petunjuk FKIP

8/3/2019 petunjuk FKIP

1/23

Petunjuk Praktikum Kultur Jaringan

KULTUR JARINGAN TANAMAN

A. Pengertian

Kultur jaringan tanaman sebagai salah satu aplikasi dari

bioteknologi tanaman merupakan budidaya tanaman yang

dikerjakan secara in-vitro (dalam wadah tertutup atau dalam

botol). Kultur jaringan yang dalam bahasa asing disebut sebagai

tissue culture, weefsel cultuus atau gewebe kultur, menurut

Yusnita (2004) didefinisikan sebagai suatu teknik menumbuh-

kembangkan bagian tanaman, baik berupa sel, jaringan atau

organ dalam kondisi aseptik secara in-vitro, yang dicirikan oleh

kondisi kultur yang aseptik, penggunaan media kultur buatan

dengan kandungan nutrisi lengkap dan ZPT (Zat Pengatur

Tumbuh) serta kondisi ruang kultur yang suhu dan

pencahayaannya terkontrol.

Kultur jaringan tanaman akan berhasil dengan baik apabila

syarat-syarat yang dibutuhkan dapat terpenuhi. Syarat-syarat

tersebut meliputi : pemilihan eksplan/bahan tanam, penggunaan

media yang sesuai, keadaan yang aseptik dan pengaturan

lingkungan tempat tumbuh yang sesuai.

B. Dasar Ilmiah

Kultur jaringan sesuai dengan definisinya sebagai teknik

budidaya sel, jaringan dan organ tanaman dalam suatu lingkungan

yang terkendali dan dalam keadaan aseptik, mengandung 2

prinsip dasar yang jelas, yaitu :

1. Bahan tanam yang bersifat totipoten.

Pelaksanaan Teknik kultur jaringan ini berdasarkan teori sel

yang dikemukakan oleh Schleiden dan Schwan mengenai sifat

totipotensi (total genetic potencial), yaitu setiap sel tanaman

yang hidup dilengkapi dengan informasi genetik dan perangkat

1


2/23


fisiologi yang lengkap untuk tumbuh dan berkembang menjadi

tanaman utuh jika ditempatkan dalam lingkungan yang sesuai.

2. Budidaya yang terkendali.

Sifat bahan yang totipotensi saja tidak cukup untuk kesuksesan

kegiatan kultur jaringan. Keadaan media tempat tumbuh,

lingkungan yang mempengaruhinya (kelembaban, temperatur,

cahaya) serta keharusan sterilitas adalah hal mutlak yang

harus terkendali.

2


3/23


C. Macam Teknik Kultur Jaringan dan Manfaatnya

Beberapa macam kultur jaringan yang dapat diaplikasikan

berikut manfaatrnya, antara lain :

1. Kulur biji steril, dapat digunakan untuk

mengatasi perbanyakan tanaman yang persentase

perkecambahannya rendah, misalnya pada biji tanaman

anggrek.

2. Kultur meristem, yaitu kultur jaringan yang

menggunakan jaringan tanaman yang sel-selnya masih aktif

mengalami permbelahan, misalnya tunas lateral tanaman yang

masih muda, hal ini biasa digunakan untuk menghasilkan

tanaman bebas virus atau penyakit sistemik lainnya.

3. Kultur kalus, yaitu kultur jaringan untuk

menginduksi kalus. Kalus merupakan sekumpulan sel yang

masih aktif membelah dan belum terdeferensisai untuk

membentuk tunas maupun akar. Salah satu manfaat kultur

kalus adalah sebagai usaha produksi metabolit sekunder yang

merupakan bahan aktif untuk obat-obatan pada industri

farmasi.

Dibandingkan dengan perbanyakan tanaman secara

konvensional, perbanyakan tanaman secara kultur jaringan

mempunyai beberapa kelebihan sebagai berikut :

1. Untuk memperbanyak tanaman tertentu yang sulit atau sangat

lambat diperbanyak secara konvensional.

2. Perbanyakan tanaman secara kultur jaringan tidakmemerlukan

tempat yang luas.

