Medios de cultivo caseros

Medios de Cultivo Caseros

Andrea Ramirez Mata 201121870Ariana Umaña Torres 201114337

Instrumentación

Gabinete con aire estéril Tanque para peces volcado

Olla a presión (para esterilización de instrumentos, agua, papel toalla…)

Envases de vidrio (con tapa que soporten calor) Pinzas y bisturí Papel toalla (para cortar el material)

Instrumentación Mechero de alcohol

(etanol para flamear instrumentos)

Spray con alcohol de 70% (para rociar las superficies al transferir)

Cloro diluido (1/4 del cloro para lavar ropa para esterilizar la superficie del material)

Medio de cultivo (básico) 2 tazas de agua ¼ de taza de azúcar Fertilizante soluble en agua

(1 taza de fertilizante todo propósito 10:10:10 NPK en 1 L de agua)

Tabletas de inositol (1/2 tableta)

Medio de cultivo (básico) Tabletas de vitaminas (1/2 tiamina con

cualquier multivitamínico) Hojuelas de agar (4 cucharadas)

Se mezclan los ingredientes en una olla hasta hervir y el agar se disuelva. Se dispensan en los envases de vidrio y se ponen en la olla a presión por 15 minutos luego de alcanzar 15 lbs de presión

Agregados al cultivo

Leche de coco : multiplicación y enraizamiento

Puré de tomate verde Jugo de naranja

recién exprimido Ácido cítrico o

bircarbonato de sodio (para ajustar pH entre 5 y6)

Medio de Cultivo de Orquídea

Materiales

Trapo. Papel de aluminio . Gasa estéril. Cinta adhesiva y

etiquetas. Cloro + Ácido clorhídrico. Hidróxido sódico. Lavajillas. Frascos

• Olla de presión. • Guantes. • Mascarilla de papel. • Espátula. • Bisturí. • Mechero de alcohol. • Soporte y rejilla. • Varilla de vidrio. • Pinzas metálicas.

Reactivos

100g de plátano maduro (puré o licuado)

10 g de agar. 15 g de azúcar. 900 ml de agua

destilada. 1,2 g Tiamina (para un litro)

Métodoa) Preparación de los frascos. Se lavan bien los frascos y tapas con

jabón y cloro.

b) Preparación y esterilización del medio de cultivo.

1. Poner en una olla : 180 ml de agua destilada, 20g de plátano maduro hecho puré o licuado, 1 g de azúcar y 0.24 g Tiamina. Una vez disuelto se añaden 2 g de agar agar y se hierve el medio.

2. Medir el pH y ajústalo. Debe de quedar entre 5.5 y 6.

3. Distribuye el medio de cultivo en los tubos de ensayo y frascos, para ello utiliza un embudo de vidrio.

4. Verter en cada frasco en el fondo una cantidad de preparado de más o menos 1 centímetro .

c) Esterilización del medio de cultivo

Los frascos se esterilizan en una olla a presión. Los pasos para la esterilización son los siguientes:

Se pone un pedazo de tela en el fondo de la olla para impedir así que los frascos toquen el fondo de la olla y se revienten con el calor.

Se añaden dos o tres centímetros de agua.

Colocamos los frascos (con el medio) tapados, pero sin cerrar del todo.

Cerrar y calentar, dejar a 15 PSI unos 20 o 30 minutos a fuego suave.

Apagar una vez trascurrido el tiempo y esperar a que la olla baje y esté totalmente enfriada. No se debe abrir la olla antes porque la diferencia de presión o temperatura hará que entre aire “no estéril” a los frascos, creando un peligro de contaminación.

Se dejan enfriar hasta que el medio gelifique (se solidifique) por acción del agar. Con guantes desinfectados con alcohol, se terminan de cerrar los botes para evitar la entrada de aire no estéril.

Los frascos se pueden guardar por varios días y meses en la nevera o congelados.

Semillas de Orquídea

d) Preparación de las semillas. Las semillas se esterilizan de la

siguiente forma: Preparar dos recipientes con agua (a

la mitad de su capacidad) y uno vacío y se cubren con tapas dobles de aluminio. Se esterilizan en una olla a presión. Dejar enfriar todo el material. La esterilización se puede hacer en el microondas (5-10 min) pero en este caso los frascos se tapan con papel plástico. Dejar enfriar antes de usarlo para la esterilización de las semillas.

Las semillas se envuelven en una gasa y se sumergen en una solución 50% cloro con unas gotas de lavavajillas.

. Las pinzas metálicas deben ser flameadas antes espátula en el mechero de alcohol y se corta la cápsula con el bisturí cerca de la llama, antes de introducirlas en los frascos y se debe intentar trabajar en un ambiente estéril.

Otras especies utilizadas

Plantas acuáticas:

Loto americano (Nelumbo lutea)

Cola de zorro (Myriophyllum aquaticum)

Lirios (Nymphaea sp)