PENGARUH MONOSODIUM GLUTAMAT (MSG) KOMERSIAL …repository.its.ac.id/72329/1/1512100003-undergraduate-theses-.pdfPseudomonas PL01 reached the highest growth in 2 g/L MSG containing

i

TUGAS AKHIR – SB141510 PENGARUH MONOSODIUM GLUTAMAT (MSG) KOMERSIAL TERHADAP PERTUMBUHAN ISOLAT BAKTERI Bacillus PL01 DAN Pseudomonas PL01 PADA MINERAL SALT MEDIUM

RIZKA RAHMAWATI NRP. 1512 100 003 Dosen Pembimbing Dr. rer. nat. Ir. MAYA SHOVITRI, M.Si. JURUSAN BIOLOGI Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya 2016

ii

FINAL PROJECT – SB141510 EFFECT MONOSODIUM GLUTAMATE (MSG) AND MINERAL SALT MEDIUM ON THE GROWTH OF Bacillus PL01 AND Pseudomonas PL01

RIZKA RAHMAWATI NRP. 1512 100 003 Advisor Lecture Dr. rer. nat. Ir. MAYA SHOVITRI, M.Si. DEPARTEMENT OF BIOLOGY Faculty Of Mathematics And Natural Sciences Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya 2016

iii

iv

PENGARUH MONOSODIUM GLUTAMAT (MSG) KOMERSIAL TERHADAP PERTUMBUHAN ISOLAT

BAKTERI Bacillus PL01 DAN Pseudomonas PL01 PADA

MINERAL SALT MEDIUM

Nama Mahasiswa : Rizka Rahmawati NRP : 1512100003 Jurusan : Biologi Dosen Pembimbing : Dr. rer. nat. Ir. Maya Shovitri,

M.Si. Abstrak

MSG merupakan hasil purifikasi glutamat sintesis yang

dapat menjadi makronutrient penyusun komponen seluler. Tujuan

dalam penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh

pemberian MSG terhadap pertumbuhan isolat bakteri Bacillus

PL01 dan Pseudomonas PL01 pada MSM. Sebagai kontrol

digunakan medium Lactose Broth (LB). Pertumbuhan diukur

setiap 1 jam sekali selama 48 jam. Parameter yang diukur adalah

Optical Density (OD) λ 600nm, jumlah sel bakteri, serta

pengukuran diameter sel. Data dianalisis secara deskriptif

kuantitatif dengan Analysis of Variance (ANOVA).

Pada Bacillus PL01 pertumbuhan tertinggi terjadi

setelah 16 jam masa inkubasi pada konsentrasi 0,5 gr/L MSG

dengan nilai serapan OD 600nm yang setara dengan 3.93E+06

Sel/mL serta ukuran sel mencapai 1,8µm x 1,2µm, dimana

pertumbuhannya melebihi pertumbuhan di medium LB. Namun

terjadi penurunan pertumbuhan seiring dengan peningkatan

konsentrasi MSG. Pada Pseudomonas PL01 pertumbuhan

tertinggi setelah 16 jam masa inkubasi terjadi pada konsentrasi 2

gr/L MSG dengan nilai serapan OD 600nm yang setara dengan

9.97E+05 Sel/mL serta ukuran sel mencapai 2,4µm x 1,1µm.

Pertumbuhan Pseudomonas PL01 masih berada dibawah LB.

Berbanding terbalik dengan Bacillus PL01, pada Pseudomonas

v

PL01 semakin tinggi konsentrasi MSG, maka pertumbuhannya

semakin tinggi pula.

Kata kunci: Bacillus PL01, MSG, MSM, Pertumbuhan Sel, Pseudomonas PL01

vi

EFFECT MONOSODIUM GLUTAMATE (MSG) COMSM

ERCIAL ON THE GROWTH OF Bacillus PL01 AND Pseudomonas PL01 ISOLATE IN MINIMAL MEDIUM

Student Name : Rizka Rahmawati NRP : 1512100003 Department : Biology Advisor : Dr. rer. nat. Ir. Maya Shovitri, M.Si. Abstract

MSG is a synthetic purified glutamate that can be used as a nitrogen source for microorganisms growth. The purpose of this research was to determine the effect of MSG on Bacillus PL01 and Pseudomonas PL01 growth in a Mineral Salt Medium. As a control medium Lactose Broth (LB) was used. The bacterial growth was measured every 1 hour for 48 hours spectrophotometrically (OD 600nm), cells number using was counted and cell shape was measured. Data were analyzed statistically using a Quantitative with Analysis of Variance (ANOVA).

In 0,5 gr/L MSG containing MSM, Bacillus PL01 growth a highest speed after 16 hours it reached OD 600nm that equals to 3.93E+06 Cell/mL, and the cell size was around 1,8μm x 1,2μm. This growth was even higher compared with it in LB. While Pseudomonas PL01 reached the highest growth in 2 g/L MSG containing MSM with OD 600nm that equals to 9.97E+05 Cell/mL with the cell size about 2,4μm x 1,1μm, but Pseudomonas PL01 was more prefer to grow in LB at which its growth was the best. The growth was increase over the MSG concentration, even they were still lower than it in LB.

Keywords: Bacillus PL01, Cell growth, MSG, MSM, Pseudomonas PL01.

vii

KATA PENGANTAR

Puji syukur saya panjatkan kepada Allah SWT sehingga dapat menyelesaikan Tugas Akhir dengan judul Pengaruh Monosodium Glutamat (MSG) Komersial Terhadap Pertumbuhan Isolat Bakteri Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01 pada Mineral Salt Medium. Penelitian ini dilakukan mulai bulan Februari – Mei 2016.Penyusunan Tugas Akhir ini merupakan suatu syarat untuk memperoleh gelar sarjana strata 1 (S1) pada Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya. Penelitian dan penyusunan Proposal Tugas Akhir ini telah melibatkan bimbingan dan bantuan dari berbagai pihak. Penulis mengucapkan terimakasih kepada Ibu Dr. rer.nat. Ir. Maya Shovitri, S.Si., M.Si. selaku pembimbing, Bapak Triono Bagus Saputro, M.biotech selaku Penguji I, serta Ibu Dr. Enny Zulaika, M.P. selaku Penguji II. Ucapan terimakasih juga penulis sampaikan pada pihak LPPM ITS atas bantuan dana penelitian Unggulan Perguruan Tinggi Skema Desentralisasi No. 01712/IT2-11/PN.08/2016 dan road map laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Jurusan Biologi. Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada ayahanda Saikhu Rohman, ibunda Anik Priutami atas segala doa restu, dan seluruh pihak yang telah membantu. Penulis menyadari masih terdapat kekurangan pada proposal ini. Namun, penulis berharap bahwa proposal ini dapat bernmanfaat dan memberikan wawasan yang luas bagi semua pihak. Surabaya, 28 Juni 2016 Penulis

viii

DAFTAR ISI

LEMBAR PENGESAHAN ............................................ iii Abstrak ........................................................................... iv Abstract .......................................................................... vi KATA PENGANTAR ................................................... vii DAFTAR ISI ................................................................ viii DAFTAR GAMBAR ...................................................... x

DAFTAR TABEL .......................................................... xi DAFTAR LAMPIRAN………………………….…….xii

BAB I PENDAHULUAN ............................................... 1

1.1 Latar Belakang..................................................... 1 1.2 Rumusan Masalah ............................................... 3

1.3 Batasan Masalah .................................................. 3 1.4 Tujuan .................................................................. 3

1.5 Manfaat ................................................................ 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..................................... 5

2.1 Monosodium Glutamat ........................................ 5

2.2 Sumber Karbon .................................................... 7

2.3 Sumber Nitrogen ................................................. 8

2.4 Nutrisi Mikroba ................................................... 8 2.5 Bakteri ............................................................... 12 2.6 Metode Perhitungan Bakteri .............................. 18 2.7 Kurva Pertumbuhan ........................................... 22

BAB III METODOLOGI .............................................. 25 3.1 Waktu dan Lokasi Penelitian ............................. 25

3.2 Isolat yang Digunakan ....................................... 25 3.2.1 Purifikasi dan Rekonfirmasi Bakteri Uji ...... 25

ix

3.2.2. Pembuatan starter ........................................ 28

3.2.3. Optimasi Pengukuran Kurva Pertumbuhan . 28 3.2.4. Pengukuran Kurva Pertumbuhan Uji .......... 29 3.2.5. Pengukuran Diameter Sel ............................ 30

3.3 Rancangan Penelitian dan Analisis Data ............ 31

BAB IV ......................................................................... 33 4.1 Hasil Rekonfirmasi Bacillus dan Pseudomonas.. 33

4.2 Pengaruh MSG Terhadap Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01 ........................................... 34

4.2.1. Bacillus PL01 ..................................................... 39

4.2.2. Pseudomonas PL01 ............................................ 41

4.3. Korelasi Perhitungan OD dan Jumlah Sel ................ 44

4.4. Pengaruh MSG Terhadap Ukuran Sel ..................... 47

BAB V ................................................................................... 53

5.1 Kesimpulan ............................................................ 53

5.2. Saran .................................................................... 53

DAFTAR PUSTAKA ................................................... 55 LAMPIRAN .................................................................. 65

x

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Struktur Kimia MSG………………....…………... Gambar 2.2 Morfologi Sel Bakteri………………..………….. Gambar 2.3 Perbandingan Struktur Dinding Sel Bakteri Gram

Positif dan Gram Negatif ……………...……..... Gambar 2.4 Struktur Peptidoglikan Bakteri Gram Positif dan

Bakteri Gram Negatif ……………….................. Gambar 2.5 Morfologi Sel Bacillus sp.………………….…… Gambar 2.6 Morfologi Sel Pseudomonas sp. ……….............. Gambar 2.7 Skema Kerja Spektrofotometer UV-Vis ……….. Gambar 2.8 Haemacytometer ……………………………….. Gambar 2.9 Kurva Pertumbuhan Bakteri …………………… Gambar 2.10 Kurva Pertumbuhan Bacillus Strain TA2.A1.

pada MSM dengan Penambahan Glutamat…..… Gambar 4.1 Kurva Pertumbuhan (A) Bacillus PL01 (B)

Pseudomonas PL01.....…………………………. Gambar 4.2 Kurva Korelasi Perhitungan OD dan Jumlah Sel

(A) Bacillus PL01 0,5 gr/L MSG (B) Pseudomonas PL01 2 gr/L MSG ………….……

Gambar 4.3 Ukuran Sel Bacillus PL01………………………. Gambar 4.4 Ukuran Sel Pseudomonas PL01………….……...

6 13 15 16 17 18 20 21 22 24 36 46 49 51

xi

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Elemen Makronutrien dan Mikronutrien yang Diperlukan oleh Mikroba ……………………..…..

Tabel 2.2 Fungsi Trace element bagi mikroba …………..…. Tabel 2.3 Perbedaan Lapisan Dinding Sel Bakteri Gram

Negatif dan Bakteri Gram Negatif ………..……... Tabel 3.1 Konsentrasi MSG pada MSM ………………...…. Tabel 4.1 Hasil Uji Rekonfirmasi Bacillus PL01 dan

Pseudomonas PL01.…………………………....… Tabel 4.2 Hasil ANOVA General Linear Model (GLM)…... Tabel 4.3 Hasil Uji Tukey Bacillus PL01……..……………. Tabel 4.4 Hasil ANOVA General Linear Model (GLM)……

Tabel 4.5 Hasil Uji Tukey Pseudomonas PL01…………..….

9 10 19 29 33 40 41 43 43

xii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Komposisi Medium……………………….……… Lampiran 2 Diagram Alir Penelitian…………...…………..…. Lampiran 3 Korelasi Kurva OD dan Jumlah Sel..……..……...

65 68 71

1

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Monosodium Glutamat (MSG) adalah garam natrium dari

asam glutamat (glutamic acid) yang berfungsi sebagai penambah rasa makanan dalam bentuk L-glutamic acid sehingga mampu menghasilkan rasa makanan yang lebih lezat (Prawirohardjono et al., 2000). MSG merupakan hasil purifikasi glutamat atau gabungan dari beberapa asam amino dengan sejumlah kecil peptida melalui proses hidrolisa protein (Hydrolized Vegetable Protein/HVP). Asam glutamat adalah kelompok asam amino non essensial yang diabsorpsi menjadi urea melalui hati, 6% menjadi plasma protein, 23% absorpsi asam amino melalui sirkulasi umum sebagai asam amino bebas, dan sisanya 14% diduga disimpan sementara di dalam hati sebagai protein hati atau enzim (Santoso, 2008). Metabolisme asam amino non essensial termasuk glutamat menyebar luas di dalam jaringan tubuh (Giacometti, 2002).

Glutamat berperan penting dalam proses sintesa protein dan terkandung dalam protein sebesar 10-40%. L-glutamic acid pada glutamat merupakan bahan yang penting untuk sintesis protein (Molina, 2004). Selain itu glutamat memiliki fungsi lain yaitu sebagai prekursor glutamin. Glutamat dan glutamin merupakan mata rantai karbon dan nitrogen di dalam proses metabolisme karbohidrat dan protein (Ganong, 1983). Asam amino digolongkan sebagai makronutrient karena dibutuhkan dalam jumlah yang banyak untuk menyusun komponen seluler (McDonald et al, 2007). Gugus NH2 pada struktur kimia MSG berperan sebagai sumber nitrogen dalam proses pembentukan asam amino yang digunakan selama proses pertumbuhan mikroorganisme (Geha, 2000).

Menurut Akiba et al. (1983) pemberian sodium glutamat sebanyak 2 g/L pada medium mineral dapat berperan sebagai substrat organik yang mendukung pertumbuhan bakteri

2

fotosintetik nonsulfur strain R1 pada spesies Rhodopseudomonas vutila. Selanjutnya pada penelitian Peddie et al., (1999) telah dilaporkan bahwa isolat Bacillus Strain TA2.A1 mampu tumbuh cepat ketika minimal medium yang digunakan untuk pertumbuhan bakteri ditambahkan dengan 2 g/l glutamat dan hasil pengukuran Optical Density (OD) meningkat seiring peningkatan konsentrasi sodium mulai dari 5-100mm Pada penelitian Saimmai (2012) membuktikan bahwa glutamat dari MSG komersial merupakan sumber nitrogen yang paling efisien bagi isolat bakteri Bacillus sp. dan Pseudomonas sp. dalam menghasilkan senyawa biosurfaktan, meningkatkan biomassa, serta meningkatkan kemampuan dalam mereduksi suatu senyawa kimia. Penambahan MSG sebanyak 1% dalam 50 mL Mineral Salt Medium (MSM) sudah dilaporkan dapat meningkatkan pertumbuhan isolat bakteri Bacillus sp. dan Pseudomonas sp. Benton (2008) menjelaskan bahwa MSM merupakan medium yang mengandung konsentrasi garam anorganik serta dapat mendukung pertumbuhan suatu mikroorganisme.

Menurut beberapa penelitian membuktikan bahwa isolat bakteri Bacillus sp. dan Pseudomonas sp. mampu mendegradasi plastik. Pada penelitian Fadilah dan Shovitri (2014) membuktikan bahwa isolat bakteri Bacillus sp. dan Pseudomonas sp. mampu melakukan biodegradasi plastik tas kresek dengan menggunakan MSM. Hasil penelitian menunjukkan kemampuan isolat bakteri Bacillus sp. dalam mendegradasi plastik putih dan hitam secara berturut adalah 1,9% dan 2,3% . Pada penelitian selanjutnya, Sriningsih dan Shovitri (2015) melakukan penelitian mengenai potensi isolat bakteri Pseudomonas L1 dalam mendegradasi plastik menggunakan MSM yang tidak mengandung sumber karbon. Hasil penelitian membuktikan bahwa isolat bakteri Pseudomonas L1 mampu mendegradasi plastik hitam, putih, dan transparan secara berturut adalah 2,7%, 3,3% dan 4,5% selama 3 bulan masa inkubasi.

Dilihat dari beberapa penelitian diatas dapat diketahui bahwa isolat bakteri Bacillus sp. dan Pseudomonas sp. mampu

3

tumbuh pada medium yang ditambahkan MSG sehingga pada penelitian ini pengaruh pemberian MSG akan diuji terhadap pertumbuhan isolat bakteri Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01 yang berpotensi mendegradasi plastik. Penambahan MSG diharapkan juga mampu meningkatkan pertumbuhan isolat bakteri Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01, dengan asumsi bahwa MSG dapat menyediakan sumber N dan glutamat.

1.2 Rumusan Masalah Permasalahan pada penelitian ini adalah bagaimana

pengaruh pemberian MSG terhadap pertumbuhan isolat bakteri Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01 pada MSM.

1.3 Batasan Masalah

Batasan masalah dalam penelitian ini adalah : Bakteri isolat Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01 diambil dari penelitian sebelumnya yang telah beradaptasi untuk mendegradasi plastik. Faktor lingkungan meliputi suhu, pH, dan tekanan selama proses perlakuan diasumsikan sama atau diabaikan. Sumber MSG adalah MSG komersial yang ada di pasaran lokal

1.4 Tujuan Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh

pemberian MSG terhadap pertumbuhan isolat bakteri Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01 pada MSM.

1.5 Manfaat

Manfaat yang diperoleh yaitu MSG pada penelitian ini diharapkan mampu mendukung pertumbuhan isolat bakteri Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01 yang dapat dimanfaatkan sebagai agen biodegradasi plastik.

4

“Halaman ini sengaja dikosongkan”

5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Monosodium Glutamat Sumber-Sumber MSG Asam glutamat digolongkan pada asam amino non essensial karena tubuh manusia sendiri dapat menghasilkan asam glutamat. Glutamat dibuat dalam manusia dan memiliki peran esensial dalam metabolisme. Sekitar 2 kg glutamat terdapat secara alami dalam otak, ginjal, hati dan pada jaringan lain pada tubuh manusia. Selain itu glutamat terdapat dalam jumlah besar di air susu ibu, jumlahnya mencapai sekitar sepuluh kali lipat lebih banyak dibanding pada susu sapi. Glutamat dalam bentuk alami didapat dari makanan seperti tomat, keju, susu, daging, kacang kapri, jamur dan kecap yang merupakan hasil fermentasi (Loliger, 2000). Tubuh manusia terdiri dari 14-17 % protein dan seperlimanya merupakan asam glutamat dalam protein (Shewry, 2006). MSG juga dapat dibuat melalui proses fermentasi dari tetes gula (molases) oleh bakteri Brevibacterium lactofermentum (Jinap, 2010). Sifat Kimia MSG

MSG mempunyai rumus kimia C5H8O4NNaH2O yang terdiri atas Natrium sebanyak 12%, glutamat 78%, dan air 10%. MSG bersifat larut dalam air (Geha, 2000). Glutamat yang terdapat dalam MSG merupakan suatu asam amino yang banyak dijumpai pada beberapa makanan, kandungan glutamat 20% dari total asam amino pada beberapa makanan terdapat baik bebas maupun terikat dengan peptida atau protein. Glutamat yang terdapat di dalam MSG berasal dari hidrolisa protein serta tergolong jenis glutamat dalam bentuk bebas (Young, 2000). Struktur kimia MSG dapat dilihat pada Gambar 2.1

Gambar 2.1 Struktur Kimia MSG (Loliger, 2000).