3. Teknik perbanyakan tanaman secara kultur jaringan dapat

dilakukan sepanjang tahun tanpa bergantung pada musim.

4. Bibit yang dihasilkan lebih sehat.

5. Memungkinkan dilakukannya menipulasi genetik.

(Yusnita, 2004).

3


4/23


4


5/23


ACARA I

STERILISASI ALAT DAN PEMBUATAN MEDIA KULTUR

A. Tujuan Praktikum

1. Mengetahui prosedur sterilisasi alat-alat penanaman

2. Mengetahui langkah-langkah dalam pembuatan media kultur

jaringan

B. Alat dan Bahan

1. Alat

a. Peralatan untuk penanaman eksplan, meliputi :

Laminar Air Flow Cabinet (LAFC), lengkap dengan

lampu bunsen yang berisi spirtus.

Petridish dan botol-botol kultur.

Peralatan diseksi, yaitu pinset besar/kecil, pisau

pemes, gunting eksplan.

Alat-alat penanaman, yaitu petridish dan peralatan diseksi

dibungkus dengan kertas, kemudian disterilisasi di dalam

autoklaf pada tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit. Setelah

disterilisasi, alat-alat tersebut disimpan di dalam oven.

b. Peralatan untuk pembuatan media, meliputi :

Timbangan Analitik

Botol-botol kultur

Magnetik stirer

pH meter

Gelas piala

Pipet

Plastik pp 0,3 mm

Karet gelang

Kertas label.

5


6/23


2. Bahan-bahan untuk pembuatan media

a. Aquadest

b. Larutan stok, terdiri atas hara makro dan mikro, vitamin

serta ZPT.

c. Agar-agar

d. Gula

e. NaOH 1 N dan HCL 1 N

C. Cara Kerja

1. Pembuatan Larutan Stok

Bahan-bahan kimia komponen media dibutuhkan dalam

jumlah yang relatif kecil, oleh karena itu bahan-bahan tersebut

disediakan dalam bentuk larutan yang disebut sebagai larutan

stok.

Larutan stok merupakan larutan bahan-bahan komponen

media yang besarnya telah dikalikan menjadi beberapa

konsentrasi. Sehingga larutan stok ini berfungsi untuk

memudahkan penimbangan dan menghindari kesalahan

penimbangan bahan-bahan yang diperlukan dalam jumah yang

relatif kecil.

Langkah-langkah pembuatan larutan stok , meliputi :

a. Larutan stok media

(1)Menimbang bahan-bahan kimia yang telah dikalikan

menjadi beberapa kali konsentrasi, misalnya untuk unsur

hara makro dikalikan 20 dan unsur hara mikro dikalikan

100 kali konsentrasi.

(2)Melarutkan bahan-bahan kimia tersebut ke dalam

aquadest dengan volume tertentu, misalnya 500 ml.

(3)Memasukkan masinr-masing larutan ke dalam botol dan

menyimpannya ke dalam refrigerator.

b. Larutan stok zat pengatur tumbuh

6


7/23


Zat pengatur tumbuh hanya diperlukan dalam jumlah sedikit

sekali. Biasanya zat pengatur tumbuh ini dibuat dengan

kepekatan 1-10 mg/ml. Cara membuat larutan stok masing-

masing ZPT adalah sebagai berikut :

(1) Menghitung kebutuhan bahan BAP 100

ppm sebanyak 300 ml adalah sebagai berikut :

100 ppm = 100 mg/l

= 30 mg/0,3 l

= 30 mg/300 ml

(2) Menghitung kebutuhan bahan IBA 100

ppm sebanyak 100 ml adalah sebagai berikut :

100 ppm = 100 mg/l

= 10 mg/0,1 l

= 10 mg/100 ml

(3) Melarutkan bahan dengan Alkohol atau

NaOH 1 N kemudian ditambah dengan aquadest sampai

300 ml untuk BAP dan 100 ml untuk IBA.

(4) Memasukkan masing-masing larutan

tersebut ke dalam botol dan menyimpannya ke dalam

refrigerator.

