crescimento a atividade dafenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis e taninos totaisforam avaliados a cada 10 dias durante 110 dias A curva decrescimento dos calos apresentou um padratildeo sigmoidal com cincofases distintas Os teores meacutedios de fenoacuteis totais acompanharamas variaccedilotildees observadas para a atividade enzimaacutetica Alta atividadee maiores teores de fenoacuteis totais foram observados no explanteinicial com reduccedilotildees progressivas ateacute a fase linear Na faseestacionaacuteria observaram-se incrementos importantes naatividadeda fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais Natildeo foidetectada a presenccedila de taninos totais nos calos
Termos para indexaccedilatildeo Barbatimatildeo cultivo in vitro plantamedicinal Stryphnodendron adstringens
ABSTRACTIn order to establish growth curve phenylalanine ammonia-
lyase (PAL) activity and total phenol and tannin levels inStryphnodendron adstringens leaf explants were inoculated inMS medium supplemented with 30 g L-1 sucrose and 905 M24-D The growth PAL activity and total phenol and tanninlevels were evaluated at 10 days intervals during 110 days Callusgrowth curve presented a sigmoid shape with five different phasesAverage levels of total phenol followed the changes observed forenzymatic activity High activity and higher levels of total phenolwere observed in initial explants with progressive reductions untilthe linear phase Increases in phenylalanine ammonia-lyase activityand total phenols levels were observed in stationary phase Notannins were observed on callus
Index terms Stryphnodendron adstringens In vitro CultureMedicinal Plant
INTRODUCcedilAtildeO
Atualmente um consideraacutevel esforccedilo tem sido feito
com o intuito de se produzir fitoteraacutepicos com maiores
concentraccedilotildees de substacircncias ativas vegetais atraveacutes de
culturas de ceacutelulas ou tecidos Segundo Taniguchi et al
(2002) dentre as diferentes teacutecnicas de cultivo in vitro a
cultura de calos tem apresentado grande importacircncia para
a propagaccedilatildeo e produccedilatildeo in vitro de espeacutecies de interesse
medicinal A desdiferenciaccedilatildeo e induccedilatildeo de regeneraccedilatildeo
das plantas a partir de calos satildeo muitas vezes processos
difiacuteceis de serem obtidos e podem demandar algum tempo
As auxinas tecircm sido amplamente utilizadas nos meios de
cultivo para a induccedilatildeo de calos e geralmente dependendo
da concentraccedilatildeo causam elongaccedilatildeo celular e expansatildeo ou
divisatildeo celular Em geral com o uso de baixas
concentraccedilotildees de auxinas predomina a formaccedilatildeo de raiacutezes
adventiacutecias enquanto que altas concentraccedilotildees induzem a
formaccedilatildeo de calos A interaccedilatildeo entre auxinas e citocininas
tambeacutem eacute muito utilizada para a induccedilatildeo de calogecircnese
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998)
Durante a calogecircnese eacute importante estabelecer-se
a curva de crescimento de calos o que propicia a
identificaccedilatildeo das fases distintas de crescimento da espeacutecie
A partir deste estudo pocircde-se determinar o momento exato
de repicagem dos calos para um meio fresco ou a
CASTRO A H F et al100
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
possibilidade de sua utilizaccedilatildeo em suspensotildees celulares
visando a otimizaccedilatildeo da produccedilatildeo de metaboacutelitos
secundaacuterios em espeacutecies medicinais (GEORGE 1996) O
crescimento in vitro de calos geralmente apresenta um
padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas Segundo Smith
(1992) a fase lag se caracteriza como fase de maior produccedilatildeo
de energia correspondendo ao periacuteodo em que as ceacutelulas
se preparam para a divisatildeo visando sua expansatildeo Ocorre o
iniacutecio da mobilizaccedilatildeo de metaboacutelitos primaacuterios sem qualquer
divisatildeo celular siacutentese de proteiacutenas e de compostos
especiacuteficos Essa fase resulta em um pequeno crescimento
dos calos A fase exponencial eacute biossinteacutetica Observa-se o
maior crescimento dos calos devido agrave maacutexima taxa de divisatildeo
celular caracteriacutestica desse periacuteodo O nuacutemero de ceacutelulas
aumenta Na fase linear haacute diminuiccedilatildeo da divisatildeo celular
mas aumento de volume celular e a fase de desaceleraccedilatildeo eacute
o momento em que as culturas devem ser transferidas para
outro meio devido agrave reduccedilatildeo de nutrientes produccedilatildeo de
produtos toacutexicos secagem do aacutegar e reduccedilatildeo do oxigecircnio
no interior das ceacutelulas Na fase estacionaacuteria ocorre maior
acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
O barbatimatildeo [Stryphnodendron adstringens
(Mart) Coville Fabaceae-Mimosoideae) eacute uma importante
espeacutecie medicinal do cerrado com altos teores de
compostos polifenoacutelicos em especial os taninos Possui
grande distribuiccedilatildeo e importacircncia econocircmica para o estado
de Minas Gerais sendo empregado como adstringente e
cicatrizante no combate de amidalite faringite
hemorroacuteidas leucorreacuteias erupccedilotildees cutacircneas diarreacuteias e
como agentes antiinflamatoacuterios (LIMA et al 1998)
A fenilalanina amocircnia-liase (EC 4315) eacute uma
enzima-chave e regulatoacuteria da rota biossinteacutetica dos
fenilpropanoacuteides e de seus derivados e catalisa a
desaminaccedilatildeo do aminoaacutecido L-fenilalanina em aacutecido trans-
cinacircmico sendo esse o primeiro passo para a biossiacutentese
dos fenoacutelicos vegetais (ASSIS et al 2001) De acordo com
Rivero et al (2001) os niacuteveis dessa enzima podem flutuar
significativamente em intervalos relativamente curtos em
resposta a uma ampla variedade de estiacutemulos como o
fotoperiacuteodo fitocromo mudanccedilas de temperatura radiaccedilatildeo
UV deficiecircncia de nutrientes reguladores de crescimento
virais e ataque de insetos bem como o estaacutedio de
desenvolvimento vegetal e o grau de diferenciaccedilatildeo de
ceacutelulas e tecidos (SOLECKA amp KACPERSKA 1995)
Devido agrave exploraccedilatildeo irracional pelas induacutestrias de
curtimento do couro o barbatimatildeo encontra-se ameaccedilado
de extinccedilatildeo Assim devem-se melhorar as teacutecnicas de
propagaccedilatildeo encorajar seu cultivo e criar vias alternativas
para a produccedilatildeo de tanino em larga escala a partir de
fontes naturais
Objetivou-se estabelecer a curva de crescimento e
avaliar a atividade da fenilalananina amocircnia-liase e os teores
de fenoacuteis e taninos totais em calos de barbatimatildeo
MATERIAL E MEacuteTODOS
As etapas experimentais foram realizadas entre
fevereiro de 2007 e janeiro de 2008 no Centro Universitaacuterio
de Lavras (UNILAVRAS) e na Universidade Federal de
Lavras (UFLA)
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento foi obtida a partir da
inoculaccedilatildeo de segmentos foliares de 025 cm2 de aacuterea
empregados como explantes em meio MS (MURASHIGE
amp SKOOG 1962) suplementado com 30 g L-1 sacarose e
acrescidos de 905 M de 24-D Os meios foram
solidificados com aacutegar na proporccedilatildeo de 7 g L-1 e o pH
ajustado para 57 plusmn 01 antes da autoclavagem por 20 min
Apoacutes inoculaccedilatildeo os explantes foram transferidos para sala
de crescimento onde foram incubados na presenccedila de luz
agrave temperatura de 27 plusmn 1 oC fotoperiacuteodo de 16 horas e
DFFFA= 25 mol m-2 s-1
Foram feitas pesagens do material inoculado fresco
a partir do dia da inoculaccedilatildeo (tempo 0) ateacute ser atingida a
fase de desaceleraccedilatildeo em intervalos de 10 dias O
porcentual de crescimento dos calos foi determinado pela
equaccedilatildeo proposta por Lameira (1997)
crescimento = Pf Pi
Pf
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 101
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
onde
Pf = Mateacuteria seca final
Pi = Mateacuteria seca inicial
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado sendo cada pesagem composta
por duas repeticcedilotildees e cada repeticcedilatildeo pela meacutedia de 10
tubos cada tubo contendo um explante Os dados obtidos
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia e analisados
estatisticamente utilizando-se o Sistema de Anaacutelise de
Variacircncia para Dados Balanceados (FERREIRA 2000)
Determinaccedilotildees da atividade da fenilalanina amocircnia-liasee teores de fenoacuteis e taninos totais
Calos obtidos na curva de crescimento foram
imersos em nitrogecircnio liacutequido e posteriormente
armazenados em Freezer Forma Scientific a -86 oC ateacute o
momento de serem utilizados na determinaccedilatildeo da atividade
enzimaacutetica Outros calos assim como aqueles obtidos no
experimento com a sacarose foram liofilizados para
determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis e taninos totais
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase
O procedimento descrito por Cheng amp Breen (1991)
com algumas modificaccedilotildees foi utilizado para extraccedilatildeo e
determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica
Calos congelados (5 g) foram triturados
homogeneizadas com acetona 80 e congelados por 15
minutos O homogenato foi filtrado e o pelet foi seco atraveacutes
de vaacutecuo
O extrato proteacuteico foi obtido homogeneizando-se
05 g do pelet seco em 5 mL de tampatildeo borato de soacutedio 01
M pH= 88 contendo 5 mM de -mercaptoetanol 2 mM
de EDTA e 4 (pv) de PVP a 4oC Depois de 1h o
homogenato foi centrifugado a 27000 g por 30 minutos a
4 oC A mistura de reaccedilatildeo foi constituiacuteda por 05 mL de L-
fenilalanina 30 M 30 mM de tampatildeo borato de soacutedio pH=
88 e 1 mL de extrato cru num volume total de 3 mL O
substrato foi adicionado apoacutes 10 minutos de preacute-incubaccedilatildeo
e a reaccedilatildeo foi interrompida com 01 mL de HCl 6 N A
atividade da fenilalanina amocircnia-liase foi determinada pela
produccedilatildeo de cinamato apoacutes 90 minutos agrave 30 oC sob
agitaccedilatildeo contiacutenua medida pela variaccedilatildeo da absorbacircncia a
290 nm A atividade especiacutefica da enzima foi definida em
nmol de aacutecido cinacircmicohmg de proteiacutena
Fenoacuteis totais
Amostras de calos liofilizados foram trituradas em
micromoinho e armazenadas em frascos fechados
protegidos da luz
Aproximadamente 500 mg de calos liofilizados e
triturados foram extraiacutedos cinco vezes com 5 mL de uma
mistura de metanolaacutegua (11) sob refluxo O volume final
do extrato foi completado para 25 mL
Uma aliacutequota de 100 L do extrato foi utilizada para
a determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis totais atraveacutes do
meacutetodo de Folin-Dennis segundo as normas da AOAC
(1970) As determinaccedilotildees foram feitas em triplicata e o
resultado foi expresso em porcentagem de aacutecido tacircnico
por grama de calo seco
Taninos Totais
A determinaccedilatildeo dos teores de taninos totais foi
realizada atraveacutes do Meacutetodo de Difusatildeo Radial de acordo
com Hagerman (1987)
Um volume de 5 mL do extrato foi concentrado a 37oC e posteriormente retomado com 05 mL de uma mistura
de metanolaacutegua (11) Uma aliacutequota de 15 mL foi utilizada
para a determinaccedilatildeo Todas as determinaccedilotildees foram feitas
em triplicata O resultado foi expresso em percentagem de
tanino por grama de calo seco
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento dos calos seguiu o padratildeo
sigmoidal apresentando cinco fases distintas lag
exponencial linear desaceleraccedilatildeo e estacionaacuteria (Figura
1) A fase lag onde as ceacutelulas do explante se preparam para
a divisatildeo celular e produccedilatildeo de energia ocorreu ateacute o 30o
dia apoacutes a inoculaccedilatildeo com calos apresentando um
crescimento de aproximadamente 73 A segunda fase
exponencial estendeu-se do 31o
ao 50o
dia de cultivo
com 70 de crescimento periacuteodo esse caracterizado pela
CASTRO A H F et al102
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
maacutexima divisatildeo celular A fase linear ocorreu entre o 51o ao
70o
dia e natildeo se verificou crescimento dos calos nesse
periacuteodo Entre o 71o
e 100o
dia observou-se a fase de
desaceleraccedilatildeo com 28 de crescimento e a partir do 101o
dia a cultura entrou na fase estacionaacuteria Segundo Smith
(1992) na fase de desaceleraccedilatildeo os calos devem ser
transferidos para um novo meio de cultura devido agrave
reduccedilatildeo de nutrientes secagem do aacutegar e acuacutemulo de
substacircncias toacutexicas
FIGURA 1 Curva de crescimento de calos deStryphnodendron adstringens obtidos a partir de segmentosfoliares inoculados em meio MS contendo 905 M de 24-D e 30 g L-1 de sacarose
0
002
004
006
008
01
012
014
016
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Mat
eacuteria
sec
a (g
)
De maneira semelhante essa mesma curva de
crescimento pode ser dividida em trecircs fases fase de
crescimento lento (do dia da inoculaccedilatildeo ateacute o 30o dia) fase
de crescimento ativo (do 31o
ao 70o
dia) e fase de
estabilizaccedilatildeo (71o
dia em diante) sendo indicada a
repicagem entre o 71o ao 100o dia
A curva de crescimento para calos de
barbatimatildeo apresentou um padratildeo semelhante ao de outras
espeacutecies medicinais de cerrado como Byrsonima
intermeacutedia A Juss (NOGUEIRA et al 2008) Croton
(BONILLA 2002) e Derris sp (CONCEICcedilAtildeO 2000)
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteise taninos totais
Na figura 2 encontram-se representados os
resultados da atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase
e dos teores de fenoacuteis totais verificados durante o periacuteodo
experimental O explante inicial apresentou um teor meacutedio
de 065 de taninos totais natildeo se detectando entretanto
a presenccedila de taninos nos demais calos formados
Conforme pode-se observar a atividade da
fenilalanina amocircnia-liase situou-se entre 016 e 196 mol
de aacutecido cinacircmico h-1 g-1 de mateacuteria fresca (plt005) (figura
2A) A atividade apresentou-se maacutexima no explante inicial
(dia 0) e reduziu progressivamente ateacute o 70o dia periacuteodo
esse correspondente agraves fases lag exponencial e linear
Entre o 71o ao 100o dia ou seja na fase de desaceleraccedilatildeo a
atividade enzimaacutetica indicou uma tendecircncia em se manter
constante e a partir do 101o dia (fase estacionaacuteria) verificou-
se um pequeno incremento nessa atividade da ordem de
26 De maneira semelhante os teores meacutedios de fenoacuteis
totais acompanharam as variaccedilotildees observadas para a
atividade enzimaacutetica e situaram-se em uma faixa de 029 a
399 sendo o teor meacutedio maacuteximo observado no explante
inicial (figura 2B) Os teores de fenoacuteis totais reduziram
significativamente ateacute o 60o dia (fase lag e exponencial) e a
partir do 61o
ao 90o
dia permaneceram praticamente
constantes com os menores niacuteveis observados durante o
periacuteodo experimental em torno de 037 em meacutedia A partir
da fase estacionaacuteria (100o dia) verificou-se um aumento de
65 nos teores meacutedios de fenoacuteis totais
Estes resultados mostraram-se muito interessantes
do ponto de vista fisioloacutegico e fitoquiacutemico e corroboram
com relatos de Conceiccedilatildeo (2000) e Lameira (1997) os quais
citam que a fase estacionaacuteria corresponde ao periacuteodo em
que ocorre maior acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
Apesar de esses teores serem baixos eacute importante ressaltar
que o meio de cultura pode ser otimizado para produccedilatildeo
em larga escala de fenoacuteis totais e taninos uma vez que
foram obtidos in vitro a partir de segmentos foliares e de
forma convencional satildeo extraiacutedos da casca da planta adulta
cultivada in vivo
A presenccedila de baixos teores de fenoacuteis e a ausecircncia
de taninos pode estar associada agrave alta atividade metaboacutelica
relacionada ao crescimento dos calos (mitose) o que
demanda elevada quantidade de substrato necessaacuterio agrave
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 103
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
FIGURA 2 Valores meacutedios de atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase (A) e teores de fenoacuteis totais (B) emStryphnodendron adstringens durante o periacuteodo experimental
0
05
1
15
2
25
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Ativ
idad
e da
Fen
ilala
nina
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ocircnia
-Lia
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mm
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e aacutec
cin
acircmic
o h-1
g-1 M
F)
A
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120Dias
Fenoacute
is T
otai
s (
)
B
produccedilatildeo de energia Segundo Botta et al (2001) a
diferenciaccedilatildeo celular assim como a desaceleraccedilatildeo da
atividade mitoacutetica progressivamente permite o acuacutemulo de
compostos derivados do metabolismo secundaacuterio Para
Lavola et al (2000) e Pentildeuelas et al (1997) variaccedilotildees nos
teores de metaboacutelitos secundaacuterios natildeo podem ser explicadas
somente pelas diferenccedilas na disponibilidade de carboidratos
devendo-se considerar tambeacutem a disponibilidade de
precursores para a sua siacutentese e as mudanccedilas nos padrotildees
de siacutentese e catabolismo desses compostos
CONCLUSOtildeES
A curva de crescimento para calos de barbatimatildeo
apresentou um padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas
sendo indicada a repicagem entre o 71o ao 100o dia
Alta atividade e maiores teores de fenoacuteis totais
foram observados no explante inicial com reduccedilotildees
progressivas ateacute a fase linear Na fase estacionaacuteria
observaram-se incrementos importantes na atividade da
fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais
Natildeo se detectou a presenccedila de taninos totais nos
calos durante a determinaccedilatildeo da curva de crescimento na
presenccedila de 904 M de 24-D
AGRADECIMENTOS
Agrave Fundaccedilatildeo de Amparo agrave Pesquisa do Estado de
Minas Gerais (FAPEMIG) pelo suporte financeiro ao
projeto e concessatildeo de bolsa de iniciaccedilatildeo cientiacutefica
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
(Recebido em 14 de fevereiro de 2007 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EMBRIOGEcircNESE SOMAacuteTICA DIRETA DE Coffea arabica LCONCENTRACcedilOtildeES DE NH4NO3 E DE KNO3 NO
DESENVOLVIMENTO DE EMBRIOtildeES1
DIRECT SOMATIC EMBRYOGENESIS OF Coffea arabica L CONCENTRATIONS OFNH4NO3 AND KNO3 ON THE DEVELOPMENT OF EMBRYOS
JULIANA COSTA DE REZENDE2 MOACIR PASQUAL3 SAMUEL PEREIRA DE CARVALHO3ESTER ALICE FERREIRA4 FLAVIA CARVALHO SANTOS5
1Artigo extraiacutedo da dissertaccedilatildeo de mestrado da primeira autora apresentada a Universidade Federal de LavrasUFLA2Pesquisadora MSc Epamig Campus da UFLA Cx P 176 372000-000 Lavras MG julianacostaepamigbr3Professor Dr Titular do Departamento de AgriculturaDAG Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 372000-000
Lavras MG pasqualuflabr samuelpcuflabr4Pesquisadora Dra Epamig Cx P 351 Uberaba MG esterepamigbr5Doutoranda em Fitotecnia Bolsista Capes flavinha3010yahoocombr
RESUMOO melhoramento geneacutetico do cafeeiro tem incorporado
atraveacutes de cruzamentos ganhos geneacuteticos para produtividade eoutras caracteriacutesticas de interesse agronocircmico A introduccedilatildeo demeacutetodos biotecnoloacutegicos para auxiliar os programas demelhoramento geneacutetico tem-se mostrado bastante uacutetilprincipalmente em culturas perenes como eacute o caso do cafeeiroUm importante meacutetodo de propagaccedilatildeo in vitro de plantas deCoffea eacute a embriogecircnese somaacutetica direta Objetivou-se com estetrabalho avaliar os efeitos de diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3 no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos
diretos de C arabica L cv Rubi Os tratamentos foramconstituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH
4NO
3 (0 4125 825
12375 e 1650 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3 (0 475
950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS O experimentofoi mantido por 150 dias em sala de crescimento com irradiacircnciaem torno de 32 igraveM m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas comtemperatura de 25 plusmn 1oC As variaacuteveis avaliadas foram nuacutemero defolhas comprimento da parte aeacuterea e massa fresca da parte aeacutereaOs resultados indicaram que a utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO
3combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de NH
4NO
3 como a mais
indicada para o desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos de Carabica L Os resultados apontam ainda que a ausecircncia denitrogecircnio promove o maior peso das placircntulas
Termos para indexaccedilatildeo Nitrogecircnio cafeacute cv Rubi Coffeaarabica
ABSTRACTCoffee breeding programs have incorporated using
artificial crossings genetic benefits for productivity and othercharacteristics of agronomic interest The introduction ofbiotechnology methods to improve genetic breeding programshas demonstrated to be useful mainly in perennial cultures ascoffee species An important method of in vitro propagation ofCoffea plants is somatic embryogenesis Therefore the objectiveof this work was to obtain the most adequate combinations ofculture medium components for plantlets growth The influence
of NH4NO
3 (0 4125 825 12375 and 1650 mg L-sup1) of MS
formulation x KNO3
(0 475 950 1425 and 1900 mg L-sup1) MSformulation were tested for the development of somatic embryosThe experiments were maintained in a growth room under lightintensity of 32 microMol m-2 s-1 photoperiods of 16 hours andtemperature of 25 plusmn 1o C The characteristics evaluated were leafnumber shoot length and shoot fresh matter The results indicatedthat the use of 950 mgL-sup1 KNO
3 combined with 1155 to 2475
mg L-sup1 NH4NO
3 is the most indicated for the development of
somatic embryos of C arabica L The absence of nitrogenpromotes the largest weight of plantlets
Index Terms Nitrogen Coffee cv Rubi Coffea arabica
INTRODUCcedilAtildeO
O nitrogecircnio eacute um dos elementos necessaacuterios e
ativos para diversos processos metaboacutelicos da planta pois
eacute constituinte de vaacuterias biomoleacuteculas essenciais tais como
aminoaacutecidos aacutecidos nucleacuteicos enzimas e proteiacutenas e
juntamente com a sacarose eacute o principal componente em
quantidade no meio de cultura
O nitrogecircnio difere dos demais macronutrientes por
apresentar-se na forma de caacutetion (amocircnio) e acircnion (nitrito
e nitrato) contribuindo de forma efetiva tanto no
metabolismo celular como na regulaccedilatildeo do seu potencial
osmoacutetico Atua como agente tamponante e favorece a
absorccedilatildeo de outros iacuteons presentes no meio (NAGAO et
al 1994) A vantagem dos tecidos vegetais receberem pelo
menos parte do nitrogecircnio sob uma forma prontamente
reduzida eacute que haveria uma diminuiccedilatildeo no gasto de energia
REZENDE J C de et al106
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
que ocorre na conversatildeo enzimaacutetica de nitrato a amocircnio
(GEORGE et al 1987) O efeito dessas diferentes formas
inorgacircnicas separadamente pode promover ou natildeo o
crescimento e desenvolvimento de determinadas espeacutecies
de plantas enquanto a combinaccedilatildeo das duas estimula o
crescimento de muitas espeacutecies in vitro (CALDAS et al
1998)
De acordo com George amp Sherrington (1984) o
desenvolvimento e morfogecircnese em cultura de tecidos satildeo
acentuadamente influenciados pela disponibilidade de
nitrogecircnio e pela forma como o mesmo eacute fornecido Alta
concentraccedilatildeo de sais do meio MS comparada a outros
meios especificamente dos niacuteveis de amocircnio (-NH4) e
nitrato (-NO3) pode ser criacutetica no processo de morfogecircnese
e crescimento (SAKUTA amp KOMAMINE 1987) estando
pois a demanda energeacutetica fornecida pelo metabolismo de
carboidratos e a assimilaccedilatildeo destes iacuteons diretamente
relacionada com o sucesso da cultura in vitro
Sato (1994) estudou o efeito de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio sobre a propagaccedilatildeo de trecircs
diferentes clones de geacuterbera de vaso (Gerbera jamesonii
Adlam) e concluiu que a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio do
MS completo inibe a regeneraccedilatildeo de brotos enquanto a
utilizaccedilatildeo de concentraccedilotildees diluiacutedas favorece a induccedilatildeo
dos brotos Bespalhok et al (1992) estudaram a
concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia na induccedilatildeo de brotos
em estevia (Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni) e
constataram que a concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia do
MS eacute toacutexica Obteve maior induccedilatildeo de brotaccedilotildees usando
frac14 de nitrato de amocircnia no meio MS Por outro lado Tadesse
et al (2000) verificaram que a accedilatildeo de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio promoveu um incremento
inicial da aacuterea foliar das placircntulas formadas mas ocasionou
efeitos relativamente negativos no aumento da aacuterea foliar
das placircntulas durante a aclimatizaccedilatildeo
O nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio sustenta
boa taxa de crescimento em algumas culturas como roseira
(Rosa gallica L) (NASH amp DAVIES 1972) e trigo (Triticum
que natildeo crescem bem com o nitrato no meio como por
exemplo o arroz (Oriza sativa L) (SARGENT amp KING 1974
YATAZAWA amp FURUHASHI 1968)
Grewal et al (1980) citados por Grattapaglia amp
Machado (1990) verificaram em culturas de eucalipto
(Eucaliptus citriodora Hook) que ao se reduzir pela
metade as concentraccedilotildees de nitrato de amocircnio e de
potaacutessio do meio MS a taxa de multiplicaccedilatildeo dobrava
Essa mesma concentraccedilatildeo proporcionou o melhor
comprimento da parte aeacuterea em embriotildees zigoacuteticos de C
arabica L (RIBEIRO 2001)
A maioria das plantas prioriza a absorccedilatildeo de NH4
+ a
NO3
- poreacutem eacute necessaacuterio encontrar o balanccedilo ideal de
NH4+NO
3- para o oacutetimo crescimento in vitro (SATO 1994)
Objetivou-se com este trabalho estudar os efeitos de
diferentes concentraccedilotildees de NH4NO
3 e KNO
3 do meio MS
no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos diretos de C
arabica L cv Rubi
MATERIAL E MEacuteTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos Vegetais do Departamento de
Agricultura da Universidade Federal de Lavras MG Foram
utilizados como explantes embriotildees de C arabica cv
Rubi provenientes da embriogecircnese somaacutetica direta Os
embriotildees somaacuteticos foram induzidos em meio MS
(MURASHIGE amp SKOOG 1962) com 50 dos sais
acrescido de 20 mg L-1 de GA3 6 mg L-1 de cinetina 8 mg
L-1 de ANA 100mg L-1 de caseiacutena hidrolisada e 400mg L-
1 de extrato de malte Os tubos de ensaio foram mantidos
durante 150 dias sob condiccedilotildees de obscuridade com
temperatura de 25 plusmn 1oC Os embriotildees somaacuteticos induzidos
nesse processo foram individualizados em tubos de
ensaio e mantidos durante 30 dias em meio MS
objetivando a homogeneizaccedilatildeo do material para a
realizaccedilatildeo deste experimento
No preparo do meio foram utilizadas soluccedilotildees-
estoque armazenadas em frascos de vidro escuro a
temperaturas em torno de 5degC Os tratamentos foram
constituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH4NO
3 (0 475
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 107
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
950 1425 e 1900 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3
(0 475 950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS
O meio foi solidificado com 5g L -1 de aacutegar e o pH
ajustado para 58 plusmn 01 utilizando NaOH 05 e 01 N ou HCl
05 N e 01 N e distribuiacutedo em tubos de ensaio cada um
recebendo 15 mL do mesmo Os tubos foram vedados com
tampas plaacutesticas transluacutecidas antes do processo de
autoclavagem a 121degC e 1 atm por 20 minutos Apoacutes o
resfriamento o meio foi levado agrave cacircmara de fluxo laminar
desinfestada com aacutelcool 70 (etanol) onde foi feita a
inoculaccedilatildeo dos explantes
Os tubos foram vedados com parafilme e mantidos
em sala de crescimento com irradiacircncia em torno de 32 igraveM
m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas com temperatura de 25 plusmn
1oC O delineamento experimental utilizado foi inteiramente
casualizado com quatro repeticcedilotildees e trecircs tubos por
parcela cada tubo contendo um explante
Aos 150 dias apoacutes a instalaccedilatildeo foram avaliadas as
variaacuteveis nuacutemero de folhas comprimento da parte aeacuterea e
peso da mateacuteria fresca das placircntulas Os valores observados
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia para dados
desbalanceados Utilizou-se o procedimento GLM
disponiacutevel no aplicativo computacional SASreg (SAS
INSTITUTE 1990)
Em situaccedilotildees em que a anaacutelise de variacircncia natildeo
confirmou a normalidade dos resiacuteduos para o comprimento
da parte aeacuterea e peso da mateacuteria fresca os dados sofreram
uma transformaccedilatildeo para garantir que essa pressuposiccedilatildeo
fosse atendida As transformaccedilotildees utilizadas foram x e5 1 02x respectivamente A variaacutevel nuacutemero de folhas
atendeu agraves pressuposiccedilotildees de normalidade A anaacutelise de
variacircncia do peso da mateacuteria fresca foi realizada por meio
do meacutetodo dos quadrados miacutenimos ponderados pelo
inverso das variacircncias de cada tratamento uma vez que
esses apresentaram heterogeneidade de variacircncias
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Houve efeito significativo das concentraccedilotildees de
NH4NO
3 e KNO
3 para o nuacutemero de folhas e peso da mateacuteria
fresca das placircntulas (Tabela 1) Observa-se que a interaccedilatildeo
entre os fatores mostrou-se significativa em relaccedilatildeo a todas
as caracteriacutesticas avaliadas a 5 de probabilidade pelo
teste F
Nuacutemero de folhas
Analisando-se as curvas de regressatildeo observa-
se na Figura 1 que houve formaccedilatildeo de maior nuacutemero
de folhas quando foram adicionados ao meio de cultura
1900 mg L-sup1 de KNO3
combinado com 12985 mg L-sup1 de
NH4NO
3 (meacutedia de 1163 folhas) Com a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 87879 mg L-sup1 de NH
4NO
3
pocircde-se observar a formaccedilatildeo meacutedia de 1001 folhas
Dessa forma como a diferenccedila eacute miacutenima justifica-se a
utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 com o objetivo de
reduccedilatildeo dos custos
TABELA 1 Anaacutelise de variacircncia dos dados relativos ao nuacutemero de folhas (NF) comprimento da parte aeacuterea (CPA) epeso da mateacuteria fresca (PMF) das placircntulas de Coffea arabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3
QM Fonte de variaccedilatildeo GL
NF CPA (cm) PMF (g)
NH4NO3 4 458337 01152 17450
KNO3 4 230014 00837 22117
NH4NO3 x KNO3 16 20447 01215 15139
Erro 135 91386 00584 05871
CV () 5162 2357 912
Significativo a 5 pelo teste F
REZENDE J C de et al108
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
FIGURA 1 Nuacutemero folhas de placircntulas de Coffea arabicacv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 combinadas com 0950 e 1900 mg L-sup1 de KNO
3
Contudo concentraccedilotildees acima de 87879 mg L-sup1 de
NH4NO
3 combinadas com 950 mg L-sup1 de NH
4NO
3 ou na
ausecircncia desse provocaram reduccedilatildeo no nuacutemero de folhas
possivelmente por toxidez causada pelo amocircnio devido agrave
sua concentraccedilatildeo mais elevada em relaccedilatildeo ao nitrato no
meio de cultura Quando o nitrogecircnio eacute fornecido somente
na forma de sais inorgacircnicos de amocircnio as ceacutelulas in vitro
apresentam sintomas de toxidez (GAMBORG amp SHYLUK
1970 YATAZAWA amp FURUHASHI 1968) demonstrando
assim a necessidade de combinaccedilatildeo dessas duas fontes
no meio de cultura
Segundo Raab amp Terry (1994) em virtude do grande
requerimento de energia fotoquiacutemica para a reduccedilatildeo
bioquiacutemica do nitrato era de se esperar que as plantas
crescessem melhor em meios com amocircnia do que em meios
com nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio no entanto
observou-se o inverso Esses mesmos autores apontam
como causa desse paradoxo o efluxo de iacuteons H+ que ocorre
devido agrave absorccedilatildeo do iacuteon amocircnio provocando acidificaccedilatildeo
do meio impedindo a absorccedilatildeo de nutrientes Segundo
Hashimoto et al (1992) a presenccedila de amocircnio in vitro
poderia acidificar o meio favorecendo a siacutentese de
carbamatos e tambeacutem a atividade de anidrase carbocircnica
Esses autores conseguiram diminuir o efeito toacutexico do
amocircnio apenas diminuindo a concentraccedilatildeo de nitrato de
amocircnio no meio MS
O nuacutemero de folhas obtidas na ausecircncia de KNO3
foi inferior quando comparado aos demais tratamentos (a
maior meacutedia observada foi 658 folhas na concentraccedilatildeo de
37626 mg L-sup1 de NH4NO
3) evidenciando assim a
importacircncia desse sal para o desenvolvimento de folhas
em placircntulas de C arabica cv Rubi Os resultados obtidos
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 109
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
concordam em parte com os obtidos por Ribeiro (2001)
trabalhando com embriotildees zigoacuteticos de C arabica que
recomenda a adiccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de NH4NO
3 e KNO
3 no
meio de cultura para comprimento da parte aeacuterea
Observa-se ainda que utilizando-se a concentraccedilatildeo
de 1425 mg L-sup1 de KNO3 haacute reduccedilatildeo no comprimento da
parte aeacuterea das placircntulas ateacute a concentraccedilatildeo de 42091 mg
L-sup1 de NH4NO
3 havendo a partir desse ponto incremento
no desenvolvimento da variaacutevel ateacute a concentraccedilatildeo de
149131 mg L-sup1 de KNO3 (132 cm dados transformados)
Esses resultados demonstram que as respostas de
interaccedilatildeo entre fontes de nitrogecircnio variam em funccedilatildeo das
concentraccedilotildees utilizadas
Na ausecircncia de NH4NO
3 em ambas as
concentraccedilotildees estudadas o comprimento da parte aeacuterea
foi inferior (09 e 097 cm respectivamente nas
concentraccedilotildees de 950 e 1425 mg L-sup1 de KNO3) evidenciando
mais uma vez a importacircncia desse sal no desenvolvimento
de embriotildees em C arabica cv Rubi
Peso da mateacuteria fresca
FIGURA 3
Peso da mateacuteria fresca de placircntulas de Carabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildeesde NH
4NO
3 combinadas com 0950 mg L-sup1 de KNO
3
6
65
7
75
8
85
9
95
10
105
0 4125 825 12375 1650NH4NO3 (mg L-1)
Peso
da
mat
eacuteria
fre
sca
(g)
Y KNO3 475 Y KNO3 1425 Y KNO3 1900 = ns Y KNO3 0 = 968811 - 006491X + 000061019X2 R2 = 09017 Y KNO3 950 = 800708 + 002278X 000022883X2 R2 =09053
Na ausecircncia de KNO3 houve decreacutescimo do peso
da mateacuteria fresca associado ao incremento das
concentraccedilotildees de NH4NO
3 ateacute a concentraccedilatildeo de 91775
mg L-sup1 de NH4NO
3 (Figura 3) observando-se aumento do
peso da mateacuteria fresca a partir deste ponto Para a
concentraccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 ocorreu aumento do
peso da mateacuteria fresca ateacute a concentraccedilatildeo de 100221 mg L-
sup1 de NH4NO
3 Poreacutem o maior valor foi registrado na
ausecircncia de ambos os sais estudados (976 g)
Da mesma forma Grossi (2000) trabalhando com
bromeacutelia observou que a menor concentraccedilatildeo de
nitrogecircnio promoveu maior produccedilatildeo de massa fresca
Kanashiro et al (2007) observou decreacutescimo linear na
massa fresca de folhas de bromeacutelia agrave medida que se
aumentou a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio (entre 75 e 120
mM) sendo que para cada mM de nitrogecircnio acrescido ao
meio houve um decreacutescimo de 00018 g na massa fresca
Provavelmente o cultivo em concentraccedilotildees maiores de
nitrogecircnio tenderia a diminuir a produccedilatildeo de massa fresca
como foi observado no presente experimento
CONCLUSOtildeES
Com base no crescimento da parte aeacuterea e na
formaccedilatildeo do maior nuacutemero de folhas a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de
NH4NO
3 eacute mais indicada para o desenvolvimento de
embriotildees somaacuteticos de Coffea arabica L Os resultados
indicam ainda que a ausecircncia de nitrogecircnio promove o
maior peso das placircntulas
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NORMAS PARA PUBLICACcedilAtildeO DE ARTIGOS E COMUNICACcedilOtildeES CIENTIacuteFICAS
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagationeacute editada semestralmente pela Editora da UniversidadeFederal de Lavras (Editora UFLA) publica artigoscientiacuteficos e comunicaccedilotildees cientiacuteficas da aacuterea de culturade tecidos de plantas elaborados por membros dacomunidade cientiacutefica nacional e internacional Natildeo eacutecobrada taxa para publicaccedilatildeo de trabalhos desde que umdos autores seja soacutecio e esteja em dia com a ABCTP(Associaccedilatildeo de Cultura de Cultura de Tecidos de Plantas)Eacute condiccedilatildeo fundamental que os artigoscomunicaccedilotildeessubmetidos agrave apreciaccedilatildeo da revista Plant Cell Culture ampMicropropagation natildeo foram e nem seratildeo publicadossimultaneamente em outro lugar Com a aceitaccedilatildeo do artigopara publicaccedilatildeo os editores adquirem amplos e exclusivosdireitos sobre o artigo para todas as liacutenguas e paiacuteses Apublicaccedilatildeo de artigoscomunicaccedilotildees dependeraacute daobservacircncia das Normas Editoriais dos pareceres do CorpoEditorial e da Comissatildeo ad hoc Todos os pareceres tecircmcaraacuteter sigiloso e imparcial e tanto os autores quanto osmembros do Corpo Editorial eou Comissatildeo ad hoc natildeoobtecircm informaccedilotildees identificadoras entre si
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1 SUBMISSAtildeO
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Esse ofiacutecio deveraacute conter o pedido de apreciaccedilatildeona revista ao editor chefe a declaraccedilatildeo de ser um trabalhooriginal e natildeo ter sido submetido a nenhuma outra revistaser assinado por todos os autores constar o endereccedilocompleto telefone e e-mail de todos Qualquer inclusatildeoexclusatildeo ou alteraccedilatildeo na ordem dos autores deveraacute sernotificada mediante ofiacutecio assinado por todos os autores(inclusive do autor excluiacutedo)
Originais quatro vias impressas e uma via em CDR comtexto e ilustraccedilotildees e graacuteficos Das 4 vias impressas apenas1 deve conter os nomes completos dos autores e rodapeacutena primeira paacuteginaProcessador de texto Word for Windows (version 98 2000XP ou 2003)Redigido em portuguecircs inglecircs ou espanholEspaccedilamento do texto Duplo Margens esquerda (3cm)direita (2cm) inferior e superiores (25cm) Cabeccedilalho eRodapeacute (25cm)Papel formato A4Fonte Times New Roman tamanho 12Nuacutemero de paacuteginas ateacute 14 paacuteginas numeradasconsecutivamente incluindo as ilustraccedilotildees
Tabelas devem fazer parte do corpo do artigo e serapresentadas no moacutedulo tabela do Word O tiacutetulo deveficar acimaGraacuteficos Figuras e Fotografias devem ser apresentadosem preto e branco niacutetidos e com contraste escaneadosinseridos no texto apoacutes a citaccedilatildeo dos mesmos e tambeacutemem um arquivo agrave parte salvos em extensatildeo tif ou jpg com resoluccedilatildeo de 300 dpi Os graacuteficos devem vir tambeacutemem excel com letra Times New Roman tamanho 10 semnegrito sem caixa de textos e agrupados em arquivo agraveparteSiacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitos emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker sem perda de suas formas originais
2 ESTRUTURA E ORGANIZACcedilAtildeO
21 O artigo cientiacutefico deve ser apresentado na seguintesequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfulas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumo
Index terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
INTRODUCcedilAtildeO
Deve apresentar uma visatildeo concisa do estado atualdo conhecimento sobre o assunto que o manuscritoaborda e enfatizar a relevacircncia do estudo sem constituir-se em extensa revisatildeo e na parte final os objetivos dapesquisa Deve incluir a revisatildeo de literatura
MATERIAL E MEacuteTODOS
Esta seccedilatildeo pode ser dividida em subtiacutetulosindicados em negrito
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Podem ser divididas em subseccedilotildees com subtiacutetulosconcisos e descritivos e conter tabelas e figuras
CONCLUSOtildeES
Finalizar com os resultados de acordo com osobjetivos do trabalho
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e naseccedilatildeo proacutepria
22 A comunicaccedilatildeo cientiacutefica deve ser apresentada naseguinte sequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfluas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumoIndex terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
Texto sem subdivisatildeo poreacutem com introduccedilatildeo material emeacutetodos resultados e discussatildeo (podendo conter tabelase graacuteficos e conclusatildeo subentendidas
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e na seccedilatildeoproacutepria
3 CASO O ARTIGO CONTENHA FOTOGRAFIASGRAacuteFICOS FIGURAS SIacuteMBOLOS E FOacuteRMULASESSAS DEVERAtildeO OBEDECER AgraveS SEGUINTESNORMAS
31 Fotografias deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpi
32 Figuras deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpiAs figuras deveratildeo ser elaboradas com letra Times NewRoman tamanho 10 sem negrito sem caixa de textos eagrupadas
33 Graacuteficos deveratildeo ser inseridos apoacutes citaccedilatildeo dosmesmos dentro do proacuteprio texto elaboradopreferencialmente em Excel com letra Times New Romantamanho 10 sem negrito sem caixa de textos e agrupadas
34 Siacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitas emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker (ex MathType Equation) sem perda de suasformas originais
OBS A formataccedilatildeo correta eacute parte imprescindiacutevel para queo trabalho seja devidamente protocolado Caso este natildeoesteja nas normas o mesmo seraacute recusado
4 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS as referecircnciasbibliograacuteficas devem ser citadas conforme a NBR60232002da ABNT
A exatidatildeo das referecircncias constantes da listagem e acorreta citaccedilatildeo no texto satildeo de responsabilidade do(s)autor(es) do artigo
41 Orientaccedilotildees gerais- Deve-se apresentar todos os autores do documentocientiacutefico (fonte)- O nome do perioacutedico deve ser descrito por extenso natildeodeve ser abreviado- Em todas as referecircncias deve-se apresentar o local depublicaccedilatildeo (cidade) a ser descrito no lugar adequado paracada tipo de documento- As referecircncias devem ser ordenadas alfabeticamente
42 Exemplificaccedilatildeo (tipos mais comuns)
ARTIGO DE PERIOacuteDICO
VIEIRA R F RESENDE M A V de Eacutepocas de plantio deervilha em Patos de Minas Uberaba e Janauacuteba MinasGerais Ciecircncia e Agrotecnologia Lavras v 24 n 1 p 74-80 janmar 2000
LIVRO
a) livro no todo
STEEL R G D TORRIE J H Principles andprocedures of statistics New York McGraw-Hill Bookl960 481 p
b) Parte de livro com autoria especiacutefica
FLEURY J A Anaacutelise ao niacutevel de empresa dos impactosda automaccedilatildeo sobre a organizaccedilatildeo da produccedilatildeo de trabalhoIn SOARES R M S M Gestatildeo da empresa Brasiacutelia IPEAIPLAN 1980 p 149-159
c) Parte de livro sem autoria especiacutefica
MARTIM L C T Nutriccedilatildeo de bovino de corte emconfinamento In ______ Confinamento de bovino decorte 2 ed Satildeo Paulo Nobel 1986 cap 3 p 29-89
DISSERTACcedilAtildeO E TESE
GONCcedilALVES R A Preservaccedilatildeo da qualidade tecnoloacutegicade trigo (Triticum aestivum L) e controle de Rhyzoperthadominica (F) durante o armazenamento em atmosferacontrolada com Co2 e N2 1997 52 f Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Ciecircncia dos Alimentos) Universidade Federal deLavras Lavras 1997
MATIOLI G P Influecircncia do leite proveniente de vacasmastiacuteticas no rendimento de queijo frescal 2000 55 pDissertaccedilatildeo (Mestrado em Ciecircncias dos Alimentos) -Universidade Federal de Lavras Lavras 2000
Nota A folha eacute composta de duas paacuteginas anverso everso Alguns trabalhos como teses e dissertaccedilotildees satildeoimpressos apenas no anverso e neste caso indica-se f(ABNT NBR60232002 p 18)
TRABALHOS DE CONGRESSO E OUTROS EVENTOS
SILVA J N M Possibilidades de produccedilatildeo sustentada demadeira em floresta densa de terra firme da Amazocircniabrasileira In CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO 61990 Campos do Jordatildeo Anais Campos do Jordatildeo SBSSBEF 1990 p 39-45
DOCUMENTOS ELETROcircNICOS
As obras consultadas online satildeo referenciadas conformenormas especiacuteficas para cada tipo de documento(monografia no todo e em parte trabalho apresentado emevento artigo de perioacutedico artigo de jornal etc)acrescidas de informaccedilotildees sobre o endereccedilo eletrocircnicoapresentado entre braquetes (lt gt) precedido da expressatildeo
Disponiacutevel em e da data de acesso ao documentoprecedida da expressatildeo Acesso em Nota Natildeo se recomenda referenciar material eletrocircnico decurta duraccedilatildeo nas redes (ABNT NBR60232000 p 4)Segundo padrotildees internacionais a divisatildeo de endereccediloeletrocircnico no fim da linha deve ocorrer sempre apoacutes barra ()
Monografia (acesso online)
a) livro no todo
TAKAHASHI T (Coord) Tecnologia em foco BrasiacuteliaSocinfoMCT 2000 90 p Disponiacutevel em lthttpwwwsocinfoorgbrgt Acesso em 22 ago 2000
b) parte de livro
TAKAHASHI T Mercado trabalho e oportunidades In______ Sociedade da informaccedilatildeo no Brasil livro verdeBrasiacutelia SocinfoMCT 2000 cap 2 p 13-24 Disponiacutevelem lthttpwwwsocinfogovbrgt Acesso em 22 ago 2000
c) Parte de congresso seminaacuterio etc
GIESBRECHT H O Avaliaccedilatildeo de desempenho deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica a experiecircncia deprojeto excelecircncia na pesquisa tecnoloacutegica InCONGRESSO ABIPTI 2000 Fortaleza Gestatildeo deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica Fortaleza Nutec 2000Disponiacutevel em lthttpwwwabiptiorgbrgt Acesso em01 dez 2000
d) Tese
SILVA E M Arbitrariedade do signo a liacutengua brasileirade sinais (LIBRAS) 1997 144 p Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Linguumliacutestica Aplicada e Estudo de Liacutengua) - PontifiacuteciaUniversidade Catoacutelica de Satildeo Paulo Satildeo Paulo 1997Disponiacutevel em lthttpwwwterracombrvirtualbooksfreebookportdid teseshtmgt Acesso em 28 nov 2000
Artigo de perioacutedico (acesso online)
RESENDE A M G Hipertexto tramas e trilhas de umconceito contemporacircneo Informaccedilatildeo e Sociedade Recifev 10 n 1 2000 Seccedilatildeo Educaccedilatildeo Disponiacutevel em lthttpwwwinformaccedilatildeoesociedadeufpbbrgt Acesso em 30 nov2000
CITACcedilAtildeO PELO SISTEMA ALFABEacuteTICO (AUTOR-DATA) (conforme ABNT NBR105202002)Dois autores - Steel amp Torrie (1960) ou (STEEL amp TORRIE1960)Trecircs ou mais autores - Valle et al (l945) ou (VALLE et al1945)Obs Quando forem citados dois autores de uma mesmaobra deve-se separaacute-los pelo sinal amp (comercial)
5 O EDITOR CHEFE NOTIFICARAacute O AUTOR DORECEBIMENTO DO ORIGINAL E POSTERIORMENTE
O INFORMARAacute SOBRE SUA PUBLICACcedilAtildeO OSARTIGOS QUE NECESSITAREM DE MODIFICACcedilOtildeESSERAtildeO DEVOLVIDOS AO AUTOR PARA A DEVIDAREVISAtildeO
6 OS ARTIGOS NAtildeO APROVADOS SERAtildeODEVOLVIDOS
7 OS ARTIGOS SERAtildeO PUBLICADOS EM ORDEMDE APROVACcedilAtildeO
8 O NAtildeO-CUMPRIMENTO DESSAS NORMASIMPLICARAacute NA DEVOLUCcedilAtildeO DO ARTIGO AOAUTOR
9 OS CASOS OMISSOS SERAtildeO RESOLVIDOS PELACOMISSAtildeO EDITORIAL
10 O ARTIGO DEVERAacute SER ENVIADO PARA
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepartamento de BiologiaSetor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 3037CEP 37200-000Lavras MG
INSTRUCTIONS FOR AUTHORS
Plant Cell Culture amp Micropropagation asemestral journal edited by Editora UFLA of theUniversidade Federal de Lavras publishes scientificarticles and communications in the area of plant tissueculture elaborated by researchers of the national andinternational scientific community One of the authors mustbe associated and have paid all charges required by theABCTP (Plant Tissue Culture Association) in order to betax free for publication in Plant Cell Culture ampMicropropagation Submission of a manuscript implies thatit is neither under consideration for publication elsewherenor has appeared previously in part or in whole Onacceptance for publication authors assign to the Editorsfull copyright of the manuscript in all languages andcountries Publications will depend on editorial rules andon the review of experts and ad hoc commission Reviewerand editorial opinions will be anonymously communicatedto authors
Concepts and affirmations included in articles andcommunications are of the entire responsibility of theauthors
1 SUBMISSION
The manuscript must present a maximum of 14pages At the time of submission a cover letter must besent with the manuscript copies to the Editor requestingpublication of the article This cover letter must be signedby all authors
and also contain the full addresstelephone number and e-mail of the authors Anyinclusion exclusion or alteration in the authors order mustbe notified and signed by all authors including the oneexcluded
Original Four copies and CD with text and illustrationsOnly one of the 4 printed copies must contain the fullnames of the authors and footnote in the first pageFormat Word for Windows (version 98 2000 XP ou 2003)Spacing of the text Double Margin on the left hand sideand 20 cm margin on the right hand side 25 cm upper andlower margin 25 cm for the heading and 25 cm for thefootnotePaper A4 formatSource Times New Roman size 12Number of pages up to 14 pages including the illustrationsTables Tables should be part of the body of the paper andthey must be presented in Word or Excel The title shouldbe above and be presented in the language in which thearticle was written and in English The vertical linesseparating the columns should not appearGraphsFiguresPhotographs must be presented in blackand white clear and with contrast scanned inserted in
the text after citation and also in a separate file (on thesame diskette as the article) saved in extension tif orjpg with resolution of 300 dpi The title should be below
and presented in the language in which the article waswritten and in EnglishSymbols and Chemical Formula must be presented usinga word processor that permits a format Page Maker
2 STRUCTURE AND ORGANIZATION
21 The article should be presented in the followingsequence
TITLE
In English language containing no more than 15 words incapital letters and bold
AUTHORS
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copies Footnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTshould be informative and condensed and should
explain the objectives material and methods results andconclusion of the work in a maximum of 250 words all writtenin one paragraphFor articles written in English the abstract should also bepresented in Portuguese
Key words minimum of three and maximum of five Theyshould not repeat words that are already in the title Thesemay include phrases as well as individual words and shouldbe separate by commasFor articles written in English the key-words should alsobe presented in Portuguese
INTRODUCTION
Should present a concise vision of the current level ofknowledge that has been achieved within the subject areathat the paper will discuss It should neither give anextensive review nor should it include details about theresults and discussion It should clearly indicate theobjectives of the research that was carried out
MATERIAL AND METHODS
This section can contain subdivisions with subtitles inbold print
RESULTS AND DISCUSSION
This section can have subsection which begins withconcise descriptive titles in bold print
CONCLUSIONS
Finishing agree of objectives of work
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
22 The Communication should be presented in thefollowing sequence
TITLE
Sufficiently clear conspicuous and complete withoutsuperfluous words It is recommended to initiate with theterm that represent the most important aspect with otherterms in decreasing of importance
TITLE IN PORTUGUESE
FULL NAME(S) OF THE AUTHOR(S)
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copiesFootnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTWritten continuously without paragraph It must
not exceed 250 words Index terms must be enclosed afterthe abstract using terms different from those used in thetitle and separated by comma
Index terms (3 to 5) must be described in capital and smallletters and express the content of the article
ABSTRACT AND INDEX TERMS IN PORTUGUESE
Text with no division but must include introductionmaterial and methods results and discussion andconclusion (it may include tables and figures)
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
3 PHOTOGRAPHS GRAPHS FIGURES SYMBOLSOR FORMULA CONTAINED IN THE ARTICLE SHOULDOBEY THE FOLLOWING RULES
31 Photographs must be presented in black and whiteclear and with contrast inserted in the text after their citationand also in a separate file (on the same diskette as thearticle) saved in extension TIFF
or JPEG withresolution of 300 dpi
32 Figures must be presented in black and white clearand with contrast inserted in the text after their citation andalso in a separate file (on the same diskette as the article)saved in extension TIFF
or JPEG with resolution of300 dpi They must be elaborated using Times New Romanfont size 10 without bold without text box and arranged
33 Graphs must be inserted in the text after their citationelaborated preferentially in Excel using Times New Romanfont size 10 without bold
34 Symbols and Chemical Formula must be presentedusing a word processor that permits a format for Page Maker(ex MathType Equation) without loss of its original form
4 REFERENCES references must be cited according toNBR60232002 of ABNT All references and their correctcitation in the text are of the entire responsibility of theauthor(s)
5 THE BRAZILIAN ASSOCIATION OF PLANT TISSUECULTURE (ABCTP) WILL INFORM THE AUTHOR THERECEIPT OF THE ORIGINAL MANUSCRIPT ANDEVENTUALLY IT WILL ALSO SEND INFORMATIONREGARDING ITS PUBLICATION MANUSCRIPTSTHAT REQUIRE MODIFICATIONS WILL BERETURNED TO THE AUTHOR FOR THE RESPECTIVEREVISION ANDCORRECTIONS
6 MANUSCRIPTS NOT APPROVED WON T BERETURNED TO THE AUTHOR
7 ARTICLES WILL BE PUBLISHED ACCORDING TOTHE ORDER OF RECEIPT AND APPROVAL
8 IF ANY OF THESE RULES ARE NOT ATTENDED THEMANUSCRIPT WILL BE RETURNED TO THE AUTHOR
9 THE NEGLECTFUL CASES WILL BE SOLVED BYTHE EDITORIAL COMMITTEE
10 MANUSCRIPTS SHOULD BE SENT TO THEFOLLOWING ADDRESS
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepto de Biologia - Setor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 303737200-000 Lavras MG BRAZIL
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 55
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
(Recebido em 17 de abril de 2008 e aprovado em 22 de julho de 2008)
ACLIMATIZACcedilAtildeO DE MUDAS MICROPROPAGADAS DE Heliconialingulata Ruiz amp Pav EM AMBIENTE PROTEGIDO EM FUNCcedilAtildeO
DA LAcircMINA DE IRRIGACcedilAtildeO1
ACCLIMATIZATION OF MICROPROPAGATED PLANTS OF Heliconia lingulata Ruiz ampPav IN PROTECTED ENVIRONMENTS AS A FUNCTION OF IRRIGATION DEPTH
BENITO MOREIRA DE AZEVEDO2 ELIANA LEE JORGE ROCHA3 THALES VINIacuteCIUS DE ARAUJO VIANA4ALBANISE BARBOSA MARINHO5 ANA CRISTINA PORTUGAL PINTO DE CARVALHO6
DENISE VIEIRA VASCONCELOS7
1Parte da dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade Federal do Cearaacute pelo primeiro autor para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem2Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC benitoazevedohotmailcom
3Mestre em Irrigaccedilatildeo e Drenagem (In memoacuteria)4Doutor em Irrigaccedilatildeo e Drenagem Professor Associado Departamento de Engenharia Agriacutecola Universidade Federal do Cearaacute UFC thalesufcbr
5Doutora em Produccedilatildeo Vegetal Pesquisadora CNPqFUNCAP albanisebmgmailcom6Doutora Embrapa Agroinduacutestria Tropical Cx P l 3761 60511-110 Fortaleza CE cristinacnpatembrapabr7Engenheira Agrocircnoma Mestre Universidade Federal do CearaacuteUFC denisevasconceloshotmailcom
RESUMOAs helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com sua beleza
e exotismo constituem uma das maiores riquezas da flora brasileiraEm decorrecircncia da alta demanda do mercado consumidor as mudasvecircm sendo produzidas em escala comercial por meio damicropropagaccedilatildeo uma teacutecnica importante da cultura de tecidosque apresenta diversas etapas A etapa de aclimatizaccedilatildeo eacute a fasemais criacutetica e importante pois se natildeo for bem executada podeproporcionar altos iacutendices de mortalidade e baixas taxas decrescimento e desuniformidade das plantas com consequumlentequeda na produccedilatildeo Para minimizar esse problema e atender agravesexigecircncias do mercado consumidor eacute preciso buscar informaccedilotildeesteacutecnicas e cientiacuteficas sobre o adequado manejo das plantas nafase de aclimatizaccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliaro efeito de distintas lacircminas de irrigaccedilatildeo na aclimatizaccedilatildeo demudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata Ruizamp Pav) A pesquisa foi conduzida em um ambiente protegidopertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical Fortaleza CE(3ordm44 S e 38ordm33 W) Foram analisadas quatro lacircminas de irrigaccedilatildeo1 2 3 e 4 mm de aacutegua As variaacuteveis agronocircmicas avaliadas nosexperimentos foram altura da planta nuacutemero de folhas e diacircmetrodo caule Os resultados dos experimentos evidenciaram o melhordesenvolvimento das mudas micropropagadas de helicocircniaquando irrigadas com lacircmina de 25 mm dia-1
Termos para indexaccedilatildeo Floricultura Heliconia lingulatamanejo de irrigaccedilatildeo
ABSTRACTHeliconias are beautiful and exotic ornamental plants of
the wealthy Brazilian flora Due to a high demand of theconsuming market plants are being produced in a commercial
scale using the technique of micropropagation In this techniqueacclimatization is the most important and critical phase forpromoting high rates of mortality reduced growth and plantuniformity which reduce its production The objective of thiswork was to evaluate the effect of different irrigation depth inthe acclimatization of micropropagated heliconia (Heliconialingulata) The experiments were in a protected environmentlocated at Embrapa Tropical Agroindustry Fortaleza CearaBrazil (3ordm44 S and 38ordm33 W) The agronomic variables evaluatedwere plant height leaf number and stem diameter The resultsshowed the best development of micropropagated heliconia plantsusing water depth of 25 mm day-1
Index terms floraculture Heliconia lingulata irrigationmanagement
INTRODUCcedilAtildeO
As helicocircnias satildeo plantas ornamentais que com
sua beleza e exotismo assemelham-se a verdadeiras
esculturas lembrando em sua forma piracircmides bicos de
aves cascatas de flores pinhais ou cachos de banana As
helicocircnias constituem uma das maiores riquezas da flora
brasileira Atualmente sabe-se que o mercado internacional
tem proporcionado muitas oportunidades de negoacutecios para
os produtores dessas flores tropicais
A floricultura eacute uma atividade desenvolvida em
geral em ambientes protegidos estufas ou tuacuteneis plaacutesticos
AZEVEDO B M de et al56
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
combinando alta produtividade com maior qualidade
garantindo ao agricultor uma colheita satisfatoacuteria e
reduzindo ao maacuteximo as perdas por danos proporcionados
por variaccedilotildees climaacuteticas adversas (GONDIM et al 2004)
De acordo com Terceiro Neto et al (2004) uma etapa
importante na produccedilatildeo de flores e plantas ornamentais
estaacute relacionada agrave utilizaccedilatildeo de mudas de qualidade Nesse
contexto a produccedilatildeo de mudas atraveacutes da
micropropagaccedilatildeo surge como uma alternativa viaacutevel para
obtenccedilatildeo de mudas em escala comercial com alta qualidade
geneacutetica e fitossanitaacuteria em um curto espaccedilo de tempo
atendendo dessa forma agraves necessidades dos produtores
Dentre as etapas da micropropagaccedilatildeo pode-se destacar a
aclimatizaccedilatildeo que eacute a fase mais criacutetica e importante
A irrigaccedilatildeo eacute uma praacutetica de suma importacircncia no
processo de aclimatizaccedilatildeo jaacute que a aacutegua eacute um dos fatores
que mais limitam a produccedilatildeo das plantas Seu manejo ou
seja a quantidade de aacutegua e sua frequumlecircncia de aplicaccedilatildeo eacute
um fator fundamental para o estabelecimento e o adequado
desenvolvimento das mudas micropropagadas Para se
alcanccedilar todos os objetivos da praacutetica de irrigaccedilatildeo que
englobam a maximizaccedilatildeo da produccedilatildeo racionalizaccedilatildeo do
uso da matildeo-de-obra energia aacutegua e fertilizante e a
aplicaccedilatildeo correta da aacutegua eacute imprescindiacutevel adotar um
correto manejo desse sistema (PEREIRA et al 1997)
Para Pieter et al (2007) os efeitos de aplicaccedilotildees
excessivas ou deficitaacuterias satildeo irreversiacuteveis e variam de
acordo com a intensidade e tempo de duraccedilatildeo do
procedimento imposto Nesses casos os processos
fisioloacutegicos da planta relacionados ao crescimento satildeo
afetados e sob condiccedilotildees severas o deacuteficit pode provocar
a murcha permanente do vegetal Conforme a Embrapa
(2007) em regiotildees de calor intenso com inverno ameno
normalmente a exigecircncia das mudas por aacutegua em qualquer
fase de desenvolvimento eacute maior que em regiotildees de clima
temperado Por outro lado alguns tipos de substrato por
terem menor capacidade de retenccedilatildeo de aacutegua exigem que
se aplique mais aacutegua a cada irrigaccedilatildeo ou que se aumente a
frequumlecircncia das mesmas Eacute recomendaacutevel que as lacircminas
sejam aplicadas nas primeiras horas da manhatilde e ao
entardecer uma vez que irrigaccedilatildeo nas horas mais quentes
pode danificar as mudas principalmente quando
fertirrigadas (CESP 2000)
Para Bernardo et al (2005) eacute necessaacuterio conhecer o
comportamento da cultura em funccedilatildeo das diferentes
quantidades de aacutegua fornecidas e identificar as fases de
desenvolvimento de maior consumo de aacutegua e os periacuteodos
criacuteticos quando a falta ou o excesso provocaria quedas de
produccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliar o
efeito de lacircminas de irrigaccedilatildeo sobre o desenvolvimento de
mudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata
Ruiz amp Pav) em fase de aclimatizaccedilatildeo em ambiente
protegido
MATERIAL E MEacuteTODOS
O presente trabalho foi conduzido em um ambiente
protegido pertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical
no periacuteodo de fevereiro a abril de 2006 A aacuterea estaacute situada
no municiacutepio de Fortaleza Cearaacute com as coordenadas
geograacuteficas correspondentes agrave 3ordm44 S 38ordm33 W e 195 m
de altitude De acordo com a classificaccedilatildeo climaacutetica de
Koppen o clima da regiatildeo eacute do tipo Aw caracterizado
como clima tropical chuvoso de savana tropical com a
eacutepoca mais seca no inverno e maacuteximo de chuvas no veratildeo-
outono
O tuacutenel alto de cultivo forccedilado de formato
semicircular e orientaccedilatildeo leste-oeste foi instalado com as
seguintes dimensotildees 45 m de comprimento 5 m de largura
e 2 m de altura comportando aproximadamente uma aacuterea
de 225 msup2 e um volume de 357 m3 Toda a sua estrutura foi
completamente coberto por uma tela de sombreamento
para reduzir 50 da luminosidade
O sistema de irrigaccedilatildeo empregado foi do tipo
microaspersatildeo suspenso sendo constituiacutedo por um
conjunto motobomba uma linha principal uma linha de
derivaccedilatildeo e uma linha lateral de 10 m com emissores
espaccedilados de 24 m e a uma altura de 05 m das bandejas
Os microaspersores foram do tipo nebulizador modelo
Tietze com bocal violeta em posiccedilatildeo invertida a vazatildeo do
emissor era de 43 l h-1 na pressatildeo de 30 kgf cm-2
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 57
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
As mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata)
utilizadas nesse experimento foram obtidas atraveacutes do
processo de micropropagaccedilatildeo realizado no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos e Geneacutetica Vegetal da Embrapa
Agroinduacutestria Tropical Na ocasiatildeo do plantio as mudas
apresentavam-se completamente enraizadas e com alturas
variando de 26 a 35 cm
As plantas provenientes do material in vitro foram
retiradas dos frascos e suas raiacutezes lavadas em aacutegua
corrente para a retirada do excesso do meio de cultura
Apoacutes a lavagem as mudas foram colocadas em bandejas e
suas raiacutezes podadas com o auxiacutelio de uma tesoura com o
objetivo de uniformizar o material facilitar o plantio e
estimular o desenvolvimento de um sistema radicular mais
funcional
As mudas foram transplantadas para tubetes de
capacidade volumeacutetrica de 180 cm3 contendo o substrato
formado pela mistura poacute-de-coco seco + huacutemus de
minhoca + solo (PCS+H+S) na proporccedilatildeo de 111
misturado no Laboratoacuterio de Solos da Embrapa e sem
fornecimento de fertilizantes durante o periacuteodo
experimental Para promover o completo umedecimento
do substrato e aumentar a umidade relativa do ambiente
momentos antes da transferecircncia das mudas para os
tubetes o sistema de irrigaccedilatildeo foi acionado
proporcionando assim um ambiente favoraacutevel ao
estabelecimento das mudas Com os recipientes em seus
devidos lugares as mudas foram acondicionadas e
levadas em bandejas ateacute o tuacutenel alto de cultivo forccedilado
iniciando a etapa de plantio As mudas foram inseridas
numa profundidade meacutedia de 5 cm de forma que as raiacutezes
e a parte inicial do caule ficaram enterradas As mudas
foram transferidas para os respectivos substratos no dia
3 de fevereiro de 2006
Para promover melhores condiccedilotildees para o
estabelecimento das mudas do primeiro ao quadrageacutesimo
quinto dia apoacutes o transplantio (DAT) essas receberam
uma irrigaccedilatildeo padratildeo com a aplicaccedilatildeo de uma lacircmina
correspondente a 3 mm de aacutegua parcelada duas vezes ao
dia sendo uma aplicaccedilatildeo pela manhatilde iniciando-se
aproximadamente agraves 9 h e a outra agrave tarde a partir das 16 h
A partir do 45ordm DAT foi adotada a diferenciaccedilatildeo das lacircminas