Metabolisme Asam Glutamat Metabolisme asam amino non essensial termasuk glutamat

menyebar luas di dalam jaringan tubuh. MSG diproses di dalam tubuh sama seperti metabolisme asam glutamat. Asam amino dekarboksilat, glutamat, dan aspartat menempati posisi unik dalam metabolisme perantara (Giacometti, 2002). Glutamat memiliki beberapa fungsi penting di dalam proses metabolisme pada tubuh, antara lain :

Substansi untuk Sintesa Protein Glutamat sebagai salah satu asam amino yang

banyak terdapat pada sumber alami. L-glutamic acid pada protein merupakan bahan yang penting untuk sintesa protein. Asam glutamat memiliki karakter fisik dan kimia yang dapat menjadi struktur sekunder dari protein yang disebut rantai α (Molina, 2004). Prekursor Glutamin

Glutamin dibentuk dari glutamat oleh glutamine sintetase. Hal ini juga merupakan reaksi yang sangat penting di dalam metabolisme asam amino. Amonia akan dikonversikan menjadi glutamin sebelum masuk ke proses sirkulasi. Glutamat dan glutamin merupakan mata rantai karbon dan nitrogen di dalam proses metabolisme karbohidrat dan protein (Ganong, 1983).

MSG memiliki dampak negatif bila dikonsumsi secara berlebihan oleh tubuh. Secara normal otak dilindungi oleh Blood Brain Barrier yang fungsinya mencegah glutamat berlebih di otak. Apabila terjadi kelebihan glutamat, glutamat akan dipompa

kembali ke dalam sel-sel glia yang mengelilingi neuron (Giovan, 2003). Bila neuron terpapar glutamat dalam jumlah besar maka sel-sel tersebut akan mati. Glutamat membuka channel neuron sehingga dapat masuk ke dalam sel (Giovan, 2003). Sejumlah reaksi kimia terjadi dalam sel yang seringkali memicu pelepasan senyawa kimia. Bila kadar glutamat berlebih,

channel akan tetap terbuka sehingga reaksi kimia juga akan semakin meningkat mengawali pengrusakan sel tersebut dan sel-sel yang memiliki reseptor glutamat (Giovan, 2003). Beberapa tempat di otak tidak bisa dilindungi oleh Blood Brain Barrier termasuk nucleus arcuatus dan nucleus ventromedial di hipotalamus. Sebagai pusat pengaturan homeostasis, hipotalamus mengatur pengeluaran hormon yang bekerja pada gonad. Kerusakan nucleus arcuatus dan nucleus ventromedial di hipotalamus mengakibatkan penurunan sekresi GnRH (Gonadotrophin Releasing Hormone) sehingga mempengaruhi hipofisis anterior dalam mensekresi hormon-hormongonadotropin yaitu Follicle Stimulating Hormone (FSH) dan Luteinizing Hormone (LH) menjadi turun (Reeds, 2000).

2.2 Sumber Karbon Suatu media kultur harus mengandung elemen yang

dibutuhkan untuk pertumbuhan mikroba dalam proporsi yang sesuai bagi sel mikroba (Berg, 2007). Sumber karbon yang biasa digunakan adalah karbohidrat berupa glukosa, hidrokarbon dan minyak sayuran seperti minyak kacang kedelai yang digunakan oleh bakteri dalam pertumbuhannya. Salah satu jenis sumber karbon dari limbah yang dapat digunakan adalah molase dan limbah kedelai (Bezkorovainy, 2001).

Menurut Berg et al., (2007), sumber karbon dan nitrogen merupakan komponen utama dalam suatu media kultur, karena sel-sel mikroba dan fermentasi sebagian besar memerlukan sumber karbon dan nitrogen dalam prosesnya. Peningkatan produksi pertumbuhan sel-sel memerlukan nutrisi yang optimum. Selain itu jumlah mikroorganisme yang terbentuk juga

8

dipengaruhi pula oleh jenis sumber karbon, temperatur, pH dan aerasi (Caggiano, 2010).

2.3 Sumber Nitrogen

Nitrogen adalah salah satu dari beberapa unsur nutrisi yang mampu dimanfaatkan oleh mikroorganisme untuk kebutuhannya. Nitrogen ini terdapat dalam dua bentuk senyawa kimia yaitu N-organik dan N-anorganik. Senyawa N-organik merupakan senyawa utama yang paling dibutuhkan oleh mikroorganisme (Walstra, 2006). Senyawa N-organik yang dibutuhkan oleh mikroorganisme biasanya digunakan sebagai sumber nitrogen bagi pertumbuhan seperti sulfur (Vincent, 2004). Salah satu contoh N-anorganik adalah urea dan asam amino, dimana nitrogen juga dapat menjadi faktor pembatas karena dibutuhkan dalam jumlah yang besar (Caggiano, 2010).

Sumber nitrogen yang biasa digunakan adalah amonium nitrat (NH4NO3), urea, KNO3, NH4Cl, dan NaNO3 (Lehninger, 1982). Selain itu senyawa nitrogen yang lain dapat juga dimanfaatkan oleh mikroorganisme untuk perkembangannya adalah senyawa nitrogen anorganik yang meliputi nitrat, nitrit, amonium (Bezkorovainy, 2001). Berbagai penelitian telah dilakukan untuk mendapatkan rasio yang terbaik antara karbon, nitrogen, fosfor dan besi yang dibutuhkan untuk mendapatkan produksi yang tinggi (Tortora, 2006).

2.4 Nutrisi Mikroba Mayoritas komponen seluler adalah karbon, oksigen,

hidrogen, nitrogen, dan fosfor dan elemen ini merupakan penyusun utama membran, protein, asam nukleat dan struktur seluler lainnya. (Martin, 2007). Elemen ini diperlukan paling banyak oleh mikroba untuk menyusun komponen selulernya, Oleh karena itu disebut makronutrien. Elemen lainnya yang sedikit diperlukan oleh mikroba untuk menyusun komponen selulernya disebut mikronutrien. Elemen lainnya yang sangat sedikit (bahkan tidak terukur) diperlukan sel untuk menyusun komponen seluler, tetapi harus tetap ada dalam nutrisinya disebut

9

trace element (Tortora G.J. and Derrickson B., 2006). Semua elemen yang diperlukan oleh mikroba terangkum dalam Tabel 2.1 dan 2.2. Faktor pertumbuhan merupakan molekul organik yang penting bagi pertumbuhan tetapi tidak mampu disintesis oleh mikroba sendiri seperti vitamin dan asam amino (Tortora G.J. and Derrickson B., 2006). Elemen makronutrien dan mikronutrien yang dibutuhkan oleh mikroba dapat dilihat pada Tabel 2.1

Tabel 2.1 Elemen Makronutrien dan Mikronutrien yang Diperlukan oleh Mikroba (Almatsier S., 2006)

Element % berat kering

Sumber Fungsi

Makronutrien Karbon (C) Oksigen (O) Nitrogen (N)

Mikronutrien

Sulfur (S) Kalium (K)

50 20 14 1

Senyawa organik atau CO2 H2O, senyawa organik, CO2, O2 NH3, NO3, senyawa organik, N2 SO4, H2S, S, sulfur organik Garam Kalium

Material seluler Material, air seluler,aseptor elektron A.Amino, A.nukleat Metionin, koenzim Kation anorganik

Beberapa spesies mampu memanfaatkan molekul

sederhana sebagai sumber makronutrien, mikronutrien, dan trace element dan menyintesisnya menjadi molekul kompleks untuk pertumbuhan dirinya. Beberapa spesies sangat tergantung pada molekul organik sebagai sumber makronutrien, mikronutrien, dan trace element (Combs, 2000). Fungsi Trace element yang dibutuhkan oleh mikroba dapat dilihat pada Tabel 2.2

10

Tabel 2.2 Fungsi Trace element bagi mikroba (Nishijima, 2005)

Elemen Fungsi

Cobalt Zinc Mo Cu Mn Ni

Bagian dari vitamin B12, biasanya digunakan untuk membawa gugus metil

Berperan struktural pada enzim termasuk enzim DNA polimerase

Diperlukan untuk asimilasi nitrogen, ditemukan di nitrat reduktase dan nitrogenase

Berperan katalitik pada beberapa enzim yang bereaksi dengan oksigen seperti sitokrom oksidase

Diperlukan oleh sejumlah enzim pada tempat katalitik. Enzim fotosintetik tertentu mengunakan Mn untuk memecah air menjadi proton dan oksigen

Berperan pada beberapa enzim, termasuk enzim untuk metabolisme CO, urea, dan metanogenesis

Media minimal (minimal media)

Media yang berisi sejumlah nutrien minimal bagi pertumbuhan mikroba. Media minimal termasuk media sintetik. Media ini umumnya hanya terdiri dari garam-garam mineral anorganik. Media minimal diperlukan untuk mengetahui kebutuhan akan nutrisi dan analisis genetik (Ahmed, 2001).

Media selektif (selective media)

Media formulasi untuk menghambat pertumbuhan mikroba tertentu dan menumbuhkan mikroba yang diinginkan.

11

Media selektif pada dasarnya adalah media untuk mikroba yang diinginkan dan ditambah faktor penghambat untuk mikroba lain yang dapat hidup di media sama (Bezkorovainy, 2001). Media dapat digunakan untuk mengelompokan atau membedakan mikroba (Minaxi, 2013). Media selektif bermanfaat untuk menyeleksi mikroba tertentu (Minaxi, 2013).

Media diperkaya (enrichment media)

Media kaya untuk mikroba tertentu. Media diperkaya dengan menyediakan nutrien bagi pertumbuhan mikroba tertentu dan agen penyeleksi untuk menghambat pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan. Sehingga media diperkaya dapat dikatakan sebagai media selektif yang diperkaya (Corry, 2003). Contoh media diperkaya adalah media bebas nitrogen untuk isolasi bakteri penambat nitrogen dan media 2,4-D untuk isolasi bakteri pengonsumsi herbisida 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (Corry, 2003).

Media diferensial (differential media) Media yang tidak mengandung agen penghambat, tetapi mengandung agen pembeda antara dua kelompok mikroba berbeda. Contohnya pada media laktosa mengandung bromcresol blue yang mampu membedakan penampakan koloni bakteri fermentasi laktosa. (Walstra, 2006). Media di sekitar bakteri yang mampu memfermentasi laktosa akan berubah warna menjadi kuning. Sebaliknya media di sekitar bakteri yang tidak mampu memfermentasi laktosa akan tetap berwarna ungu (Bezkorovainy, 2001). Selain bromcresol blue media laktosa terdiri atas pepton, beef extract, dan laktosa (Corry, 2003).

Media harus disterilisasi sebelum digunakan untuk kultivasi dan isolasi mikroba. Sterilisasi yang umum untuk media adalah dengan autoklaf pada suhu 121⁰C dengan tekanan 1atm. Namun untuk komponen nutrien yang tidak tahan panas seperti vitamin, antibiotik, dan beberapa asam amino dilakukan filtrasi terpisah dari media pokok. Vitamin dan antibiotik dimasukkan

12

secara aseptis ke media pokok setelah media dingin dan masih cair (Corry, 2003; Walstra, 2006).

2.5 Bakteri

Nama bakteri berasal dari bahasa yunani “bacterion” yang berarti batang atau tongkat. Nama itu dipakai untuk menyebut sekelompok mikroorganisme bersel satu, bersifat prokariotik yaitu tubuhnya terdiri atas sel yang tidak mempunyai pembungkus inti. Bakteri tersebar di tanah, air dan sebagai simbiosis dari organisme lain (Pramila, 2012). Bakteri memiliki ukuran tubuh yang sangat kecil, umumnya bentuk tubuh bakteri dapat dilihat dengan menggunakan mikroskop pembesaran 1000 kali. Satuan ukuran tubuh bakteri adalah mikrometer atau mikron. Satu mikron sama dengan 1/1.000 milimeter. Lebar tubuh umumnya antara 1 sampai 2 mikron sedangkan panjangnya antara 2-5 mikron (Yateem, 2002). Beberapa bentuk dasar bakteri yaitu bulat (coccus), batang atau silinder (Bacillus), dan spiral yaitu bentuk batang melengkung atau melingkar-lingkar (Pramila, 2012). Bentuk morfologi bakteri dapat dilihat pada Gambar 2.2

13

Gambar 2.2 Morfologi Sel Bakteri (Pramila, 2012).

Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif Dinding sel ditemukan pada semua bakteri hidup kecuali pada Mycoplasma. Dinding sel berfungsi untuk mempertahankan bentuk sel dan mencegah sel mengalami lisis (Canbolat, 2006). Dinding sel bakteri tersusun atas makromolekul peptidoglikan yang terdiri dari monomer-monomer tetrapeptidaglikan (polisakarida dan asam amino). Berdasarkan susunan kimia dinding selnya, bakteri dibedakan atas bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif.

Bakteri Gram positif memiliki peptidoglikan setebal 20-80 nm dengan komposisi terbesar teichoic, asam teichuroni, dan berbagai macam polisakarida. Asam teikhoat berfungsi sebagai antigen permukaan pada Gram positif. Letaknya berada antara lapisan membran sitoplasma dan lapisan peptidoglikan (Milton, 2001). Selain itu bakteri Gram positif memiliki 40 lembar

14

peptidoglikan pada dinding selnya, yang merupakan 50% dari seluruh komponen penyusun dinding sel. Polisakarida dan asam amino pada lembar peptidoglikan bersifat sangat polar.

Sedangkan pada bakteri Gram negatif memiliki lapisan peptidoglikan tipis (5-10 nm) dengan komposisi utama: lipoprotein, membran luar dan lipopolisakarida. Membran luar pada Gram negatif juga memiliki sifat hidrofilik, namun komponen lipid pada dinding selnya justru memberikan sifat hidrofobik (Benson, 2001). Selain itu terdapat saluran khusus yang terbuat dari protein yang disebut porins yang berfungsi sebagai tempat masuknya komponen hidrofilik seperti gula dan asam amino yang penting untuk kebutuhan nutrisi bakteri. Lipoprotein mengandung 57 asam amino yang merupakan ulangan sekuen 15 asam amino yang saling bertaut dengan ikatan peptida dengan residu asam diaminpimelat dari sisi tetrapeptida rantai peptidoglikan (Walstra, 2006). Lipoprotein merupakan komponen yang mendominasi dinding sel Gram negatif dan berfungsi menjaga stabilitas membran luar dan tempat perlekatan pada lapisan peptidoglikan. Membran luarnya merupakan struktur bilayer, komposisi lembar dalamnya mirip dengan membran sitoplasma, hanyan saja fosfolipid pada lapisan luarnya diganti dengan molekul lipopolisakarida (LPS) (Gambar 2.3). Peptidoglikan adalah polimer kompleks yang terdiri dari 3 bagian: backbone, yang terdiri dari N-asetilglukosamin dan asam N-asetilmuramat, secara berselang-seling yang dihubungkan oleh ikatan beta 1-4 glikosida; sekelompok rantai tetrapeptida identic yang melekat pada asam N-asetilmuramat; dan sekelompok identical peptide-cross bridges. Backbone pada semua bakteri adalah sama, namun rantai tetrapeptida dan identical peptide-cross bridges berbeda-beda (Hurrel, 2004). (Gambar 2.4).

15

Gambar 2.3 Perbandingan Struktur Dinding Sel Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif (Freshney, 2005.

16

Gambar 2.4 Struktur Peptidoglikan Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif (Todar, 2001).

Perbedaan Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif dapat pula dilihat pada Tabel 2.3.

Tabel 2.3 Perbedaan Lapisan Dinding Sel Bakteri Gram Negatif dan Bakteri Gram Negatif (Pelczar, 1986).

Karakteristik Gram Positif Gram Negatif

Struktur Dinding Sel Pertumbuhan dihambat oleh zat-zat warna dasar, misalnya ungu kristal Resistensi

Tebal (15-80 nm), Berlapis tunggal Pertumbuhan dihambat Lebih rentan

Tipis (10-15 nm), berlapis tiga Pertumbuhan tidak begitu dihambat Kurang rentan

17

Bacillus sp. Bacillus sp. memiliki bentuk batang, gram positif, motil,

membentuk spora yang tahan panas, anaerob fakultatif, katalase positif dan oksidasi bervariasi (Evans, 2000). Sebagian besar Bacillus sp. merupakan bakteri mesofil yang tumbuh dengan suhu optimal antara 30-40˚C, meskipun ada beberapa yang termasuk golongan termofil dengan suhu optimal pada suhu 65˚C (Ynte, 2004). Bacillus sp. memiliki sifat pertumbuhan yang berbeda-beda, diantaranya ada yang bersifat mesofilik seperti B. subtilis dan B. cereus. Bakteri ini termasuk ke dalam kelompok gram positif yang menghasilkan spora yang terletak ditengah-tengah sel serta memiliki flagel peritrikus (Ichida, 2011).

Salah satu contoh spesies pada bakteri Bacillus sp. yaitu Bacillus thuringiensis yang merupakan bakteri tanah gram positif bersifat mesofilik, aerobik, memiliki flagel peritrikus, pembentuk spora yang memiliki dinding tebal, sehingga sangat resisten terhadap kondisi fisik yang kurang menguntungkan. Bakteri ini juga dapat membentuk kristal protein diluar spora didalam sel bakteri, yang bersifat toksin terhadap serangga koleoptera (Canbolat, 2006). Morfologi sel bakteri Bacillus sp. dapat dilihat pada Gambar 2.5.

Gambar 2.5 Morfologi Sel Bacillus sp. (Ichida, 2011).

18

Pseudomonas sp. Karakteristik genus ini terdiri dari batang Gram-negatif, katalase positif, motil dan banyak dijumpai (biasanya di air dan tanah). Pseudomonas aeruginosa merupakan spesies yang paling sering ditemukan. P.aeruginosa memiliki bau mirip anggur yang khas dan menghasilkan pigmen piosianin (Pramila, 2012). P.aeruginosa merupakan bakteri gram negatif yang berbentuk batang, tidak berspora, berflagel, dan katalase positif. P.aeruginosa bersifat aerobik obligat yang tumbuh dengan cepat pada berbagai media, pada media padat dan cair bakteri ini dapat terbentuk warna hijau (Yateem, 2002). P.aeruginosa membentuk koloni bulat, halus dengan warna fluoresen kehijauan memproduksi pigmen kebiruan dan tidak fluoresen yang disebut piosianin yang larut dalam agar (Pramila, 2012). Morfologi sel bakteri Pseudomonas sp. dapat dilihat pada Gambar 2.6.