2. Pembuatan Media

Media kultur merupakan salah satu faktor penentu

keberhasilan perbanyakan tanaman secara kultur jaringan.

Berbagai komposisi media kultur telah diformulasikan untuk

mengoptimalkan pertumbuhan dan perkembangan tanaman

yang dikulturkan. Contohnya komposisi Knudson C (1946),

Heller (1953), Nitsch dan Nitsch (1972), Gamborg dkk. B5

(1976), Linsmaier dan Skoog-LS (1965), Murashige dan Skoog-

MS (1962) serta woody plant medium-WPM (Lloyd dan McCown,

1980). Komponen media kultur yang lengkap sebagai berikut :

7


8/23


Air distilata (akuades) atau air bebas ion sebagai

pelarut atau solven.

Hara-hara makro dan mikro.

Gula (umumnya sukrosa) sebagai sumber energi.

Vitamin, asam amino dan bahan organik lain.

Zat pengatur tumbuh.

Suplemen berupa bahan-bahan alami, jika diperlukan.

Agar-agar atau gelrite sebagai pemadat media.

(Yusnita, 2004).Langkah-langkah pembuatan media (1 liter) adalah

sebagai berikut :

(1)Mengambil masing-masing larutan stok sesuai dengan

ukuran yang telah ditentukan dan memasukkannya ke

dalam gelas piala.

(2)Mengambil larutan stok ZPT sesuai dengan perlakuan,

misalnya : Untuk membuat media 1 L dengan konsentrasi BAP 2

ppm, maka volume larutan stok yang diambil adalah :

V1 x M1 = V2 x M2

V1 x 100 ppm = 1000 ml x 2 ppm

V1 = 20 ml/L

Untuk membuat media 1 L dengan konsentrasi IAA 0,5

ppm, maka volume larutan stok yang diambil adalah :V1 x M1 = V2 x M2

V1 x 100 ppm = 1000 ml x 0,5 ppm

V1 = 5 ml/L

Ket. : V1 = volume larutan stok yang diambil

M1 = dosis larutan stok yang tersedia

V2 = volume media yang akan dibuat

M2 = dosis media yang akan dibuat.(3)Menambah aquadest sampai 1000 ml.

8


9/23


(4)Menambah gula sebanyak 30 gr.

(5)Mengatur pH dalam kisaran 5,8 6,3 dengan

menambahkan beberapa tetes NaOH untuk menaikkan pH

atau HCL untuk menurunkan pH. Pada saat pengukuran pH,

larutan media diaduk dengan magnetik stirer.

(6)Menambahkan agar-agar 8 gr kemudian dididihkan.

(7)Menuangkan larutan media ke dalam botol-botol kultur

kurang lebih 25 ml tiap botol.

(8)Menutup botol berisi larutan media dengan plastik.

(9) Memasukkan botol-botol berisi media ke dalam autoklaf

untuk proses sterilisasi pada tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45

menit.

(10) Menyimpan media pada rak penyimpan media yang

bertujuan untuk mengantisipaso ada tidaknya kontaminasi

pada media sehingga dapat dicegah penggunaan media

yang telah terkontaminasi pada saat penanaman.

3. Media Penanaman

Dalam praktikum ini, media yang digunakan adalah

media Murashige dan Skoog (MS) yang dimodifikasi dengan

penambahan ZPT BAP 2 ppm dan IAA 0,5 ppm. Media kultur

tersebut digunakan untuk penanaman 4 macam eksplan

dengan masing-masing eksplan diulang sebanyak 2 kali untuk

setiap mahasiswa / praktikan.

9


10/23


ACARA II

KULTUR JARINGAN MAWAR

A. Tujuan Praktikum.

1. Mengetahui teknik kultur jaringan mawar

2. Mengetahui pengaruh BAP dan IBA terhadap

pertumbuhan dan perkembangan eksplan mawar.

B. Alat dan Bahan

1. Alat

a. LAFC lengkap dengan lampu bunsen

b. Petridish dan botol-botol kultur

c. Peralatan diseksi yaitu pinset besar/kecil dan pisau

pemes.