de irrigaccedilatildeo
O delineamento experimental foi em blocos
casualizados composto por quatro tratamentos e cinco
repeticcedilotildees constituiacutedas por cinco fileiras verticais com
cinco plantas cada totalizando 25 plantas por tratamento
num total de 100 plantas por experimento Os tratamentos
consistiram de quatro niacuteveis de irrigaccedilatildeo equivalentes agraves
lacircminas de 10 (L1) 20 (L
2) 30 (L
3) e 40 (L
4) miliacutemetros de
aacutegua tambeacutem parcelada em duas aplicaccedilotildees diaacuterias agraves 9 h
e agraves 16h
Os dados foram coletados em duas ocasiotildees apoacutes
a diferenciaccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo A primeira coleta
de dados ocorreu em 04 de abril aos 60 dias apoacutes o
transplantio (DAT) e a segunda em 19 de abril (aos 75
DAT) As variaacuteveis analisadas foram nuacutemero de folhas
(NF) altura da planta (AP) e diacircmetro do caule (DC) O
nuacutemero de folhas foi contado visualmente em todas as
mudas transplantadas Todas as folhas foram consideradas
na contagem exceto as totalmente secas A altura da planta
foi medida a partir da base ateacute a abertura das folhas por
meio de um escaliacutemetro graduado em centiacutemetros
subdividido em miliacutemetros O diacircmetro do caule foi
mensurado com o auxiacutelio de um paquiacutemetro digital
graduado em centiacutemetros considerando a base do caule
como padratildeo de contagem
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos aplicativos Microsoft Office Excel e SISVAR
versatildeo 46 (FERREIRA 2003)
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os valores meacutedios mensais de temperatura do ar
umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidade
do vento a 2 m de altura registrados durante o experimento
pela estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade
Federal do Cearaacute (UFC) encontram-se na Tabela 1 cuja
temperatura meacutedia do periacuteodo foi de 23 ordmC e umidade relativa
meacutedia de 93 caracterizando um periacuteodo de temperaturas
amenas
AZEVEDO B M de et al58
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
TABELA 1 Valores meacutedios mensais de temperatura do ar umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidadedo vento a 2m de altura Fortaleza-CE 2006
Mecircs Temperatura (ordmC) U R () Rad solar global (W m-2) Vel do vento (m s-1)
Fevereiro 23 95 1329 173
Marccedilo 24 84 1291 125
Abril 23 99 1162 094
Fonte Estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade Federal do Cearaacute (UFC)
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Tanto o deacuteficit quanto o excesso hiacutedrico afetaram o
crescimento das mudas Isso pode ter ocorrido pelo fato
da deficiecircncia hiacutedrica ocasionar o fechamento dos
estocircmatos diminuindo a concentraccedilatildeo intracelular de CO2
e consequumlentemente gerando decreacutescimo na assimilaccedilatildeo
do mesmo (BERNARDO et al 2005) Jaacute o excesso hiacutedrico
ocasiona a falta de oxigecircnio que provoca a reduccedilatildeo da
fotossiacutentese e prejudica a conversatildeo da mateacuteria orgacircnica
pelos microorganismos em formas soluacuteveis que a planta
possa reutilizar Esses fatores podem proporcionar um
TABELA 2 Anaacutelise de variacircncia das caracteriacutesticas de desenvolvimento altura da planta (AP) diacircmetro do caule(DC) e nuacutemero de folhas (NF) de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das laminas aplicadas aos 60e 75 DAT
(ns) natildeo significativo significativo a 5 de probabilidade pelo teste F
Quadrado meacutedio Variaacutevel FV GL
60 DAT 75 DAT
Bloco 4 03966ns 02946ns
Tratamento 3 23675 31348 AP
Resiacuteduo 12 03593 06279
Bloco 4 06407ns 02754ns
Tratamento 3 16645 41102 DC
Resiacuteduo 12 06222 06728
Bloco 4 04377 01829ns
Tratamento 3 03421 05204 NF
Resiacuteduo 12 0773 01081
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 59
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
menor crescimento das plantas devido agrave diminuiccedilatildeo da
eficiecircncia de transformaccedilatildeo de fotoassimilados nessas
condiccedilotildees (REGO et al 2004)
A anaacutelise de regressatildeo indica que o modelo que
melhor se ajustou agrave relaccedilatildeo altura de planta em funccedilatildeo da
lacircmina de irrigaccedilatildeo aos 60 e 75 DAT foi o polinomial
quadraacutetico apresentando valores para R2 de 0997 e 0966
respectivamente (Figuras 1 e 2) Observa-se que aos 60 e 75
DAT a altura da planta aumentou com a lacircmina aplicada ateacute
FIGURA 1 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 60 DATFortaleza-CE 2005 (ns natildeo significativo pelo teste F significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
FIGURA 2 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 75 DATFortaleza-CE 2005 (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
um ponto maacuteximo de 247 e 250 mm dia-1 respectivamente
representando a lacircmina que proporcionou maior
desenvolvimento das mudas em relaccedilatildeo agrave altura da planta
sendo obtida 896 e 1012 cm respectivamente Lacircminas acima
desse valor causaram reduccedilatildeo no crescimento
possivelmente devido ao excesso de aacutegua
Soares et al (1998) salientam que a aacutegua em excesso
proporciona aumentos nos custo de produccedilatildeo e do risco
de lixiviaccedilatildeo da aacutegua e dos nutrientes nela diluiacutedos o que
AP = -05934LI2 + 29273LI + 53519R2 = 0997
700
740
780
820
860
900
940
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1)
Altu
ra d
a pl
anta
(cm
)
AP = -06728L2 + 33294L + 59869
R2 = 0966
80
84
88
92
96
100
104
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Alt
ura
da p
lant
a (c
m)
AZEVEDO B M de et al60
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
pode prejudicar o desenvolvimento radicular Aleacutem disso
o excesso de aacutegua compromete os processos de
fotossiacutentese e respiraccedilatildeo os quais envolvem a utilizaccedilatildeo
de determinadas concentraccedilotildees de oxigecircnio (RAVEN et
al 2001) Jaacute em casos de deacuteficit hiacutedrico podem ocorrer
problemas de ordem fisioloacutegica ou seja afetar
negativamente o desenvolvimento das plantas
Em ambos os periacuteodos avaliados observou-se que
as lacircminas aplicadas influenciaram o diacircmetro de caule
das mudas de helicocircnia com valores meacutedios de 97 e 103
cm aos 60 e 75 DAT respectivamente A anaacutelise de
regressatildeo indicou que aos 60 DAT o modelo polinomial
quadraacutetico foi o que melhor representou o diacircmetro do
caule em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo com R2 de 0746
(Figura 3) O maacuteximo valor do diacircmetro de caule (1022
cm) calculado por derivaccedilatildeo da curva de ajuste foi obtido
aplicando-se uma lacircmina de 264 mm dia-1 A partir dessa
lacircmina houve uma diminuiccedilatildeo no diacircmetro de caule
ocasionado possivelmente pelo excesso de aacutegua Aos
75 DAT o modelo matemaacutetico ajustado para relacionar o
diacircmetro de caule em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo
apresentou coeficiente de determinaccedilatildeo (R2) muito baixo
natildeo sendo representativo
Modelos polinomiais quadraacuteticos para explicar o
efeito da lacircmina de irrigaccedilatildeo sobre a altura e diacircmetro de
caule tambeacutem foram obtidos por Pieter et al (2007) na
produccedilatildeo da flor da fortuna por Lopes et al (2005) em
mudas de Eucalyptus grandis W Hill por Pereira et al
(2003) e Recircgo et al (2004) na cultura do crisacircntemo
A anaacutelise de variacircncia (Tabela2) indicou que o
nuacutemero de folhas nas mudas de helicocircnia foi influenciado
pelas lacircminas de irrigaccedilatildeo nas duas eacutepocas analisadas (60
e 75 DAT) com valores meacutedios de 325 e 345 folhas nas
respectivas eacutepocas poreacutem o modelo matemaacutetico para
representar essa relaccedilatildeo apresentou coeficiente de
determinaccedilatildeo (R2) muito baixo e natildeo foi estatisticamente
significativo
As anaacutelises mostraram que aos 60 e 75 DAT a
lacircmina de irrigaccedilatildeo ideal que proporcionou o melhor
desenvolvimento das plantas encontra-se na faixa
compreendida de 247 a 264 mm dia-1 Valores
semelhantes foram obtidos por Gomes et al (2006) que
verificaram que a taxa de evapotranspiraccedilatildeo meacutedia da
Heliconia psittacorum L f x HSpatho-circinada
Aristeg cultivada em ambiente protegido foi de 22 mm
dia-1
FIGURA 3 Diacircmetro de caule de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) aos 60 DAT em funccedilatildeo das lacircminas deirrigaccedilatildeo Fortaleza CE (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
DC= -04111L2
+ 21726L + 73492
R2 = 0746
80
85
90
95
100
105
110
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Diacirc
met
ro d
o ca
ule(
cm)
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 61
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
CONCLUSOtildeES
As lacircminas de irrigaccedilatildeo influenciaram as
caracteriacutesticas de desenvolvimento avaliadas aos 60 e 75
DAT
A altura de planta e o diacircmetro de caule
apresentaram resposta quadraacutetica em relaccedilatildeo agraves lacircminas
aplicadas
Nas condiccedilotildees em que foi desenvolvido este
trabalho para a aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas
de helicocircnia recomenda-se irrigar com 25 mm dia-1 com o
intuito de se obter mudas mais vigorosas para serem
transplantadas para condiccedilotildees de campo
AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pela concessatildeo da bolsa de estudo
Agrave Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaacuteria
CNPAT pela oportunidade de realizaccedilatildeo desta pesquisa
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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ALEXANDRE R S et al62
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
(Recebido em 4 de marccedilo de 2008 e aprovado em 1 de setembro de 2008)
IN VITRO ORGANOGENESIS OF PASSION FRUIT (PASSIFLORAEDULIS SIMS F FLAVICARPA DEG) AFFECTED BYIRRADIANCE SUCROSE AND EXPLANT POSITION
ORGANOGEcircNESE IN VITRO DO MARACUJAZEIRO (PASSIFLORA EDULIS SIMSF FLAVICARPA DEGENER) AFETADO POR IRRADIAcircNCIA SACAROSE E
POSICcedilAtildeO DOS EXPLANTES
RODRIGO SOBREIRA ALEXANDRE1 FLAacuteVIO ALENCAR D
ARAUacuteJO COUTO1 JOSEacute MARIA MOREIRA DIAS1WAGNER CAMPOS OTONI2 RITA DE CAacuteSSIA MENDES3 PAULO ROBERTO CECON4
1Professor Doutor Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG rsalexandreclick21combr2Doutor Departamento de Biologia Vegetal Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG3Teacutecnica em Quiacutemica Graduanda em Agronomia Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
4Doutor Departamento de Informaacutetica Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
ABSTRACTThe culture of the tissues has helped considerably the
Passiflora genus development achieving successfully themorphogenic responses in different in vitro explants Theobjective this work was to assess the in vitro morphogenicresponses of hypocotyl segments of passion fruit collected from5 positions (apical sub-apical median sub-basal and basalnamely 1-5 respectively) along the hypocotyls axis and culturedin medium with different concentrations of sucrose and exposedto irradiance levels The experiments were performed as acompletely randomized blocks design with 15 repetitions in 4 x4 x 5 factorial scheme (irradiance x sucrose x explant positions)totalizing 80 treatments on which every experimental parcelwas comprised of a flask containing five hypocotyls Thehypocotyl segment from positions 1 and 3 at their extremedistal ends cultured onto medium of culture with 30 g L-1 sucroseand under 100 micromol m-2 s-1 irradiance enable the greatest numberof buds and shoots differentiated The distal extremity from thesegments of hypocotyl farthest from the cotyledonary nodes(position 1) cultivated in 20 g L-1 sucrose and exposed to 50micromol m-2 s-1 irradiance result in the best condition for shootdevelopment
Index terms Passiflora edulis f flavicarpa in vitro propagationyellow passion fruit
RESUMOA cultura de tecidos tem auxiliado no desenvolvimento
do gecircnero Passiflora alcanccedilando sucesso morfogecircnico emdiferentes explantes in vitro Objetivou-se neste trabalho avaliarrespostas morfogecircnicas in vitro de segmentos de hipocoacutetilo domaracujazeiro coletados de 5 posiccedilotildees (apical sub-apicalmediana sub-basal e basal isto eacute 1-5 respectivamente) ao longodo eixo dos hipocoacutetilos e cultivados em meios com diferentesconcentraccedilotildees de sacarose e expostos a niacuteveis de irradiacircncia Oexperimento foi instalado em blocos casualizados com 15
repeticcedilotildees em esquema fatorial 4 x 4 x 5 (irradiacircncia x sacarose xposiccedilatildeo dos explantes) totalizando 80 tratamentos nos quaistoda parcela experimental foi constituiacuteda de um frasco contendocinco hipocoacutetilos As posiccedilotildees 1 e 3 no extremo distal dossegmentos de hipocoacutetilo cultivados em meio de cultura com 30 gL-1 de sacarose e sob 100 micromol m-2 s-1 de irradiacircncia proporcionamaior nuacutemero de brotos e brotos diferenciados A extremidadedistal dos segmentos de hipocoacutetilo extraiacutedos mais distantes donoacute cotiledonar (posiccedilatildeo 1) cultivados em 20 g L-1 de sacarose eexpostos agrave irradiacircncia de 50 micromol m-2 s-1 resulta na melhorcondiccedilatildeo para o desenvolvimento do broto
Termos para indexaccedilatildeo Passiflora edulis f flavicarpapropagaccedilatildeo in vitro maracujazeiro amarelo
INTRODUCTION
The genus of Passiflora was originated at South
America and comprises more than 580 species most of them
belonging to the Tropical America mainly from Brazil
(OLIVEIRA 1987) Among them the most commercially used
is the passion fruit plant P edulis Sims f flavicarpa Deg
The culture of the tissue has been reaching with
the Passiflora genus answers satisfactory morphogenic in
different in vitro explants (BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1993 1994 MORAN-ROBLES 1979 SCORZA
amp JANICK 1980)
The explant morphogenic capability has
relationship with the polarity effect such factor is
responsible for the shoot emergence Several studies were
researched to assess the effect of the position of the
In vitro organogenesis of passion fruit 63
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
explants extracted from the hypocotyl and roots of Citrus
plantlets during the shoot-bud proliferation (BURGER amp
HACKETT 1986 COSTA et al 2004 DIAS 1998
GARCIA-LUIS et al 1999) as well as the effect of the
polarity in the formation the buds and shoots
(McCLELLAND amp SMITH 1990 YAE et al 1987)
In the in vitro organogenesis of plants of the genus
Passiflora several factors influence among them among
them the irradiance for which different types of explants
were spared for the essays 58 micromol m-2 s-1 in internodes
(MORAN-ROBLES 1979) 20 micromol m-2 s-1 in mesophyll-
derived protoplasts (OTONI et al 1995) 30 or 23 micromol m-
2 s-1 in leaf (KAWATA et al 1995 APPEZZATO-DA-
GLOacuteRIA et al 1999 respectively) 50 micromol m-2 s-1 in
endosperm (MOHAMED et al 1996) 80 30 or 24 micromol m-
2 s-1 in shoot cultures (FARIA amp SEGURA 1997
KURIYAMA et al 1998 BARBOSA et al 2001
respectively) 20-55 micromol m-2 s-1 in cotyledons (HALL et
al 2000) 60 or 54 micromol m-2 s-1 in hipocotyl (COUCEIRO
2002 FELISMINO 2005 respectively) Although different
irradiances have been studied in these works in none of
them the effect of difference irradiances was studied during
the in vitro organogenic process of passion fruit plant
Other important factor for the in vitro
organogenesis is the source of carbon The in vitro
organogenesis works affirm that sucrose has been the most
employed source of carbon in the culture for Passiflora
(APPEZZATO-DA-GLOacuteRIA et al 1999 HALL et al 2000)
its concentration varies from 10 to 30 g L-1
The present work aimed to evaluate the in vitro
morphogenic responses of hypocotyledonary explants of
passion fruit plants throughout the use of different levels
of irradiance sucrose concentration and positions of the
segments of hypocotyls derived from in vitro germinated
plantlets
MATERIALS AND METHODS
Axenic and vigorous etiolated plantlets were
obtained from in vitro germinated seeds and used as
explants sources
In vitro-grown seedlings (25-30 days-old) were
transversally cut into 1-12 cm long were cultured on
different conditions of incubation The explants were
cultured in 300 mL glass flasks (Santa Marina Satildeo Paulo
Brazil) containing 30 mL aliquots of MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) medium salts 100 mg L-1 mio-inositol 10
mg L-1 6-benzylaminopurine (BAP) vitamins of White
(1951) and 80 g L-1 of agar (Isofarreg Brazil) The medium
pH was adjusted to 57 plusmn 01 before the addition of agar
Several concentrations of sucrose (0 10 20 or 30 g L-1)
were added to this medium The culture flasks were sealed
with polypropylene lids and the medium was autoclaved
at 121ordmC 15 kgf cm-2 during 20 minutes
The segments of hypocotyls were cut in five
segments numbered from 1 to 5 follows 1 basal the first
segment adjacent to the root collar 2 sub-apical the
second segment adjacent to the hypocotyl root 3 median
the central segment in relation to the hypocotyl region 4
sub-apical the second segment that is adjacent to the
cotyledonary node 5 - apical the first segment that is
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
Axenic plantlets Segments of hypocotyls in the
medium of culture
DE
PE
FIGURE 1 The segments of hypocotyls numbered from1 to 5 were characterized as follows 1 basal the firstsegment adjacent to the root collar 2 sub-apical thesecond segment adjacent to the hypocotyl root 3 median the central segment in relation to the hypocotylregion 4 sub-apical the second segment that is adjacentto the cotyledonary node 5 - apical the first segment thatis adjacent to the cotyledonary node () ED = distalextremity EP = proximal extremity
ALEXANDRE R S et al64
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
adjacent to the cotyledonary node (Figure 1) In this order
the five hypocotyl explants were placed horizontally on
the media maintaining the proximal extremity towards the
wall of the flask and having the distal extremity facing the
centre of the flask
The flasks were distributed 5 cm far from each other
on the shelves at the growth room to avoid shadowiness
at these flasks The explants were kept at the temperature
of 27 plusmn 2ordmC photoperiod of 168-h lightdark regime and
irradiances of 25 50 100 and 150 micromol m-2 s-1
The irradiance levels were provided by the
utilization of 40 W daylight fluorescent light tubes (Osramreg
Brazil) as follows I - 25 micromol m-2 s-1 (1 light on without
on without dislocating the luminous panel) III - 100 micromol
m-2 s-1 (4 lights on setting the luminous panel at 20 cm
from the shelf surface) IV - 150 micromol m-2 s-1 (5 lights on
setting the luminous panel at 16 cm from the shelf surface)
Copper strings were used to support the fluorescent
incandescent lamps
After 45 days of incubation regeneration frequencies
and number of shoots per explant were assessed which
were formed at the distal and proximal ends The
organogenesis was assessed regarding shoot lengths from
the evaluated positions at the proximal and distal ends
The experiment was performed under complete
randomized blocks design with 15 replicates in a 4 x 4 x 5
factorial scheme (irradiance levels 25 50 100 and 150 igravemol
m-2 s-1 x sucrose concentrations 0 10 20 and 30 g L-1 x
position of the explants at the hypocotyl 1 2 3 4 and 5)
totalizing 80 treatments being the experiment plot
comprised of a flask containing five segments of
hypocotyl Considering the three factors studied were made
by analysis of test average (Tukey) and regression to
concentrations of sucrose and levels of irradiance The
experiments were repeated at least once
RESULTS AND DISCUSSION
In vitro organogenesis at the distal extremity The
differentiation of buds and shoots as influenced by
irradiance levels and distinct positions of explants along
the hypocotyls axis and the mean values and the standard
deviation of the total number of buds and shoots formed
at the distal extremity are shown in figures 2 and 3
respectively
Independently from the other factors at the medium
without sucrose there was no morphogenic response in
the explants (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The number of structures formed at the distal
extremity reached the highest means when there was added
30 g L-1 sucrose to the medium under 100 micromol m-2 s-1
irradiance at the positions 1 and 3 (Figure 3a) Considering
the means of the five explant positions an average of 592
structures per explant was obtained Similarly Couceiro
(2002) has obtained 590 structures per explant at the distal
extremity when cultivating them horizontally under 60 micromol
m-2 s-1 of irradiance in MS medium containing 50 mg L-1 of
BAP and 30 g L-1 of sucrose Garcia-Luis et al (1999) have
shown in Citrange Troyer that despite the explants being
horizontally placed on the medium surface there was an
additional effect of polarity evidenced by the larger number
of shoots differentiated at the apical extremity and the
distance among the cotyledonary node has affected the
morphogenesis These results confirmed the studies of
Ziv et al (1970) and Fari amp Czako (1981) evidencing that
normally in stem and root sections the shoot-buds are
formed at the distal extremity and the roots at the proximal
extremity In the present work structures formed at both
explant extremities but in a higher degree at the distal
extremity
The largest value found for the average length of
the shoot a was 364 mm for the explants that were extracted
farthest from the cotyledonary node (position 1) and
cultured in medium containing 20 g L-1 of sucrose and
submitted to 50 micromol m-2 s-1 of irradiance (Figure 4a)
However in Passiflora actinia the inclusion of auxins to
the medium favoured the development of the shoot-buds
that consequently presented larger lengths when the
hypocotyl segments were cultivated in MS medium
containing 001 mg L-1 de IBA (KOCH et al 2001)
In vitro organogenesis of passion fruit 65
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
In vitro organogenesis at the proximal extremity
The mean values and the standard deviation of the total
number of buds and shoots formed at the proximal extremity
of the explants are presented in Figure 3b Likewise to the
distal extremity the formation of buds and shoots did not
happen when the explants were cultured in medium without
sucrose (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The differentiation and development of the buds
and shoots at the proximal extremity reached the highest
FIGURE 2 In vitro organogenesis in hypocotyl segments that are characterized by the positions that variesfrom 1 to 5 under effect of different irradiance levels A 25 micromol m-2 s-1 B 50 micromol m-2 s-1 C 100 micromol m-2 s-1 andD 150 micromol m-2 s-1 and sucrose concentrations (a 0 b 10 c 20 d 30 g L-1) for 45 days
A 1
2
3
4
5
a
1
2
3
4
5
b 1
2
3
4
5
c 1
2
3
4
5
d
B
a
b
c
d
C
a
b
c
d
D
a
b
c
d
Distal extremity
Proximal extremity
averages (35) at 25 micromol m-2 s-1 of irradiance in MS medium
containing 20 g L-1 sucrose for explants derived from the
position 4 (Figure 3b) Concurrently the work by Baccarin
(1988) pointed out the best bud and shoot proliferation in
explants from the regions closer to the cotyledonary nodes
The presence of BAP in the medium was essential to
the organogenic process as observed in works with Passiflora
spp (BECERRA et al 2004 BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1994 FERNANDO 2005 HALL et al 2000)
ALEXANDRE R S et al66
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Position 1
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Irradiance (micromol m-2
s-1
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Sucrose
(g L-1)
a
b
FIGURE 3 Mean values and standard deviation of the total number of structures (buds and shoots) formed at thedistal (a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
In vitro organogenesis of passion fruit 67
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
FIGURE 4 Mean values and standard deviation of the lengths of structures (buds and shoots) formed at the distal(a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
Position 1
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s-1
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Com
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Sucrose
(g L-1)
a
b
ALEXANDRE R S et al68
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Independently from the irradiance levels different
sucrose concentrations and explant positions at the
hypocotyl the shoot elongation was considered to be
lower (Figure 4b) than the minimum recommended
(approximately 2-3 cm) for the in vitro rooting process It
highlights the need of previous submission of the explants
to an adequate medium for the elongation process
CONCLUSIONS
The morphogenic response for bud and shoot
formation was remarkably superior at the distal extremity
The maximum concentration among the sucrose
and the irradiance of 100 micromol m-2 s-1 has proportioned
better morphogenic responses at the distal extremity
regardless the position of the explants
The buds and shoots differentiated at the distal
extremity farthest to the cotyledonary node developed
better under 50 micromol m-2 s-1 of irradiance in medium
supplemented with 20 g L-1 sucrose
The use of a carbon source is essential for in vitro
morphogenesis
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
(Recebido em 15 de maio de 2008 e aprovado em 2 de setembro de 2008)
AVALIACcedilAtildeO DE SUBSTRATOS NA PRODUCcedilAtildeO DE MUDASDO ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL [Ananaacutes comosus (L) Merr
var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] EM CONDICcedilOtildeESDE CASA DE VEGETACcedilAtildeO
SUBSTRATES EVALUATION FOR PRODUCTION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE[Ananas comosus (L) Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] PLANTS
UNDER GREENHOUSE CONDITIONS
FRANCISCO NUNES DA CUNHA FILHO1 ANTONIO CARLOS TORRES1 JOAtildeO MARIA CHARCHAR1
1Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF francisconunescnphembrapabr torrescnphembrapabr
RESUMOA utilizaccedilatildeo de substratos na aclimataccedilatildeo de mudas
micropropagadas oferece consideraacutevel vantagem no custo e napossibilidade de obtenccedilatildeo de alta porcentagem de sobrevivecircnciados propaacutegulos ex vitro aliado agrave obtenccedilatildeo de mudas maisuniformes vigorosas precoces e com alta qualidade fitossanitaacuteriaAvaliaram-se quatro diferentes tipos de substratos (fibra de cococomercial fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxe substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas) na aclimataccedilatildeode mudas do abacaxizeiro ornamental As variaacuteveis massa frescatotal massa fresca da parte aeacuterea massa fresca de raiacutezescomprimento de raiacutezes altura de plantas e nuacutemero total de folhasforam avaliadas O delineamento experimental utilizado foi ointeiramente casualizado com quatro tratamentos e com quatrorepeticcedilotildees Pela anaacutelise dos resultados o substrato padronizadoda Embrapa Hortaliccedilas o de fibra de coco comercial e o Plantmaxforam os mais eficientes na produccedilatildeo de mudas de abacaxizeiroornamental para fins comerciais O substrato de coco-verde daEmbrapa Hortaliccedilas foi o menos indicado
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatus plantaornamental substrato
ABSTRACTThe use of substrate in the acclimatization of
micropropagated plants offers considerable cost advantages andthe possibility to obtain high percentage of ex vitro survivingplants as well as in the production of uniform vigorous precociousand healthy plants Four different substrates (commercial coconutfiber green-coconut fiber from Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxand the standardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas) wereevaluated for acclimatization of ornamental pineapple plantsTotal fresh mass fresh mass of shoots fresh mass of roots rootlength plant height and total number of leaves were obtainedThe experiment followed a complete randomized design withfour treatments and four replicates The results showed that thestandardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas commercialcoconut fiber and Plantmax were the most efficient for theproduction of ornamental pineapple plants for commercialpurpose Green-coconut fiber substrate from Embrapa was lessindicated
Index terms Ananas comosus var bracteatus ornamental plantgrowth substrate
INTRODUCcedilAtildeO
Os abacaxizeiros ornamentais apresentam flores e
infrutescecircncias de beleza atrativa muito usadas em arranjos
decorativos e ornamentais no Brasil e exterior
representando um segmento de grande potencial para
exportaccedilatildeo (CABRAL 2000 SOUZA et al 2004) No
comeacutercio de flores nativas o abacaxi ornamental jaacute obteve
valores agregados da ordem de 5000 em relaccedilatildeo ao
abacaxi de fruta natildeo ornamental (SOUZA et al 2004)
A propagaccedilatildeo vegetativa do abacaxizeiro ornamental
para fins de comercializaccedilatildeo eacute feita por mudas oriundas da
planta-matildee Poreacutem essa propagaccedilatildeo apresenta o
inconveniente de disseminar agentes patogecircnicos e pragas
pela utilizaccedilatildeo de mudas contaminadas Dentre os patoacutegenos
e pragas mais comuns destacam-se o fungo Fusarium
subglutinans (Wollenw amp Reinking) PE Nelson (TOUSSON
amp MARASAS 1983) e a cochonilha Dysmicoccus brevipes
turfa casca curtida de eucalipto ou Pinus palha de arroz
carbonizada poacute de carvatildeo (GRATTAPAGLIA amp
MACHADO 1998) casca de arroz carbonizada poacute de
casca de coco seco e verde (SANTOS et al 2006) mistura
de areiaxaximhuacutemus (SOUZA JUNIOR et al 2001) solo
esterco bovino Plantmax e composto orgacircnico em
diferentes proporccedilotildees (MOREIRA et al 2006) dentre
outros Entretanto para o genoacutetipo em estudo as
tecnologias disponiacuteveis necessitam de adequaccedilatildeo para
serem mais eficientes e de baixo custo na produccedilatildeo
comercial de mudas
Objetivou-se neste trabalho avaliar quatro
diferentes substratos na produccedilatildeo de mudas do
abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L) Merr var
bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] para fins comerciais
utilizando-se propaacutegulos produzidos in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
Produccedilatildeo de mudas in vitro
Foram utilizados como fonte de explantes
propaacutegulos produzidos in vitro subcultivados a cada 60
dias utilizando-se o meacutetodo proposto por Correia et al
(1999) Os explantes consistiram de brotaccedilotildees com 2 cm de
comprimento transferidos para meio baacutesico de cultura
contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 3 de sacarose e em mg L-1 incluiacuteram-
se i-inositol 100 tiaminaHCl 02 aacutecido nicotiacutenico 005
piridoxinaHCl 005 e glicina 02 O meio de cultura foi
solidificado com 06 de aacutegar e o pH do meio foi ajustado
para 57 O meio foi distribuiacutedo em tubos de ensaio de 25 x
150 mm na quantidade de 125 mL por tubo
Os tubos foram esterilizados em autoclave a 121ordmC
e a 104 Kpa de pressatildeo por 15 minutos Apoacutes a inoculaccedilatildeo
as culturas foram mantidas em cacircmara de crescimento com
fotoperiacuteodo de 16 horas irradiacircncia de 32 mmol m-2 s-1
temperatura de 27oC durante 30 dias
As mudas foram preacute-aclimatizadas mediante
abertura das tampas dos frascos de cultura cinco dias
antes do transplantio para os respectivos substratos
Transplante e desenvolvimento de mudas micropropagadas
Mudas enraizadas e preacute-aclimatizadas de
abacaxizeiro ornamental foram retiradas dos tubos de
cultura e transplantadas em bandejas de isopor com 72
ceacutelulas contendo quatro diferentes substratos utilizados
como tratamentos 1) substrato comercial de fibra de coco
2) substrato de fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas
3) substrato Plantmax e 4) substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas composto por solo de cerrado areia
lavada esterco de gado curtido e palha de arroz
carbonizada em proporccedilotildees de 3111 vv com adiccedilatildeo de
300 g de calcaacuterio dolomiacutetico e de 300 g da formulaccedilatildeo 4-
30-16
Apenas 30 ceacutelulas por bandeja foram
transplantadas com mudas de abacaxizeiro ornamental (uma
muda por ceacutelula) deixando-se 42 ceacutelulas livres (sem planta)
para que natildeo houvesse competiccedilatildeo entre plantas nas
bandejas As bandejas permaneceram cobertas com
envoltoacuterio plaacutestico nos primeiros trecircs dias apoacutes o
transplante
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado com 10 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca
de raiz e tamanho de raiz e 30 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
altura e nuacutemero de folhas Os dados foram coletados aos
90 dias apoacutes o transplantio A anaacutelise de variacircncia do
experimento foi realizada com o auxiacutelio do programa
estatiacutestico SAS Institute Inc (SAS INSTITUTE 1988) e a
CUNHA FILHO F N da et al72
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
diferenciaccedilatildeo de meacutedias pelo teste de Tukey p 001 e
p 005
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
A anaacutelise conjunta do experimento indicou que
existiu homogeneidade de variacircncia natildeo sendo necessaacuteria
a transformaccedilatildeo de dados para a realizaccedilatildeo das anaacutelises A
anaacutelise de variacircncia (Tabelas 1 e 2) indicou que houve
efeito significativo dos diferentes substratos (teste de
Tukey p 005) sobre a massa fresca total massa fresca da
parte aeacuterea altura de plantas e nuacutemero total de folhas e
que natildeo houve diferenccedila significativa entre os diferentes
substratos com relaccedilatildeo agrave massa fresca de raiacutezes e o
comprimento de raiacutezes (Figuras 1 A-F)
Embora natildeo tenha havido diferenccedila significativa
(teste de Tukey p 005) entre os valores de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea nos tratamentos com
os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
comercial de fibra de coco e o Plantmax os valores
absolutos mais elevados desses paracircmetros foram obtidos
com o substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
(Figuras 1 A-B)
No substrato de fibra de coco-verde da Embrapa
Hortaliccedilas as plantas de abacaxizeiro ornamental tiveram
sempre pior performance em produccedilatildeo de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea natildeo se diferenciando
estatisticamente dos valores obtidos com o uso dos
substratos comerciais da Plantmax e de fibra de coco
Entretanto esses substratos foram significativamente
inferiores (teste de Tukey p 005) em relaccedilatildeo aos valores
obtidos com o uso do substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas (Figuras 1 A-B)
Os valores obtidos para as variaacuteveis massa fresca
de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes natildeo diferiram
estatisticamente entre si (teste de Tukey p 005) em
relaccedilatildeo aos quatro tratamentos (substratos analisados)
Os maiores valores absolutos dessas variaacuteveis foram obtidos
para a massa fresca de raiacutezes no substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e para o comprimento de raiacutezes no
substrato comercial de fibra de coco (Figuras 1 C-D)
TABELA 1 Resumo da anaacutelise de variacircncia para massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca deraiacutezes e comprimento de raiacutezes de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio
Fontes de variaccedilatildeo GL Massa fresca total
Massa fresca
da parte aeacuterea Massa fresca
de raiacutezes Comprimento
de raiacutezes
Tipo de substrato 03 673536 518934 02201ns 22382ns
Resiacuteduo 36 115108 80557 01328 13107
Total 39 - - - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade (ns) natildeo significativo
TABELA 2 Resumo da anaacutelise de variacircncia para altura e nuacutemero de folhas de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio Fontes de variaccedilatildeo GL
Altura de plantas Nuacutemero total de folhas
Tipo de substrato 003 1424357 526854
Resiacuteduo 124 50188 16807
Total 127 - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas 73
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
FIGURA 1 Variaacuteveis avaliadas na determinaccedilatildeo de eficiecircncia dos substratos Plantmax Embrapa Hortaliccedilas fibra decoco e fibra de coco-verde na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental -em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo A)massa fresca total B) massa fresca da parte aeacuterea C) massa fresca de raiacutezes D) comprimento de raiacutezes E) altura deplantas e F) nuacutemero total de folhas Meacutedias seguidas da mesma letra natildeo diferem significativamente entre si pelo testede Tukey Plt005
3653+b 0688
7459+ab 1414
9894+a 1229
6254+ab 0789
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a to
tal (
g)
A
3421+b 0664
6822+ab 1152
8930+a 0933
6002+ab 0763
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax Embrapa Hortaliccedilas Fibra de coco Fibra de coco verde
Tipo de substratos
Mas
sa fr
sca
da p
arte
aeacuter
ea (
g)
B
0568 + 0178 a
0298 + 0007 a0363 + 0120 a
0222 + 0039 a
0
02
04
06
08
1
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a de
rai
zes
(g)
C
12000 + 0338 a
12800 + 0387 a
11690 + 0468 a12020 + 0204 a
10
11
12
13
14
15
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Com
prim
ento
de
raiz
es (c
m)
D
11789 + 0412 a13800 + 0406 b
11088 + 0381 a
8797 + 0385 c
02468
1012141618
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Alt
ura
de p
lant
as (c
m)
E
5882 + 0173 c
7727 + 0191 b8818 + 0259 a
8143 + 0294 ab
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Nuacutem
ero
tota
l de
folh
as
F
Houve diferenccedila significativa (teste de Tukey
p 005) entre os valores meacutedios obtidos para a altura de
plantas e para o nuacutemero total de folhas nos quatro
tratamentos avaliados As plantas tiveram
significativamente maior desenvolvimento em altura no
substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas Natildeo houve
diferenccedila significativa entre os valores meacutedios em altura
de plantas nos substratos comerciais da Plantmax e de
fibra de coco Esses poreacutem foram diferentes dos valores
obtidos no substrato de fibra de coco-verde que
proporcionou significativamente o menor crescimento das
plantas (Figura 1 E)
Maiores meacutedias da variaacutevel nuacutemero total de folhas
foram obtidas com a utilizaccedilatildeo do substrato padronizado
CUNHA FILHO F N da et al74
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
da Embrapa Hortaliccedilas e do Plantmax Natildeo houve diferenccedila
significativa entre os valores meacutedios do nuacutemero total de
folhas nos substratos Plantmax e de fibra de coco comercial
mas esses diferiram estatisticamente dos obtidos no
substrato fibra de coco-verde O substrato de fibra de coco-
verde foi o que propiciou os menores valores da variaacutevel
nuacutemero total de folhas (Figura 1 F) Esses resultados
contradizem os relatados por Carrijo et al (2002) que
verificaram que os substratos contendo fibra de coco-verde
satildeo os mais indicados para produccedilatildeo de mudas de
hortaliccedilas e ornamentais em cultivo sem solo Correia et al
(2003) natildeo observaram diferenccedila significativa entre os
valores da massa fresca de raiacutezes de mudas de cajueiro
anatildeo precoce crescidas em substratos com adiccedilatildeo de poacute
de coco-verde ou de poacute de coco-maduro Santos et al
(2006) relataram que os substratos orgacircnicos contendo as
combinaccedilotildees de fibras de coco seco ou verde
proporcionaram baixo desenvolvimento na aclimatizaccedilatildeo
de mudas Heliconia rostrata Ruiz amp Pav provenientes
da micropropagaccedilatildeo Poreacutem Bezerra et al (2001) discordam
dos autores acima mencionados informando que os
substratos contendo fibras de coco-verde ou seco foram
os mais indicados respectivamente para o enraizamento
de mudas de crisacircntemo (Chrysanthemum sp) e de violeta
africana (Saintpaulia ionantha H Wendl)
Tambeacutem substrato contendo casca de arroz
carbonizada tem sido utilizado na produccedilatildeo de mudas
micropropagadas Weber et al (2003) relataram que o
substrato contendo esse componente misturado com
vermiculita e vermicomposto em proporccedilotildees de 111 foi a
melhor opccedilatildeo para aclimataccedilatildeo de mudas de abacaxizeiro
ornamental oriundas da cultura in vitro e transplantadas
para tubetes Esses autores ainda observaram que o uso
da mistura contendo casca de arroz carbonizada e poacute de
casca de coco em proporccedilotildees de 11 resultou em baixo
desempenho de mudas do abacaxizeiro ornamental em
funccedilatildeo da maacute agregaccedilatildeo fiacutesica baixa retenccedilatildeo de aacutegua e
limitaccedilatildeo nutricional da planta
Neste trabalho os resultados com o uso de substrato
contendo casca de arroz carbonizada sem a presenccedila de
fibras de coco seco ou verde tambeacutem proporcionou
excelente desenvolvimento de mudas do abacaxizeiro
ornamental o que indica uma provaacutevel incompatibilidade
das fibras de coco com outros componentes de substratos
na produccedilatildeo de mudas dessa ornamental
Natildeo houve diferenccedila significativa entre valores de
massa fresca de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes de
abacaxizeiro ornamental em relaccedilatildeo aos quatro substratos
analisados Poreacutem o maior valor absoluto em massa fresca
de raiacutezes foi obtido no substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas enquanto que o maior valor em comprimento
de raiacutezes no substrato comercial de fibra de coco
Com relaccedilatildeo agraves demais variaacuteveis analisadas
observou-se que a massa fresca total e a massa fresca da
parte aeacuterea tiveram performances mais significativas nos
substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas comercial
de fibra de coco e o da Plantmax enquanto que a altura de
plantas foi significativamente mais elevada no substrato
padronizado da Embrapa Hortaliccedilas e o nuacutemero total de
folhas mais significativo nos substratos padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e o Plantmax
CONCLUSOtildeES
Os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
fibra de coco comercial e o da Plantmax satildeo os mais
indicados para a produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro
ornamental para fins comerciais
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) as bolsas concedidas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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SANTOS M do D M dos et al76
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(Recebido em 8 de abril de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFEITO DE ISOPENTENILADENINA POR QUATROSUBCULTIVOS NA MULTIPLICACcedilAtildeO DE BROTACcedilOtildeES
DE ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL IN VITRO
EFFECT OF ISOPENTENYL ADENINE IN FOUR SUBCULTURES DURING THEIN VITRO MULTIPLICATION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE SHOOT
MARIA DO DESTERRO MENDES DOS SANTOS1 JOSEacute GETUacuteLIO DA SILVA FILHO2ANTONIO CARLOS TORRES3
1Bioacuteloga MSc em Botacircnica Departamento de Botacircnica Universidade de BrasiacuteliaUnB Cx P 4457 709190-970 Brasiacutelia DF mariacnphembrapabr2Engenheiro Agrocircnomo Especialista em Biotecnologia de Plantas Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF jgetuliocnphembrapabr3Engenheiro Agrocircnomo Embrapa Hortaliccedilas CxP 218 70359-970 Brasiacutelia DF
RESUMOObjetivou-se no presente trabalho foi o de avaliar o
efeito da adiccedilatildeo de concentraccedilotildees de 2iP em diferentes subcultivosna micropropagaccedilatildeo do abacaxizeiro ornamental var bracteatusBrotaccedilotildees com aproximadamente 10 cm de tamanho oriundosda cultura in vitro foram utilizados como explantes Os explantesforam inoculados em meio baacutesico liquido contendo sais mineraisMS 3 sacarose e em mg L-1 i-inositol 100 tiaminaHCl 01piridoxina HCl 05 aacutecido nicotiacutenico 005 glicina 20 formulaccedilatildeoliacutequida A esse meio foram adicionados concentraccedilotildees de 2iP(00 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro subcultivos(30 60 90 e 120 dias) Maacuteximo nuacutemero de brotaccedilotildees por explante(139) foi obtido em meio baacutesico com 16 mg L-1 de 2iP e no quartosubcultivo aos 120 dias Apoacutes a transferecircncia de brotaccedilotildeesindividualizadas para meio contendo ANA (00 05 10 15 2025 30 e 40 mg L-1) verificou-se a diferenciaccedilatildeo de raiacutezesadventiacutecias na porccedilatildeo basilar dos explantes
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatusmicropropagaccedilatildeo cultivo in vitro
ABSTRACTThe objective of this work was to evaluate the effect of
2iP addition in different subcultures during the micropropagationof ornamental pineapple var bracteatus Shoots with 10 cm inlength originated from in vitro culture were used as explantsThe explants were inoculated in liquid basal medium containingMS salts 3 sucrose 100 mg L-1 i-inositol 01 mg L-1
thiamineHCl 05 mg L-1 pyridoxineHCl 005 mg L-1 nicotinicacid and 20 mg L-1 glycine Different concentrations of 2iP (0005 10 and 20 mg L-1) in combination with four subcultures (3060 90 e 120 days) were used Maximum number of shoot formedper explant (139) was observed in basal medium with 16 mg L-1
2iP at the fourth subculture (120 days) After transferringindividual shoots to medium containing different concentrationsof NAA (00 05 10 15 20 25 30 and 40 mg L-1) mediaadventitious root formed in the basal portion of the explants
Index terms Ananas comosus var bracteatus micropropagationin vitro culture
INTRODUCcedilAtildeO
O abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L)
Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] eacute uma
planta de propagaccedilatildeo vegetativa com grande potencial
ornamental (D EECKENBRUGGE amp LEAL 2003) A
qualidade fitossanitaacuteria do campo de produccedilatildeo dessa
espeacutecie depende do material utilizado para sua propagaccedilatildeo
Assim sendo pode haver acuacutemulo entre plantios
sucessivos de patoacutegenos que satildeo transmitidos de um ciclo
de produccedilatildeo a outro via mudas contaminadas A
micropropagaccedilatildeo em larga escala de mudas sadias via
cultura de tecidos eacute uma estrateacutegia que possibilita
contornar a limitaccedilatildeo de mudas com alta qualidade
fitossanitaacuteria principalmente isentas de fusariose
(REINHARDT amp CUNHA 1999)
Em espeacutecies do gecircnero Ananaacutes os explantes mais
utilizados satildeo as gemas axilares das mudas do tipo coroa
ou filhote embora outros tipos de mudas possam ser usadas
A vantagem do uso de gemas axilares incluem boa
sobrevivecircncia em meio de cultura e com a quebra da
dominacircncia apical do broto haacute estiacutemulo para a formaccedilatildeo de
gemas muacuteltiplas (DREW 1980) A adiccedilatildeo de
fitorreguladores em geral eacute necessaacuteria para suprir as
possiacuteveis deficiecircncias dos niacuteveis endoacutegenos de hormocircnios
nos explantes in vitro Assim sendo recomenda-se a
combinaccedilatildeo de uma auxina com uma citocinina (SKOOG amp
MILLER 1957) Em geral a benzilaminopurina (BAP)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 77
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(ALMEIDA et al 2002 BARBOZA et al 2001 BE amp
DEBERG 2006) ou essa substacircncia em combinaccedilatildeo auxina
e aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (COSTA amp ZAFFARI 2005
GUERRA et al 1999) tecircm sido a(s) substacircncia(s)
reguladora(s) de crescimento mais usada(s) na formaccedilatildeo
de brotaccedilotildees de Ananas sp Entretanto em abacaxizeiro
ornamental a inclusatildeo de BAP no meio pode induzir o
aparecimento de variaccedilotildees somaclonais (RODRIGUES et
al 2007 SANTOS et al 2008) Tambeacutem a combinaccedilatildeo de
cinetina ANA e AIB (aacutecido indolbutiacuterico) foi empregada
para proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees em abacaxizeiro (KISS et
al 1995 MATHEWS amp RANGAN 1979)
Dada a escassez de informaccedilotildees sobre o efeito de
isopenteniladenina (2iP) na propagaccedilatildeo in vitro de espeacutecies
do gecircnero Ananas neste trabalho procurou-se otimizar a
concentraccedilatildeo de 2iP na produccedilatildeo de brotaccedilotildees de
abacaxizeiro ornamental em diferentes subcultivos e seu
subsequumlente enraizamento
MATERIAL E MEacuteTODOS
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Brotaccedilotildees
individualizadas com aproximadamente 1 cm de
comprimento estabelecidas a partir da cultura de gemas
axilares de mudas tipo coroa foram utilizadas como fonte
de explantes Os explantes foram cultivados em meio baacutesico
liacutequido contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) 3 sacarose e em mg L-1 tiaminaHCl 01
piridoxinaHCl 005 aacutecido nicotiacutenico 005 e glicina 20
(SANTOS 2008) O delineamento experimental empregado
foi o inteiramente ao acaso em esquema fatorial 4x4
referentes concentraccedilotildees de 2iP e subcultivos Ao meio
baacutesico foram adicionadas quatro concentraccedilotildees de BAP
(0 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro
subcultivos (30 60 90 e 120 dias) O pH dos meios foi
ajustado a 57 Foram utilizadas nove repeticcedilotildees por
tratamento sendo que cada parcela foi constituiacuteda por um
explante Inicialmente os explantes foram inoculados em
frascos de 250 mL de capacidade com 40mL de meio No
segundo subcultivo os propaacutegulos foram transferidos para
frascos idecircnticos com meio receacutem-preparado No terceiro
e quarto subcultivos foram utilizados frascos de 1000 mL
com 100 mL de meio As culturas foram mantidas em sala
de crescimento sob fotoperiacutedo de 16 horas com densidade
de fluxo de foacutetons de 32 mmol m-2 s-1 a 27plusmn2oC Em cada
subcultivo foi determinado o nuacutemero e a massa de mateacuteria
fresca das brotaccedilotildees formadas por explante inoculado
Os dados foram transformados para 1X e as
anaacutelises estatiacutestica foram realizadas com o auxiacutelio dos
programas SASStat e SISVAR versatildeo 301 Aplicou-se a
anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo grau para
avaliar o efeito da concentraccedilatildeo de 2iP sobre o nuacutemero e
massa da mateacuteria fresca de brotaccedilotildees em cada subcultivo
Enraizamento das brotaccedilotildees Foram utilizadas
brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental regeneradas in vitro
Os explantes com 10 a 20 cm de comprimento foram
inoculados em tubos de ensaio (25x150 mm) com 20 ml de
meio baacutesico 07 de aacutegar suplementado com diferentes
concentraccedilotildees de aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (00 05
10 15 20 25 30 e 40 mg L-1)
Apoacutes inoculaccedilatildeo as culturas foram mantidas em
cacircmara de crescimento nas condiccedilotildees descritas
anteriormente Apoacutes 30 dias da inoculaccedilatildeo foram avaliados
a percentagem de brotaccedilotildees enraizadas nuacutemero e massa
fresca das raiacutezes desenvolvida por brotaccedilatildeo altura da
planta e massa da mateacuteria fresca da parte aeacuterea O
delineamento experimental foi inteiramente casualizado com
29 repeticcedilotildees Cada parcela foi constituiacuteda de um tubo de
ensaio com um explante
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos programas SASStat e SISVAR versatildeo 301
Aplicou-se a anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo
grau para avaliar a variaccedilatildeo das variaacuteveis em funccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de ANA
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Na proliferaccedilatildeo de
brotaccedilotildees observou-se que os fatores concentraccedilatildeo de
2iP e o subcultivo isoladamente e em interaccedilatildeo afetam
significativamente (P 005) as variaacuteveis nuacutemero e massa
da mateacuteria fresca das brotaccedilotildees formadas A equaccedilatildeo que
SANTOS M do D M dos et al78
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
melhor se ajustou para explicar o efeito de 2iP nos diferentes
subcultivos para a variaacutevel nuacutemero de brotaccedilotildees foi a de
segundo grau (Figuras 1 e 2) A multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees
de abacaxizeiro ornamental in vitro eacute dependente de 2iP
no meio de cultura O nuacutemero de brotaccedilotildees por explante
responsivo de tamanho maior que 05 cm de comprimento
foi pequeno na primeira subcultura (30 dias) em todas as
concentraccedilotildees de 2iP testadas aumentando-se nos demais
subcultivos Aos 30 60 90 e 120 dias estimou-se que a
concentraccedilatildeo de 16 mg L-1 de 2iP produziu o maacuteximo de
brotaccedilotildees por explante inoculado respectivamente 20 42
64 e 139 (Figuras 1 e 2) Esses resultados estatildeo em
consonacircncia com a importacircncia da citocinina em vaacuterios
aspectos do crescimento e desenvolvimento da planta
tais como divisatildeo celular (SKOOG amp MILLER 1957) quebra
da dominacircncia apical e desenvolvimento das gemas laterais
(SACHS amp THIMMAN 1964) induccedilatildeo e multiplicaccedilatildeo de
brotaccedilotildees in vitro (GRATTAPAGLIA amp MACHADO
1998 JOSHI amp DHAWAN 2007 MURASHIGE 1974)
Tambeacutem o tipo de citocinina e a sua concentraccedilatildeo satildeo
determinantes no processo de micropropagaccedilatildeo
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998 MURASHIGE
1974) Em Ananas sp o BAP tem sido preferencialmente
usado na proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees in vitro (ALMEIDA
1994 ALMEIDA et al 2002 CRUZ 2000 ESCALONA et
al 1999 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
GUERRA et al 1999 MATHEWS et al 1976) Entretanto
Kiss et al (1995) relataram que tanto o BAP quanto a
cinetina foram efetivos para formaccedilatildeo de brotaccedilotildees em
abacaxizeiro comercial No presente trabalho o 2iP foi
adicionado ao meio devido a sua maior atividade bioloacutegica
comparada com o BAP e a cinetina (MURASHIGE 1974)
Tambeacutem para a variaacutevel massa da mateacuteria fresca
foi constatada a resposta quadraacutetica das doses de 2iP
(Figuras 3 e 4) Pelas equaccedilotildees de regressatildeo infere-se
que o 2iP estimula o acuacutemulo de massa fresca nas
brotaccedilotildees com o maacuteximo obtido com a concentraccedilatildeo de
18 mgL-1 desse fator nos subcultivos de 30 60 e 120 dias
com a produccedilatildeo de respectivamente 9 17 e 77 g por
explante inoculado No terceiro subcultivo aos 90 dias a
concentraccedilatildeo de 17 gL-1 de 2iP produziu o total de
biomassa de 45 g por explante Essa observaccedilatildeo estaacute em
concordacircncia com os trabalhos do efeito beneacutefico de
citocininas na produccedilatildeo de parte aeacuterea ateacute uma
concentraccedilatildeo oacutetima acima da qual seu excesso eacute inibitoacuterio
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1988)
FIGURA 1 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
y)dias 60(14585x = -247661x + 31353 +
R 20999 =
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e bo
taccedilotilde
es p
or
expl
ante
s
30 dias
60 dias
y (60 dias) = 14585x2 - 47661x + 31353
R2 = 0999
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 79
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 2 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
FIGURA 3 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
FIGURA 4 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa mateacuteria fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
y)dias 90(22847x = -2 73196x + 55784
R209477 =
y)dias 120(5072x = -21623x + 9464 +
R20954 =
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero m
eacutedio
de
brot
accedilatildeo
por
expl
ante
90 dias
120 dias
y (120 dias) = 50725x2 - 1623x + 9464
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
R2 = 0954
y(60 dias) = -38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (
g)
30 dias
60 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (60 dias) = - 38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
y)dias 90(12255x = -243239x + 75847 +
R209717 =
y)dias 120(19075x = -271029x + 11295 +
R2096 =
0
10
2030
40
50
6070
80
90
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (g
)
90 dias
120 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (120 dias) = 19075x2 - 71029x + 11295
R2 = 096
y (90 dias) = 12255x2 - 43239x + 75847R2 = 09717
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e br
otaccedil
atildeo p
or e
xpla
nte
SANTOS M do D M dos et al80
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
Enraizamento das brotaccedilotildees A induccedilatildeo
emergecircncia e alongamento das raiacutezes ocorreram em todos
os tratamentos Em meio sem regulador de crescimento
os propaacutegulos apresentaram raiacutezes desenvolvendo-se
de maneira pontual na extremidade seccionada dos
explantes (Figura 5) Em meio com ANA as raiacutezes
desenvolveram-se na porccedilatildeo basilar dos propaacutegulos em
forma de roseta Em geral a auxina eacute utilizada na fase de
enraizamento de propaacutegulos oriundos da cultura in vitro
de Ananas (BARBOZA et al 2004 CORREIA et al
2000 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
PRAXEDES et al 2001 TENG 1997) Entretanto o
enraizamento pode ser feito em meio sem regulador de
crescimento (KISS et al 1995 ZEPEDA amp SAGAWA
1981) A utilizaccedilatildeo de uma auxina na fase de enraizamento
induz agrave formaccedilatildeo de um sistema radicular mais
pronunciado que facilitaraacute a fase de aclimataccedilatildeo (Figura
5) Observou-se que a concentraccedilatildeo de ANA afetou
significativamente (P 005) o nuacutemero de raiacutezes massa
fresca das raiacutezes e da parte aeacuterea A altura da planta natildeo
foi afetada pela concentraccedilatildeo de ANA sendo o valor
de F natildeo significativo
Constatou-se uma relaccedilatildeo quadraacutetica entre as
variaacuteveis nuacutemero e massa da mateacuteria fresca das raiacutezes e da
parte aeacuterea e a concentraccedilatildeo de ANA A estimativa da
proliferaccedilatildeo de raiacutezes baseando-se no nuacutemero de raiacutezes
por explante aumentou com a concentraccedilatildeo de ANA
atingindo um maacuteximo de 119 com 22 mg L-1 de ANA
Concentraccedilotildees acima de 22 mg L-1 tendem a apresentar
um efeito inibitoacuterio na produccedilatildeo de raiacutezes (Figura 6)
Tambeacutem a massa da mateacuteria fresca das raiacutezes aumentou
com a concentraccedilatildeo de ANA com um maacuteximo de 023 g
obtida com a concentraccedilatildeo de 24 mg L-1 de ANA (Figura
7) Essa tendecircncia foi observada para a massa fresca da
parte aeacuterea onde a estimativa maacutexima da produccedilatildeo de
biomassa foi de 046 g por explante em meio com 19 mg L-1
de ANA (Figura 8)
Com relaccedilatildeo agrave altura das plantas natildeo houve
diferenccedila significativa entre as diferentes concentraccedilotildees
de ANA e essa variaacutevel
FIGURA 5 Brotaccedilotildees enraizadas em meio MS contendo diferentes concentraccedilotildees de ANA (mg L-1) aos 30 dias apoacutesa inoculaccedilatildeo
00 05 10 15 20 25 30 40
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 81
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 6 Variaccedilatildeo do nuacutemero de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 7 Variaccedilatildeo na massa da mateacuteria fresca de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 8 Variaccedilatildeo da massa de mateacuteria fresca da parte aeacuterea por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
y = -1202x2 + 5291x + 61504
R2 = 06865
0
2
4
6
8
10
12
14
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Nordm
de r
aiacuteze
s
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00282x2 + 01359x + 00704
R2 = 07573
0
005
01
015
02
025
03
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Mas
sa fr
esca
das
raiacutez
es
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00363x2 + 01407x + 03255
R2 = 0857
0
01
02
03
04
05
06
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Mas
sa fr
esca
da
part
e aeacute
rea
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
SANTOS M do D M dos et al82
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
CONCLUSOtildeES
No meio liacutequido contendo MS vitaminas 3 de
sacarose e 16 mg L-1 de 2iP obteacutem-se uma estimativa meacutedia
de 139 brotaccedilotildees por explante inoculado no final do quarto
subcultivo (120 dias)
Maior nuacutemero de raiacutezes adventiacutecias por explante eacute
estimado com a concentraccedilatildeo de 22 mg L-1 de ANA
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) pelas bolsas concedidas
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MOTHEacute G P B et al84
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
(Recebido em 25 de marccedilo de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFICIEcircNCIA FOTOQUIacuteMICA E CARACTERIacuteSTICAS DECRESCIMENTO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR (Saccharum officinarum L)CULTIVADA IN VITRO EM DIFERENTES CONCENTRACcedilOtildeES DE
SACAROSE E QUALIDADE DE LUZ
PHOTOCHEMICAL EFFICIENCY AND GROWTH CHARACTERISTICS OF SUGARCANE (Saccharum officinarum L) PLANTS CULTIVATED IN VITRO UNDER
DIFFERENT SUCROSE CONCENTRATIONS AND LIGHT QUALITY
1Bioacuteloga Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000 28015-620
Campos dos Goytacazes RJ georgiabecharayahoocombr2Engenheiro Agrocircnomo Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA
Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000
28015-620 Campos dos Goytacazes RJ alenauenfbr crespouenfbr campostuenfbr
RESUMODentre os diversos produtos agriacutecolas cultivados no
Estado do Rio de Janeiro a cana-de-accediluacutecar (Saccharumofficinarum L) eacute a cultura de maior importacircncia econocircmicaDiante dessa importacircncia na regiatildeo fluminense torna-senecessaacuteria cada vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividadedessa espeacutecie A produccedilatildeo em escala comercial de plantas decana-de-accediluacutecar pode ser beneficiada pela obtenccedilatildeo de mudas dealta qualidade e homogeneidade em curtos periacuteodos de tempo oque pode ocorrer pelo uso da micropropagaccedilatildeo A presenccedila decarboidrato eacute essencial para o enraizamento de muitas espeacuteciesin vitro sendo a sacarose o accediluacutecar mais utilizado namicropropagaccedilatildeo Poreacutem a necessidade desse composto nomeio de cultivo vem sendo discutida por alguns autoresObjetivou-se neste trabalho verificar o efeito da concentraccedilatildeode sacarose no meio de cultivo e a qualidade da luz sobre acapacidade fotossinteacutetica e as caracteriacutesticas de crescimentoem plantas de cana de accediluacutecar cultivadas in vitro Para tanto foiquantificada a emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila determinadaa massa seca de raiz e da parte aeacuterea a massa foliar especiacutefica eestimada a concentraccedilatildeo de clorofilas Os resultados obtidosmostraram que em cana de accediluacutecar cultivada in vitro em frascosfechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de sacarose no meio decultivo promoveu aumentos na mateacuteria seca da parte aeacuterea e daraiz na massa foliar especiacutefica e na intensidade de cor verde dasfolhas estudadas Natildeo houve modificaccedilatildeo na capacidadefotoquiacutemica maacutexima do PSII A justificativa para o natildeo-comprometimento da sacarose sobre as caracteriacutesticasrelacionadas agrave fotossiacutentese estudadas neste trabalho como oteor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o rendimentoquacircntico maacuteximo do PSII pode estar relacionada com a altacapacidade dessa espeacutecie em armazenar sacarose nos tecidos
Termos para indexaccedilatildeo Saccharum officinarum aclimatizaccedilatildeomeio de cultura fotossiacutentese
ABSTRACTThe State of Rio de Janeiro was one of the pioneers in
Brazil to set out the sugar cane activity which still represents animportant segment in the regional economy The production ofplants in commercial scale would be benefited by the attainmentof seedlings of high quality and homogeneity in short periods oftime which can be obtained using the micropropagation Thepresence of carbohydrate is essential for in vitro rooting of manyspecies with the sucrose being considered the most used sugarduring micropropagation despite the discussion by some authorsregarding its requirement The objective of this work was toevaluate the effect of sucrose concentrations in the culture mediumand light quality on the photosynthetic capacity and biometriccharacteristics on micropropagated sugar cane plants Chlorophyllfluorescence and contents were quantified root and shoot drymass and specific leaf mass were determined and chlorophyllconcentrations were estimated The results showed that theincrease in sucrose concentration during the in vitro cultivationof sugar cane in closed flasks promotes increase in the shootand root dry matter specific leaf mass and chlorophyll contentsNo modification of maximum PSII photochemistry capacity wasobserved The lack of sucrose effects on photosyntheticcharacteristics such chlorophyll contents and PSII yield may berelated to the high capacity of this specie to storage sucrose inthe tissues
Index terms Saccharum officinarum aclimatization culturemedium photosynthesis
Siacutembolos PSII fotossistema II SPAD Soil Plant AnalysisDevelopment BAP benzilaminopurina FFF fluxo de foacutetonsfotossinteacuteticos MPC medidor portaacutetil de clorofilas MFE massafoliar especiacutefica F
vF
maacutex Rendimento quacircntico maacuteximo do
fotossistema II MSPA massa seca parte aeacuterea MSR massaseca raiz AIB acido indol butirico ANAacido naftaleno aceacutetico
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 85
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
INTRODUCcedilAtildeO
A cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) foi
introduzida no Brasil no seacuteculo XVII com o objetivo de
quebrar o monopoacutelio mundial exercido pela Franccedila no
comeacutercio do accediluacutecar produzido nas Ilhas do Caribe O cultivo
da cana-de-accediluacutecar teve um grande aumento quando em
meados da deacutecada de 70 o Brasil criou o Programa Nacional
do Aacutelcool o qual teve como objetivo estimular a produccedilatildeo
do aacutelcool visando o atendimento das necessidades do
mercado interno e externo e da poliacutetica de combustiacuteveis
automotivos (MENEZES VEIGA et al 2006)
Atualmente a cana-de-accediluacutecar eacute uma das principais
culturas do panorama brasileiro e continua crescendo em
funccedilatildeo do consumo como fonte de energia e accediluacutecar Dentre
os diversos produtos agriacutecolas cultivados no estado do Rio
de Janeiro a cana-de-accediluacutecar eacute a cultura de maior importacircncia
econocircmica (MENEZES VEIGA et al 2006) Diante dessa
importacircncia na regiatildeo fluminense torna-se necessaacuteria cada
vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividade dessa espeacutecie