Gambar 2.6 Morfologi Sel Pseudomonas sp. (Yateem, 2002).

2.6 Metode Perhitungan Bakteri Mikroba tidak dapat dilihat secara kasat mata. Oleh karena

itu, untuk melihat miroorganisme diperlukan alat bantu berupa mikroskop (Ardiyanto, 2004). Penentuan jumlah angka mikroorganisme sangat penting dilakukan untuk menetapkankeamanan suatu sediaan farmasi dan makanan

19

(Backman, 1994). Berbagai metode telah dikembangkan untuk menghitung jumlah mikroorganisme. Menghitung jumlah populasi mikroorganisme dapat ditentukan dengan beberapa cara yaitu perhitungan langsung, pengukuran langsung, perhitungan tidak langsung, dan perkiraan tidak langsung (Brosnan, 2000).

Perhitungan langsung (direct count) digunakan untuk menghitung jumlah sel atau biomassa mikroorganisme dengan cara sel dihitung langsung di bawah mikroskop atau dengan perhitungan partikel elektronik (electronic particle counter) (Corry, 2003). Pengukuran langsung (direct measurement) digunakan untuk menghitung biomassa mikroorganisme dengan cara massa sel dapat ditentukan dengan menimbang atau mengukur berat seluruh sel serta biomassa dapat dikorelasikan dengan jumlah sel dan membandingkannya pada kurva standar (Kennedy, 2005).

Perhitungan tidak langsung (indirect count) digunakan untuk menghitung jumlah sel yang ada pada sampel dengan cara memperkirakan jumlah mikroorganisme dalam sampel yang telah dikonsentrasikan dan ditanam pada media yang sesuai, contohnya pembentukan koloni dalam plat agar (Hurrel, 2004). Perkiraan tidak langsung (indirect estimate) digunakan untuk biomassa mikroorganisme. Biomassa mikroorganisme diperkirakan dengan cara mengukur komponen biokimia sel mikroorganisme yang relatif konstan, seperti protein, adenosin trifosfat (ATP), lipopolisakarida (LPS), murein, dan klorofil. Biomassa juga dapat diperkirakan secara tidak langsung dengan mengukur kekeruhan. Perkiraan tidak langsung biomassa mikroorganisme dapat dikorelasikan dengan jumlah sel dengan membandingkannya pada kurva standar (Kennedy, 2005). Turbidimetri

Turbidimetri merupakan metode yang cepat untuk menghitung jumlah bakteri dalam suatu larutan menggunakan spektrofotometer. Bakteri menyerap cahaya sebanding dengan volume total sel (ditentukan oleh ukuran dan jumlah). Ketika

mikroba bertambah jumlahnya atau semakin besar ukurannya dalam biakan cair, terjadi peningkatan kekeruhan dalam biakan. Kekeruhan dapat disebut optical density (absorbsi cahaya, biasanya diukur pada panjang gelombang 520 nm – 700 nm). Kurva standar dapat memperlihatkan jumlah organisme/ml (ditentukan dengan metode hitungan cawan) hingga pengukuran optical density (ditentukan dengan spektrofotometer) (Lestienne, 2005).

Spektrofotometer Alat yang umum digunakan untuk mengukur nilai kekeruhan

suspensi sel yaitu spektrofotometer. Sel bakteri umumnya dihitung dengan panjang gelombang 600 nm (Lestienne, 2005). Skema kerja spektrofotometer dapat dilihat pada Gambar 2.7.

Gambar 2.7 Skema Kerja Spektrofotometer UV-Vis (Lestienne, 2005).

Haemacytometer Haemacytometer merupakan alat yang berfungsi untuk

menghitung sel, antara lain mikroorganisme dan sel darah, yang berukuran mikroskopis. Haemacytometer ditemukan oleh Louis-Charles Malassez yang pada awalnya terdiri dari sebuah lapisan kaca tebal dengan lekukan persegi panjang dan terdapat ruang-

ruang kamar. Ruangan tersebut diukir dengan laser grid yang menggores garis secara tegak lurus (Lestienne, 2005). Haemacytometer dapat menghitung jumlah sel atau partikel dalam suatu volume cairan tertentu, sehingga dapat diketahui konsentrasi sel dalam cairan secara keseluruhan. Ruang hitung terdiri dari 9 kotak besar dengan luas 1mm². Menurut Freshney (2005) sel bakteri yang tersuspensi akan memenuhi volume ruang hitung sehingga didapatkan rumus perhitungan ruang R sebagai berikut:

Alat Haemacytometer dapat dilihat pada Gambar 2.8.

Gambar 2.8 Haemacytometer (Martin, 2007).

22

Selain cahaya, faktor perbesaran mikroskop juga berpengaruh (Hurrel, 2004). Haemocytometer memiliki kelemahan dan kelebihan pada proses penghitungan bakteri secara langsung. Kelebihannnya antara lain ialah cepat dalam menghasilkan data sehingga tidak perlu menunggu lama dalam menghitung kepadatan sel, serta dapat mengamati morfologi sel, mengevaluasi homogenitas, dan dapat mendeteksi kontaminan. Sedangkan kelemahannya ialah tidak dapat membedakan antara sel yang mati dengan yang hidup apabila tidak menggunakan suatu larutan pewarna untuk membedakannya (Hurrel, 2004).

2.7 Kurva Pertumbuhan Tipe pertumbuhan bakteri tidak berlangsung dalam periode

waktu yang kontinyu, namun dipengaruhi oleh lingkungan dan nutrisi yang terkandung di dalamnya. Kekurangan nutrisi menyebabkan berhentinya pertumbuhan bakteri. Pertumbuhan bakteri dapat digambarkan dalam kurva pertumbuhan seperti pada Gambar 2.9.

Gambar 2.9. Kurva Pertumbuhan Bakteri (Peddie, 1999).

Fase lag merupakan waktu yang dibutuhkan mikrobia untuk tumbuh beradaptasi di dalam medium baru. Pada fase lag terjadi pertambahan massa dan volume sel mikrobia. Panjang atau

23

pendeknya interval fase lag tergantung pada jenis inokulum mikrobia, medium yang sedikit nutrisi dan kondisi pertumbuhan mikrobia saat diinokulasikan (Presccot, 1999). a. Pada fase eksponensial, populasi mikrobia mengalami

pembelahan paling tinggi dan konstan dalam waktu generasi yang pendek. Waktu generasi mikrobia merupakan waktu yang dibutuhkan sel mikrobia untuk membelah menjadi 2 sel. Setiap sel mikrobia akan membelah 2x lipat sehingga peningkatan jumlah populasi selalu 2n, n adalah jumlah generasi. Pertambahan jumlah sel dalam populasi disebut sebagai pertumbuhan mikrobia.

b. Pada fase stasioner, pembelahan sel yang terjadi sangat lambat. Jumlah pembelahan sel dengan sel yang mati seimbang, sehingga jumlah sel relatif konstan (pertumbuhan 0). Pada fase ini, sel mikroba tetap aktif melakukan metabolisme energi dan proses biosintesis lainnya. Metabolit sekunder banyak dihasilkan mikrobia pada fase ini. Fase stasioner terjadi karena beberapa alasan yaitu: Terbatasnya nutrisi essensial dalam kultur yang mulai berkurang, kurangnya ketersediaan O2 dalam medium mulai berkurang untuk organisme aerobik, dan banyaknya sisa metabolisme yang tertimbun dalam medium kultur sehingga pertumbuhan mikroba terhambat (Madigan, 1991).

c. Fase kematian terjadi jika terjadi perubahan lingkungan menjadi tidak menguntungkan, seperti berkurangnya nutrisi essensial dalam medium dan meningkatnya akumulasi zat toksik dalam medium. Grafik fase kematian seperti grafik fase eksponensial yaitu logaritmik (kematian sel tiap jam adalah konstan). Sel mikrobia yang mati akan mengalami lisis (Presccot, 1999).

Penelitian Peddie et al. (1999) tentang pertumbuhan bakteri Bacillus sp. yang ditumbuhkan pada medium MSM dengan penambahan glutamat sebnyak 2g/L bahwa Bacillus strain TA2.A1. dapat tumbuh dengan cepat karena menggunakan glutamat sebagai sumber karbon dan energi. Kecepatan rata-rata

24

pertumbuhan bakteri mencapai 0,35 per jam (data tidak ditunjukkan). Selain glutamat, bakteri ini juga membutuhkan sodium untuk pertumbuhannya untuk energi dalam melakukan pembelahan diri dan proses bioenergi. Penggunaan glutamat oleh bakteri dipengaruhi oleh konsentrasi sodium. Konsentrasi sodium yang semakin tinggi yaitu berkisar 5mm-100mm di dalam medium pertumbuhan dapat meningkatkan kepadatan sel bakteri sedangkan konsentrasi lebih dari 100mm dapat menghambat pertumbuhan sel bakteri. Kurva pertumbuhan Bacillus strain TA2.A1. Medium MSM yang tambahkan glutamat dengan konsentrasi 2 g/L ditunjukkan pada Gambar 2.10

Gambar 2.10. Kurva Pertumbuhan Bacillus Strain TA2.A1. pada MSM dengan Penambahan Glutamat (Peddie, 1999).

25

BAB III METODOLOGI

3.1 Waktu dan Lokasi Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Jurusan Biologi FMIPA ITS Surabaya pada bulan Februari sampai dengan Mei 2016.

3.2 Isolat yang Digunakan

Secara umum metodologi yang digunakan dapat digambarkan seperti dalam lampiran 2. Isolat yang digunakan berasal dari penelitian degradasi plastik menggunakan kolom Winogradsky (Sriningsih, 2015) dan merupakan koleksi Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi. Isolat tersebut adalah Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01.

3.2.1 Purifikasi dan Rekonfirmasi Bakteri Uji

Sumber isolat adalah inokulum yang ada di tabung Winogradsky penelitian Sriningsih (2015). Pemurnian isolat bakteri uji diawali dengan pembuatan medium Nutrient Agar (NA) (lampiran 1) pada cawan Petri. Isolasi bakteri diambil dari 3 titik berbeda yaitu pada area kolom, biofilm, dan pasir. Sampel diambil sebanyak 1mL pada area kolom dan dituang pada cawan Petri dengan metode spread (metode sebar). Selanjutnya sampel pada area biofilm diambil dengan cara memasukkan plastik ke dalam botol falkon yang berisi 10 mL akuades steril. Sementara itu sampel pada area pasir diambil dengan cara memasukkan pasir ke dalam botol falkon yang berisi 10 mL akuades steril. Sampel pada area biofilm dan pasir disentrifugasi selama 30 menit dengan kecepatan 2500 rpm. Supernatant hasil sentrifugasi diambil sebanyak 1mL dan dituang dengan metode spread pada cawan Petri, selanjutnya dimasukkan ke dalam inkubator suhu 37⁰C

selama 24 jam hingga didapatkan koloni tunggal (Nishijima ,2005).

26

Koloni tunggal yang terbentuk pada biakan bakteri umur 24 jam diinokulasikan pada cawan Petri dengan metode16 streak. Hasil koloni tunggal direkonfirmasikan karakteristiknya secara makroskopis dan biokimia berdasarkan Bergey’s Manual of Determinative Bacteria untuk memastikan bahwa isolat tersebut merupakan bakteri Bacillus dan Pseudomonas. Karakter fenotip isolat bakteri yang diuji meliputi pewarnaan sederhana, pewarnaan Gram, uji endospora, uji motilitas, dan aktivitas katalase (Harley dan Prescott, 2002). Pewarnaan Sederhana

Bakteri isolat uji diambil sebanyak 1 ose, kemudian digoreskan di atas kaca objek yang telah diberi akuades sebelumnya. Preparat difiksasi di atas bunsen. Selanjutnya preparat ditetesi dengan methylene blue sebanyak 1-2 tetes, lalu didiamkan selama 30 detik. Preparat dibilas dengan akuades dan didiamkan hingga kering. Preparat ditutup dengan kaca penutup dan diberi tambahan minyak imersi sebanyak 1 tetes pada bagian atas kaca penutup. Setelah itu preparat diamati dengan mikroskop perbesaran 1000 kali (Harley dan Prescott, 2002).

Pewarnaan Gram

Isolat bakteri uji diambil sebanyak 1 ose, kemudian digoreskan di atas kaca objek yang telah diberi akuades sebelumnya. Preparat difiksasi di atas Bunsen, lalu ditetesi larutan kristal violet sebanyak 2-3 tetes. Preparat didiamkan selama 30 detik lalu dibilas dengan akuades. Preparat ditetesi larutan Gram’s iodine sebanyak 2-3 tetes dan didiamkan selama 1 menit. Selanjutnya preparat dibilas kembali dengan akuades. Preparat didekolorisasi dengan menggunakan etil alkohol 95% setetes demi setetes selama 15 detik kemudian dibilas kembali dengan akuades dan didiamkan hingga kering. Preparat ditetesi safranin selama ±1 menit dan dibilas kembali dengan akuades. Kemudian preparat didiamkan hingga kering. Preparat ditutup dengan kaca penutup dan diberi tambahan minyak imersi sebanyak 1 tetes

27

pada bagian atas kaca penutup. Setelah itu preparat diamati dengan mikroskop perbesaran 1000 kali (Harley dan Prescott, 2002). Pewarnaan Endospora

Bakteri isolat uji diambil sebanyak 1 ose, kemudian digoreskan di atas kaca objek yang telah diberi akuades sebelumnya. Preparat difiksasi di atas bunsen. Selanjutnya bagian atas preparat ditutup tisu lalu ditetesi dengan malachite green hingga menutupi seluruh permukaan kaca objek. Preparat dipanaskan selama 3-4 menit di atas bunsen dengan bantuan kasa pemanas. Selanjutnya tisu pada preparat dibuang dan dibilas dengan akuades. Preparat diwarnai dengan safranin selama ±1 menit dan dibilas kembali dengan akuades. Preparat ditutup dengan kaca penutup dan diberi tambahan minyak imersi sebanyak 1 tetes pada bagian atas kaca penutup. Preparat diamati dengan mikroskop perbesaran 1000 kali (Harley dan Prescott, 2002).

Uji Katalase

Gelas objek yang telah dibersihkan dengan alkohol 70% ditetesi dengan larutan H2O2 (Hidrogen Peroksida) 3% sebanyak 1 tetes. Isolat diambil sebanyak 1 ose lalu digoreskan secara aseptis pada kaca objek. Isolat dihomogenkan secara manual dan diamati hasilnya. Hasil positif ditandai dengan timbulnya gas atau gelembung udara di sekitar goresan isolat bakteri (Harley dan Prescott, 2002).

Uji Motilitas

Inokulasi bakteri pada media TSIA (Lampiran 1) dilakukan secara aseptis dengan menusukkan jarum ose steril yang mengandung isolat bakteri secara lurus kedalam tabung reaksi tanpa menyentuh dinding tabung. Media yang telah diinokulasi bakteri selanjutnya diinkubasi selama 24 jam dan diamati pola pergerakkan bakteri (Harley dan Prescott, 2002).

28

Hasil dari rekonfirmasi bakteri uji didapatkan isolat bakteri

uji yang diberi nama Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01.

3.2.2. Pembuatan starter Pembuatan starter dilakukan pada medium cair Nutrient

Broth (NB) dengan menggunakan metode pengenceran bertingkat. Langkah pertama sebanyak 1 ose isolat murni hasil subkultur pada medium padat yang telah direkonfirmasi dimasukkan pada 10 mL medium NB, kemudian diinkubasi selama 24 jam. Selanjutnya sebanyak 5 mL dari 10 mL medium NB dimasukkan pada 45 mL medium NB baru. Selanjutnya sebanyak 15 mL dari 50 mL medium NB dimasukkan pada 135 mL medium NB baru. Kultur pada 150 mL NB ini digunakan sebagai starter pada perlakuan selanjutnya. Starter yang digunakan untuk uji adalah 10% dari total medium dengan kepadatan sel 106 sel/ml yang dihitung menggunakan Haemacytometer. Sampel uji diambil sebanyak 1-2 tetes dan diletakkan di atas Haemacytometer. Preparat diamati di bawah mikroskop dengan perbesaran 1000 kali (Martin, 2007).

3.2.3. Optimasi Pengukuran Kurva Pertumbuhan 2 gr/L MSG Optimasi pengukuran kurva pertumbuhan dilakukan dengan beberapa tahapan. Tahap pertama yaitu membuat Mineral Salt Medium (MSM) (Lampiran 1) sebanyak 350 ml dengan penambahan MSG sebanyak 2 g/L. Sebanyak 315 mL MSM 2 gr/L MSG dimasukkan ke dalam Erlenmeyer 500 mL kemudian ditambahkan 10% (35 mL) starter bakteri uji sehingga total medium kultur adalah 350 mL dan diinkubasi pada suhu ruang di atas shaker 250 rpm menggunakan Rotary Shaker. Pada interval waktu:

a) Setiap 24 jam sekali selama 4 hari b) Setiap 48 jam sekali selama 4 hari c) Setiap 72 jam sekali selama 4 hari

29

pertumbuhan sel diamati berdasarkan kekeruhan kultur sel. Sebanyak 2 mL sampel uji dimasukkan ke dalam kuvet dan diukur nilai absorbansinya pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 600nm. Pengukuran dilakukan dengan 2 kali ulangan pada setiap kultur sel dan setiap interval waktu. 1 gr/L MSG

Pembuatan MSM untuk serial MSG 1 g/L dilakukan dengan cara yang sama seperti pembuatan MSM untuk serial MSG 2 g/L. Namun jumlah MSM yang digunakan sebanyak 215 mL dengan penambahan starter bakteri uji sebanyak 10% (25 mL) sehingga total medium kultur adalah 250 mL. Pada perlakuan 1 g/L MSG disediakan kontrol yaitu MSM tanpa MSG. Selanjutnya inokulum diinkubasi pada suhu ruang di atas shaker 250 rpm menggunakan Rotary Shaker. Pertumbuhan sel bakteri uji diamati berdasarkan OD dengan mengukur nilai absorbansi menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 600nm. Pengukuran pertumbuhan sel bakteri dilakukan setiap 4 jam sekali selama 24 jam dan dilakukan sebanyak 2 kali ulangan pada tiap perlakuan.

