Alonso Rodriguez María de Jesús Cordero Cordero Dulce María
Alonso Rodriguez María de Jesús
Cordero Cordero Dulce María
Método para determinar en Orina Humana de manera simultanea MDEA, MDMA y los metabolitos HMA, MDA y HMMA mediante Cromatografía de gases acoplada a un Espectrómetro de masas
Introducción
Material y Métodos
VALIDACIÓN EXPERIMENTAL
Linealidad Seis puntos de calibración
Linealidad mínima aceptada r2= 0.99
LOQ
LOD Sensibilidad Evaluado con 6 replicas
Recobro
Controles
30 µg/L
300 µg/L
3000 µg/ml
+ E.I
Se realizó antes y después del procedimiento de extracción
Precisión Interensayo Desviación Estandar
relativa de 6 replicas de la curva de calibración
Precisión Intraensayo
Desviación Estandar relativa de los puntos de control
Análisis de Interferencias
Selectividad del Método
6-acetilmorfina
Acido acetilsalicílico
Cafeína
Canabidol
Diperamina
Hidromorfina
11-Tetrahidrocanabinol
Metadone
Morfina
Nicotina
Norcocaina
Estabilidad del método
Ciclos de
congelación - descongelación
Temperatura controlada durante 14 h
Refrigeración durante 72 h
Temperatura del auto muestreador
Comparado con un set de muestras preparadas en el momento
Muestras Clínicas El estudio fue aprobado por el National Institute on Drug
Abuse Institutional Review Board
Los participantes firmaron una carta de consentimiento
Grupos de Estudio
•Placebo
•Doble Ciego
•Grupo de Estudio
Recibieron una dosis oral de 1.6 mg/Kg de MDMA
1.2 h después fue recolectada la orina y almacenada a -20 ºC
ResultadosHMA* pico 1, MDA-d5 pico 2, MDA pico 3, HMMA pico 4, MDMA-d5 pico 5, MDMA pico 6, MDEA-d6 pico 7), y MDEA pico 8
Fig. 2. Extracted ion chromatograms containing 29.3 g/L HMA* (240m/z, peak 1), 50 g/L MDA-d5 (167m/z, peak 2), 46.7 g/L MDA (162m/z, peak 3), 4261.8 g/L HMMA(360 m/z, peak 4), 50 g/L MDMA-d5(258 m/z, peak 5), 1462.4 g/LMDMA (254 m/z, peak 6), and 50g/L MDEA-d6 (274 m/z, peak 7), in aurine specimen collected 1.2 h after1.6 mg/kg oral administration ofMDMA to a research participant.
Validación del MétodoLinealidad Rango de 25 – 5000 µg/L
- r2 > 0.99
AnalitoEstandar
Interno50 g/LLOD(g/L)
LOQ(g/L)
Ecuación r2
HMA d5–MDA 10 25 Y=0.0705 (0.00693) X–0.7628 (0.2236) 0.998
MDA d5–MDA 10 25 Y= 0.0421 (0.00408) X–0.2595 (0.1875) 0.998
HMMA d5–MDA 10 25 Y= 0.1605 (0.2513) X–0.6274 (0.15356) 0.999
MDMA d5–MDMA 10 25 Y=0.0475 (0.1115) X–0.1429 (0.09786) 0.999
MDEA d6–MDEA 10 25 Y=0.0270 (0.0007) X–0.1632 (0.0752) 0.999
Validación del Método Recobro
>85.5 %
Precisión •CV 6%
•El porcentaje de la concentración recobrada fue de 90 – 117 %
•Precisión interensayo fue 3.5 – 12.9 %
•Recobro 90 – 112 %
EspecificidadNo fue detectado ningún pico debido a la interferencia
Estabilidad
•Estabilidad buena CV 15% en los ciclos de congelación – descongelación
•Al analizar las muestras congeladas durante 72 h se muestra una diferencia <20%
Discusión
La selección de E.I adecuados es muy importante, ya que algunos de los metabolitos del MDMA
El método desarrollado tiene una alta sensibilidad, para cuantificar los metabolitos del MDMA hasta su tiempo de eliminación 5 vidas medias.
Uno de los pasos mas importantes fue la hidrólisis antes de la extracción.
La extracción es uno de los pasos mas importantes ya que en este se puede perder hasta el 50% del MDMA libre
La reproducibilidad inter e intra ensayo fue satisfactoria ya que se obtuvo un CV < 15%
Conclusiones
Se demostró la estabilidad a -20, 4 y 20º C por 21 semanas
Este método puede ser aceptable para estudios de farmacocinética del MDMA y sus metabolitos