Uma das alternativas para essa elevaccedilatildeo eacute a formaccedilatildeo de
lavouras por meio do uso de mudas de excelente qualidade
Assim a micropropagaccedilatildeo eacute uma teacutecnica que pode contribuir
significativamente para a produccedilatildeo de mudas de cana de
accediluacutecar de alta qualidade Entre as diversas vantagens que
essa teacutecnica apresenta estaacute a produccedilatildeo raacutepida de mudas em
larga escala e a eliminaccedilatildeo de microrganismos potencialmente
fitopatogecircnicos
A micropropagaccedilatildeo tradicional tem como premissa
a presenccedila de sacarose no meio de cultivo uma vez que
esse composto eleva a produccedilatildeo de biomassa e pode
contribuir para aumentar o enraizamento de muitas espeacutecies
in vitro (GRATTAPAGALIA amp MACHADO 1990)
Entretanto vaacuterios autores tecircm sugerido que a fonte de
carboidrato no meio de cultura inibe o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono A adiccedilatildeo da sacarose ao meio
inibiu a fotossiacutentese potencial in vitro (LEES et al 1991)
reduziu a atividade da Rubisco (GROUT amp DONKIN 1987)
inibiu o acuacutemulo de clorofila (LA ROSA et al 1984) e
diminuiu a fixaccedilatildeo do carbono inorgacircnico por meio da
inibiccedilatildeo da atividade da carboxilase do fosfoenol-piruvato
e do Ciclo de Calvin (NEUMANN amp BENDER 1987)
Entretanto Khan et al (2006) trabalhando com cana-de-
accediluacutecar relataram que a maacutexima taxa de multiplicaccedilatildeo de
dois clones (AEC82-223 e NIA-2004) foi nas concentraccedilotildees
de 4 e 6 de sacarose no meio mostrando que nesses
clones cultivados em frascos fechados in vitro a sacarose
foi de fundamental importacircncia para a otimizaccedilatildeo do
crescimento da parte aeacuterea Esses autores mostraram que
a maior taxa de enraizamento foi em meio MS com 1 mg L-
1 de AIB e 6 de sacarose
Alguns autores para facilitar a aclimatizaccedilatildeo da
planta micropropagada sugerem adotar na uacuteltima fase da
cultura in vitro diminuir a concentraccedilatildeo de sacarose com
o objetivo de tentar elevar a taxa fotossinteacutetica e capacitar
a planta agrave nutriccedilatildeo autotroacutefica uma vez que a fonte de
carboidrato no meio de cultura pode inibir o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono Em vista disso Simmonds (1983)
obteve melhores resultados no enraizamento de porta-
enxerto de macieira ao reduzir a concentraccedilatildeo de sacarose
no meio de cultura para apenas 1 Contudo Wainwright
amp Scrace (1989) sugerem manter a sacarose no niacutevel
normalmente utilizado (3) ou ateacute mesmo aumentaacute-lo numa
fase anterior agrave aclimatizaccedilatildeo visando melhorar a qualidade
da planta Segundo esses autores o preacute-condicionamento
em altas concentraccedilotildees de sacarose aumentaria as reservas
de carboidratos armazenadas pelas folhas aumentando
assim a energia disponiacutevel para as placircntulas durante o
processo de aclimataccedilatildeo Para George amp Sherrington (1984)
no desenvolvimento in vitro de muitas espeacutecies a
assimilaccedilatildeo fotossinteacutetica eacute baixa fazendo com que as
culturas sejam dependentes do suporte externo de
carboidratos
Objetivou-se neste trabalho verificar o efeito da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo e da qualidade
de luz sobre a eficiecircncia fotoquiacutemica e as caracteriacutesticas de
crescimento da cana-de-accediluacutecar cultivada in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
O experimento foi realizado na unidade de pesquisa
em fotossiacutentese de plantas in vitro no Setor de Fisiologia
MOTHEacute G P B et al86
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
Vegetal Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal
na UENF Campos dos GoytacazesRJ
Como fonte de explante foram utilizadas placircntulas
de cana-de-accediluacutecar com dois a trecircs centiacutemetros de altura
proveniente de material vegetal jaacute em fase de multiplicaccedilatildeo
contendo meio MS modificado (02 mg L-1 de fonte de
nitrogecircnio combinado 01 mg L-1 de cinetina 02 mg L-1 de
BAP 1 mg L-1 de Tiamina 100 mg L-1 de mio-inositol e 20 g
L-1 de sacarose) em condiccedilotildees de perfilhamento O material
foi obtido no Laboratoacuterio de Cultura de Tecido do Campus
Dr Leonel Miranda UFRRJ O meio de cultura utilizado
para o recultivo foi o MS padratildeo (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 100 mg L-1 de mio-inositol 7 g L-1 de
Agar (Vetec) e sem adiccedilatildeo de reguladores de crescimento
Os tratamentos consistiram de uma combinaccedilatildeo bifatorial
de seis concentraccedilotildees de sacarose no meio (0 10 20 30
40 e 50 g L-1) e dois tipos de luz (lacircmpada fluorescente
branca 40w luz branca com irradiacircncia de 948 igravemol m-2 s-
1 e lacircmpada fluorescente tipo Grolux 40w luz vermelha
com irradiacircncia de 966 igravemol m-2 s-1) O pH do meio foi
ajustado para 58 antes da inclusatildeo do aacutegar e da
autoclavagem (15 atm a 120ordmC por 20 min) A parcela
experimental consistiu de frascos tipo baby food
contendo 50 mL do meio MS nas diferentes
concentraccedilotildees de sacarose O delineamento experimental
foi inteiramente casualizado com trecircs repeticcedilotildees em que
cada parcela consistiu de um frasco com duas plantas
Apoacutes a inoculaccedilatildeo os explantes foram cultivados em
sala de crescimento a uma temperatura 25ordm C plusmn 10 a um
fluxo de foacutetons fotossinteacuteticos de 120 a 150 igravemol m-2 s-1
com 16h de fotoperiacuteodo
Aos vinte e oito dias apoacutes a inoculaccedilatildeo (DAI) foi
utilizada a 2ordm eou 3ordm folha mais expandida para as anaacutelises
para determinaccedilatildeo do rendimento quacircntico maacuteximo do PSII
(FvF
max) (apoacutes adaptaccedilatildeo da folha ao escuro por 30
minutos com auxiacutelio de pinccedilas) por meio de um fluoriacutemetro
natildeo modulado PEA (Plant Efficiency Analyser - Hansatech
Ltd King s Lynn Norfolk UK)
A medida de intensidade de verde (relacionada com
o teor de clorofilas totais) foi feita nesta mesma eacutepoca por
meio do medidor portaacutetil do teor de clorofila SPAD 502
Chlorophyll Meter Minolta Japatildeo Os valores da
intensidade do verde foram provenientes da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha
A massa foliar especiacutefica feita aos 28 dias apoacutes o
cultivo in vitro foi determinada a partir da divisatildeo da massa
seca da folha de uma parte do limbo foliar pela respectiva
aacuterea dessa parte
No final do experimento foi determinada a massa
seca das partes aeacuterea e da raiz das plantas Essas partes
foram colocadas em estufa com ventilaccedilatildeo forccedilada a 70ordm C
por 48 h A partir dos dados da massa seca estimou-se a
relaccedilatildeo parte aeacuterearaiz (massa seca da parte aeacuterea massa
seca das raiacutezes)
Os dados experimentais foram submetidos a uma
anaacutelise de variacircncia e para cada tratamento foram
avaliados trecircs frascos Foram realizadas duas repeticcedilotildees
para cada frasco e seis plantas foram utilizadas
provenientes de trecircs frascos Os dados de cada avaliaccedilatildeo
foram analisados estatisticamente por teste Tukey a 5
e os resultados expressos como meacutedia (plusmn erro-padratildeo) de
seis repeticcedilotildees
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os diferentes tratamentos de luz e dosagem de
sacarose no meio de cultura influenciaram a produccedilatildeo de
biomassa na parte aeacuterea mostrando que maiores
concentraccedilotildees de sacarose produziram maior biomassa
(figuras 2 e 3) O tratamento controle (0 g L-1 de sacarose)
natildeo produziu biomassa suficiente para as anaacutelises
Portanto as plantas-controle cultivadas nessas
condiccedilotildees requerem a adiccedilatildeo de carboidratos para suprir
suas necessidades metaboacutelicas quer participando na
geraccedilatildeo de energia ou como fonte de esqueletos
carbocircnicos para vaacuterios processos bioquiacutemicos sugerindo
que as condiccedilotildees encontradas no frasco de cultivo e na
sala de crescimento foram ineficientes para as plantas-
controle desenvolverem condiccedilotildees de realizar
fotossiacutentese e consequumlentemente produzir biomassa
(Figura 1)
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 87
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 1 Plantas de cana-de-accediluacutecar cultivada em diferentes concentraccedilotildees de sacarose apoacutes 28 dias de cultivo (A)0 g L-1 (B) 10 g L-1 (C) 20 g L-1 (D) 30 g L-1 (E) 40 g L-1 e (F) 50 g L-1
Os resultados obtidos por meio da anaacutelise de
variacircncia para as cinco diferentes concentraccedilotildees de
sacarose (10 20 30 40 e 50 g L-1) no meio demonstraram
que para a caracteriacutestica massa seca da parte aeacuterea (MSPA)
houve uma resposta crescente em que doses crescentes
de sacarose promoveram acreacutescimos de biomassa seca
(Figura 2A) A concentraccedilatildeo 10 g L-1 diferenciou
significativamente das concentraccedilotildees de 40 g L-1 e 50 g L-
1 produzindo uma menor MSPA 0039 0101 e 0135g
respectivamente (Figura 2A) Dados semelhantes foram
obtidos em morangueiros batata menta e videira por
(RIQUELME et al 1991) e por (NICOLOSO 2003) em que
nesse trabalho a elevaccedilatildeo da concentraccedilatildeo de sacarose
de 30 ateacute 60 g L-1 promoveu maior produccedilatildeo de biomassa
dos oacutergatildeos de Pfaffia glomerata (Spreng) Pedersen
Com relaccedilatildeo agrave mateacuteria seca da raiz (MSR) as
diferenccedilas de concentraccedilatildeo de sacarose influenciaram
significativamente os resultados As menores
concentraccedilotildees (10 20 e 30 g L-1) somente diferenciaram
significativamente da maior concentraccedilatildeo (50 g L-1) que
produziu valores 0084g de MSR (Figura 2b) Pelos
resultados foi verificado que a presenccedila de sacarose
mostrou-se fundamental para o desenvolvimento da parte
aeacuterea e das raiacutezes da cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro
De fato Khan et al (2008) mostraram que o meio MS com
meia forccedila suplementado com reguladores de crescimento
(AIB e ANA) e 60 g L-1 de sacarose proporcionou maior
enraizamento em 3 variedades elite de cana-de-accediluacutecar Khan
et al (2006) tambeacutem indicaram a importacircncia da sacarose
no crescimento da parte aeacuterea em clones dessa espeacutecie
George (1996) relata que para formaccedilatildeo de raiacutezes in vitro
haacute necessidade de energia e carboidratos sendo esses
fornecidos por meio da fotossiacutentese (em condiccedilotildees
autotroacuteficas) ou oriunda de uma fonte exoacutegena de accediluacutecar
(em sistemas heterotroacuteficos ou mixotroacuteficos) O autor
verificou ainda que o aumento da concentraccedilatildeo de
sacarose de modo geral estimula o crescimento e a
formaccedilatildeo de raiacutezes de algumas espeacutecies Jaacute em outros
trabalhos na fase de enraizamento a reduccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultura vem sendo
citada como beneacutefica na melhoria da qualidade do sistema
radicular bem como na sobrevivecircncia das placircntulas
transplantadas (ANDRADE 1998)
Com relaccedilatildeo agrave MSPAMSR os tratamentos natildeo
apresentaram diferenccedila significativa apontando uma
relaccedilatildeo direta entre o crescimento das raiacutezes e da parte
MOTHEacute G P B et al88
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 2 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e as diferentes concentraccedilotildees de sacarose no meio de cultivoindependente da luz (A) Massa seca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa seca raiz (MSR) (C) Razatildeo massa seca da parteaeacuterearaiacutezes (MSPAMSR) (D) Massa foliar especiacutefica (MFE) (E) Teor estimado de clorofilas totais (valores de MPC)(F) Rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (F
vF
m) em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Cada
siacutembolo representa a meacutedia de seis repeticcedilotildees em MSPA MSR MSPA MSR e MFE e oito repeticcedilotildees em Valores deMPC e da relaccedilatildeo F
vF
m Meacutedias seguidas pela mesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
aeacuterea Essa relaccedilatildeo eacute de fundamental importacircncia para a
organizaccedilatildeo dos processos fisioloacutegicos e desenvolvimento
das plantas (TAIZ amp ZEIGER 2002) Essas partes estatildeo
relacionadas entre si e essa relaccedilatildeo eacute devida agrave dependecircncia
nutricional e fitohormonal da parte aeacuterea com a raiz
(SALISBURY amp ROSS 1992) (Figura 2c)
As diferentes concentraccedilotildees de sacarose
influenciaram a massa foliar especiacutefica (MFE) a qual
representa a quantidade de massa seca por unidade de
aacuterea da folha estimando a proporccedilatildeo relativa da superfiacutecie
assimilatoacuteria e os tecidos de sustentaccedilatildeo e condutores da
folha aleacutem de poder ser correlacionada positivamente com
a taxa fotossinteacutetica (CRUZ et al 2004) A menor
concentraccedilatildeo de sacarose apresentou o menor valor (148
g m-2) o que indica que a ausecircncia de sacarose pode
comprometer a espessura foliar bem como a capacidade
da maquinaria fotossinteacutetica (Figura 2d)
O teor de clorofila foi estimado por meio do medidor
portatil de clorofila (MPC) Os valores encontrados da
intensidade do verde foram oriundos da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha As diferentes concentraccedilotildees de
sacarose no meio de cultivo influenciaram a intensidade
de verde (Figura 2e) em que a maior concentraccedilatildeo de
sacarose apresentou o maior valor do MPC (336)
0
003
006
009
012
015
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
A (g
)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MFE
(gm
2)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
0
002
004
006
008
01
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSR
(g)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
20
22
24
26
28
30
32
34
36
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
Val
ores
de
MPC
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
000
100
200
300
400
500
600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
AM
SR
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
062
064
066
068
07
072
074
076
078
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
FvF
m
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
A
B
D
C
E
F
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 89
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
diferenciando significativamente dos demais tratamentos
Esses valores estatildeo relacionados com uma maior
quantidade de clorofilas totais em maiores teores de
sacarose Nesse caso em plantas de cana-de-accediluacutecar a
elevaccedilatildeo no teor de sacarose contribui para o incremento
do teor de clorofilas a partir de 30 g L-1 desse composto no
meio de cultivo
Com relaccedilatildeo agrave atividade do PSII avaliada por meio
da emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila a as plantas de
cana-de-accediluacutecar apresentaram alteraccedilotildees com relaccedilatildeo aos
tratamentos utilizados Estatisticamente os valores
menores da eficiecircncia fotoquiacutemica maacutexima do PSII (FvF
m)
foram verificados na concentraccedilatildeo de 20 g L-1 de sacarose
(Figura 2f) Com exceccedilatildeo das plantas crescidas nessa
concentraccedilatildeo de sacarose as demais plantas cultivadas
em meios com maiores concentraccedilotildees de sacarose natildeo
apresentaram diferenccedilas significativas para a caracteriacutestica
FvF
m Por meio dos resultados relacionados aos efeitos
da concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo sobre as
caracteriacutesticas de crescimento a produccedilatildeo de biomassa
estaria mais relacionada agrave oferta de carbono no meio de
cultivo do que a eficiecircncia na maquinaria fotoquiacutemica das
plantas
A qualidade do fluxo de foacutetons fotossinteacutetico (FFF)
teve influecircncia relevante nas caracteriacutesticas MSPA MSR
MFE e valores do MPC A luz considerada vermelha emitida
pelas lacircmpadas GroLux proporcionou maiores valores das
caracteriacutesticas supracitadas Tais resultados poderiam estar
relacionados a um maior ganho de carbono por meio de um
aumento da taxa fotossinteacutetica liacutequida eou indiretamente
causado por alteraccedilotildees fitormonais causadas pela
modificaccedilatildeo no espectro luminoso (CAMPELL amp
BONNER 1986) Ainda na presenccedila da luz vermelha houve
favorecimento para a produccedilatildeo de biomassa tanto na parte
FIGURA 3 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e os diferentes tipos de luz (Branca e Vermelha) (A) Massaseca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa foliar especifico (MFE) (C) Massa seca raiz (MSR) e (D) Teor estimado declorofilas totais (Valores de MPC) Cada siacutembolo representa a meacutedia sendo 15 repeticcedilotildees em MSPA MSR e valores deMPC e 20 repeticcedilotildees em MFE em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Meacutedias seguidas pelamesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
14
16
18
20
22
LUZ
MFE
(gm
2)
Luz branca
Luz vermelha
0
001
002
003
004
005
LUZ
MSR
(g)
Luz branca
Luz vermelha
002
004
006
008
01
012
014
LUZ
MSP
A (g
)
Luz branca
Luz vermelha
20
22
24
26
28
30
LUZ
Val
ores
de
MP
C
Luz branca
Luz vermelha
A
C
B
D
MOTHEacute G P B et al90
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
aeacuterea como no sistema radicular A luz branca apresenta
uma composiccedilatildeo espectral que pode variar e causar
respostas diferenciadas na cultura in vitro A
predominacircncia na emissatildeo de foacutetons na regiatildeo do vermelho
ateacute o azul pode estimular a induccedilatildeo de calos quebrar a
moleacutecula de AIA e ainda estimular a induccedilatildeo de brotos
(BARRUETO CID 2001 CHAMOVITZ amp DENG 1996)
As plantas cultivadas em maiores concentraccedilotildees
(40 e 50 gL-1) de sacarose e aclimatadas em luz vermelha
tiveram melhores resultados do que nos outros tratamentos
(Figura 2 e 3)
CONCLUSOtildeES
Em cana-de-accediluacutecar cultivada em condiccedilotildees in vitro
e em frascos fechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de
sacarose no meio de cultivo promoveu aumentos na
mateacuteria seca da parte aeacuterea e da raiz na massa foliar
especiacutefica e na intensidade de cor verde das folhas
estudadas Natildeo houve alteraccedilatildeo na eficiecircncia fotoquiacutemica
maacutexima do PSII A luz vermelha associada agrave concentraccedilotildees
de sacarose de 40 e 50gL-1 parece ter uma resposta
somatoacuteria tanto na produccedilatildeo de parte aeacuterea e raiz quanto
na massa foliar especiacutefica e no teor de clorofila
A justificativa para o natildeo-comprometimento da
sacarose no meio sobre as caracteriacutesticas relacionadas agrave
fotossiacutentese estudadas neste trabalho como exemplo o
teor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o
rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (FvF
m) pode estar
relacionada com a alta capacidade dessa espeacutecie em
armazenar sacarose nos tecidos
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
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EFFECTS OF AUXINS AND CYTOKININS ON IN VITRODEVELOPMENT OF Alpinia purpurata K SCHUM AND
PHENOLIC COMPOUNDS PRODUCTION
EFEITO DE AUXINAS E CITOCININAS NO DESENVOLVIMENTO IN VITRO DEAlpinia purpurata K SCHUM E PRODUCcedilAtildeO DE SUBSTAcircNCIAS FENOacuteLICAS
CRISTIANE PIMENTEL VICTOacuteRIO1 IACINETE PAMPLONA DA CRUZ2 ALICE SATO3RICARDO MACHADO KUSTER4 CELSO LUIZ SALGUEIRO LAGE5
1Doutora em Ciecircncias Bioloacutegicas (Biofiacutesica) Instituto de Biofiacutesica Carlos Chagas FilhoLab Fisiologia Vegetal Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050 21952-590 Rio de Janeiro RJ crispvbiofufrjbr
2Estudante de Farmaacutecia bolsista PIBICUFRJ3Doutora em Biotecnologia Vegetal Prof Dep Botacircnica Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro Av Pasteur 458
22290-040 Rio de Janeiro RJ alicesatouniriobr4Doutor Prof Laboratoacuterio de Fitoquiacutemica Nuacutecleo de Pesquisas de Produtos Naturais (NPPN) Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco H 21941-902 Rio de Janeiro RJ kusternppnufrjbr
5Doutor Prof IBCCFo Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050
21952-590 Rio de Janeiro RJ clslagebiofufrjbr
ABSTRACTAlpinia purpurata K Schum is largely used in
ornamentation and scarcely present itself in folk medicine Studiesusing plant tissue culture technique under standardized conditionpermit to evaluate plant physiological morphological andphytochemical responses to exogenous plant growth regulatorThis work consisted in the establishment of in vitro A purpurataplants using different concentrations of auxin and cytokinins inmg L-1 IAA 2 TDZ 2 and 4 IAA 2 + TDZ 2 IAA 2 + BAP 2Additionally it was determined the content of phenoliccompounds in the leaves of field and in vitro plants using Folin-Ciocalteau method Buds from inflorescence A purpurata weredisinfested and introduced in solid MS medium to initiate culturesThe direct organogenesis process was fast and satisfactoryproducing elongated plants with a developed radicular systemThe rooting percentage reached 100 for all treatments after 2months Cytokinins and auxins were important for the increasingof the leaves quantity (42 to 51) and shoot elongation (40 cm)Liquid MS0 presented the favorable results for fastmicropropagation and higher production of shoots providingplants ready to be acclimatized In vitro plants cultivated underMS0 produced 93 of phenolic compounds in comparison withfield plants (100) Through High Performance LiquidChromatographic it was verified similar chromatographic profilesbetween field and in vitro plant extracts
Index terms Folin-Ciocalteau HPLC micropropagation tissueculture Zingiberaceae Alpinia purpurata
RESUMOAlpinia purpurata K Schum eacute uma espeacutecie muito
utilizada como ornamental e possui escassas indicaccedilotildees de usona medicina popular Estudos utilizando teacutecnicas de cultura detecidos vegetais permitem a partir de condiccedilotildees padronizadas
avaliar as respostas fisioloacutegicas morfoloacutegicas e fitoquiacutemicas dosvegetais aos fitorreguladores exoacutegenos Este trabalho consistiuno estabelecimento de plantas de A purpurata in vitro utilizando-se diferentes concentraccedilotildees de auxina e citocininas (mg L-1) AIA2 TDZ 2 e 4 AIA 2 + TDZ 2 AIA 2 + BAP 2 Verificou-setambeacutem o conteuacutedo de substacircncias fenoacutelicas nas folhas de plantasde campo e in vitro atraveacutes do meacutetodo de Folin-CiocalteauBrotos oriundos da inflorescecircncia de A purpurata foramdesinfestados e introduzidos em meio MS soacutelido para iniciar asculturas O processo de organogecircnese direta foi raacutepido esatisfatoacuterio produzindo plantas alongadas e com sistema radiculardesenvolvido A porcentagem de enraizamento atingiu 100 paratodos os tratamentos ao final de 2 meses As citocininas e auxinasforam importantes para incrementar o nuacutemero de folhas (42 a51) e alongamento dos brotos (40 cm) em comparaccedilatildeo com omeio controle O MS0 liacutequido foi o mais favoraacutevel para raacutepidapropagaccedilatildeo in vitro e maior produccedilatildeo de brotos com suprimentode plantas aptas a serem aclimatizadas Plantas in vitro cultivadasem meio MS0 produziram 93 de fenoacuteis totais em relaccedilatildeo agravesplantas de campo (100) Atraveacutes da Cromatografia Liacutequida deAlta Eficiecircncia foi verificada semelhanccedila entre os perfiscromatograacuteficos dos extratos de plantas de campo e in vitro
Termos para indexaccedilatildeo Folin-Ciocalteau CLAEmicropropagaccedilatildeo cultura de tecidos vegetais ZingiberaceaeAlpinia purpurata
INTRODUCTION
Alpinia purpurata K Schum is widely used as
ornamental plant in several tropical and subtropical areas
with high international market demand (KRESS et al 2002
SANGWANANGKUL et al 2008) In folk medicine it is
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 93
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
used for cough in Venezuela and presents antibacterial
activity (BERMUacuteDEZ amp VELAacuteSQUEZ 2002 ZOGHBI et
al 1999) Recent studies have showed the phytochemical
potential of this species (VICTOacuteRIO et al 2007 2008)
The vegetative propagation through rhizome is the
main way of reproduction of this species According to
Moroacuten (1987) for the propagation of A purpurata in
greenhouse the time is twice more than in in vitro systems
Plant tissue culture techniques have been employed in
Brazil since 1950 and the main advantages include the
continuous and fast production of aseptic and selected
plants These techniques permit a commercial-scale
production of plants (ROUT et al 2006) and some studies
have showed them as an alternative for optimizing
secondary metabolites production (RAO amp
RAVISHANKAR 2002) The micropropagation of A
purpurata supplies may be a source for ornamental and
medicinal raw material (MULABAGAL amp TSAY 2004
POMPELLI et al 2007)
Addition of auxins and cytokinins in the culture
media are essential to improve and regulate growth and
morphogenesis of the cultures (CHITRA amp PADMAJA
2005 KYOZUKA 2007) Besides several studies have
reported the effects of plant growth regulators in in vitro
phenolic production (SANTOS-GOMES et al 2002
THIEM 2003) We intended to develop a protocol for in
vitro production of A purpurata plants and to evaluate
the effects of auxins and cytokinins on plant development
and compounds phenolic production
MATERIAL AND METHODS
Plant Material
Buds from inflorescence of donor plants of Alpinia
purpurata red inflorescence were used as source of plant
material to initiate in vitro cultures Voucher specimen was
deposited at the Herbarium of Rio de Janeiro Botanical
Garden under accession number RB 433484 Buds were
collected and washed with running water using nylon
brush for removing residues The sterilization process was
concluded in four steps in sterile ambient after dissection
of leaves 20 of commercial bleach solution for 40 min
followed by immersion in distilled water plus commercial
detergent solution for 15 min dipped in 70 ethanol
washed for 10 min in 30 of commercial bleach solution
and rinsed with sterile distilled water three after each step
Establishment of in vitro cultures
Explants were subcultured into glasses (16 x 8 cm)
containing 50 ml of culture medium Murashige amp Skoog
(1962) supplemented with 3 of sucrose 148 igraveM thiamine-
Different letters indicate significant differences at plt 005 level Tukey s test n e 30
VICTOacuteRIO C P et al96
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
FIGURE 2 In vitro development of Alpinia purpurata plants in MS medium under different plant growth regulators(mgl-1) (A) Sequence of development 1 month (I) 2 months (II) and 3 months (III) (B) shoot height after 2 months (C)shoot height and (D) percentage of shoots after 3 months Different letters indicate significant differences at plt 005level Tukey s test n e 30 100 correspond to 30 shoots per explant within 1 year
advantage of in vitro production of secondary metabolites
is the possibility to control environment and nutritional
factors Data show high level of phenolics in in vitro
cultures of A purpurata (93) compared with field plants
(100) (Figure 3A) Through reversed-phase HPLC was
found similarity between field and in vitro plants profiles
(Figure 3B-C) The peaks 1 2 and 3 presented
characteristics of phenolic compounds verified through
UV spectra obtained by HPLC A purpurata is not currently
used in folk medicine and these results may indicate the
presence of therapeutic resource in its phytochemistry
The preliminary investigation of phenolic in
organogenic cultures of A purpurata using Folin-
Ciocalteau reagent and HPLC analysis brings perspectives
about the production of antioxidant compounds by this
species In addition the establishment of tissue culture of
A purpurata may be a good alternative to produce aseptic
plants and its bioactive metabolites
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 97
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
ACKNOWLEDGEMENTS
C P Victoacuterio acknowledges the fellowship from
CAPES and PROEX financial support
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VICTOacuteRIO C P PAMPLONA I C KUSTER R MLAGE C L S Detection of flavonoids in Alpinia purpurata(Vieill) K Schum leaves by high-performance liquidchromatography Revista Brasileira de PlantasMedicinais Botucatu 2008 No prelo
ZOGHBI M G B ANDRADE E H A MAIA J G SVolatile constituents from leaves and flowers of Alpiniaspeciosa K Schum and A purpurata (Viell) SchumFlavour and Fragrance Journal United Kingdom v 14 p411-414 1999
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 99
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
(Recebido em 23 de janeiro de 2008 e aprovado em 7 de outubro de 2008)
CURVA DE CRESCIMENTO ATIVIDADE DA FENILALANINA AMOcircNIA-LIASE E TEORES DE FENOacuteIS E TANINOS TOTAIS EM CALOS DE
GROWTH CURVE PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE ACTIVITY AND TOTALPHENOL LEVELS IN CALLUS OF Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville
(FABACEAE-MIMOSOIDEAE)
ANA HORTEcircNCIA FONSEcircCA CASTRO1 MILLER MARANI LIMA2 RENATO PAIVA3 AMAURI ALVES DE ALVARENGA4 MIRELLE OLIVEIRA SOacuteTER5
1Doutora Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG2Bolsista ICFAPEMIG Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG3PhD Universidade Federal de LavrasUFLA 37200-000 Lavras MG4Doutor Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 37200-000 Lavras MG renpaivauflabr5Acadecircmica Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG
RESUMOObjetivou-se estabelecer a curva de crescimento e avaliar
a atividade da fenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis etaninos totais em calos de barbatimatildeo explantes foliares foraminoculados em meio MS suplementado com 30 g L-1 sacarose eacrescidos de 905 M de 24-D O crescimento a atividade dafenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis e taninos totaisforam avaliados a cada 10 dias durante 110 dias A curva decrescimento dos calos apresentou um padratildeo sigmoidal com cincofases distintas Os teores meacutedios de fenoacuteis totais acompanharamas variaccedilotildees observadas para a atividade enzimaacutetica Alta atividadee maiores teores de fenoacuteis totais foram observados no explanteinicial com reduccedilotildees progressivas ateacute a fase linear Na faseestacionaacuteria observaram-se incrementos importantes naatividadeda fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais Natildeo foidetectada a presenccedila de taninos totais nos calos
Termos para indexaccedilatildeo Barbatimatildeo cultivo in vitro plantamedicinal Stryphnodendron adstringens
ABSTRACTIn order to establish growth curve phenylalanine ammonia-
lyase (PAL) activity and total phenol and tannin levels inStryphnodendron adstringens leaf explants were inoculated inMS medium supplemented with 30 g L-1 sucrose and 905 M24-D The growth PAL activity and total phenol and tanninlevels were evaluated at 10 days intervals during 110 days Callusgrowth curve presented a sigmoid shape with five different phasesAverage levels of total phenol followed the changes observed forenzymatic activity High activity and higher levels of total phenolwere observed in initial explants with progressive reductions untilthe linear phase Increases in phenylalanine ammonia-lyase activityand total phenols levels were observed in stationary phase Notannins were observed on callus
Index terms Stryphnodendron adstringens In vitro CultureMedicinal Plant
INTRODUCcedilAtildeO
Atualmente um consideraacutevel esforccedilo tem sido feito
com o intuito de se produzir fitoteraacutepicos com maiores
concentraccedilotildees de substacircncias ativas vegetais atraveacutes de
culturas de ceacutelulas ou tecidos Segundo Taniguchi et al
(2002) dentre as diferentes teacutecnicas de cultivo in vitro a
cultura de calos tem apresentado grande importacircncia para
a propagaccedilatildeo e produccedilatildeo in vitro de espeacutecies de interesse
medicinal A desdiferenciaccedilatildeo e induccedilatildeo de regeneraccedilatildeo
das plantas a partir de calos satildeo muitas vezes processos
difiacuteceis de serem obtidos e podem demandar algum tempo
As auxinas tecircm sido amplamente utilizadas nos meios de
cultivo para a induccedilatildeo de calos e geralmente dependendo
da concentraccedilatildeo causam elongaccedilatildeo celular e expansatildeo ou
divisatildeo celular Em geral com o uso de baixas
concentraccedilotildees de auxinas predomina a formaccedilatildeo de raiacutezes
adventiacutecias enquanto que altas concentraccedilotildees induzem a
formaccedilatildeo de calos A interaccedilatildeo entre auxinas e citocininas
tambeacutem eacute muito utilizada para a induccedilatildeo de calogecircnese
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998)
Durante a calogecircnese eacute importante estabelecer-se
a curva de crescimento de calos o que propicia a
identificaccedilatildeo das fases distintas de crescimento da espeacutecie
A partir deste estudo pocircde-se determinar o momento exato
de repicagem dos calos para um meio fresco ou a
CASTRO A H F et al100
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
possibilidade de sua utilizaccedilatildeo em suspensotildees celulares
visando a otimizaccedilatildeo da produccedilatildeo de metaboacutelitos
secundaacuterios em espeacutecies medicinais (GEORGE 1996) O
crescimento in vitro de calos geralmente apresenta um
padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas Segundo Smith
(1992) a fase lag se caracteriza como fase de maior produccedilatildeo
de energia correspondendo ao periacuteodo em que as ceacutelulas
se preparam para a divisatildeo visando sua expansatildeo Ocorre o
iniacutecio da mobilizaccedilatildeo de metaboacutelitos primaacuterios sem qualquer
divisatildeo celular siacutentese de proteiacutenas e de compostos
especiacuteficos Essa fase resulta em um pequeno crescimento
dos calos A fase exponencial eacute biossinteacutetica Observa-se o
maior crescimento dos calos devido agrave maacutexima taxa de divisatildeo
celular caracteriacutestica desse periacuteodo O nuacutemero de ceacutelulas
aumenta Na fase linear haacute diminuiccedilatildeo da divisatildeo celular
mas aumento de volume celular e a fase de desaceleraccedilatildeo eacute
o momento em que as culturas devem ser transferidas para
outro meio devido agrave reduccedilatildeo de nutrientes produccedilatildeo de
produtos toacutexicos secagem do aacutegar e reduccedilatildeo do oxigecircnio
no interior das ceacutelulas Na fase estacionaacuteria ocorre maior
acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
O barbatimatildeo [Stryphnodendron adstringens
(Mart) Coville Fabaceae-Mimosoideae) eacute uma importante
espeacutecie medicinal do cerrado com altos teores de
compostos polifenoacutelicos em especial os taninos Possui
grande distribuiccedilatildeo e importacircncia econocircmica para o estado
de Minas Gerais sendo empregado como adstringente e
cicatrizante no combate de amidalite faringite
hemorroacuteidas leucorreacuteias erupccedilotildees cutacircneas diarreacuteias e
como agentes antiinflamatoacuterios (LIMA et al 1998)
A fenilalanina amocircnia-liase (EC 4315) eacute uma
enzima-chave e regulatoacuteria da rota biossinteacutetica dos
fenilpropanoacuteides e de seus derivados e catalisa a
desaminaccedilatildeo do aminoaacutecido L-fenilalanina em aacutecido trans-
cinacircmico sendo esse o primeiro passo para a biossiacutentese
dos fenoacutelicos vegetais (ASSIS et al 2001) De acordo com
Rivero et al (2001) os niacuteveis dessa enzima podem flutuar
significativamente em intervalos relativamente curtos em
resposta a uma ampla variedade de estiacutemulos como o
fotoperiacuteodo fitocromo mudanccedilas de temperatura radiaccedilatildeo
UV deficiecircncia de nutrientes reguladores de crescimento
virais e ataque de insetos bem como o estaacutedio de
desenvolvimento vegetal e o grau de diferenciaccedilatildeo de
ceacutelulas e tecidos (SOLECKA amp KACPERSKA 1995)
Devido agrave exploraccedilatildeo irracional pelas induacutestrias de
curtimento do couro o barbatimatildeo encontra-se ameaccedilado
de extinccedilatildeo Assim devem-se melhorar as teacutecnicas de
propagaccedilatildeo encorajar seu cultivo e criar vias alternativas
para a produccedilatildeo de tanino em larga escala a partir de
fontes naturais
Objetivou-se estabelecer a curva de crescimento e
avaliar a atividade da fenilalananina amocircnia-liase e os teores
de fenoacuteis e taninos totais em calos de barbatimatildeo
MATERIAL E MEacuteTODOS
As etapas experimentais foram realizadas entre
fevereiro de 2007 e janeiro de 2008 no Centro Universitaacuterio
de Lavras (UNILAVRAS) e na Universidade Federal de
Lavras (UFLA)
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento foi obtida a partir da
inoculaccedilatildeo de segmentos foliares de 025 cm2 de aacuterea
empregados como explantes em meio MS (MURASHIGE
amp SKOOG 1962) suplementado com 30 g L-1 sacarose e
acrescidos de 905 M de 24-D Os meios foram
solidificados com aacutegar na proporccedilatildeo de 7 g L-1 e o pH
ajustado para 57 plusmn 01 antes da autoclavagem por 20 min
Apoacutes inoculaccedilatildeo os explantes foram transferidos para sala
de crescimento onde foram incubados na presenccedila de luz
agrave temperatura de 27 plusmn 1 oC fotoperiacuteodo de 16 horas e
DFFFA= 25 mol m-2 s-1
Foram feitas pesagens do material inoculado fresco
a partir do dia da inoculaccedilatildeo (tempo 0) ateacute ser atingida a
fase de desaceleraccedilatildeo em intervalos de 10 dias O
porcentual de crescimento dos calos foi determinado pela
equaccedilatildeo proposta por Lameira (1997)
crescimento = Pf Pi
Pf
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 101
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
onde
Pf = Mateacuteria seca final
Pi = Mateacuteria seca inicial
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado sendo cada pesagem composta
por duas repeticcedilotildees e cada repeticcedilatildeo pela meacutedia de 10
tubos cada tubo contendo um explante Os dados obtidos
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia e analisados
estatisticamente utilizando-se o Sistema de Anaacutelise de
Variacircncia para Dados Balanceados (FERREIRA 2000)
Determinaccedilotildees da atividade da fenilalanina amocircnia-liasee teores de fenoacuteis e taninos totais
Calos obtidos na curva de crescimento foram
imersos em nitrogecircnio liacutequido e posteriormente
armazenados em Freezer Forma Scientific a -86 oC ateacute o
momento de serem utilizados na determinaccedilatildeo da atividade
enzimaacutetica Outros calos assim como aqueles obtidos no
experimento com a sacarose foram liofilizados para
determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis e taninos totais
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase
O procedimento descrito por Cheng amp Breen (1991)
com algumas modificaccedilotildees foi utilizado para extraccedilatildeo e
determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica
Calos congelados (5 g) foram triturados
homogeneizadas com acetona 80 e congelados por 15
minutos O homogenato foi filtrado e o pelet foi seco atraveacutes
de vaacutecuo
O extrato proteacuteico foi obtido homogeneizando-se
05 g do pelet seco em 5 mL de tampatildeo borato de soacutedio 01
M pH= 88 contendo 5 mM de -mercaptoetanol 2 mM
de EDTA e 4 (pv) de PVP a 4oC Depois de 1h o
homogenato foi centrifugado a 27000 g por 30 minutos a
4 oC A mistura de reaccedilatildeo foi constituiacuteda por 05 mL de L-
fenilalanina 30 M 30 mM de tampatildeo borato de soacutedio pH=
88 e 1 mL de extrato cru num volume total de 3 mL O
substrato foi adicionado apoacutes 10 minutos de preacute-incubaccedilatildeo
e a reaccedilatildeo foi interrompida com 01 mL de HCl 6 N A
atividade da fenilalanina amocircnia-liase foi determinada pela
produccedilatildeo de cinamato apoacutes 90 minutos agrave 30 oC sob
agitaccedilatildeo contiacutenua medida pela variaccedilatildeo da absorbacircncia a
290 nm A atividade especiacutefica da enzima foi definida em
nmol de aacutecido cinacircmicohmg de proteiacutena
Fenoacuteis totais
Amostras de calos liofilizados foram trituradas em
micromoinho e armazenadas em frascos fechados
protegidos da luz
Aproximadamente 500 mg de calos liofilizados e
triturados foram extraiacutedos cinco vezes com 5 mL de uma
mistura de metanolaacutegua (11) sob refluxo O volume final
do extrato foi completado para 25 mL
Uma aliacutequota de 100 L do extrato foi utilizada para
a determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis totais atraveacutes do
meacutetodo de Folin-Dennis segundo as normas da AOAC
(1970) As determinaccedilotildees foram feitas em triplicata e o
resultado foi expresso em porcentagem de aacutecido tacircnico
por grama de calo seco
Taninos Totais
A determinaccedilatildeo dos teores de taninos totais foi
realizada atraveacutes do Meacutetodo de Difusatildeo Radial de acordo
com Hagerman (1987)
Um volume de 5 mL do extrato foi concentrado a 37oC e posteriormente retomado com 05 mL de uma mistura
de metanolaacutegua (11) Uma aliacutequota de 15 mL foi utilizada
para a determinaccedilatildeo Todas as determinaccedilotildees foram feitas
em triplicata O resultado foi expresso em percentagem de
tanino por grama de calo seco
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento dos calos seguiu o padratildeo
sigmoidal apresentando cinco fases distintas lag
exponencial linear desaceleraccedilatildeo e estacionaacuteria (Figura
1) A fase lag onde as ceacutelulas do explante se preparam para
a divisatildeo celular e produccedilatildeo de energia ocorreu ateacute o 30o
dia apoacutes a inoculaccedilatildeo com calos apresentando um
crescimento de aproximadamente 73 A segunda fase
exponencial estendeu-se do 31o
ao 50o
dia de cultivo
com 70 de crescimento periacuteodo esse caracterizado pela
CASTRO A H F et al102
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
maacutexima divisatildeo celular A fase linear ocorreu entre o 51o ao
70o
dia e natildeo se verificou crescimento dos calos nesse
periacuteodo Entre o 71o
e 100o
dia observou-se a fase de
desaceleraccedilatildeo com 28 de crescimento e a partir do 101o
dia a cultura entrou na fase estacionaacuteria Segundo Smith
(1992) na fase de desaceleraccedilatildeo os calos devem ser
transferidos para um novo meio de cultura devido agrave
reduccedilatildeo de nutrientes secagem do aacutegar e acuacutemulo de
substacircncias toacutexicas
FIGURA 1 Curva de crescimento de calos deStryphnodendron adstringens obtidos a partir de segmentosfoliares inoculados em meio MS contendo 905 M de 24-D e 30 g L-1 de sacarose
0
002
004
006
008
01
012
014
016
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Mat
eacuteria
sec
a (g
)
De maneira semelhante essa mesma curva de
crescimento pode ser dividida em trecircs fases fase de
crescimento lento (do dia da inoculaccedilatildeo ateacute o 30o dia) fase
de crescimento ativo (do 31o
ao 70o
dia) e fase de
estabilizaccedilatildeo (71o
dia em diante) sendo indicada a
repicagem entre o 71o ao 100o dia
A curva de crescimento para calos de
barbatimatildeo apresentou um padratildeo semelhante ao de outras
espeacutecies medicinais de cerrado como Byrsonima
intermeacutedia A Juss (NOGUEIRA et al 2008) Croton
(BONILLA 2002) e Derris sp (CONCEICcedilAtildeO 2000)
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteise taninos totais
Na figura 2 encontram-se representados os
resultados da atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase
e dos teores de fenoacuteis totais verificados durante o periacuteodo
experimental O explante inicial apresentou um teor meacutedio
de 065 de taninos totais natildeo se detectando entretanto
a presenccedila de taninos nos demais calos formados
Conforme pode-se observar a atividade da
fenilalanina amocircnia-liase situou-se entre 016 e 196 mol
de aacutecido cinacircmico h-1 g-1 de mateacuteria fresca (plt005) (figura
2A) A atividade apresentou-se maacutexima no explante inicial
(dia 0) e reduziu progressivamente ateacute o 70o dia periacuteodo
esse correspondente agraves fases lag exponencial e linear
Entre o 71o ao 100o dia ou seja na fase de desaceleraccedilatildeo a
atividade enzimaacutetica indicou uma tendecircncia em se manter
constante e a partir do 101o dia (fase estacionaacuteria) verificou-
se um pequeno incremento nessa atividade da ordem de
26 De maneira semelhante os teores meacutedios de fenoacuteis
totais acompanharam as variaccedilotildees observadas para a
atividade enzimaacutetica e situaram-se em uma faixa de 029 a
399 sendo o teor meacutedio maacuteximo observado no explante
inicial (figura 2B) Os teores de fenoacuteis totais reduziram
significativamente ateacute o 60o dia (fase lag e exponencial) e a
partir do 61o
ao 90o
dia permaneceram praticamente
constantes com os menores niacuteveis observados durante o
periacuteodo experimental em torno de 037 em meacutedia A partir
da fase estacionaacuteria (100o dia) verificou-se um aumento de
65 nos teores meacutedios de fenoacuteis totais
Estes resultados mostraram-se muito interessantes
do ponto de vista fisioloacutegico e fitoquiacutemico e corroboram
com relatos de Conceiccedilatildeo (2000) e Lameira (1997) os quais
citam que a fase estacionaacuteria corresponde ao periacuteodo em
que ocorre maior acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
Apesar de esses teores serem baixos eacute importante ressaltar
que o meio de cultura pode ser otimizado para produccedilatildeo
em larga escala de fenoacuteis totais e taninos uma vez que
foram obtidos in vitro a partir de segmentos foliares e de
forma convencional satildeo extraiacutedos da casca da planta adulta
cultivada in vivo
A presenccedila de baixos teores de fenoacuteis e a ausecircncia
de taninos pode estar associada agrave alta atividade metaboacutelica
relacionada ao crescimento dos calos (mitose) o que
demanda elevada quantidade de substrato necessaacuterio agrave
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 103
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
FIGURA 2 Valores meacutedios de atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase (A) e teores de fenoacuteis totais (B) emStryphnodendron adstringens durante o periacuteodo experimental
0
05
1
15
2
25
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Ativ
idad
e da
Fen
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acircmic
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A
0
05
1
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2
25
3
35
4
45
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120Dias
Fenoacute
is T
otai
s (
)
B
produccedilatildeo de energia Segundo Botta et al (2001) a
diferenciaccedilatildeo celular assim como a desaceleraccedilatildeo da
atividade mitoacutetica progressivamente permite o acuacutemulo de
compostos derivados do metabolismo secundaacuterio Para
Lavola et al (2000) e Pentildeuelas et al (1997) variaccedilotildees nos
teores de metaboacutelitos secundaacuterios natildeo podem ser explicadas
somente pelas diferenccedilas na disponibilidade de carboidratos
devendo-se considerar tambeacutem a disponibilidade de
precursores para a sua siacutentese e as mudanccedilas nos padrotildees
de siacutentese e catabolismo desses compostos
CONCLUSOtildeES
A curva de crescimento para calos de barbatimatildeo
apresentou um padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas
sendo indicada a repicagem entre o 71o ao 100o dia
Alta atividade e maiores teores de fenoacuteis totais
foram observados no explante inicial com reduccedilotildees
progressivas ateacute a fase linear Na fase estacionaacuteria
observaram-se incrementos importantes na atividade da
fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais
Natildeo se detectou a presenccedila de taninos totais nos
calos durante a determinaccedilatildeo da curva de crescimento na
presenccedila de 904 M de 24-D
AGRADECIMENTOS
Agrave Fundaccedilatildeo de Amparo agrave Pesquisa do Estado de
Minas Gerais (FAPEMIG) pelo suporte financeiro ao
projeto e concessatildeo de bolsa de iniciaccedilatildeo cientiacutefica
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(Recebido em 14 de fevereiro de 2007 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EMBRIOGEcircNESE SOMAacuteTICA DIRETA DE Coffea arabica LCONCENTRACcedilOtildeES DE NH4NO3 E DE KNO3 NO
DESENVOLVIMENTO DE EMBRIOtildeES1
DIRECT SOMATIC EMBRYOGENESIS OF Coffea arabica L CONCENTRATIONS OFNH4NO3 AND KNO3 ON THE DEVELOPMENT OF EMBRYOS
JULIANA COSTA DE REZENDE2 MOACIR PASQUAL3 SAMUEL PEREIRA DE CARVALHO3ESTER ALICE FERREIRA4 FLAVIA CARVALHO SANTOS5
1Artigo extraiacutedo da dissertaccedilatildeo de mestrado da primeira autora apresentada a Universidade Federal de LavrasUFLA2Pesquisadora MSc Epamig Campus da UFLA Cx P 176 372000-000 Lavras MG julianacostaepamigbr3Professor Dr Titular do Departamento de AgriculturaDAG Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 372000-000
Lavras MG pasqualuflabr samuelpcuflabr4Pesquisadora Dra Epamig Cx P 351 Uberaba MG esterepamigbr5Doutoranda em Fitotecnia Bolsista Capes flavinha3010yahoocombr
RESUMOO melhoramento geneacutetico do cafeeiro tem incorporado
atraveacutes de cruzamentos ganhos geneacuteticos para produtividade eoutras caracteriacutesticas de interesse agronocircmico A introduccedilatildeo demeacutetodos biotecnoloacutegicos para auxiliar os programas demelhoramento geneacutetico tem-se mostrado bastante uacutetilprincipalmente em culturas perenes como eacute o caso do cafeeiroUm importante meacutetodo de propagaccedilatildeo in vitro de plantas deCoffea eacute a embriogecircnese somaacutetica direta Objetivou-se com estetrabalho avaliar os efeitos de diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3 no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos
diretos de C arabica L cv Rubi Os tratamentos foramconstituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH
4NO
3 (0 4125 825
12375 e 1650 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3 (0 475
950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS O experimentofoi mantido por 150 dias em sala de crescimento com irradiacircnciaem torno de 32 igraveM m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas comtemperatura de 25 plusmn 1oC As variaacuteveis avaliadas foram nuacutemero defolhas comprimento da parte aeacuterea e massa fresca da parte aeacutereaOs resultados indicaram que a utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO
3combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de NH
4NO
3 como a mais
indicada para o desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos de Carabica L Os resultados apontam ainda que a ausecircncia denitrogecircnio promove o maior peso das placircntulas
Termos para indexaccedilatildeo Nitrogecircnio cafeacute cv Rubi Coffeaarabica
ABSTRACTCoffee breeding programs have incorporated using
artificial crossings genetic benefits for productivity and othercharacteristics of agronomic interest The introduction ofbiotechnology methods to improve genetic breeding programshas demonstrated to be useful mainly in perennial cultures ascoffee species An important method of in vitro propagation ofCoffea plants is somatic embryogenesis Therefore the objectiveof this work was to obtain the most adequate combinations ofculture medium components for plantlets growth The influence
of NH4NO
3 (0 4125 825 12375 and 1650 mg L-sup1) of MS
formulation x KNO3
(0 475 950 1425 and 1900 mg L-sup1) MSformulation were tested for the development of somatic embryosThe experiments were maintained in a growth room under lightintensity of 32 microMol m-2 s-1 photoperiods of 16 hours andtemperature of 25 plusmn 1o C The characteristics evaluated were leafnumber shoot length and shoot fresh matter The results indicatedthat the use of 950 mgL-sup1 KNO
3 combined with 1155 to 2475
mg L-sup1 NH4NO
3 is the most indicated for the development of
somatic embryos of C arabica L The absence of nitrogenpromotes the largest weight of plantlets
Index Terms Nitrogen Coffee cv Rubi Coffea arabica
INTRODUCcedilAtildeO
O nitrogecircnio eacute um dos elementos necessaacuterios e
ativos para diversos processos metaboacutelicos da planta pois
eacute constituinte de vaacuterias biomoleacuteculas essenciais tais como
aminoaacutecidos aacutecidos nucleacuteicos enzimas e proteiacutenas e
juntamente com a sacarose eacute o principal componente em
quantidade no meio de cultura
O nitrogecircnio difere dos demais macronutrientes por
apresentar-se na forma de caacutetion (amocircnio) e acircnion (nitrito
e nitrato) contribuindo de forma efetiva tanto no
metabolismo celular como na regulaccedilatildeo do seu potencial
osmoacutetico Atua como agente tamponante e favorece a
absorccedilatildeo de outros iacuteons presentes no meio (NAGAO et
al 1994) A vantagem dos tecidos vegetais receberem pelo
menos parte do nitrogecircnio sob uma forma prontamente
reduzida eacute que haveria uma diminuiccedilatildeo no gasto de energia
REZENDE J C de et al106
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
que ocorre na conversatildeo enzimaacutetica de nitrato a amocircnio
(GEORGE et al 1987) O efeito dessas diferentes formas
inorgacircnicas separadamente pode promover ou natildeo o
crescimento e desenvolvimento de determinadas espeacutecies
de plantas enquanto a combinaccedilatildeo das duas estimula o
crescimento de muitas espeacutecies in vitro (CALDAS et al
1998)
De acordo com George amp Sherrington (1984) o
desenvolvimento e morfogecircnese em cultura de tecidos satildeo
acentuadamente influenciados pela disponibilidade de
nitrogecircnio e pela forma como o mesmo eacute fornecido Alta
concentraccedilatildeo de sais do meio MS comparada a outros
meios especificamente dos niacuteveis de amocircnio (-NH4) e
nitrato (-NO3) pode ser criacutetica no processo de morfogecircnese
e crescimento (SAKUTA amp KOMAMINE 1987) estando
pois a demanda energeacutetica fornecida pelo metabolismo de
carboidratos e a assimilaccedilatildeo destes iacuteons diretamente
relacionada com o sucesso da cultura in vitro
Sato (1994) estudou o efeito de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio sobre a propagaccedilatildeo de trecircs
diferentes clones de geacuterbera de vaso (Gerbera jamesonii
Adlam) e concluiu que a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio do
MS completo inibe a regeneraccedilatildeo de brotos enquanto a
utilizaccedilatildeo de concentraccedilotildees diluiacutedas favorece a induccedilatildeo
dos brotos Bespalhok et al (1992) estudaram a
concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia na induccedilatildeo de brotos
em estevia (Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni) e
constataram que a concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia do
MS eacute toacutexica Obteve maior induccedilatildeo de brotaccedilotildees usando
frac14 de nitrato de amocircnia no meio MS Por outro lado Tadesse
et al (2000) verificaram que a accedilatildeo de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio promoveu um incremento
inicial da aacuterea foliar das placircntulas formadas mas ocasionou
efeitos relativamente negativos no aumento da aacuterea foliar
das placircntulas durante a aclimatizaccedilatildeo
O nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio sustenta
boa taxa de crescimento em algumas culturas como roseira
(Rosa gallica L) (NASH amp DAVIES 1972) e trigo (Triticum
que natildeo crescem bem com o nitrato no meio como por
exemplo o arroz (Oriza sativa L) (SARGENT amp KING 1974
YATAZAWA amp FURUHASHI 1968)
Grewal et al (1980) citados por Grattapaglia amp
Machado (1990) verificaram em culturas de eucalipto
(Eucaliptus citriodora Hook) que ao se reduzir pela
metade as concentraccedilotildees de nitrato de amocircnio e de
potaacutessio do meio MS a taxa de multiplicaccedilatildeo dobrava
Essa mesma concentraccedilatildeo proporcionou o melhor
comprimento da parte aeacuterea em embriotildees zigoacuteticos de C
arabica L (RIBEIRO 2001)
A maioria das plantas prioriza a absorccedilatildeo de NH4
+ a
NO3
- poreacutem eacute necessaacuterio encontrar o balanccedilo ideal de
NH4+NO
3- para o oacutetimo crescimento in vitro (SATO 1994)
Objetivou-se com este trabalho estudar os efeitos de
diferentes concentraccedilotildees de NH4NO
3 e KNO
3 do meio MS
no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos diretos de C
arabica L cv Rubi
MATERIAL E MEacuteTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos Vegetais do Departamento de
Agricultura da Universidade Federal de Lavras MG Foram
utilizados como explantes embriotildees de C arabica cv
Rubi provenientes da embriogecircnese somaacutetica direta Os
embriotildees somaacuteticos foram induzidos em meio MS
(MURASHIGE amp SKOOG 1962) com 50 dos sais
acrescido de 20 mg L-1 de GA3 6 mg L-1 de cinetina 8 mg
L-1 de ANA 100mg L-1 de caseiacutena hidrolisada e 400mg L-
1 de extrato de malte Os tubos de ensaio foram mantidos
durante 150 dias sob condiccedilotildees de obscuridade com
temperatura de 25 plusmn 1oC Os embriotildees somaacuteticos induzidos
nesse processo foram individualizados em tubos de
ensaio e mantidos durante 30 dias em meio MS
objetivando a homogeneizaccedilatildeo do material para a
realizaccedilatildeo deste experimento
No preparo do meio foram utilizadas soluccedilotildees-
estoque armazenadas em frascos de vidro escuro a
temperaturas em torno de 5degC Os tratamentos foram
constituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH4NO
3 (0 475
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 107
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
950 1425 e 1900 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3
(0 475 950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS
O meio foi solidificado com 5g L -1 de aacutegar e o pH
ajustado para 58 plusmn 01 utilizando NaOH 05 e 01 N ou HCl
05 N e 01 N e distribuiacutedo em tubos de ensaio cada um
recebendo 15 mL do mesmo Os tubos foram vedados com
tampas plaacutesticas transluacutecidas antes do processo de
autoclavagem a 121degC e 1 atm por 20 minutos Apoacutes o
resfriamento o meio foi levado agrave cacircmara de fluxo laminar
desinfestada com aacutelcool 70 (etanol) onde foi feita a
inoculaccedilatildeo dos explantes
Os tubos foram vedados com parafilme e mantidos
em sala de crescimento com irradiacircncia em torno de 32 igraveM
m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas com temperatura de 25 plusmn
1oC O delineamento experimental utilizado foi inteiramente
casualizado com quatro repeticcedilotildees e trecircs tubos por
parcela cada tubo contendo um explante
Aos 150 dias apoacutes a instalaccedilatildeo foram avaliadas as
variaacuteveis nuacutemero de folhas comprimento da parte aeacuterea e
peso da mateacuteria fresca das placircntulas Os valores observados
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia para dados
desbalanceados Utilizou-se o procedimento GLM
disponiacutevel no aplicativo computacional SASreg (SAS
INSTITUTE 1990)
Em situaccedilotildees em que a anaacutelise de variacircncia natildeo
confirmou a normalidade dos resiacuteduos para o comprimento
da parte aeacuterea e peso da mateacuteria fresca os dados sofreram
uma transformaccedilatildeo para garantir que essa pressuposiccedilatildeo
fosse atendida As transformaccedilotildees utilizadas foram x e5 1 02x respectivamente A variaacutevel nuacutemero de folhas
atendeu agraves pressuposiccedilotildees de normalidade A anaacutelise de
variacircncia do peso da mateacuteria fresca foi realizada por meio
do meacutetodo dos quadrados miacutenimos ponderados pelo
inverso das variacircncias de cada tratamento uma vez que
esses apresentaram heterogeneidade de variacircncias
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Houve efeito significativo das concentraccedilotildees de
NH4NO
3 e KNO
3 para o nuacutemero de folhas e peso da mateacuteria
fresca das placircntulas (Tabela 1) Observa-se que a interaccedilatildeo
entre os fatores mostrou-se significativa em relaccedilatildeo a todas
as caracteriacutesticas avaliadas a 5 de probabilidade pelo
teste F
Nuacutemero de folhas
Analisando-se as curvas de regressatildeo observa-
se na Figura 1 que houve formaccedilatildeo de maior nuacutemero
de folhas quando foram adicionados ao meio de cultura
1900 mg L-sup1 de KNO3
combinado com 12985 mg L-sup1 de
NH4NO
3 (meacutedia de 1163 folhas) Com a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 87879 mg L-sup1 de NH
4NO
3
pocircde-se observar a formaccedilatildeo meacutedia de 1001 folhas
Dessa forma como a diferenccedila eacute miacutenima justifica-se a
utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 com o objetivo de
reduccedilatildeo dos custos
TABELA 1 Anaacutelise de variacircncia dos dados relativos ao nuacutemero de folhas (NF) comprimento da parte aeacuterea (CPA) epeso da mateacuteria fresca (PMF) das placircntulas de Coffea arabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3
QM Fonte de variaccedilatildeo GL
NF CPA (cm) PMF (g)
NH4NO3 4 458337 01152 17450
KNO3 4 230014 00837 22117
NH4NO3 x KNO3 16 20447 01215 15139
Erro 135 91386 00584 05871
CV () 5162 2357 912
Significativo a 5 pelo teste F
REZENDE J C de et al108
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
FIGURA 1 Nuacutemero folhas de placircntulas de Coffea arabicacv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 combinadas com 0950 e 1900 mg L-sup1 de KNO
3
Contudo concentraccedilotildees acima de 87879 mg L-sup1 de
NH4NO
3 combinadas com 950 mg L-sup1 de NH
4NO
3 ou na
ausecircncia desse provocaram reduccedilatildeo no nuacutemero de folhas
possivelmente por toxidez causada pelo amocircnio devido agrave
sua concentraccedilatildeo mais elevada em relaccedilatildeo ao nitrato no
meio de cultura Quando o nitrogecircnio eacute fornecido somente
na forma de sais inorgacircnicos de amocircnio as ceacutelulas in vitro
apresentam sintomas de toxidez (GAMBORG amp SHYLUK
1970 YATAZAWA amp FURUHASHI 1968) demonstrando
assim a necessidade de combinaccedilatildeo dessas duas fontes
no meio de cultura
Segundo Raab amp Terry (1994) em virtude do grande
requerimento de energia fotoquiacutemica para a reduccedilatildeo
bioquiacutemica do nitrato era de se esperar que as plantas
crescessem melhor em meios com amocircnia do que em meios
com nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio no entanto
observou-se o inverso Esses mesmos autores apontam
como causa desse paradoxo o efluxo de iacuteons H+ que ocorre
devido agrave absorccedilatildeo do iacuteon amocircnio provocando acidificaccedilatildeo
do meio impedindo a absorccedilatildeo de nutrientes Segundo
Hashimoto et al (1992) a presenccedila de amocircnio in vitro
poderia acidificar o meio favorecendo a siacutentese de
carbamatos e tambeacutem a atividade de anidrase carbocircnica
Esses autores conseguiram diminuir o efeito toacutexico do
amocircnio apenas diminuindo a concentraccedilatildeo de nitrato de
amocircnio no meio MS
O nuacutemero de folhas obtidas na ausecircncia de KNO3
foi inferior quando comparado aos demais tratamentos (a
maior meacutedia observada foi 658 folhas na concentraccedilatildeo de
37626 mg L-sup1 de NH4NO
3) evidenciando assim a
importacircncia desse sal para o desenvolvimento de folhas
em placircntulas de C arabica cv Rubi Os resultados obtidos
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 109
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
concordam em parte com os obtidos por Ribeiro (2001)
trabalhando com embriotildees zigoacuteticos de C arabica que
recomenda a adiccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de NH4NO
3 e KNO
3 no
meio de cultura para comprimento da parte aeacuterea
Observa-se ainda que utilizando-se a concentraccedilatildeo
de 1425 mg L-sup1 de KNO3 haacute reduccedilatildeo no comprimento da
parte aeacuterea das placircntulas ateacute a concentraccedilatildeo de 42091 mg
L-sup1 de NH4NO
3 havendo a partir desse ponto incremento
no desenvolvimento da variaacutevel ateacute a concentraccedilatildeo de
149131 mg L-sup1 de KNO3 (132 cm dados transformados)
Esses resultados demonstram que as respostas de
interaccedilatildeo entre fontes de nitrogecircnio variam em funccedilatildeo das
concentraccedilotildees utilizadas
Na ausecircncia de NH4NO
3 em ambas as
concentraccedilotildees estudadas o comprimento da parte aeacuterea
foi inferior (09 e 097 cm respectivamente nas
concentraccedilotildees de 950 e 1425 mg L-sup1 de KNO3) evidenciando
mais uma vez a importacircncia desse sal no desenvolvimento
de embriotildees em C arabica cv Rubi
Peso da mateacuteria fresca
FIGURA 3
Peso da mateacuteria fresca de placircntulas de Carabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildeesde NH
4NO
3 combinadas com 0950 mg L-sup1 de KNO
3
6
65
7
75
8
85
9
95
10
105
0 4125 825 12375 1650NH4NO3 (mg L-1)
Peso
da
mat
eacuteria
fre
sca
(g)
Y KNO3 475 Y KNO3 1425 Y KNO3 1900 = ns Y KNO3 0 = 968811 - 006491X + 000061019X2 R2 = 09017 Y KNO3 950 = 800708 + 002278X 000022883X2 R2 =09053
Na ausecircncia de KNO3 houve decreacutescimo do peso
da mateacuteria fresca associado ao incremento das
concentraccedilotildees de NH4NO
3 ateacute a concentraccedilatildeo de 91775
mg L-sup1 de NH4NO
3 (Figura 3) observando-se aumento do
peso da mateacuteria fresca a partir deste ponto Para a
concentraccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 ocorreu aumento do
peso da mateacuteria fresca ateacute a concentraccedilatildeo de 100221 mg L-
sup1 de NH4NO
3 Poreacutem o maior valor foi registrado na
ausecircncia de ambos os sais estudados (976 g)
Da mesma forma Grossi (2000) trabalhando com
bromeacutelia observou que a menor concentraccedilatildeo de
nitrogecircnio promoveu maior produccedilatildeo de massa fresca
Kanashiro et al (2007) observou decreacutescimo linear na
massa fresca de folhas de bromeacutelia agrave medida que se
aumentou a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio (entre 75 e 120
mM) sendo que para cada mM de nitrogecircnio acrescido ao
meio houve um decreacutescimo de 00018 g na massa fresca
Provavelmente o cultivo em concentraccedilotildees maiores de
nitrogecircnio tenderia a diminuir a produccedilatildeo de massa fresca
como foi observado no presente experimento
CONCLUSOtildeES
Com base no crescimento da parte aeacuterea e na
formaccedilatildeo do maior nuacutemero de folhas a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de
NH4NO
3 eacute mais indicada para o desenvolvimento de
embriotildees somaacuteticos de Coffea arabica L Os resultados
indicam ainda que a ausecircncia de nitrogecircnio promove o
maior peso das placircntulas
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NORMAS PARA PUBLICACcedilAtildeO DE ARTIGOS E COMUNICACcedilOtildeES CIENTIacuteFICAS