3.2.4. Pengukuran Kurva Pertumbuhan Uji MSM dibuat dengan variasi kandungan MSG yaitu 0 g/L ; 0,5 g/L ; 1 g/L ; 1,5 g/L ; dan 2 g/L (Tabel 3.1.). Tabel 3.1 Konsentrasi MSG pada MSM MSG MSG

(gr/L) Nama Medium Modifikasi

MSG 0 0 gr/L MSG MSG 0,5 0,5 gr/L MSG MSG 1 1 gr/L MSG MSG 1,5 1,5 gr/L MSG MSG 2 2 gr/L MSG Selanjutnya sebanyak 315 mL MSM termodifikasi masing-masing dimasukkan ke dalam Erlenmeyer 500 ml dan ditambahkan 10% (35 mL) starter bakteri uji sehingga total

medium kultur pada tiap serial MSG adalah 350 mL. Inokulum bakteri uji pada MSM diinkubasi pada suhu ruang di atas shaker 250 rpm menggunakan Rotary Shaker. Setiap 1 jam sekali selama 48 jam perhitungan sel diukur berdasarkan kekeruhannya pada OD 600 nm. Pengukuran sel dilakukan dengan cara yang sama seperti pada tahap 3.2.3. Kontrol pendukung perlakuan adalah bakteri uji yang dikultur pada medium Lactose Broth (LB) (Lampiran 1). Selain berdasarkan kekeruhan sel, pertumbuhan sel juga diamati dengan perhitungan jumlah sel menggunakan Haemacytometer. Sampel uji sebelumnya difiksasi dengan ditambahkan larutan formalin 0,5% sebanyak 1 tetes dalam 10 mL kultur. Perlakuan ini dilakukan untuk menghambat pertumbuhan bakteri uji selama perhitungan Haemacytometer(Bezkorovainy, 2001). Sampel uji diambil sebanyak 1-2 tetes dan diletakkan di atas Haemacytometer. Preparat diamati di bawah mikroskop dengan perbesaran 1000 kali. Sel bakteri yang telah dihitung jumlah sel nya dicatat dan dihitung kepadatan nya dengan menggunakan rumus :

(Freshney, 2005). Pengukuran OD dan Haemacytometer dilakukan sebanyak 3 kali ulangan pada kultur tiap serial MSG perlakuan.

3.2.5. Pengukuran Diameter Sel Pengukuran diameter sel dilakukan pada jam ke-16 masa

inkubasi. Inokulum yang berusia 16 jam, diambil 1-2 tetes menggunakan ose dan diletakkan pada kaca objek. Preparat difiksasi, selanjutnya dilakukan pewarnaan sederhana menggunakan Methylen Blue. Preparat diamati menggunakan mikroskop opti lab untuk mengetahui ukuran selnya. Pengukuran diameter sel meliputi pengukuran panjang dan lebar sel.

Concentration (cells/mL) = x 25

31

Pengukuran sel dilakukan sebanyak 3 kali ulangan pada kultur tiap konsentrasi MSG perlakuan.

3.3 Rancangan Penelitian dan Analisis Data

Penelitian dilakukan secara deskriptif kualitatif untuk mengetahui pengaruh MSG terhadap pertumbuhan isolat uji, dan deskriptif kuantitatif untuk mengetahui konsentrasi MSG yang optimal terhadap pertumbuhan isolat uji. Data pembuktian bahwa MSG komersial sebagai sumber nitrogen bagi bakteri Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01 yang diperoleh dari tiap perlakuan dianalisis dengan Analysis of Variance (ANOVA) One Way untuk mengetahui pengaruh MSG komersial sebagai sumber nitrogen terhadap pertumbuhan bakteri dengan hipotesa: Ho : Perbedaan konsentrasi MSG tidak berpengaruh

terhadap pertumbuhan bakteri H1 : Perbedaan konsentrasi MSG berpengaruh terhadap

pertumbuhan bakteri Dengan pengambilan Keputusan :

a) Jika signifikan > 0.05 maka H0 diterima b) Jika signifikan < 0.05 maka H0 ditolak

Jika H1 diterima maka analisis dilanjutkan dengan uji Tukey pada tahap kepercayaan 95%

(Prawirohardjono, 2000). Uji pengaruh MSG komersial bagi pertumbuhan bakteri isolat Bacillus PL01 atau Pseudomonas PL01 dideteksi dari hasil pengukuran OD.

32

“Halaman ini sengaja dikosongkan”

33

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Rekonfirmasi Bacillus dan Pseudomonas Uji rekonfirmasi dilakukan untuk memastikan bahwa isolat uji adalah Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01. Hasil rekonfirmasi Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01 ditunjukkan pada Tabel 4.1. Tabel 4.1 Hasil Uji Rekonfirmasi Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01

Karakterisasi* Bakteri

Bacillus PL01 Pseudomonas

PL01 Berbentuk Batang Gram Positif Motilitas Katalase Positif Endospora

+ + + + +

+ - + + -

(*Holt et al, 1994).

Bakteri Gram positif ditandai dengan perubahan warna menjadi ungu setelah pewarnaan Gram (Harisha, 2006). Sekitar 60-90% dinding sel bakteri Gram positif terdiri dari peptidoglikan. Bakteri Gram negatif mempunyai dinding sel terdiri dari dua lapisan yaitu: lapisan luar yang tersusun dari lipopolisakarida dan protein, serta lapisan dalam yang tersusun dari peptidoglikan tetapi lebih tipis dari bakteri Gram positif (Timotius, 1982). Bacillus PL01 membentuk endospora yang ditandai dengan sel bakteri yang berwarna hijau. Endospora mengandung dipicolinic acid (DPA) sebagai bentuk resistensi bakteri tersebut terhadap paparan panas (Prescott et al, 2008). Secara umum genus Bacillus bersifat motil karena memiliki

34

peritrichous flagella (Berber, 2004). Pada uji katalase, katalase positif menandakan adanya enzim katalase saat proses interaksi dengan H2O2 ditandai dengan munculnya gelembung (Harley dan Prescott, 2002). Enzim katalase berfungsi untuk mengkatalis kandungan H2O2 melalui dua mekanisme kerja yaitu katalitik dan peroksidatik. Enzim katalase bersifat antioksidan ditemukan pada hampir sebagian besar sel (Kohen dan Nyska, 2002).

4.2 Pengaruh MSG Terhadap Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01

Pertumbuhan mikroorganisme dapat ditandai dengan peningkatan jumlah dan massal sel, dimana kecepatan pertumbuhan tergantung pada lingkungan fisik dan kimianya (Pelczar, 1986). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh Monosodium Glutamat (MSG) terhadap pertumbuhan isolat Bacillus PL01 dan Pseudomonas PL01 selama 48 jam masa inkubasi. Konsentrasi MSG yang digunakan yaitu 0 MSG ; 0,5 MSG ; 1 MSG ; 1,5 MSG ; 2 MSG. Pada penelitian ini digunakan Minimal Medium (MSM) agar pengaruh penambahan MSG dapat diketahui sebagai sumber nutrisi alternatif. MSM merupakan medium yang hanya terdiri dari garam-garam mineral anorganik dan tidak terdapat sumber karbon (Deacon, 2003). MSG merupakan hasil purifikasi glutamat atau gabungan dari beberapa asam amino dengan sejumlah kecil peptida melalui proses hidrolisa protein (Hydrolized Vegetable Protein/HVP) (Santoso, 2008). MSG dapat dimanfaatkan sebagai sumber nitrogen bagi pertumbuhan bakteri. Sebagai kontrol digunakan medium Lactose Broth (LB). Penentuan kurva pertumbuhan dilakukan dengan mengukur OD (Optical Density) menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 600nm dan menghitung jumlah sel bakteri menggunakan Haemacytometer pada perbesaran 1000x.

Gambar 4.1 Kurva Pertumbuhan (A) Bacillus PL01 (B) Pseudomonas PL01.

37

Secara umum (Gambar 4.1) terlihat bahwa MSM dapat mendukung pertumbuhan kedua isolat uji. Pada 0 gr/L MSG kedua isolat uji masih membutuhkan fase adaptasi sebelum masuk ke fase log. Namun ketika MSM ditambah MSG, kedua isolat uji dapat langsung masuk ke fase log atau eksponensial. Hal ini menunjukkan bahwa MSG mampu menjadi sumber energi bagi isolat uji. Kurva pertumbuhan isolat Bacillus PL01 memiliki pola pertumbuhan yang berbeda dengan isolat Pseudomonas PL01, yang menunjukkan penambahan MSG pada MSM memberikan pengaruh yang berbeda terhadap kedua isolat uji tersebut.

Menurut Pelczar (1986), pertumbuhan mikroorganisme terbagi atas 4 fase, yang dimulai dari fase lag atau fase adaptasi. Ciri-ciri fase ini adalah tidak ada pertumbuhan populasi, sel mengalami perubahan dalam komposisi kimiawi, ukuran sel bertambah, dan bertambahnya substansi intraseluler. Setelah fase lag, bakteri akan memasuki fase eksponensial, pada fase ini sel membelah dengan laju yang konstan, massa menjadi dua kali lipat dengan laju yang sama, aktivitas metabolik serta pertumbuhan seimbang. Pertumbuhan seimbang ditandai dengan bertambahnya populasi secara teratur. Pertumbuhan bakteri selanjutnya, yaitu fase stasioner. Fase ini ditandai habisnya nutrisi yang dibutuhkan bakteri dalam pertumbuhannya. Pada fase ini senyawa atau produk racun diproduksi dan menyebabkan beberapa sel bakteri mati sehingga jumlah sel yang hidup menjadi tetap. Fase selanjutnya yaitu fase kematian atau penurunan pertumbuhan yang ditandai dengan jumlah sel bakteri yang mati lebih banyak dibandingkan terbentuknya sel baru.

Pengaruh MSG secara umum dapat pula dilihat dari sudut jarak antar kurva untuk setiap penambahan MSG (Gambar 4.1). Pada pertumbuhan Bacillus PL01 terlihat ada perbedaan jarak yang cukup jauh. Hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi MSG memberikan pengaruh besar untuk pertumbuhan Bacillus PL01. Sedangkan pada Pseudomonas PL01, jarak antar kurva relatif berdekatan. Hal ini diasumsikan bahwa pengaruh penambahan

38

MSG pada Pseudomonas PL01 di tiap konsentrasi tidak terlalu besar. Hal ini mungkin dapat dikaitkan dengan perbedaan Gram antara kedua isolat uji yang berhubungan dengan komposisi lapisan dinding sel. Menurut Madigan et al. (2012), Bacillus merupakan bakteri Gram positif yang lapisan dinding selnya terdiri dari lipopolisakarida dan peptidoglikan. Lipopolisakarida berasal dari dua gula N-acetyglucosamine dan N-acetylmuramic acid, beberapa asam amino, dan diaminopimelic acid (DAP). Sedangkan pada Pseudomonas PL01 memiliki lapisan peptidoglikan yang lebih tipis (Gambar 2.3 dan Gambar 2.4)

Secara umum mekanisme penyerapan nutrisi pada membran sel dapat melalui proses transpor aktif. Transpor aktif sangat diperlukan untuk memelihara keseimbangan molekul-molekul di dalam sel. Sumber energi untuk transpor aktif adalah ATP (Adenosin Trifosfat) (Berber, 2004). Pada transpor aktif diperlukan energi dari dalam sel untuk melawan gradien konsentrasi (Hipotonis->Hipertonis). Transport aktif dapat terjadi melalui dua mekanisme: Protein transport dalam membran plasma memindahkan

zat terlarut seperti ion-ion kecil (Na+, K+, Cl-,H+), asam amino, dan monosakarida Vesikula atau badan-badan lain dalam sitoplasma memindahkan molekul-molekul makro atau partikel-partikel besar melewati membran plasma.

(Berg, 2007). Contoh dari transpor aktif adalah transpor asam amino dan glukosa melewati membran plasma dengan suatu protein khusus. Pada glukosa, disebut sebagai GLUT-4 (Glucose Transporter 4). Pengangkutan tersebut terjadi seiring dengan difusi molekul ion Na+ (Vincent, 2004).

Endositosis merupakan proses masuknya partikel ke dalam sel. Membran sel pada awalnya akan membentuk lekukan akibat desakan dari partikel yang akan masuk. Setelah lekukan terlepas, vesikel akan terbentuk dimana jika partikel yang masuk berupa nutrisi maka akan langsung masuk ke dalam sel, namun

39

ji ka partikel berupa benda asing maka akan langsung dicerna oleh lisosom dengan bantuan enzim. Endositosis pada sel dapat terjadi secara fagositosis dan pinositosis. Fagositosis merupakan proses masuknya molekul padat ke dalam sel, sedangkan zat cair masuk ke dalam sel secara pinositosis (Berber, 2004). 4.2.1. Bacillus PL01

Gambar 4.1. menunjukkan bahwa pada 0 gr/L MSG isolat Bacillus PL01 memiliki pola pertumbuhan paling rendah. Namun selama 48 jam masa inkubasi, pertumbuhan Bacillus PL01 belum mencapai fase kematian. Hal ini menunjukkan bahwa isolat Bacillus PL01 mampu hidup pada MSM, walaupun kurva pertumbuhannya lebih rendah bila dibandingkan dengan kurva pertumbuhan dengan penambahan MSG. Pada 0,5 gr/L MSG, isolat Bacillus PL01 mampu tumbuh maksimal, bahkan melebihi pertumbuhan di medium LB. Hal ini menunjukkan penambahan 0,5 gr/L MSG dalam MSM dapat menyediakan nutrisi setara dengan LB untuk pertumbuhan sel Bacillus PL01. Namun ketika penambahan MSG ditingkatkan (1 gr/L MSG, 1,5 gr/L MSG, dan 2 gr/L MSG) Bacillus PL01 mengalami penurunan pertumbuhan, bahkan kurva pertumbuhannya berada di bawah LB. Hal ini mungkin berkaitan dengan struktur dinding sel Bacillus PL01 yang memiliki dinding sel tebal (Gambar 2.3 dan Tabel 2.3)

Peningkatan MSG berpengaruh terhadap konsentrasi lingkungan ekstraseluler, menjadi lebih pekat bagi Bacillus PL01. Semakin tinggi konsentrasi MSG yang diberikan, semakin tidak tersedia atau sulit diserap masuk oleh Bacillus PL01 karena terhalang oleh lapisan peptidoglikan, sehingga nutrisi alternatif dari MSG tidak tersedia untuk mendukung pertumbuhan bakteri. Lapisan peptidoglikan tebal Bacillus PL01 (Gambar 2.3 dan Gambar 2.4) mungkin menjadi penghalang fisik-kimia dinding sel dalam menyerap konsentrasi bahan kimia yang terlalu tinggi.

Bacillus merupakan organisme kemolitotrof yang memiliki kemampuan mereduksi senyawa nitrat menjadi nitrit dan nitrit menjadi ammonia (Madigan, 2012). Bakteri Bacillus

40

memiliki flagela yang tersebar pada seluruh permukaan sel, yang disebut peritik (Berber, 2004). Fungsi utama flagela pada bakteri yaitu sebagai alat pergerakan. Sel bakteri yang memiliki flagela dapat menghampiri sumber nutrisi. Koordinasi fungsi flagela melibatkan kemoreseptor yang disebut “protein pengikat periplasmik” dan dapat berikatan pada transpor membran. Adanya pergerakan flagela juga melibatkan proses metilasi suatu protein membran plasma spesifik (Hogg, 2005). Bakteri Gram positif dapat menghasilkan polisakarida permukaan yang spesifik dan protein yang berhubungan dengan peptidoglikan. Polisakarida spesifik yang terdapat pada bakteri Gram positif adalah asam teikoat, yang berfungsi sebagai antigen permukaan sel bakteri (Berber, 2004).

Pengaruh konsentrasi MSG terhadap pertumbuhan Bacillus PL01 juga dianalisis menggunakan Analysis of Varians (ANOVA) One Way yang ditunjukkan pada Tabel 4.2. Tabel 4.2 Hasil ANOVA One Way OD jam ke-16 Bacillus

Sum of Squares

df Mean Square

F Sig.

Between Groups

.319 5 .064 197.157 .000

Within Groups

.010 30 .000

Total .329 35

Berdasarkan Tabel 4.2. dapat diketahui bahwa pada jam ke-16 masa inkubasi pengaruh konsentrasi MSG terhadap pertumbuhan Bacillus PL01 memiliki probabilitas atau signifikansi 0.000 yang berarti lebih kecil dari 0.05. Hal ini menunjukkan bahwa penambahan MSG berpengaruh terhadap pertumbuhan Bacillus PL01. Analisis dilakukan pada jam ke-16 dikarenakan pada jam tersebut sel bakteri berada pada fase

41

eksponensial dimana mengalami pertumbuhan yang maksimal. Selanjutnya dilakukan uji Tukey pada tahap kepercayaan 95% (Tabel 4.3).

Tabel 4.3. Hasil Uji Tukey Bacillus PL01

Bacillus N Subset for alpha = 0.05

A B C D E

0 MSG 6 .366

1 MSG 6 .390

2 MSG 6 .577

1,5 MSG 6 .667

LB 6 .785

0,5 MSG 6 .873

Sig. .847 1.000 1.000 1.000 1.000

Berdasarkan Gambar 4.1.A dan Tabel 4.3 pada konsentrasi 0,5 gr/L MSG memberi pengaruh tertinggi dengan nilai rata-rata serapan OD mencapai 0,87, sehingga dikelompokkan terpisah dari konsentrasi MSG lainnya, yaitu E. Hal yang sama juga terjadi pada konsentrasi 2 gr/L MSG, 1,5 gr/L MSG, dan LB yang berada pada kelompok B, C, D dan memiliki kelompok yang terpisah dari konsentrasi lainnya. Sedangkan untuk konsentrasi 0 gr/L MSG dan 1 gr/L MSG berada pada kelompok yang sama, yaitu A. Hal ini menunjukkan pertumbuhan Bacillus PL01 pada 0 gr/L MSG dan 1 gr/L MSG memiliki pola pertumbuhan yang hampir sama. Pola kurva pada Gambar 4.1.A juga menunjukkan hal yang sama, dimana kurva keduanya saling tumpang tindih. 4.2.2. Pseudomonas PL01

Kurva pertumbuhan paling rendah pada isolat Pseudomonas PL01 juga terjadi pada 0 gr/L MSG. Pertumbuhan Pseudomonas PL01 masih di fase stasioner hingga 48 jam masa

42

inkubasi. Pertumbuhan Pseudomonas PL01 di MSM di setiap tingkat konsentrasi MSG, terlihat masih lebih rendah dibandingkan dengan pertumbuhannya di medium LB. Hal ini menunjukkan bahwa penambahan MSG pada MSM belum memberikan nutrisi setara dengan LB. Medium LB merupakan medium pengkaya, yang mengandung sumber C yang digunakan sel mikroorganisme selama masa pertumbuhan (Corry, 2003). Berbanding terbalik dengan Bacillus PL01, semakin tinggi penambahan MSG, maka kurva pertumbuhan Pseudomonas PL01 tampak semakin tinggi pula (Gambar 4.1.B) bahkan konsentrasi 2 gr/L MSG dapat memberikan pertumbuhan Pseudomonas PL01 tertinggi. Hal ini juga mungkin berkaitan dengan lapisan dinding sel, dimana Pseudomonas PL01 memiliki lapisan peptidoglikan yang lebih tipis sehingga MSG mudah diserap oleh sel mikroorganisme dan digunakan sebagai nutrisi alternatif (Gambar 2.4).