2. Bahan

a. Eksplan : mawar

b. Media kulltur

c. Alkohol 96 %

d. Aquadest steril

e. Spirtus

f. Chlorox (Sunclin)

C. Cara Kerja

1. Persiapan eksplan

2. Sterilisasi ekpslan (dilakukan dalam LAFC)

Merendam eksplan dalam larutan Dithane M-45 3 mg/l

selama 12 jam, dilanjutkan dengan chlorox 5,25 %

(Sunclin 100 %) selama 3 menit.

Membilas eksplan dengan aquadest steril.

3. Penanaman eksplan

Membuka plastik penutup botol media kultur.

10


11/23


Mengambil eksplan dan menanamnya di media kultur

dengan pinset. Setelah digunakan, pinset harus selalu

dibakar di atas api.

Selama penanaman, mulut botol harus selalu dekat dengan

api untuk menghindari kontaminasi.

4. Pemeliharaan

Botol-botol media berisi eksplan ditempatkan di rak-rak

kultur

Lingkungan di luar botol harus dijaga suhu, kelembaban dan

cahayanya.

Penyemprotan botol-botol kultur dengan spirtus dilakukan 2

hari sekali untuk mencegah kontaminasi.

5. Pengamatan selama 5 minggu, yang diamati :

Saat muncul akar, tunas, daun dan kalus (HST), diamati

setiap hari.

Jumlah akar, tunas dan daun, diamati 1 minggu sekali.

Deskripsi kalus (struktur dan warna kalus), dilakukan pada

akhir pengamatan.

Persentase keberhasilan, dilakukan pada akhir pengamatan.

11


12/23


ACARA III

KULTUR JARINGAN NANAS

A. Tujuan Praktikum

1. Mengetahui teknik kultur jaringan nanas

2. Mengetahui pengaruh BAP dan IBA

terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan nanas.

B. Alat dan Bahan

1. Alat



c. Peralatan diseksi yaitu pinset besar/kecil dan pisau

pemes.

2. Bahan

a. Eksplan : nanas.

b. Media kulltur

c. Alkohol 96 %

d. Aquadest steril

e. Spirtus


C. Cara Kerja

1. Persiapan eksplan

2. Sterilisai eksplan (dilakukan dalam LAFC)





3. Penanaman eksplan


12


13/23







13


14/23


4. Pemeliharaan


kultur


cahayanya.



5. Pengamatan selama 5 minggu, yang diamati :


setiap hari.



akhir pengamatan.


14


15/23


ACARA IV

KULTUR JARINGAN PISANG

A. Tujuan Praktikum

1. Mengetahui teknik kultur jaringan pisang

2. Mengetahui pengaruh BAP dan IBA

terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan pisang.

B. Alat dan Bahan

1. Alat

d. LAFC lengkap dengan lampu bunsen

e. Petridish dan botol-botol kultur

f. Peralatan diseksi yaitu pinset besar/kecil dan pisau

pemes.

2. Bahan

a. Eksplan : pisang

b. Media kulltur

c. Alkohol 96 %

d. Aquadest steril

e. Spirtus


C. Cara Kerja

i. Persiapan eksplan

ii. Sterilisai eksplan (dilakukan dalam LAFC)





iii. Penanaman eksplan


15


16/23







iv. Pemeliharaan


kultur


cahayanya.



v. Pengamatan selama 5 minggu, yang diamati :


setiap hari.



akhir pengamatan.


16


17/23


ACARA V

SUB KULTUR

A. Tujuan Praktikum

Mengetahui teknik sub kultur untuk beberapa jenis eksplan

yang tersedia

B. Alat dan Bahan

1. Alat



c. Peralatan diseksi (pinset besar/ kecil dan scalpel)