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagationeacute editada semestralmente pela Editora da UniversidadeFederal de Lavras (Editora UFLA) publica artigoscientiacuteficos e comunicaccedilotildees cientiacuteficas da aacuterea de culturade tecidos de plantas elaborados por membros dacomunidade cientiacutefica nacional e internacional Natildeo eacutecobrada taxa para publicaccedilatildeo de trabalhos desde que umdos autores seja soacutecio e esteja em dia com a ABCTP(Associaccedilatildeo de Cultura de Cultura de Tecidos de Plantas)Eacute condiccedilatildeo fundamental que os artigoscomunicaccedilotildeessubmetidos agrave apreciaccedilatildeo da revista Plant Cell Culture ampMicropropagation natildeo foram e nem seratildeo publicadossimultaneamente em outro lugar Com a aceitaccedilatildeo do artigopara publicaccedilatildeo os editores adquirem amplos e exclusivosdireitos sobre o artigo para todas as liacutenguas e paiacuteses Apublicaccedilatildeo de artigoscomunicaccedilotildees dependeraacute daobservacircncia das Normas Editoriais dos pareceres do CorpoEditorial e da Comissatildeo ad hoc Todos os pareceres tecircmcaraacuteter sigiloso e imparcial e tanto os autores quanto osmembros do Corpo Editorial eou Comissatildeo ad hoc natildeoobtecircm informaccedilotildees identificadoras entre si
Os conceitos e afirmaccedilotildees contidos nos artigos ecomunicaccedilotildees seratildeo de inteira responsabilidade do(s)autor(es)
1 SUBMISSAtildeO
Cada trabalho deveraacute ter no maacuteximo 14 paacuteginas ejunto do mesmo deveraacute ser encaminhado ofiacutecio dirigido aoEditor Chefe da revista solicitando a publicaccedilatildeo do artigo
Esse ofiacutecio deveraacute conter o pedido de apreciaccedilatildeona revista ao editor chefe a declaraccedilatildeo de ser um trabalhooriginal e natildeo ter sido submetido a nenhuma outra revistaser assinado por todos os autores constar o endereccedilocompleto telefone e e-mail de todos Qualquer inclusatildeoexclusatildeo ou alteraccedilatildeo na ordem dos autores deveraacute sernotificada mediante ofiacutecio assinado por todos os autores(inclusive do autor excluiacutedo)
Originais quatro vias impressas e uma via em CDR comtexto e ilustraccedilotildees e graacuteficos Das 4 vias impressas apenas1 deve conter os nomes completos dos autores e rodapeacutena primeira paacuteginaProcessador de texto Word for Windows (version 98 2000XP ou 2003)Redigido em portuguecircs inglecircs ou espanholEspaccedilamento do texto Duplo Margens esquerda (3cm)direita (2cm) inferior e superiores (25cm) Cabeccedilalho eRodapeacute (25cm)Papel formato A4Fonte Times New Roman tamanho 12Nuacutemero de paacuteginas ateacute 14 paacuteginas numeradasconsecutivamente incluindo as ilustraccedilotildees
Tabelas devem fazer parte do corpo do artigo e serapresentadas no moacutedulo tabela do Word O tiacutetulo deveficar acimaGraacuteficos Figuras e Fotografias devem ser apresentadosem preto e branco niacutetidos e com contraste escaneadosinseridos no texto apoacutes a citaccedilatildeo dos mesmos e tambeacutemem um arquivo agrave parte salvos em extensatildeo tif ou jpg com resoluccedilatildeo de 300 dpi Os graacuteficos devem vir tambeacutemem excel com letra Times New Roman tamanho 10 semnegrito sem caixa de textos e agrupados em arquivo agraveparteSiacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitos emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker sem perda de suas formas originais
2 ESTRUTURA E ORGANIZACcedilAtildeO
21 O artigo cientiacutefico deve ser apresentado na seguintesequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfulas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumo
Index terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
INTRODUCcedilAtildeO
Deve apresentar uma visatildeo concisa do estado atualdo conhecimento sobre o assunto que o manuscritoaborda e enfatizar a relevacircncia do estudo sem constituir-se em extensa revisatildeo e na parte final os objetivos dapesquisa Deve incluir a revisatildeo de literatura
MATERIAL E MEacuteTODOS
Esta seccedilatildeo pode ser dividida em subtiacutetulosindicados em negrito
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Podem ser divididas em subseccedilotildees com subtiacutetulosconcisos e descritivos e conter tabelas e figuras
CONCLUSOtildeES
Finalizar com os resultados de acordo com osobjetivos do trabalho
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e naseccedilatildeo proacutepria
22 A comunicaccedilatildeo cientiacutefica deve ser apresentada naseguinte sequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfluas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumoIndex terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
Texto sem subdivisatildeo poreacutem com introduccedilatildeo material emeacutetodos resultados e discussatildeo (podendo conter tabelase graacuteficos e conclusatildeo subentendidas
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e na seccedilatildeoproacutepria
3 CASO O ARTIGO CONTENHA FOTOGRAFIASGRAacuteFICOS FIGURAS SIacuteMBOLOS E FOacuteRMULASESSAS DEVERAtildeO OBEDECER AgraveS SEGUINTESNORMAS
31 Fotografias deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpi
32 Figuras deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpiAs figuras deveratildeo ser elaboradas com letra Times NewRoman tamanho 10 sem negrito sem caixa de textos eagrupadas
33 Graacuteficos deveratildeo ser inseridos apoacutes citaccedilatildeo dosmesmos dentro do proacuteprio texto elaboradopreferencialmente em Excel com letra Times New Romantamanho 10 sem negrito sem caixa de textos e agrupadas
34 Siacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitas emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker (ex MathType Equation) sem perda de suasformas originais
OBS A formataccedilatildeo correta eacute parte imprescindiacutevel para queo trabalho seja devidamente protocolado Caso este natildeoesteja nas normas o mesmo seraacute recusado
4 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS as referecircnciasbibliograacuteficas devem ser citadas conforme a NBR60232002da ABNT
A exatidatildeo das referecircncias constantes da listagem e acorreta citaccedilatildeo no texto satildeo de responsabilidade do(s)autor(es) do artigo
41 Orientaccedilotildees gerais- Deve-se apresentar todos os autores do documentocientiacutefico (fonte)- O nome do perioacutedico deve ser descrito por extenso natildeodeve ser abreviado- Em todas as referecircncias deve-se apresentar o local depublicaccedilatildeo (cidade) a ser descrito no lugar adequado paracada tipo de documento- As referecircncias devem ser ordenadas alfabeticamente
42 Exemplificaccedilatildeo (tipos mais comuns)
ARTIGO DE PERIOacuteDICO
VIEIRA R F RESENDE M A V de Eacutepocas de plantio deervilha em Patos de Minas Uberaba e Janauacuteba MinasGerais Ciecircncia e Agrotecnologia Lavras v 24 n 1 p 74-80 janmar 2000
LIVRO
a) livro no todo
STEEL R G D TORRIE J H Principles andprocedures of statistics New York McGraw-Hill Bookl960 481 p
b) Parte de livro com autoria especiacutefica
FLEURY J A Anaacutelise ao niacutevel de empresa dos impactosda automaccedilatildeo sobre a organizaccedilatildeo da produccedilatildeo de trabalhoIn SOARES R M S M Gestatildeo da empresa Brasiacutelia IPEAIPLAN 1980 p 149-159
c) Parte de livro sem autoria especiacutefica
MARTIM L C T Nutriccedilatildeo de bovino de corte emconfinamento In ______ Confinamento de bovino decorte 2 ed Satildeo Paulo Nobel 1986 cap 3 p 29-89
DISSERTACcedilAtildeO E TESE
GONCcedilALVES R A Preservaccedilatildeo da qualidade tecnoloacutegicade trigo (Triticum aestivum L) e controle de Rhyzoperthadominica (F) durante o armazenamento em atmosferacontrolada com Co2 e N2 1997 52 f Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Ciecircncia dos Alimentos) Universidade Federal deLavras Lavras 1997
MATIOLI G P Influecircncia do leite proveniente de vacasmastiacuteticas no rendimento de queijo frescal 2000 55 pDissertaccedilatildeo (Mestrado em Ciecircncias dos Alimentos) -Universidade Federal de Lavras Lavras 2000
Nota A folha eacute composta de duas paacuteginas anverso everso Alguns trabalhos como teses e dissertaccedilotildees satildeoimpressos apenas no anverso e neste caso indica-se f(ABNT NBR60232002 p 18)
TRABALHOS DE CONGRESSO E OUTROS EVENTOS
SILVA J N M Possibilidades de produccedilatildeo sustentada demadeira em floresta densa de terra firme da Amazocircniabrasileira In CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO 61990 Campos do Jordatildeo Anais Campos do Jordatildeo SBSSBEF 1990 p 39-45
DOCUMENTOS ELETROcircNICOS
As obras consultadas online satildeo referenciadas conformenormas especiacuteficas para cada tipo de documento(monografia no todo e em parte trabalho apresentado emevento artigo de perioacutedico artigo de jornal etc)acrescidas de informaccedilotildees sobre o endereccedilo eletrocircnicoapresentado entre braquetes (lt gt) precedido da expressatildeo
Disponiacutevel em e da data de acesso ao documentoprecedida da expressatildeo Acesso em Nota Natildeo se recomenda referenciar material eletrocircnico decurta duraccedilatildeo nas redes (ABNT NBR60232000 p 4)Segundo padrotildees internacionais a divisatildeo de endereccediloeletrocircnico no fim da linha deve ocorrer sempre apoacutes barra ()
Monografia (acesso online)
a) livro no todo
TAKAHASHI T (Coord) Tecnologia em foco BrasiacuteliaSocinfoMCT 2000 90 p Disponiacutevel em lthttpwwwsocinfoorgbrgt Acesso em 22 ago 2000
b) parte de livro
TAKAHASHI T Mercado trabalho e oportunidades In______ Sociedade da informaccedilatildeo no Brasil livro verdeBrasiacutelia SocinfoMCT 2000 cap 2 p 13-24 Disponiacutevelem lthttpwwwsocinfogovbrgt Acesso em 22 ago 2000
c) Parte de congresso seminaacuterio etc
GIESBRECHT H O Avaliaccedilatildeo de desempenho deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica a experiecircncia deprojeto excelecircncia na pesquisa tecnoloacutegica InCONGRESSO ABIPTI 2000 Fortaleza Gestatildeo deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica Fortaleza Nutec 2000Disponiacutevel em lthttpwwwabiptiorgbrgt Acesso em01 dez 2000
d) Tese
SILVA E M Arbitrariedade do signo a liacutengua brasileirade sinais (LIBRAS) 1997 144 p Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Linguumliacutestica Aplicada e Estudo de Liacutengua) - PontifiacuteciaUniversidade Catoacutelica de Satildeo Paulo Satildeo Paulo 1997Disponiacutevel em lthttpwwwterracombrvirtualbooksfreebookportdid teseshtmgt Acesso em 28 nov 2000
Artigo de perioacutedico (acesso online)
RESENDE A M G Hipertexto tramas e trilhas de umconceito contemporacircneo Informaccedilatildeo e Sociedade Recifev 10 n 1 2000 Seccedilatildeo Educaccedilatildeo Disponiacutevel em lthttpwwwinformaccedilatildeoesociedadeufpbbrgt Acesso em 30 nov2000
CITACcedilAtildeO PELO SISTEMA ALFABEacuteTICO (AUTOR-DATA) (conforme ABNT NBR105202002)Dois autores - Steel amp Torrie (1960) ou (STEEL amp TORRIE1960)Trecircs ou mais autores - Valle et al (l945) ou (VALLE et al1945)Obs Quando forem citados dois autores de uma mesmaobra deve-se separaacute-los pelo sinal amp (comercial)
5 O EDITOR CHEFE NOTIFICARAacute O AUTOR DORECEBIMENTO DO ORIGINAL E POSTERIORMENTE
O INFORMARAacute SOBRE SUA PUBLICACcedilAtildeO OSARTIGOS QUE NECESSITAREM DE MODIFICACcedilOtildeESSERAtildeO DEVOLVIDOS AO AUTOR PARA A DEVIDAREVISAtildeO
6 OS ARTIGOS NAtildeO APROVADOS SERAtildeODEVOLVIDOS
7 OS ARTIGOS SERAtildeO PUBLICADOS EM ORDEMDE APROVACcedilAtildeO
8 O NAtildeO-CUMPRIMENTO DESSAS NORMASIMPLICARAacute NA DEVOLUCcedilAtildeO DO ARTIGO AOAUTOR
9 OS CASOS OMISSOS SERAtildeO RESOLVIDOS PELACOMISSAtildeO EDITORIAL
10 O ARTIGO DEVERAacute SER ENVIADO PARA
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepartamento de BiologiaSetor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 3037CEP 37200-000Lavras MG
INSTRUCTIONS FOR AUTHORS
Plant Cell Culture amp Micropropagation asemestral journal edited by Editora UFLA of theUniversidade Federal de Lavras publishes scientificarticles and communications in the area of plant tissueculture elaborated by researchers of the national andinternational scientific community One of the authors mustbe associated and have paid all charges required by theABCTP (Plant Tissue Culture Association) in order to betax free for publication in Plant Cell Culture ampMicropropagation Submission of a manuscript implies thatit is neither under consideration for publication elsewherenor has appeared previously in part or in whole Onacceptance for publication authors assign to the Editorsfull copyright of the manuscript in all languages andcountries Publications will depend on editorial rules andon the review of experts and ad hoc commission Reviewerand editorial opinions will be anonymously communicatedto authors
Concepts and affirmations included in articles andcommunications are of the entire responsibility of theauthors
1 SUBMISSION
The manuscript must present a maximum of 14pages At the time of submission a cover letter must besent with the manuscript copies to the Editor requestingpublication of the article This cover letter must be signedby all authors
and also contain the full addresstelephone number and e-mail of the authors Anyinclusion exclusion or alteration in the authors order mustbe notified and signed by all authors including the oneexcluded
Original Four copies and CD with text and illustrationsOnly one of the 4 printed copies must contain the fullnames of the authors and footnote in the first pageFormat Word for Windows (version 98 2000 XP ou 2003)Spacing of the text Double Margin on the left hand sideand 20 cm margin on the right hand side 25 cm upper andlower margin 25 cm for the heading and 25 cm for thefootnotePaper A4 formatSource Times New Roman size 12Number of pages up to 14 pages including the illustrationsTables Tables should be part of the body of the paper andthey must be presented in Word or Excel The title shouldbe above and be presented in the language in which thearticle was written and in English The vertical linesseparating the columns should not appearGraphsFiguresPhotographs must be presented in blackand white clear and with contrast scanned inserted in
the text after citation and also in a separate file (on thesame diskette as the article) saved in extension tif orjpg with resolution of 300 dpi The title should be below
and presented in the language in which the article waswritten and in EnglishSymbols and Chemical Formula must be presented usinga word processor that permits a format Page Maker
2 STRUCTURE AND ORGANIZATION
21 The article should be presented in the followingsequence
TITLE
In English language containing no more than 15 words incapital letters and bold
AUTHORS
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copies Footnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTshould be informative and condensed and should
explain the objectives material and methods results andconclusion of the work in a maximum of 250 words all writtenin one paragraphFor articles written in English the abstract should also bepresented in Portuguese
Key words minimum of three and maximum of five Theyshould not repeat words that are already in the title Thesemay include phrases as well as individual words and shouldbe separate by commasFor articles written in English the key-words should alsobe presented in Portuguese
INTRODUCTION
Should present a concise vision of the current level ofknowledge that has been achieved within the subject areathat the paper will discuss It should neither give anextensive review nor should it include details about theresults and discussion It should clearly indicate theobjectives of the research that was carried out
MATERIAL AND METHODS
This section can contain subdivisions with subtitles inbold print
RESULTS AND DISCUSSION
This section can have subsection which begins withconcise descriptive titles in bold print
CONCLUSIONS
Finishing agree of objectives of work
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
22 The Communication should be presented in thefollowing sequence
TITLE
Sufficiently clear conspicuous and complete withoutsuperfluous words It is recommended to initiate with theterm that represent the most important aspect with otherterms in decreasing of importance
TITLE IN PORTUGUESE
FULL NAME(S) OF THE AUTHOR(S)
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copiesFootnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTWritten continuously without paragraph It must
not exceed 250 words Index terms must be enclosed afterthe abstract using terms different from those used in thetitle and separated by comma
Index terms (3 to 5) must be described in capital and smallletters and express the content of the article
ABSTRACT AND INDEX TERMS IN PORTUGUESE
Text with no division but must include introductionmaterial and methods results and discussion andconclusion (it may include tables and figures)
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
3 PHOTOGRAPHS GRAPHS FIGURES SYMBOLSOR FORMULA CONTAINED IN THE ARTICLE SHOULDOBEY THE FOLLOWING RULES
31 Photographs must be presented in black and whiteclear and with contrast inserted in the text after their citationand also in a separate file (on the same diskette as thearticle) saved in extension TIFF
or JPEG withresolution of 300 dpi
32 Figures must be presented in black and white clearand with contrast inserted in the text after their citation andalso in a separate file (on the same diskette as the article)saved in extension TIFF
or JPEG with resolution of300 dpi They must be elaborated using Times New Romanfont size 10 without bold without text box and arranged
33 Graphs must be inserted in the text after their citationelaborated preferentially in Excel using Times New Romanfont size 10 without bold
34 Symbols and Chemical Formula must be presentedusing a word processor that permits a format for Page Maker(ex MathType Equation) without loss of its original form
4 REFERENCES references must be cited according toNBR60232002 of ABNT All references and their correctcitation in the text are of the entire responsibility of theauthor(s)
5 THE BRAZILIAN ASSOCIATION OF PLANT TISSUECULTURE (ABCTP) WILL INFORM THE AUTHOR THERECEIPT OF THE ORIGINAL MANUSCRIPT ANDEVENTUALLY IT WILL ALSO SEND INFORMATIONREGARDING ITS PUBLICATION MANUSCRIPTSTHAT REQUIRE MODIFICATIONS WILL BERETURNED TO THE AUTHOR FOR THE RESPECTIVEREVISION ANDCORRECTIONS
6 MANUSCRIPTS NOT APPROVED WON T BERETURNED TO THE AUTHOR
7 ARTICLES WILL BE PUBLISHED ACCORDING TOTHE ORDER OF RECEIPT AND APPROVAL
8 IF ANY OF THESE RULES ARE NOT ATTENDED THEMANUSCRIPT WILL BE RETURNED TO THE AUTHOR
9 THE NEGLECTFUL CASES WILL BE SOLVED BYTHE EDITORIAL COMMITTEE
10 MANUSCRIPTS SHOULD BE SENT TO THEFOLLOWING ADDRESS
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepto de Biologia - Setor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 303737200-000 Lavras MG BRAZIL
AZEVEDO B M de et al56
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
combinando alta produtividade com maior qualidade
garantindo ao agricultor uma colheita satisfatoacuteria e
reduzindo ao maacuteximo as perdas por danos proporcionados
por variaccedilotildees climaacuteticas adversas (GONDIM et al 2004)
De acordo com Terceiro Neto et al (2004) uma etapa
importante na produccedilatildeo de flores e plantas ornamentais
estaacute relacionada agrave utilizaccedilatildeo de mudas de qualidade Nesse
contexto a produccedilatildeo de mudas atraveacutes da
micropropagaccedilatildeo surge como uma alternativa viaacutevel para
obtenccedilatildeo de mudas em escala comercial com alta qualidade
geneacutetica e fitossanitaacuteria em um curto espaccedilo de tempo
atendendo dessa forma agraves necessidades dos produtores
Dentre as etapas da micropropagaccedilatildeo pode-se destacar a
aclimatizaccedilatildeo que eacute a fase mais criacutetica e importante
A irrigaccedilatildeo eacute uma praacutetica de suma importacircncia no
processo de aclimatizaccedilatildeo jaacute que a aacutegua eacute um dos fatores
que mais limitam a produccedilatildeo das plantas Seu manejo ou
seja a quantidade de aacutegua e sua frequumlecircncia de aplicaccedilatildeo eacute
um fator fundamental para o estabelecimento e o adequado
desenvolvimento das mudas micropropagadas Para se
alcanccedilar todos os objetivos da praacutetica de irrigaccedilatildeo que
englobam a maximizaccedilatildeo da produccedilatildeo racionalizaccedilatildeo do
uso da matildeo-de-obra energia aacutegua e fertilizante e a
aplicaccedilatildeo correta da aacutegua eacute imprescindiacutevel adotar um
correto manejo desse sistema (PEREIRA et al 1997)
Para Pieter et al (2007) os efeitos de aplicaccedilotildees
excessivas ou deficitaacuterias satildeo irreversiacuteveis e variam de
acordo com a intensidade e tempo de duraccedilatildeo do
procedimento imposto Nesses casos os processos
fisioloacutegicos da planta relacionados ao crescimento satildeo
afetados e sob condiccedilotildees severas o deacuteficit pode provocar
a murcha permanente do vegetal Conforme a Embrapa
(2007) em regiotildees de calor intenso com inverno ameno
normalmente a exigecircncia das mudas por aacutegua em qualquer
fase de desenvolvimento eacute maior que em regiotildees de clima
temperado Por outro lado alguns tipos de substrato por
terem menor capacidade de retenccedilatildeo de aacutegua exigem que
se aplique mais aacutegua a cada irrigaccedilatildeo ou que se aumente a
frequumlecircncia das mesmas Eacute recomendaacutevel que as lacircminas
sejam aplicadas nas primeiras horas da manhatilde e ao
entardecer uma vez que irrigaccedilatildeo nas horas mais quentes
pode danificar as mudas principalmente quando
fertirrigadas (CESP 2000)
Para Bernardo et al (2005) eacute necessaacuterio conhecer o
comportamento da cultura em funccedilatildeo das diferentes
quantidades de aacutegua fornecidas e identificar as fases de
desenvolvimento de maior consumo de aacutegua e os periacuteodos
criacuteticos quando a falta ou o excesso provocaria quedas de
produccedilatildeo Objetivou-se no presente trabalho avaliar o
efeito de lacircminas de irrigaccedilatildeo sobre o desenvolvimento de
mudas micropropagadas de helicocircnia (Heliconia lingulata
Ruiz amp Pav) em fase de aclimatizaccedilatildeo em ambiente
protegido
MATERIAL E MEacuteTODOS
O presente trabalho foi conduzido em um ambiente
protegido pertencente agrave Embrapa Agroinduacutestria Tropical
no periacuteodo de fevereiro a abril de 2006 A aacuterea estaacute situada
no municiacutepio de Fortaleza Cearaacute com as coordenadas
geograacuteficas correspondentes agrave 3ordm44 S 38ordm33 W e 195 m
de altitude De acordo com a classificaccedilatildeo climaacutetica de
Koppen o clima da regiatildeo eacute do tipo Aw caracterizado
como clima tropical chuvoso de savana tropical com a
eacutepoca mais seca no inverno e maacuteximo de chuvas no veratildeo-
outono
O tuacutenel alto de cultivo forccedilado de formato
semicircular e orientaccedilatildeo leste-oeste foi instalado com as
seguintes dimensotildees 45 m de comprimento 5 m de largura
e 2 m de altura comportando aproximadamente uma aacuterea
de 225 msup2 e um volume de 357 m3 Toda a sua estrutura foi
completamente coberto por uma tela de sombreamento
para reduzir 50 da luminosidade
O sistema de irrigaccedilatildeo empregado foi do tipo
microaspersatildeo suspenso sendo constituiacutedo por um
conjunto motobomba uma linha principal uma linha de
derivaccedilatildeo e uma linha lateral de 10 m com emissores
espaccedilados de 24 m e a uma altura de 05 m das bandejas
Os microaspersores foram do tipo nebulizador modelo
Tietze com bocal violeta em posiccedilatildeo invertida a vazatildeo do
emissor era de 43 l h-1 na pressatildeo de 30 kgf cm-2
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 57
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
As mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata)
utilizadas nesse experimento foram obtidas atraveacutes do
processo de micropropagaccedilatildeo realizado no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos e Geneacutetica Vegetal da Embrapa
Agroinduacutestria Tropical Na ocasiatildeo do plantio as mudas
apresentavam-se completamente enraizadas e com alturas
variando de 26 a 35 cm
As plantas provenientes do material in vitro foram
retiradas dos frascos e suas raiacutezes lavadas em aacutegua
corrente para a retirada do excesso do meio de cultura
Apoacutes a lavagem as mudas foram colocadas em bandejas e
suas raiacutezes podadas com o auxiacutelio de uma tesoura com o
objetivo de uniformizar o material facilitar o plantio e
estimular o desenvolvimento de um sistema radicular mais
funcional
As mudas foram transplantadas para tubetes de
capacidade volumeacutetrica de 180 cm3 contendo o substrato
formado pela mistura poacute-de-coco seco + huacutemus de
minhoca + solo (PCS+H+S) na proporccedilatildeo de 111
misturado no Laboratoacuterio de Solos da Embrapa e sem
fornecimento de fertilizantes durante o periacuteodo
experimental Para promover o completo umedecimento
do substrato e aumentar a umidade relativa do ambiente
momentos antes da transferecircncia das mudas para os
tubetes o sistema de irrigaccedilatildeo foi acionado
proporcionando assim um ambiente favoraacutevel ao
estabelecimento das mudas Com os recipientes em seus
devidos lugares as mudas foram acondicionadas e
levadas em bandejas ateacute o tuacutenel alto de cultivo forccedilado
iniciando a etapa de plantio As mudas foram inseridas
numa profundidade meacutedia de 5 cm de forma que as raiacutezes
e a parte inicial do caule ficaram enterradas As mudas
foram transferidas para os respectivos substratos no dia
3 de fevereiro de 2006
Para promover melhores condiccedilotildees para o
estabelecimento das mudas do primeiro ao quadrageacutesimo
quinto dia apoacutes o transplantio (DAT) essas receberam
uma irrigaccedilatildeo padratildeo com a aplicaccedilatildeo de uma lacircmina
correspondente a 3 mm de aacutegua parcelada duas vezes ao
dia sendo uma aplicaccedilatildeo pela manhatilde iniciando-se
aproximadamente agraves 9 h e a outra agrave tarde a partir das 16 h
A partir do 45ordm DAT foi adotada a diferenciaccedilatildeo das lacircminas
de irrigaccedilatildeo
O delineamento experimental foi em blocos
casualizados composto por quatro tratamentos e cinco
repeticcedilotildees constituiacutedas por cinco fileiras verticais com
cinco plantas cada totalizando 25 plantas por tratamento
num total de 100 plantas por experimento Os tratamentos
consistiram de quatro niacuteveis de irrigaccedilatildeo equivalentes agraves
lacircminas de 10 (L1) 20 (L
2) 30 (L
3) e 40 (L
4) miliacutemetros de
aacutegua tambeacutem parcelada em duas aplicaccedilotildees diaacuterias agraves 9 h
e agraves 16h
Os dados foram coletados em duas ocasiotildees apoacutes
a diferenciaccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo A primeira coleta
de dados ocorreu em 04 de abril aos 60 dias apoacutes o
transplantio (DAT) e a segunda em 19 de abril (aos 75
DAT) As variaacuteveis analisadas foram nuacutemero de folhas
(NF) altura da planta (AP) e diacircmetro do caule (DC) O
nuacutemero de folhas foi contado visualmente em todas as
mudas transplantadas Todas as folhas foram consideradas
na contagem exceto as totalmente secas A altura da planta
foi medida a partir da base ateacute a abertura das folhas por
meio de um escaliacutemetro graduado em centiacutemetros
subdividido em miliacutemetros O diacircmetro do caule foi
mensurado com o auxiacutelio de um paquiacutemetro digital
graduado em centiacutemetros considerando a base do caule
como padratildeo de contagem
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos aplicativos Microsoft Office Excel e SISVAR
versatildeo 46 (FERREIRA 2003)
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os valores meacutedios mensais de temperatura do ar
umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidade
do vento a 2 m de altura registrados durante o experimento
pela estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade
Federal do Cearaacute (UFC) encontram-se na Tabela 1 cuja
temperatura meacutedia do periacuteodo foi de 23 ordmC e umidade relativa
meacutedia de 93 caracterizando um periacuteodo de temperaturas
amenas
AZEVEDO B M de et al58
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
TABELA 1 Valores meacutedios mensais de temperatura do ar umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidadedo vento a 2m de altura Fortaleza-CE 2006
Mecircs Temperatura (ordmC) U R () Rad solar global (W m-2) Vel do vento (m s-1)
Fevereiro 23 95 1329 173
Marccedilo 24 84 1291 125
Abril 23 99 1162 094
Fonte Estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade Federal do Cearaacute (UFC)
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Tanto o deacuteficit quanto o excesso hiacutedrico afetaram o
crescimento das mudas Isso pode ter ocorrido pelo fato
da deficiecircncia hiacutedrica ocasionar o fechamento dos
estocircmatos diminuindo a concentraccedilatildeo intracelular de CO2
e consequumlentemente gerando decreacutescimo na assimilaccedilatildeo
do mesmo (BERNARDO et al 2005) Jaacute o excesso hiacutedrico
ocasiona a falta de oxigecircnio que provoca a reduccedilatildeo da
fotossiacutentese e prejudica a conversatildeo da mateacuteria orgacircnica
pelos microorganismos em formas soluacuteveis que a planta
possa reutilizar Esses fatores podem proporcionar um
TABELA 2 Anaacutelise de variacircncia das caracteriacutesticas de desenvolvimento altura da planta (AP) diacircmetro do caule(DC) e nuacutemero de folhas (NF) de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das laminas aplicadas aos 60e 75 DAT
(ns) natildeo significativo significativo a 5 de probabilidade pelo teste F
Quadrado meacutedio Variaacutevel FV GL
60 DAT 75 DAT
Bloco 4 03966ns 02946ns
Tratamento 3 23675 31348 AP
Resiacuteduo 12 03593 06279
Bloco 4 06407ns 02754ns
Tratamento 3 16645 41102 DC
Resiacuteduo 12 06222 06728
Bloco 4 04377 01829ns
Tratamento 3 03421 05204 NF
Resiacuteduo 12 0773 01081
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 59
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
menor crescimento das plantas devido agrave diminuiccedilatildeo da
eficiecircncia de transformaccedilatildeo de fotoassimilados nessas
condiccedilotildees (REGO et al 2004)
A anaacutelise de regressatildeo indica que o modelo que
melhor se ajustou agrave relaccedilatildeo altura de planta em funccedilatildeo da
lacircmina de irrigaccedilatildeo aos 60 e 75 DAT foi o polinomial
quadraacutetico apresentando valores para R2 de 0997 e 0966
respectivamente (Figuras 1 e 2) Observa-se que aos 60 e 75
DAT a altura da planta aumentou com a lacircmina aplicada ateacute
FIGURA 1 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 60 DATFortaleza-CE 2005 (ns natildeo significativo pelo teste F significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
FIGURA 2 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 75 DATFortaleza-CE 2005 (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
um ponto maacuteximo de 247 e 250 mm dia-1 respectivamente
representando a lacircmina que proporcionou maior
desenvolvimento das mudas em relaccedilatildeo agrave altura da planta
sendo obtida 896 e 1012 cm respectivamente Lacircminas acima
desse valor causaram reduccedilatildeo no crescimento
possivelmente devido ao excesso de aacutegua
Soares et al (1998) salientam que a aacutegua em excesso
proporciona aumentos nos custo de produccedilatildeo e do risco
de lixiviaccedilatildeo da aacutegua e dos nutrientes nela diluiacutedos o que
AP = -05934LI2 + 29273LI + 53519R2 = 0997
700
740
780
820
860
900
940
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1)
Altu
ra d
a pl
anta
(cm
)
AP = -06728L2 + 33294L + 59869
R2 = 0966
80
84
88
92
96
100
104
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Alt
ura
da p
lant
a (c
m)
AZEVEDO B M de et al60
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
pode prejudicar o desenvolvimento radicular Aleacutem disso
o excesso de aacutegua compromete os processos de
fotossiacutentese e respiraccedilatildeo os quais envolvem a utilizaccedilatildeo
de determinadas concentraccedilotildees de oxigecircnio (RAVEN et
al 2001) Jaacute em casos de deacuteficit hiacutedrico podem ocorrer
problemas de ordem fisioloacutegica ou seja afetar
negativamente o desenvolvimento das plantas
Em ambos os periacuteodos avaliados observou-se que
as lacircminas aplicadas influenciaram o diacircmetro de caule
das mudas de helicocircnia com valores meacutedios de 97 e 103
cm aos 60 e 75 DAT respectivamente A anaacutelise de
regressatildeo indicou que aos 60 DAT o modelo polinomial
quadraacutetico foi o que melhor representou o diacircmetro do
caule em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo com R2 de 0746
(Figura 3) O maacuteximo valor do diacircmetro de caule (1022
cm) calculado por derivaccedilatildeo da curva de ajuste foi obtido
aplicando-se uma lacircmina de 264 mm dia-1 A partir dessa
lacircmina houve uma diminuiccedilatildeo no diacircmetro de caule
ocasionado possivelmente pelo excesso de aacutegua Aos
75 DAT o modelo matemaacutetico ajustado para relacionar o
diacircmetro de caule em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo
apresentou coeficiente de determinaccedilatildeo (R2) muito baixo
natildeo sendo representativo
Modelos polinomiais quadraacuteticos para explicar o
efeito da lacircmina de irrigaccedilatildeo sobre a altura e diacircmetro de
caule tambeacutem foram obtidos por Pieter et al (2007) na
produccedilatildeo da flor da fortuna por Lopes et al (2005) em
mudas de Eucalyptus grandis W Hill por Pereira et al
(2003) e Recircgo et al (2004) na cultura do crisacircntemo
A anaacutelise de variacircncia (Tabela2) indicou que o
nuacutemero de folhas nas mudas de helicocircnia foi influenciado
pelas lacircminas de irrigaccedilatildeo nas duas eacutepocas analisadas (60
e 75 DAT) com valores meacutedios de 325 e 345 folhas nas
respectivas eacutepocas poreacutem o modelo matemaacutetico para
representar essa relaccedilatildeo apresentou coeficiente de
determinaccedilatildeo (R2) muito baixo e natildeo foi estatisticamente
significativo
As anaacutelises mostraram que aos 60 e 75 DAT a
lacircmina de irrigaccedilatildeo ideal que proporcionou o melhor
desenvolvimento das plantas encontra-se na faixa
compreendida de 247 a 264 mm dia-1 Valores
semelhantes foram obtidos por Gomes et al (2006) que
verificaram que a taxa de evapotranspiraccedilatildeo meacutedia da
Heliconia psittacorum L f x HSpatho-circinada
Aristeg cultivada em ambiente protegido foi de 22 mm
dia-1
FIGURA 3 Diacircmetro de caule de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) aos 60 DAT em funccedilatildeo das lacircminas deirrigaccedilatildeo Fortaleza CE (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
DC= -04111L2
+ 21726L + 73492
R2 = 0746
80
85
90
95
100
105
110
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Diacirc
met
ro d
o ca
ule(
cm)
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 61
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
CONCLUSOtildeES
As lacircminas de irrigaccedilatildeo influenciaram as
caracteriacutesticas de desenvolvimento avaliadas aos 60 e 75
DAT
A altura de planta e o diacircmetro de caule
apresentaram resposta quadraacutetica em relaccedilatildeo agraves lacircminas
aplicadas
Nas condiccedilotildees em que foi desenvolvido este
trabalho para a aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas
de helicocircnia recomenda-se irrigar com 25 mm dia-1 com o
intuito de se obter mudas mais vigorosas para serem
transplantadas para condiccedilotildees de campo
AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pela concessatildeo da bolsa de estudo
Agrave Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaacuteria
CNPAT pela oportunidade de realizaccedilatildeo desta pesquisa
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ALEXANDRE R S et al62
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
(Recebido em 4 de marccedilo de 2008 e aprovado em 1 de setembro de 2008)
IN VITRO ORGANOGENESIS OF PASSION FRUIT (PASSIFLORAEDULIS SIMS F FLAVICARPA DEG) AFFECTED BYIRRADIANCE SUCROSE AND EXPLANT POSITION
ORGANOGEcircNESE IN VITRO DO MARACUJAZEIRO (PASSIFLORA EDULIS SIMSF FLAVICARPA DEGENER) AFETADO POR IRRADIAcircNCIA SACAROSE E
POSICcedilAtildeO DOS EXPLANTES
RODRIGO SOBREIRA ALEXANDRE1 FLAacuteVIO ALENCAR D
ARAUacuteJO COUTO1 JOSEacute MARIA MOREIRA DIAS1WAGNER CAMPOS OTONI2 RITA DE CAacuteSSIA MENDES3 PAULO ROBERTO CECON4
1Professor Doutor Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG rsalexandreclick21combr2Doutor Departamento de Biologia Vegetal Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG3Teacutecnica em Quiacutemica Graduanda em Agronomia Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
4Doutor Departamento de Informaacutetica Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
ABSTRACTThe culture of the tissues has helped considerably the
Passiflora genus development achieving successfully themorphogenic responses in different in vitro explants Theobjective this work was to assess the in vitro morphogenicresponses of hypocotyl segments of passion fruit collected from5 positions (apical sub-apical median sub-basal and basalnamely 1-5 respectively) along the hypocotyls axis and culturedin medium with different concentrations of sucrose and exposedto irradiance levels The experiments were performed as acompletely randomized blocks design with 15 repetitions in 4 x4 x 5 factorial scheme (irradiance x sucrose x explant positions)totalizing 80 treatments on which every experimental parcelwas comprised of a flask containing five hypocotyls Thehypocotyl segment from positions 1 and 3 at their extremedistal ends cultured onto medium of culture with 30 g L-1 sucroseand under 100 micromol m-2 s-1 irradiance enable the greatest numberof buds and shoots differentiated The distal extremity from thesegments of hypocotyl farthest from the cotyledonary nodes(position 1) cultivated in 20 g L-1 sucrose and exposed to 50micromol m-2 s-1 irradiance result in the best condition for shootdevelopment
Index terms Passiflora edulis f flavicarpa in vitro propagationyellow passion fruit
RESUMOA cultura de tecidos tem auxiliado no desenvolvimento
do gecircnero Passiflora alcanccedilando sucesso morfogecircnico emdiferentes explantes in vitro Objetivou-se neste trabalho avaliarrespostas morfogecircnicas in vitro de segmentos de hipocoacutetilo domaracujazeiro coletados de 5 posiccedilotildees (apical sub-apicalmediana sub-basal e basal isto eacute 1-5 respectivamente) ao longodo eixo dos hipocoacutetilos e cultivados em meios com diferentesconcentraccedilotildees de sacarose e expostos a niacuteveis de irradiacircncia Oexperimento foi instalado em blocos casualizados com 15
repeticcedilotildees em esquema fatorial 4 x 4 x 5 (irradiacircncia x sacarose xposiccedilatildeo dos explantes) totalizando 80 tratamentos nos quaistoda parcela experimental foi constituiacuteda de um frasco contendocinco hipocoacutetilos As posiccedilotildees 1 e 3 no extremo distal dossegmentos de hipocoacutetilo cultivados em meio de cultura com 30 gL-1 de sacarose e sob 100 micromol m-2 s-1 de irradiacircncia proporcionamaior nuacutemero de brotos e brotos diferenciados A extremidadedistal dos segmentos de hipocoacutetilo extraiacutedos mais distantes donoacute cotiledonar (posiccedilatildeo 1) cultivados em 20 g L-1 de sacarose eexpostos agrave irradiacircncia de 50 micromol m-2 s-1 resulta na melhorcondiccedilatildeo para o desenvolvimento do broto
Termos para indexaccedilatildeo Passiflora edulis f flavicarpapropagaccedilatildeo in vitro maracujazeiro amarelo
INTRODUCTION
The genus of Passiflora was originated at South
America and comprises more than 580 species most of them
belonging to the Tropical America mainly from Brazil
(OLIVEIRA 1987) Among them the most commercially used
is the passion fruit plant P edulis Sims f flavicarpa Deg
The culture of the tissue has been reaching with
the Passiflora genus answers satisfactory morphogenic in
different in vitro explants (BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1993 1994 MORAN-ROBLES 1979 SCORZA
amp JANICK 1980)
The explant morphogenic capability has
relationship with the polarity effect such factor is
responsible for the shoot emergence Several studies were
researched to assess the effect of the position of the
In vitro organogenesis of passion fruit 63
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
explants extracted from the hypocotyl and roots of Citrus
plantlets during the shoot-bud proliferation (BURGER amp
HACKETT 1986 COSTA et al 2004 DIAS 1998
GARCIA-LUIS et al 1999) as well as the effect of the
polarity in the formation the buds and shoots
(McCLELLAND amp SMITH 1990 YAE et al 1987)
In the in vitro organogenesis of plants of the genus
Passiflora several factors influence among them among
them the irradiance for which different types of explants
were spared for the essays 58 micromol m-2 s-1 in internodes
(MORAN-ROBLES 1979) 20 micromol m-2 s-1 in mesophyll-
derived protoplasts (OTONI et al 1995) 30 or 23 micromol m-
2 s-1 in leaf (KAWATA et al 1995 APPEZZATO-DA-
GLOacuteRIA et al 1999 respectively) 50 micromol m-2 s-1 in
endosperm (MOHAMED et al 1996) 80 30 or 24 micromol m-
2 s-1 in shoot cultures (FARIA amp SEGURA 1997
KURIYAMA et al 1998 BARBOSA et al 2001
respectively) 20-55 micromol m-2 s-1 in cotyledons (HALL et
al 2000) 60 or 54 micromol m-2 s-1 in hipocotyl (COUCEIRO
2002 FELISMINO 2005 respectively) Although different
irradiances have been studied in these works in none of
them the effect of difference irradiances was studied during
the in vitro organogenic process of passion fruit plant
Other important factor for the in vitro
organogenesis is the source of carbon The in vitro
organogenesis works affirm that sucrose has been the most
employed source of carbon in the culture for Passiflora
(APPEZZATO-DA-GLOacuteRIA et al 1999 HALL et al 2000)
its concentration varies from 10 to 30 g L-1
The present work aimed to evaluate the in vitro
morphogenic responses of hypocotyledonary explants of
passion fruit plants throughout the use of different levels
of irradiance sucrose concentration and positions of the
segments of hypocotyls derived from in vitro germinated
plantlets
MATERIALS AND METHODS
Axenic and vigorous etiolated plantlets were
obtained from in vitro germinated seeds and used as
explants sources
In vitro-grown seedlings (25-30 days-old) were
transversally cut into 1-12 cm long were cultured on
different conditions of incubation The explants were
cultured in 300 mL glass flasks (Santa Marina Satildeo Paulo
Brazil) containing 30 mL aliquots of MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) medium salts 100 mg L-1 mio-inositol 10
mg L-1 6-benzylaminopurine (BAP) vitamins of White
(1951) and 80 g L-1 of agar (Isofarreg Brazil) The medium
pH was adjusted to 57 plusmn 01 before the addition of agar
Several concentrations of sucrose (0 10 20 or 30 g L-1)
were added to this medium The culture flasks were sealed
with polypropylene lids and the medium was autoclaved
at 121ordmC 15 kgf cm-2 during 20 minutes
The segments of hypocotyls were cut in five
segments numbered from 1 to 5 follows 1 basal the first
segment adjacent to the root collar 2 sub-apical the
second segment adjacent to the hypocotyl root 3 median
the central segment in relation to the hypocotyl region 4
sub-apical the second segment that is adjacent to the
cotyledonary node 5 - apical the first segment that is
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
Axenic plantlets Segments of hypocotyls in the
medium of culture
DE
PE
FIGURE 1 The segments of hypocotyls numbered from1 to 5 were characterized as follows 1 basal the firstsegment adjacent to the root collar 2 sub-apical thesecond segment adjacent to the hypocotyl root 3 median the central segment in relation to the hypocotylregion 4 sub-apical the second segment that is adjacentto the cotyledonary node 5 - apical the first segment thatis adjacent to the cotyledonary node () ED = distalextremity EP = proximal extremity
ALEXANDRE R S et al64
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
adjacent to the cotyledonary node (Figure 1) In this order
the five hypocotyl explants were placed horizontally on
the media maintaining the proximal extremity towards the
wall of the flask and having the distal extremity facing the
centre of the flask
The flasks were distributed 5 cm far from each other
on the shelves at the growth room to avoid shadowiness
at these flasks The explants were kept at the temperature
of 27 plusmn 2ordmC photoperiod of 168-h lightdark regime and
irradiances of 25 50 100 and 150 micromol m-2 s-1
The irradiance levels were provided by the
utilization of 40 W daylight fluorescent light tubes (Osramreg
Brazil) as follows I - 25 micromol m-2 s-1 (1 light on without
on without dislocating the luminous panel) III - 100 micromol
m-2 s-1 (4 lights on setting the luminous panel at 20 cm
from the shelf surface) IV - 150 micromol m-2 s-1 (5 lights on
setting the luminous panel at 16 cm from the shelf surface)
Copper strings were used to support the fluorescent
incandescent lamps
After 45 days of incubation regeneration frequencies
and number of shoots per explant were assessed which
were formed at the distal and proximal ends The
organogenesis was assessed regarding shoot lengths from
the evaluated positions at the proximal and distal ends
The experiment was performed under complete
randomized blocks design with 15 replicates in a 4 x 4 x 5
factorial scheme (irradiance levels 25 50 100 and 150 igravemol
m-2 s-1 x sucrose concentrations 0 10 20 and 30 g L-1 x
position of the explants at the hypocotyl 1 2 3 4 and 5)
totalizing 80 treatments being the experiment plot
comprised of a flask containing five segments of
hypocotyl Considering the three factors studied were made
by analysis of test average (Tukey) and regression to
concentrations of sucrose and levels of irradiance The
experiments were repeated at least once
RESULTS AND DISCUSSION
In vitro organogenesis at the distal extremity The
differentiation of buds and shoots as influenced by
irradiance levels and distinct positions of explants along
the hypocotyls axis and the mean values and the standard
deviation of the total number of buds and shoots formed
at the distal extremity are shown in figures 2 and 3
respectively
Independently from the other factors at the medium
without sucrose there was no morphogenic response in
the explants (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The number of structures formed at the distal
extremity reached the highest means when there was added
30 g L-1 sucrose to the medium under 100 micromol m-2 s-1
irradiance at the positions 1 and 3 (Figure 3a) Considering
the means of the five explant positions an average of 592
structures per explant was obtained Similarly Couceiro
(2002) has obtained 590 structures per explant at the distal
extremity when cultivating them horizontally under 60 micromol
m-2 s-1 of irradiance in MS medium containing 50 mg L-1 of
BAP and 30 g L-1 of sucrose Garcia-Luis et al (1999) have
shown in Citrange Troyer that despite the explants being
horizontally placed on the medium surface there was an
additional effect of polarity evidenced by the larger number
of shoots differentiated at the apical extremity and the
distance among the cotyledonary node has affected the
morphogenesis These results confirmed the studies of
Ziv et al (1970) and Fari amp Czako (1981) evidencing that
normally in stem and root sections the shoot-buds are
formed at the distal extremity and the roots at the proximal
extremity In the present work structures formed at both
explant extremities but in a higher degree at the distal
extremity
The largest value found for the average length of
the shoot a was 364 mm for the explants that were extracted
farthest from the cotyledonary node (position 1) and
cultured in medium containing 20 g L-1 of sucrose and
submitted to 50 micromol m-2 s-1 of irradiance (Figure 4a)
However in Passiflora actinia the inclusion of auxins to
the medium favoured the development of the shoot-buds
that consequently presented larger lengths when the
hypocotyl segments were cultivated in MS medium
containing 001 mg L-1 de IBA (KOCH et al 2001)
In vitro organogenesis of passion fruit 65
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
In vitro organogenesis at the proximal extremity
The mean values and the standard deviation of the total
number of buds and shoots formed at the proximal extremity
of the explants are presented in Figure 3b Likewise to the
distal extremity the formation of buds and shoots did not
happen when the explants were cultured in medium without
sucrose (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The differentiation and development of the buds
and shoots at the proximal extremity reached the highest
FIGURE 2 In vitro organogenesis in hypocotyl segments that are characterized by the positions that variesfrom 1 to 5 under effect of different irradiance levels A 25 micromol m-2 s-1 B 50 micromol m-2 s-1 C 100 micromol m-2 s-1 andD 150 micromol m-2 s-1 and sucrose concentrations (a 0 b 10 c 20 d 30 g L-1) for 45 days
A 1
2
3
4
5
a
1
2
3
4
5
b 1
2
3
4
5
c 1
2
3
4
5
d
B
a
b
c
d
C
a
b
c
d
D
a
b
c
d
Distal extremity
Proximal extremity
averages (35) at 25 micromol m-2 s-1 of irradiance in MS medium
containing 20 g L-1 sucrose for explants derived from the
position 4 (Figure 3b) Concurrently the work by Baccarin
(1988) pointed out the best bud and shoot proliferation in
explants from the regions closer to the cotyledonary nodes
The presence of BAP in the medium was essential to
the organogenic process as observed in works with Passiflora
spp (BECERRA et al 2004 BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1994 FERNANDO 2005 HALL et al 2000)
ALEXANDRE R S et al66
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Position 1
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 2
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 3
0
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Sucrose
(g L-1)
a
b
FIGURE 3 Mean values and standard deviation of the total number of structures (buds and shoots) formed at thedistal (a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
In vitro organogenesis of passion fruit 67
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
FIGURE 4 Mean values and standard deviation of the lengths of structures (buds and shoots) formed at the distal(a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
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Com
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)
Sucrose
(g L-1)
a
b
ALEXANDRE R S et al68
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Independently from the irradiance levels different
sucrose concentrations and explant positions at the
hypocotyl the shoot elongation was considered to be
lower (Figure 4b) than the minimum recommended
(approximately 2-3 cm) for the in vitro rooting process It
highlights the need of previous submission of the explants
to an adequate medium for the elongation process
CONCLUSIONS
The morphogenic response for bud and shoot
formation was remarkably superior at the distal extremity
The maximum concentration among the sucrose
and the irradiance of 100 micromol m-2 s-1 has proportioned
better morphogenic responses at the distal extremity
regardless the position of the explants
The buds and shoots differentiated at the distal
extremity farthest to the cotyledonary node developed
better under 50 micromol m-2 s-1 of irradiance in medium
supplemented with 20 g L-1 sucrose
The use of a carbon source is essential for in vitro
morphogenesis
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
(Recebido em 15 de maio de 2008 e aprovado em 2 de setembro de 2008)
AVALIACcedilAtildeO DE SUBSTRATOS NA PRODUCcedilAtildeO DE MUDASDO ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL [Ananaacutes comosus (L) Merr
var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] EM CONDICcedilOtildeESDE CASA DE VEGETACcedilAtildeO
SUBSTRATES EVALUATION FOR PRODUCTION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE[Ananas comosus (L) Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] PLANTS
UNDER GREENHOUSE CONDITIONS
FRANCISCO NUNES DA CUNHA FILHO1 ANTONIO CARLOS TORRES1 JOAtildeO MARIA CHARCHAR1
1Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF francisconunescnphembrapabr torrescnphembrapabr
RESUMOA utilizaccedilatildeo de substratos na aclimataccedilatildeo de mudas
micropropagadas oferece consideraacutevel vantagem no custo e napossibilidade de obtenccedilatildeo de alta porcentagem de sobrevivecircnciados propaacutegulos ex vitro aliado agrave obtenccedilatildeo de mudas maisuniformes vigorosas precoces e com alta qualidade fitossanitaacuteriaAvaliaram-se quatro diferentes tipos de substratos (fibra de cococomercial fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxe substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas) na aclimataccedilatildeode mudas do abacaxizeiro ornamental As variaacuteveis massa frescatotal massa fresca da parte aeacuterea massa fresca de raiacutezescomprimento de raiacutezes altura de plantas e nuacutemero total de folhasforam avaliadas O delineamento experimental utilizado foi ointeiramente casualizado com quatro tratamentos e com quatrorepeticcedilotildees Pela anaacutelise dos resultados o substrato padronizadoda Embrapa Hortaliccedilas o de fibra de coco comercial e o Plantmaxforam os mais eficientes na produccedilatildeo de mudas de abacaxizeiroornamental para fins comerciais O substrato de coco-verde daEmbrapa Hortaliccedilas foi o menos indicado
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatus plantaornamental substrato
ABSTRACTThe use of substrate in the acclimatization of
micropropagated plants offers considerable cost advantages andthe possibility to obtain high percentage of ex vitro survivingplants as well as in the production of uniform vigorous precociousand healthy plants Four different substrates (commercial coconutfiber green-coconut fiber from Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxand the standardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas) wereevaluated for acclimatization of ornamental pineapple plantsTotal fresh mass fresh mass of shoots fresh mass of roots rootlength plant height and total number of leaves were obtainedThe experiment followed a complete randomized design withfour treatments and four replicates The results showed that thestandardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas commercialcoconut fiber and Plantmax were the most efficient for theproduction of ornamental pineapple plants for commercialpurpose Green-coconut fiber substrate from Embrapa was lessindicated
Index terms Ananas comosus var bracteatus ornamental plantgrowth substrate
INTRODUCcedilAtildeO
Os abacaxizeiros ornamentais apresentam flores e
infrutescecircncias de beleza atrativa muito usadas em arranjos
decorativos e ornamentais no Brasil e exterior
representando um segmento de grande potencial para
exportaccedilatildeo (CABRAL 2000 SOUZA et al 2004) No
comeacutercio de flores nativas o abacaxi ornamental jaacute obteve
valores agregados da ordem de 5000 em relaccedilatildeo ao
abacaxi de fruta natildeo ornamental (SOUZA et al 2004)
A propagaccedilatildeo vegetativa do abacaxizeiro ornamental
para fins de comercializaccedilatildeo eacute feita por mudas oriundas da
planta-matildee Poreacutem essa propagaccedilatildeo apresenta o
inconveniente de disseminar agentes patogecircnicos e pragas
pela utilizaccedilatildeo de mudas contaminadas Dentre os patoacutegenos
e pragas mais comuns destacam-se o fungo Fusarium
subglutinans (Wollenw amp Reinking) PE Nelson (TOUSSON
amp MARASAS 1983) e a cochonilha Dysmicoccus brevipes
turfa casca curtida de eucalipto ou Pinus palha de arroz
carbonizada poacute de carvatildeo (GRATTAPAGLIA amp
MACHADO 1998) casca de arroz carbonizada poacute de
casca de coco seco e verde (SANTOS et al 2006) mistura
de areiaxaximhuacutemus (SOUZA JUNIOR et al 2001) solo
esterco bovino Plantmax e composto orgacircnico em
diferentes proporccedilotildees (MOREIRA et al 2006) dentre
outros Entretanto para o genoacutetipo em estudo as
tecnologias disponiacuteveis necessitam de adequaccedilatildeo para
serem mais eficientes e de baixo custo na produccedilatildeo
comercial de mudas
Objetivou-se neste trabalho avaliar quatro
diferentes substratos na produccedilatildeo de mudas do
abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L) Merr var
bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] para fins comerciais
utilizando-se propaacutegulos produzidos in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
Produccedilatildeo de mudas in vitro
Foram utilizados como fonte de explantes
propaacutegulos produzidos in vitro subcultivados a cada 60
dias utilizando-se o meacutetodo proposto por Correia et al
(1999) Os explantes consistiram de brotaccedilotildees com 2 cm de
comprimento transferidos para meio baacutesico de cultura
contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 3 de sacarose e em mg L-1 incluiacuteram-
se i-inositol 100 tiaminaHCl 02 aacutecido nicotiacutenico 005
piridoxinaHCl 005 e glicina 02 O meio de cultura foi
solidificado com 06 de aacutegar e o pH do meio foi ajustado
para 57 O meio foi distribuiacutedo em tubos de ensaio de 25 x
150 mm na quantidade de 125 mL por tubo
Os tubos foram esterilizados em autoclave a 121ordmC
e a 104 Kpa de pressatildeo por 15 minutos Apoacutes a inoculaccedilatildeo
as culturas foram mantidas em cacircmara de crescimento com
fotoperiacuteodo de 16 horas irradiacircncia de 32 mmol m-2 s-1
temperatura de 27oC durante 30 dias
As mudas foram preacute-aclimatizadas mediante
abertura das tampas dos frascos de cultura cinco dias
antes do transplantio para os respectivos substratos
Transplante e desenvolvimento de mudas micropropagadas
Mudas enraizadas e preacute-aclimatizadas de
abacaxizeiro ornamental foram retiradas dos tubos de
cultura e transplantadas em bandejas de isopor com 72
ceacutelulas contendo quatro diferentes substratos utilizados
como tratamentos 1) substrato comercial de fibra de coco
2) substrato de fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas
3) substrato Plantmax e 4) substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas composto por solo de cerrado areia
lavada esterco de gado curtido e palha de arroz
carbonizada em proporccedilotildees de 3111 vv com adiccedilatildeo de
300 g de calcaacuterio dolomiacutetico e de 300 g da formulaccedilatildeo 4-
30-16
Apenas 30 ceacutelulas por bandeja foram
transplantadas com mudas de abacaxizeiro ornamental (uma
muda por ceacutelula) deixando-se 42 ceacutelulas livres (sem planta)
para que natildeo houvesse competiccedilatildeo entre plantas nas
bandejas As bandejas permaneceram cobertas com
envoltoacuterio plaacutestico nos primeiros trecircs dias apoacutes o
transplante
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado com 10 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca
de raiz e tamanho de raiz e 30 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
altura e nuacutemero de folhas Os dados foram coletados aos
90 dias apoacutes o transplantio A anaacutelise de variacircncia do
experimento foi realizada com o auxiacutelio do programa
estatiacutestico SAS Institute Inc (SAS INSTITUTE 1988) e a
CUNHA FILHO F N da et al72
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
diferenciaccedilatildeo de meacutedias pelo teste de Tukey p 001 e
p 005
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
A anaacutelise conjunta do experimento indicou que
existiu homogeneidade de variacircncia natildeo sendo necessaacuteria
a transformaccedilatildeo de dados para a realizaccedilatildeo das anaacutelises A
anaacutelise de variacircncia (Tabelas 1 e 2) indicou que houve
efeito significativo dos diferentes substratos (teste de
Tukey p 005) sobre a massa fresca total massa fresca da
parte aeacuterea altura de plantas e nuacutemero total de folhas e
que natildeo houve diferenccedila significativa entre os diferentes
substratos com relaccedilatildeo agrave massa fresca de raiacutezes e o
comprimento de raiacutezes (Figuras 1 A-F)
Embora natildeo tenha havido diferenccedila significativa
(teste de Tukey p 005) entre os valores de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea nos tratamentos com
os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
comercial de fibra de coco e o Plantmax os valores
absolutos mais elevados desses paracircmetros foram obtidos
com o substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
(Figuras 1 A-B)
No substrato de fibra de coco-verde da Embrapa
Hortaliccedilas as plantas de abacaxizeiro ornamental tiveram
sempre pior performance em produccedilatildeo de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea natildeo se diferenciando
estatisticamente dos valores obtidos com o uso dos
substratos comerciais da Plantmax e de fibra de coco
Entretanto esses substratos foram significativamente
inferiores (teste de Tukey p 005) em relaccedilatildeo aos valores
obtidos com o uso do substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas (Figuras 1 A-B)
Os valores obtidos para as variaacuteveis massa fresca
de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes natildeo diferiram
estatisticamente entre si (teste de Tukey p 005) em
relaccedilatildeo aos quatro tratamentos (substratos analisados)
Os maiores valores absolutos dessas variaacuteveis foram obtidos
para a massa fresca de raiacutezes no substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e para o comprimento de raiacutezes no
substrato comercial de fibra de coco (Figuras 1 C-D)
TABELA 1 Resumo da anaacutelise de variacircncia para massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca deraiacutezes e comprimento de raiacutezes de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio
Fontes de variaccedilatildeo GL Massa fresca total
Massa fresca
da parte aeacuterea Massa fresca
de raiacutezes Comprimento
de raiacutezes
Tipo de substrato 03 673536 518934 02201ns 22382ns
Resiacuteduo 36 115108 80557 01328 13107
Total 39 - - - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade (ns) natildeo significativo
TABELA 2 Resumo da anaacutelise de variacircncia para altura e nuacutemero de folhas de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio Fontes de variaccedilatildeo GL
Altura de plantas Nuacutemero total de folhas
Tipo de substrato 003 1424357 526854
Resiacuteduo 124 50188 16807
Total 127 - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas 73
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
FIGURA 1 Variaacuteveis avaliadas na determinaccedilatildeo de eficiecircncia dos substratos Plantmax Embrapa Hortaliccedilas fibra decoco e fibra de coco-verde na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental -em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo A)massa fresca total B) massa fresca da parte aeacuterea C) massa fresca de raiacutezes D) comprimento de raiacutezes E) altura deplantas e F) nuacutemero total de folhas Meacutedias seguidas da mesma letra natildeo diferem significativamente entre si pelo testede Tukey Plt005
3653+b 0688
7459+ab 1414
9894+a 1229
6254+ab 0789
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a to
tal (
g)
A
3421+b 0664
6822+ab 1152
8930+a 0933
6002+ab 0763
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax Embrapa Hortaliccedilas Fibra de coco Fibra de coco verde
Tipo de substratos
Mas
sa fr
sca
da p
arte
aeacuter
ea (
g)
B
0568 + 0178 a
0298 + 0007 a0363 + 0120 a
0222 + 0039 a
0
02
04
06
08
1
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a de
rai
zes
(g)
C
12000 + 0338 a
12800 + 0387 a
11690 + 0468 a12020 + 0204 a
10
11
12
13
14
15
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Com
prim
ento
de
raiz
es (c
m)
D
11789 + 0412 a13800 + 0406 b
11088 + 0381 a
8797 + 0385 c
02468
1012141618
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Alt
ura
de p
lant
as (c
m)
E
5882 + 0173 c
7727 + 0191 b8818 + 0259 a
8143 + 0294 ab
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Nuacutem
ero
tota
l de
folh
as
F
Houve diferenccedila significativa (teste de Tukey
p 005) entre os valores meacutedios obtidos para a altura de
plantas e para o nuacutemero total de folhas nos quatro
tratamentos avaliados As plantas tiveram
significativamente maior desenvolvimento em altura no
substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas Natildeo houve
diferenccedila significativa entre os valores meacutedios em altura
de plantas nos substratos comerciais da Plantmax e de
fibra de coco Esses poreacutem foram diferentes dos valores
obtidos no substrato de fibra de coco-verde que
proporcionou significativamente o menor crescimento das
plantas (Figura 1 E)
Maiores meacutedias da variaacutevel nuacutemero total de folhas
foram obtidas com a utilizaccedilatildeo do substrato padronizado
CUNHA FILHO F N da et al74
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
da Embrapa Hortaliccedilas e do Plantmax Natildeo houve diferenccedila
significativa entre os valores meacutedios do nuacutemero total de
folhas nos substratos Plantmax e de fibra de coco comercial
mas esses diferiram estatisticamente dos obtidos no
substrato fibra de coco-verde O substrato de fibra de coco-
verde foi o que propiciou os menores valores da variaacutevel
nuacutemero total de folhas (Figura 1 F) Esses resultados
contradizem os relatados por Carrijo et al (2002) que
verificaram que os substratos contendo fibra de coco-verde
satildeo os mais indicados para produccedilatildeo de mudas de
hortaliccedilas e ornamentais em cultivo sem solo Correia et al
(2003) natildeo observaram diferenccedila significativa entre os
valores da massa fresca de raiacutezes de mudas de cajueiro
anatildeo precoce crescidas em substratos com adiccedilatildeo de poacute
de coco-verde ou de poacute de coco-maduro Santos et al
(2006) relataram que os substratos orgacircnicos contendo as
combinaccedilotildees de fibras de coco seco ou verde
proporcionaram baixo desenvolvimento na aclimatizaccedilatildeo
de mudas Heliconia rostrata Ruiz amp Pav provenientes
da micropropagaccedilatildeo Poreacutem Bezerra et al (2001) discordam
dos autores acima mencionados informando que os
substratos contendo fibras de coco-verde ou seco foram
os mais indicados respectivamente para o enraizamento
de mudas de crisacircntemo (Chrysanthemum sp) e de violeta
africana (Saintpaulia ionantha H Wendl)
Tambeacutem substrato contendo casca de arroz
carbonizada tem sido utilizado na produccedilatildeo de mudas
micropropagadas Weber et al (2003) relataram que o
substrato contendo esse componente misturado com
vermiculita e vermicomposto em proporccedilotildees de 111 foi a
melhor opccedilatildeo para aclimataccedilatildeo de mudas de abacaxizeiro
ornamental oriundas da cultura in vitro e transplantadas
para tubetes Esses autores ainda observaram que o uso
da mistura contendo casca de arroz carbonizada e poacute de
casca de coco em proporccedilotildees de 11 resultou em baixo
desempenho de mudas do abacaxizeiro ornamental em
funccedilatildeo da maacute agregaccedilatildeo fiacutesica baixa retenccedilatildeo de aacutegua e
limitaccedilatildeo nutricional da planta
Neste trabalho os resultados com o uso de substrato
contendo casca de arroz carbonizada sem a presenccedila de
fibras de coco seco ou verde tambeacutem proporcionou
excelente desenvolvimento de mudas do abacaxizeiro
ornamental o que indica uma provaacutevel incompatibilidade
das fibras de coco com outros componentes de substratos
na produccedilatildeo de mudas dessa ornamental
Natildeo houve diferenccedila significativa entre valores de
massa fresca de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes de
abacaxizeiro ornamental em relaccedilatildeo aos quatro substratos
analisados Poreacutem o maior valor absoluto em massa fresca
de raiacutezes foi obtido no substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas enquanto que o maior valor em comprimento