Karakter kunci dari genus Pseudomonas adalah sel berbentuk basil, gram negatif, aerob obligat, motil, oksidasi fermentatif negatif. Pada bakteri Gram negatif terdapat tiga lapisan pembungkus sel yaitu : membran luar, lapisan tengah yang merupakan dinding sel atau lapisan murein yang terdapat di ruang periplasma, dan membran dalam. Membran luar mengandung fosfolipid, Lipopolisakarida (LPS) yang berperan sebagai antigen permukaan O somatik atau endotoxin (Milton, 2001). Pada bakteri Gram negatif, protein dan lipoprotein memiliki jumlah yang sangat banyak.

Pada Pseudomonas PL01 juga dilakukan analisis statistik menggunakan Analysis of Varians (ANOVA) One Way yang ditunjukkan pada Tabel 4.4.

43

Tabel 4.4 Hasil ANOVA One Way OD jamke-16 Pseudomonas

Sum of Squares

df Mean Square

F Sig.

Between Groups

.198 5 .040 34.823 .000

Within Groups

.034 30 .001

Total .232 35

Berdasarkan Tabel 4.4. dapat diketahui bahwa pada jam ke-16 masa inkubasi hasil signifikansinya sama seperti Bacillus PL01, yaitu lebih kecil dari 0.05. Hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi MSG berpengaruh terhadap pertumbuhan Pseudomonas PL01. Selanjutnya dilakukan uji Tukey pada tahap kepercayaan 95% (Tabel 4.5).

Tabel 4.5 Hasil Uji Tukey Pseudomonas PL01

Tukey HSD

Pseudomonas N Subset for alpha = 0.05

A B C

0 MSG 6 .447

1 MSG 6 .520 .601

0,5 MSG 6 .3007

1,5 MSG 6 .750

LB 6 .823

2 MSG 6 .828

Sig. .435 .315 .359

44

Berdasarkan Gambar 4.1.B dan Tabel 4.5, pada konsentrasi 2 gr/L MSG memberi pengaruh tertinggi dengan nilai rata-rata serapan OD mencapai 0,82. Pada konsentrasi 1.5 gr/L MSG, Kontrol LB dan 2 gr/L MSG berada pada kelompok yang sama, yaitu C. Hal ini menunjukkan pertumbuhan Pseudomonas PL01 pada 1.5 gr/L MSG, Kontrol LB, dan 2 gr/L MSG memiliki pola pertumbuhan yang hampir sama. Hal ini juga terjadi pada konsentrasi 0 gr/L MSG dan 1 gr/L MSG yang juga memiliki pengelompokkan yang sama, yaitu A. Pola pertumbuhan yang hampir sama juga terjadi pada konsentrasi 1 gr/L MSG dan 0,5 gr/L MSG, dimana berada pada kelompok B. Pola kurva pada Gambar 4.1.B juga menunjukkan hal serupa, dimana terlihat adanya kurva saling tumpang tindih pada konsentrasi MSG yang memiliki pengelompokkan sama. 4.3. Korelasi Perhitungan OD dan Jumlah Sel

Perhitungan sel dilakukan secara kualitatif dengan mengukur kekeruhan sel (Turbidimetri) menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 600 nm dan secara kuantitatif dengan menghitung jumlah sel menggunakan Haemocytometer pada perbesaran 1000x. Perhitungan sel secara langsung dilakukan dengan menghitung jumlah sel. Dalam penelitian ini korelasi perhitungan OD dan jumlah sel antara kedua isolat uji dilakukan pada penambahan 0,5 gr/L MSG untuk Bacillus PL01 dan 2 gr/L MSG untuk Pseudomonas PL01 karena pada kedua konsentrasi tersebut isolat uji memberikan pola pertumbuhan tertinggi (Gambar 4.2).

OD Jumlah Sel Jumlah Sel

A

Gambar 4.2. Kurva Korelasi Perhitungan OD dan Jumlah Sel (A) Bacillus PL01 0,5 gr/L MSG (B) Pseudomonas PL01 2 gr/L MSG

OD Jumlah Sel

B

47

Gambar 4.2 menunjukkan bahwa antara pembacaan OD dan jumlah sel memiliki pola pertumbuhan yang hampir sama; besarnya nilai OD berbanding lurus dengan banyaknya jumlah sel. Menurut Laboffe (2010), semakin tinggi OD maka semakin banyak pula jumlah mikroorganisme dalam kultur tersebut. Korelasi antara OD dan Jumlah Sel tiap penambahan MSG pada kedua isolat uji dapat dilihat pada Lampiran 3.

Haemocytometer adalah metode perhitungan secara mikroskopis. Sel bakteri yang tersuspensi akan memenuhi volume ruang hitung sehingga jumlah sel bakteri per satuan volume dapat diketahui (Martin, 2007). Hurrel (2004) menambahkan, kelebihan menghitung jumlah sel menggunakan Hemacytometer antara lain cepat dalam menghasilkan data, dan dapat mengamati morfologi sel. Sedangkan kelemahannya adalah tidak dapat membedakan antara sel yang mati dengan yang hidup apabila tidak menggunakan suatu larutan pewarna sebagai pembeda, serta data yang dihasilkan tidak akurat karena setiap pengamat memiliki keterbatasan dalam melihat serta menghitung sel yang ada dalam ruang-ruang kamar Haemocytometer.

Turbidimetri merupakan metode untuk menghitung jumlah bakteri dalam suatu larutan menggunakan spektrofotometer. Cahaya yang diserap oleh bakteri sebanding dengan volume total sel, ketika jumlah sel mikroorganisme bertambah, maka akan terjadi peningkatan kekeruhan dalam biakan. Semakin pekat suspensi biakan bakteri, maka semakin besar intensitas sinar yang diabsorbsi, sehingga intensitas sinar yang diteruskan semakin kecil. Kelebihan menggunakan metode ini yaitu nilai absorbansi yang dihasilkan lebih akurat, dibandingkan dengan perhitungan secara langsung (Yuliar, 2008).

4.4. Pengaruh MSG Terhadap Ukuran Sel Pengukuran diameter sel dilakukan pada jam ke-16 masa inkubasi, karena dari kurva pertumbuhan (Gambar 4.1) pada jam tersebut sel masuk fase eksponensial. Menurut Hogg (2005), fase eksponensial merupakan fase pertumbuhan mikroorganisme

48

dimana sel-sel baru terbentuk dengan laju yang konstan dan stabil. Pada fase ini terjadi pembelahan sel secara optimal. Peddie (1999) menambahkan, dalam fase eksponensial bakteri membutuhkan energi lebih tinggi untuk menunjang kebutuhan nutrisinya. Hasil pengukuran sel Bacillus PL01 dapat dilihat pada Gambar 4.3 dan sel Pseudomonas PL01 pada Gambar 4.4. Pertumbuhan bakteri didukung oleh sumber energi dan kondisi lingkungan yang sesuai. Faktor yang mempengaruhi penambahan ukuran sel yaitu ketersediaan nutrisi. Hal ini penting bagi pertumbuhan sel bakteri, dimana selama masa pertumbuhannya sel mikroorganisme membutuhkan sumber C (Canbolat, 2006). Selain itu faktor lainnya adalah ketersediaan oksigen sebagai elektron aseptor terakhir dalam proses respirasi untuk menghasilkan energi bagi pertumbuhannya (Bezkorovainy, 2001). Komponen dinding sel juga dapat memberikan pengaruh terhadap ukuran sel suatu mikroorganisme (Shewry, 2006).

0 MSG 0 MSG

0,5 MSG 0,5 MSG

49

Gambar 4.3. Ukuran Sel Bacillus PL01

1 MSG 1 MSG

1,5 MSG 1,5 MSG

2 MSG 2 MSG

LB LB

50

Dari Gambar 4.3. terlihat pengaruh MSG terhadap penambahan ukuran sel Bacillus PL01. Sel Bacillus PL01 pada 0 gr/L MSG memiliki ukuran sel paling kecil. Hal ini berkolerasi positif dengan pertumbuhan sel yang tidak optimal pada MSM tanpa MSG. Namun ketika MSM ditambahkan MSG ukuran sel Bacillus PL01 pun membesar. Pada penambahan 0,5 gr/L MSG mampu memberikan pengaruh tertinggi pada pertumbuhan sel Bacillus PL01 dengan ukuran sel mencapai 1,8µm x 1,2µm. Pada penambahan 1 gr/L MSG , 1,5 gr/L MSG , dan 2 gr/L MSG ukuran sel juga membesar, walaupun masih berada dibawah ukuran sel pada LB yang mencapai 1,8µm x 0,8µm. Ukuran sel pada medium LB tampak lebih kecil dibandingkan dengan ukuran sel pada 0,5 gr/L MSG.

0 MSG 0 MSG

0,5 MSG 0,5 MSG

51

Gambar 4.4. Ukuran Sel Pseudomonas PL01

1 MSG 1 MSG

1,5 MSG 1,5 MSG

2 MSG 2 MSG

LB LB

52

Sama halnya dengan Bacillus PL01, ukuran sel Pseudomonas PL01 meningkat dengan penambahan MSG (0,5 gr/L MSG, 1 gr/L MSG, 1,5 gr/L MSG, 2 gr/L MSG) . Pada konsentrasi 2 gr/L MSG, sel Pseudomonas PL01 mencapai ukuran tertinggi yaitu 2,4µm x 1,1µm, walaupun masih dibawah ukuran sel di medium LB yang mencapai 2,2µm x 1,4µm.

Pada Gambar 4.4. dapat dilihat juga bahwa sel-sel Pseudomonas PL01 membentuk rantai panjang. Hal ini mungkin sebagai indikasi awal bahwa penambahan MSG dapat menstimulus pembentukan formasi rantai untuk Pseudomonas PL01. Formasi rantai ini juga berpengaruh pada serapan nilai OD. Menurut Jawetz (2004), jika sel membentuk rantai maka nilai serapan absorbansi dapat menjadi semakin kecil, bila dibandingkan dengan sel bentuk tunggal. Adanya fenomena pembentukan formasi rantai ini maka pembacaan absorbansi pertumbuhan sel Pseudomonas PL01 pada Gambar 4.1.B perlu diuji lebih lanjut karena ada kemungkinan nilai absorbansi pada MSG lebih tinggi dibanding pada kontrol LB. Sedangkan untuk jarak kurva antar perlakuan diasumsikan masih memiliki jarak yang dekat karena adanya pengaruh dinding sel.

65

LAMPIRAN

Lampiran 1. Komposisi medium

Komposisi medium NA dalam g/L Komposisi g/L Pepton Ekstrak daging Agar

5 3 15

pH akhir medium 7, medium diautoklaf selama 15 menit dengan suhu 1210C dan 1,5 atm, warna akhir medium setelah diautoklaf adalah kuning bening

Komposisi medium NB dalam g/L Komposisi g/L Pepton Ekstrak daging

5 3

pH akhir medium 7, medium diautoklaf selama 15 menit dengan suhu 1210C dan 1,5 atm, warna akhir medium setelah diautoklaf adalah kuning bening

Komposisi medium MSM dalam g/L Komposisi g/L MgSO4 CaCl2 KH2PO4 K2HPO4 NH4NO3 FeCl2

0,2 0.02 1 1 1 0,05

pH akhir medium 7, medium diautoklaf selama 15 menit dengan suhu 1210C dan 1,5 atm, warna akhir medium setelah diautoklaf adalah putih hingga kuning

66

Komposisi medium Tioglikolat cair dalam g/L Komposisi g/L

Pepton Ekstrak yeast

Dekstrosa L-sistein

Asam tioglikolat Sodium klorida

Resazurin Agar

15 5 5

0,75 0,5 2,5

0,001 0,75

pH akhir medium 7,1, medium diautoklaf selama 15 menit dengan suhu 1210C dan 1,5 atm, warna akhir medium setelah diautoklaf adalah putih hingga kuning Komposisi medium TSIA dalam g/L

Komposisi g/L Beef extract Yeast extract

Peptone Peptose-peptone

Lactose Saccharose Dextrose

Ferrous sulfate Sodium chloride

Sodium thiosulfate Phenol red

Agar

3 3 15 5 10 10 1

0,2 5

0,3 0,024

12 pH akhir medium 7,4, medium diautoklaf selama 15 menit dengan suhu 1210C dan 1,5 atm, warna akhir medium setelah diautoklaf adalah merah kecoklatan

67

Komposisi medium Lactose Broth (LB) dalam g/L

pH akhir medium 7, medium diautoklaf selama 15 menit dengan suhu 1210C dan 1,5 atm, warna akhir medium setelah diautoklaf adalah kuning bening

Komposisi g/L Pepton

Ekstrak daging Laktosa

5 3 5

68

Lampiran 2. Diagram alir penelitian

Op

Pemurnian isolat

Bakteri diinokulasikan

ke NA

Uji rekonfirmasi

Bacillus sp. Pseudomonas sp.

Basil

Gram

Katalase +

Aerob obligat

Motil

Ada

endospora

Basil

Gram

Katalase +

Aerob obligat

Motil

Tidak ada

endospora

Pembuatan starter

Pembuatan Starter

1 ose bakteri

diinokulasikan ke 10

ml NB

Diambil 5 ml

diinokulasikan ke 45

ml NB baru

Diambil 15 ml

diinokulasikan ke

135 ml NB baru

Dibuat starter

sebanyak 35 ml dari

total medium 350

ml pada tiap

konsentrasi MSG

69

Optimasi Kurva

MSM + Starter

Ditambahkan MSG 2

g/L dan MSG 1gr/L

Optimasi

Pengukuran Kurva

pada 3 interval

waktu pada MSG

2gr/L dan kultur 4

jam pada MSG

1gr/L

Diukur OD panjang

gelombang 600nm

Hasil

Dilakukan 2 kali

ulangan pada tiap

kultur interval

waktu

Dibuat kurva

pertumbuhan

hasil

pengukuran OD

Pengukuran Kurva

MSM + Starter

Ditambahkan MSG tiap

konsentrasi

Pengukuran Kurva

selama 48 jam

setiap 1 jam sekali

Diukur OD dan

Haemocytometer

Dilakukan 3 kali

ulangan pada tiap

konsentrasi MSG

Analisis Data

menggunakan

ANOVA Tukey dan

Dibuat Rancangan

Penelitian

Dibuat kurva

pertumbuhan

hasil pengukuran

OD dan

Haemocytometer

70

1-2 tetes inokulum

diletakkan pada

kaca objek

Difiksai dan dilakukan

pewarnaan sederhana

Dilakukan pengamatan

menggunakan mikroskop

Opti Lab

Diukur Panjang Sel

dan Lebar Sel Tiap

Perlakuan

Konsentrasi MSG

Pengukuran Diameter Sel

Lampiran 3. Korelasi Kurva OD dan Jumlah Sel

OD

Jum

lah

Sel

Jumlah Sel OD

Jumlah Sel OD

Jumlah Sel OD

Jumlah Sel OD

Jumlah Sel OD

Jumlah Sel OD

Jumlah Sel OD

Jumlah Sel OD

Jumlah Sel OD

Jumlah Sel OD

Jumlah Sel OD

Bacillus PL01 Konsentrasi 0 MSG

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.152 0.172 0.176 0.182 0.230 0.240 0.258 0.250 0.246 0.316 0.306 0.306 0.260 0.144 0.156 0.174 0.178 0.228 0.238 0.236 0.254 0.244 0.316 0.304 0.306 0.258

kultur 2

0.176 0.19 0.184 0.174 0.198 0.262 0.234 0.28 0.274 0.264 0.272 0.252 0.296 0.154 0.174 0.172 0.174 0.192 0.216 0.238 0.280 0.210 0.262 0.286 0.284 0.314

kutur 3

0.176 0.178 0.15 0.166 0.214 0.226 0.218 0.264 0.29 0.306 0.266 0.266 0.328 0.152 0.17 0.198 0.208 0.212 0.212 0.246 0.208 0.29 0.244 0.242 0.254 0.304

rata2 0.159 0.173 0.176 0.180 0.212 0.232 0.238 0.256 0.259 0.285 0.279 0.278 0.293

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.340 0.304 0.370 0.358 0.392 0.360 0.484 0.328 0.272 0.260 0.236 0.432 0.400 0.276 0.304 0.366 0.368 0.39 0.36 0.37 0.328 0.27 0.28 0.306 0.276 0.242 0.316 0.384 0.358 0.366 0.39 0.34 0.364 0.37 0.342 0.278 0.246 0.278 0.24 0.318 0.336 0.338 0.420 0.406 0.446 0.362 0.370 0.292 0.380 0.280 0.538 0.302 0.322 0.34 0.352 0.324 0.394 0.388 0.362 0.316 0.328 0.428 0.288 0.476 0.434 0.348 0.336 0.322 0.358 0.39 0.378 0.414 0.366 0.326 0.228 0.406 0.304 0.434 0.320 0.334 0.351 0.366 0.394 0.379 0.393 0.346 0.305 0.309 0.294 0.384 0.342

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.286 0.378 0.456 0.198 0.356 0.308 0.330 0.346 0.352 0.420 0.384 0.382 0.546 0.52 0.29 0.364 0.234 0.338 0.302 0.434 0.358 0.392 0.444 0.46 0.47 0.548 0.348 0.46 0.432 0.234 0.53 0.302 0.46 0.418 0.41 0.488 0.404 0.456 0.474 0.518 0.428 0.508 0.222 0.300 0.426 0.460 0.414 0.400 0.488 0.410 0.458 0.490 0.558 0.382 0.464 0.272 0.416 0.34 0.326 0.434 0.406 0.414 0.412 0.442 0.46 0.528 0.414 0.358 0.256 0.414 0.338 0.436 0.44 0.41 0.414 0.412 0.544 0.474 0.460 0.392 0.430 0.236 0.392 0.336 0.408 0.402 0.395 0.445 0.414 0.459 0.499