2. Bahan

a. eksplan : kalus, tunas/buku d. Aquadest steril

b. Media kultur e. Spirtus

c. Alkohol 96%

C. Cara Kerja

1. Penanaman Eksplan

a. Membuka plastik penutup botol media kultur

b. Mengambil eksplan/ memecah eksplan kalus/ tunas/ buku

yang ada dan menanamnya di media kultur baru dengan

pinset. Setelah digunakan, pinset harus selalu dibakar di atas

api

c. Selama penanaman, mulut botol harus selalu dekat dengan

api untuk menghindari kontaminasi

2. Pemeliharaan

a. Botol-botol media berisi eksplan ditempatkan di rak-rak

kultur

b. Lingkungan di luar botol harus dijaga suhu, kelembaban dan

cahayanya

c. Penyemprotan botol-botol kultur dengan spirtus dilakukan 2


17


18/23


3. Pengamatan selama 5 minggu, yang diamati:


setiap hari

Jumlah akar, tunas dan daun, diamati 1 minggu sekali


akhir pengamatan

18


19/23


Format penulisan laporan :

Halaman Judul

Halaman PengesahanKata Pengantar

Daftar Isi

Daftar Tabel

Acara I Sterilisasi Alat dan Pembuatan Media Kultur

A. Pendahuluan

1. Latar Belakang

2. Tujuan

3. Waktu dan Tempat Praktikum.

B. Tinjauan Pustaka

C. Alat, Bahan dan Cara Kerja

1. Alat

2. Bahan

3. Cara Kerja

Acara II Kultur Jaringan Mawar (Rosa sp.)

A. Pendahuluan

1. Latar Belakang

2. Tujuan

3. Waktu dan Tempat Praktikum

B. Tinjauan Pustaka

C. Alat, Bahan dan Cara Kerja

1. Alat2. Bahan

3. Cara Kerja

D. Hasil dan Pembahasan

1. Saat Muncul Akar

2. Jumlah Akar

3. ........

E. Kesimpulan dan Saran

1. Kesimpulan

2. Saran

Daftar Pustaka

Acara III .................................Acara IV.................................

Acara V.................................

19


20/23


Contoh Halaman Judul / Cover (warna biru muda)

20

LAPORAN PRAKTIKUM

KULTUR JARINGAN

Di susun oleh :Nama : ..NIM : ..Kelompok : ..

PROGRAM STUDI ...................FAKULTAS ............................................

UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA


21/23


Contoh Tabel Pengamatan

Tabel 2.1. Saat Muncul Akar Tanaman Mawar

Macam Eksplan Ulangan Saat Muncul Akar

Mawar

1

2

3

4

5

6

7

8

X

Tabel 2.2. Saat Muncul TunasTanaman Mawar

Macam Eksplan Ulangan Saat Muncul Akar

Mawar

1

2

3

4

5

6

7

8

X

Tabel 2.3...

21


22/23


Tabel rekapan secara keseluruhan

Macam

Eksplan

Ulangan

Saat

MunculAkar

Saat

MunculTunas

Saat

MunculDaun

Saat

MunculKalus

Jumlah Akar

Jumla

hTunas

Jumla

hDaun

Persentase

Keberhasilan

Mawar

1

2

3

4

5

6

7

8

Nanas

1

2

3

4

56

7

8

Pisang

1

2

3

4

5

6

7

8

SubKultur

1

23

4

5

6

7

8

22


23/23


Jadwal Praktikum Kultur Jaringan

No Acara Waktu Tempat1. Asistensi Ruang Kuliah

2. Pretest Lab Kul-Jar

3. Acara I Lab Kul-Jar

Sterilisasi &

Pembuatan Media

4. Acara II

Penanaman Eksplan II Lab. Kul-Jar

5. Acara III Lab Kul-Jar

Penanaman Eksplan III

6. Acara IV Lab Kul-Jar

Penanaman Eksplan IV

7. Acara V Lab Kul-Jar

Sub-Kultur dan Aklimatisasi

8. Pengumpulan Laporan 2 Minggu setelah Pengamatan Terakhir

(1 orang 1 laporan)

9. Responsi 1 Minggu setelah pengumpulan laporan

(yang belum mengumpulkan laporan

Tidak diperkenankan ikut responsi)

Nb : Saat penanaman eksplan, setiap kelompok harap datang 10 menit sebelumjadwal yang telah ditetapkan..Harap diperhatikan!!

petunjuk FKIP

Documents