de raiacutezes no substrato comercial de fibra de coco
Com relaccedilatildeo agraves demais variaacuteveis analisadas
observou-se que a massa fresca total e a massa fresca da
parte aeacuterea tiveram performances mais significativas nos
substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas comercial
de fibra de coco e o da Plantmax enquanto que a altura de
plantas foi significativamente mais elevada no substrato
padronizado da Embrapa Hortaliccedilas e o nuacutemero total de
folhas mais significativo nos substratos padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e o Plantmax
CONCLUSOtildeES
Os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
fibra de coco comercial e o da Plantmax satildeo os mais
indicados para a produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro
ornamental para fins comerciais
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) as bolsas concedidas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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SANTOS M do D M dos et al76
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(Recebido em 8 de abril de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFEITO DE ISOPENTENILADENINA POR QUATROSUBCULTIVOS NA MULTIPLICACcedilAtildeO DE BROTACcedilOtildeES
DE ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL IN VITRO
EFFECT OF ISOPENTENYL ADENINE IN FOUR SUBCULTURES DURING THEIN VITRO MULTIPLICATION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE SHOOT
MARIA DO DESTERRO MENDES DOS SANTOS1 JOSEacute GETUacuteLIO DA SILVA FILHO2ANTONIO CARLOS TORRES3
1Bioacuteloga MSc em Botacircnica Departamento de Botacircnica Universidade de BrasiacuteliaUnB Cx P 4457 709190-970 Brasiacutelia DF mariacnphembrapabr2Engenheiro Agrocircnomo Especialista em Biotecnologia de Plantas Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF jgetuliocnphembrapabr3Engenheiro Agrocircnomo Embrapa Hortaliccedilas CxP 218 70359-970 Brasiacutelia DF
RESUMOObjetivou-se no presente trabalho foi o de avaliar o
efeito da adiccedilatildeo de concentraccedilotildees de 2iP em diferentes subcultivosna micropropagaccedilatildeo do abacaxizeiro ornamental var bracteatusBrotaccedilotildees com aproximadamente 10 cm de tamanho oriundosda cultura in vitro foram utilizados como explantes Os explantesforam inoculados em meio baacutesico liquido contendo sais mineraisMS 3 sacarose e em mg L-1 i-inositol 100 tiaminaHCl 01piridoxina HCl 05 aacutecido nicotiacutenico 005 glicina 20 formulaccedilatildeoliacutequida A esse meio foram adicionados concentraccedilotildees de 2iP(00 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro subcultivos(30 60 90 e 120 dias) Maacuteximo nuacutemero de brotaccedilotildees por explante(139) foi obtido em meio baacutesico com 16 mg L-1 de 2iP e no quartosubcultivo aos 120 dias Apoacutes a transferecircncia de brotaccedilotildeesindividualizadas para meio contendo ANA (00 05 10 15 2025 30 e 40 mg L-1) verificou-se a diferenciaccedilatildeo de raiacutezesadventiacutecias na porccedilatildeo basilar dos explantes
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatusmicropropagaccedilatildeo cultivo in vitro
ABSTRACTThe objective of this work was to evaluate the effect of
2iP addition in different subcultures during the micropropagationof ornamental pineapple var bracteatus Shoots with 10 cm inlength originated from in vitro culture were used as explantsThe explants were inoculated in liquid basal medium containingMS salts 3 sucrose 100 mg L-1 i-inositol 01 mg L-1
thiamineHCl 05 mg L-1 pyridoxineHCl 005 mg L-1 nicotinicacid and 20 mg L-1 glycine Different concentrations of 2iP (0005 10 and 20 mg L-1) in combination with four subcultures (3060 90 e 120 days) were used Maximum number of shoot formedper explant (139) was observed in basal medium with 16 mg L-1
2iP at the fourth subculture (120 days) After transferringindividual shoots to medium containing different concentrationsof NAA (00 05 10 15 20 25 30 and 40 mg L-1) mediaadventitious root formed in the basal portion of the explants
Index terms Ananas comosus var bracteatus micropropagationin vitro culture
INTRODUCcedilAtildeO
O abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L)
Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] eacute uma
planta de propagaccedilatildeo vegetativa com grande potencial
ornamental (D EECKENBRUGGE amp LEAL 2003) A
qualidade fitossanitaacuteria do campo de produccedilatildeo dessa
espeacutecie depende do material utilizado para sua propagaccedilatildeo
Assim sendo pode haver acuacutemulo entre plantios
sucessivos de patoacutegenos que satildeo transmitidos de um ciclo
de produccedilatildeo a outro via mudas contaminadas A
micropropagaccedilatildeo em larga escala de mudas sadias via
cultura de tecidos eacute uma estrateacutegia que possibilita
contornar a limitaccedilatildeo de mudas com alta qualidade
fitossanitaacuteria principalmente isentas de fusariose
(REINHARDT amp CUNHA 1999)
Em espeacutecies do gecircnero Ananaacutes os explantes mais
utilizados satildeo as gemas axilares das mudas do tipo coroa
ou filhote embora outros tipos de mudas possam ser usadas
A vantagem do uso de gemas axilares incluem boa
sobrevivecircncia em meio de cultura e com a quebra da
dominacircncia apical do broto haacute estiacutemulo para a formaccedilatildeo de
gemas muacuteltiplas (DREW 1980) A adiccedilatildeo de
fitorreguladores em geral eacute necessaacuteria para suprir as
possiacuteveis deficiecircncias dos niacuteveis endoacutegenos de hormocircnios
nos explantes in vitro Assim sendo recomenda-se a
combinaccedilatildeo de uma auxina com uma citocinina (SKOOG amp
MILLER 1957) Em geral a benzilaminopurina (BAP)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 77
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(ALMEIDA et al 2002 BARBOZA et al 2001 BE amp
DEBERG 2006) ou essa substacircncia em combinaccedilatildeo auxina
e aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (COSTA amp ZAFFARI 2005
GUERRA et al 1999) tecircm sido a(s) substacircncia(s)
reguladora(s) de crescimento mais usada(s) na formaccedilatildeo
de brotaccedilotildees de Ananas sp Entretanto em abacaxizeiro
ornamental a inclusatildeo de BAP no meio pode induzir o
aparecimento de variaccedilotildees somaclonais (RODRIGUES et
al 2007 SANTOS et al 2008) Tambeacutem a combinaccedilatildeo de
cinetina ANA e AIB (aacutecido indolbutiacuterico) foi empregada
para proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees em abacaxizeiro (KISS et
al 1995 MATHEWS amp RANGAN 1979)
Dada a escassez de informaccedilotildees sobre o efeito de
isopenteniladenina (2iP) na propagaccedilatildeo in vitro de espeacutecies
do gecircnero Ananas neste trabalho procurou-se otimizar a
concentraccedilatildeo de 2iP na produccedilatildeo de brotaccedilotildees de
abacaxizeiro ornamental em diferentes subcultivos e seu
subsequumlente enraizamento
MATERIAL E MEacuteTODOS
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Brotaccedilotildees
individualizadas com aproximadamente 1 cm de
comprimento estabelecidas a partir da cultura de gemas
axilares de mudas tipo coroa foram utilizadas como fonte
de explantes Os explantes foram cultivados em meio baacutesico
liacutequido contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) 3 sacarose e em mg L-1 tiaminaHCl 01
piridoxinaHCl 005 aacutecido nicotiacutenico 005 e glicina 20
(SANTOS 2008) O delineamento experimental empregado
foi o inteiramente ao acaso em esquema fatorial 4x4
referentes concentraccedilotildees de 2iP e subcultivos Ao meio
baacutesico foram adicionadas quatro concentraccedilotildees de BAP
(0 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro
subcultivos (30 60 90 e 120 dias) O pH dos meios foi
ajustado a 57 Foram utilizadas nove repeticcedilotildees por
tratamento sendo que cada parcela foi constituiacuteda por um
explante Inicialmente os explantes foram inoculados em
frascos de 250 mL de capacidade com 40mL de meio No
segundo subcultivo os propaacutegulos foram transferidos para
frascos idecircnticos com meio receacutem-preparado No terceiro
e quarto subcultivos foram utilizados frascos de 1000 mL
com 100 mL de meio As culturas foram mantidas em sala
de crescimento sob fotoperiacutedo de 16 horas com densidade
de fluxo de foacutetons de 32 mmol m-2 s-1 a 27plusmn2oC Em cada
subcultivo foi determinado o nuacutemero e a massa de mateacuteria
fresca das brotaccedilotildees formadas por explante inoculado
Os dados foram transformados para 1X e as
anaacutelises estatiacutestica foram realizadas com o auxiacutelio dos
programas SASStat e SISVAR versatildeo 301 Aplicou-se a
anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo grau para
avaliar o efeito da concentraccedilatildeo de 2iP sobre o nuacutemero e
massa da mateacuteria fresca de brotaccedilotildees em cada subcultivo
Enraizamento das brotaccedilotildees Foram utilizadas
brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental regeneradas in vitro
Os explantes com 10 a 20 cm de comprimento foram
inoculados em tubos de ensaio (25x150 mm) com 20 ml de
meio baacutesico 07 de aacutegar suplementado com diferentes
concentraccedilotildees de aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (00 05
10 15 20 25 30 e 40 mg L-1)
Apoacutes inoculaccedilatildeo as culturas foram mantidas em
cacircmara de crescimento nas condiccedilotildees descritas
anteriormente Apoacutes 30 dias da inoculaccedilatildeo foram avaliados
a percentagem de brotaccedilotildees enraizadas nuacutemero e massa
fresca das raiacutezes desenvolvida por brotaccedilatildeo altura da
planta e massa da mateacuteria fresca da parte aeacuterea O
delineamento experimental foi inteiramente casualizado com
29 repeticcedilotildees Cada parcela foi constituiacuteda de um tubo de
ensaio com um explante
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos programas SASStat e SISVAR versatildeo 301
Aplicou-se a anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo
grau para avaliar a variaccedilatildeo das variaacuteveis em funccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de ANA
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Na proliferaccedilatildeo de
brotaccedilotildees observou-se que os fatores concentraccedilatildeo de
2iP e o subcultivo isoladamente e em interaccedilatildeo afetam
significativamente (P 005) as variaacuteveis nuacutemero e massa
da mateacuteria fresca das brotaccedilotildees formadas A equaccedilatildeo que
SANTOS M do D M dos et al78
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
melhor se ajustou para explicar o efeito de 2iP nos diferentes
subcultivos para a variaacutevel nuacutemero de brotaccedilotildees foi a de
segundo grau (Figuras 1 e 2) A multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees
de abacaxizeiro ornamental in vitro eacute dependente de 2iP
no meio de cultura O nuacutemero de brotaccedilotildees por explante
responsivo de tamanho maior que 05 cm de comprimento
foi pequeno na primeira subcultura (30 dias) em todas as
concentraccedilotildees de 2iP testadas aumentando-se nos demais
subcultivos Aos 30 60 90 e 120 dias estimou-se que a
concentraccedilatildeo de 16 mg L-1 de 2iP produziu o maacuteximo de
brotaccedilotildees por explante inoculado respectivamente 20 42
64 e 139 (Figuras 1 e 2) Esses resultados estatildeo em
consonacircncia com a importacircncia da citocinina em vaacuterios
aspectos do crescimento e desenvolvimento da planta
tais como divisatildeo celular (SKOOG amp MILLER 1957) quebra
da dominacircncia apical e desenvolvimento das gemas laterais
(SACHS amp THIMMAN 1964) induccedilatildeo e multiplicaccedilatildeo de
brotaccedilotildees in vitro (GRATTAPAGLIA amp MACHADO
1998 JOSHI amp DHAWAN 2007 MURASHIGE 1974)
Tambeacutem o tipo de citocinina e a sua concentraccedilatildeo satildeo
determinantes no processo de micropropagaccedilatildeo
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998 MURASHIGE
1974) Em Ananas sp o BAP tem sido preferencialmente
usado na proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees in vitro (ALMEIDA
1994 ALMEIDA et al 2002 CRUZ 2000 ESCALONA et
al 1999 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
GUERRA et al 1999 MATHEWS et al 1976) Entretanto
Kiss et al (1995) relataram que tanto o BAP quanto a
cinetina foram efetivos para formaccedilatildeo de brotaccedilotildees em
abacaxizeiro comercial No presente trabalho o 2iP foi
adicionado ao meio devido a sua maior atividade bioloacutegica
comparada com o BAP e a cinetina (MURASHIGE 1974)
Tambeacutem para a variaacutevel massa da mateacuteria fresca
foi constatada a resposta quadraacutetica das doses de 2iP
(Figuras 3 e 4) Pelas equaccedilotildees de regressatildeo infere-se
que o 2iP estimula o acuacutemulo de massa fresca nas
brotaccedilotildees com o maacuteximo obtido com a concentraccedilatildeo de
18 mgL-1 desse fator nos subcultivos de 30 60 e 120 dias
com a produccedilatildeo de respectivamente 9 17 e 77 g por
explante inoculado No terceiro subcultivo aos 90 dias a
concentraccedilatildeo de 17 gL-1 de 2iP produziu o total de
biomassa de 45 g por explante Essa observaccedilatildeo estaacute em
concordacircncia com os trabalhos do efeito beneacutefico de
citocininas na produccedilatildeo de parte aeacuterea ateacute uma
concentraccedilatildeo oacutetima acima da qual seu excesso eacute inibitoacuterio
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1988)
FIGURA 1 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
y)dias 60(14585x = -247661x + 31353 +
R 20999 =
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e bo
taccedilotilde
es p
or
expl
ante
s
30 dias
60 dias
y (60 dias) = 14585x2 - 47661x + 31353
R2 = 0999
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 79
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 2 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
FIGURA 3 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
FIGURA 4 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa mateacuteria fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
y)dias 90(22847x = -2 73196x + 55784
R209477 =
y)dias 120(5072x = -21623x + 9464 +
R20954 =
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero m
eacutedio
de
brot
accedilatildeo
por
expl
ante
90 dias
120 dias
y (120 dias) = 50725x2 - 1623x + 9464
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
R2 = 0954
y(60 dias) = -38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (
g)
30 dias
60 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (60 dias) = - 38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
y)dias 90(12255x = -243239x + 75847 +
R209717 =
y)dias 120(19075x = -271029x + 11295 +
R2096 =
0
10
2030
40
50
6070
80
90
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (g
)
90 dias
120 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (120 dias) = 19075x2 - 71029x + 11295
R2 = 096
y (90 dias) = 12255x2 - 43239x + 75847R2 = 09717
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e br
otaccedil
atildeo p
or e
xpla
nte
SANTOS M do D M dos et al80
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
Enraizamento das brotaccedilotildees A induccedilatildeo
emergecircncia e alongamento das raiacutezes ocorreram em todos
os tratamentos Em meio sem regulador de crescimento
os propaacutegulos apresentaram raiacutezes desenvolvendo-se
de maneira pontual na extremidade seccionada dos
explantes (Figura 5) Em meio com ANA as raiacutezes
desenvolveram-se na porccedilatildeo basilar dos propaacutegulos em
forma de roseta Em geral a auxina eacute utilizada na fase de
enraizamento de propaacutegulos oriundos da cultura in vitro
de Ananas (BARBOZA et al 2004 CORREIA et al
2000 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
PRAXEDES et al 2001 TENG 1997) Entretanto o
enraizamento pode ser feito em meio sem regulador de
crescimento (KISS et al 1995 ZEPEDA amp SAGAWA
1981) A utilizaccedilatildeo de uma auxina na fase de enraizamento
induz agrave formaccedilatildeo de um sistema radicular mais
pronunciado que facilitaraacute a fase de aclimataccedilatildeo (Figura
5) Observou-se que a concentraccedilatildeo de ANA afetou
significativamente (P 005) o nuacutemero de raiacutezes massa
fresca das raiacutezes e da parte aeacuterea A altura da planta natildeo
foi afetada pela concentraccedilatildeo de ANA sendo o valor
de F natildeo significativo
Constatou-se uma relaccedilatildeo quadraacutetica entre as
variaacuteveis nuacutemero e massa da mateacuteria fresca das raiacutezes e da
parte aeacuterea e a concentraccedilatildeo de ANA A estimativa da
proliferaccedilatildeo de raiacutezes baseando-se no nuacutemero de raiacutezes
por explante aumentou com a concentraccedilatildeo de ANA
atingindo um maacuteximo de 119 com 22 mg L-1 de ANA
Concentraccedilotildees acima de 22 mg L-1 tendem a apresentar
um efeito inibitoacuterio na produccedilatildeo de raiacutezes (Figura 6)
Tambeacutem a massa da mateacuteria fresca das raiacutezes aumentou
com a concentraccedilatildeo de ANA com um maacuteximo de 023 g
obtida com a concentraccedilatildeo de 24 mg L-1 de ANA (Figura
7) Essa tendecircncia foi observada para a massa fresca da
parte aeacuterea onde a estimativa maacutexima da produccedilatildeo de
biomassa foi de 046 g por explante em meio com 19 mg L-1
de ANA (Figura 8)
Com relaccedilatildeo agrave altura das plantas natildeo houve
diferenccedila significativa entre as diferentes concentraccedilotildees
de ANA e essa variaacutevel
FIGURA 5 Brotaccedilotildees enraizadas em meio MS contendo diferentes concentraccedilotildees de ANA (mg L-1) aos 30 dias apoacutesa inoculaccedilatildeo
00 05 10 15 20 25 30 40
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 81
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 6 Variaccedilatildeo do nuacutemero de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 7 Variaccedilatildeo na massa da mateacuteria fresca de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 8 Variaccedilatildeo da massa de mateacuteria fresca da parte aeacuterea por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
y = -1202x2 + 5291x + 61504
R2 = 06865
0
2
4
6
8
10
12
14
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Nordm
de r
aiacuteze
s
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00282x2 + 01359x + 00704
R2 = 07573
0
005
01
015
02
025
03
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Mas
sa fr
esca
das
raiacutez
es
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00363x2 + 01407x + 03255
R2 = 0857
0
01
02
03
04
05
06
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Mas
sa fr
esca
da
part
e aeacute
rea
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
SANTOS M do D M dos et al82
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
CONCLUSOtildeES
No meio liacutequido contendo MS vitaminas 3 de
sacarose e 16 mg L-1 de 2iP obteacutem-se uma estimativa meacutedia
de 139 brotaccedilotildees por explante inoculado no final do quarto
subcultivo (120 dias)
Maior nuacutemero de raiacutezes adventiacutecias por explante eacute
estimado com a concentraccedilatildeo de 22 mg L-1 de ANA
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) pelas bolsas concedidas
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MOTHEacute G P B et al84
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
(Recebido em 25 de marccedilo de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFICIEcircNCIA FOTOQUIacuteMICA E CARACTERIacuteSTICAS DECRESCIMENTO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR (Saccharum officinarum L)CULTIVADA IN VITRO EM DIFERENTES CONCENTRACcedilOtildeES DE
SACAROSE E QUALIDADE DE LUZ
PHOTOCHEMICAL EFFICIENCY AND GROWTH CHARACTERISTICS OF SUGARCANE (Saccharum officinarum L) PLANTS CULTIVATED IN VITRO UNDER
DIFFERENT SUCROSE CONCENTRATIONS AND LIGHT QUALITY
1Bioacuteloga Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000 28015-620
Campos dos Goytacazes RJ georgiabecharayahoocombr2Engenheiro Agrocircnomo Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA
Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000
28015-620 Campos dos Goytacazes RJ alenauenfbr crespouenfbr campostuenfbr
RESUMODentre os diversos produtos agriacutecolas cultivados no
Estado do Rio de Janeiro a cana-de-accediluacutecar (Saccharumofficinarum L) eacute a cultura de maior importacircncia econocircmicaDiante dessa importacircncia na regiatildeo fluminense torna-senecessaacuteria cada vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividadedessa espeacutecie A produccedilatildeo em escala comercial de plantas decana-de-accediluacutecar pode ser beneficiada pela obtenccedilatildeo de mudas dealta qualidade e homogeneidade em curtos periacuteodos de tempo oque pode ocorrer pelo uso da micropropagaccedilatildeo A presenccedila decarboidrato eacute essencial para o enraizamento de muitas espeacuteciesin vitro sendo a sacarose o accediluacutecar mais utilizado namicropropagaccedilatildeo Poreacutem a necessidade desse composto nomeio de cultivo vem sendo discutida por alguns autoresObjetivou-se neste trabalho verificar o efeito da concentraccedilatildeode sacarose no meio de cultivo e a qualidade da luz sobre acapacidade fotossinteacutetica e as caracteriacutesticas de crescimentoem plantas de cana de accediluacutecar cultivadas in vitro Para tanto foiquantificada a emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila determinadaa massa seca de raiz e da parte aeacuterea a massa foliar especiacutefica eestimada a concentraccedilatildeo de clorofilas Os resultados obtidosmostraram que em cana de accediluacutecar cultivada in vitro em frascosfechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de sacarose no meio decultivo promoveu aumentos na mateacuteria seca da parte aeacuterea e daraiz na massa foliar especiacutefica e na intensidade de cor verde dasfolhas estudadas Natildeo houve modificaccedilatildeo na capacidadefotoquiacutemica maacutexima do PSII A justificativa para o natildeo-comprometimento da sacarose sobre as caracteriacutesticasrelacionadas agrave fotossiacutentese estudadas neste trabalho como oteor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o rendimentoquacircntico maacuteximo do PSII pode estar relacionada com a altacapacidade dessa espeacutecie em armazenar sacarose nos tecidos
Termos para indexaccedilatildeo Saccharum officinarum aclimatizaccedilatildeomeio de cultura fotossiacutentese
ABSTRACTThe State of Rio de Janeiro was one of the pioneers in
Brazil to set out the sugar cane activity which still represents animportant segment in the regional economy The production ofplants in commercial scale would be benefited by the attainmentof seedlings of high quality and homogeneity in short periods oftime which can be obtained using the micropropagation Thepresence of carbohydrate is essential for in vitro rooting of manyspecies with the sucrose being considered the most used sugarduring micropropagation despite the discussion by some authorsregarding its requirement The objective of this work was toevaluate the effect of sucrose concentrations in the culture mediumand light quality on the photosynthetic capacity and biometriccharacteristics on micropropagated sugar cane plants Chlorophyllfluorescence and contents were quantified root and shoot drymass and specific leaf mass were determined and chlorophyllconcentrations were estimated The results showed that theincrease in sucrose concentration during the in vitro cultivationof sugar cane in closed flasks promotes increase in the shootand root dry matter specific leaf mass and chlorophyll contentsNo modification of maximum PSII photochemistry capacity wasobserved The lack of sucrose effects on photosyntheticcharacteristics such chlorophyll contents and PSII yield may berelated to the high capacity of this specie to storage sucrose inthe tissues
Index terms Saccharum officinarum aclimatization culturemedium photosynthesis
Siacutembolos PSII fotossistema II SPAD Soil Plant AnalysisDevelopment BAP benzilaminopurina FFF fluxo de foacutetonsfotossinteacuteticos MPC medidor portaacutetil de clorofilas MFE massafoliar especiacutefica F
vF
maacutex Rendimento quacircntico maacuteximo do
fotossistema II MSPA massa seca parte aeacuterea MSR massaseca raiz AIB acido indol butirico ANAacido naftaleno aceacutetico
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 85
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
INTRODUCcedilAtildeO
A cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) foi
introduzida no Brasil no seacuteculo XVII com o objetivo de
quebrar o monopoacutelio mundial exercido pela Franccedila no
comeacutercio do accediluacutecar produzido nas Ilhas do Caribe O cultivo
da cana-de-accediluacutecar teve um grande aumento quando em
meados da deacutecada de 70 o Brasil criou o Programa Nacional
do Aacutelcool o qual teve como objetivo estimular a produccedilatildeo
do aacutelcool visando o atendimento das necessidades do
mercado interno e externo e da poliacutetica de combustiacuteveis
automotivos (MENEZES VEIGA et al 2006)
Atualmente a cana-de-accediluacutecar eacute uma das principais
culturas do panorama brasileiro e continua crescendo em
funccedilatildeo do consumo como fonte de energia e accediluacutecar Dentre
os diversos produtos agriacutecolas cultivados no estado do Rio
de Janeiro a cana-de-accediluacutecar eacute a cultura de maior importacircncia
econocircmica (MENEZES VEIGA et al 2006) Diante dessa
importacircncia na regiatildeo fluminense torna-se necessaacuteria cada
vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividade dessa espeacutecie
Uma das alternativas para essa elevaccedilatildeo eacute a formaccedilatildeo de
lavouras por meio do uso de mudas de excelente qualidade
Assim a micropropagaccedilatildeo eacute uma teacutecnica que pode contribuir
significativamente para a produccedilatildeo de mudas de cana de
accediluacutecar de alta qualidade Entre as diversas vantagens que
essa teacutecnica apresenta estaacute a produccedilatildeo raacutepida de mudas em
larga escala e a eliminaccedilatildeo de microrganismos potencialmente
fitopatogecircnicos
A micropropagaccedilatildeo tradicional tem como premissa
a presenccedila de sacarose no meio de cultivo uma vez que
esse composto eleva a produccedilatildeo de biomassa e pode
contribuir para aumentar o enraizamento de muitas espeacutecies
in vitro (GRATTAPAGALIA amp MACHADO 1990)
Entretanto vaacuterios autores tecircm sugerido que a fonte de
carboidrato no meio de cultura inibe o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono A adiccedilatildeo da sacarose ao meio
inibiu a fotossiacutentese potencial in vitro (LEES et al 1991)
reduziu a atividade da Rubisco (GROUT amp DONKIN 1987)
inibiu o acuacutemulo de clorofila (LA ROSA et al 1984) e
diminuiu a fixaccedilatildeo do carbono inorgacircnico por meio da
inibiccedilatildeo da atividade da carboxilase do fosfoenol-piruvato
e do Ciclo de Calvin (NEUMANN amp BENDER 1987)
Entretanto Khan et al (2006) trabalhando com cana-de-
accediluacutecar relataram que a maacutexima taxa de multiplicaccedilatildeo de
dois clones (AEC82-223 e NIA-2004) foi nas concentraccedilotildees
de 4 e 6 de sacarose no meio mostrando que nesses
clones cultivados em frascos fechados in vitro a sacarose
foi de fundamental importacircncia para a otimizaccedilatildeo do
crescimento da parte aeacuterea Esses autores mostraram que
a maior taxa de enraizamento foi em meio MS com 1 mg L-
1 de AIB e 6 de sacarose
Alguns autores para facilitar a aclimatizaccedilatildeo da
planta micropropagada sugerem adotar na uacuteltima fase da
cultura in vitro diminuir a concentraccedilatildeo de sacarose com
o objetivo de tentar elevar a taxa fotossinteacutetica e capacitar
a planta agrave nutriccedilatildeo autotroacutefica uma vez que a fonte de
carboidrato no meio de cultura pode inibir o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono Em vista disso Simmonds (1983)
obteve melhores resultados no enraizamento de porta-
enxerto de macieira ao reduzir a concentraccedilatildeo de sacarose
no meio de cultura para apenas 1 Contudo Wainwright
amp Scrace (1989) sugerem manter a sacarose no niacutevel
normalmente utilizado (3) ou ateacute mesmo aumentaacute-lo numa
fase anterior agrave aclimatizaccedilatildeo visando melhorar a qualidade
da planta Segundo esses autores o preacute-condicionamento
em altas concentraccedilotildees de sacarose aumentaria as reservas
de carboidratos armazenadas pelas folhas aumentando
assim a energia disponiacutevel para as placircntulas durante o
processo de aclimataccedilatildeo Para George amp Sherrington (1984)
no desenvolvimento in vitro de muitas espeacutecies a
assimilaccedilatildeo fotossinteacutetica eacute baixa fazendo com que as
culturas sejam dependentes do suporte externo de
carboidratos
Objetivou-se neste trabalho verificar o efeito da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo e da qualidade
de luz sobre a eficiecircncia fotoquiacutemica e as caracteriacutesticas de
crescimento da cana-de-accediluacutecar cultivada in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
O experimento foi realizado na unidade de pesquisa
em fotossiacutentese de plantas in vitro no Setor de Fisiologia
MOTHEacute G P B et al86
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
Vegetal Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal
na UENF Campos dos GoytacazesRJ
Como fonte de explante foram utilizadas placircntulas
de cana-de-accediluacutecar com dois a trecircs centiacutemetros de altura
proveniente de material vegetal jaacute em fase de multiplicaccedilatildeo
contendo meio MS modificado (02 mg L-1 de fonte de
nitrogecircnio combinado 01 mg L-1 de cinetina 02 mg L-1 de
BAP 1 mg L-1 de Tiamina 100 mg L-1 de mio-inositol e 20 g
L-1 de sacarose) em condiccedilotildees de perfilhamento O material
foi obtido no Laboratoacuterio de Cultura de Tecido do Campus
Dr Leonel Miranda UFRRJ O meio de cultura utilizado
para o recultivo foi o MS padratildeo (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 100 mg L-1 de mio-inositol 7 g L-1 de
Agar (Vetec) e sem adiccedilatildeo de reguladores de crescimento
Os tratamentos consistiram de uma combinaccedilatildeo bifatorial
de seis concentraccedilotildees de sacarose no meio (0 10 20 30
40 e 50 g L-1) e dois tipos de luz (lacircmpada fluorescente
branca 40w luz branca com irradiacircncia de 948 igravemol m-2 s-
1 e lacircmpada fluorescente tipo Grolux 40w luz vermelha
com irradiacircncia de 966 igravemol m-2 s-1) O pH do meio foi
ajustado para 58 antes da inclusatildeo do aacutegar e da
autoclavagem (15 atm a 120ordmC por 20 min) A parcela
experimental consistiu de frascos tipo baby food
contendo 50 mL do meio MS nas diferentes
concentraccedilotildees de sacarose O delineamento experimental
foi inteiramente casualizado com trecircs repeticcedilotildees em que
cada parcela consistiu de um frasco com duas plantas
Apoacutes a inoculaccedilatildeo os explantes foram cultivados em
sala de crescimento a uma temperatura 25ordm C plusmn 10 a um
fluxo de foacutetons fotossinteacuteticos de 120 a 150 igravemol m-2 s-1
com 16h de fotoperiacuteodo
Aos vinte e oito dias apoacutes a inoculaccedilatildeo (DAI) foi
utilizada a 2ordm eou 3ordm folha mais expandida para as anaacutelises
para determinaccedilatildeo do rendimento quacircntico maacuteximo do PSII
(FvF
max) (apoacutes adaptaccedilatildeo da folha ao escuro por 30
minutos com auxiacutelio de pinccedilas) por meio de um fluoriacutemetro
natildeo modulado PEA (Plant Efficiency Analyser - Hansatech
Ltd King s Lynn Norfolk UK)
A medida de intensidade de verde (relacionada com
o teor de clorofilas totais) foi feita nesta mesma eacutepoca por
meio do medidor portaacutetil do teor de clorofila SPAD 502
Chlorophyll Meter Minolta Japatildeo Os valores da
intensidade do verde foram provenientes da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha
A massa foliar especiacutefica feita aos 28 dias apoacutes o
cultivo in vitro foi determinada a partir da divisatildeo da massa
seca da folha de uma parte do limbo foliar pela respectiva
aacuterea dessa parte
No final do experimento foi determinada a massa
seca das partes aeacuterea e da raiz das plantas Essas partes
foram colocadas em estufa com ventilaccedilatildeo forccedilada a 70ordm C
por 48 h A partir dos dados da massa seca estimou-se a
relaccedilatildeo parte aeacuterearaiz (massa seca da parte aeacuterea massa
seca das raiacutezes)
Os dados experimentais foram submetidos a uma
anaacutelise de variacircncia e para cada tratamento foram
avaliados trecircs frascos Foram realizadas duas repeticcedilotildees
para cada frasco e seis plantas foram utilizadas
provenientes de trecircs frascos Os dados de cada avaliaccedilatildeo
foram analisados estatisticamente por teste Tukey a 5
e os resultados expressos como meacutedia (plusmn erro-padratildeo) de
seis repeticcedilotildees
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os diferentes tratamentos de luz e dosagem de
sacarose no meio de cultura influenciaram a produccedilatildeo de
biomassa na parte aeacuterea mostrando que maiores
concentraccedilotildees de sacarose produziram maior biomassa
(figuras 2 e 3) O tratamento controle (0 g L-1 de sacarose)
natildeo produziu biomassa suficiente para as anaacutelises
Portanto as plantas-controle cultivadas nessas
condiccedilotildees requerem a adiccedilatildeo de carboidratos para suprir
suas necessidades metaboacutelicas quer participando na
geraccedilatildeo de energia ou como fonte de esqueletos
carbocircnicos para vaacuterios processos bioquiacutemicos sugerindo
que as condiccedilotildees encontradas no frasco de cultivo e na
sala de crescimento foram ineficientes para as plantas-
controle desenvolverem condiccedilotildees de realizar
fotossiacutentese e consequumlentemente produzir biomassa
(Figura 1)
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 87
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 1 Plantas de cana-de-accediluacutecar cultivada em diferentes concentraccedilotildees de sacarose apoacutes 28 dias de cultivo (A)0 g L-1 (B) 10 g L-1 (C) 20 g L-1 (D) 30 g L-1 (E) 40 g L-1 e (F) 50 g L-1
Os resultados obtidos por meio da anaacutelise de
variacircncia para as cinco diferentes concentraccedilotildees de
sacarose (10 20 30 40 e 50 g L-1) no meio demonstraram
que para a caracteriacutestica massa seca da parte aeacuterea (MSPA)
houve uma resposta crescente em que doses crescentes
de sacarose promoveram acreacutescimos de biomassa seca
(Figura 2A) A concentraccedilatildeo 10 g L-1 diferenciou
significativamente das concentraccedilotildees de 40 g L-1 e 50 g L-
1 produzindo uma menor MSPA 0039 0101 e 0135g
respectivamente (Figura 2A) Dados semelhantes foram
obtidos em morangueiros batata menta e videira por
(RIQUELME et al 1991) e por (NICOLOSO 2003) em que
nesse trabalho a elevaccedilatildeo da concentraccedilatildeo de sacarose
de 30 ateacute 60 g L-1 promoveu maior produccedilatildeo de biomassa
dos oacutergatildeos de Pfaffia glomerata (Spreng) Pedersen
Com relaccedilatildeo agrave mateacuteria seca da raiz (MSR) as
diferenccedilas de concentraccedilatildeo de sacarose influenciaram
significativamente os resultados As menores
concentraccedilotildees (10 20 e 30 g L-1) somente diferenciaram
significativamente da maior concentraccedilatildeo (50 g L-1) que
produziu valores 0084g de MSR (Figura 2b) Pelos
resultados foi verificado que a presenccedila de sacarose
mostrou-se fundamental para o desenvolvimento da parte
aeacuterea e das raiacutezes da cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro
De fato Khan et al (2008) mostraram que o meio MS com
meia forccedila suplementado com reguladores de crescimento
(AIB e ANA) e 60 g L-1 de sacarose proporcionou maior
enraizamento em 3 variedades elite de cana-de-accediluacutecar Khan
et al (2006) tambeacutem indicaram a importacircncia da sacarose
no crescimento da parte aeacuterea em clones dessa espeacutecie
George (1996) relata que para formaccedilatildeo de raiacutezes in vitro
haacute necessidade de energia e carboidratos sendo esses
fornecidos por meio da fotossiacutentese (em condiccedilotildees
autotroacuteficas) ou oriunda de uma fonte exoacutegena de accediluacutecar
(em sistemas heterotroacuteficos ou mixotroacuteficos) O autor
verificou ainda que o aumento da concentraccedilatildeo de
sacarose de modo geral estimula o crescimento e a
formaccedilatildeo de raiacutezes de algumas espeacutecies Jaacute em outros
trabalhos na fase de enraizamento a reduccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultura vem sendo
citada como beneacutefica na melhoria da qualidade do sistema
radicular bem como na sobrevivecircncia das placircntulas
transplantadas (ANDRADE 1998)
Com relaccedilatildeo agrave MSPAMSR os tratamentos natildeo
apresentaram diferenccedila significativa apontando uma
relaccedilatildeo direta entre o crescimento das raiacutezes e da parte
MOTHEacute G P B et al88
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 2 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e as diferentes concentraccedilotildees de sacarose no meio de cultivoindependente da luz (A) Massa seca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa seca raiz (MSR) (C) Razatildeo massa seca da parteaeacuterearaiacutezes (MSPAMSR) (D) Massa foliar especiacutefica (MFE) (E) Teor estimado de clorofilas totais (valores de MPC)(F) Rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (F
vF
m) em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Cada
siacutembolo representa a meacutedia de seis repeticcedilotildees em MSPA MSR MSPA MSR e MFE e oito repeticcedilotildees em Valores deMPC e da relaccedilatildeo F
vF
m Meacutedias seguidas pela mesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
aeacuterea Essa relaccedilatildeo eacute de fundamental importacircncia para a
organizaccedilatildeo dos processos fisioloacutegicos e desenvolvimento
das plantas (TAIZ amp ZEIGER 2002) Essas partes estatildeo
relacionadas entre si e essa relaccedilatildeo eacute devida agrave dependecircncia
nutricional e fitohormonal da parte aeacuterea com a raiz
(SALISBURY amp ROSS 1992) (Figura 2c)
As diferentes concentraccedilotildees de sacarose
influenciaram a massa foliar especiacutefica (MFE) a qual
representa a quantidade de massa seca por unidade de
aacuterea da folha estimando a proporccedilatildeo relativa da superfiacutecie
assimilatoacuteria e os tecidos de sustentaccedilatildeo e condutores da
folha aleacutem de poder ser correlacionada positivamente com
a taxa fotossinteacutetica (CRUZ et al 2004) A menor
concentraccedilatildeo de sacarose apresentou o menor valor (148
g m-2) o que indica que a ausecircncia de sacarose pode
comprometer a espessura foliar bem como a capacidade
da maquinaria fotossinteacutetica (Figura 2d)
O teor de clorofila foi estimado por meio do medidor
portatil de clorofila (MPC) Os valores encontrados da
intensidade do verde foram oriundos da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha As diferentes concentraccedilotildees de
sacarose no meio de cultivo influenciaram a intensidade
de verde (Figura 2e) em que a maior concentraccedilatildeo de
sacarose apresentou o maior valor do MPC (336)
0
003
006
009
012
015
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
A (g
)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MFE
(gm
2)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
0
002
004
006
008
01
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSR
(g)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
20
22
24
26
28
30
32
34
36
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
Val
ores
de
MPC
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
000
100
200
300
400
500
600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
AM
SR
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
062
064
066
068
07
072
074
076
078
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
FvF
m
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
A
B
D
C
E
F
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 89
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
diferenciando significativamente dos demais tratamentos
Esses valores estatildeo relacionados com uma maior
quantidade de clorofilas totais em maiores teores de
sacarose Nesse caso em plantas de cana-de-accediluacutecar a
elevaccedilatildeo no teor de sacarose contribui para o incremento
do teor de clorofilas a partir de 30 g L-1 desse composto no
meio de cultivo
Com relaccedilatildeo agrave atividade do PSII avaliada por meio
da emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila a as plantas de
cana-de-accediluacutecar apresentaram alteraccedilotildees com relaccedilatildeo aos
tratamentos utilizados Estatisticamente os valores
menores da eficiecircncia fotoquiacutemica maacutexima do PSII (FvF
m)
foram verificados na concentraccedilatildeo de 20 g L-1 de sacarose
(Figura 2f) Com exceccedilatildeo das plantas crescidas nessa
concentraccedilatildeo de sacarose as demais plantas cultivadas
em meios com maiores concentraccedilotildees de sacarose natildeo
apresentaram diferenccedilas significativas para a caracteriacutestica
FvF
m Por meio dos resultados relacionados aos efeitos
da concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo sobre as
caracteriacutesticas de crescimento a produccedilatildeo de biomassa
estaria mais relacionada agrave oferta de carbono no meio de
cultivo do que a eficiecircncia na maquinaria fotoquiacutemica das
plantas
A qualidade do fluxo de foacutetons fotossinteacutetico (FFF)
teve influecircncia relevante nas caracteriacutesticas MSPA MSR
MFE e valores do MPC A luz considerada vermelha emitida
pelas lacircmpadas GroLux proporcionou maiores valores das
caracteriacutesticas supracitadas Tais resultados poderiam estar
relacionados a um maior ganho de carbono por meio de um
aumento da taxa fotossinteacutetica liacutequida eou indiretamente
causado por alteraccedilotildees fitormonais causadas pela
modificaccedilatildeo no espectro luminoso (CAMPELL amp
BONNER 1986) Ainda na presenccedila da luz vermelha houve
favorecimento para a produccedilatildeo de biomassa tanto na parte
FIGURA 3 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e os diferentes tipos de luz (Branca e Vermelha) (A) Massaseca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa foliar especifico (MFE) (C) Massa seca raiz (MSR) e (D) Teor estimado declorofilas totais (Valores de MPC) Cada siacutembolo representa a meacutedia sendo 15 repeticcedilotildees em MSPA MSR e valores deMPC e 20 repeticcedilotildees em MFE em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Meacutedias seguidas pelamesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
14
16
18
20
22
LUZ
MFE
(gm
2)
Luz branca
Luz vermelha
0
001
002
003
004
005
LUZ
MSR
(g)
Luz branca
Luz vermelha
002
004
006
008
01
012
014
LUZ
MSP
A (g
)
Luz branca
Luz vermelha
20
22
24
26
28
30
LUZ
Val
ores
de
MP
C
Luz branca
Luz vermelha
A
C
B
D
MOTHEacute G P B et al90
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
aeacuterea como no sistema radicular A luz branca apresenta
uma composiccedilatildeo espectral que pode variar e causar
respostas diferenciadas na cultura in vitro A
predominacircncia na emissatildeo de foacutetons na regiatildeo do vermelho
ateacute o azul pode estimular a induccedilatildeo de calos quebrar a
moleacutecula de AIA e ainda estimular a induccedilatildeo de brotos
(BARRUETO CID 2001 CHAMOVITZ amp DENG 1996)
As plantas cultivadas em maiores concentraccedilotildees
(40 e 50 gL-1) de sacarose e aclimatadas em luz vermelha
tiveram melhores resultados do que nos outros tratamentos
(Figura 2 e 3)
CONCLUSOtildeES
Em cana-de-accediluacutecar cultivada em condiccedilotildees in vitro
e em frascos fechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de
sacarose no meio de cultivo promoveu aumentos na
mateacuteria seca da parte aeacuterea e da raiz na massa foliar
especiacutefica e na intensidade de cor verde das folhas
estudadas Natildeo houve alteraccedilatildeo na eficiecircncia fotoquiacutemica
maacutexima do PSII A luz vermelha associada agrave concentraccedilotildees
de sacarose de 40 e 50gL-1 parece ter uma resposta
somatoacuteria tanto na produccedilatildeo de parte aeacuterea e raiz quanto
na massa foliar especiacutefica e no teor de clorofila
A justificativa para o natildeo-comprometimento da
sacarose no meio sobre as caracteriacutesticas relacionadas agrave
fotossiacutentese estudadas neste trabalho como exemplo o
teor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o
rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (FvF
m) pode estar
relacionada com a alta capacidade dessa espeacutecie em
armazenar sacarose nos tecidos
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Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
(Recebido em 20 de junho de 2008 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EFFECTS OF AUXINS AND CYTOKININS ON IN VITRODEVELOPMENT OF Alpinia purpurata K SCHUM AND
PHENOLIC COMPOUNDS PRODUCTION
EFEITO DE AUXINAS E CITOCININAS NO DESENVOLVIMENTO IN VITRO DEAlpinia purpurata K SCHUM E PRODUCcedilAtildeO DE SUBSTAcircNCIAS FENOacuteLICAS
CRISTIANE PIMENTEL VICTOacuteRIO1 IACINETE PAMPLONA DA CRUZ2 ALICE SATO3RICARDO MACHADO KUSTER4 CELSO LUIZ SALGUEIRO LAGE5
1Doutora em Ciecircncias Bioloacutegicas (Biofiacutesica) Instituto de Biofiacutesica Carlos Chagas FilhoLab Fisiologia Vegetal Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050 21952-590 Rio de Janeiro RJ crispvbiofufrjbr
2Estudante de Farmaacutecia bolsista PIBICUFRJ3Doutora em Biotecnologia Vegetal Prof Dep Botacircnica Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro Av Pasteur 458
22290-040 Rio de Janeiro RJ alicesatouniriobr4Doutor Prof Laboratoacuterio de Fitoquiacutemica Nuacutecleo de Pesquisas de Produtos Naturais (NPPN) Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco H 21941-902 Rio de Janeiro RJ kusternppnufrjbr
5Doutor Prof IBCCFo Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050
21952-590 Rio de Janeiro RJ clslagebiofufrjbr
ABSTRACTAlpinia purpurata K Schum is largely used in
ornamentation and scarcely present itself in folk medicine Studiesusing plant tissue culture technique under standardized conditionpermit to evaluate plant physiological morphological andphytochemical responses to exogenous plant growth regulatorThis work consisted in the establishment of in vitro A purpurataplants using different concentrations of auxin and cytokinins inmg L-1 IAA 2 TDZ 2 and 4 IAA 2 + TDZ 2 IAA 2 + BAP 2Additionally it was determined the content of phenoliccompounds in the leaves of field and in vitro plants using Folin-Ciocalteau method Buds from inflorescence A purpurata weredisinfested and introduced in solid MS medium to initiate culturesThe direct organogenesis process was fast and satisfactoryproducing elongated plants with a developed radicular systemThe rooting percentage reached 100 for all treatments after 2months Cytokinins and auxins were important for the increasingof the leaves quantity (42 to 51) and shoot elongation (40 cm)Liquid MS0 presented the favorable results for fastmicropropagation and higher production of shoots providingplants ready to be acclimatized In vitro plants cultivated underMS0 produced 93 of phenolic compounds in comparison withfield plants (100) Through High Performance LiquidChromatographic it was verified similar chromatographic profilesbetween field and in vitro plant extracts
Index terms Folin-Ciocalteau HPLC micropropagation tissueculture Zingiberaceae Alpinia purpurata
RESUMOAlpinia purpurata K Schum eacute uma espeacutecie muito
utilizada como ornamental e possui escassas indicaccedilotildees de usona medicina popular Estudos utilizando teacutecnicas de cultura detecidos vegetais permitem a partir de condiccedilotildees padronizadas
avaliar as respostas fisioloacutegicas morfoloacutegicas e fitoquiacutemicas dosvegetais aos fitorreguladores exoacutegenos Este trabalho consistiuno estabelecimento de plantas de A purpurata in vitro utilizando-se diferentes concentraccedilotildees de auxina e citocininas (mg L-1) AIA2 TDZ 2 e 4 AIA 2 + TDZ 2 AIA 2 + BAP 2 Verificou-setambeacutem o conteuacutedo de substacircncias fenoacutelicas nas folhas de plantasde campo e in vitro atraveacutes do meacutetodo de Folin-CiocalteauBrotos oriundos da inflorescecircncia de A purpurata foramdesinfestados e introduzidos em meio MS soacutelido para iniciar asculturas O processo de organogecircnese direta foi raacutepido esatisfatoacuterio produzindo plantas alongadas e com sistema radiculardesenvolvido A porcentagem de enraizamento atingiu 100 paratodos os tratamentos ao final de 2 meses As citocininas e auxinasforam importantes para incrementar o nuacutemero de folhas (42 a51) e alongamento dos brotos (40 cm) em comparaccedilatildeo com omeio controle O MS0 liacutequido foi o mais favoraacutevel para raacutepidapropagaccedilatildeo in vitro e maior produccedilatildeo de brotos com suprimentode plantas aptas a serem aclimatizadas Plantas in vitro cultivadasem meio MS0 produziram 93 de fenoacuteis totais em relaccedilatildeo agravesplantas de campo (100) Atraveacutes da Cromatografia Liacutequida deAlta Eficiecircncia foi verificada semelhanccedila entre os perfiscromatograacuteficos dos extratos de plantas de campo e in vitro
Termos para indexaccedilatildeo Folin-Ciocalteau CLAEmicropropagaccedilatildeo cultura de tecidos vegetais ZingiberaceaeAlpinia purpurata
INTRODUCTION
Alpinia purpurata K Schum is widely used as
ornamental plant in several tropical and subtropical areas
with high international market demand (KRESS et al 2002
SANGWANANGKUL et al 2008) In folk medicine it is
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 93
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
used for cough in Venezuela and presents antibacterial
activity (BERMUacuteDEZ amp VELAacuteSQUEZ 2002 ZOGHBI et
al 1999) Recent studies have showed the phytochemical
potential of this species (VICTOacuteRIO et al 2007 2008)
The vegetative propagation through rhizome is the
main way of reproduction of this species According to
Moroacuten (1987) for the propagation of A purpurata in
greenhouse the time is twice more than in in vitro systems
Plant tissue culture techniques have been employed in
Brazil since 1950 and the main advantages include the
continuous and fast production of aseptic and selected
plants These techniques permit a commercial-scale
production of plants (ROUT et al 2006) and some studies
have showed them as an alternative for optimizing
secondary metabolites production (RAO amp
RAVISHANKAR 2002) The micropropagation of A
purpurata supplies may be a source for ornamental and
medicinal raw material (MULABAGAL amp TSAY 2004
POMPELLI et al 2007)
Addition of auxins and cytokinins in the culture
media are essential to improve and regulate growth and
morphogenesis of the cultures (CHITRA amp PADMAJA
2005 KYOZUKA 2007) Besides several studies have
reported the effects of plant growth regulators in in vitro
phenolic production (SANTOS-GOMES et al 2002
THIEM 2003) We intended to develop a protocol for in
vitro production of A purpurata plants and to evaluate
the effects of auxins and cytokinins on plant development
and compounds phenolic production
MATERIAL AND METHODS
Plant Material
Buds from inflorescence of donor plants of Alpinia
purpurata red inflorescence were used as source of plant
material to initiate in vitro cultures Voucher specimen was
deposited at the Herbarium of Rio de Janeiro Botanical
Garden under accession number RB 433484 Buds were
collected and washed with running water using nylon
brush for removing residues The sterilization process was
concluded in four steps in sterile ambient after dissection
of leaves 20 of commercial bleach solution for 40 min
followed by immersion in distilled water plus commercial
detergent solution for 15 min dipped in 70 ethanol
washed for 10 min in 30 of commercial bleach solution
and rinsed with sterile distilled water three after each step
Establishment of in vitro cultures
Explants were subcultured into glasses (16 x 8 cm)
containing 50 ml of culture medium Murashige amp Skoog
(1962) supplemented with 3 of sucrose 148 igraveM thiamine-
Different letters indicate significant differences at plt 005 level Tukey s test n e 30
VICTOacuteRIO C P et al96
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
FIGURE 2 In vitro development of Alpinia purpurata plants in MS medium under different plant growth regulators(mgl-1) (A) Sequence of development 1 month (I) 2 months (II) and 3 months (III) (B) shoot height after 2 months (C)shoot height and (D) percentage of shoots after 3 months Different letters indicate significant differences at plt 005level Tukey s test n e 30 100 correspond to 30 shoots per explant within 1 year
advantage of in vitro production of secondary metabolites
is the possibility to control environment and nutritional
factors Data show high level of phenolics in in vitro
cultures of A purpurata (93) compared with field plants
(100) (Figure 3A) Through reversed-phase HPLC was
found similarity between field and in vitro plants profiles
(Figure 3B-C) The peaks 1 2 and 3 presented
characteristics of phenolic compounds verified through
UV spectra obtained by HPLC A purpurata is not currently
used in folk medicine and these results may indicate the
presence of therapeutic resource in its phytochemistry
The preliminary investigation of phenolic in
organogenic cultures of A purpurata using Folin-
Ciocalteau reagent and HPLC analysis brings perspectives
about the production of antioxidant compounds by this
species In addition the establishment of tissue culture of
A purpurata may be a good alternative to produce aseptic
plants and its bioactive metabolites
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 97
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
ACKNOWLEDGEMENTS
C P Victoacuterio acknowledges the fellowship from
CAPES and PROEX financial support
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GROWTH CURVE PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE ACTIVITY AND TOTALPHENOL LEVELS IN CALLUS OF Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville
(FABACEAE-MIMOSOIDEAE)
ANA HORTEcircNCIA FONSEcircCA CASTRO1 MILLER MARANI LIMA2 RENATO PAIVA3 AMAURI ALVES DE ALVARENGA4 MIRELLE OLIVEIRA SOacuteTER5
1Doutora Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG2Bolsista ICFAPEMIG Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG3PhD Universidade Federal de LavrasUFLA 37200-000 Lavras MG4Doutor Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 37200-000 Lavras MG renpaivauflabr5Acadecircmica Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG
RESUMOObjetivou-se estabelecer a curva de crescimento e avaliar
a atividade da fenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis etaninos totais em calos de barbatimatildeo explantes foliares foraminoculados em meio MS suplementado com 30 g L-1 sacarose eacrescidos de 905 M de 24-D O crescimento a atividade dafenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis e taninos totaisforam avaliados a cada 10 dias durante 110 dias A curva decrescimento dos calos apresentou um padratildeo sigmoidal com cincofases distintas Os teores meacutedios de fenoacuteis totais acompanharamas variaccedilotildees observadas para a atividade enzimaacutetica Alta atividadee maiores teores de fenoacuteis totais foram observados no explanteinicial com reduccedilotildees progressivas ateacute a fase linear Na faseestacionaacuteria observaram-se incrementos importantes naatividadeda fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais Natildeo foidetectada a presenccedila de taninos totais nos calos
Termos para indexaccedilatildeo Barbatimatildeo cultivo in vitro plantamedicinal Stryphnodendron adstringens
ABSTRACTIn order to establish growth curve phenylalanine ammonia-
lyase (PAL) activity and total phenol and tannin levels inStryphnodendron adstringens leaf explants were inoculated inMS medium supplemented with 30 g L-1 sucrose and 905 M24-D The growth PAL activity and total phenol and tanninlevels were evaluated at 10 days intervals during 110 days Callusgrowth curve presented a sigmoid shape with five different phasesAverage levels of total phenol followed the changes observed forenzymatic activity High activity and higher levels of total phenolwere observed in initial explants with progressive reductions untilthe linear phase Increases in phenylalanine ammonia-lyase activityand total phenols levels were observed in stationary phase Notannins were observed on callus
Index terms Stryphnodendron adstringens In vitro CultureMedicinal Plant
INTRODUCcedilAtildeO
Atualmente um consideraacutevel esforccedilo tem sido feito
com o intuito de se produzir fitoteraacutepicos com maiores
concentraccedilotildees de substacircncias ativas vegetais atraveacutes de
culturas de ceacutelulas ou tecidos Segundo Taniguchi et al
(2002) dentre as diferentes teacutecnicas de cultivo in vitro a
cultura de calos tem apresentado grande importacircncia para
a propagaccedilatildeo e produccedilatildeo in vitro de espeacutecies de interesse
medicinal A desdiferenciaccedilatildeo e induccedilatildeo de regeneraccedilatildeo
das plantas a partir de calos satildeo muitas vezes processos
difiacuteceis de serem obtidos e podem demandar algum tempo
As auxinas tecircm sido amplamente utilizadas nos meios de
cultivo para a induccedilatildeo de calos e geralmente dependendo
da concentraccedilatildeo causam elongaccedilatildeo celular e expansatildeo ou
divisatildeo celular Em geral com o uso de baixas
concentraccedilotildees de auxinas predomina a formaccedilatildeo de raiacutezes
adventiacutecias enquanto que altas concentraccedilotildees induzem a
formaccedilatildeo de calos A interaccedilatildeo entre auxinas e citocininas
tambeacutem eacute muito utilizada para a induccedilatildeo de calogecircnese
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998)
Durante a calogecircnese eacute importante estabelecer-se
a curva de crescimento de calos o que propicia a
identificaccedilatildeo das fases distintas de crescimento da espeacutecie
A partir deste estudo pocircde-se determinar o momento exato
de repicagem dos calos para um meio fresco ou a
CASTRO A H F et al100
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
possibilidade de sua utilizaccedilatildeo em suspensotildees celulares
visando a otimizaccedilatildeo da produccedilatildeo de metaboacutelitos
secundaacuterios em espeacutecies medicinais (GEORGE 1996) O
crescimento in vitro de calos geralmente apresenta um
padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas Segundo Smith
(1992) a fase lag se caracteriza como fase de maior produccedilatildeo
de energia correspondendo ao periacuteodo em que as ceacutelulas
se preparam para a divisatildeo visando sua expansatildeo Ocorre o
iniacutecio da mobilizaccedilatildeo de metaboacutelitos primaacuterios sem qualquer
divisatildeo celular siacutentese de proteiacutenas e de compostos
especiacuteficos Essa fase resulta em um pequeno crescimento
dos calos A fase exponencial eacute biossinteacutetica Observa-se o
maior crescimento dos calos devido agrave maacutexima taxa de divisatildeo
celular caracteriacutestica desse periacuteodo O nuacutemero de ceacutelulas
aumenta Na fase linear haacute diminuiccedilatildeo da divisatildeo celular
mas aumento de volume celular e a fase de desaceleraccedilatildeo eacute
o momento em que as culturas devem ser transferidas para
outro meio devido agrave reduccedilatildeo de nutrientes produccedilatildeo de
produtos toacutexicos secagem do aacutegar e reduccedilatildeo do oxigecircnio
no interior das ceacutelulas Na fase estacionaacuteria ocorre maior
acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
O barbatimatildeo [Stryphnodendron adstringens
(Mart) Coville Fabaceae-Mimosoideae) eacute uma importante
espeacutecie medicinal do cerrado com altos teores de
compostos polifenoacutelicos em especial os taninos Possui
grande distribuiccedilatildeo e importacircncia econocircmica para o estado
de Minas Gerais sendo empregado como adstringente e
cicatrizante no combate de amidalite faringite
hemorroacuteidas leucorreacuteias erupccedilotildees cutacircneas diarreacuteias e
como agentes antiinflamatoacuterios (LIMA et al 1998)
A fenilalanina amocircnia-liase (EC 4315) eacute uma
enzima-chave e regulatoacuteria da rota biossinteacutetica dos
fenilpropanoacuteides e de seus derivados e catalisa a
desaminaccedilatildeo do aminoaacutecido L-fenilalanina em aacutecido trans-
cinacircmico sendo esse o primeiro passo para a biossiacutentese
dos fenoacutelicos vegetais (ASSIS et al 2001) De acordo com
Rivero et al (2001) os niacuteveis dessa enzima podem flutuar
significativamente em intervalos relativamente curtos em
resposta a uma ampla variedade de estiacutemulos como o
fotoperiacuteodo fitocromo mudanccedilas de temperatura radiaccedilatildeo
UV deficiecircncia de nutrientes reguladores de crescimento
virais e ataque de insetos bem como o estaacutedio de
desenvolvimento vegetal e o grau de diferenciaccedilatildeo de
ceacutelulas e tecidos (SOLECKA amp KACPERSKA 1995)
Devido agrave exploraccedilatildeo irracional pelas induacutestrias de
curtimento do couro o barbatimatildeo encontra-se ameaccedilado
de extinccedilatildeo Assim devem-se melhorar as teacutecnicas de
propagaccedilatildeo encorajar seu cultivo e criar vias alternativas
para a produccedilatildeo de tanino em larga escala a partir de
fontes naturais
Objetivou-se estabelecer a curva de crescimento e
avaliar a atividade da fenilalananina amocircnia-liase e os teores
de fenoacuteis e taninos totais em calos de barbatimatildeo
MATERIAL E MEacuteTODOS
As etapas experimentais foram realizadas entre
fevereiro de 2007 e janeiro de 2008 no Centro Universitaacuterio
de Lavras (UNILAVRAS) e na Universidade Federal de
Lavras (UFLA)
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento foi obtida a partir da
inoculaccedilatildeo de segmentos foliares de 025 cm2 de aacuterea
empregados como explantes em meio MS (MURASHIGE
amp SKOOG 1962) suplementado com 30 g L-1 sacarose e
acrescidos de 905 M de 24-D Os meios foram
solidificados com aacutegar na proporccedilatildeo de 7 g L-1 e o pH
ajustado para 57 plusmn 01 antes da autoclavagem por 20 min
Apoacutes inoculaccedilatildeo os explantes foram transferidos para sala
de crescimento onde foram incubados na presenccedila de luz
agrave temperatura de 27 plusmn 1 oC fotoperiacuteodo de 16 horas e
DFFFA= 25 mol m-2 s-1
Foram feitas pesagens do material inoculado fresco
a partir do dia da inoculaccedilatildeo (tempo 0) ateacute ser atingida a
fase de desaceleraccedilatildeo em intervalos de 10 dias O
porcentual de crescimento dos calos foi determinado pela
equaccedilatildeo proposta por Lameira (1997)
crescimento = Pf Pi
Pf
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 101
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
onde
Pf = Mateacuteria seca final
Pi = Mateacuteria seca inicial
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado sendo cada pesagem composta
por duas repeticcedilotildees e cada repeticcedilatildeo pela meacutedia de 10
tubos cada tubo contendo um explante Os dados obtidos
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia e analisados
estatisticamente utilizando-se o Sistema de Anaacutelise de
Variacircncia para Dados Balanceados (FERREIRA 2000)
Determinaccedilotildees da atividade da fenilalanina amocircnia-liasee teores de fenoacuteis e taninos totais
Calos obtidos na curva de crescimento foram
imersos em nitrogecircnio liacutequido e posteriormente
armazenados em Freezer Forma Scientific a -86 oC ateacute o
momento de serem utilizados na determinaccedilatildeo da atividade
enzimaacutetica Outros calos assim como aqueles obtidos no
experimento com a sacarose foram liofilizados para
determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis e taninos totais
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase
O procedimento descrito por Cheng amp Breen (1991)
com algumas modificaccedilotildees foi utilizado para extraccedilatildeo e
determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica
Calos congelados (5 g) foram triturados
homogeneizadas com acetona 80 e congelados por 15
minutos O homogenato foi filtrado e o pelet foi seco atraveacutes
de vaacutecuo
O extrato proteacuteico foi obtido homogeneizando-se
05 g do pelet seco em 5 mL de tampatildeo borato de soacutedio 01
M pH= 88 contendo 5 mM de -mercaptoetanol 2 mM
de EDTA e 4 (pv) de PVP a 4oC Depois de 1h o
homogenato foi centrifugado a 27000 g por 30 minutos a
4 oC A mistura de reaccedilatildeo foi constituiacuteda por 05 mL de L-
fenilalanina 30 M 30 mM de tampatildeo borato de soacutedio pH=
88 e 1 mL de extrato cru num volume total de 3 mL O
substrato foi adicionado apoacutes 10 minutos de preacute-incubaccedilatildeo
e a reaccedilatildeo foi interrompida com 01 mL de HCl 6 N A
atividade da fenilalanina amocircnia-liase foi determinada pela
produccedilatildeo de cinamato apoacutes 90 minutos agrave 30 oC sob
agitaccedilatildeo contiacutenua medida pela variaccedilatildeo da absorbacircncia a
290 nm A atividade especiacutefica da enzima foi definida em
nmol de aacutecido cinacircmicohmg de proteiacutena
Fenoacuteis totais
Amostras de calos liofilizados foram trituradas em
micromoinho e armazenadas em frascos fechados
protegidos da luz
Aproximadamente 500 mg de calos liofilizados e
triturados foram extraiacutedos cinco vezes com 5 mL de uma
mistura de metanolaacutegua (11) sob refluxo O volume final
do extrato foi completado para 25 mL
Uma aliacutequota de 100 L do extrato foi utilizada para
a determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis totais atraveacutes do
meacutetodo de Folin-Dennis segundo as normas da AOAC
(1970) As determinaccedilotildees foram feitas em triplicata e o
resultado foi expresso em porcentagem de aacutecido tacircnico
por grama de calo seco
Taninos Totais
A determinaccedilatildeo dos teores de taninos totais foi
realizada atraveacutes do Meacutetodo de Difusatildeo Radial de acordo
com Hagerman (1987)
Um volume de 5 mL do extrato foi concentrado a 37oC e posteriormente retomado com 05 mL de uma mistura
de metanolaacutegua (11) Uma aliacutequota de 15 mL foi utilizada
para a determinaccedilatildeo Todas as determinaccedilotildees foram feitas
em triplicata O resultado foi expresso em percentagem de
tanino por grama de calo seco
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento dos calos seguiu o padratildeo
sigmoidal apresentando cinco fases distintas lag
exponencial linear desaceleraccedilatildeo e estacionaacuteria (Figura
1) A fase lag onde as ceacutelulas do explante se preparam para
a divisatildeo celular e produccedilatildeo de energia ocorreu ateacute o 30o
dia apoacutes a inoculaccedilatildeo com calos apresentando um
crescimento de aproximadamente 73 A segunda fase
exponencial estendeu-se do 31o
ao 50o
dia de cultivo
com 70 de crescimento periacuteodo esse caracterizado pela
CASTRO A H F et al102
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
maacutexima divisatildeo celular A fase linear ocorreu entre o 51o ao
70o
dia e natildeo se verificou crescimento dos calos nesse
periacuteodo Entre o 71o
e 100o
dia observou-se a fase de
desaceleraccedilatildeo com 28 de crescimento e a partir do 101o
dia a cultura entrou na fase estacionaacuteria Segundo Smith
(1992) na fase de desaceleraccedilatildeo os calos devem ser
transferidos para um novo meio de cultura devido agrave
reduccedilatildeo de nutrientes secagem do aacutegar e acuacutemulo de