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 0.456 0.438 0.362 0.494 0.382 0.446 0.442 0.450 0.466 0.424 0.484 0.45 0.444 0.492 0.53 0.514 0.418 0.45 0.506 0.418 0.484 0.46 0.424 0.422 0.46 0.506 0.424 0.528 0.492 0.418 0.392 0.458 0.328 0.378 0.448 0.400 0.424 0.470 0.492 0.486 0.496 0.474 0.462 0.414 0.47 0.43 0.4 0.436 0.476 0.484 0.586 0.542 0.37 0.486 0.49 0.442 0.386 0.446 0.528 0.466 0.483 0.470 0.398 0.448 0.463 0.456 0.416 0.463 0.493 0.449

Bacillus PL01 Konsentrasi 0.5 MSG

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.326 0.390 0.482 0.508 0.668 0.628 0.674 0.600 0.684 0.824 0.864 0.834 0.890 0.326 0.392 0.482 0.508 0.666 0.628 0.682 0.7 0.684 0.822 0.858 0.722 0.848

kultur 2

0.282 0.34 0.436 0.586 0.69 0.724 0.516 0.678 0.694 0.786 0.714 0.9 0.792 0.268 0.304 0.448 0.452 0.562 0.604 0.584 0.650 0.778 0.854 0.818 0.900 0.846

kutur 3

0.246 0.324 0.44 0.508 0.6 0.792 0.658 0.634 0.814 0.866 0.808 0.966 0.802 0.276 0.326 0.49 0.508 0.6 0.794 0.632 0.654 0.802 0.85 0.916 0.968 0.802

rata2 0.287 0.346 0.463 0.512 0.631 0.695 0.624 0.653 0.743 0.834 0.830 0.882 0.830

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.866 0.732 0.880 0.944 0.692 0.912 0.786 0.874 0.826 0.862 0.762 1.034 1.006 0.866 0.898 0.88 0.944 0.832 0.91 0.754 0.826 0.828 0.898 0.764 1.036 0.98 0.766 0.896 0.832 0.834 0.876 0.892 0.946 0.922 0.94 0.832 0.796 1.162 1.018 0.800 0.894 0.910 0.834 0.876 0.862 0.946 0.924 0.884 0.832 0.744 1.082 1.060 0.888 0.88 0.852 0.842 0.9 0.804 0.822 0.862 0.828 1.026 0.926 1.162 0.922 0.888 0.88 0.684 0.842 0.902 0.932 0.822 0.862 0.83 1.024 0.926 1.162 0.924 0.846 0.863 0.840 0.873 0.846 0.885 0.846 0.878 0.856 0.912 0.820 1.106 0.985

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.996 1.002 0.978 0.954 1.014 1.242 1.002 1.056 1.092 1.002 1.046 0.972 1.082 0.994 1.004 0.976 0.956 1.02 1.242 1.002 1.058 1.11 1.002 1.05 0.974 1.08 1.016 0.984 0.964 0.882 1.072 1.178 0.998 1.09 1.142 1 1.088 1.062 1.13 0.996 1.038 1.012 0.888 1.018 1.190 0.998 1.076 1.138 1.000 1.068 1.038 1.132 0.892 1.012 0.86 1.004 1.058 1.062 0.968 1.042 1.064 1.074 1.054 0.946 0.972 0.892 1.018 0.856 1.006 1.056 1.062 0.97 1.052 1.07 1.118 1.038 0.948 1.014 0.964 1.010 0.941 0.948 1.040 1.163 0.990 1.062 1.103 1.033 1.057 0.990 1.068

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 1.216 1.188 1.072 1.100 0.914 0.902 0.900 0.980 1.222 1.160 1.218 1.188 1.074 1.1 0.914 0.9 0.9 0.978 1.224 1.158 1.196 1.192 1.028 1.066 0.872 1 1.108 1.346 1.32 1.032 1.094 1.194 1.064 0.946 0.940 1.096 0.970 0.948 1.318 1.204 0.914 0.982 0.902 1.048 1.148 0.916 1.118 1.108 1.216 1.192 0.884 0.982 0.904 1.05 1.15 0.914 1.116 1.108 1.218 1.192 1.087 1.121 1.007 1.052 0.990 0.955 1.019 1.078 1.253 1.156

Bacillus PL01 Konsentrasi 1 MSG

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.102 0.218 0.304 0.266 0.338 0.360 0.376 0.348 0.306 0.308 0.474 0.454 0.446 0.144 0.232 0.312 0.288 0.272 0.38 0.348 0.266 0.266 0.362 0.44 0.426 0.448

kultur 2

0.132 0.232 0.302 0.296 0.358 0.38 0.348 0.346 0.308 0.362 0.44 0.43 0.446 0.216 0.172 0.302 0.294 0.314 0.410 0.392 0.396 0.334 0.344 0.416 0.388 0.410

kutur 3

0.158 0.23 0.274 0.324 0.298 0.336 0.37 0.376 0.27 0.326 0.418 0.438 0.518 0.17 0.228 0.238 0.25 0.378 0.382 0.37 0.376 0.268 0.424 0.456 0.472 0.516

rata2 0.154 0.219 0.289 0.286 0.326 0.375 0.367 0.351 0.292 0.354 0.441 0.435 0.464

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.428 0.382 0.348 0.402 0.504 0.386 0.498 0.484 0.494 0.568 0.748 0.594 0.498 0.536 0.38 0.336 0.398 0.526 0.522 0.478 0.602 0.588 0.51 0.674 0.46 0.6 0.536 0.38 0.338 0.394 0.444 0.524 0.566 0.446 0.472 0.51 0.672 0.48 0.602 0.440 0.302 0.260 0.370 0.470 0.520 0.514 0.444 0.422 0.444 0.588 0.480 0.438 0.47 0.35 0.308 0.388 0.488 0.472 0.518 0.624 0.534 0.54 0.496 0.594 0.478 0.488 0.4 0.31 0.388 0.49 0.456 0.518 0.6 0.536 0.54 0.498 0.47 0.478 0.483 0.366 0.317 0.390 0.487 0.480 0.515 0.533 0.508 0.519 0.613 0.513 0.516

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.658 0.766 0.684 0.738 0.724 0.616 0.790 0.632 0.728 0.694 0.630 0.608 0.652 0.676 0.774 0.782 0.834 0.786 0.608 0.822 0.822 0.696 0.746 0.714 0.754 0.608 0.672 0.668 0.796 0.834 0.732 0.608 0.822 0.748 0.698 0.742 0.638 0.756 0.604 0.634 0.668 0.680 0.704 0.792 0.650 0.770 0.666 0.626 0.696 0.794 0.766 0.510 0.602 0.744 0.596 0.778 0.818 0.536 0.66 0.656 0.576 0.648 0.734 0.708 0.53 0.604 0.694 0.702 0.744 0.742 0.566 0.758 0.726 0.594 0.844 0.72 0.718 0.566 0.641 0.719 0.707 0.772 0.766 0.597 0.770 0.708 0.653 0.728 0.705 0.718 0.578

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 0.454 0.666 0.632 0.400 0.306 0.638 0.604 0.660 0.560 0.638 0.522 0.644 0.638 0.38 0.256 0.68 0.602 0.716 0.652 0.57 0.524 0.642 0.596 0.382 0.256 0.566 0.602 0.714 0.624 0.57 0.566 0.590 0.602 0.358 0.190 0.606 0.614 0.658 0.546 0.554 0.582 0.596 0.516 0.372 0.296 0.546 0.594 0.622 0.55 0.624 0.584 0.6 0.604 0.254 0.212 0.746 0.63 0.622 0.658 0.626 0.539 0.623 0.598 0.358 0.253 0.630 0.608 0.665 0.598 0.597

Bacillus PL01 Konsentrasi 1,5 MSG jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.164 0.230 0.280 0.312 0.376 0.354 0.286 0.444 0.554 0.552 0.522 0.606 0.504 0.146 0.24 0.262 0.308 0.296 0.398 0.288 0.36 0.558 0.472 0.544 0.526 0.556

kultur 2

0.14 0.242 0.236 0.358 0.396 0.478 0.382 0.34 0.476 0.528 0.53 0.578 0.532 0.192 0.232 0.234 0.358 0.458 0.380 0.390 0.340 0.476 0.528 0.620 0.696 0.474

kutur 3

0.184 0.244 0.28 0.356 0.44 0.336 0.21 0.402 0.608 0.58 0.648 0.496 0.602 0.186 0.246 0.258 0.356 0.438 0.31 0.404 0.276 0.608 0.518 0.646 0.538 0.602

rata2 0.169 0.239 0.258 0.341 0.401 0.376 0.327 0.360 0.547 0.530 0.585 0.573 0.545

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.568 0.556 0.686 0.650 0.542 0.680 0.720 0.698 0.706 0.718 0.740 0.652 0.608 0.592 0.634 0.654 0.652 0.632 0.626 0.652 0.774 0.776 0.764 0.742 0.722 0.612 0.626 0.632 0.654 0.698 0.66 0.628 0.772 0.772 0.736 0.764 0.658 0.724 0.614 0.558 0.584 0.646 0.686 0.616 0.638 0.740 0.792 0.720 0.716 0.658 0.600 0.642 0.616 0.74 0.642 0.66 0.654 0.672 0.708 0.758 0.716 0.754 0.692 0.726 0.542 0.616 0.75 0.642 0.658 0.614 0.672 0.762 0.756 0.714 0.752 0.668 0.726 0.54 0.596 0.649 0.654 0.667 0.620 0.653 0.726 0.758 0.728 0.745 0.693 0.692 0.593

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.822 0.768 0.758 0.688 0.758 0.698 0.778 0.980 1.004 0.730 0.954 0.866 0.796 0.83 0.784 0.718 0.688 0.72 0.684 0.78 0.916 1.1 0.828 0.702 0.888 0.742 0.83 0.784 0.72 0.82 0.718 0.682 0.778 0.998 1.068 0.828 0.876 0.798 0.802 0.596 0.824 0.858 0.784 0.748 0.744 0.778 0.988 1.068 0.998 0.876 0.830 0.804 0.658 0.648 0.59 0.824 0.584 0.72 0.772 0.926 0.91 0.91 0.726 0.812 0.708 0.658 0.7 0.7 0.778 0.678 0.81 0.804 0.922 0.992 0.986 0.888 0.896 0.702 0.732 0.751 0.724 0.764 0.701 0.723 0.782 0.955 1.024 0.880 0.837 0.848 0.759

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 0.712 0.702 0.748 1.000 1.036 0.990 0.852 0.880 0.766 0.798 0.628 0.812 0.746 1.06 0.852 0.828 1.034 0.87 0.93 0.92 0.7 0.784 0.63 1.04 1.034 0.826 0.838 0.798 0.954 0.94

0.820 0.784 0.718 1.058 0.808 0.864 1.036 0.892 0.820 0.940 0.716 0.818 0.768 1.094 0.856 0.91 0.916 0.932 0.974 0.894 0.748 0.784 0.762 0.914 0.864 0.89 0.956 0.93 0.838 0.908 0.721 0.781 0.729 1.028 0.908 0.885 0.939 0.884 0.880 0.900

Bacillus PL01 Konsentrasi 2 MSG

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.242 0.218 0.384 0.346 0.288 0.414 0.426 0.504 0.520 0.524 0.480 0.532 0.480 0.23 0.226 0.34 0.3 0.33 0.426 0.434 0.434 0.436 0.534 0.52 0.528 0.506

kultur 2

0.244 0.304 0.298 0.316 0.292 0.43 0.398 0.436 0.51 0.464 0.524 0.468 0.506 0.310 0.264 0.300 0.326 0.304 0.336 0.504 0.418 0.510 0.524 0.554 0.610 0.552

kutur 3

0.282 0.308 0.248 0.292 0.394 0.426 0.556 0.5 0.486 0.506 0.494 0.492 0.536 0.28 0.306 0.308 0.312 0.354 0.428 0.49 0.51 0.474 0.506 0.582 0.582 0.58

rata2 0.265 0.271 0.313 0.315 0.327 0.410 0.468 0.467 0.489 0.510 0.526 0.535 0.527

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.482 0.622 0.476 0.598 0.538 0.434 0.598 0.560 0.494 0.408 0.548 0.602 0.598 0.588 0.622 0.454 0.538 0.48 0.508 0.576 0.53 0.508 0.364 0.462 0.574 0.594 0.586 0.44 0.556 0.538 0.482 0.478 0.62 0.478 0.508 0.468 0.564 0.59 0.572 0.538 0.450 0.476 0.554 0.510 0.496 0.622 0.578 0.598 0.434 0.584 0.590 0.622 0.612 0.518 0.482 0.616 0.604 0.442 0.562 0.544 0.418 0.426 0.58 0.626 0.622 0.492 0.47 0.418 0.616 0.612 0.44 0.662 0.552 0.416 0.412 0.494 0.52 0.594 0.550 0.520 0.477 0.577 0.538 0.466 0.607 0.540 0.490 0.419 0.539 0.584 0.600

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.618 0.618 0.618 0.672 0.682 0.612 0.644 0.690 0.634 0.596 0.578 0.600 0.604 0.716 0.514 0.74 0.788 0.654 0.636 0.734 0.726 0.72 0.626 0.526 0.586 0.57 0.636 0.782 0.612 0.788 0.656 0.798 0.624 0.616 0.672 0.594 0.526 0.586 0.564 0.672 0.720 0.708 0.734 0.722 0.670 0.518 0.648 0.674 0.606 0.600 0.564 0.564 0.66 0.732 0.614 0.66 0.734 0.616 0.584 0.622 0.59 0.664 0.556 0.418 0.5 0.514 0.734 0.632 0.664 0.732 0.634 0.588 0.688 0.664 0.632 0.598 0.538 0.51 0.636 0.683 0.654 0.718 0.697 0.661 0.615 0.665 0.659 0.620 0.564 0.549 0.552

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 0.520 0.560 0.506 0.532 0.558 0.518 0.498 0.542 0.532 0.600 0.498 0.586 0.59 0.506 0.492 0.588 0.598 0.63 0.53 0.538 0.49 0.534 0.514 0.506 0.578 0.588 0.646 0.63 0.584 0.54 0.680 0.630 0.514 0.508 0.598 0.508 0.534 0.632 0.540 0.606 0.62 0.5 0.55 0.534 0.592 0.478 0.558 0.51 0.586 0.532 0.544 0.6 0.538 0.532 0.512 0.532 0.528 0.51 0.51 0.53 0.559 0.568 0.535 0.520 0.555 0.535 0.560 0.576 0.547 0.558

Bacillus PL01 Medium LB

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.308 0.362 0.354 0.390 0.466 0.478 0.466 0.594 0.666 0.718 0.698 0.752 0.544 0.308 0.362 0.352 0.388 0.474 0.476 0.464 0.574 0.662 0.718 0.696 0.75 0.542

kultur 2

0.326 0.31 0.326 0.402 0.472 0.528 0.484 0.548 0.55 0.714 0.724 0.802 0.688 0.328 0.316 0.346 0.410 0.470 0.446 0.514 0.534 0.724 0.786 0.742 0.794 0.682

kutur 3

0.308 0.336 0.38 0.356 0.48 0.486 0.47 0.5 0.564 0.482 0.614 0.764 0.608 0.306 0.334 0.38 0.354 0.478 0.484 0.468 0.502 0.562 0.478 0.61 0.762 0.618

rata2 0.314 0.337 0.356 0.383 0.473 0.483 0.478 0.542 0.621 0.649 0.681 0.771 0.614

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.678 0.674 0.770 0.768 0.920 0.800 0.882 0.768 0.950 0.984 1.070 0.868 0.888 0.674 0.728 0.766 0.764 0.784 0.798 0.876 0.766 0.944 0.978 1.06 0.862 0.882 0.624 0.726 0.776 0.868 0.754 0.796 0.878 0.782 0.886 0.706 0.872 0.914 0.9 0.638 0.722 0.590 0.744 0.812 0.812 0.878 0.758 1.054 0.750 0.860 0.900 0.908 0.618 0.778 0.672 0.786 0.744 0.862 0.914 0.782 0.798 0.73 0.95 0.912 0.87 0.616 0.784 0.668 0.782 0.742 0.854 0.884 0.778 0.792 0.722 0.956 0.906 0.864 0.641 0.735 0.707 0.785 0.793 0.820 0.885 0.772 0.904 0.812 0.961 0.894 0.885

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.964 0.940 1.032 0.916 0.836 0.834 0.850 0.868 0.860 0.984 0.904 1.084 0.942 0.956 0.934 1.038 0.912 0.772 0.832 0.844 0.862 0.854 0.98 0.894 1.076 0.938 0.964 0.854 0.99 0.946 0.908 0.984 0.862 0.952 1.008 0.922 1.018 0.984 1.02 0.958 0.922 0.950 0.898 0.970 0.980 0.824 0.890 0.866 0.812 0.942 0.890 0.888 0.888 0.93 0.908 0.89 1.032 0.858 0.744 0.846 1.108 1.046 0.94 0.898 1.028 0.884 0.924 0.902 0.884 1.028 0.846 0.74 0.838 1.102 1.04 0.934 0.89 1.024 0.936 0.917 0.970 0.908 0.924 0.889 0.811 0.876 0.966 0.964 0.939 0.970 0.973

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 0.794 0.916 0.910 0.982 0.912 1.040 1.062 0.984 1.012 0.638 0.672 0.91 0.896 0.974 0.906 1.03 1.054 0.99 1.006 0.634 0.76 0.988 1.022 0.874 1.018 1.002 1.09 0.956 1.056 1.076 0.790 1.014 1.020 0.866 0.846 0.878 1.032 0.950 1.006 0.964 0.738 0.95 1.036 1.022 1.032 1.006 0.916 0.926 1.03 0.83 0.734 0.948 1.034 1.014 1.026 0.998 0.912 0.918 1.024 0.828 0.748 0.954 0.986 0.955 0.957 0.992 1.011 0.954 1.022 0.828

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.418 0.476 0.364 0.364 0.616 0.650 0.616 0.572 0.606 0.506 0.580 0.582 0.376 0.43 0.334 0.364 0.32 0.49 0.54 0.552 0.522 0.598 0.546 0.586 0.586 0.322 0.45 0.336 0.582 0.542 0.49 0.524 0.65 0.606 0.672 0.544 0.68 0.582 0.324 0.394 0.304 0.636 0.538 0.604 0.602 0.572 0.652 0.656 0.664 0.576 0.620 0.558 0.356 0.294 0.53 0.424 0.568 0.584 0.648 0.646 0.754 0.622 0.594 0.636 0.422 0.354 0.294 0.578 0.492 0.44 0.54 0.548 0.604 0.58 0.624 0.582 0.608 0.422 0.400 0.340 0.509 0.447 0.535 0.573 0.598 0.600 0.644 0.584 0.600 0.602 0.404