substacircncias toacutexicas
FIGURA 1 Curva de crescimento de calos deStryphnodendron adstringens obtidos a partir de segmentosfoliares inoculados em meio MS contendo 905 M de 24-D e 30 g L-1 de sacarose
0
002
004
006
008
01
012
014
016
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Mat
eacuteria
sec
a (g
)
De maneira semelhante essa mesma curva de
crescimento pode ser dividida em trecircs fases fase de
crescimento lento (do dia da inoculaccedilatildeo ateacute o 30o dia) fase
de crescimento ativo (do 31o
ao 70o
dia) e fase de
estabilizaccedilatildeo (71o
dia em diante) sendo indicada a
repicagem entre o 71o ao 100o dia
A curva de crescimento para calos de
barbatimatildeo apresentou um padratildeo semelhante ao de outras
espeacutecies medicinais de cerrado como Byrsonima
intermeacutedia A Juss (NOGUEIRA et al 2008) Croton
(BONILLA 2002) e Derris sp (CONCEICcedilAtildeO 2000)
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteise taninos totais
Na figura 2 encontram-se representados os
resultados da atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase
e dos teores de fenoacuteis totais verificados durante o periacuteodo
experimental O explante inicial apresentou um teor meacutedio
de 065 de taninos totais natildeo se detectando entretanto
a presenccedila de taninos nos demais calos formados
Conforme pode-se observar a atividade da
fenilalanina amocircnia-liase situou-se entre 016 e 196 mol
de aacutecido cinacircmico h-1 g-1 de mateacuteria fresca (plt005) (figura
2A) A atividade apresentou-se maacutexima no explante inicial
(dia 0) e reduziu progressivamente ateacute o 70o dia periacuteodo
esse correspondente agraves fases lag exponencial e linear
Entre o 71o ao 100o dia ou seja na fase de desaceleraccedilatildeo a
atividade enzimaacutetica indicou uma tendecircncia em se manter
constante e a partir do 101o dia (fase estacionaacuteria) verificou-
se um pequeno incremento nessa atividade da ordem de
26 De maneira semelhante os teores meacutedios de fenoacuteis
totais acompanharam as variaccedilotildees observadas para a
atividade enzimaacutetica e situaram-se em uma faixa de 029 a
399 sendo o teor meacutedio maacuteximo observado no explante
inicial (figura 2B) Os teores de fenoacuteis totais reduziram
significativamente ateacute o 60o dia (fase lag e exponencial) e a
partir do 61o
ao 90o
dia permaneceram praticamente
constantes com os menores niacuteveis observados durante o
periacuteodo experimental em torno de 037 em meacutedia A partir
da fase estacionaacuteria (100o dia) verificou-se um aumento de
65 nos teores meacutedios de fenoacuteis totais
Estes resultados mostraram-se muito interessantes
do ponto de vista fisioloacutegico e fitoquiacutemico e corroboram
com relatos de Conceiccedilatildeo (2000) e Lameira (1997) os quais
citam que a fase estacionaacuteria corresponde ao periacuteodo em
que ocorre maior acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
Apesar de esses teores serem baixos eacute importante ressaltar
que o meio de cultura pode ser otimizado para produccedilatildeo
em larga escala de fenoacuteis totais e taninos uma vez que
foram obtidos in vitro a partir de segmentos foliares e de
forma convencional satildeo extraiacutedos da casca da planta adulta
cultivada in vivo
A presenccedila de baixos teores de fenoacuteis e a ausecircncia
de taninos pode estar associada agrave alta atividade metaboacutelica
relacionada ao crescimento dos calos (mitose) o que
demanda elevada quantidade de substrato necessaacuterio agrave
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 103
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
FIGURA 2 Valores meacutedios de atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase (A) e teores de fenoacuteis totais (B) emStryphnodendron adstringens durante o periacuteodo experimental
0
05
1
15
2
25
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Ativ
idad
e da
Fen
ilala
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mm
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acircmic
o h-1
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0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120Dias
Fenoacute
is T
otai
s (
)
B
produccedilatildeo de energia Segundo Botta et al (2001) a
diferenciaccedilatildeo celular assim como a desaceleraccedilatildeo da
atividade mitoacutetica progressivamente permite o acuacutemulo de
compostos derivados do metabolismo secundaacuterio Para
Lavola et al (2000) e Pentildeuelas et al (1997) variaccedilotildees nos
teores de metaboacutelitos secundaacuterios natildeo podem ser explicadas
somente pelas diferenccedilas na disponibilidade de carboidratos
devendo-se considerar tambeacutem a disponibilidade de
precursores para a sua siacutentese e as mudanccedilas nos padrotildees
de siacutentese e catabolismo desses compostos
CONCLUSOtildeES
A curva de crescimento para calos de barbatimatildeo
apresentou um padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas
sendo indicada a repicagem entre o 71o ao 100o dia
Alta atividade e maiores teores de fenoacuteis totais
foram observados no explante inicial com reduccedilotildees
progressivas ateacute a fase linear Na fase estacionaacuteria
observaram-se incrementos importantes na atividade da
fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais
Natildeo se detectou a presenccedila de taninos totais nos
calos durante a determinaccedilatildeo da curva de crescimento na
presenccedila de 904 M de 24-D
AGRADECIMENTOS
Agrave Fundaccedilatildeo de Amparo agrave Pesquisa do Estado de
Minas Gerais (FAPEMIG) pelo suporte financeiro ao
projeto e concessatildeo de bolsa de iniciaccedilatildeo cientiacutefica
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(Recebido em 14 de fevereiro de 2007 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EMBRIOGEcircNESE SOMAacuteTICA DIRETA DE Coffea arabica LCONCENTRACcedilOtildeES DE NH4NO3 E DE KNO3 NO
DESENVOLVIMENTO DE EMBRIOtildeES1
DIRECT SOMATIC EMBRYOGENESIS OF Coffea arabica L CONCENTRATIONS OFNH4NO3 AND KNO3 ON THE DEVELOPMENT OF EMBRYOS
JULIANA COSTA DE REZENDE2 MOACIR PASQUAL3 SAMUEL PEREIRA DE CARVALHO3ESTER ALICE FERREIRA4 FLAVIA CARVALHO SANTOS5
1Artigo extraiacutedo da dissertaccedilatildeo de mestrado da primeira autora apresentada a Universidade Federal de LavrasUFLA2Pesquisadora MSc Epamig Campus da UFLA Cx P 176 372000-000 Lavras MG julianacostaepamigbr3Professor Dr Titular do Departamento de AgriculturaDAG Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 372000-000
Lavras MG pasqualuflabr samuelpcuflabr4Pesquisadora Dra Epamig Cx P 351 Uberaba MG esterepamigbr5Doutoranda em Fitotecnia Bolsista Capes flavinha3010yahoocombr
RESUMOO melhoramento geneacutetico do cafeeiro tem incorporado
atraveacutes de cruzamentos ganhos geneacuteticos para produtividade eoutras caracteriacutesticas de interesse agronocircmico A introduccedilatildeo demeacutetodos biotecnoloacutegicos para auxiliar os programas demelhoramento geneacutetico tem-se mostrado bastante uacutetilprincipalmente em culturas perenes como eacute o caso do cafeeiroUm importante meacutetodo de propagaccedilatildeo in vitro de plantas deCoffea eacute a embriogecircnese somaacutetica direta Objetivou-se com estetrabalho avaliar os efeitos de diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3 no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos
diretos de C arabica L cv Rubi Os tratamentos foramconstituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH
4NO
3 (0 4125 825
12375 e 1650 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3 (0 475
950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS O experimentofoi mantido por 150 dias em sala de crescimento com irradiacircnciaem torno de 32 igraveM m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas comtemperatura de 25 plusmn 1oC As variaacuteveis avaliadas foram nuacutemero defolhas comprimento da parte aeacuterea e massa fresca da parte aeacutereaOs resultados indicaram que a utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO
3combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de NH
4NO
3 como a mais
indicada para o desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos de Carabica L Os resultados apontam ainda que a ausecircncia denitrogecircnio promove o maior peso das placircntulas
Termos para indexaccedilatildeo Nitrogecircnio cafeacute cv Rubi Coffeaarabica
ABSTRACTCoffee breeding programs have incorporated using
artificial crossings genetic benefits for productivity and othercharacteristics of agronomic interest The introduction ofbiotechnology methods to improve genetic breeding programshas demonstrated to be useful mainly in perennial cultures ascoffee species An important method of in vitro propagation ofCoffea plants is somatic embryogenesis Therefore the objectiveof this work was to obtain the most adequate combinations ofculture medium components for plantlets growth The influence
of NH4NO
3 (0 4125 825 12375 and 1650 mg L-sup1) of MS
formulation x KNO3
(0 475 950 1425 and 1900 mg L-sup1) MSformulation were tested for the development of somatic embryosThe experiments were maintained in a growth room under lightintensity of 32 microMol m-2 s-1 photoperiods of 16 hours andtemperature of 25 plusmn 1o C The characteristics evaluated were leafnumber shoot length and shoot fresh matter The results indicatedthat the use of 950 mgL-sup1 KNO
3 combined with 1155 to 2475
mg L-sup1 NH4NO
3 is the most indicated for the development of
somatic embryos of C arabica L The absence of nitrogenpromotes the largest weight of plantlets
Index Terms Nitrogen Coffee cv Rubi Coffea arabica
INTRODUCcedilAtildeO
O nitrogecircnio eacute um dos elementos necessaacuterios e
ativos para diversos processos metaboacutelicos da planta pois
eacute constituinte de vaacuterias biomoleacuteculas essenciais tais como
aminoaacutecidos aacutecidos nucleacuteicos enzimas e proteiacutenas e
juntamente com a sacarose eacute o principal componente em
quantidade no meio de cultura
O nitrogecircnio difere dos demais macronutrientes por
apresentar-se na forma de caacutetion (amocircnio) e acircnion (nitrito
e nitrato) contribuindo de forma efetiva tanto no
metabolismo celular como na regulaccedilatildeo do seu potencial
osmoacutetico Atua como agente tamponante e favorece a
absorccedilatildeo de outros iacuteons presentes no meio (NAGAO et
al 1994) A vantagem dos tecidos vegetais receberem pelo
menos parte do nitrogecircnio sob uma forma prontamente
reduzida eacute que haveria uma diminuiccedilatildeo no gasto de energia
REZENDE J C de et al106
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
que ocorre na conversatildeo enzimaacutetica de nitrato a amocircnio
(GEORGE et al 1987) O efeito dessas diferentes formas
inorgacircnicas separadamente pode promover ou natildeo o
crescimento e desenvolvimento de determinadas espeacutecies
de plantas enquanto a combinaccedilatildeo das duas estimula o
crescimento de muitas espeacutecies in vitro (CALDAS et al
1998)
De acordo com George amp Sherrington (1984) o
desenvolvimento e morfogecircnese em cultura de tecidos satildeo
acentuadamente influenciados pela disponibilidade de
nitrogecircnio e pela forma como o mesmo eacute fornecido Alta
concentraccedilatildeo de sais do meio MS comparada a outros
meios especificamente dos niacuteveis de amocircnio (-NH4) e
nitrato (-NO3) pode ser criacutetica no processo de morfogecircnese
e crescimento (SAKUTA amp KOMAMINE 1987) estando
pois a demanda energeacutetica fornecida pelo metabolismo de
carboidratos e a assimilaccedilatildeo destes iacuteons diretamente
relacionada com o sucesso da cultura in vitro
Sato (1994) estudou o efeito de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio sobre a propagaccedilatildeo de trecircs
diferentes clones de geacuterbera de vaso (Gerbera jamesonii
Adlam) e concluiu que a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio do
MS completo inibe a regeneraccedilatildeo de brotos enquanto a
utilizaccedilatildeo de concentraccedilotildees diluiacutedas favorece a induccedilatildeo
dos brotos Bespalhok et al (1992) estudaram a
concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia na induccedilatildeo de brotos
em estevia (Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni) e
constataram que a concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia do
MS eacute toacutexica Obteve maior induccedilatildeo de brotaccedilotildees usando
frac14 de nitrato de amocircnia no meio MS Por outro lado Tadesse
et al (2000) verificaram que a accedilatildeo de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio promoveu um incremento
inicial da aacuterea foliar das placircntulas formadas mas ocasionou
efeitos relativamente negativos no aumento da aacuterea foliar
das placircntulas durante a aclimatizaccedilatildeo
O nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio sustenta
boa taxa de crescimento em algumas culturas como roseira
(Rosa gallica L) (NASH amp DAVIES 1972) e trigo (Triticum
que natildeo crescem bem com o nitrato no meio como por
exemplo o arroz (Oriza sativa L) (SARGENT amp KING 1974
YATAZAWA amp FURUHASHI 1968)
Grewal et al (1980) citados por Grattapaglia amp
Machado (1990) verificaram em culturas de eucalipto
(Eucaliptus citriodora Hook) que ao se reduzir pela
metade as concentraccedilotildees de nitrato de amocircnio e de
potaacutessio do meio MS a taxa de multiplicaccedilatildeo dobrava
Essa mesma concentraccedilatildeo proporcionou o melhor
comprimento da parte aeacuterea em embriotildees zigoacuteticos de C
arabica L (RIBEIRO 2001)
A maioria das plantas prioriza a absorccedilatildeo de NH4
+ a
NO3
- poreacutem eacute necessaacuterio encontrar o balanccedilo ideal de
NH4+NO
3- para o oacutetimo crescimento in vitro (SATO 1994)
Objetivou-se com este trabalho estudar os efeitos de
diferentes concentraccedilotildees de NH4NO
3 e KNO
3 do meio MS
no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos diretos de C
arabica L cv Rubi
MATERIAL E MEacuteTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos Vegetais do Departamento de
Agricultura da Universidade Federal de Lavras MG Foram
utilizados como explantes embriotildees de C arabica cv
Rubi provenientes da embriogecircnese somaacutetica direta Os
embriotildees somaacuteticos foram induzidos em meio MS
(MURASHIGE amp SKOOG 1962) com 50 dos sais
acrescido de 20 mg L-1 de GA3 6 mg L-1 de cinetina 8 mg
L-1 de ANA 100mg L-1 de caseiacutena hidrolisada e 400mg L-
1 de extrato de malte Os tubos de ensaio foram mantidos
durante 150 dias sob condiccedilotildees de obscuridade com
temperatura de 25 plusmn 1oC Os embriotildees somaacuteticos induzidos
nesse processo foram individualizados em tubos de
ensaio e mantidos durante 30 dias em meio MS
objetivando a homogeneizaccedilatildeo do material para a
realizaccedilatildeo deste experimento
No preparo do meio foram utilizadas soluccedilotildees-
estoque armazenadas em frascos de vidro escuro a
temperaturas em torno de 5degC Os tratamentos foram
constituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH4NO
3 (0 475
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 107
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
950 1425 e 1900 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3
(0 475 950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS
O meio foi solidificado com 5g L -1 de aacutegar e o pH
ajustado para 58 plusmn 01 utilizando NaOH 05 e 01 N ou HCl
05 N e 01 N e distribuiacutedo em tubos de ensaio cada um
recebendo 15 mL do mesmo Os tubos foram vedados com
tampas plaacutesticas transluacutecidas antes do processo de
autoclavagem a 121degC e 1 atm por 20 minutos Apoacutes o
resfriamento o meio foi levado agrave cacircmara de fluxo laminar
desinfestada com aacutelcool 70 (etanol) onde foi feita a
inoculaccedilatildeo dos explantes
Os tubos foram vedados com parafilme e mantidos
em sala de crescimento com irradiacircncia em torno de 32 igraveM
m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas com temperatura de 25 plusmn
1oC O delineamento experimental utilizado foi inteiramente
casualizado com quatro repeticcedilotildees e trecircs tubos por
parcela cada tubo contendo um explante
Aos 150 dias apoacutes a instalaccedilatildeo foram avaliadas as
variaacuteveis nuacutemero de folhas comprimento da parte aeacuterea e
peso da mateacuteria fresca das placircntulas Os valores observados
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia para dados
desbalanceados Utilizou-se o procedimento GLM
disponiacutevel no aplicativo computacional SASreg (SAS
INSTITUTE 1990)
Em situaccedilotildees em que a anaacutelise de variacircncia natildeo
confirmou a normalidade dos resiacuteduos para o comprimento
da parte aeacuterea e peso da mateacuteria fresca os dados sofreram
uma transformaccedilatildeo para garantir que essa pressuposiccedilatildeo
fosse atendida As transformaccedilotildees utilizadas foram x e5 1 02x respectivamente A variaacutevel nuacutemero de folhas
atendeu agraves pressuposiccedilotildees de normalidade A anaacutelise de
variacircncia do peso da mateacuteria fresca foi realizada por meio
do meacutetodo dos quadrados miacutenimos ponderados pelo
inverso das variacircncias de cada tratamento uma vez que
esses apresentaram heterogeneidade de variacircncias
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Houve efeito significativo das concentraccedilotildees de
NH4NO
3 e KNO
3 para o nuacutemero de folhas e peso da mateacuteria
fresca das placircntulas (Tabela 1) Observa-se que a interaccedilatildeo
entre os fatores mostrou-se significativa em relaccedilatildeo a todas
as caracteriacutesticas avaliadas a 5 de probabilidade pelo
teste F
Nuacutemero de folhas
Analisando-se as curvas de regressatildeo observa-
se na Figura 1 que houve formaccedilatildeo de maior nuacutemero
de folhas quando foram adicionados ao meio de cultura
1900 mg L-sup1 de KNO3
combinado com 12985 mg L-sup1 de
NH4NO
3 (meacutedia de 1163 folhas) Com a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 87879 mg L-sup1 de NH
4NO
3
pocircde-se observar a formaccedilatildeo meacutedia de 1001 folhas
Dessa forma como a diferenccedila eacute miacutenima justifica-se a
utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 com o objetivo de
reduccedilatildeo dos custos
TABELA 1 Anaacutelise de variacircncia dos dados relativos ao nuacutemero de folhas (NF) comprimento da parte aeacuterea (CPA) epeso da mateacuteria fresca (PMF) das placircntulas de Coffea arabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3
QM Fonte de variaccedilatildeo GL
NF CPA (cm) PMF (g)
NH4NO3 4 458337 01152 17450
KNO3 4 230014 00837 22117
NH4NO3 x KNO3 16 20447 01215 15139
Erro 135 91386 00584 05871
CV () 5162 2357 912
Significativo a 5 pelo teste F
REZENDE J C de et al108
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
FIGURA 1 Nuacutemero folhas de placircntulas de Coffea arabicacv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 combinadas com 0950 e 1900 mg L-sup1 de KNO
3
Contudo concentraccedilotildees acima de 87879 mg L-sup1 de
NH4NO
3 combinadas com 950 mg L-sup1 de NH
4NO
3 ou na
ausecircncia desse provocaram reduccedilatildeo no nuacutemero de folhas
possivelmente por toxidez causada pelo amocircnio devido agrave
sua concentraccedilatildeo mais elevada em relaccedilatildeo ao nitrato no
meio de cultura Quando o nitrogecircnio eacute fornecido somente
na forma de sais inorgacircnicos de amocircnio as ceacutelulas in vitro
apresentam sintomas de toxidez (GAMBORG amp SHYLUK
1970 YATAZAWA amp FURUHASHI 1968) demonstrando
assim a necessidade de combinaccedilatildeo dessas duas fontes
no meio de cultura
Segundo Raab amp Terry (1994) em virtude do grande
requerimento de energia fotoquiacutemica para a reduccedilatildeo
bioquiacutemica do nitrato era de se esperar que as plantas
crescessem melhor em meios com amocircnia do que em meios
com nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio no entanto
observou-se o inverso Esses mesmos autores apontam
como causa desse paradoxo o efluxo de iacuteons H+ que ocorre
devido agrave absorccedilatildeo do iacuteon amocircnio provocando acidificaccedilatildeo
do meio impedindo a absorccedilatildeo de nutrientes Segundo
Hashimoto et al (1992) a presenccedila de amocircnio in vitro
poderia acidificar o meio favorecendo a siacutentese de
carbamatos e tambeacutem a atividade de anidrase carbocircnica
Esses autores conseguiram diminuir o efeito toacutexico do
amocircnio apenas diminuindo a concentraccedilatildeo de nitrato de
amocircnio no meio MS
O nuacutemero de folhas obtidas na ausecircncia de KNO3
foi inferior quando comparado aos demais tratamentos (a
maior meacutedia observada foi 658 folhas na concentraccedilatildeo de
37626 mg L-sup1 de NH4NO
3) evidenciando assim a
importacircncia desse sal para o desenvolvimento de folhas
em placircntulas de C arabica cv Rubi Os resultados obtidos
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 109
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
concordam em parte com os obtidos por Ribeiro (2001)
trabalhando com embriotildees zigoacuteticos de C arabica que
recomenda a adiccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de NH4NO
3 e KNO
3 no
meio de cultura para comprimento da parte aeacuterea
Observa-se ainda que utilizando-se a concentraccedilatildeo
de 1425 mg L-sup1 de KNO3 haacute reduccedilatildeo no comprimento da
parte aeacuterea das placircntulas ateacute a concentraccedilatildeo de 42091 mg
L-sup1 de NH4NO
3 havendo a partir desse ponto incremento
no desenvolvimento da variaacutevel ateacute a concentraccedilatildeo de
149131 mg L-sup1 de KNO3 (132 cm dados transformados)
Esses resultados demonstram que as respostas de
interaccedilatildeo entre fontes de nitrogecircnio variam em funccedilatildeo das
concentraccedilotildees utilizadas
Na ausecircncia de NH4NO
3 em ambas as
concentraccedilotildees estudadas o comprimento da parte aeacuterea
foi inferior (09 e 097 cm respectivamente nas
concentraccedilotildees de 950 e 1425 mg L-sup1 de KNO3) evidenciando
mais uma vez a importacircncia desse sal no desenvolvimento
de embriotildees em C arabica cv Rubi
Peso da mateacuteria fresca
FIGURA 3
Peso da mateacuteria fresca de placircntulas de Carabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildeesde NH
4NO
3 combinadas com 0950 mg L-sup1 de KNO
3
6
65
7
75
8
85
9
95
10
105
0 4125 825 12375 1650NH4NO3 (mg L-1)
Peso
da
mat
eacuteria
fre
sca
(g)
Y KNO3 475 Y KNO3 1425 Y KNO3 1900 = ns Y KNO3 0 = 968811 - 006491X + 000061019X2 R2 = 09017 Y KNO3 950 = 800708 + 002278X 000022883X2 R2 =09053
Na ausecircncia de KNO3 houve decreacutescimo do peso
da mateacuteria fresca associado ao incremento das
concentraccedilotildees de NH4NO
3 ateacute a concentraccedilatildeo de 91775
mg L-sup1 de NH4NO
3 (Figura 3) observando-se aumento do
peso da mateacuteria fresca a partir deste ponto Para a
concentraccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 ocorreu aumento do
peso da mateacuteria fresca ateacute a concentraccedilatildeo de 100221 mg L-
sup1 de NH4NO
3 Poreacutem o maior valor foi registrado na
ausecircncia de ambos os sais estudados (976 g)
Da mesma forma Grossi (2000) trabalhando com
bromeacutelia observou que a menor concentraccedilatildeo de
nitrogecircnio promoveu maior produccedilatildeo de massa fresca
Kanashiro et al (2007) observou decreacutescimo linear na
massa fresca de folhas de bromeacutelia agrave medida que se
aumentou a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio (entre 75 e 120
mM) sendo que para cada mM de nitrogecircnio acrescido ao
meio houve um decreacutescimo de 00018 g na massa fresca
Provavelmente o cultivo em concentraccedilotildees maiores de
nitrogecircnio tenderia a diminuir a produccedilatildeo de massa fresca
como foi observado no presente experimento
CONCLUSOtildeES
Com base no crescimento da parte aeacuterea e na
formaccedilatildeo do maior nuacutemero de folhas a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de
NH4NO
3 eacute mais indicada para o desenvolvimento de
embriotildees somaacuteticos de Coffea arabica L Os resultados
indicam ainda que a ausecircncia de nitrogecircnio promove o
maior peso das placircntulas
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NORMAS PARA PUBLICACcedilAtildeO DE ARTIGOS E COMUNICACcedilOtildeES CIENTIacuteFICAS
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagationeacute editada semestralmente pela Editora da UniversidadeFederal de Lavras (Editora UFLA) publica artigoscientiacuteficos e comunicaccedilotildees cientiacuteficas da aacuterea de culturade tecidos de plantas elaborados por membros dacomunidade cientiacutefica nacional e internacional Natildeo eacutecobrada taxa para publicaccedilatildeo de trabalhos desde que umdos autores seja soacutecio e esteja em dia com a ABCTP(Associaccedilatildeo de Cultura de Cultura de Tecidos de Plantas)Eacute condiccedilatildeo fundamental que os artigoscomunicaccedilotildeessubmetidos agrave apreciaccedilatildeo da revista Plant Cell Culture ampMicropropagation natildeo foram e nem seratildeo publicadossimultaneamente em outro lugar Com a aceitaccedilatildeo do artigopara publicaccedilatildeo os editores adquirem amplos e exclusivosdireitos sobre o artigo para todas as liacutenguas e paiacuteses Apublicaccedilatildeo de artigoscomunicaccedilotildees dependeraacute daobservacircncia das Normas Editoriais dos pareceres do CorpoEditorial e da Comissatildeo ad hoc Todos os pareceres tecircmcaraacuteter sigiloso e imparcial e tanto os autores quanto osmembros do Corpo Editorial eou Comissatildeo ad hoc natildeoobtecircm informaccedilotildees identificadoras entre si
Os conceitos e afirmaccedilotildees contidos nos artigos ecomunicaccedilotildees seratildeo de inteira responsabilidade do(s)autor(es)
1 SUBMISSAtildeO
Cada trabalho deveraacute ter no maacuteximo 14 paacuteginas ejunto do mesmo deveraacute ser encaminhado ofiacutecio dirigido aoEditor Chefe da revista solicitando a publicaccedilatildeo do artigo
Esse ofiacutecio deveraacute conter o pedido de apreciaccedilatildeona revista ao editor chefe a declaraccedilatildeo de ser um trabalhooriginal e natildeo ter sido submetido a nenhuma outra revistaser assinado por todos os autores constar o endereccedilocompleto telefone e e-mail de todos Qualquer inclusatildeoexclusatildeo ou alteraccedilatildeo na ordem dos autores deveraacute sernotificada mediante ofiacutecio assinado por todos os autores(inclusive do autor excluiacutedo)
Originais quatro vias impressas e uma via em CDR comtexto e ilustraccedilotildees e graacuteficos Das 4 vias impressas apenas1 deve conter os nomes completos dos autores e rodapeacutena primeira paacuteginaProcessador de texto Word for Windows (version 98 2000XP ou 2003)Redigido em portuguecircs inglecircs ou espanholEspaccedilamento do texto Duplo Margens esquerda (3cm)direita (2cm) inferior e superiores (25cm) Cabeccedilalho eRodapeacute (25cm)Papel formato A4Fonte Times New Roman tamanho 12Nuacutemero de paacuteginas ateacute 14 paacuteginas numeradasconsecutivamente incluindo as ilustraccedilotildees
Tabelas devem fazer parte do corpo do artigo e serapresentadas no moacutedulo tabela do Word O tiacutetulo deveficar acimaGraacuteficos Figuras e Fotografias devem ser apresentadosem preto e branco niacutetidos e com contraste escaneadosinseridos no texto apoacutes a citaccedilatildeo dos mesmos e tambeacutemem um arquivo agrave parte salvos em extensatildeo tif ou jpg com resoluccedilatildeo de 300 dpi Os graacuteficos devem vir tambeacutemem excel com letra Times New Roman tamanho 10 semnegrito sem caixa de textos e agrupados em arquivo agraveparteSiacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitos emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker sem perda de suas formas originais
2 ESTRUTURA E ORGANIZACcedilAtildeO
21 O artigo cientiacutefico deve ser apresentado na seguintesequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfulas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumo
Index terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
INTRODUCcedilAtildeO
Deve apresentar uma visatildeo concisa do estado atualdo conhecimento sobre o assunto que o manuscritoaborda e enfatizar a relevacircncia do estudo sem constituir-se em extensa revisatildeo e na parte final os objetivos dapesquisa Deve incluir a revisatildeo de literatura
MATERIAL E MEacuteTODOS
Esta seccedilatildeo pode ser dividida em subtiacutetulosindicados em negrito
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Podem ser divididas em subseccedilotildees com subtiacutetulosconcisos e descritivos e conter tabelas e figuras
CONCLUSOtildeES
Finalizar com os resultados de acordo com osobjetivos do trabalho
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e naseccedilatildeo proacutepria
22 A comunicaccedilatildeo cientiacutefica deve ser apresentada naseguinte sequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfluas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumoIndex terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
Texto sem subdivisatildeo poreacutem com introduccedilatildeo material emeacutetodos resultados e discussatildeo (podendo conter tabelase graacuteficos e conclusatildeo subentendidas
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e na seccedilatildeoproacutepria
3 CASO O ARTIGO CONTENHA FOTOGRAFIASGRAacuteFICOS FIGURAS SIacuteMBOLOS E FOacuteRMULASESSAS DEVERAtildeO OBEDECER AgraveS SEGUINTESNORMAS
31 Fotografias deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpi
32 Figuras deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpiAs figuras deveratildeo ser elaboradas com letra Times NewRoman tamanho 10 sem negrito sem caixa de textos eagrupadas
33 Graacuteficos deveratildeo ser inseridos apoacutes citaccedilatildeo dosmesmos dentro do proacuteprio texto elaboradopreferencialmente em Excel com letra Times New Romantamanho 10 sem negrito sem caixa de textos e agrupadas
34 Siacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitas emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker (ex MathType Equation) sem perda de suasformas originais
OBS A formataccedilatildeo correta eacute parte imprescindiacutevel para queo trabalho seja devidamente protocolado Caso este natildeoesteja nas normas o mesmo seraacute recusado
4 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS as referecircnciasbibliograacuteficas devem ser citadas conforme a NBR60232002da ABNT
A exatidatildeo das referecircncias constantes da listagem e acorreta citaccedilatildeo no texto satildeo de responsabilidade do(s)autor(es) do artigo
41 Orientaccedilotildees gerais- Deve-se apresentar todos os autores do documentocientiacutefico (fonte)- O nome do perioacutedico deve ser descrito por extenso natildeodeve ser abreviado- Em todas as referecircncias deve-se apresentar o local depublicaccedilatildeo (cidade) a ser descrito no lugar adequado paracada tipo de documento- As referecircncias devem ser ordenadas alfabeticamente
42 Exemplificaccedilatildeo (tipos mais comuns)
ARTIGO DE PERIOacuteDICO
VIEIRA R F RESENDE M A V de Eacutepocas de plantio deervilha em Patos de Minas Uberaba e Janauacuteba MinasGerais Ciecircncia e Agrotecnologia Lavras v 24 n 1 p 74-80 janmar 2000
LIVRO
a) livro no todo
STEEL R G D TORRIE J H Principles andprocedures of statistics New York McGraw-Hill Bookl960 481 p
b) Parte de livro com autoria especiacutefica
FLEURY J A Anaacutelise ao niacutevel de empresa dos impactosda automaccedilatildeo sobre a organizaccedilatildeo da produccedilatildeo de trabalhoIn SOARES R M S M Gestatildeo da empresa Brasiacutelia IPEAIPLAN 1980 p 149-159
c) Parte de livro sem autoria especiacutefica
MARTIM L C T Nutriccedilatildeo de bovino de corte emconfinamento In ______ Confinamento de bovino decorte 2 ed Satildeo Paulo Nobel 1986 cap 3 p 29-89
DISSERTACcedilAtildeO E TESE
GONCcedilALVES R A Preservaccedilatildeo da qualidade tecnoloacutegicade trigo (Triticum aestivum L) e controle de Rhyzoperthadominica (F) durante o armazenamento em atmosferacontrolada com Co2 e N2 1997 52 f Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Ciecircncia dos Alimentos) Universidade Federal deLavras Lavras 1997
MATIOLI G P Influecircncia do leite proveniente de vacasmastiacuteticas no rendimento de queijo frescal 2000 55 pDissertaccedilatildeo (Mestrado em Ciecircncias dos Alimentos) -Universidade Federal de Lavras Lavras 2000
Nota A folha eacute composta de duas paacuteginas anverso everso Alguns trabalhos como teses e dissertaccedilotildees satildeoimpressos apenas no anverso e neste caso indica-se f(ABNT NBR60232002 p 18)
TRABALHOS DE CONGRESSO E OUTROS EVENTOS
SILVA J N M Possibilidades de produccedilatildeo sustentada demadeira em floresta densa de terra firme da Amazocircniabrasileira In CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO 61990 Campos do Jordatildeo Anais Campos do Jordatildeo SBSSBEF 1990 p 39-45
DOCUMENTOS ELETROcircNICOS
As obras consultadas online satildeo referenciadas conformenormas especiacuteficas para cada tipo de documento(monografia no todo e em parte trabalho apresentado emevento artigo de perioacutedico artigo de jornal etc)acrescidas de informaccedilotildees sobre o endereccedilo eletrocircnicoapresentado entre braquetes (lt gt) precedido da expressatildeo
Disponiacutevel em e da data de acesso ao documentoprecedida da expressatildeo Acesso em Nota Natildeo se recomenda referenciar material eletrocircnico decurta duraccedilatildeo nas redes (ABNT NBR60232000 p 4)Segundo padrotildees internacionais a divisatildeo de endereccediloeletrocircnico no fim da linha deve ocorrer sempre apoacutes barra ()
Monografia (acesso online)
a) livro no todo
TAKAHASHI T (Coord) Tecnologia em foco BrasiacuteliaSocinfoMCT 2000 90 p Disponiacutevel em lthttpwwwsocinfoorgbrgt Acesso em 22 ago 2000
b) parte de livro
TAKAHASHI T Mercado trabalho e oportunidades In______ Sociedade da informaccedilatildeo no Brasil livro verdeBrasiacutelia SocinfoMCT 2000 cap 2 p 13-24 Disponiacutevelem lthttpwwwsocinfogovbrgt Acesso em 22 ago 2000
c) Parte de congresso seminaacuterio etc
GIESBRECHT H O Avaliaccedilatildeo de desempenho deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica a experiecircncia deprojeto excelecircncia na pesquisa tecnoloacutegica InCONGRESSO ABIPTI 2000 Fortaleza Gestatildeo deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica Fortaleza Nutec 2000Disponiacutevel em lthttpwwwabiptiorgbrgt Acesso em01 dez 2000
d) Tese
SILVA E M Arbitrariedade do signo a liacutengua brasileirade sinais (LIBRAS) 1997 144 p Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Linguumliacutestica Aplicada e Estudo de Liacutengua) - PontifiacuteciaUniversidade Catoacutelica de Satildeo Paulo Satildeo Paulo 1997Disponiacutevel em lthttpwwwterracombrvirtualbooksfreebookportdid teseshtmgt Acesso em 28 nov 2000
Artigo de perioacutedico (acesso online)
RESENDE A M G Hipertexto tramas e trilhas de umconceito contemporacircneo Informaccedilatildeo e Sociedade Recifev 10 n 1 2000 Seccedilatildeo Educaccedilatildeo Disponiacutevel em lthttpwwwinformaccedilatildeoesociedadeufpbbrgt Acesso em 30 nov2000
CITACcedilAtildeO PELO SISTEMA ALFABEacuteTICO (AUTOR-DATA) (conforme ABNT NBR105202002)Dois autores - Steel amp Torrie (1960) ou (STEEL amp TORRIE1960)Trecircs ou mais autores - Valle et al (l945) ou (VALLE et al1945)Obs Quando forem citados dois autores de uma mesmaobra deve-se separaacute-los pelo sinal amp (comercial)
5 O EDITOR CHEFE NOTIFICARAacute O AUTOR DORECEBIMENTO DO ORIGINAL E POSTERIORMENTE
O INFORMARAacute SOBRE SUA PUBLICACcedilAtildeO OSARTIGOS QUE NECESSITAREM DE MODIFICACcedilOtildeESSERAtildeO DEVOLVIDOS AO AUTOR PARA A DEVIDAREVISAtildeO
6 OS ARTIGOS NAtildeO APROVADOS SERAtildeODEVOLVIDOS
7 OS ARTIGOS SERAtildeO PUBLICADOS EM ORDEMDE APROVACcedilAtildeO
8 O NAtildeO-CUMPRIMENTO DESSAS NORMASIMPLICARAacute NA DEVOLUCcedilAtildeO DO ARTIGO AOAUTOR
9 OS CASOS OMISSOS SERAtildeO RESOLVIDOS PELACOMISSAtildeO EDITORIAL
10 O ARTIGO DEVERAacute SER ENVIADO PARA
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepartamento de BiologiaSetor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 3037CEP 37200-000Lavras MG
INSTRUCTIONS FOR AUTHORS
Plant Cell Culture amp Micropropagation asemestral journal edited by Editora UFLA of theUniversidade Federal de Lavras publishes scientificarticles and communications in the area of plant tissueculture elaborated by researchers of the national andinternational scientific community One of the authors mustbe associated and have paid all charges required by theABCTP (Plant Tissue Culture Association) in order to betax free for publication in Plant Cell Culture ampMicropropagation Submission of a manuscript implies thatit is neither under consideration for publication elsewherenor has appeared previously in part or in whole Onacceptance for publication authors assign to the Editorsfull copyright of the manuscript in all languages andcountries Publications will depend on editorial rules andon the review of experts and ad hoc commission Reviewerand editorial opinions will be anonymously communicatedto authors
Concepts and affirmations included in articles andcommunications are of the entire responsibility of theauthors
1 SUBMISSION
The manuscript must present a maximum of 14pages At the time of submission a cover letter must besent with the manuscript copies to the Editor requestingpublication of the article This cover letter must be signedby all authors
and also contain the full addresstelephone number and e-mail of the authors Anyinclusion exclusion or alteration in the authors order mustbe notified and signed by all authors including the oneexcluded
Original Four copies and CD with text and illustrationsOnly one of the 4 printed copies must contain the fullnames of the authors and footnote in the first pageFormat Word for Windows (version 98 2000 XP ou 2003)Spacing of the text Double Margin on the left hand sideand 20 cm margin on the right hand side 25 cm upper andlower margin 25 cm for the heading and 25 cm for thefootnotePaper A4 formatSource Times New Roman size 12Number of pages up to 14 pages including the illustrationsTables Tables should be part of the body of the paper andthey must be presented in Word or Excel The title shouldbe above and be presented in the language in which thearticle was written and in English The vertical linesseparating the columns should not appearGraphsFiguresPhotographs must be presented in blackand white clear and with contrast scanned inserted in
the text after citation and also in a separate file (on thesame diskette as the article) saved in extension tif orjpg with resolution of 300 dpi The title should be below
and presented in the language in which the article waswritten and in EnglishSymbols and Chemical Formula must be presented usinga word processor that permits a format Page Maker
2 STRUCTURE AND ORGANIZATION
21 The article should be presented in the followingsequence
TITLE
In English language containing no more than 15 words incapital letters and bold
AUTHORS
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copies Footnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTshould be informative and condensed and should
explain the objectives material and methods results andconclusion of the work in a maximum of 250 words all writtenin one paragraphFor articles written in English the abstract should also bepresented in Portuguese
Key words minimum of three and maximum of five Theyshould not repeat words that are already in the title Thesemay include phrases as well as individual words and shouldbe separate by commasFor articles written in English the key-words should alsobe presented in Portuguese
INTRODUCTION
Should present a concise vision of the current level ofknowledge that has been achieved within the subject areathat the paper will discuss It should neither give anextensive review nor should it include details about theresults and discussion It should clearly indicate theobjectives of the research that was carried out
MATERIAL AND METHODS
This section can contain subdivisions with subtitles inbold print
RESULTS AND DISCUSSION
This section can have subsection which begins withconcise descriptive titles in bold print
CONCLUSIONS
Finishing agree of objectives of work
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
22 The Communication should be presented in thefollowing sequence
TITLE
Sufficiently clear conspicuous and complete withoutsuperfluous words It is recommended to initiate with theterm that represent the most important aspect with otherterms in decreasing of importance
TITLE IN PORTUGUESE
FULL NAME(S) OF THE AUTHOR(S)
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copiesFootnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTWritten continuously without paragraph It must
not exceed 250 words Index terms must be enclosed afterthe abstract using terms different from those used in thetitle and separated by comma
Index terms (3 to 5) must be described in capital and smallletters and express the content of the article
ABSTRACT AND INDEX TERMS IN PORTUGUESE
Text with no division but must include introductionmaterial and methods results and discussion andconclusion (it may include tables and figures)
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
3 PHOTOGRAPHS GRAPHS FIGURES SYMBOLSOR FORMULA CONTAINED IN THE ARTICLE SHOULDOBEY THE FOLLOWING RULES
31 Photographs must be presented in black and whiteclear and with contrast inserted in the text after their citationand also in a separate file (on the same diskette as thearticle) saved in extension TIFF
or JPEG withresolution of 300 dpi
32 Figures must be presented in black and white clearand with contrast inserted in the text after their citation andalso in a separate file (on the same diskette as the article)saved in extension TIFF
or JPEG with resolution of300 dpi They must be elaborated using Times New Romanfont size 10 without bold without text box and arranged
33 Graphs must be inserted in the text after their citationelaborated preferentially in Excel using Times New Romanfont size 10 without bold
34 Symbols and Chemical Formula must be presentedusing a word processor that permits a format for Page Maker(ex MathType Equation) without loss of its original form
4 REFERENCES references must be cited according toNBR60232002 of ABNT All references and their correctcitation in the text are of the entire responsibility of theauthor(s)
5 THE BRAZILIAN ASSOCIATION OF PLANT TISSUECULTURE (ABCTP) WILL INFORM THE AUTHOR THERECEIPT OF THE ORIGINAL MANUSCRIPT ANDEVENTUALLY IT WILL ALSO SEND INFORMATIONREGARDING ITS PUBLICATION MANUSCRIPTSTHAT REQUIRE MODIFICATIONS WILL BERETURNED TO THE AUTHOR FOR THE RESPECTIVEREVISION ANDCORRECTIONS
6 MANUSCRIPTS NOT APPROVED WON T BERETURNED TO THE AUTHOR
7 ARTICLES WILL BE PUBLISHED ACCORDING TOTHE ORDER OF RECEIPT AND APPROVAL
8 IF ANY OF THESE RULES ARE NOT ATTENDED THEMANUSCRIPT WILL BE RETURNED TO THE AUTHOR
9 THE NEGLECTFUL CASES WILL BE SOLVED BYTHE EDITORIAL COMMITTEE
10 MANUSCRIPTS SHOULD BE SENT TO THEFOLLOWING ADDRESS
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepto de Biologia - Setor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 303737200-000 Lavras MG BRAZIL
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 57
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
As mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata)
utilizadas nesse experimento foram obtidas atraveacutes do
processo de micropropagaccedilatildeo realizado no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos e Geneacutetica Vegetal da Embrapa
Agroinduacutestria Tropical Na ocasiatildeo do plantio as mudas
apresentavam-se completamente enraizadas e com alturas
variando de 26 a 35 cm
As plantas provenientes do material in vitro foram
retiradas dos frascos e suas raiacutezes lavadas em aacutegua
corrente para a retirada do excesso do meio de cultura
Apoacutes a lavagem as mudas foram colocadas em bandejas e
suas raiacutezes podadas com o auxiacutelio de uma tesoura com o
objetivo de uniformizar o material facilitar o plantio e
estimular o desenvolvimento de um sistema radicular mais
funcional
As mudas foram transplantadas para tubetes de
capacidade volumeacutetrica de 180 cm3 contendo o substrato
formado pela mistura poacute-de-coco seco + huacutemus de
minhoca + solo (PCS+H+S) na proporccedilatildeo de 111
misturado no Laboratoacuterio de Solos da Embrapa e sem
fornecimento de fertilizantes durante o periacuteodo
experimental Para promover o completo umedecimento
do substrato e aumentar a umidade relativa do ambiente
momentos antes da transferecircncia das mudas para os
tubetes o sistema de irrigaccedilatildeo foi acionado
proporcionando assim um ambiente favoraacutevel ao
estabelecimento das mudas Com os recipientes em seus
devidos lugares as mudas foram acondicionadas e
levadas em bandejas ateacute o tuacutenel alto de cultivo forccedilado
iniciando a etapa de plantio As mudas foram inseridas
numa profundidade meacutedia de 5 cm de forma que as raiacutezes
e a parte inicial do caule ficaram enterradas As mudas
foram transferidas para os respectivos substratos no dia
3 de fevereiro de 2006
Para promover melhores condiccedilotildees para o
estabelecimento das mudas do primeiro ao quadrageacutesimo
quinto dia apoacutes o transplantio (DAT) essas receberam
uma irrigaccedilatildeo padratildeo com a aplicaccedilatildeo de uma lacircmina
correspondente a 3 mm de aacutegua parcelada duas vezes ao
dia sendo uma aplicaccedilatildeo pela manhatilde iniciando-se
aproximadamente agraves 9 h e a outra agrave tarde a partir das 16 h
A partir do 45ordm DAT foi adotada a diferenciaccedilatildeo das lacircminas
de irrigaccedilatildeo
O delineamento experimental foi em blocos
casualizados composto por quatro tratamentos e cinco
repeticcedilotildees constituiacutedas por cinco fileiras verticais com
cinco plantas cada totalizando 25 plantas por tratamento
num total de 100 plantas por experimento Os tratamentos
consistiram de quatro niacuteveis de irrigaccedilatildeo equivalentes agraves
lacircminas de 10 (L1) 20 (L
2) 30 (L
3) e 40 (L
4) miliacutemetros de
aacutegua tambeacutem parcelada em duas aplicaccedilotildees diaacuterias agraves 9 h
e agraves 16h
Os dados foram coletados em duas ocasiotildees apoacutes
a diferenciaccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo A primeira coleta
de dados ocorreu em 04 de abril aos 60 dias apoacutes o
transplantio (DAT) e a segunda em 19 de abril (aos 75
DAT) As variaacuteveis analisadas foram nuacutemero de folhas
(NF) altura da planta (AP) e diacircmetro do caule (DC) O
nuacutemero de folhas foi contado visualmente em todas as
mudas transplantadas Todas as folhas foram consideradas
na contagem exceto as totalmente secas A altura da planta
foi medida a partir da base ateacute a abertura das folhas por
meio de um escaliacutemetro graduado em centiacutemetros
subdividido em miliacutemetros O diacircmetro do caule foi
mensurado com o auxiacutelio de um paquiacutemetro digital
graduado em centiacutemetros considerando a base do caule
como padratildeo de contagem
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos aplicativos Microsoft Office Excel e SISVAR
versatildeo 46 (FERREIRA 2003)
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os valores meacutedios mensais de temperatura do ar
umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidade
do vento a 2 m de altura registrados durante o experimento
pela estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade
Federal do Cearaacute (UFC) encontram-se na Tabela 1 cuja
temperatura meacutedia do periacuteodo foi de 23 ordmC e umidade relativa
meacutedia de 93 caracterizando um periacuteodo de temperaturas
amenas
AZEVEDO B M de et al58
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
TABELA 1 Valores meacutedios mensais de temperatura do ar umidade relativa do ar radiaccedilatildeo solar global e velocidadedo vento a 2m de altura Fortaleza-CE 2006
Mecircs Temperatura (ordmC) U R () Rad solar global (W m-2) Vel do vento (m s-1)
Fevereiro 23 95 1329 173
Marccedilo 24 84 1291 125
Abril 23 99 1162 094
Fonte Estaccedilatildeo meteoroloacutegica automatizada da Universidade Federal do Cearaacute (UFC)
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Nas condiccedilotildees em que foi realizado o experimento
o desenvolvimento das mudas de helicocircnia (Heliconia
lingulata) foi afetado pelos diferentes niacuteveis de irrigaccedilatildeo
aplicados As anaacutelises de variacircncia das caracteriacutesticas de
desenvolvimento nuacutemero de folhas (NF) altura da planta
(AP) e diacircmetro do caule (DC) aos 60 e 75 DAT estatildeo
apresentadas na Tabela 2 Pocircde-se verificar que as lacircminas
de irrigaccedilatildeo influenciaram as trecircs variaacuteveis analisadas ao
niacutevel de 5 de probabilidade pelo teste F
Tanto o deacuteficit quanto o excesso hiacutedrico afetaram o
crescimento das mudas Isso pode ter ocorrido pelo fato
da deficiecircncia hiacutedrica ocasionar o fechamento dos
estocircmatos diminuindo a concentraccedilatildeo intracelular de CO2
e consequumlentemente gerando decreacutescimo na assimilaccedilatildeo
do mesmo (BERNARDO et al 2005) Jaacute o excesso hiacutedrico
ocasiona a falta de oxigecircnio que provoca a reduccedilatildeo da
fotossiacutentese e prejudica a conversatildeo da mateacuteria orgacircnica
pelos microorganismos em formas soluacuteveis que a planta
possa reutilizar Esses fatores podem proporcionar um
TABELA 2 Anaacutelise de variacircncia das caracteriacutesticas de desenvolvimento altura da planta (AP) diacircmetro do caule(DC) e nuacutemero de folhas (NF) de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das laminas aplicadas aos 60e 75 DAT
(ns) natildeo significativo significativo a 5 de probabilidade pelo teste F
Quadrado meacutedio Variaacutevel FV GL
60 DAT 75 DAT
Bloco 4 03966ns 02946ns
Tratamento 3 23675 31348 AP
Resiacuteduo 12 03593 06279
Bloco 4 06407ns 02754ns
Tratamento 3 16645 41102 DC
Resiacuteduo 12 06222 06728
Bloco 4 04377 01829ns
Tratamento 3 03421 05204 NF
Resiacuteduo 12 0773 01081
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 59
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
menor crescimento das plantas devido agrave diminuiccedilatildeo da
eficiecircncia de transformaccedilatildeo de fotoassimilados nessas
condiccedilotildees (REGO et al 2004)
A anaacutelise de regressatildeo indica que o modelo que
melhor se ajustou agrave relaccedilatildeo altura de planta em funccedilatildeo da
lacircmina de irrigaccedilatildeo aos 60 e 75 DAT foi o polinomial
quadraacutetico apresentando valores para R2 de 0997 e 0966
respectivamente (Figuras 1 e 2) Observa-se que aos 60 e 75
DAT a altura da planta aumentou com a lacircmina aplicada ateacute
FIGURA 1 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 60 DATFortaleza-CE 2005 (ns natildeo significativo pelo teste F significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
FIGURA 2 Altura de plantas de helicocircnia (Heliconia lingulata) em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo aos 75 DATFortaleza-CE 2005 (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
um ponto maacuteximo de 247 e 250 mm dia-1 respectivamente
representando a lacircmina que proporcionou maior
desenvolvimento das mudas em relaccedilatildeo agrave altura da planta
sendo obtida 896 e 1012 cm respectivamente Lacircminas acima
desse valor causaram reduccedilatildeo no crescimento
possivelmente devido ao excesso de aacutegua
Soares et al (1998) salientam que a aacutegua em excesso
proporciona aumentos nos custo de produccedilatildeo e do risco
de lixiviaccedilatildeo da aacutegua e dos nutrientes nela diluiacutedos o que
AP = -05934LI2 + 29273LI + 53519R2 = 0997
700
740
780
820
860
900
940
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1)
Altu
ra d
a pl
anta
(cm
)
AP = -06728L2 + 33294L + 59869
R2 = 0966
80
84
88
92
96
100
104
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Alt
ura
da p
lant
a (c
m)
AZEVEDO B M de et al60
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
pode prejudicar o desenvolvimento radicular Aleacutem disso
o excesso de aacutegua compromete os processos de
fotossiacutentese e respiraccedilatildeo os quais envolvem a utilizaccedilatildeo
de determinadas concentraccedilotildees de oxigecircnio (RAVEN et
al 2001) Jaacute em casos de deacuteficit hiacutedrico podem ocorrer
problemas de ordem fisioloacutegica ou seja afetar
negativamente o desenvolvimento das plantas
Em ambos os periacuteodos avaliados observou-se que
as lacircminas aplicadas influenciaram o diacircmetro de caule
das mudas de helicocircnia com valores meacutedios de 97 e 103
cm aos 60 e 75 DAT respectivamente A anaacutelise de
regressatildeo indicou que aos 60 DAT o modelo polinomial
quadraacutetico foi o que melhor representou o diacircmetro do
caule em funccedilatildeo das lacircminas de irrigaccedilatildeo com R2 de 0746
(Figura 3) O maacuteximo valor do diacircmetro de caule (1022
cm) calculado por derivaccedilatildeo da curva de ajuste foi obtido
aplicando-se uma lacircmina de 264 mm dia-1 A partir dessa
lacircmina houve uma diminuiccedilatildeo no diacircmetro de caule
ocasionado possivelmente pelo excesso de aacutegua Aos
75 DAT o modelo matemaacutetico ajustado para relacionar o
diacircmetro de caule em funccedilatildeo da lacircmina de irrigaccedilatildeo
apresentou coeficiente de determinaccedilatildeo (R2) muito baixo
natildeo sendo representativo
Modelos polinomiais quadraacuteticos para explicar o
efeito da lacircmina de irrigaccedilatildeo sobre a altura e diacircmetro de
caule tambeacutem foram obtidos por Pieter et al (2007) na
produccedilatildeo da flor da fortuna por Lopes et al (2005) em
mudas de Eucalyptus grandis W Hill por Pereira et al
(2003) e Recircgo et al (2004) na cultura do crisacircntemo
A anaacutelise de variacircncia (Tabela2) indicou que o
nuacutemero de folhas nas mudas de helicocircnia foi influenciado
pelas lacircminas de irrigaccedilatildeo nas duas eacutepocas analisadas (60
e 75 DAT) com valores meacutedios de 325 e 345 folhas nas
respectivas eacutepocas poreacutem o modelo matemaacutetico para
representar essa relaccedilatildeo apresentou coeficiente de
determinaccedilatildeo (R2) muito baixo e natildeo foi estatisticamente
significativo
As anaacutelises mostraram que aos 60 e 75 DAT a
lacircmina de irrigaccedilatildeo ideal que proporcionou o melhor
desenvolvimento das plantas encontra-se na faixa
compreendida de 247 a 264 mm dia-1 Valores
semelhantes foram obtidos por Gomes et al (2006) que
verificaram que a taxa de evapotranspiraccedilatildeo meacutedia da
Heliconia psittacorum L f x HSpatho-circinada
Aristeg cultivada em ambiente protegido foi de 22 mm
dia-1
FIGURA 3 Diacircmetro de caule de mudas de helicocircnia (Heliconia lingulata) aos 60 DAT em funccedilatildeo das lacircminas deirrigaccedilatildeo Fortaleza CE (- significativo ao niacutevel de 5 pelo teste F)
DC= -04111L2
+ 21726L + 73492
R2 = 0746
80
85
90
95
100
105
110
10 20 30 40
Lacircmina de irrigaccedilatildeo (mm dia-1
)
Diacirc
met
ro d
o ca
ule(
cm)
Aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas de Heliconia 61
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 55-61 2008
CONCLUSOtildeES
As lacircminas de irrigaccedilatildeo influenciaram as
caracteriacutesticas de desenvolvimento avaliadas aos 60 e 75
DAT
A altura de planta e o diacircmetro de caule
apresentaram resposta quadraacutetica em relaccedilatildeo agraves lacircminas
aplicadas
Nas condiccedilotildees em que foi desenvolvido este
trabalho para a aclimatizaccedilatildeo de mudas micropropagadas
de helicocircnia recomenda-se irrigar com 25 mm dia-1 com o
intuito de se obter mudas mais vigorosas para serem
transplantadas para condiccedilotildees de campo
AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pela concessatildeo da bolsa de estudo
Agrave Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaacuteria
CNPAT pela oportunidade de realizaccedilatildeo desta pesquisa
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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ALEXANDRE R S et al62
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
(Recebido em 4 de marccedilo de 2008 e aprovado em 1 de setembro de 2008)
IN VITRO ORGANOGENESIS OF PASSION FRUIT (PASSIFLORAEDULIS SIMS F FLAVICARPA DEG) AFFECTED BYIRRADIANCE SUCROSE AND EXPLANT POSITION
ORGANOGEcircNESE IN VITRO DO MARACUJAZEIRO (PASSIFLORA EDULIS SIMSF FLAVICARPA DEGENER) AFETADO POR IRRADIAcircNCIA SACAROSE E
POSICcedilAtildeO DOS EXPLANTES
RODRIGO SOBREIRA ALEXANDRE1 FLAacuteVIO ALENCAR D
ARAUacuteJO COUTO1 JOSEacute MARIA MOREIRA DIAS1WAGNER CAMPOS OTONI2 RITA DE CAacuteSSIA MENDES3 PAULO ROBERTO CECON4
1Professor Doutor Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG rsalexandreclick21combr2Doutor Departamento de Biologia Vegetal Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG3Teacutecnica em Quiacutemica Graduanda em Agronomia Departamento de Fitotecnia Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
4Doutor Departamento de Informaacutetica Universidade Federal de ViccedilosaUFV Av PH Rolfs 36571-000 Viccedilosa MG
ABSTRACTThe culture of the tissues has helped considerably the
Passiflora genus development achieving successfully themorphogenic responses in different in vitro explants Theobjective this work was to assess the in vitro morphogenicresponses of hypocotyl segments of passion fruit collected from5 positions (apical sub-apical median sub-basal and basalnamely 1-5 respectively) along the hypocotyls axis and culturedin medium with different concentrations of sucrose and exposedto irradiance levels The experiments were performed as acompletely randomized blocks design with 15 repetitions in 4 x4 x 5 factorial scheme (irradiance x sucrose x explant positions)totalizing 80 treatments on which every experimental parcelwas comprised of a flask containing five hypocotyls Thehypocotyl segment from positions 1 and 3 at their extremedistal ends cultured onto medium of culture with 30 g L-1 sucroseand under 100 micromol m-2 s-1 irradiance enable the greatest numberof buds and shoots differentiated The distal extremity from thesegments of hypocotyl farthest from the cotyledonary nodes(position 1) cultivated in 20 g L-1 sucrose and exposed to 50micromol m-2 s-1 irradiance result in the best condition for shootdevelopment
Index terms Passiflora edulis f flavicarpa in vitro propagationyellow passion fruit
RESUMOA cultura de tecidos tem auxiliado no desenvolvimento
do gecircnero Passiflora alcanccedilando sucesso morfogecircnico emdiferentes explantes in vitro Objetivou-se neste trabalho avaliarrespostas morfogecircnicas in vitro de segmentos de hipocoacutetilo domaracujazeiro coletados de 5 posiccedilotildees (apical sub-apicalmediana sub-basal e basal isto eacute 1-5 respectivamente) ao longodo eixo dos hipocoacutetilos e cultivados em meios com diferentesconcentraccedilotildees de sacarose e expostos a niacuteveis de irradiacircncia Oexperimento foi instalado em blocos casualizados com 15
repeticcedilotildees em esquema fatorial 4 x 4 x 5 (irradiacircncia x sacarose xposiccedilatildeo dos explantes) totalizando 80 tratamentos nos quaistoda parcela experimental foi constituiacuteda de um frasco contendocinco hipocoacutetilos As posiccedilotildees 1 e 3 no extremo distal dossegmentos de hipocoacutetilo cultivados em meio de cultura com 30 gL-1 de sacarose e sob 100 micromol m-2 s-1 de irradiacircncia proporcionamaior nuacutemero de brotos e brotos diferenciados A extremidadedistal dos segmentos de hipocoacutetilo extraiacutedos mais distantes donoacute cotiledonar (posiccedilatildeo 1) cultivados em 20 g L-1 de sacarose eexpostos agrave irradiacircncia de 50 micromol m-2 s-1 resulta na melhorcondiccedilatildeo para o desenvolvimento do broto
Termos para indexaccedilatildeo Passiflora edulis f flavicarpapropagaccedilatildeo in vitro maracujazeiro amarelo
INTRODUCTION
The genus of Passiflora was originated at South
America and comprises more than 580 species most of them
belonging to the Tropical America mainly from Brazil
(OLIVEIRA 1987) Among them the most commercially used
is the passion fruit plant P edulis Sims f flavicarpa Deg
The culture of the tissue has been reaching with
the Passiflora genus answers satisfactory morphogenic in
different in vitro explants (BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1993 1994 MORAN-ROBLES 1979 SCORZA
amp JANICK 1980)
The explant morphogenic capability has
relationship with the polarity effect such factor is
responsible for the shoot emergence Several studies were
researched to assess the effect of the position of the
In vitro organogenesis of passion fruit 63
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
explants extracted from the hypocotyl and roots of Citrus
plantlets during the shoot-bud proliferation (BURGER amp
HACKETT 1986 COSTA et al 2004 DIAS 1998
GARCIA-LUIS et al 1999) as well as the effect of the
polarity in the formation the buds and shoots
(McCLELLAND amp SMITH 1990 YAE et al 1987)
In the in vitro organogenesis of plants of the genus
Passiflora several factors influence among them among
them the irradiance for which different types of explants
were spared for the essays 58 micromol m-2 s-1 in internodes
(MORAN-ROBLES 1979) 20 micromol m-2 s-1 in mesophyll-
derived protoplasts (OTONI et al 1995) 30 or 23 micromol m-
2 s-1 in leaf (KAWATA et al 1995 APPEZZATO-DA-
GLOacuteRIA et al 1999 respectively) 50 micromol m-2 s-1 in
endosperm (MOHAMED et al 1996) 80 30 or 24 micromol m-
2 s-1 in shoot cultures (FARIA amp SEGURA 1997
KURIYAMA et al 1998 BARBOSA et al 2001
respectively) 20-55 micromol m-2 s-1 in cotyledons (HALL et
al 2000) 60 or 54 micromol m-2 s-1 in hipocotyl (COUCEIRO
2002 FELISMINO 2005 respectively) Although different
irradiances have been studied in these works in none of
them the effect of difference irradiances was studied during
the in vitro organogenic process of passion fruit plant
Other important factor for the in vitro
organogenesis is the source of carbon The in vitro
organogenesis works affirm that sucrose has been the most
employed source of carbon in the culture for Passiflora
(APPEZZATO-DA-GLOacuteRIA et al 1999 HALL et al 2000)
its concentration varies from 10 to 30 g L-1
The present work aimed to evaluate the in vitro
morphogenic responses of hypocotyledonary explants of
passion fruit plants throughout the use of different levels
of irradiance sucrose concentration and positions of the
segments of hypocotyls derived from in vitro germinated
plantlets
MATERIALS AND METHODS
Axenic and vigorous etiolated plantlets were
obtained from in vitro germinated seeds and used as
explants sources
In vitro-grown seedlings (25-30 days-old) were
transversally cut into 1-12 cm long were cultured on
different conditions of incubation The explants were
cultured in 300 mL glass flasks (Santa Marina Satildeo Paulo
Brazil) containing 30 mL aliquots of MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) medium salts 100 mg L-1 mio-inositol 10
mg L-1 6-benzylaminopurine (BAP) vitamins of White
(1951) and 80 g L-1 of agar (Isofarreg Brazil) The medium
pH was adjusted to 57 plusmn 01 before the addition of agar
Several concentrations of sucrose (0 10 20 or 30 g L-1)
were added to this medium The culture flasks were sealed
with polypropylene lids and the medium was autoclaved
at 121ordmC 15 kgf cm-2 during 20 minutes
The segments of hypocotyls were cut in five
segments numbered from 1 to 5 follows 1 basal the first
segment adjacent to the root collar 2 sub-apical the
second segment adjacent to the hypocotyl root 3 median
the central segment in relation to the hypocotyl region 4
sub-apical the second segment that is adjacent to the
cotyledonary node 5 - apical the first segment that is
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
Axenic plantlets Segments of hypocotyls in the
medium of culture
DE
PE
FIGURE 1 The segments of hypocotyls numbered from1 to 5 were characterized as follows 1 basal the firstsegment adjacent to the root collar 2 sub-apical thesecond segment adjacent to the hypocotyl root 3 median the central segment in relation to the hypocotylregion 4 sub-apical the second segment that is adjacentto the cotyledonary node 5 - apical the first segment thatis adjacent to the cotyledonary node () ED = distalextremity EP = proximal extremity
ALEXANDRE R S et al64
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
adjacent to the cotyledonary node (Figure 1) In this order
the five hypocotyl explants were placed horizontally on
the media maintaining the proximal extremity towards the
wall of the flask and having the distal extremity facing the
centre of the flask
The flasks were distributed 5 cm far from each other
on the shelves at the growth room to avoid shadowiness
at these flasks The explants were kept at the temperature
of 27 plusmn 2ordmC photoperiod of 168-h lightdark regime and
irradiances of 25 50 100 and 150 micromol m-2 s-1
The irradiance levels were provided by the
utilization of 40 W daylight fluorescent light tubes (Osramreg
Brazil) as follows I - 25 micromol m-2 s-1 (1 light on without
on without dislocating the luminous panel) III - 100 micromol
m-2 s-1 (4 lights on setting the luminous panel at 20 cm
from the shelf surface) IV - 150 micromol m-2 s-1 (5 lights on
setting the luminous panel at 16 cm from the shelf surface)
Copper strings were used to support the fluorescent
incandescent lamps
After 45 days of incubation regeneration frequencies
and number of shoots per explant were assessed which
were formed at the distal and proximal ends The
organogenesis was assessed regarding shoot lengths from
the evaluated positions at the proximal and distal ends
The experiment was performed under complete
randomized blocks design with 15 replicates in a 4 x 4 x 5
factorial scheme (irradiance levels 25 50 100 and 150 igravemol
m-2 s-1 x sucrose concentrations 0 10 20 and 30 g L-1 x
position of the explants at the hypocotyl 1 2 3 4 and 5)
totalizing 80 treatments being the experiment plot
comprised of a flask containing five segments of
hypocotyl Considering the three factors studied were made
by analysis of test average (Tukey) and regression to
concentrations of sucrose and levels of irradiance The
experiments were repeated at least once
RESULTS AND DISCUSSION
In vitro organogenesis at the distal extremity The
differentiation of buds and shoots as influenced by
irradiance levels and distinct positions of explants along
the hypocotyls axis and the mean values and the standard
deviation of the total number of buds and shoots formed
at the distal extremity are shown in figures 2 and 3
respectively
Independently from the other factors at the medium
without sucrose there was no morphogenic response in
the explants (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The number of structures formed at the distal
extremity reached the highest means when there was added
30 g L-1 sucrose to the medium under 100 micromol m-2 s-1
irradiance at the positions 1 and 3 (Figure 3a) Considering
the means of the five explant positions an average of 592
structures per explant was obtained Similarly Couceiro
(2002) has obtained 590 structures per explant at the distal
extremity when cultivating them horizontally under 60 micromol
m-2 s-1 of irradiance in MS medium containing 50 mg L-1 of
BAP and 30 g L-1 of sucrose Garcia-Luis et al (1999) have
shown in Citrange Troyer that despite the explants being
horizontally placed on the medium surface there was an
additional effect of polarity evidenced by the larger number
of shoots differentiated at the apical extremity and the
distance among the cotyledonary node has affected the
morphogenesis These results confirmed the studies of
Ziv et al (1970) and Fari amp Czako (1981) evidencing that
normally in stem and root sections the shoot-buds are
formed at the distal extremity and the roots at the proximal
extremity In the present work structures formed at both
explant extremities but in a higher degree at the distal
extremity
The largest value found for the average length of
the shoot a was 364 mm for the explants that were extracted
farthest from the cotyledonary node (position 1) and
cultured in medium containing 20 g L-1 of sucrose and
submitted to 50 micromol m-2 s-1 of irradiance (Figure 4a)
However in Passiflora actinia the inclusion of auxins to
the medium favoured the development of the shoot-buds
that consequently presented larger lengths when the
hypocotyl segments were cultivated in MS medium
containing 001 mg L-1 de IBA (KOCH et al 2001)
In vitro organogenesis of passion fruit 65
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
In vitro organogenesis at the proximal extremity
The mean values and the standard deviation of the total
number of buds and shoots formed at the proximal extremity
of the explants are presented in Figure 3b Likewise to the
distal extremity the formation of buds and shoots did not
happen when the explants were cultured in medium without
sucrose (Figure 2 Aa Ba Ca Da)
The differentiation and development of the buds
and shoots at the proximal extremity reached the highest
FIGURE 2 In vitro organogenesis in hypocotyl segments that are characterized by the positions that variesfrom 1 to 5 under effect of different irradiance levels A 25 micromol m-2 s-1 B 50 micromol m-2 s-1 C 100 micromol m-2 s-1 andD 150 micromol m-2 s-1 and sucrose concentrations (a 0 b 10 c 20 d 30 g L-1) for 45 days
A 1
2
3
4
5
a
1
2
3
4
5
b 1
2
3
4
5
c 1
2
3
4
5
d
B
a
b
c
d
C
a
b
c
d
D
a
b
c
d
Distal extremity
Proximal extremity
averages (35) at 25 micromol m-2 s-1 of irradiance in MS medium
containing 20 g L-1 sucrose for explants derived from the
position 4 (Figure 3b) Concurrently the work by Baccarin
(1988) pointed out the best bud and shoot proliferation in
explants from the regions closer to the cotyledonary nodes
The presence of BAP in the medium was essential to
the organogenic process as observed in works with Passiflora
spp (BECERRA et al 2004 BIASI et al 2000 DORNELAS
amp VIEIRA 1994 FERNANDO 2005 HALL et al 2000)
ALEXANDRE R S et al66
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Position 1
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 2
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 3
0
2
4
6
8
10
25 50 100 150
Num
ber t
otal
of e
stru
ture
s
Position 4
0
2
4
6
8
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25 50 100 150
Nuacutem
ero
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l de
estr
utur
as
Position 1
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
10
20
30
Position 2
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
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l de
estr
utur
as
Position 3
0
1
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3
4
5
25 50 100 150
Nuacutem
ero
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l de
estr
utur
as
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0
1
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3
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25 50 100 150
Nuacutem
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l de
estr
utur
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4
6
8
10
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Position 5
0
1
2
3
4
5
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Nuacutem
ero
tota
l de
estr
utur
as
Sucrose
(g L-1)
a
b
FIGURE 3 Mean values and standard deviation of the total number of structures (buds and shoots) formed at thedistal (a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
In vitro organogenesis of passion fruit 67
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
FIGURE 4 Mean values and standard deviation of the lengths of structures (buds and shoots) formed at the distal(a) and proximal (b) extremities of the explants which were under the effect of different sucrose concentrationsirradiance and explant positions at the hypocotyl Bars are the averages and their standard deviation
Position 1
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 2
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 3
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Leng
th o
f sho
ots
(mm
)
Position 4
0
1
2
3
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25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 5
0
1
2
3
4
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 1
0
1
2
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25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os(m
m)
10
20
30
Position 2
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os(m
m)
Position 3
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Position 4
0
1
2
3
25 50 100 150
Com
prim
ento
de
brot
o (m
m)
Position 5
0
1
2
3
25 50 100 150
Irradiance (micromol m-2
s-1
)
Com
prim
ento
de
brot
os
(mm
)
Sucrose
(g L-1)
a
b
ALEXANDRE R S et al68
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 62-69 2008
Independently from the irradiance levels different
sucrose concentrations and explant positions at the
hypocotyl the shoot elongation was considered to be
lower (Figure 4b) than the minimum recommended
(approximately 2-3 cm) for the in vitro rooting process It
highlights the need of previous submission of the explants
to an adequate medium for the elongation process
CONCLUSIONS
The morphogenic response for bud and shoot
formation was remarkably superior at the distal extremity
The maximum concentration among the sucrose
and the irradiance of 100 micromol m-2 s-1 has proportioned
better morphogenic responses at the distal extremity
regardless the position of the explants
The buds and shoots differentiated at the distal
extremity farthest to the cotyledonary node developed
better under 50 micromol m-2 s-1 of irradiance in medium
supplemented with 20 g L-1 sucrose
The use of a carbon source is essential for in vitro
morphogenesis
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(Recebido em 15 de maio de 2008 e aprovado em 2 de setembro de 2008)
AVALIACcedilAtildeO DE SUBSTRATOS NA PRODUCcedilAtildeO DE MUDASDO ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL [Ananaacutes comosus (L) Merr
var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] EM CONDICcedilOtildeESDE CASA DE VEGETACcedilAtildeO
SUBSTRATES EVALUATION FOR PRODUCTION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE[Ananas comosus (L) Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] PLANTS
UNDER GREENHOUSE CONDITIONS
FRANCISCO NUNES DA CUNHA FILHO1 ANTONIO CARLOS TORRES1 JOAtildeO MARIA CHARCHAR1
1Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF francisconunescnphembrapabr torrescnphembrapabr
RESUMOA utilizaccedilatildeo de substratos na aclimataccedilatildeo de mudas
micropropagadas oferece consideraacutevel vantagem no custo e napossibilidade de obtenccedilatildeo de alta porcentagem de sobrevivecircnciados propaacutegulos ex vitro aliado agrave obtenccedilatildeo de mudas maisuniformes vigorosas precoces e com alta qualidade fitossanitaacuteriaAvaliaram-se quatro diferentes tipos de substratos (fibra de cococomercial fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxe substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas) na aclimataccedilatildeode mudas do abacaxizeiro ornamental As variaacuteveis massa frescatotal massa fresca da parte aeacuterea massa fresca de raiacutezescomprimento de raiacutezes altura de plantas e nuacutemero total de folhasforam avaliadas O delineamento experimental utilizado foi ointeiramente casualizado com quatro tratamentos e com quatrorepeticcedilotildees Pela anaacutelise dos resultados o substrato padronizadoda Embrapa Hortaliccedilas o de fibra de coco comercial e o Plantmaxforam os mais eficientes na produccedilatildeo de mudas de abacaxizeiroornamental para fins comerciais O substrato de coco-verde daEmbrapa Hortaliccedilas foi o menos indicado
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatus plantaornamental substrato
ABSTRACTThe use of substrate in the acclimatization of
micropropagated plants offers considerable cost advantages andthe possibility to obtain high percentage of ex vitro survivingplants as well as in the production of uniform vigorous precociousand healthy plants Four different substrates (commercial coconutfiber green-coconut fiber from Embrapa Hortaliccedilas Plantmaxand the standardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas) wereevaluated for acclimatization of ornamental pineapple plantsTotal fresh mass fresh mass of shoots fresh mass of roots rootlength plant height and total number of leaves were obtainedThe experiment followed a complete randomized design withfour treatments and four replicates The results showed that thestandardized substrate of Embrapa Hortaliccedilas commercialcoconut fiber and Plantmax were the most efficient for theproduction of ornamental pineapple plants for commercialpurpose Green-coconut fiber substrate from Embrapa was lessindicated
Index terms Ananas comosus var bracteatus ornamental plantgrowth substrate
INTRODUCcedilAtildeO
Os abacaxizeiros ornamentais apresentam flores e
infrutescecircncias de beleza atrativa muito usadas em arranjos
decorativos e ornamentais no Brasil e exterior
representando um segmento de grande potencial para
exportaccedilatildeo (CABRAL 2000 SOUZA et al 2004) No
comeacutercio de flores nativas o abacaxi ornamental jaacute obteve
valores agregados da ordem de 5000 em relaccedilatildeo ao
abacaxi de fruta natildeo ornamental (SOUZA et al 2004)
A propagaccedilatildeo vegetativa do abacaxizeiro ornamental
para fins de comercializaccedilatildeo eacute feita por mudas oriundas da
planta-matildee Poreacutem essa propagaccedilatildeo apresenta o
inconveniente de disseminar agentes patogecircnicos e pragas
pela utilizaccedilatildeo de mudas contaminadas Dentre os patoacutegenos
e pragas mais comuns destacam-se o fungo Fusarium
subglutinans (Wollenw amp Reinking) PE Nelson (TOUSSON
amp MARASAS 1983) e a cochonilha Dysmicoccus brevipes
turfa casca curtida de eucalipto ou Pinus palha de arroz
carbonizada poacute de carvatildeo (GRATTAPAGLIA amp
MACHADO 1998) casca de arroz carbonizada poacute de
casca de coco seco e verde (SANTOS et al 2006) mistura
de areiaxaximhuacutemus (SOUZA JUNIOR et al 2001) solo
esterco bovino Plantmax e composto orgacircnico em
diferentes proporccedilotildees (MOREIRA et al 2006) dentre
outros Entretanto para o genoacutetipo em estudo as
tecnologias disponiacuteveis necessitam de adequaccedilatildeo para
serem mais eficientes e de baixo custo na produccedilatildeo
comercial de mudas
Objetivou-se neste trabalho avaliar quatro
diferentes substratos na produccedilatildeo de mudas do
abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L) Merr var
bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] para fins comerciais
utilizando-se propaacutegulos produzidos in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
Produccedilatildeo de mudas in vitro
Foram utilizados como fonte de explantes
propaacutegulos produzidos in vitro subcultivados a cada 60
dias utilizando-se o meacutetodo proposto por Correia et al
(1999) Os explantes consistiram de brotaccedilotildees com 2 cm de
comprimento transferidos para meio baacutesico de cultura
contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 3 de sacarose e em mg L-1 incluiacuteram-
se i-inositol 100 tiaminaHCl 02 aacutecido nicotiacutenico 005
piridoxinaHCl 005 e glicina 02 O meio de cultura foi
solidificado com 06 de aacutegar e o pH do meio foi ajustado
para 57 O meio foi distribuiacutedo em tubos de ensaio de 25 x
150 mm na quantidade de 125 mL por tubo
Os tubos foram esterilizados em autoclave a 121ordmC
e a 104 Kpa de pressatildeo por 15 minutos Apoacutes a inoculaccedilatildeo
as culturas foram mantidas em cacircmara de crescimento com
fotoperiacuteodo de 16 horas irradiacircncia de 32 mmol m-2 s-1
temperatura de 27oC durante 30 dias
As mudas foram preacute-aclimatizadas mediante
abertura das tampas dos frascos de cultura cinco dias
antes do transplantio para os respectivos substratos
Transplante e desenvolvimento de mudas micropropagadas
Mudas enraizadas e preacute-aclimatizadas de
abacaxizeiro ornamental foram retiradas dos tubos de
cultura e transplantadas em bandejas de isopor com 72
ceacutelulas contendo quatro diferentes substratos utilizados
como tratamentos 1) substrato comercial de fibra de coco
2) substrato de fibra de coco-verde da Embrapa Hortaliccedilas
3) substrato Plantmax e 4) substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas composto por solo de cerrado areia
lavada esterco de gado curtido e palha de arroz
carbonizada em proporccedilotildees de 3111 vv com adiccedilatildeo de
300 g de calcaacuterio dolomiacutetico e de 300 g da formulaccedilatildeo 4-
30-16
Apenas 30 ceacutelulas por bandeja foram
transplantadas com mudas de abacaxizeiro ornamental (uma
muda por ceacutelula) deixando-se 42 ceacutelulas livres (sem planta)
para que natildeo houvesse competiccedilatildeo entre plantas nas
bandejas As bandejas permaneceram cobertas com
envoltoacuterio plaacutestico nos primeiros trecircs dias apoacutes o
transplante
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado com 10 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca
de raiz e tamanho de raiz e 30 repeticcedilotildees para as variaacuteveis
altura e nuacutemero de folhas Os dados foram coletados aos
90 dias apoacutes o transplantio A anaacutelise de variacircncia do
experimento foi realizada com o auxiacutelio do programa
estatiacutestico SAS Institute Inc (SAS INSTITUTE 1988) e a
CUNHA FILHO F N da et al72
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
diferenciaccedilatildeo de meacutedias pelo teste de Tukey p 001 e
p 005
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
A anaacutelise conjunta do experimento indicou que
existiu homogeneidade de variacircncia natildeo sendo necessaacuteria
a transformaccedilatildeo de dados para a realizaccedilatildeo das anaacutelises A
anaacutelise de variacircncia (Tabelas 1 e 2) indicou que houve
efeito significativo dos diferentes substratos (teste de
Tukey p 005) sobre a massa fresca total massa fresca da
parte aeacuterea altura de plantas e nuacutemero total de folhas e
que natildeo houve diferenccedila significativa entre os diferentes
substratos com relaccedilatildeo agrave massa fresca de raiacutezes e o
comprimento de raiacutezes (Figuras 1 A-F)
Embora natildeo tenha havido diferenccedila significativa
(teste de Tukey p 005) entre os valores de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea nos tratamentos com
os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
comercial de fibra de coco e o Plantmax os valores
absolutos mais elevados desses paracircmetros foram obtidos
com o substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
(Figuras 1 A-B)
No substrato de fibra de coco-verde da Embrapa
Hortaliccedilas as plantas de abacaxizeiro ornamental tiveram
sempre pior performance em produccedilatildeo de massa fresca
total e de massa fresca da parte aeacuterea natildeo se diferenciando
estatisticamente dos valores obtidos com o uso dos
substratos comerciais da Plantmax e de fibra de coco
Entretanto esses substratos foram significativamente
inferiores (teste de Tukey p 005) em relaccedilatildeo aos valores
obtidos com o uso do substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas (Figuras 1 A-B)
Os valores obtidos para as variaacuteveis massa fresca
de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes natildeo diferiram
estatisticamente entre si (teste de Tukey p 005) em
relaccedilatildeo aos quatro tratamentos (substratos analisados)
Os maiores valores absolutos dessas variaacuteveis foram obtidos
para a massa fresca de raiacutezes no substrato padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e para o comprimento de raiacutezes no
substrato comercial de fibra de coco (Figuras 1 C-D)
TABELA 1 Resumo da anaacutelise de variacircncia para massa fresca total massa fresca da parte aeacuterea massa fresca deraiacutezes e comprimento de raiacutezes de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio
Fontes de variaccedilatildeo GL Massa fresca total
Massa fresca
da parte aeacuterea Massa fresca
de raiacutezes Comprimento
de raiacutezes
Tipo de substrato 03 673536 518934 02201ns 22382ns
Resiacuteduo 36 115108 80557 01328 13107
Total 39 - - - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade (ns) natildeo significativo
TABELA 2 Resumo da anaacutelise de variacircncia para altura e nuacutemero de folhas de A comosus var bracteatus
Quadrado meacutedio Fontes de variaccedilatildeo GL
Altura de plantas Nuacutemero total de folhas
Tipo de substrato 003 1424357 526854
Resiacuteduo 124 50188 16807
Total 127 - -
() significativo ao niacutevel de 1 de probabilidade
Avaliaccedilatildeo de substratos na produccedilatildeo de mudas 73
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
FIGURA 1 Variaacuteveis avaliadas na determinaccedilatildeo de eficiecircncia dos substratos Plantmax Embrapa Hortaliccedilas fibra decoco e fibra de coco-verde na produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro ornamental -em condiccedilotildees de casa de vegetaccedilatildeo A)massa fresca total B) massa fresca da parte aeacuterea C) massa fresca de raiacutezes D) comprimento de raiacutezes E) altura deplantas e F) nuacutemero total de folhas Meacutedias seguidas da mesma letra natildeo diferem significativamente entre si pelo testede Tukey Plt005
3653+b 0688
7459+ab 1414
9894+a 1229
6254+ab 0789
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a to
tal (
g)
A
3421+b 0664
6822+ab 1152
8930+a 0933
6002+ab 0763
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax Embrapa Hortaliccedilas Fibra de coco Fibra de coco verde
Tipo de substratos
Mas
sa fr
sca
da p
arte
aeacuter
ea (
g)
B
0568 + 0178 a
0298 + 0007 a0363 + 0120 a
0222 + 0039 a
0
02
04
06
08
1
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Mas
sa f
resc
a de
rai
zes
(g)
C
12000 + 0338 a
12800 + 0387 a
11690 + 0468 a12020 + 0204 a
10
11
12
13
14
15
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Com
prim
ento
de
raiz
es (c
m)
D
11789 + 0412 a13800 + 0406 b
11088 + 0381 a
8797 + 0385 c
02468
1012141618
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Alt
ura
de p
lant
as (c
m)
E
5882 + 0173 c
7727 + 0191 b8818 + 0259 a
8143 + 0294 ab
0
2
4
6
8
10
12
Plantmax EmbrapaHortaliccedilas
Fibra de coco Fibra de cocoverde
Tipo de substratos
Nuacutem
ero
tota
l de
folh
as
F
Houve diferenccedila significativa (teste de Tukey
p 005) entre os valores meacutedios obtidos para a altura de
plantas e para o nuacutemero total de folhas nos quatro
tratamentos avaliados As plantas tiveram
significativamente maior desenvolvimento em altura no
substrato padronizado da Embrapa Hortaliccedilas Natildeo houve
diferenccedila significativa entre os valores meacutedios em altura
de plantas nos substratos comerciais da Plantmax e de
fibra de coco Esses poreacutem foram diferentes dos valores
obtidos no substrato de fibra de coco-verde que
proporcionou significativamente o menor crescimento das
plantas (Figura 1 E)
Maiores meacutedias da variaacutevel nuacutemero total de folhas
foram obtidas com a utilizaccedilatildeo do substrato padronizado
CUNHA FILHO F N da et al74
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 70-75 2008
da Embrapa Hortaliccedilas e do Plantmax Natildeo houve diferenccedila
significativa entre os valores meacutedios do nuacutemero total de
folhas nos substratos Plantmax e de fibra de coco comercial
mas esses diferiram estatisticamente dos obtidos no
substrato fibra de coco-verde O substrato de fibra de coco-
verde foi o que propiciou os menores valores da variaacutevel
nuacutemero total de folhas (Figura 1 F) Esses resultados
contradizem os relatados por Carrijo et al (2002) que
verificaram que os substratos contendo fibra de coco-verde
satildeo os mais indicados para produccedilatildeo de mudas de
hortaliccedilas e ornamentais em cultivo sem solo Correia et al
(2003) natildeo observaram diferenccedila significativa entre os
valores da massa fresca de raiacutezes de mudas de cajueiro
anatildeo precoce crescidas em substratos com adiccedilatildeo de poacute
de coco-verde ou de poacute de coco-maduro Santos et al
(2006) relataram que os substratos orgacircnicos contendo as
combinaccedilotildees de fibras de coco seco ou verde
proporcionaram baixo desenvolvimento na aclimatizaccedilatildeo
de mudas Heliconia rostrata Ruiz amp Pav provenientes
da micropropagaccedilatildeo Poreacutem Bezerra et al (2001) discordam
dos autores acima mencionados informando que os
substratos contendo fibras de coco-verde ou seco foram
os mais indicados respectivamente para o enraizamento
de mudas de crisacircntemo (Chrysanthemum sp) e de violeta
africana (Saintpaulia ionantha H Wendl)
Tambeacutem substrato contendo casca de arroz
carbonizada tem sido utilizado na produccedilatildeo de mudas
micropropagadas Weber et al (2003) relataram que o
substrato contendo esse componente misturado com
vermiculita e vermicomposto em proporccedilotildees de 111 foi a
melhor opccedilatildeo para aclimataccedilatildeo de mudas de abacaxizeiro
ornamental oriundas da cultura in vitro e transplantadas
para tubetes Esses autores ainda observaram que o uso
da mistura contendo casca de arroz carbonizada e poacute de
casca de coco em proporccedilotildees de 11 resultou em baixo
desempenho de mudas do abacaxizeiro ornamental em
funccedilatildeo da maacute agregaccedilatildeo fiacutesica baixa retenccedilatildeo de aacutegua e
limitaccedilatildeo nutricional da planta
Neste trabalho os resultados com o uso de substrato
contendo casca de arroz carbonizada sem a presenccedila de
fibras de coco seco ou verde tambeacutem proporcionou
excelente desenvolvimento de mudas do abacaxizeiro
ornamental o que indica uma provaacutevel incompatibilidade
das fibras de coco com outros componentes de substratos
na produccedilatildeo de mudas dessa ornamental
Natildeo houve diferenccedila significativa entre valores de
massa fresca de raiacutezes e de comprimento de raiacutezes de
abacaxizeiro ornamental em relaccedilatildeo aos quatro substratos
analisados Poreacutem o maior valor absoluto em massa fresca
de raiacutezes foi obtido no substrato padronizado da Embrapa
Hortaliccedilas enquanto que o maior valor em comprimento
de raiacutezes no substrato comercial de fibra de coco
Com relaccedilatildeo agraves demais variaacuteveis analisadas
observou-se que a massa fresca total e a massa fresca da
parte aeacuterea tiveram performances mais significativas nos
substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas comercial
de fibra de coco e o da Plantmax enquanto que a altura de
plantas foi significativamente mais elevada no substrato
padronizado da Embrapa Hortaliccedilas e o nuacutemero total de
folhas mais significativo nos substratos padronizado da
Embrapa Hortaliccedilas e o Plantmax
CONCLUSOtildeES
Os substratos padronizado da Embrapa Hortaliccedilas
fibra de coco comercial e o da Plantmax satildeo os mais
indicados para a produccedilatildeo de mudas do abacaxizeiro
ornamental para fins comerciais
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) as bolsas concedidas
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SANTOS M do D M dos et al76
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(Recebido em 8 de abril de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFEITO DE ISOPENTENILADENINA POR QUATROSUBCULTIVOS NA MULTIPLICACcedilAtildeO DE BROTACcedilOtildeES
DE ABACAXIZEIRO ORNAMENTAL IN VITRO
EFFECT OF ISOPENTENYL ADENINE IN FOUR SUBCULTURES DURING THEIN VITRO MULTIPLICATION OF ORNAMENTAL PINEAPPLE SHOOT
MARIA DO DESTERRO MENDES DOS SANTOS1 JOSEacute GETUacuteLIO DA SILVA FILHO2ANTONIO CARLOS TORRES3
1Bioacuteloga MSc em Botacircnica Departamento de Botacircnica Universidade de BrasiacuteliaUnB Cx P 4457 709190-970 Brasiacutelia DF mariacnphembrapabr2Engenheiro Agrocircnomo Especialista em Biotecnologia de Plantas Embrapa Hortaliccedilas Cx P 218 70359-970 Brasiacutelia DF jgetuliocnphembrapabr3Engenheiro Agrocircnomo Embrapa Hortaliccedilas CxP 218 70359-970 Brasiacutelia DF
RESUMOObjetivou-se no presente trabalho foi o de avaliar o
efeito da adiccedilatildeo de concentraccedilotildees de 2iP em diferentes subcultivosna micropropagaccedilatildeo do abacaxizeiro ornamental var bracteatusBrotaccedilotildees com aproximadamente 10 cm de tamanho oriundosda cultura in vitro foram utilizados como explantes Os explantesforam inoculados em meio baacutesico liquido contendo sais mineraisMS 3 sacarose e em mg L-1 i-inositol 100 tiaminaHCl 01piridoxina HCl 05 aacutecido nicotiacutenico 005 glicina 20 formulaccedilatildeoliacutequida A esse meio foram adicionados concentraccedilotildees de 2iP(00 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro subcultivos(30 60 90 e 120 dias) Maacuteximo nuacutemero de brotaccedilotildees por explante(139) foi obtido em meio baacutesico com 16 mg L-1 de 2iP e no quartosubcultivo aos 120 dias Apoacutes a transferecircncia de brotaccedilotildeesindividualizadas para meio contendo ANA (00 05 10 15 2025 30 e 40 mg L-1) verificou-se a diferenciaccedilatildeo de raiacutezesadventiacutecias na porccedilatildeo basilar dos explantes
Termos para indexaccedilatildeo Ananas comosus var bracteatusmicropropagaccedilatildeo cultivo in vitro
ABSTRACTThe objective of this work was to evaluate the effect of
2iP addition in different subcultures during the micropropagationof ornamental pineapple var bracteatus Shoots with 10 cm inlength originated from in vitro culture were used as explantsThe explants were inoculated in liquid basal medium containingMS salts 3 sucrose 100 mg L-1 i-inositol 01 mg L-1
thiamineHCl 05 mg L-1 pyridoxineHCl 005 mg L-1 nicotinicacid and 20 mg L-1 glycine Different concentrations of 2iP (0005 10 and 20 mg L-1) in combination with four subcultures (3060 90 e 120 days) were used Maximum number of shoot formedper explant (139) was observed in basal medium with 16 mg L-1
2iP at the fourth subculture (120 days) After transferringindividual shoots to medium containing different concentrationsof NAA (00 05 10 15 20 25 30 and 40 mg L-1) mediaadventitious root formed in the basal portion of the explants
Index terms Ananas comosus var bracteatus micropropagationin vitro culture
INTRODUCcedilAtildeO
O abacaxizeiro ornamental [Ananas comosus (L)
Merr var bracteatus (Lindl) Coppens amp F Leal] eacute uma
planta de propagaccedilatildeo vegetativa com grande potencial
ornamental (D EECKENBRUGGE amp LEAL 2003) A
qualidade fitossanitaacuteria do campo de produccedilatildeo dessa
espeacutecie depende do material utilizado para sua propagaccedilatildeo
Assim sendo pode haver acuacutemulo entre plantios
sucessivos de patoacutegenos que satildeo transmitidos de um ciclo
de produccedilatildeo a outro via mudas contaminadas A
micropropagaccedilatildeo em larga escala de mudas sadias via
cultura de tecidos eacute uma estrateacutegia que possibilita
contornar a limitaccedilatildeo de mudas com alta qualidade
fitossanitaacuteria principalmente isentas de fusariose
(REINHARDT amp CUNHA 1999)
Em espeacutecies do gecircnero Ananaacutes os explantes mais
utilizados satildeo as gemas axilares das mudas do tipo coroa
ou filhote embora outros tipos de mudas possam ser usadas
A vantagem do uso de gemas axilares incluem boa
sobrevivecircncia em meio de cultura e com a quebra da
dominacircncia apical do broto haacute estiacutemulo para a formaccedilatildeo de
gemas muacuteltiplas (DREW 1980) A adiccedilatildeo de
fitorreguladores em geral eacute necessaacuteria para suprir as
possiacuteveis deficiecircncias dos niacuteveis endoacutegenos de hormocircnios
nos explantes in vitro Assim sendo recomenda-se a
combinaccedilatildeo de uma auxina com uma citocinina (SKOOG amp
MILLER 1957) Em geral a benzilaminopurina (BAP)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 77
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
(ALMEIDA et al 2002 BARBOZA et al 2001 BE amp
DEBERG 2006) ou essa substacircncia em combinaccedilatildeo auxina
e aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (COSTA amp ZAFFARI 2005
GUERRA et al 1999) tecircm sido a(s) substacircncia(s)
reguladora(s) de crescimento mais usada(s) na formaccedilatildeo
de brotaccedilotildees de Ananas sp Entretanto em abacaxizeiro
ornamental a inclusatildeo de BAP no meio pode induzir o
aparecimento de variaccedilotildees somaclonais (RODRIGUES et
al 2007 SANTOS et al 2008) Tambeacutem a combinaccedilatildeo de
cinetina ANA e AIB (aacutecido indolbutiacuterico) foi empregada
para proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees em abacaxizeiro (KISS et
al 1995 MATHEWS amp RANGAN 1979)
Dada a escassez de informaccedilotildees sobre o efeito de
isopenteniladenina (2iP) na propagaccedilatildeo in vitro de espeacutecies
do gecircnero Ananas neste trabalho procurou-se otimizar a
concentraccedilatildeo de 2iP na produccedilatildeo de brotaccedilotildees de
abacaxizeiro ornamental em diferentes subcultivos e seu
subsequumlente enraizamento
MATERIAL E MEacuteTODOS
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Brotaccedilotildees
individualizadas com aproximadamente 1 cm de
comprimento estabelecidas a partir da cultura de gemas
axilares de mudas tipo coroa foram utilizadas como fonte
de explantes Os explantes foram cultivados em meio baacutesico
liacutequido contendo sais minerais MS (MURASHIGE amp
SKOOG 1962) 3 sacarose e em mg L-1 tiaminaHCl 01
piridoxinaHCl 005 aacutecido nicotiacutenico 005 e glicina 20
(SANTOS 2008) O delineamento experimental empregado
foi o inteiramente ao acaso em esquema fatorial 4x4
referentes concentraccedilotildees de 2iP e subcultivos Ao meio
baacutesico foram adicionadas quatro concentraccedilotildees de BAP
(0 05 10 e 20 mg L-1) em combinaccedilatildeo com quatro
subcultivos (30 60 90 e 120 dias) O pH dos meios foi
ajustado a 57 Foram utilizadas nove repeticcedilotildees por
tratamento sendo que cada parcela foi constituiacuteda por um
explante Inicialmente os explantes foram inoculados em
frascos de 250 mL de capacidade com 40mL de meio No
segundo subcultivo os propaacutegulos foram transferidos para
frascos idecircnticos com meio receacutem-preparado No terceiro
e quarto subcultivos foram utilizados frascos de 1000 mL
com 100 mL de meio As culturas foram mantidas em sala
de crescimento sob fotoperiacutedo de 16 horas com densidade
de fluxo de foacutetons de 32 mmol m-2 s-1 a 27plusmn2oC Em cada
subcultivo foi determinado o nuacutemero e a massa de mateacuteria
fresca das brotaccedilotildees formadas por explante inoculado
Os dados foram transformados para 1X e as
anaacutelises estatiacutestica foram realizadas com o auxiacutelio dos
programas SASStat e SISVAR versatildeo 301 Aplicou-se a
anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo grau para
avaliar o efeito da concentraccedilatildeo de 2iP sobre o nuacutemero e
massa da mateacuteria fresca de brotaccedilotildees em cada subcultivo
Enraizamento das brotaccedilotildees Foram utilizadas
brotaccedilotildees de abacaxizeiro ornamental regeneradas in vitro
Os explantes com 10 a 20 cm de comprimento foram
inoculados em tubos de ensaio (25x150 mm) com 20 ml de
meio baacutesico 07 de aacutegar suplementado com diferentes
concentraccedilotildees de aacutecido naftalenoaceacutetico (ANA) (00 05
10 15 20 25 30 e 40 mg L-1)
Apoacutes inoculaccedilatildeo as culturas foram mantidas em
cacircmara de crescimento nas condiccedilotildees descritas
anteriormente Apoacutes 30 dias da inoculaccedilatildeo foram avaliados
a percentagem de brotaccedilotildees enraizadas nuacutemero e massa
fresca das raiacutezes desenvolvida por brotaccedilatildeo altura da
planta e massa da mateacuteria fresca da parte aeacuterea O
delineamento experimental foi inteiramente casualizado com
29 repeticcedilotildees Cada parcela foi constituiacuteda de um tubo de
ensaio com um explante
As anaacutelises estatiacutesticas foram realizadas com o
auxiacutelio dos programas SASStat e SISVAR versatildeo 301
Aplicou-se a anaacutelise de regressatildeo polinomial ateacute segundo
grau para avaliar a variaccedilatildeo das variaacuteveis em funccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de ANA
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees Na proliferaccedilatildeo de
brotaccedilotildees observou-se que os fatores concentraccedilatildeo de
2iP e o subcultivo isoladamente e em interaccedilatildeo afetam
significativamente (P 005) as variaacuteveis nuacutemero e massa
da mateacuteria fresca das brotaccedilotildees formadas A equaccedilatildeo que
SANTOS M do D M dos et al78
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
melhor se ajustou para explicar o efeito de 2iP nos diferentes
subcultivos para a variaacutevel nuacutemero de brotaccedilotildees foi a de
segundo grau (Figuras 1 e 2) A multiplicaccedilatildeo de brotaccedilotildees
de abacaxizeiro ornamental in vitro eacute dependente de 2iP
no meio de cultura O nuacutemero de brotaccedilotildees por explante
responsivo de tamanho maior que 05 cm de comprimento
foi pequeno na primeira subcultura (30 dias) em todas as
concentraccedilotildees de 2iP testadas aumentando-se nos demais
subcultivos Aos 30 60 90 e 120 dias estimou-se que a
concentraccedilatildeo de 16 mg L-1 de 2iP produziu o maacuteximo de
brotaccedilotildees por explante inoculado respectivamente 20 42
64 e 139 (Figuras 1 e 2) Esses resultados estatildeo em
consonacircncia com a importacircncia da citocinina em vaacuterios
aspectos do crescimento e desenvolvimento da planta
tais como divisatildeo celular (SKOOG amp MILLER 1957) quebra
da dominacircncia apical e desenvolvimento das gemas laterais
(SACHS amp THIMMAN 1964) induccedilatildeo e multiplicaccedilatildeo de
brotaccedilotildees in vitro (GRATTAPAGLIA amp MACHADO
1998 JOSHI amp DHAWAN 2007 MURASHIGE 1974)
Tambeacutem o tipo de citocinina e a sua concentraccedilatildeo satildeo
determinantes no processo de micropropagaccedilatildeo
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998 MURASHIGE
1974) Em Ananas sp o BAP tem sido preferencialmente
usado na proliferaccedilatildeo de brotaccedilotildees in vitro (ALMEIDA
1994 ALMEIDA et al 2002 CRUZ 2000 ESCALONA et
al 1999 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
GUERRA et al 1999 MATHEWS et al 1976) Entretanto
Kiss et al (1995) relataram que tanto o BAP quanto a
cinetina foram efetivos para formaccedilatildeo de brotaccedilotildees em
abacaxizeiro comercial No presente trabalho o 2iP foi
adicionado ao meio devido a sua maior atividade bioloacutegica
comparada com o BAP e a cinetina (MURASHIGE 1974)
Tambeacutem para a variaacutevel massa da mateacuteria fresca
foi constatada a resposta quadraacutetica das doses de 2iP
(Figuras 3 e 4) Pelas equaccedilotildees de regressatildeo infere-se
que o 2iP estimula o acuacutemulo de massa fresca nas
brotaccedilotildees com o maacuteximo obtido com a concentraccedilatildeo de
18 mgL-1 desse fator nos subcultivos de 30 60 e 120 dias
com a produccedilatildeo de respectivamente 9 17 e 77 g por
explante inoculado No terceiro subcultivo aos 90 dias a
concentraccedilatildeo de 17 gL-1 de 2iP produziu o total de
biomassa de 45 g por explante Essa observaccedilatildeo estaacute em
concordacircncia com os trabalhos do efeito beneacutefico de
citocininas na produccedilatildeo de parte aeacuterea ateacute uma
concentraccedilatildeo oacutetima acima da qual seu excesso eacute inibitoacuterio
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1988)
FIGURA 1 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
y)dias 60(14585x = -247661x + 31353 +
R 20999 =
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e bo
taccedilotilde
es p
or
expl
ante
s
30 dias
60 dias
y (60 dias) = 14585x2 - 47661x + 31353
R2 = 0999
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 79
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 2 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP no nuacutemero de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
FIGURA 3 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 30 e 60 dias
FIGURA 4 Efeito de concentraccedilotildees de 2iP na massa mateacuteria fresca de brotaccedilotildees por explante nos subcultivos de 90 e 120 dias
y)dias 90(22847x = -2 73196x + 55784
R209477 =
y)dias 120(5072x = -21623x + 9464 +
R20954 =
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Nuacutem
ero m
eacutedio
de
brot
accedilatildeo
por
expl
ante
90 dias
120 dias
y (120 dias) = 50725x2 - 1623x + 9464
Concentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
R2 = 0954
y(60 dias) = -38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (
g)
30 dias
60 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (60 dias) = - 38745x2 + 13957x + 49227
R2 = 09999
y)dias 90(12255x = -243239x + 75847 +
R209717 =
y)dias 120(19075x = -271029x + 11295 +
R2096 =
0
10
2030
40
50
6070
80
90
0 05 1 15 2
Concentraccedilatildeo de 2ip (mgL-1
)
Mas
sa fr
esca
das
bro
taccedilotilde
es (g
)
90 dias
120 diasConcentraccedilatildeo de 2iP (mg L-1)
y (120 dias) = 19075x2 - 71029x + 11295
R2 = 096
y (90 dias) = 12255x2 - 43239x + 75847R2 = 09717
Nuacutem
ero
meacuted
io d
e br
otaccedil
atildeo p
or e
xpla
nte
SANTOS M do D M dos et al80
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
Enraizamento das brotaccedilotildees A induccedilatildeo
emergecircncia e alongamento das raiacutezes ocorreram em todos
os tratamentos Em meio sem regulador de crescimento
os propaacutegulos apresentaram raiacutezes desenvolvendo-se
de maneira pontual na extremidade seccionada dos
explantes (Figura 5) Em meio com ANA as raiacutezes
desenvolveram-se na porccedilatildeo basilar dos propaacutegulos em
forma de roseta Em geral a auxina eacute utilizada na fase de
enraizamento de propaacutegulos oriundos da cultura in vitro
de Ananas (BARBOZA et al 2004 CORREIA et al
2000 FIROOZABADY amp GUTTERSON 2003
PRAXEDES et al 2001 TENG 1997) Entretanto o
enraizamento pode ser feito em meio sem regulador de
crescimento (KISS et al 1995 ZEPEDA amp SAGAWA
1981) A utilizaccedilatildeo de uma auxina na fase de enraizamento
induz agrave formaccedilatildeo de um sistema radicular mais
pronunciado que facilitaraacute a fase de aclimataccedilatildeo (Figura
5) Observou-se que a concentraccedilatildeo de ANA afetou
significativamente (P 005) o nuacutemero de raiacutezes massa
fresca das raiacutezes e da parte aeacuterea A altura da planta natildeo
foi afetada pela concentraccedilatildeo de ANA sendo o valor
de F natildeo significativo
Constatou-se uma relaccedilatildeo quadraacutetica entre as
variaacuteveis nuacutemero e massa da mateacuteria fresca das raiacutezes e da
parte aeacuterea e a concentraccedilatildeo de ANA A estimativa da
proliferaccedilatildeo de raiacutezes baseando-se no nuacutemero de raiacutezes
por explante aumentou com a concentraccedilatildeo de ANA
atingindo um maacuteximo de 119 com 22 mg L-1 de ANA
Concentraccedilotildees acima de 22 mg L-1 tendem a apresentar
um efeito inibitoacuterio na produccedilatildeo de raiacutezes (Figura 6)
Tambeacutem a massa da mateacuteria fresca das raiacutezes aumentou
com a concentraccedilatildeo de ANA com um maacuteximo de 023 g
obtida com a concentraccedilatildeo de 24 mg L-1 de ANA (Figura
7) Essa tendecircncia foi observada para a massa fresca da
parte aeacuterea onde a estimativa maacutexima da produccedilatildeo de
biomassa foi de 046 g por explante em meio com 19 mg L-1
de ANA (Figura 8)
Com relaccedilatildeo agrave altura das plantas natildeo houve
diferenccedila significativa entre as diferentes concentraccedilotildees
de ANA e essa variaacutevel
FIGURA 5 Brotaccedilotildees enraizadas em meio MS contendo diferentes concentraccedilotildees de ANA (mg L-1) aos 30 dias apoacutesa inoculaccedilatildeo
00 05 10 15 20 25 30 40
Efeito de isopenteniladenina por quatro subcultivos 81
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
FIGURA 6 Variaccedilatildeo do nuacutemero de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 7 Variaccedilatildeo na massa da mateacuteria fresca de raiacutezes por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
FIGURA 8 Variaccedilatildeo da massa de mateacuteria fresca da parte aeacuterea por explante em funccedilatildeo da concentraccedilatildeo de ANA
y = -1202x2 + 5291x + 61504
R2 = 06865
0
2
4
6
8
10
12
14
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Nordm
de r
aiacuteze
s
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00282x2 + 01359x + 00704
R2 = 07573
0
005
01
015
02
025
03
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Concentraccedilatildeo de ANA ( mg L-1)
Mas
sa fr
esca
das
raiacutez
es
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
y = -00363x2 + 01407x + 03255
R2 = 0857
0
01
02
03
04
05
06
0 05 1 15 2 25 3 35 4
Mas
sa fr
esca
da
part
e aeacute
rea
Concentraccedilatildeo de ANA (mg L-1)
SANTOS M do D M dos et al82
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 76-83 2008
CONCLUSOtildeES
No meio liacutequido contendo MS vitaminas 3 de
sacarose e 16 mg L-1 de 2iP obteacutem-se uma estimativa meacutedia
de 139 brotaccedilotildees por explante inoculado no final do quarto
subcultivo (120 dias)
Maior nuacutemero de raiacutezes adventiacutecias por explante eacute
estimado com a concentraccedilatildeo de 22 mg L-1 de ANA
AGRADECIMENTOS
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientiacutefico e Tecnoloacutegico (CNPq) pelas bolsas concedidas
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MOTHEacute G P B et al84
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
(Recebido em 25 de marccedilo de 2008 e aprovado em 6 de outubro de 2008)
EFICIEcircNCIA FOTOQUIacuteMICA E CARACTERIacuteSTICAS DECRESCIMENTO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR (Saccharum officinarum L)CULTIVADA IN VITRO EM DIFERENTES CONCENTRACcedilOtildeES DE
SACAROSE E QUALIDADE DE LUZ
PHOTOCHEMICAL EFFICIENCY AND GROWTH CHARACTERISTICS OF SUGARCANE (Saccharum officinarum L) PLANTS CULTIVATED IN VITRO UNDER
DIFFERENT SUCROSE CONCENTRATIONS AND LIGHT QUALITY
1Bioacuteloga Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000 28015-620
Campos dos Goytacazes RJ georgiabecharayahoocombr2Engenheiro Agrocircnomo Universidade Estadual do Norte Fluminense Centro de Ciecircncias Tecnoloacutegicas e Agraacuterias UENF-CCTA
Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal Departamento de Fisiologia Vegetal Sala 217 P4 Av Alberto Lamego 2000
28015-620 Campos dos Goytacazes RJ alenauenfbr crespouenfbr campostuenfbr
RESUMODentre os diversos produtos agriacutecolas cultivados no
Estado do Rio de Janeiro a cana-de-accediluacutecar (Saccharumofficinarum L) eacute a cultura de maior importacircncia econocircmicaDiante dessa importacircncia na regiatildeo fluminense torna-senecessaacuteria cada vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividadedessa espeacutecie A produccedilatildeo em escala comercial de plantas decana-de-accediluacutecar pode ser beneficiada pela obtenccedilatildeo de mudas dealta qualidade e homogeneidade em curtos periacuteodos de tempo oque pode ocorrer pelo uso da micropropagaccedilatildeo A presenccedila decarboidrato eacute essencial para o enraizamento de muitas espeacuteciesin vitro sendo a sacarose o accediluacutecar mais utilizado namicropropagaccedilatildeo Poreacutem a necessidade desse composto nomeio de cultivo vem sendo discutida por alguns autoresObjetivou-se neste trabalho verificar o efeito da concentraccedilatildeode sacarose no meio de cultivo e a qualidade da luz sobre acapacidade fotossinteacutetica e as caracteriacutesticas de crescimentoem plantas de cana de accediluacutecar cultivadas in vitro Para tanto foiquantificada a emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila determinadaa massa seca de raiz e da parte aeacuterea a massa foliar especiacutefica eestimada a concentraccedilatildeo de clorofilas Os resultados obtidosmostraram que em cana de accediluacutecar cultivada in vitro em frascosfechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de sacarose no meio decultivo promoveu aumentos na mateacuteria seca da parte aeacuterea e daraiz na massa foliar especiacutefica e na intensidade de cor verde dasfolhas estudadas Natildeo houve modificaccedilatildeo na capacidadefotoquiacutemica maacutexima do PSII A justificativa para o natildeo-comprometimento da sacarose sobre as caracteriacutesticasrelacionadas agrave fotossiacutentese estudadas neste trabalho como oteor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o rendimentoquacircntico maacuteximo do PSII pode estar relacionada com a altacapacidade dessa espeacutecie em armazenar sacarose nos tecidos
Termos para indexaccedilatildeo Saccharum officinarum aclimatizaccedilatildeomeio de cultura fotossiacutentese
ABSTRACTThe State of Rio de Janeiro was one of the pioneers in
Brazil to set out the sugar cane activity which still represents animportant segment in the regional economy The production ofplants in commercial scale would be benefited by the attainmentof seedlings of high quality and homogeneity in short periods oftime which can be obtained using the micropropagation Thepresence of carbohydrate is essential for in vitro rooting of manyspecies with the sucrose being considered the most used sugarduring micropropagation despite the discussion by some authorsregarding its requirement The objective of this work was toevaluate the effect of sucrose concentrations in the culture mediumand light quality on the photosynthetic capacity and biometriccharacteristics on micropropagated sugar cane plants Chlorophyllfluorescence and contents were quantified root and shoot drymass and specific leaf mass were determined and chlorophyllconcentrations were estimated The results showed that theincrease in sucrose concentration during the in vitro cultivationof sugar cane in closed flasks promotes increase in the shootand root dry matter specific leaf mass and chlorophyll contentsNo modification of maximum PSII photochemistry capacity wasobserved The lack of sucrose effects on photosyntheticcharacteristics such chlorophyll contents and PSII yield may berelated to the high capacity of this specie to storage sucrose inthe tissues
Index terms Saccharum officinarum aclimatization culturemedium photosynthesis
Siacutembolos PSII fotossistema II SPAD Soil Plant AnalysisDevelopment BAP benzilaminopurina FFF fluxo de foacutetonsfotossinteacuteticos MPC medidor portaacutetil de clorofilas MFE massafoliar especiacutefica F
vF
maacutex Rendimento quacircntico maacuteximo do
fotossistema II MSPA massa seca parte aeacuterea MSR massaseca raiz AIB acido indol butirico ANAacido naftaleno aceacutetico
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 85
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
INTRODUCcedilAtildeO
A cana-de-accediluacutecar (Saccharum officinarum L) foi
introduzida no Brasil no seacuteculo XVII com o objetivo de
quebrar o monopoacutelio mundial exercido pela Franccedila no
comeacutercio do accediluacutecar produzido nas Ilhas do Caribe O cultivo
da cana-de-accediluacutecar teve um grande aumento quando em
meados da deacutecada de 70 o Brasil criou o Programa Nacional
do Aacutelcool o qual teve como objetivo estimular a produccedilatildeo
do aacutelcool visando o atendimento das necessidades do
mercado interno e externo e da poliacutetica de combustiacuteveis
automotivos (MENEZES VEIGA et al 2006)
Atualmente a cana-de-accediluacutecar eacute uma das principais
culturas do panorama brasileiro e continua crescendo em
funccedilatildeo do consumo como fonte de energia e accediluacutecar Dentre
os diversos produtos agriacutecolas cultivados no estado do Rio
de Janeiro a cana-de-accediluacutecar eacute a cultura de maior importacircncia
econocircmica (MENEZES VEIGA et al 2006) Diante dessa
importacircncia na regiatildeo fluminense torna-se necessaacuteria cada
vez mais a busca na elevaccedilatildeo da produtividade dessa espeacutecie
Uma das alternativas para essa elevaccedilatildeo eacute a formaccedilatildeo de
lavouras por meio do uso de mudas de excelente qualidade
Assim a micropropagaccedilatildeo eacute uma teacutecnica que pode contribuir
significativamente para a produccedilatildeo de mudas de cana de
accediluacutecar de alta qualidade Entre as diversas vantagens que
essa teacutecnica apresenta estaacute a produccedilatildeo raacutepida de mudas em
larga escala e a eliminaccedilatildeo de microrganismos potencialmente
fitopatogecircnicos
A micropropagaccedilatildeo tradicional tem como premissa
a presenccedila de sacarose no meio de cultivo uma vez que
esse composto eleva a produccedilatildeo de biomassa e pode
contribuir para aumentar o enraizamento de muitas espeacutecies
in vitro (GRATTAPAGALIA amp MACHADO 1990)
Entretanto vaacuterios autores tecircm sugerido que a fonte de
carboidrato no meio de cultura inibe o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono A adiccedilatildeo da sacarose ao meio
inibiu a fotossiacutentese potencial in vitro (LEES et al 1991)
reduziu a atividade da Rubisco (GROUT amp DONKIN 1987)
inibiu o acuacutemulo de clorofila (LA ROSA et al 1984) e
diminuiu a fixaccedilatildeo do carbono inorgacircnico por meio da
inibiccedilatildeo da atividade da carboxilase do fosfoenol-piruvato
e do Ciclo de Calvin (NEUMANN amp BENDER 1987)
Entretanto Khan et al (2006) trabalhando com cana-de-
accediluacutecar relataram que a maacutexima taxa de multiplicaccedilatildeo de
dois clones (AEC82-223 e NIA-2004) foi nas concentraccedilotildees
de 4 e 6 de sacarose no meio mostrando que nesses
clones cultivados em frascos fechados in vitro a sacarose
foi de fundamental importacircncia para a otimizaccedilatildeo do
crescimento da parte aeacuterea Esses autores mostraram que
a maior taxa de enraizamento foi em meio MS com 1 mg L-
1 de AIB e 6 de sacarose
Alguns autores para facilitar a aclimatizaccedilatildeo da
planta micropropagada sugerem adotar na uacuteltima fase da
cultura in vitro diminuir a concentraccedilatildeo de sacarose com
o objetivo de tentar elevar a taxa fotossinteacutetica e capacitar
a planta agrave nutriccedilatildeo autotroacutefica uma vez que a fonte de
carboidrato no meio de cultura pode inibir o metabolismo
fotossinteacutetico do carbono Em vista disso Simmonds (1983)
obteve melhores resultados no enraizamento de porta-
enxerto de macieira ao reduzir a concentraccedilatildeo de sacarose
no meio de cultura para apenas 1 Contudo Wainwright
amp Scrace (1989) sugerem manter a sacarose no niacutevel
normalmente utilizado (3) ou ateacute mesmo aumentaacute-lo numa
fase anterior agrave aclimatizaccedilatildeo visando melhorar a qualidade
da planta Segundo esses autores o preacute-condicionamento
em altas concentraccedilotildees de sacarose aumentaria as reservas
de carboidratos armazenadas pelas folhas aumentando
assim a energia disponiacutevel para as placircntulas durante o
processo de aclimataccedilatildeo Para George amp Sherrington (1984)
no desenvolvimento in vitro de muitas espeacutecies a
assimilaccedilatildeo fotossinteacutetica eacute baixa fazendo com que as
culturas sejam dependentes do suporte externo de
carboidratos
Objetivou-se neste trabalho verificar o efeito da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo e da qualidade
de luz sobre a eficiecircncia fotoquiacutemica e as caracteriacutesticas de
crescimento da cana-de-accediluacutecar cultivada in vitro
MATERIAL E MEacuteTODOS
O experimento foi realizado na unidade de pesquisa
em fotossiacutentese de plantas in vitro no Setor de Fisiologia
MOTHEacute G P B et al86
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
Vegetal Laboratoacuterio de Melhoramento Geneacutetico Vegetal
na UENF Campos dos GoytacazesRJ
Como fonte de explante foram utilizadas placircntulas
de cana-de-accediluacutecar com dois a trecircs centiacutemetros de altura
proveniente de material vegetal jaacute em fase de multiplicaccedilatildeo
contendo meio MS modificado (02 mg L-1 de fonte de
nitrogecircnio combinado 01 mg L-1 de cinetina 02 mg L-1 de
BAP 1 mg L-1 de Tiamina 100 mg L-1 de mio-inositol e 20 g
L-1 de sacarose) em condiccedilotildees de perfilhamento O material
foi obtido no Laboratoacuterio de Cultura de Tecido do Campus
Dr Leonel Miranda UFRRJ O meio de cultura utilizado
para o recultivo foi o MS padratildeo (MURASHIGE amp SKOOG
1962) acrescido de 100 mg L-1 de mio-inositol 7 g L-1 de
Agar (Vetec) e sem adiccedilatildeo de reguladores de crescimento
Os tratamentos consistiram de uma combinaccedilatildeo bifatorial
de seis concentraccedilotildees de sacarose no meio (0 10 20 30
40 e 50 g L-1) e dois tipos de luz (lacircmpada fluorescente
branca 40w luz branca com irradiacircncia de 948 igravemol m-2 s-
1 e lacircmpada fluorescente tipo Grolux 40w luz vermelha
com irradiacircncia de 966 igravemol m-2 s-1) O pH do meio foi
ajustado para 58 antes da inclusatildeo do aacutegar e da
autoclavagem (15 atm a 120ordmC por 20 min) A parcela
experimental consistiu de frascos tipo baby food
contendo 50 mL do meio MS nas diferentes
concentraccedilotildees de sacarose O delineamento experimental
foi inteiramente casualizado com trecircs repeticcedilotildees em que
cada parcela consistiu de um frasco com duas plantas
Apoacutes a inoculaccedilatildeo os explantes foram cultivados em
sala de crescimento a uma temperatura 25ordm C plusmn 10 a um
fluxo de foacutetons fotossinteacuteticos de 120 a 150 igravemol m-2 s-1
com 16h de fotoperiacuteodo
Aos vinte e oito dias apoacutes a inoculaccedilatildeo (DAI) foi
utilizada a 2ordm eou 3ordm folha mais expandida para as anaacutelises
para determinaccedilatildeo do rendimento quacircntico maacuteximo do PSII
(FvF
max) (apoacutes adaptaccedilatildeo da folha ao escuro por 30
minutos com auxiacutelio de pinccedilas) por meio de um fluoriacutemetro
natildeo modulado PEA (Plant Efficiency Analyser - Hansatech
Ltd King s Lynn Norfolk UK)
A medida de intensidade de verde (relacionada com
o teor de clorofilas totais) foi feita nesta mesma eacutepoca por
meio do medidor portaacutetil do teor de clorofila SPAD 502
Chlorophyll Meter Minolta Japatildeo Os valores da
intensidade do verde foram provenientes da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha
A massa foliar especiacutefica feita aos 28 dias apoacutes o
cultivo in vitro foi determinada a partir da divisatildeo da massa
seca da folha de uma parte do limbo foliar pela respectiva
aacuterea dessa parte
No final do experimento foi determinada a massa
seca das partes aeacuterea e da raiz das plantas Essas partes
foram colocadas em estufa com ventilaccedilatildeo forccedilada a 70ordm C
por 48 h A partir dos dados da massa seca estimou-se a
relaccedilatildeo parte aeacuterearaiz (massa seca da parte aeacuterea massa
seca das raiacutezes)
Os dados experimentais foram submetidos a uma
anaacutelise de variacircncia e para cada tratamento foram
avaliados trecircs frascos Foram realizadas duas repeticcedilotildees
para cada frasco e seis plantas foram utilizadas
provenientes de trecircs frascos Os dados de cada avaliaccedilatildeo
foram analisados estatisticamente por teste Tukey a 5
e os resultados expressos como meacutedia (plusmn erro-padratildeo) de
seis repeticcedilotildees
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Os diferentes tratamentos de luz e dosagem de
sacarose no meio de cultura influenciaram a produccedilatildeo de
biomassa na parte aeacuterea mostrando que maiores
concentraccedilotildees de sacarose produziram maior biomassa
(figuras 2 e 3) O tratamento controle (0 g L-1 de sacarose)
natildeo produziu biomassa suficiente para as anaacutelises
Portanto as plantas-controle cultivadas nessas
condiccedilotildees requerem a adiccedilatildeo de carboidratos para suprir
suas necessidades metaboacutelicas quer participando na
geraccedilatildeo de energia ou como fonte de esqueletos
carbocircnicos para vaacuterios processos bioquiacutemicos sugerindo
que as condiccedilotildees encontradas no frasco de cultivo e na
sala de crescimento foram ineficientes para as plantas-
controle desenvolverem condiccedilotildees de realizar
fotossiacutentese e consequumlentemente produzir biomassa
(Figura 1)
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 87
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 1 Plantas de cana-de-accediluacutecar cultivada em diferentes concentraccedilotildees de sacarose apoacutes 28 dias de cultivo (A)0 g L-1 (B) 10 g L-1 (C) 20 g L-1 (D) 30 g L-1 (E) 40 g L-1 e (F) 50 g L-1
Os resultados obtidos por meio da anaacutelise de
variacircncia para as cinco diferentes concentraccedilotildees de
sacarose (10 20 30 40 e 50 g L-1) no meio demonstraram
que para a caracteriacutestica massa seca da parte aeacuterea (MSPA)
houve uma resposta crescente em que doses crescentes
de sacarose promoveram acreacutescimos de biomassa seca
(Figura 2A) A concentraccedilatildeo 10 g L-1 diferenciou
significativamente das concentraccedilotildees de 40 g L-1 e 50 g L-
1 produzindo uma menor MSPA 0039 0101 e 0135g
respectivamente (Figura 2A) Dados semelhantes foram
obtidos em morangueiros batata menta e videira por
(RIQUELME et al 1991) e por (NICOLOSO 2003) em que
nesse trabalho a elevaccedilatildeo da concentraccedilatildeo de sacarose
de 30 ateacute 60 g L-1 promoveu maior produccedilatildeo de biomassa
dos oacutergatildeos de Pfaffia glomerata (Spreng) Pedersen
Com relaccedilatildeo agrave mateacuteria seca da raiz (MSR) as
diferenccedilas de concentraccedilatildeo de sacarose influenciaram
significativamente os resultados As menores
concentraccedilotildees (10 20 e 30 g L-1) somente diferenciaram
significativamente da maior concentraccedilatildeo (50 g L-1) que
produziu valores 0084g de MSR (Figura 2b) Pelos
resultados foi verificado que a presenccedila de sacarose
mostrou-se fundamental para o desenvolvimento da parte
aeacuterea e das raiacutezes da cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro
De fato Khan et al (2008) mostraram que o meio MS com
meia forccedila suplementado com reguladores de crescimento
(AIB e ANA) e 60 g L-1 de sacarose proporcionou maior
enraizamento em 3 variedades elite de cana-de-accediluacutecar Khan
et al (2006) tambeacutem indicaram a importacircncia da sacarose
no crescimento da parte aeacuterea em clones dessa espeacutecie
George (1996) relata que para formaccedilatildeo de raiacutezes in vitro
haacute necessidade de energia e carboidratos sendo esses
fornecidos por meio da fotossiacutentese (em condiccedilotildees
autotroacuteficas) ou oriunda de uma fonte exoacutegena de accediluacutecar
(em sistemas heterotroacuteficos ou mixotroacuteficos) O autor
verificou ainda que o aumento da concentraccedilatildeo de
sacarose de modo geral estimula o crescimento e a
formaccedilatildeo de raiacutezes de algumas espeacutecies Jaacute em outros
trabalhos na fase de enraizamento a reduccedilatildeo da
concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultura vem sendo
citada como beneacutefica na melhoria da qualidade do sistema
radicular bem como na sobrevivecircncia das placircntulas
transplantadas (ANDRADE 1998)
Com relaccedilatildeo agrave MSPAMSR os tratamentos natildeo
apresentaram diferenccedila significativa apontando uma
relaccedilatildeo direta entre o crescimento das raiacutezes e da parte
MOTHEacute G P B et al88
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
FIGURA 2 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e as diferentes concentraccedilotildees de sacarose no meio de cultivoindependente da luz (A) Massa seca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa seca raiz (MSR) (C) Razatildeo massa seca da parteaeacuterearaiacutezes (MSPAMSR) (D) Massa foliar especiacutefica (MFE) (E) Teor estimado de clorofilas totais (valores de MPC)(F) Rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (F
vF
m) em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Cada
siacutembolo representa a meacutedia de seis repeticcedilotildees em MSPA MSR MSPA MSR e MFE e oito repeticcedilotildees em Valores deMPC e da relaccedilatildeo F
vF
m Meacutedias seguidas pela mesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
aeacuterea Essa relaccedilatildeo eacute de fundamental importacircncia para a
organizaccedilatildeo dos processos fisioloacutegicos e desenvolvimento
das plantas (TAIZ amp ZEIGER 2002) Essas partes estatildeo
relacionadas entre si e essa relaccedilatildeo eacute devida agrave dependecircncia
nutricional e fitohormonal da parte aeacuterea com a raiz
(SALISBURY amp ROSS 1992) (Figura 2c)
As diferentes concentraccedilotildees de sacarose
influenciaram a massa foliar especiacutefica (MFE) a qual
representa a quantidade de massa seca por unidade de
aacuterea da folha estimando a proporccedilatildeo relativa da superfiacutecie
assimilatoacuteria e os tecidos de sustentaccedilatildeo e condutores da
folha aleacutem de poder ser correlacionada positivamente com
a taxa fotossinteacutetica (CRUZ et al 2004) A menor
concentraccedilatildeo de sacarose apresentou o menor valor (148
g m-2) o que indica que a ausecircncia de sacarose pode
comprometer a espessura foliar bem como a capacidade
da maquinaria fotossinteacutetica (Figura 2d)
O teor de clorofila foi estimado por meio do medidor
portatil de clorofila (MPC) Os valores encontrados da
intensidade do verde foram oriundos da meacutedia de cinco
repeticcedilotildees em cada folha As diferentes concentraccedilotildees de
sacarose no meio de cultivo influenciaram a intensidade
de verde (Figura 2e) em que a maior concentraccedilatildeo de
sacarose apresentou o maior valor do MPC (336)
0
003
006
009
012
015
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
A (g
)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MFE
(gm
2)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
0
002
004
006
008
01
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSR
(g)
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
20
22
24
26
28
30
32
34
36
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
Val
ores
de
MPC
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
000
100
200
300
400
500
600
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
MSP
AM
SR
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
062
064
066
068
07
072
074
076
078
Concentraccedilatildeo de Sacarose (gL)
FvF
m
10 gL
20 gL
30 gL
40 gL
50 gL
A
B
D
C
E
F
Eficiecircncia fotoquiacutemica e caracteriacutesticas de crescimento 89
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
diferenciando significativamente dos demais tratamentos
Esses valores estatildeo relacionados com uma maior
quantidade de clorofilas totais em maiores teores de
sacarose Nesse caso em plantas de cana-de-accediluacutecar a
elevaccedilatildeo no teor de sacarose contribui para o incremento
do teor de clorofilas a partir de 30 g L-1 desse composto no
meio de cultivo
Com relaccedilatildeo agrave atividade do PSII avaliada por meio
da emissatildeo da fluorescecircncia da clorofila a as plantas de
cana-de-accediluacutecar apresentaram alteraccedilotildees com relaccedilatildeo aos
tratamentos utilizados Estatisticamente os valores
menores da eficiecircncia fotoquiacutemica maacutexima do PSII (FvF
m)
foram verificados na concentraccedilatildeo de 20 g L-1 de sacarose
(Figura 2f) Com exceccedilatildeo das plantas crescidas nessa
concentraccedilatildeo de sacarose as demais plantas cultivadas
em meios com maiores concentraccedilotildees de sacarose natildeo
apresentaram diferenccedilas significativas para a caracteriacutestica
FvF
m Por meio dos resultados relacionados aos efeitos
da concentraccedilatildeo de sacarose no meio de cultivo sobre as
caracteriacutesticas de crescimento a produccedilatildeo de biomassa
estaria mais relacionada agrave oferta de carbono no meio de
cultivo do que a eficiecircncia na maquinaria fotoquiacutemica das
plantas
A qualidade do fluxo de foacutetons fotossinteacutetico (FFF)
teve influecircncia relevante nas caracteriacutesticas MSPA MSR
MFE e valores do MPC A luz considerada vermelha emitida
pelas lacircmpadas GroLux proporcionou maiores valores das
caracteriacutesticas supracitadas Tais resultados poderiam estar
relacionados a um maior ganho de carbono por meio de um
aumento da taxa fotossinteacutetica liacutequida eou indiretamente
causado por alteraccedilotildees fitormonais causadas pela
modificaccedilatildeo no espectro luminoso (CAMPELL amp
BONNER 1986) Ainda na presenccedila da luz vermelha houve
favorecimento para a produccedilatildeo de biomassa tanto na parte
FIGURA 3 Relaccedilatildeo entre as caracteriacutesticas estudadas e os diferentes tipos de luz (Branca e Vermelha) (A) Massaseca parte aeacuterea (MSPA) (B) Massa foliar especifico (MFE) (C) Massa seca raiz (MSR) e (D) Teor estimado declorofilas totais (Valores de MPC) Cada siacutembolo representa a meacutedia sendo 15 repeticcedilotildees em MSPA MSR e valores deMPC e 20 repeticcedilotildees em MFE em plantas de cana-de-accediluacutecar cultivadas in vitro aos 28 dias Meacutedias seguidas pelamesma letra natildeo diferem estatisticamente entre si (Tukey 5)
14
16
18
20
22
LUZ
MFE
(gm
2)
Luz branca
Luz vermelha
0
001
002
003
004
005
LUZ
MSR
(g)
Luz branca
Luz vermelha
002
004
006
008
01
012
014
LUZ
MSP
A (g
)
Luz branca
Luz vermelha
20
22
24
26
28
30
LUZ
Val
ores
de
MP
C
Luz branca
Luz vermelha
A
C
B
D
MOTHEacute G P B et al90
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 84-91 2008
aeacuterea como no sistema radicular A luz branca apresenta
uma composiccedilatildeo espectral que pode variar e causar
respostas diferenciadas na cultura in vitro A
predominacircncia na emissatildeo de foacutetons na regiatildeo do vermelho
ateacute o azul pode estimular a induccedilatildeo de calos quebrar a
moleacutecula de AIA e ainda estimular a induccedilatildeo de brotos
(BARRUETO CID 2001 CHAMOVITZ amp DENG 1996)
As plantas cultivadas em maiores concentraccedilotildees
(40 e 50 gL-1) de sacarose e aclimatadas em luz vermelha
tiveram melhores resultados do que nos outros tratamentos
(Figura 2 e 3)
CONCLUSOtildeES
Em cana-de-accediluacutecar cultivada em condiccedilotildees in vitro
e em frascos fechados a elevaccedilatildeo na concentraccedilatildeo de
sacarose no meio de cultivo promoveu aumentos na
mateacuteria seca da parte aeacuterea e da raiz na massa foliar
especiacutefica e na intensidade de cor verde das folhas
estudadas Natildeo houve alteraccedilatildeo na eficiecircncia fotoquiacutemica
maacutexima do PSII A luz vermelha associada agrave concentraccedilotildees
de sacarose de 40 e 50gL-1 parece ter uma resposta
somatoacuteria tanto na produccedilatildeo de parte aeacuterea e raiz quanto
na massa foliar especiacutefica e no teor de clorofila
A justificativa para o natildeo-comprometimento da
sacarose no meio sobre as caracteriacutesticas relacionadas agrave
fotossiacutentese estudadas neste trabalho como exemplo o
teor de clorofilas (avaliada pelos valores do MPC) e o
rendimento quacircntico maacuteximo do PSII (FvF
m) pode estar
relacionada com a alta capacidade dessa espeacutecie em
armazenar sacarose nos tecidos
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VICTOacuteRIO C P et al92
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