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.584 0.458 0.630 0.570 0.436 0.592 0.658 0.630 0.668 0.690 0.700 0.734 0.624 0.45 0.638 0.496 0.57 0.436 0.594 0.658 0.576 0.496 0.546 0.694 0.734 0.624 0.506 0.608 0.496 0.55 0.628 0.638 0.648 0.452 0.592 0.614 0.742 0.682 0.638 0.572 0.606 0.496 0.530 0.514 0.638 0.646 0.610 0.506 0.538 0.598 0.622 0.632 0.45 0.458 0.378 0.56 0.422 0.574 0.624 0.576 0.596 0.666 0.63 0.618 0.636 0.45 0.502 0.504 0.486 0.574 0.566 0.624 0.556 0.506 0.65 0.698 0.618 0.63 0.502 0.545 0.500 0.544 0.502 0.600 0.643 0.567 0.561 0.617 0.677 0.668 0.631

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 0.680 0.736 0.704 0.588 0.628 0.614 0.662 0.630 0.616 0.632 0.678 0.632 0.758 0.686 0.562 0.618 0.606 0.634 0.62 0.636 0.594 0.578 0.622 0.614 0.5 0.706 0.478 0.562 0.632 0.618 0.602 0.716 0.744 0.686 0.644 0.710 0.484 0.572 0.638 0.618 0.678 0.674 0.672 0.582 0.65 0.638 0.654 0.62 0.606 0.562 0.678 0.702 0.672 0.592 0.65 0.628 0.616 0.786 0.604 0.564 0.652 0.673 0.695 0.625 0.606 0.652 0.583 0.634 0.619 0.605

Pseudomonas PL01 Konsentrasi 0 MSG

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.158 0.176 0.202 0.268 0.308 0.366 0.418 0.476 0.352 0.428 0.376 0.376 0.410 0.142 0.158 0.214 0.27 0.284 0.406 0.396 0.458 0.372 0.432 0.474 0.474 0.458

kultur 2

0.138 0.146 0.214 0.238 0.32 0.332 0.398 0.422 0.352 0.432 0.324 0.324 0.456 0.138 0.162 0.212 0.238 0.284 0.332 0.396 0.402 0.352 0.366 0.322 0.322 0.406

kutur 3

0.178 0.16 0.192 0.24 0.254 0.394 0.476 0.402 0.266 0.392 0.458 0.458 0.406 0.178 0.15 0.192 0.24 0.344 0.178 0.408 0.454 0.268 0.392 0.32 0.32 0.324

rata2 0.155 0.159 0.204 0.249 0.299 0.335 0.415 0.436 0.327 0.407 0.379 0.379 0.410

Pseudomonas PL01 Konsentrasi 0,5 MSG

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.264 0.210 0.340 0.350 0.434 0.576 0.412 0.572 0.518 0.550 0.266 0.436 0.240 0.254 0.21 0.34 0.35 0.436 0.586 0.264 0.572 0.516 0.576 0.258 0.382 0.24

kultur 2

0.252 0.254 0.368 0.38 0.446 0.442 0.556 0.542 0.548 0.574 0.258 0.38 0.468 0.224 0.250 0.368 0.406 0.344 0.480 0.556 0.594 0.548 0.464 0.360 0.416 0.308

kutur 3

0.124 0.288 0.332 0.386 0.428 0.498 0.446 0.584 0.382 0.534 0.242 0.358 0.506 0.124 0.29 0.318 0.388 0.43 0.5 0.446 0.584 0.382 0.532 0.25 0.358 0.504

rata2 0.207 0.250 0.344 0.377 0.420 0.514 0.447 0.575 0.482 0.538 0.272 0.388 0.378

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.302 0.804 0.640 0.520 0.890 0.700 0.748 0.626 0.728 0.770 0.776 0.642 0.798 0.534 0.802 0.642 0.52 0.888 0.702 0.746 0.626 0.73 0.77 0.778 0.64 0.796 0.538 0.478 0.498 0.584 0.72 0.728 0.682 0.72 0.704 0.62 0.752 0.468 0.488 0.496 0.480 0.470 0.640 0.718 0.726 0.586 0.808 0.768 0.706 0.688 0.692 0.698 0.622 0.38 0.362 0.67 0.888 0.672 0.742 0.76 0.64 0.552 0.712 0.76 0.848 0.516 0.38 0.362 0.674 0.766 0.672 0.742 0.76 0.666 0.716 0.652 0.726 0.702 0.501 0.554 0.496 0.601 0.812 0.700 0.708 0.717 0.706 0.689 0.726 0.655 0.722

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.716 0.840 0.720 0.982 1.102 0.840 0.860 0.900 0.778 0.934 0.856 0.684 0.696 0.766 0.82 0.72 0.982 1.1 0.84 0.858 0.898 0.858 0.932 0.858 0.684 0.802 0.584 0.632 0.526 0.874 0.916 0.962 0.732 0.902 0.858 0.838 0.558 0.658 0.806 0.584 0.628 0.520 0.858 0.814 0.902 0.730 1.014 0.868 0.742 0.810 0.806 0.656 0.684 0.854 0.6 0.938 0.952 1.052 1.01 0.95 0.996 0.676 0.69 0.922 0.848 0.678 0.722 0.6 1.038 0.962 1.05 1.008 0.95 0.974 0.674 0.73 0.732 0.85 0.669 0.749 0.614 0.945 0.974 0.941 0.866 0.936 0.889 0.799 0.750 0.748 0.776

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 0.670 0.962 0.952 0.846 1.090 0.916 1.060 0.986 0.948 1.104 0.67 0.962 0.952 0.846 1.088 0.916 1.06 0.986 0.952 1.09 0.688 1.058 0.842 0.944 0.762 0.982 0.992 1.06 0.95 0.904 0.796 0.902 0.824 0.842 1.030 1.046 0.850 0.978 0.992 1.070 0.588 0.92 0.81 0.974 0.85 1.042 1.106 0.988 0.954 0.964 0.588 0.92 0.808 0.976 0.968 0.962 1.122 0.988 0.952 0.808 0.667 0.954 0.865 0.905 0.965 0.977 1.032 0.998 0.958 0.990

Pseudomonas PL01 Konsentrasi 1 MSG

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.336 0.202 0.254 0.428 0.360 0.426 0.532 0.662 0.524 0.590 0.628 0.566 0.536

0.334 0.202 0.254 0.428 0.38 0.428 0.534 0.66 0.524 0.574 0.624 0.558 0.534

kultur 2

0.3 0.238 0.324 0.336 0.38 0.466 0.54 0.632 0.572 0.596 0.574 0.626 0.572

0.318 0.234 0.292 0.364 0.314 0.366 0.542 0.586 0.632 0.608 0.578 0.558 0.568

kutur 3

0.326 0.258 0.278 0.328 0.34 0.356 0.558 0.568 0.572 0.514 0.584 0.68 0.588

0.326 0.258 0.278 0.4 0.324 0.358 0.558 0.568 0.572 0.514 0.586 0.682 0.594

rata2 0.323 0.232 0.280 0.381 0.350 0.400 0.544 0.613 0.566 0.566 0.596 0.612 0.565

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.554 0.530 0.562 0.500 0.554 0.538 0.518 0.648 0.556 0.624 0.510 0.612 0.514 0.584 0.528 0.544 0.5 0.524 0.54 0.52 0.65 0.604 0.624 0.494 0.612 0.514 0.622 0.524 0.534 0.498 0.516 0.534 0.554 0.502 0.428 0.54 0.468 0.488 0.496 0.556 0.522 0.594 0.498 0.554 0.534 0.582 0.566 0.426 0.708 0.510 0.518 0.498 0.562 0.508 0.506 0.562 0.478 0.45 0.488 0.65 0.486 0.544 0.494 0.466 0.526 0.562 0.506 0.506 0.56 0.48 0.436 0.486 0.65 0.484 0.542 0.494 0.464 0.528 0.573 0.520 0.541 0.520 0.518 0.505 0.525 0.611 0.497 0.597 0.495 0.527 0.513

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.578 0.586 0.716 0.748 0.602 0.698 0.760 0.720 0.850 0.908 0.994 0.976 0.832 0.732 0.584 0.716 0.75 0.602 0.7 0.762 0.72 0.85 0.91 0.988 0.886 0.834 0.646 0.764 0.648 0.668 0.62 0.68 0.712 0.634 0.784 0.79 1.016 0.868 0.644 0.688 0.686 0.610 0.670 0.620 0.740 0.784 0.696 0.782 0.794 1.080 0.974 0.794 0.69 0.786 0.784 0.72 0.716 0.678 0.734 0.78 0.872 0.87 0.828 0.888 0.996 0.69 0.786 0.782 0.722 0.76 0.682 0.734 0.782 0.872 0.874 0.832 0.894 0.954 0.671 0.699 0.709 0.713 0.653 0.696 0.748 0.722 0.835 0.858 0.956 0.914 0.842

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 1.054 1.004 1.068 0.858 0.794 0.952 0.808 1.004 0.826 0.856 0.938 1.002 0.97 0.856 1.024 0.952 0.808 1.004 0.824 0.854 0.838 0.912 1.06 0.978 0.908 0.856 0.834 0.836 0.858 0.928 0.912 0.986 1.010 0.852 0.860 0.858 0.974 0.952 0.924 0.880 1.004 1.054 0.924 0.928 1.062 0.914 0.91 0.792 0.84 0.78 1.006 1.052 0.924 0.928 0.788 0.912 0.912 0.782 0.842 0.782 0.959 1.002 0.993 0.900 0.906 0.907 0.874 0.895 0.852 0.847

Pseudomonas PL01 Konsentrasi 1,5 MSG

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.246 0.292 0.256 0.326 0.438 0.438 0.542 0.572 0.572 0.632 0.652 0.666 0.554 0.308 0.226 0.338 0.308 0.446 0.438 0.512 0.576 0.58 0.654 0.662 0.602 0.684

kultur 2

0.244 0.198 0.338 0.306 0.446 0.448 0.496 0.572 0.602 0.584 0.664 0.602 0.692 0.214 0.174 0.240 0.372 0.404 0.558 0.462 0.582 0.604 0.652 0.612 0.712 0.642

kutur 3

0.264 0.2 0.234 0.402 0.458 0.438 0.538 0.594 0.66 0.59 0.596 0.688 0.692 0.302 0.254 0.202 0.334 0.402 0.276 0.584 0.53 0.64 0.692 0.628 0.76 0.71

rata2 0.263 0.224 0.268 0.341 0.432 0.433 0.522 0.571 0.610 0.634 0.636 0.672 0.662

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.714 0.682 0.744 0.816 0.698 0.720 0.926 0.754 0.782 0.744 0.826 0.786 0.784 0.666 0.678 0.704 0.738 0.736 0.73 0.754 0.808 0.784 0.728 0.666 0.788 0.85 0.668 0.678 0.742 0.762 0.736 0.754 0.798 0.878 0.782 0.726 0.682 0.788 0.876 0.748 0.826 0.740 0.800 0.850 0.670 0.900 0.910 0.746 0.614 0.688 0.746 0.860 0.628 0.776 0.726 0.684 0.738 0.768 0.754 0.808 0.712 0.614 0.734 0.692 0.786 0.75 0.698 0.734 0.7 0.702 0.648 0.854 0.806 0.738 0.71 0.718 0.69 0.818 0.696 0.723 0.732 0.750 0.743 0.715 0.831 0.827 0.757 0.689 0.719 0.748 0.829

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.862 0.752 0.792 0.776 0.788 0.834 0.922 1.030 0.944 0.948 0.986 0.964 0.966 0.714 0.75 0.866 0.806 0.71 0.846 0.888 0.976 1.014 0.984 0.906 0.902 0.87 0.714 0.914 0.878 0.91 0.904 0.772 0.85 0.982 0.924 0.926 0.82 1.1 0.868 0.606 0.930 0.876 0.918 0.792 0.710 0.850 0.990 1.034 0.972 0.874 0.868 1.078 0.86 0.706 0.864 0.932 0.902 0.974 0.958 0.84 0.882 0.898 1.006 0.836 0.934 0.884 0.786 0.862 0.848 0.866 0.824 0.864 1.036 0.996 0.992 0.834 1.078 0.898 0.773 0.806 0.856 0.865 0.827 0.827 0.889 0.976 0.966 0.953 0.904 0.958 0.936

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 0.908 0.958 1.106 1.026 1.014 0.952 1.066 1.002 0.874 1.056 0.762 0.928 1.132 1.092 1.188 0.956 1.046 0.95 1.078 0.822 0.868 1.03 0.972 1.174 1.106 1.172 1.284 0.95 1.078 1.002 0.870 1.120 0.966 1.104 1.070 1.106 1.240 1.070 0.988 0.974 0.936 0.958 0.884 0.966 1.062 1.064 1.058 0.93 0.892 1.012 1.106 1.154 0.88 0.968 1.09 1.056 0.92 0.91 0.88 0.932 0.908 1.025 0.990 1.055 1.088 1.051 1.102 0.969 0.965 0.966

Pseudomonas PL01 Konsentrasi 2 MSG

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.322 0.410 0.396 0.536 0.484 0.488 0.578 0.628 0.712 0.598 0.600 0.820 0.750 0.322 0.41 0.458 0.482 0.486 0.486 0.578 0.63 0.648 0.696 0.778 0.834 0.75

kultur 2

0.326 0.372 0.378 0.438 0.586 0.558 0.56 0.564 0.642 0.794 0.72 0.834 0.778 0.290 0.366 0.394 0.462 0.504 0.562 0.568 0.542 0.668 0.690 0.798 0.716 0.798

kutur 3

0.342 0.346 0.406 0.474 0.53 0.57 0.562 0.592 0.732 0.636 0.68 0.772 0.804 0.342 0.346 0.406 0.474 0.53 0.568 0.558 0.592 0.722 0.84 0.692 0.868 0.84

rata2 0.324 0.375 0.406 0.478 0.520 0.539 0.567 0.591 0.687 0.709 0.711 0.807 0.787

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.796 0.826 0.786 0.922 0.836 0.860 0.676 0.842 0.948 0.740 0.866 0.804 0.928 0.798 0.87 0.788 0.924 0.894 0.932 0.912 0.866 0.868 0.74 0.804 0.964 0.932 0.826 0.706 0.716 0.78 0.746 0.928 0.822 0.7 0.878 0.794 0.704 0.79 0.87 0.812 0.716 0.792 0.780 0.766 0.984 0.842 0.944 0.834 0.744 0.848 0.876 0.868 0.628 0.816 0.82 0.782 0.776 0.808 0.908 0.878 0.866 0.788 0.846 0.796 0.918 0.798 0.812 0.818 0.782 0.788 0.802 0.908 0.876 0.862 0.85 0.768 0.794 0.768 0.776 0.791 0.787 0.828 0.801 0.886 0.845 0.851 0.876 0.776 0.806 0.837 0.881

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 0.904 0.874 0.940 0.922 0.882 0.986 0.928 0.954 0.966 1.022 1.064 1.022 0.908 0.944 0.894 0.86 0.86 0.89 0.958 1.118 0.874 1.034 0.968 1.046 0.946 0.972 1.022 0.954 1.034 0.834 0.934 0.93 0.974 0.862 1.02 0.874 0.968 1.05 0.894 0.864 0.956 0.928 0.926 0.932 0.924 0.976 0.976 1.054 0.750 1.046 0.892 0.848 0.78 0.806 0.86 0.868 0.838 0.808 0.924 0.888 0.884 1.022 0.978 0.86 1.006 0.88 0.93 0.878 0.94 0.972 0.876 0.93 0.886 1.014 0.86 1.04 0.856 1.008 0.899 0.902 0.917 0.892 0.908 0.914 0.975 0.907 0.995 0.916 1.024 0.938 0.939

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 0.802 0.740 0.836 0.918 0.936 0.832 1.136 0.872 1.062 0.984 0.91 0.716 0.978 0.822 0.732 0.984 0.89 1.042 0.93 1.084 0.94 0.916 0.894 0.904 0.958 1.072 1.006 1.122 1.026 1.26 0.780 0.916 0.790 1.046 1.046 1.072 1.010 0.968 1.210 1.092 0.928 0.968 0.934 0.992 0.986 0.848 0.9 1.074 1.116 1.15 0.776 0.874 0.956 0.864 0.802 1.004 0.912 1.074 1.114 0.932 0.856 0.855 0.898 0.924 0.910 0.969 0.976 1.025 1.076 1.084

Pseudomonas PL01 Konsentrasi Medium LB

jam ke

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

kultur 1

0.486 0.452 0.510 0.418 0.218 0.584 0.550 0.548 0.426 0.442 0.438 0.630 0.612 0.4 0.42 0.484 0.372 0.286 0.52 0.576 0.52 0.464 0.49 0.442 0.626 0.642

kultur 2

0.416 0.456 0.456 0.372 0.308 0.544 0.576 0.592 0.448 0.488 0.536 0.624 0.642 0.518 0.480 0.408 0.380 0.478 0.520 0.570 0.592 0.468 0.448 0.494 0.594 0.644

kutur 3

0.478 0.48 0.524 0.404 0.252 0.596 0.65 0.58 0.62 0.416 0.488 0.65 0.686 0.496 0.464 0.374 0.404 0.184 0.47 0.58 0.636 0.65 0.398 0.43 0.596 0.532

rata2 0.466 0.459 0.459 0.392 0.288 0.539 0.584 0.578 0.513 0.447 0.471 0.620 0.626

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0.630 0.512 0.532 0.822 0.880 0.894 0.828 0.852 0.792 1.038 1.190 1.194 1.108 0.632 0.442 0.494 0.768 0.92 0.822 0.826 0.902 0.776 1.268 1.216 1.206 1.162 0.616 0.442 0.542 0.766 0.884 0.822 0.864 0.842 0.774 1.1 1.216 1.202 1.168 0.764 0.620 0.534 0.856 0.922 0.876 0.840 0.774 0.786 1.294 1.186 1.222 1.328 0.656 0.614 0.5 0.94 0.914 0.91 0.87 0.894 0.694 1.25 1.25 1.208 1.138 0.61 0.512 0.566 0.788 0.89 0.904 0.868 0.902 0.906 1.202 1.3 1.25 1.134 0.651 0.524 0.528 0.823 0.902 0.871 0.849 0.861 0.788 1.192 1.226 1.214 1.173

26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 1.210 1.100 1.084 1.072 1.106 1.156 1.268 1.274 1.032 1.174 1.138 0.922 1.024 0.994 1.2 1.204 1.074 1.126 1.134 1.26 1.3 0.912 1.048 1.136 0.942 0.978 1.088 1.2 1.004 1.076 1.052 1.132 1.164 1.298 0.91 1.286 1.194 1.186 1.168 1.202 1.168 1.148 1.130 1.102 1.168 1.294 1.166 1.132 1.236 1.260 1.184 1.168 1.246 1.112 1.266 1.136 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1.242 1.048 1.25 1.23 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1.164 1.138 1.159 1.120 0.731 0.765 0.831 0.840 0.664 0.791 0.788 0.706 0.723

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 1.134 1.116 1.228 0.940 0.978 0.896 1.300 1.284 1.066 1.092 1.008 1.294 1.28 1.08 0.94 0.964 1.218 1.208 1.096 0.96 1.224 1.294 1.28 1.152 0.942 0.848 1.188 1.208 1.096 1.196 1.226 1.086 1.218 1.152 1.002 0.898 1.340 1.168 1.120 1.194

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0.765 0.798 0.834 0.721 0.644 0.601 0.841 0.811 0.730 0.740

53

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian MSG terhadap pertumbuhan isolat bakteri Bacillus

PL01 dan Pseudomonas PL01 pada MSM. Hasil yang diperoleh yaitu: - Pada Bacillus PL01 pertumbuhan tertinggi terjadi pada

konsentrasi 0,5 gr/L MSG dimana pertumbuhannya melebihi pertumbuhan dengan medium LB. Namun terjadi penurunan pertumbuhan seiring dengan peningkatan konsentrasi MSG (1 gr/L MSG, 1,5 gr/L MSG, dan 2 gr/L MSG).