(Recebido em 20 de junho de 2008 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EFFECTS OF AUXINS AND CYTOKININS ON IN VITRODEVELOPMENT OF Alpinia purpurata K SCHUM AND
PHENOLIC COMPOUNDS PRODUCTION
EFEITO DE AUXINAS E CITOCININAS NO DESENVOLVIMENTO IN VITRO DEAlpinia purpurata K SCHUM E PRODUCcedilAtildeO DE SUBSTAcircNCIAS FENOacuteLICAS
CRISTIANE PIMENTEL VICTOacuteRIO1 IACINETE PAMPLONA DA CRUZ2 ALICE SATO3RICARDO MACHADO KUSTER4 CELSO LUIZ SALGUEIRO LAGE5
1Doutora em Ciecircncias Bioloacutegicas (Biofiacutesica) Instituto de Biofiacutesica Carlos Chagas FilhoLab Fisiologia Vegetal Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050 21952-590 Rio de Janeiro RJ crispvbiofufrjbr
2Estudante de Farmaacutecia bolsista PIBICUFRJ3Doutora em Biotecnologia Vegetal Prof Dep Botacircnica Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro Av Pasteur 458
22290-040 Rio de Janeiro RJ alicesatouniriobr4Doutor Prof Laboratoacuterio de Fitoquiacutemica Nuacutecleo de Pesquisas de Produtos Naturais (NPPN) Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco H 21941-902 Rio de Janeiro RJ kusternppnufrjbr
5Doutor Prof IBCCFo Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ Av Carlos Chagas Filho sn CCS Bloco G sala G2-050
21952-590 Rio de Janeiro RJ clslagebiofufrjbr
ABSTRACTAlpinia purpurata K Schum is largely used in
ornamentation and scarcely present itself in folk medicine Studiesusing plant tissue culture technique under standardized conditionpermit to evaluate plant physiological morphological andphytochemical responses to exogenous plant growth regulatorThis work consisted in the establishment of in vitro A purpurataplants using different concentrations of auxin and cytokinins inmg L-1 IAA 2 TDZ 2 and 4 IAA 2 + TDZ 2 IAA 2 + BAP 2Additionally it was determined the content of phenoliccompounds in the leaves of field and in vitro plants using Folin-Ciocalteau method Buds from inflorescence A purpurata weredisinfested and introduced in solid MS medium to initiate culturesThe direct organogenesis process was fast and satisfactoryproducing elongated plants with a developed radicular systemThe rooting percentage reached 100 for all treatments after 2months Cytokinins and auxins were important for the increasingof the leaves quantity (42 to 51) and shoot elongation (40 cm)Liquid MS0 presented the favorable results for fastmicropropagation and higher production of shoots providingplants ready to be acclimatized In vitro plants cultivated underMS0 produced 93 of phenolic compounds in comparison withfield plants (100) Through High Performance LiquidChromatographic it was verified similar chromatographic profilesbetween field and in vitro plant extracts
Index terms Folin-Ciocalteau HPLC micropropagation tissueculture Zingiberaceae Alpinia purpurata
RESUMOAlpinia purpurata K Schum eacute uma espeacutecie muito
utilizada como ornamental e possui escassas indicaccedilotildees de usona medicina popular Estudos utilizando teacutecnicas de cultura detecidos vegetais permitem a partir de condiccedilotildees padronizadas
avaliar as respostas fisioloacutegicas morfoloacutegicas e fitoquiacutemicas dosvegetais aos fitorreguladores exoacutegenos Este trabalho consistiuno estabelecimento de plantas de A purpurata in vitro utilizando-se diferentes concentraccedilotildees de auxina e citocininas (mg L-1) AIA2 TDZ 2 e 4 AIA 2 + TDZ 2 AIA 2 + BAP 2 Verificou-setambeacutem o conteuacutedo de substacircncias fenoacutelicas nas folhas de plantasde campo e in vitro atraveacutes do meacutetodo de Folin-CiocalteauBrotos oriundos da inflorescecircncia de A purpurata foramdesinfestados e introduzidos em meio MS soacutelido para iniciar asculturas O processo de organogecircnese direta foi raacutepido esatisfatoacuterio produzindo plantas alongadas e com sistema radiculardesenvolvido A porcentagem de enraizamento atingiu 100 paratodos os tratamentos ao final de 2 meses As citocininas e auxinasforam importantes para incrementar o nuacutemero de folhas (42 a51) e alongamento dos brotos (40 cm) em comparaccedilatildeo com omeio controle O MS0 liacutequido foi o mais favoraacutevel para raacutepidapropagaccedilatildeo in vitro e maior produccedilatildeo de brotos com suprimentode plantas aptas a serem aclimatizadas Plantas in vitro cultivadasem meio MS0 produziram 93 de fenoacuteis totais em relaccedilatildeo agravesplantas de campo (100) Atraveacutes da Cromatografia Liacutequida deAlta Eficiecircncia foi verificada semelhanccedila entre os perfiscromatograacuteficos dos extratos de plantas de campo e in vitro
Termos para indexaccedilatildeo Folin-Ciocalteau CLAEmicropropagaccedilatildeo cultura de tecidos vegetais ZingiberaceaeAlpinia purpurata
INTRODUCTION
Alpinia purpurata K Schum is widely used as
ornamental plant in several tropical and subtropical areas
with high international market demand (KRESS et al 2002
SANGWANANGKUL et al 2008) In folk medicine it is
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 93
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
used for cough in Venezuela and presents antibacterial
activity (BERMUacuteDEZ amp VELAacuteSQUEZ 2002 ZOGHBI et
al 1999) Recent studies have showed the phytochemical
potential of this species (VICTOacuteRIO et al 2007 2008)
The vegetative propagation through rhizome is the
main way of reproduction of this species According to
Moroacuten (1987) for the propagation of A purpurata in
greenhouse the time is twice more than in in vitro systems
Plant tissue culture techniques have been employed in
Brazil since 1950 and the main advantages include the
continuous and fast production of aseptic and selected
plants These techniques permit a commercial-scale
production of plants (ROUT et al 2006) and some studies
have showed them as an alternative for optimizing
secondary metabolites production (RAO amp
RAVISHANKAR 2002) The micropropagation of A
purpurata supplies may be a source for ornamental and
medicinal raw material (MULABAGAL amp TSAY 2004
POMPELLI et al 2007)
Addition of auxins and cytokinins in the culture
media are essential to improve and regulate growth and
morphogenesis of the cultures (CHITRA amp PADMAJA
2005 KYOZUKA 2007) Besides several studies have
reported the effects of plant growth regulators in in vitro
phenolic production (SANTOS-GOMES et al 2002
THIEM 2003) We intended to develop a protocol for in
vitro production of A purpurata plants and to evaluate
the effects of auxins and cytokinins on plant development
and compounds phenolic production
MATERIAL AND METHODS
Plant Material
Buds from inflorescence of donor plants of Alpinia
purpurata red inflorescence were used as source of plant
material to initiate in vitro cultures Voucher specimen was
deposited at the Herbarium of Rio de Janeiro Botanical
Garden under accession number RB 433484 Buds were
collected and washed with running water using nylon
brush for removing residues The sterilization process was
concluded in four steps in sterile ambient after dissection
of leaves 20 of commercial bleach solution for 40 min
followed by immersion in distilled water plus commercial
detergent solution for 15 min dipped in 70 ethanol
washed for 10 min in 30 of commercial bleach solution
and rinsed with sterile distilled water three after each step
Establishment of in vitro cultures
Explants were subcultured into glasses (16 x 8 cm)
containing 50 ml of culture medium Murashige amp Skoog
(1962) supplemented with 3 of sucrose 148 igraveM thiamine-
Different letters indicate significant differences at plt 005 level Tukey s test n e 30
VICTOacuteRIO C P et al96
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
FIGURE 2 In vitro development of Alpinia purpurata plants in MS medium under different plant growth regulators(mgl-1) (A) Sequence of development 1 month (I) 2 months (II) and 3 months (III) (B) shoot height after 2 months (C)shoot height and (D) percentage of shoots after 3 months Different letters indicate significant differences at plt 005level Tukey s test n e 30 100 correspond to 30 shoots per explant within 1 year
advantage of in vitro production of secondary metabolites
is the possibility to control environment and nutritional
factors Data show high level of phenolics in in vitro
cultures of A purpurata (93) compared with field plants
(100) (Figure 3A) Through reversed-phase HPLC was
found similarity between field and in vitro plants profiles
(Figure 3B-C) The peaks 1 2 and 3 presented
characteristics of phenolic compounds verified through
UV spectra obtained by HPLC A purpurata is not currently
used in folk medicine and these results may indicate the
presence of therapeutic resource in its phytochemistry
The preliminary investigation of phenolic in
organogenic cultures of A purpurata using Folin-
Ciocalteau reagent and HPLC analysis brings perspectives
about the production of antioxidant compounds by this
species In addition the establishment of tissue culture of
A purpurata may be a good alternative to produce aseptic
plants and its bioactive metabolites
Effects of auxins and cytokinins on in vitro 97
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 92-98 2008
ACKNOWLEDGEMENTS
C P Victoacuterio acknowledges the fellowship from
CAPES and PROEX financial support
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Curva de crescimento atividade da fenilalanina 99
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
(Recebido em 23 de janeiro de 2008 e aprovado em 7 de outubro de 2008)
CURVA DE CRESCIMENTO ATIVIDADE DA FENILALANINA AMOcircNIA-LIASE E TEORES DE FENOacuteIS E TANINOS TOTAIS EM CALOS DE
GROWTH CURVE PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE ACTIVITY AND TOTALPHENOL LEVELS IN CALLUS OF Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville
(FABACEAE-MIMOSOIDEAE)
ANA HORTEcircNCIA FONSEcircCA CASTRO1 MILLER MARANI LIMA2 RENATO PAIVA3 AMAURI ALVES DE ALVARENGA4 MIRELLE OLIVEIRA SOacuteTER5
1Doutora Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG2Bolsista ICFAPEMIG Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG3PhD Universidade Federal de LavrasUFLA 37200-000 Lavras MG4Doutor Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 37200-000 Lavras MG renpaivauflabr5Acadecircmica Centro Universitaacuterio de LavrasUNILAVRAS 37200-000 Lavras MG
RESUMOObjetivou-se estabelecer a curva de crescimento e avaliar
a atividade da fenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis etaninos totais em calos de barbatimatildeo explantes foliares foraminoculados em meio MS suplementado com 30 g L-1 sacarose eacrescidos de 905 M de 24-D O crescimento a atividade dafenilalanina amocircnia-liase e os teores de fenoacuteis e taninos totaisforam avaliados a cada 10 dias durante 110 dias A curva decrescimento dos calos apresentou um padratildeo sigmoidal com cincofases distintas Os teores meacutedios de fenoacuteis totais acompanharamas variaccedilotildees observadas para a atividade enzimaacutetica Alta atividadee maiores teores de fenoacuteis totais foram observados no explanteinicial com reduccedilotildees progressivas ateacute a fase linear Na faseestacionaacuteria observaram-se incrementos importantes naatividadeda fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais Natildeo foidetectada a presenccedila de taninos totais nos calos
Termos para indexaccedilatildeo Barbatimatildeo cultivo in vitro plantamedicinal Stryphnodendron adstringens
ABSTRACTIn order to establish growth curve phenylalanine ammonia-
lyase (PAL) activity and total phenol and tannin levels inStryphnodendron adstringens leaf explants were inoculated inMS medium supplemented with 30 g L-1 sucrose and 905 M24-D The growth PAL activity and total phenol and tanninlevels were evaluated at 10 days intervals during 110 days Callusgrowth curve presented a sigmoid shape with five different phasesAverage levels of total phenol followed the changes observed forenzymatic activity High activity and higher levels of total phenolwere observed in initial explants with progressive reductions untilthe linear phase Increases in phenylalanine ammonia-lyase activityand total phenols levels were observed in stationary phase Notannins were observed on callus
Index terms Stryphnodendron adstringens In vitro CultureMedicinal Plant
INTRODUCcedilAtildeO
Atualmente um consideraacutevel esforccedilo tem sido feito
com o intuito de se produzir fitoteraacutepicos com maiores
concentraccedilotildees de substacircncias ativas vegetais atraveacutes de
culturas de ceacutelulas ou tecidos Segundo Taniguchi et al
(2002) dentre as diferentes teacutecnicas de cultivo in vitro a
cultura de calos tem apresentado grande importacircncia para
a propagaccedilatildeo e produccedilatildeo in vitro de espeacutecies de interesse
medicinal A desdiferenciaccedilatildeo e induccedilatildeo de regeneraccedilatildeo
das plantas a partir de calos satildeo muitas vezes processos
difiacuteceis de serem obtidos e podem demandar algum tempo
As auxinas tecircm sido amplamente utilizadas nos meios de
cultivo para a induccedilatildeo de calos e geralmente dependendo
da concentraccedilatildeo causam elongaccedilatildeo celular e expansatildeo ou
divisatildeo celular Em geral com o uso de baixas
concentraccedilotildees de auxinas predomina a formaccedilatildeo de raiacutezes
adventiacutecias enquanto que altas concentraccedilotildees induzem a
formaccedilatildeo de calos A interaccedilatildeo entre auxinas e citocininas
tambeacutem eacute muito utilizada para a induccedilatildeo de calogecircnese
(GRATTAPAGLIA amp MACHADO 1998)
Durante a calogecircnese eacute importante estabelecer-se
a curva de crescimento de calos o que propicia a
identificaccedilatildeo das fases distintas de crescimento da espeacutecie
A partir deste estudo pocircde-se determinar o momento exato
de repicagem dos calos para um meio fresco ou a
CASTRO A H F et al100
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
possibilidade de sua utilizaccedilatildeo em suspensotildees celulares
visando a otimizaccedilatildeo da produccedilatildeo de metaboacutelitos
secundaacuterios em espeacutecies medicinais (GEORGE 1996) O
crescimento in vitro de calos geralmente apresenta um
padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas Segundo Smith
(1992) a fase lag se caracteriza como fase de maior produccedilatildeo
de energia correspondendo ao periacuteodo em que as ceacutelulas
se preparam para a divisatildeo visando sua expansatildeo Ocorre o
iniacutecio da mobilizaccedilatildeo de metaboacutelitos primaacuterios sem qualquer
divisatildeo celular siacutentese de proteiacutenas e de compostos
especiacuteficos Essa fase resulta em um pequeno crescimento
dos calos A fase exponencial eacute biossinteacutetica Observa-se o
maior crescimento dos calos devido agrave maacutexima taxa de divisatildeo
celular caracteriacutestica desse periacuteodo O nuacutemero de ceacutelulas
aumenta Na fase linear haacute diminuiccedilatildeo da divisatildeo celular
mas aumento de volume celular e a fase de desaceleraccedilatildeo eacute
o momento em que as culturas devem ser transferidas para
outro meio devido agrave reduccedilatildeo de nutrientes produccedilatildeo de
produtos toacutexicos secagem do aacutegar e reduccedilatildeo do oxigecircnio
no interior das ceacutelulas Na fase estacionaacuteria ocorre maior
acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
O barbatimatildeo [Stryphnodendron adstringens
(Mart) Coville Fabaceae-Mimosoideae) eacute uma importante
espeacutecie medicinal do cerrado com altos teores de
compostos polifenoacutelicos em especial os taninos Possui
grande distribuiccedilatildeo e importacircncia econocircmica para o estado
de Minas Gerais sendo empregado como adstringente e
cicatrizante no combate de amidalite faringite
hemorroacuteidas leucorreacuteias erupccedilotildees cutacircneas diarreacuteias e
como agentes antiinflamatoacuterios (LIMA et al 1998)
A fenilalanina amocircnia-liase (EC 4315) eacute uma
enzima-chave e regulatoacuteria da rota biossinteacutetica dos
fenilpropanoacuteides e de seus derivados e catalisa a
desaminaccedilatildeo do aminoaacutecido L-fenilalanina em aacutecido trans-
cinacircmico sendo esse o primeiro passo para a biossiacutentese
dos fenoacutelicos vegetais (ASSIS et al 2001) De acordo com
Rivero et al (2001) os niacuteveis dessa enzima podem flutuar
significativamente em intervalos relativamente curtos em
resposta a uma ampla variedade de estiacutemulos como o
fotoperiacuteodo fitocromo mudanccedilas de temperatura radiaccedilatildeo
UV deficiecircncia de nutrientes reguladores de crescimento
virais e ataque de insetos bem como o estaacutedio de
desenvolvimento vegetal e o grau de diferenciaccedilatildeo de
ceacutelulas e tecidos (SOLECKA amp KACPERSKA 1995)
Devido agrave exploraccedilatildeo irracional pelas induacutestrias de
curtimento do couro o barbatimatildeo encontra-se ameaccedilado
de extinccedilatildeo Assim devem-se melhorar as teacutecnicas de
propagaccedilatildeo encorajar seu cultivo e criar vias alternativas
para a produccedilatildeo de tanino em larga escala a partir de
fontes naturais
Objetivou-se estabelecer a curva de crescimento e
avaliar a atividade da fenilalananina amocircnia-liase e os teores
de fenoacuteis e taninos totais em calos de barbatimatildeo
MATERIAL E MEacuteTODOS
As etapas experimentais foram realizadas entre
fevereiro de 2007 e janeiro de 2008 no Centro Universitaacuterio
de Lavras (UNILAVRAS) e na Universidade Federal de
Lavras (UFLA)
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento foi obtida a partir da
inoculaccedilatildeo de segmentos foliares de 025 cm2 de aacuterea
empregados como explantes em meio MS (MURASHIGE
amp SKOOG 1962) suplementado com 30 g L-1 sacarose e
acrescidos de 905 M de 24-D Os meios foram
solidificados com aacutegar na proporccedilatildeo de 7 g L-1 e o pH
ajustado para 57 plusmn 01 antes da autoclavagem por 20 min
Apoacutes inoculaccedilatildeo os explantes foram transferidos para sala
de crescimento onde foram incubados na presenccedila de luz
agrave temperatura de 27 plusmn 1 oC fotoperiacuteodo de 16 horas e
DFFFA= 25 mol m-2 s-1
Foram feitas pesagens do material inoculado fresco
a partir do dia da inoculaccedilatildeo (tempo 0) ateacute ser atingida a
fase de desaceleraccedilatildeo em intervalos de 10 dias O
porcentual de crescimento dos calos foi determinado pela
equaccedilatildeo proposta por Lameira (1997)
crescimento = Pf Pi
Pf
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 101
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
onde
Pf = Mateacuteria seca final
Pi = Mateacuteria seca inicial
O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado sendo cada pesagem composta
por duas repeticcedilotildees e cada repeticcedilatildeo pela meacutedia de 10
tubos cada tubo contendo um explante Os dados obtidos
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia e analisados
estatisticamente utilizando-se o Sistema de Anaacutelise de
Variacircncia para Dados Balanceados (FERREIRA 2000)
Determinaccedilotildees da atividade da fenilalanina amocircnia-liasee teores de fenoacuteis e taninos totais
Calos obtidos na curva de crescimento foram
imersos em nitrogecircnio liacutequido e posteriormente
armazenados em Freezer Forma Scientific a -86 oC ateacute o
momento de serem utilizados na determinaccedilatildeo da atividade
enzimaacutetica Outros calos assim como aqueles obtidos no
experimento com a sacarose foram liofilizados para
determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis e taninos totais
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase
O procedimento descrito por Cheng amp Breen (1991)
com algumas modificaccedilotildees foi utilizado para extraccedilatildeo e
determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica
Calos congelados (5 g) foram triturados
homogeneizadas com acetona 80 e congelados por 15
minutos O homogenato foi filtrado e o pelet foi seco atraveacutes
de vaacutecuo
O extrato proteacuteico foi obtido homogeneizando-se
05 g do pelet seco em 5 mL de tampatildeo borato de soacutedio 01
M pH= 88 contendo 5 mM de -mercaptoetanol 2 mM
de EDTA e 4 (pv) de PVP a 4oC Depois de 1h o
homogenato foi centrifugado a 27000 g por 30 minutos a
4 oC A mistura de reaccedilatildeo foi constituiacuteda por 05 mL de L-
fenilalanina 30 M 30 mM de tampatildeo borato de soacutedio pH=
88 e 1 mL de extrato cru num volume total de 3 mL O
substrato foi adicionado apoacutes 10 minutos de preacute-incubaccedilatildeo
e a reaccedilatildeo foi interrompida com 01 mL de HCl 6 N A
atividade da fenilalanina amocircnia-liase foi determinada pela
produccedilatildeo de cinamato apoacutes 90 minutos agrave 30 oC sob
agitaccedilatildeo contiacutenua medida pela variaccedilatildeo da absorbacircncia a
290 nm A atividade especiacutefica da enzima foi definida em
nmol de aacutecido cinacircmicohmg de proteiacutena
Fenoacuteis totais
Amostras de calos liofilizados foram trituradas em
micromoinho e armazenadas em frascos fechados
protegidos da luz
Aproximadamente 500 mg de calos liofilizados e
triturados foram extraiacutedos cinco vezes com 5 mL de uma
mistura de metanolaacutegua (11) sob refluxo O volume final
do extrato foi completado para 25 mL
Uma aliacutequota de 100 L do extrato foi utilizada para
a determinaccedilatildeo dos teores de fenoacuteis totais atraveacutes do
meacutetodo de Folin-Dennis segundo as normas da AOAC
(1970) As determinaccedilotildees foram feitas em triplicata e o
resultado foi expresso em porcentagem de aacutecido tacircnico
por grama de calo seco
Taninos Totais
A determinaccedilatildeo dos teores de taninos totais foi
realizada atraveacutes do Meacutetodo de Difusatildeo Radial de acordo
com Hagerman (1987)
Um volume de 5 mL do extrato foi concentrado a 37oC e posteriormente retomado com 05 mL de uma mistura
de metanolaacutegua (11) Uma aliacutequota de 15 mL foi utilizada
para a determinaccedilatildeo Todas as determinaccedilotildees foram feitas
em triplicata O resultado foi expresso em percentagem de
tanino por grama de calo seco
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Curva de crescimento de calos
A curva de crescimento dos calos seguiu o padratildeo
sigmoidal apresentando cinco fases distintas lag
exponencial linear desaceleraccedilatildeo e estacionaacuteria (Figura
1) A fase lag onde as ceacutelulas do explante se preparam para
a divisatildeo celular e produccedilatildeo de energia ocorreu ateacute o 30o
dia apoacutes a inoculaccedilatildeo com calos apresentando um
crescimento de aproximadamente 73 A segunda fase
exponencial estendeu-se do 31o
ao 50o
dia de cultivo
com 70 de crescimento periacuteodo esse caracterizado pela
CASTRO A H F et al102
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
maacutexima divisatildeo celular A fase linear ocorreu entre o 51o ao
70o
dia e natildeo se verificou crescimento dos calos nesse
periacuteodo Entre o 71o
e 100o
dia observou-se a fase de
desaceleraccedilatildeo com 28 de crescimento e a partir do 101o
dia a cultura entrou na fase estacionaacuteria Segundo Smith
(1992) na fase de desaceleraccedilatildeo os calos devem ser
transferidos para um novo meio de cultura devido agrave
reduccedilatildeo de nutrientes secagem do aacutegar e acuacutemulo de
substacircncias toacutexicas
FIGURA 1 Curva de crescimento de calos deStryphnodendron adstringens obtidos a partir de segmentosfoliares inoculados em meio MS contendo 905 M de 24-D e 30 g L-1 de sacarose
0
002
004
006
008
01
012
014
016
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Mat
eacuteria
sec
a (g
)
De maneira semelhante essa mesma curva de
crescimento pode ser dividida em trecircs fases fase de
crescimento lento (do dia da inoculaccedilatildeo ateacute o 30o dia) fase
de crescimento ativo (do 31o
ao 70o
dia) e fase de
estabilizaccedilatildeo (71o
dia em diante) sendo indicada a
repicagem entre o 71o ao 100o dia
A curva de crescimento para calos de
barbatimatildeo apresentou um padratildeo semelhante ao de outras
espeacutecies medicinais de cerrado como Byrsonima
intermeacutedia A Juss (NOGUEIRA et al 2008) Croton
(BONILLA 2002) e Derris sp (CONCEICcedilAtildeO 2000)
Atividade da fenilalanina amocircnia-liase e teores de fenoacuteise taninos totais
Na figura 2 encontram-se representados os
resultados da atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase
e dos teores de fenoacuteis totais verificados durante o periacuteodo
experimental O explante inicial apresentou um teor meacutedio
de 065 de taninos totais natildeo se detectando entretanto
a presenccedila de taninos nos demais calos formados
Conforme pode-se observar a atividade da
fenilalanina amocircnia-liase situou-se entre 016 e 196 mol
de aacutecido cinacircmico h-1 g-1 de mateacuteria fresca (plt005) (figura
2A) A atividade apresentou-se maacutexima no explante inicial
(dia 0) e reduziu progressivamente ateacute o 70o dia periacuteodo
esse correspondente agraves fases lag exponencial e linear
Entre o 71o ao 100o dia ou seja na fase de desaceleraccedilatildeo a
atividade enzimaacutetica indicou uma tendecircncia em se manter
constante e a partir do 101o dia (fase estacionaacuteria) verificou-
se um pequeno incremento nessa atividade da ordem de
26 De maneira semelhante os teores meacutedios de fenoacuteis
totais acompanharam as variaccedilotildees observadas para a
atividade enzimaacutetica e situaram-se em uma faixa de 029 a
399 sendo o teor meacutedio maacuteximo observado no explante
inicial (figura 2B) Os teores de fenoacuteis totais reduziram
significativamente ateacute o 60o dia (fase lag e exponencial) e a
partir do 61o
ao 90o
dia permaneceram praticamente
constantes com os menores niacuteveis observados durante o
periacuteodo experimental em torno de 037 em meacutedia A partir
da fase estacionaacuteria (100o dia) verificou-se um aumento de
65 nos teores meacutedios de fenoacuteis totais
Estes resultados mostraram-se muito interessantes
do ponto de vista fisioloacutegico e fitoquiacutemico e corroboram
com relatos de Conceiccedilatildeo (2000) e Lameira (1997) os quais
citam que a fase estacionaacuteria corresponde ao periacuteodo em
que ocorre maior acuacutemulo de metaboacutelitos secundaacuterios
Apesar de esses teores serem baixos eacute importante ressaltar
que o meio de cultura pode ser otimizado para produccedilatildeo
em larga escala de fenoacuteis totais e taninos uma vez que
foram obtidos in vitro a partir de segmentos foliares e de
forma convencional satildeo extraiacutedos da casca da planta adulta
cultivada in vivo
A presenccedila de baixos teores de fenoacuteis e a ausecircncia
de taninos pode estar associada agrave alta atividade metaboacutelica
relacionada ao crescimento dos calos (mitose) o que
demanda elevada quantidade de substrato necessaacuterio agrave
Curva de crescimento atividade da fenilalanina 103
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 99-104 2008
FIGURA 2 Valores meacutedios de atividade da enzima fenilalanina amocircnia-liase (A) e teores de fenoacuteis totais (B) emStryphnodendron adstringens durante o periacuteodo experimental
0
05
1
15
2
25
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Dias
Ativ
idad
e da
Fen
ilala
nina
Am
ocircnia
-Lia
se (
mm
ol d
e aacutec
cin
acircmic
o h-1
g-1 M
F)
A
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120Dias
Fenoacute
is T
otai
s (
)
B
produccedilatildeo de energia Segundo Botta et al (2001) a
diferenciaccedilatildeo celular assim como a desaceleraccedilatildeo da
atividade mitoacutetica progressivamente permite o acuacutemulo de
compostos derivados do metabolismo secundaacuterio Para
Lavola et al (2000) e Pentildeuelas et al (1997) variaccedilotildees nos
teores de metaboacutelitos secundaacuterios natildeo podem ser explicadas
somente pelas diferenccedilas na disponibilidade de carboidratos
devendo-se considerar tambeacutem a disponibilidade de
precursores para a sua siacutentese e as mudanccedilas nos padrotildees
de siacutentese e catabolismo desses compostos
CONCLUSOtildeES
A curva de crescimento para calos de barbatimatildeo
apresentou um padratildeo sigmoidal com cinco fases distintas
sendo indicada a repicagem entre o 71o ao 100o dia
Alta atividade e maiores teores de fenoacuteis totais
foram observados no explante inicial com reduccedilotildees
progressivas ateacute a fase linear Na fase estacionaacuteria
observaram-se incrementos importantes na atividade da
fenilalanina amocircnia-liase e nos teores de fenoacuteis totais
Natildeo se detectou a presenccedila de taninos totais nos
calos durante a determinaccedilatildeo da curva de crescimento na
presenccedila de 904 M de 24-D
AGRADECIMENTOS
Agrave Fundaccedilatildeo de Amparo agrave Pesquisa do Estado de
Minas Gerais (FAPEMIG) pelo suporte financeiro ao
projeto e concessatildeo de bolsa de iniciaccedilatildeo cientiacutefica
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Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 105
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
(Recebido em 14 de fevereiro de 2007 e aprovado em 16 de outubro de 2008)
EMBRIOGEcircNESE SOMAacuteTICA DIRETA DE Coffea arabica LCONCENTRACcedilOtildeES DE NH4NO3 E DE KNO3 NO
DESENVOLVIMENTO DE EMBRIOtildeES1
DIRECT SOMATIC EMBRYOGENESIS OF Coffea arabica L CONCENTRATIONS OFNH4NO3 AND KNO3 ON THE DEVELOPMENT OF EMBRYOS
JULIANA COSTA DE REZENDE2 MOACIR PASQUAL3 SAMUEL PEREIRA DE CARVALHO3ESTER ALICE FERREIRA4 FLAVIA CARVALHO SANTOS5
1Artigo extraiacutedo da dissertaccedilatildeo de mestrado da primeira autora apresentada a Universidade Federal de LavrasUFLA2Pesquisadora MSc Epamig Campus da UFLA Cx P 176 372000-000 Lavras MG julianacostaepamigbr3Professor Dr Titular do Departamento de AgriculturaDAG Universidade Federal de LavrasUFLA Cx P 3037 372000-000
Lavras MG pasqualuflabr samuelpcuflabr4Pesquisadora Dra Epamig Cx P 351 Uberaba MG esterepamigbr5Doutoranda em Fitotecnia Bolsista Capes flavinha3010yahoocombr
RESUMOO melhoramento geneacutetico do cafeeiro tem incorporado
atraveacutes de cruzamentos ganhos geneacuteticos para produtividade eoutras caracteriacutesticas de interesse agronocircmico A introduccedilatildeo demeacutetodos biotecnoloacutegicos para auxiliar os programas demelhoramento geneacutetico tem-se mostrado bastante uacutetilprincipalmente em culturas perenes como eacute o caso do cafeeiroUm importante meacutetodo de propagaccedilatildeo in vitro de plantas deCoffea eacute a embriogecircnese somaacutetica direta Objetivou-se com estetrabalho avaliar os efeitos de diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3 no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos
diretos de C arabica L cv Rubi Os tratamentos foramconstituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH
4NO
3 (0 4125 825
12375 e 1650 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3 (0 475
950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS O experimentofoi mantido por 150 dias em sala de crescimento com irradiacircnciaem torno de 32 igraveM m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas comtemperatura de 25 plusmn 1oC As variaacuteveis avaliadas foram nuacutemero defolhas comprimento da parte aeacuterea e massa fresca da parte aeacutereaOs resultados indicaram que a utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO
3combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de NH
4NO
3 como a mais
indicada para o desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos de Carabica L Os resultados apontam ainda que a ausecircncia denitrogecircnio promove o maior peso das placircntulas
Termos para indexaccedilatildeo Nitrogecircnio cafeacute cv Rubi Coffeaarabica
ABSTRACTCoffee breeding programs have incorporated using
artificial crossings genetic benefits for productivity and othercharacteristics of agronomic interest The introduction ofbiotechnology methods to improve genetic breeding programshas demonstrated to be useful mainly in perennial cultures ascoffee species An important method of in vitro propagation ofCoffea plants is somatic embryogenesis Therefore the objectiveof this work was to obtain the most adequate combinations ofculture medium components for plantlets growth The influence
of NH4NO
3 (0 4125 825 12375 and 1650 mg L-sup1) of MS
formulation x KNO3
(0 475 950 1425 and 1900 mg L-sup1) MSformulation were tested for the development of somatic embryosThe experiments were maintained in a growth room under lightintensity of 32 microMol m-2 s-1 photoperiods of 16 hours andtemperature of 25 plusmn 1o C The characteristics evaluated were leafnumber shoot length and shoot fresh matter The results indicatedthat the use of 950 mgL-sup1 KNO
3 combined with 1155 to 2475
mg L-sup1 NH4NO
3 is the most indicated for the development of
somatic embryos of C arabica L The absence of nitrogenpromotes the largest weight of plantlets
Index Terms Nitrogen Coffee cv Rubi Coffea arabica
INTRODUCcedilAtildeO
O nitrogecircnio eacute um dos elementos necessaacuterios e
ativos para diversos processos metaboacutelicos da planta pois
eacute constituinte de vaacuterias biomoleacuteculas essenciais tais como
aminoaacutecidos aacutecidos nucleacuteicos enzimas e proteiacutenas e
juntamente com a sacarose eacute o principal componente em
quantidade no meio de cultura
O nitrogecircnio difere dos demais macronutrientes por
apresentar-se na forma de caacutetion (amocircnio) e acircnion (nitrito
e nitrato) contribuindo de forma efetiva tanto no
metabolismo celular como na regulaccedilatildeo do seu potencial
osmoacutetico Atua como agente tamponante e favorece a
absorccedilatildeo de outros iacuteons presentes no meio (NAGAO et
al 1994) A vantagem dos tecidos vegetais receberem pelo
menos parte do nitrogecircnio sob uma forma prontamente
reduzida eacute que haveria uma diminuiccedilatildeo no gasto de energia
REZENDE J C de et al106
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
que ocorre na conversatildeo enzimaacutetica de nitrato a amocircnio
(GEORGE et al 1987) O efeito dessas diferentes formas
inorgacircnicas separadamente pode promover ou natildeo o
crescimento e desenvolvimento de determinadas espeacutecies
de plantas enquanto a combinaccedilatildeo das duas estimula o
crescimento de muitas espeacutecies in vitro (CALDAS et al
1998)
De acordo com George amp Sherrington (1984) o
desenvolvimento e morfogecircnese em cultura de tecidos satildeo
acentuadamente influenciados pela disponibilidade de
nitrogecircnio e pela forma como o mesmo eacute fornecido Alta
concentraccedilatildeo de sais do meio MS comparada a outros
meios especificamente dos niacuteveis de amocircnio (-NH4) e
nitrato (-NO3) pode ser criacutetica no processo de morfogecircnese
e crescimento (SAKUTA amp KOMAMINE 1987) estando
pois a demanda energeacutetica fornecida pelo metabolismo de
carboidratos e a assimilaccedilatildeo destes iacuteons diretamente
relacionada com o sucesso da cultura in vitro
Sato (1994) estudou o efeito de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio sobre a propagaccedilatildeo de trecircs
diferentes clones de geacuterbera de vaso (Gerbera jamesonii
Adlam) e concluiu que a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio do
MS completo inibe a regeneraccedilatildeo de brotos enquanto a
utilizaccedilatildeo de concentraccedilotildees diluiacutedas favorece a induccedilatildeo
dos brotos Bespalhok et al (1992) estudaram a
concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia na induccedilatildeo de brotos
em estevia (Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni) e
constataram que a concentraccedilatildeo de nitrato de amocircnia do
MS eacute toacutexica Obteve maior induccedilatildeo de brotaccedilotildees usando
frac14 de nitrato de amocircnia no meio MS Por outro lado Tadesse
et al (2000) verificaram que a accedilatildeo de diferentes
concentraccedilotildees de nitrogecircnio promoveu um incremento
inicial da aacuterea foliar das placircntulas formadas mas ocasionou
efeitos relativamente negativos no aumento da aacuterea foliar
das placircntulas durante a aclimatizaccedilatildeo
O nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio sustenta
boa taxa de crescimento em algumas culturas como roseira
(Rosa gallica L) (NASH amp DAVIES 1972) e trigo (Triticum
que natildeo crescem bem com o nitrato no meio como por
exemplo o arroz (Oriza sativa L) (SARGENT amp KING 1974
YATAZAWA amp FURUHASHI 1968)
Grewal et al (1980) citados por Grattapaglia amp
Machado (1990) verificaram em culturas de eucalipto
(Eucaliptus citriodora Hook) que ao se reduzir pela
metade as concentraccedilotildees de nitrato de amocircnio e de
potaacutessio do meio MS a taxa de multiplicaccedilatildeo dobrava
Essa mesma concentraccedilatildeo proporcionou o melhor
comprimento da parte aeacuterea em embriotildees zigoacuteticos de C
arabica L (RIBEIRO 2001)
A maioria das plantas prioriza a absorccedilatildeo de NH4
+ a
NO3
- poreacutem eacute necessaacuterio encontrar o balanccedilo ideal de
NH4+NO
3- para o oacutetimo crescimento in vitro (SATO 1994)
Objetivou-se com este trabalho estudar os efeitos de
diferentes concentraccedilotildees de NH4NO
3 e KNO
3 do meio MS
no desenvolvimento de embriotildees somaacuteticos diretos de C
arabica L cv Rubi
MATERIAL E MEacuteTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratoacuterio
de Cultura de Tecidos Vegetais do Departamento de
Agricultura da Universidade Federal de Lavras MG Foram
utilizados como explantes embriotildees de C arabica cv
Rubi provenientes da embriogecircnese somaacutetica direta Os
embriotildees somaacuteticos foram induzidos em meio MS
(MURASHIGE amp SKOOG 1962) com 50 dos sais
acrescido de 20 mg L-1 de GA3 6 mg L-1 de cinetina 8 mg
L-1 de ANA 100mg L-1 de caseiacutena hidrolisada e 400mg L-
1 de extrato de malte Os tubos de ensaio foram mantidos
durante 150 dias sob condiccedilotildees de obscuridade com
temperatura de 25 plusmn 1oC Os embriotildees somaacuteticos induzidos
nesse processo foram individualizados em tubos de
ensaio e mantidos durante 30 dias em meio MS
objetivando a homogeneizaccedilatildeo do material para a
realizaccedilatildeo deste experimento
No preparo do meio foram utilizadas soluccedilotildees-
estoque armazenadas em frascos de vidro escuro a
temperaturas em torno de 5degC Os tratamentos foram
constituiacutedos de cinco concentraccedilotildees de NH4NO
3 (0 475
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 107
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
950 1425 e 1900 mg L-sup1) e cinco concentraccedilotildees de KNO3
(0 475 950 1425 e 1900 mg L-sup1) adicionados ao meio MS
O meio foi solidificado com 5g L -1 de aacutegar e o pH
ajustado para 58 plusmn 01 utilizando NaOH 05 e 01 N ou HCl
05 N e 01 N e distribuiacutedo em tubos de ensaio cada um
recebendo 15 mL do mesmo Os tubos foram vedados com
tampas plaacutesticas transluacutecidas antes do processo de
autoclavagem a 121degC e 1 atm por 20 minutos Apoacutes o
resfriamento o meio foi levado agrave cacircmara de fluxo laminar
desinfestada com aacutelcool 70 (etanol) onde foi feita a
inoculaccedilatildeo dos explantes
Os tubos foram vedados com parafilme e mantidos
em sala de crescimento com irradiacircncia em torno de 32 igraveM
m-2 s-1 e fotoperiacuteodo de 16 horas com temperatura de 25 plusmn
1oC O delineamento experimental utilizado foi inteiramente
casualizado com quatro repeticcedilotildees e trecircs tubos por
parcela cada tubo contendo um explante
Aos 150 dias apoacutes a instalaccedilatildeo foram avaliadas as
variaacuteveis nuacutemero de folhas comprimento da parte aeacuterea e
peso da mateacuteria fresca das placircntulas Os valores observados
foram submetidos agrave anaacutelise de variacircncia para dados
desbalanceados Utilizou-se o procedimento GLM
disponiacutevel no aplicativo computacional SASreg (SAS
INSTITUTE 1990)
Em situaccedilotildees em que a anaacutelise de variacircncia natildeo
confirmou a normalidade dos resiacuteduos para o comprimento
da parte aeacuterea e peso da mateacuteria fresca os dados sofreram
uma transformaccedilatildeo para garantir que essa pressuposiccedilatildeo
fosse atendida As transformaccedilotildees utilizadas foram x e5 1 02x respectivamente A variaacutevel nuacutemero de folhas
atendeu agraves pressuposiccedilotildees de normalidade A anaacutelise de
variacircncia do peso da mateacuteria fresca foi realizada por meio
do meacutetodo dos quadrados miacutenimos ponderados pelo
inverso das variacircncias de cada tratamento uma vez que
esses apresentaram heterogeneidade de variacircncias
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Houve efeito significativo das concentraccedilotildees de
NH4NO
3 e KNO
3 para o nuacutemero de folhas e peso da mateacuteria
fresca das placircntulas (Tabela 1) Observa-se que a interaccedilatildeo
entre os fatores mostrou-se significativa em relaccedilatildeo a todas
as caracteriacutesticas avaliadas a 5 de probabilidade pelo
teste F
Nuacutemero de folhas
Analisando-se as curvas de regressatildeo observa-
se na Figura 1 que houve formaccedilatildeo de maior nuacutemero
de folhas quando foram adicionados ao meio de cultura
1900 mg L-sup1 de KNO3
combinado com 12985 mg L-sup1 de
NH4NO
3 (meacutedia de 1163 folhas) Com a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 87879 mg L-sup1 de NH
4NO
3
pocircde-se observar a formaccedilatildeo meacutedia de 1001 folhas
Dessa forma como a diferenccedila eacute miacutenima justifica-se a
utilizaccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 com o objetivo de
reduccedilatildeo dos custos
TABELA 1 Anaacutelise de variacircncia dos dados relativos ao nuacutemero de folhas (NF) comprimento da parte aeacuterea (CPA) epeso da mateacuteria fresca (PMF) das placircntulas de Coffea arabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 e KNO
3
QM Fonte de variaccedilatildeo GL
NF CPA (cm) PMF (g)
NH4NO3 4 458337 01152 17450
KNO3 4 230014 00837 22117
NH4NO3 x KNO3 16 20447 01215 15139
Erro 135 91386 00584 05871
CV () 5162 2357 912
Significativo a 5 pelo teste F
REZENDE J C de et al108
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
FIGURA 1 Nuacutemero folhas de placircntulas de Coffea arabicacv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildees deNH
4NO
3 combinadas com 0950 e 1900 mg L-sup1 de KNO
3
Contudo concentraccedilotildees acima de 87879 mg L-sup1 de
NH4NO
3 combinadas com 950 mg L-sup1 de NH
4NO
3 ou na
ausecircncia desse provocaram reduccedilatildeo no nuacutemero de folhas
possivelmente por toxidez causada pelo amocircnio devido agrave
sua concentraccedilatildeo mais elevada em relaccedilatildeo ao nitrato no
meio de cultura Quando o nitrogecircnio eacute fornecido somente
na forma de sais inorgacircnicos de amocircnio as ceacutelulas in vitro
apresentam sintomas de toxidez (GAMBORG amp SHYLUK
1970 YATAZAWA amp FURUHASHI 1968) demonstrando
assim a necessidade de combinaccedilatildeo dessas duas fontes
no meio de cultura
Segundo Raab amp Terry (1994) em virtude do grande
requerimento de energia fotoquiacutemica para a reduccedilatildeo
bioquiacutemica do nitrato era de se esperar que as plantas
crescessem melhor em meios com amocircnia do que em meios
com nitrato como uacutenica fonte de nitrogecircnio no entanto
observou-se o inverso Esses mesmos autores apontam
como causa desse paradoxo o efluxo de iacuteons H+ que ocorre
devido agrave absorccedilatildeo do iacuteon amocircnio provocando acidificaccedilatildeo
do meio impedindo a absorccedilatildeo de nutrientes Segundo
Hashimoto et al (1992) a presenccedila de amocircnio in vitro
poderia acidificar o meio favorecendo a siacutentese de
carbamatos e tambeacutem a atividade de anidrase carbocircnica
Esses autores conseguiram diminuir o efeito toacutexico do
amocircnio apenas diminuindo a concentraccedilatildeo de nitrato de
amocircnio no meio MS
O nuacutemero de folhas obtidas na ausecircncia de KNO3
foi inferior quando comparado aos demais tratamentos (a
maior meacutedia observada foi 658 folhas na concentraccedilatildeo de
37626 mg L-sup1 de NH4NO
3) evidenciando assim a
importacircncia desse sal para o desenvolvimento de folhas
em placircntulas de C arabica cv Rubi Os resultados obtidos
Embriogecircnese somaacutetica direta de Coffea arabica 109
Plant Cell Cult Micropropag Lavras v4 n2 p 105-110 2008
concordam em parte com os obtidos por Ribeiro (2001)
trabalhando com embriotildees zigoacuteticos de C arabica que
recomenda a adiccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de NH4NO
3 e KNO
3 no
meio de cultura para comprimento da parte aeacuterea
Observa-se ainda que utilizando-se a concentraccedilatildeo
de 1425 mg L-sup1 de KNO3 haacute reduccedilatildeo no comprimento da
parte aeacuterea das placircntulas ateacute a concentraccedilatildeo de 42091 mg
L-sup1 de NH4NO
3 havendo a partir desse ponto incremento
no desenvolvimento da variaacutevel ateacute a concentraccedilatildeo de
149131 mg L-sup1 de KNO3 (132 cm dados transformados)
Esses resultados demonstram que as respostas de
interaccedilatildeo entre fontes de nitrogecircnio variam em funccedilatildeo das
concentraccedilotildees utilizadas
Na ausecircncia de NH4NO
3 em ambas as
concentraccedilotildees estudadas o comprimento da parte aeacuterea
foi inferior (09 e 097 cm respectivamente nas
concentraccedilotildees de 950 e 1425 mg L-sup1 de KNO3) evidenciando
mais uma vez a importacircncia desse sal no desenvolvimento
de embriotildees em C arabica cv Rubi
Peso da mateacuteria fresca
FIGURA 3
Peso da mateacuteria fresca de placircntulas de Carabica cv Rubi cultivadas em diferentes concentraccedilotildeesde NH
4NO
3 combinadas com 0950 mg L-sup1 de KNO
3
6
65
7
75
8
85
9
95
10
105
0 4125 825 12375 1650NH4NO3 (mg L-1)
Peso
da
mat
eacuteria
fre
sca
(g)
Y KNO3 475 Y KNO3 1425 Y KNO3 1900 = ns Y KNO3 0 = 968811 - 006491X + 000061019X2 R2 = 09017 Y KNO3 950 = 800708 + 002278X 000022883X2 R2 =09053
Na ausecircncia de KNO3 houve decreacutescimo do peso
da mateacuteria fresca associado ao incremento das
concentraccedilotildees de NH4NO
3 ateacute a concentraccedilatildeo de 91775
mg L-sup1 de NH4NO
3 (Figura 3) observando-se aumento do
peso da mateacuteria fresca a partir deste ponto Para a
concentraccedilatildeo de 950 mg L-sup1 de KNO3 ocorreu aumento do
peso da mateacuteria fresca ateacute a concentraccedilatildeo de 100221 mg L-
sup1 de NH4NO
3 Poreacutem o maior valor foi registrado na
ausecircncia de ambos os sais estudados (976 g)
Da mesma forma Grossi (2000) trabalhando com
bromeacutelia observou que a menor concentraccedilatildeo de
nitrogecircnio promoveu maior produccedilatildeo de massa fresca
Kanashiro et al (2007) observou decreacutescimo linear na
massa fresca de folhas de bromeacutelia agrave medida que se
aumentou a concentraccedilatildeo de nitrogecircnio (entre 75 e 120
mM) sendo que para cada mM de nitrogecircnio acrescido ao
meio houve um decreacutescimo de 00018 g na massa fresca
Provavelmente o cultivo em concentraccedilotildees maiores de
nitrogecircnio tenderia a diminuir a produccedilatildeo de massa fresca
como foi observado no presente experimento
CONCLUSOtildeES
Com base no crescimento da parte aeacuterea e na
formaccedilatildeo do maior nuacutemero de folhas a utilizaccedilatildeo de 950
mg L-sup1 de KNO3 combinada com 1155 a 2475 mg L-sup1 de
NH4NO
3 eacute mais indicada para o desenvolvimento de
embriotildees somaacuteticos de Coffea arabica L Os resultados
indicam ainda que a ausecircncia de nitrogecircnio promove o
maior peso das placircntulas
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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NORMAS PARA PUBLICACcedilAtildeO DE ARTIGOS E COMUNICACcedilOtildeES CIENTIacuteFICAS
A revista Plant Cell Culture amp Micropropagationeacute editada semestralmente pela Editora da UniversidadeFederal de Lavras (Editora UFLA) publica artigoscientiacuteficos e comunicaccedilotildees cientiacuteficas da aacuterea de culturade tecidos de plantas elaborados por membros dacomunidade cientiacutefica nacional e internacional Natildeo eacutecobrada taxa para publicaccedilatildeo de trabalhos desde que umdos autores seja soacutecio e esteja em dia com a ABCTP(Associaccedilatildeo de Cultura de Cultura de Tecidos de Plantas)Eacute condiccedilatildeo fundamental que os artigoscomunicaccedilotildeessubmetidos agrave apreciaccedilatildeo da revista Plant Cell Culture ampMicropropagation natildeo foram e nem seratildeo publicadossimultaneamente em outro lugar Com a aceitaccedilatildeo do artigopara publicaccedilatildeo os editores adquirem amplos e exclusivosdireitos sobre o artigo para todas as liacutenguas e paiacuteses Apublicaccedilatildeo de artigoscomunicaccedilotildees dependeraacute daobservacircncia das Normas Editoriais dos pareceres do CorpoEditorial e da Comissatildeo ad hoc Todos os pareceres tecircmcaraacuteter sigiloso e imparcial e tanto os autores quanto osmembros do Corpo Editorial eou Comissatildeo ad hoc natildeoobtecircm informaccedilotildees identificadoras entre si
Os conceitos e afirmaccedilotildees contidos nos artigos ecomunicaccedilotildees seratildeo de inteira responsabilidade do(s)autor(es)
1 SUBMISSAtildeO
Cada trabalho deveraacute ter no maacuteximo 14 paacuteginas ejunto do mesmo deveraacute ser encaminhado ofiacutecio dirigido aoEditor Chefe da revista solicitando a publicaccedilatildeo do artigo
Esse ofiacutecio deveraacute conter o pedido de apreciaccedilatildeona revista ao editor chefe a declaraccedilatildeo de ser um trabalhooriginal e natildeo ter sido submetido a nenhuma outra revistaser assinado por todos os autores constar o endereccedilocompleto telefone e e-mail de todos Qualquer inclusatildeoexclusatildeo ou alteraccedilatildeo na ordem dos autores deveraacute sernotificada mediante ofiacutecio assinado por todos os autores(inclusive do autor excluiacutedo)
Originais quatro vias impressas e uma via em CDR comtexto e ilustraccedilotildees e graacuteficos Das 4 vias impressas apenas1 deve conter os nomes completos dos autores e rodapeacutena primeira paacuteginaProcessador de texto Word for Windows (version 98 2000XP ou 2003)Redigido em portuguecircs inglecircs ou espanholEspaccedilamento do texto Duplo Margens esquerda (3cm)direita (2cm) inferior e superiores (25cm) Cabeccedilalho eRodapeacute (25cm)Papel formato A4Fonte Times New Roman tamanho 12Nuacutemero de paacuteginas ateacute 14 paacuteginas numeradasconsecutivamente incluindo as ilustraccedilotildees
Tabelas devem fazer parte do corpo do artigo e serapresentadas no moacutedulo tabela do Word O tiacutetulo deveficar acimaGraacuteficos Figuras e Fotografias devem ser apresentadosem preto e branco niacutetidos e com contraste escaneadosinseridos no texto apoacutes a citaccedilatildeo dos mesmos e tambeacutemem um arquivo agrave parte salvos em extensatildeo tif ou jpg com resoluccedilatildeo de 300 dpi Os graacuteficos devem vir tambeacutemem excel com letra Times New Roman tamanho 10 semnegrito sem caixa de textos e agrupados em arquivo agraveparteSiacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitos emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker sem perda de suas formas originais
2 ESTRUTURA E ORGANIZACcedilAtildeO
21 O artigo cientiacutefico deve ser apresentado na seguintesequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfulas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumo
Index terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
INTRODUCcedilAtildeO
Deve apresentar uma visatildeo concisa do estado atualdo conhecimento sobre o assunto que o manuscritoaborda e enfatizar a relevacircncia do estudo sem constituir-se em extensa revisatildeo e na parte final os objetivos dapesquisa Deve incluir a revisatildeo de literatura
MATERIAL E MEacuteTODOS
Esta seccedilatildeo pode ser dividida em subtiacutetulosindicados em negrito
RESULTADOS E DISCUSSAtildeO
Podem ser divididas em subseccedilotildees com subtiacutetulosconcisos e descritivos e conter tabelas e figuras
CONCLUSOtildeES
Finalizar com os resultados de acordo com osobjetivos do trabalho
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e naseccedilatildeo proacutepria
22 A comunicaccedilatildeo cientiacutefica deve ser apresentada naseguinte sequumlecircncia
TIacuteTULO
Suficientemente claro conciso e completoevitando-se palavras supeacuterfluas em letras maiuacutesculascentralizado em negrito em portuguecircs e inglecircs
AUTORES
Maacuteximo de 6 autoresNomes completos sem abreviaccedilatildeo com chamada para notade rodapeacute da primeira paacutegina em apenas 1 das 4 vias domanuscritoRodapeacute deve conter titulaccedilatildeo instituiccedilatildeo a que o autorestaacute filiado endereccedilo da instituiccedilatildeo CEP cidade estado
endereccedilo de e-mail do respectivo autor
RESUMODeve condensar em um uacutenico paraacutegrafo o
conteuacutedo expondo objetivos materiais e meacutetodos osprincipais resultados e conclusotildees em natildeo mais do que250 palavras De acordo com as normas da NBR6028
Termos para indexaccedilatildeo no miacutenimo de trecircs e maacuteximo decinco Natildeo devem repetir os termos que se acham no tiacutetulopodem ser constituiacutedas de expressotildees curtas e natildeo soacute depalavras e devem ser separadas por viacutergula Se possiacutevelextraiacutedas do vocabulaacuterio Thesagro Thesaurus AgriacutecolaNacional desenvolvido pela CENAGRI (indicaccedilatildeo darevista Plant Cell Culture amp Micropropagation paraevitar o uso de vaacuterios sinocircnimos como termos de indexaccedilatildeo)
ABSTRACTAleacutem de seguir as recomendaccedilotildees do resumo natildeo
ultrapassando 250 palavras deve ser uma traduccedilatildeo proacuteximado resumoIndex terms representam a traduccedilatildeo das palavras-chavepara a liacutengua inglesa
Texto sem subdivisatildeo poreacutem com introduccedilatildeo material emeacutetodos resultados e discussatildeo (podendo conter tabelase graacuteficos e conclusatildeo subentendidas
AGRADECIMENTOS
Se for o caso ao fim do texto e antes das ReferecircnciasBibliograacuteficas a pessoas ou instituiccedilotildees O estilo tambeacutemaqui deve ser soacutebrio e claro indicando as razotildees pelasquais se fazem os agradecimentos
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
Devem seguir as normas para citaccedilatildeo no texto e na seccedilatildeoproacutepria
3 CASO O ARTIGO CONTENHA FOTOGRAFIASGRAacuteFICOS FIGURAS SIacuteMBOLOS E FOacuteRMULASESSAS DEVERAtildeO OBEDECER AgraveS SEGUINTESNORMAS
31 Fotografias deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpi
32 Figuras deveratildeo ser apresentadas em preto e branconiacutetidas e com contraste inseridas no texto apoacutes a citaccedilatildeodas mesmas e tambeacutem em um arquivo agrave parte salvas emextensatildeo TIFF ou JPEG com resoluccedilatildeo de 300 dpiAs figuras deveratildeo ser elaboradas com letra Times NewRoman tamanho 10 sem negrito sem caixa de textos eagrupadas
33 Graacuteficos deveratildeo ser inseridos apoacutes citaccedilatildeo dosmesmos dentro do proacuteprio texto elaboradopreferencialmente em Excel com letra Times New Romantamanho 10 sem negrito sem caixa de textos e agrupadas
34 Siacutembolos e Foacutermulas Quiacutemicas deveratildeo ser feitas emprocessador que possibilite a formataccedilatildeo para o programaPage Maker (ex MathType Equation) sem perda de suasformas originais
OBS A formataccedilatildeo correta eacute parte imprescindiacutevel para queo trabalho seja devidamente protocolado Caso este natildeoesteja nas normas o mesmo seraacute recusado
4 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS as referecircnciasbibliograacuteficas devem ser citadas conforme a NBR60232002da ABNT
A exatidatildeo das referecircncias constantes da listagem e acorreta citaccedilatildeo no texto satildeo de responsabilidade do(s)autor(es) do artigo
41 Orientaccedilotildees gerais- Deve-se apresentar todos os autores do documentocientiacutefico (fonte)- O nome do perioacutedico deve ser descrito por extenso natildeodeve ser abreviado- Em todas as referecircncias deve-se apresentar o local depublicaccedilatildeo (cidade) a ser descrito no lugar adequado paracada tipo de documento- As referecircncias devem ser ordenadas alfabeticamente
42 Exemplificaccedilatildeo (tipos mais comuns)
ARTIGO DE PERIOacuteDICO
VIEIRA R F RESENDE M A V de Eacutepocas de plantio deervilha em Patos de Minas Uberaba e Janauacuteba MinasGerais Ciecircncia e Agrotecnologia Lavras v 24 n 1 p 74-80 janmar 2000
LIVRO
a) livro no todo
STEEL R G D TORRIE J H Principles andprocedures of statistics New York McGraw-Hill Bookl960 481 p
b) Parte de livro com autoria especiacutefica
FLEURY J A Anaacutelise ao niacutevel de empresa dos impactosda automaccedilatildeo sobre a organizaccedilatildeo da produccedilatildeo de trabalhoIn SOARES R M S M Gestatildeo da empresa Brasiacutelia IPEAIPLAN 1980 p 149-159
c) Parte de livro sem autoria especiacutefica
MARTIM L C T Nutriccedilatildeo de bovino de corte emconfinamento In ______ Confinamento de bovino decorte 2 ed Satildeo Paulo Nobel 1986 cap 3 p 29-89
DISSERTACcedilAtildeO E TESE
GONCcedilALVES R A Preservaccedilatildeo da qualidade tecnoloacutegicade trigo (Triticum aestivum L) e controle de Rhyzoperthadominica (F) durante o armazenamento em atmosferacontrolada com Co2 e N2 1997 52 f Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Ciecircncia dos Alimentos) Universidade Federal deLavras Lavras 1997
MATIOLI G P Influecircncia do leite proveniente de vacasmastiacuteticas no rendimento de queijo frescal 2000 55 pDissertaccedilatildeo (Mestrado em Ciecircncias dos Alimentos) -Universidade Federal de Lavras Lavras 2000
Nota A folha eacute composta de duas paacuteginas anverso everso Alguns trabalhos como teses e dissertaccedilotildees satildeoimpressos apenas no anverso e neste caso indica-se f(ABNT NBR60232002 p 18)
TRABALHOS DE CONGRESSO E OUTROS EVENTOS
SILVA J N M Possibilidades de produccedilatildeo sustentada demadeira em floresta densa de terra firme da Amazocircniabrasileira In CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO 61990 Campos do Jordatildeo Anais Campos do Jordatildeo SBSSBEF 1990 p 39-45
DOCUMENTOS ELETROcircNICOS
As obras consultadas online satildeo referenciadas conformenormas especiacuteficas para cada tipo de documento(monografia no todo e em parte trabalho apresentado emevento artigo de perioacutedico artigo de jornal etc)acrescidas de informaccedilotildees sobre o endereccedilo eletrocircnicoapresentado entre braquetes (lt gt) precedido da expressatildeo
Disponiacutevel em e da data de acesso ao documentoprecedida da expressatildeo Acesso em Nota Natildeo se recomenda referenciar material eletrocircnico decurta duraccedilatildeo nas redes (ABNT NBR60232000 p 4)Segundo padrotildees internacionais a divisatildeo de endereccediloeletrocircnico no fim da linha deve ocorrer sempre apoacutes barra ()
Monografia (acesso online)
a) livro no todo
TAKAHASHI T (Coord) Tecnologia em foco BrasiacuteliaSocinfoMCT 2000 90 p Disponiacutevel em lthttpwwwsocinfoorgbrgt Acesso em 22 ago 2000
b) parte de livro
TAKAHASHI T Mercado trabalho e oportunidades In______ Sociedade da informaccedilatildeo no Brasil livro verdeBrasiacutelia SocinfoMCT 2000 cap 2 p 13-24 Disponiacutevelem lthttpwwwsocinfogovbrgt Acesso em 22 ago 2000
c) Parte de congresso seminaacuterio etc
GIESBRECHT H O Avaliaccedilatildeo de desempenho deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica a experiecircncia deprojeto excelecircncia na pesquisa tecnoloacutegica InCONGRESSO ABIPTI 2000 Fortaleza Gestatildeo deinstitutos de pesquisa tecnoloacutegica Fortaleza Nutec 2000Disponiacutevel em lthttpwwwabiptiorgbrgt Acesso em01 dez 2000
d) Tese
SILVA E M Arbitrariedade do signo a liacutengua brasileirade sinais (LIBRAS) 1997 144 p Dissertaccedilatildeo (Mestradoem Linguumliacutestica Aplicada e Estudo de Liacutengua) - PontifiacuteciaUniversidade Catoacutelica de Satildeo Paulo Satildeo Paulo 1997Disponiacutevel em lthttpwwwterracombrvirtualbooksfreebookportdid teseshtmgt Acesso em 28 nov 2000
Artigo de perioacutedico (acesso online)
RESENDE A M G Hipertexto tramas e trilhas de umconceito contemporacircneo Informaccedilatildeo e Sociedade Recifev 10 n 1 2000 Seccedilatildeo Educaccedilatildeo Disponiacutevel em lthttpwwwinformaccedilatildeoesociedadeufpbbrgt Acesso em 30 nov2000
CITACcedilAtildeO PELO SISTEMA ALFABEacuteTICO (AUTOR-DATA) (conforme ABNT NBR105202002)Dois autores - Steel amp Torrie (1960) ou (STEEL amp TORRIE1960)Trecircs ou mais autores - Valle et al (l945) ou (VALLE et al1945)Obs Quando forem citados dois autores de uma mesmaobra deve-se separaacute-los pelo sinal amp (comercial)
5 O EDITOR CHEFE NOTIFICARAacute O AUTOR DORECEBIMENTO DO ORIGINAL E POSTERIORMENTE
O INFORMARAacute SOBRE SUA PUBLICACcedilAtildeO OSARTIGOS QUE NECESSITAREM DE MODIFICACcedilOtildeESSERAtildeO DEVOLVIDOS AO AUTOR PARA A DEVIDAREVISAtildeO
6 OS ARTIGOS NAtildeO APROVADOS SERAtildeODEVOLVIDOS
7 OS ARTIGOS SERAtildeO PUBLICADOS EM ORDEMDE APROVACcedilAtildeO
8 O NAtildeO-CUMPRIMENTO DESSAS NORMASIMPLICARAacute NA DEVOLUCcedilAtildeO DO ARTIGO AOAUTOR
9 OS CASOS OMISSOS SERAtildeO RESOLVIDOS PELACOMISSAtildeO EDITORIAL
10 O ARTIGO DEVERAacute SER ENVIADO PARA
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepartamento de BiologiaSetor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 3037CEP 37200-000Lavras MG
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Plant Cell Culture amp Micropropagation asemestral journal edited by Editora UFLA of theUniversidade Federal de Lavras publishes scientificarticles and communications in the area of plant tissueculture elaborated by researchers of the national andinternational scientific community One of the authors mustbe associated and have paid all charges required by theABCTP (Plant Tissue Culture Association) in order to betax free for publication in Plant Cell Culture ampMicropropagation Submission of a manuscript implies thatit is neither under consideration for publication elsewherenor has appeared previously in part or in whole Onacceptance for publication authors assign to the Editorsfull copyright of the manuscript in all languages andcountries Publications will depend on editorial rules andon the review of experts and ad hoc commission Reviewerand editorial opinions will be anonymously communicatedto authors
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1 SUBMISSION
The manuscript must present a maximum of 14pages At the time of submission a cover letter must besent with the manuscript copies to the Editor requestingpublication of the article This cover letter must be signedby all authors
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the text after citation and also in a separate file (on thesame diskette as the article) saved in extension tif orjpg with resolution of 300 dpi The title should be below
and presented in the language in which the article waswritten and in EnglishSymbols and Chemical Formula must be presented usinga word processor that permits a format Page Maker
2 STRUCTURE AND ORGANIZATION
21 The article should be presented in the followingsequence
TITLE
In English language containing no more than 15 words incapital letters and bold
AUTHORS
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copies Footnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTshould be informative and condensed and should
explain the objectives material and methods results andconclusion of the work in a maximum of 250 words all writtenin one paragraphFor articles written in English the abstract should also bepresented in Portuguese
Key words minimum of three and maximum of five Theyshould not repeat words that are already in the title Thesemay include phrases as well as individual words and shouldbe separate by commasFor articles written in English the key-words should alsobe presented in Portuguese
INTRODUCTION
Should present a concise vision of the current level ofknowledge that has been achieved within the subject areathat the paper will discuss It should neither give anextensive review nor should it include details about theresults and discussion It should clearly indicate theobjectives of the research that was carried out
MATERIAL AND METHODS
This section can contain subdivisions with subtitles inbold print
RESULTS AND DISCUSSION
This section can have subsection which begins withconcise descriptive titles in bold print
CONCLUSIONS
Finishing agree of objectives of work
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
22 The Communication should be presented in thefollowing sequence
TITLE
Sufficiently clear conspicuous and complete withoutsuperfluous words It is recommended to initiate with theterm that represent the most important aspect with otherterms in decreasing of importance
TITLE IN PORTUGUESE
FULL NAME(S) OF THE AUTHOR(S)
Maximum of 6 authorsFull names with call for baseboard note with the followinginformation on first page only 1 copysThey should comein the footnote of the first page in only one of the fourprinted copiesFootnote titulation name of the institution to which theauthors belong address of institution ZIP CODE citystate mail address
ABSTRACTWritten continuously without paragraph It must
not exceed 250 words Index terms must be enclosed afterthe abstract using terms different from those used in thetitle and separated by comma
Index terms (3 to 5) must be described in capital and smallletters and express the content of the article
ABSTRACT AND INDEX TERMS IN PORTUGUESE
Text with no division but must include introductionmaterial and methods results and discussion andconclusion (it may include tables and figures)
ACKNOWLEDGEMENTS
If applicable
BIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
They should follow citation norms both in the text and inthe appropriated section
3 PHOTOGRAPHS GRAPHS FIGURES SYMBOLSOR FORMULA CONTAINED IN THE ARTICLE SHOULDOBEY THE FOLLOWING RULES
31 Photographs must be presented in black and whiteclear and with contrast inserted in the text after their citationand also in a separate file (on the same diskette as thearticle) saved in extension TIFF
or JPEG withresolution of 300 dpi
32 Figures must be presented in black and white clearand with contrast inserted in the text after their citation andalso in a separate file (on the same diskette as the article)saved in extension TIFF
or JPEG with resolution of300 dpi They must be elaborated using Times New Romanfont size 10 without bold without text box and arranged
33 Graphs must be inserted in the text after their citationelaborated preferentially in Excel using Times New Romanfont size 10 without bold
34 Symbols and Chemical Formula must be presentedusing a word processor that permits a format for Page Maker(ex MathType Equation) without loss of its original form
4 REFERENCES references must be cited according toNBR60232002 of ABNT All references and their correctcitation in the text are of the entire responsibility of theauthor(s)
5 THE BRAZILIAN ASSOCIATION OF PLANT TISSUECULTURE (ABCTP) WILL INFORM THE AUTHOR THERECEIPT OF THE ORIGINAL MANUSCRIPT ANDEVENTUALLY IT WILL ALSO SEND INFORMATIONREGARDING ITS PUBLICATION MANUSCRIPTSTHAT REQUIRE MODIFICATIONS WILL BERETURNED TO THE AUTHOR FOR THE RESPECTIVEREVISION ANDCORRECTIONS
6 MANUSCRIPTS NOT APPROVED WON T BERETURNED TO THE AUTHOR
7 ARTICLES WILL BE PUBLISHED ACCORDING TOTHE ORDER OF RECEIPT AND APPROVAL
8 IF ANY OF THESE RULES ARE NOT ATTENDED THEMANUSCRIPT WILL BE RETURNED TO THE AUTHOR
9 THE NEGLECTFUL CASES WILL BE SOLVED BYTHE EDITORIAL COMMITTEE
10 MANUSCRIPTS SHOULD BE SENT TO THEFOLLOWING ADDRESS
ABCTP
Plant Cell Culture amp MicropropagationUniversidade Federal de LavrasDepto de Biologia - Setor de Fisiologia VegetalCaixa Postal 303737200-000 Lavras MG BRAZIL