- Pada Pseudomonas PL01, semakin tinggi konsentrasi MSG, maka pertumbuhan Pseudomonas PL01 tampak semakin tinggi pula. Pertumbuhan tertinggi terjadi pada konsentrasi 2 gr/L MSG, namun pertumbuhan yang tampak masih berada dibawah LB.

- Berdasarkan hasil pengukuran sel, penambahan 0,5 gr/L MSG mampu memberikan pengaruh tertinggi pada pertumbuhan sel Bacillus PL01 dengan ukuran sel mencapai 1,8µm x 1,2µm. Sedangkan pada Pseudomonas PL01 ukuran sel tertinggi terjadi pada konsentrasi 2 gr/L MSG yang mencapai 2,4µm x 1,1µm, dimana pada pengukuran sel tampak bahwa sel-sel Pseudomonas PL01 membentuk rantai panjang.

5.2. Saran

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan maka penelitian selanjutnya dapat dilakukan uji lebih lanjut terhadap pertumbuhan bakteri Pseudomonas PL01 karena ada kemungkinan nilai absorbansi pada MSG lebih tinggi dibanding pada kontrol LB dilihat dari adanya fenomena pembentukan formasi rantai pada sel-sel Pseudomonas PL01.

54

“Halaman ini sengaja dikosongkan”

55

DAFTAR PUSTAKA

Ahmed, Z., H. Banu, M. M.Rahman, F. Akhter, and M.S. Haque .2001. Microbial activity on the degradation of lignocellulosic polysaccharides. OnLine Journal of Biological Sciences. 1(10), 993-997. Almatsier, S .2006. Prinsip Dasar Ilmu Gizi, edisi ke-6. Jakarta: Gramedia Pustaka utama Ardyanto, T.D .2004. MSG dan Kesehatan: Sejarah, Efek dan Kontroversinya. Kesehatan. 16(1):1. Backman, P.A, P.M. Brannnen, and W.F. Mahaffe.1994. Plant Respon and Disease Control Following Seed Inoculation with Bacillus sp. Australia: Pruc Third Int Work PGPR South Australia. Benton, D. 2008. Micronutrient status, cognition and behavioral problems in childhood. Eur. J. Nutr. 47, 38–50. Benson. 2001. Microbiological Application. New York: Mc. Graw Hill Publisher Berber, I. 2004. Characterization of Bacillus Spesies By Numerical Analysis of Their SDS-PAGE protein Profiles. Journal of Cell and Molecular Biology 3:33-37. Berg, J.M., J.L. Tymoczko, and L. Stryer. 2007. Biochemistry, 6th edn. New York, NY: Friedman & Co.

Bezkorovainy, A., 2001. Probiotics: determinants of survival and growth in the gut. Am. J. Clin. Nutr. 73, 399S-405S Brosnan, J.T. 2000. Glutamate, At The Interface Between Amino Acid And Carbohydrate Metabolism. International Symposium

56

on Glutamate, Proceedings of the symposium held October, 1998 in Bergami, Italy. J. Nutr. 130 (Suppl.): 988S – 990S.

Caggiano, R., M., Macchiato, and S. Trippetta, .2010. Levels, chemical composition and sources of fine aerosol particles (PM1) in an area of the Mediterranean basin, Sci. Total Environ., 408, 884–895. Canbolat, M.Y., S., Bilen, R. Cakmakci, S. Ahin, and F. Aydin .2006. Effect of plant growth promoting bacteria and soil compaction on barley seedling growth, nutrient uptake, soil properties and rhizosphere microflora. Biol. Fertil. Soils. 42, 350-357. Combs Jr., .2000. Food system-based approaches to improving micronutrient nutrition: the case for selenium. Biofactors 12, 39–43 Corry j., h. atabay, j. forsythes, and l. mansfield .2003. Culture media for the isolation of campylobacters, helicobacter and arcobacters. In: Handbook of Culture Media for Food Microbiology, Second Edition, Corry J.E.L., Curtis G.D.W. & Baird R.M. eds. Elsevier, Amsterdam, The Netherlands, 271–315. Deacon,Jim.2003.The Microbialworld Profils of Microorga- nisms.http:helios.bto.ed.ac.uk. Institute of Cell and Molecular Biology and Biology Teaching Organisation. University of Edinburgh Evans KL, J. Crowder, and E. Miller .2000. Subtilisins of Bacillus spp. hydrolyse keratin and allow growth on feathers Can. J. Microbiol. 46 (11): 1004-1011. Fadilah, F.R. and M. Shovitri .2014. Potensi Isolat Bakteri Bacillus dalam Mendegradasi Plastik dengan Metode Kolom Winogradsky. Jurnal Teknik Pomits. Vol. 3, No. 2

57

Fraga, C.G and P.I., Oteiza, .2002. Iron toxicity and antioxidant nutrients. Toxicology 180, 23–32. Eweka, A.O., P.S. Igbigbi and R.E. Ucheya .2011. Histochemical Studies Of The Effects Of Monosodium Glutamate On The Liver Of Adult Wistar Rats. Ann.Med.Health Sci.Res. 1

Freshney, R. I. .2005. Culture of animal cells: a manual of basic techniques. 5th ed.Hoboken, New Jersey. John Wiley & sonsInc. Ganong WF. 1983. Perkembangan dan fungsi sistem reproduksi. Dalam: Fisiologi Kedokteran. Edisi 10. Jakarta:EGC;1983.h.360-95 Geha, R., A. Beiser, C. Ren , R. Patterson, P. Greenberger, L. GraMSMer, A. Ditto, K. Harris, M. Saughnessy, P. Yarnold, J. Corrent and A. Saxon .2000. Review of Alleged Reactionto Monosodium Glutamate and Outcome of a

Multicenter Double-Blind Placebo-Controlled Study. The Journal of Nutrition, 130, 1058S-1062S.

Giacometti T. 2002. Free and bound glutamate in natural products. In: Glutamic Acid:Advances in Biochemistry (Filer, L.J., Garattini, S., Kare, M.R., Reynolds, W.A. and Wurtman, R.J., eds), Raven Press, New York; 1979:25 –34. Melalui: <http://jn.nutrition.org/cgi/content /full/130/4/892S>. Giovan, B. , franca, and S Calandra, .2003. Modullatory Effect of leptin on Leydig Cell Function of Normal and Hiperleptinemia rats, Reproduktif Harinaldi. 2005. Prinsip-Prinsip Statistik untuk Teknik dan Sains. Jakarta: Erlangga.

58

Harley dan Prescott. 2002. Laboratory Exercises in Microbiology, Fifth Edition. The McGraw-Hill Companies.

Harisha, S. 2006. An Introduction to Practical Biotechnology. New Delhi: Laxmi Publications.

Hogg, S., 2005, Essensial Microbiology, 102-103, John Wiley & Sons LtdEngland. Holt, J. G., Krieg, N. R., Sneath, P. H. A. Staley, J. T., dan Williams, S. T. 1994. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology 9th edition. Baltimore: Williams and Wilkins.

Hurrell, R.F., S. Lynch, T. Bothwell, H. Cori, R., Glahn, E. Hertrampf, Z. Kratky , D. Miller, M. Rodenstein, H. Streekstra, B. Teucher, E. Turner, C.K. Yeung, and M.B. ZiMSMermann, .2004. Enhancing the absorption of fortification iron, A sustain task force report. Int. J. Vitam. Nutr. Res. 74, 387–401 Ichida J.M, L. Krizova, C.A. Lefevre, HM. Keener, D.L. Elwell, and E.B.Burtt .2001. Bacterial inoculum enhaces keratine degradation and biofilm formation in poultry compost.J. Microbiol. Methods .47: 99-208. Jawetz, Melnick, & Adelberg. 2004. Mikrobiologi Kedokteran Edisi 23. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta

Jinap, S., A.R Ilya-Nur, S.C. Tang, P. Hajeb, K. Shahrim and M. Khairunnisak .2010. Sensory attributes of dishes containing shrimp paste with different concentrations of glutamate and 5’-nucleotides. Appetite 55:238-244.

Kennedy, E., L., Meyers .2005. Dietary reference intakes: development and uses for assessment of micronutrient status of women-a global perspective. Am. J. Clin. Nutr. 81, 1194S–1197S

59

Khropycheva, R., H. Uneyama, K. Torii and V. Zolotarev. 2009. Dietary Monosodium Glutamate Enhances Gastric Secretion. J Med Invest.56 Suppl:218-23.

Kohen, R., Nyska, A.2002. Oxidation of Biological System : Oxidative Stress Phenomena, Antioxidant, Redox Reaction and Methods for Their Quantification. Toxicologic Pathology, 30:620-650

Laboffe, Michael J & Burton E Pierce. 2010. Microbiology Laboratory Theory & Applications. United State: Morton Publishing Company Lehninger, A.L. 1982. Principles of Biochemistry. United States of America : Worth Publishers Inc

Lestienne, I., P. Besancon, B. Caporiccio, , V. Lullien-Pellerin, and S. Treche, .2005. Iron and zinc in vitro availability in pearl millet flours (pennisetum glaucum) with varying phytate, tannin, and fiber contents.J. Agric. Food Chem. 53, 3240–3247. Loliger, J. 2000. Function And Importance Of Glutamate For Savory Of Foods. The Journal of Nutrition 130, 915S-920S

Madigan M.T., Martinko J.M., Stahl D.A., Clark D.P. 2012. Biology of Microorganism. 13th ed. San Francisco: Pearson. P. 140-141 Martin, E. A., .2007. Oxford Concise Medical Dictionary. 7th ed. New York: Oxford University Press. McDonald, P., R.A. Edwards, and J.F.D. Greenhalgh .2007. Animal Nutrition. John Willey and Sons Inc., New York. p. 96−105.

60

Milton R.J. Salton dan Kwang-Shin Kim, 2001. Structur of Bacteria. www.bact.wisc.edu. Departement of Baceriology University of WisconsinMadison.USA Minaxi., J., Saxena, S., Chandra, and L. Nain .2013. Synergistic effects of phosphate solubilizing rhizobacteria and arbuscular mycorrhiza fungi on growth and yield of wheat plants. J. Soil Sci. Plant Nutr. 13(2), 511-525. Molina, EP. 2004. Female reproductive system. In:Endocrine Physiology. New York:McGraw-Hill;2004.p.207-25 Nishijima, T., K. Toyota, and M. Mochizuki .2005. Predominant culturable Bacillus species in Japanese arable soils and their potential as biocontrol agents. Microbes and Environments 20 (1): 61-68. Peddie, C.J., G.M. Cook and H.W. Morgan .1999. Sodium-Dependent Glutamate Uptake by an Alkaliphilic, Thermophilic Bacillus Strain, TA2.A. Journal Of Bacteriology. 3172–3177

Pelczar, M.J. & E.C.S. Chan, 1986, Penterjemah , Ratna Siri Hadioetomo dkk. Dasar-Dasar Mikrobiologi 1, Universitas Indonesia Press. Jakarta. Pramila, R., K. Padmavathy, V.K. Ramesh and K. Mahalakshmi .2012. BreviBacillus parabrevis, Acinetobacter baumannii And Pseudomonas Citronellolis -Potential Candidates For Biodegradation Of Low Density Polyethylene (LDPE). J. Bacteriol. Res, 4(1), pp. 9-14.

Prawirohardjono, W., I., Dwiprahasto, A., Indwiani, S., Hadiwandowo, E., Kristin, M., MuhaMSMad, and F.K. Michael, .2000. The Administration to Indonesians of Monosodium Lglutamat in Indonesian Foods: An Assessment of Adverse

61

Reactions in a Randomized. Journal Of Nutrition. 130(4): 10741076. Prescott, Harley, Klein. 2008. Microbiology, Seventh Edition. New York: McGraw-Hill. Reeds, P.J., D.G. Burrin, B. Stoll and F. Jahoor .2000. Intestinal Glutamate Metabolism. International Symposium on Glutamate, Proceedings of the symposium held October, 1998 in Bergami, Italy. J. Nutr. 130 (Suppl): 978S – 982S.

Saimmai, A., O. Rukadee, V. Sobhon and S.Maneerat. 2012. Biosurfactant Production by Bacillus subtilis TD4 and Pseudomonas aeruginosa SU7 Grown On Crude Glycerol Obtained From Biodisel Production Plant As Sole Carbon Source. Journal of Scientific and Industrial Research. Vol. 71 396-406

Santoso, OS. 2008. Beberapa data metabolisme MSG dalam tubuh dan tinjauan manfaat mudaratnya. CDK 1987;57:29-32.Melalui: <http://www.kalbe.co.id/files /cdk/_057_ hipertensi _(ii).pdf> Shewry, P.R. 2006. Improving the protein content and quality of temperate cereals: Wheat, Barley and Rye, in Impacts of Agriculture on Human Health and Nutrition, [Eds. Ross M. Welch, and Ismail Çakmak], in Encyclopedia of Life Support Systems (EOLSS), Developed under the Auspices of the UNESCO, Eolss Publishers, Oxford ,UK, [http://www.eolss.net] Singgih, Santoso.2008. Panduan Lengkap Menguasai SPSS 16. Penerbit : PT. Alex MediaKomputindao. Jakarta Sosa-Peinado A, D., Mustafi , and M.W., Makinen .2000. Overexpression and biosynthetic deuterium enrichment of TEM-1 beta-lactamase for structural characterization by magnetic resonance methods. Protein Expr Purif 19(2):235–245

62

Sriningsih, A. and M. Shovitri .2015. Potensi Isolat Bakteri Pseudomonas Sebagai Pendegradasi Plastik. Jurnal Sains dan Seni ITS Sukawan, Uke. 2008. Efek toksik Monosodium Glutamat (MSG) pada binatang percobaan. Universitas Indonesia. Jakarta Timotius, K. H. 1982. Mikrobiologi Dasar. Salatiga: Universitas Kristen Satya Wacana Todar, Kenneth, 2001. Biological identity of Procaryotes. www.bact.wisc.edu. Departement of Baceriology University of Wisconsin-Madison.USA. Tortora, G.J., and B., Derrickson .2006. An Introduction to The Human Body. Principles of Anatomy and Physiology. 11th ed. USA: John Wiley & Sons, Inc, 4-7. Vincent, J.B., 2004. Recent advances in the nutritional biochemistry of trivalent chromium. Proc. Nutr.Soc. 63, 41–47. Walstra P, J.T.M., Wouters, and T.J., Geurts .2006. Dairy Science and Technology. Boca Raton: CRC Press. Yateem A, M.T., Balba, Y. Al-Shayji, and N. Al-Awadhi .2002. Isolation and characterization of biosurfactant-producing bacteria from oil-contaminated soil. Soil and Sediment Contamination 11: 41-55. Ynte P.D.E., M.V., ries Luc, W.M., Hornstra, and T.A. Vos .2004. Growth and Sporulation of Bacillus cereus ATCC 14579 under Defined Conditions: Temporal Expression of Genes for

63

Key Sigma Factors. Appl. Environ. Microbiol. 70(4): 2514-2519. Young, V.R. and A.M., Ajami .2000. Glutamate: An Amino Acid Of Particular Distinction. International Symposium on Glutamate, Proceedings of the symposium held October, 1998 in Bergami, Italy. J. Nutr. 130 (Suppl.): 892S – 900S.

Yuliar. 2008. Skrining Bioantagonistik Bakteri untuk Agen Biokontrol Rhizoctonia solani dan Kemampuannya dalam Menghasilkan Surfaktan. Jurnal Biodiversitas/ Vol.9/ No.2 hal 83-86.

64

”Halaman ini sengaja dikosongkan”

BIODATA PENULIS

Rizka Rahmawati atau yang akrab disapa Rizka lahir di Sidoarjo pada tanggal 21 Mei 1994. Penulis memulai pendidikan dasar di SDN Sukaluyu IV, Karawang Barat. Dari sini, mulai terlihat ketertarikannya mengenai ilmu alam. Setelah lulus, ia memulai jenjang menengah pertama di SMPN 1 Karawang Barat. Pada tahun 2012, penulis lulus dari SMA Negeri 1 Tambun Selatan dan pada tahun yang sama lulus seleksi masuk Institut

Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) melalui jalur Seleksi Nasional Masuk Perguruan Tinggi Negeri (SNMPTN) Undangan. Selama kuliah di Institut Teknologi Sepuluh Nopember, penulis pernah bergabung dalam Himpunan Mahasiswa Biologi ITS sebagai Staff Departemen Media dan Hubungan Luar 13/14 dan menjadi Ketua Divisi Media Departemen Media dan Hubungan Luar Himpunan Mahasiswa Biologi ITS 14/15. Penulis juga aktif dalam mengikuti Program Kreatifitas Mahasiswa (PKM) serta lolos didanai pada bidang PKM-Kewirausahaan tahun 2015. Diantara aktivitas studi dan organisasi, penulis juga pernah mengikuti PP LKMM VII FMIPA ITS, serta aktif mengikuti beberapa kepanitiaan di ITS seperti Interval (2013), ISTEC (2014), INTERN FMIPA (2014). Pada tahun 2015, penulis melaksanakan Kerja Praktek selama satu bulan di PPTMGB LEMIGAS Kebayoran Lama, Jakarta Selatan. Ketertarikan penulis pada dunia Mikrobiologi mendorong penulis untuk melaksanakan penelitian Tugas Akhir yang berjudul “Pengaruh Monososodium Glutamat (MSG) Komersial Terhadap Pertumbuhan Isolat Bakteri Bacillus PL01 Dan Pseudomonas PL01 pada Mineral Salt Medium”. Untuk keperluan penelitian, penulis dapat dihubungi melalui email [email protected].