Laporan Temulawak

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA

PEMURNIAN DAN IDENTIFIKASI SPEKTRA UV-VIS KURKUMINOID DARI EKSTRAK TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza)Kelompok F-3 :

Felicia Kristianti / 1110065Tanoko Harris A. / 1100037

Valentina Sintya / 1110085Wijaya Kartanegara / 1110097

Amelia Susetyo / 1110098Putri Wardhani / 1110141

Vani Oktavia S. / 1110118Zhidni Robbi R. / 1110160

Fonnyza M. / 11100328Langgeng Dewi A. / 1110346

A. PENDAHULUANA.1Tinjauan Pustaka

Temulawak (Curcumae xanthorrhiza)

Temulawak terdiri dari fraksi pati, kurkuminoid dan minyak asiri (3-12 %). Fraksi pati merupakan kandungan terbesar, jumlah bervariasi antara 48-54% tergantung dari ketinggian tempat tumbuh. Makin tinggi tempat tumbuh maka kadar patinya semakin rendah dan kadar minyaknya semakin tinggi.

Pati temulawak terdiri dari abu, protein, lemak, karbohidrat, serat kasar, kurkuminoid, kalium, natrium, kalsium, magnesium, besi, mangan dan kadnium (Sidik, 1985). pati rimpang temulawak dapat dikembangkan sebagai sumber karbohidrat, yang digunakan untuk bahan makanan atau campuran bahan makanan.

Fraksi kurkuminoid mempunyai aroma khas, tidak toksik, terdiri dari kurkumin yang mempunyai aktivitas antiradang dan desmetoksikurkumin.

Minyak atsiri berupa cairan berwarna kuning atau kuning jingga, berbau aromatik tajam. Komposisinya tergantung pada umur rimpang, tempat tumbuh, teknik isolasi, teknik analisis, perbedaan klon varietas dan sebagainya. Oei Ban Liang (1985) dengan metode kromatografi gas mendeteksi 31 komponen yang terkandung dalam temulawak. Beberapa diantaranya merupakan komponen minyak khas asiri temulawak, yaitu isofuranogermakren, trisiklin, allo-aromadendren, germaken dan xanthorrhizol. Selain itu, terdapat komponen lain yang bersifat insect repellent yaitu ar-turmeron

Dieterle dan Kaiser (1932;1933), minyak atsiri temulawak (Curcuma xanthorrihiza) antara lain mengandung siklo-isoprem-mirsen, p-tolil-metil-karbinol dan kamper;juga mengandung kurkumin des-metoksi-kurkumin dan bides-metil-kurkumin. Kelkar dan Rao (1934) menemukan d-alpha-felanden, d-sabinen, sineol, borneol, zingiberen, seskuiterpen-alkohol dan keton dalam minyak atsirinya. Rupe dan Gassman (1934) menemukan tuermeron dan arturmeron di samping seskuiterpenalkohol. Gunster (1943) menemukan sineol, alpha-felandren, kamper, borneol, zingiberen, atlanton, turmeron dan artumeron. Rimpler (1970) menemukan santorizol dalam ekstrak metilenklorida dari temulawak. Maligre (1975) menemukan seskuiterpen-keton, seskuiterpen alkohol dan santorizol dengan kromatografi gas IR dan NMR. Terutama digunakan sebagai obat penyakit kandungan empedu dan hati, bekerja sebagai kolagog (Isaac. 1959), Luckner (1967) menyatakan dalam bentuk rebusan dan ekstrak dipakai pada kolelitiasis, kolesistitis, kolangitida dan kerusakan pada parenchym hati. Bekerja baik sebagai kolekinetik maupun sebagai koleretik. Zat warna kuning kurkumin dan kurkuminoid bekerja sebagai kolekinetik, sedang minyak atsirinya bekerja sebagai koleretik. Mengenai daya kerja kandung empedu belum ada persamaan pendapat. Robbers (1936) dengan hewan perlakuan anjing, hanya dapat melihat daya kerja kolekinetik dari kurkumin, tetapi Jentzch (1959) menerangkan kurkumin juga menyebabkan efek koleretik yang nyata dengan hewan perlakuan tikus. Gunster (1959) tidak menemukan efek apapun dari kurkumin dan harsanya pada sistim blier hewan perlakuan. Pada percobaan dapat dilihat bahwa minyak atsirinya disamping berefek koleretik juga bersifat disinfektan dan dapat melarutkan kolesterol.

(Pustaka : Vademekum Bahan Obat Alam 1989 Departemen Kesehatan Repulik Indonesia, penerbit; Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan)

Kromatografi Kolom

Pada prinsipnya kromatografi kolom adalah suatu teknik pemisahan yang didasarkan pada peristiwa adsorpsi. Sampel yang biasanya berupa larutan pekat diletakkan pada ujung atas kolom. Eluen atau pelarut dialirkan secara continue ke dalam kolom. Dengan adanya gravitasi atau karena bantuan tekanan, maka eluen/pelarut akan melewati kolom dan proses pemisahan akan terjadi. Seperti pada umumnya, eluen/pelarut yang digunakan dimulai dari yang paling nonpolar dan dinaikkan secara gradient kepolarannya hingga pemisahan dapat terjadi. Sama halnya pada KLT, pemisahan dapat terjadi karena adanya perbedaan afinitas senyawa pada adsorben dan perbedaan kelarutan senyawa pada eluen/pelarut.

Ketika sampel diletakkan di ujung kolom, seketika itu juga sudah terjadi peristiwa adsorpsi oleh permukaan adsorben yang berbatasan dengan sampel. Eluen yang dialirkan secara kontinu ke dalam kolom akan menyebabkan adanya peristiwa adsorpsi dan desorpsi senyawa-senyawa pada sampel. Molekul-molekul senyawa akan dibawa ke bagian bawah kolom dengan kecepatan yang bervariasi bergantung pada besarnya afinitas molekul tersebut pada adsorben dan juga pada besarnya kelarutan molekul tersebut dalam eluen/pelarut. Cairan yang keluar dari kolom ditampung dan dilakukan analisis menggunakan KLT untuk melihat hasil pemisahannnya.

Pada kromatografi kolom, hal-hal yang paling berperan dalam kesuksesan pemisahan adalah adsorben dan eluen/pelarut, dimensi kolom yang digunakan serta kecepatan elusi yang dilakukan.

(Pustaka : Buku Ajar Fitokimia, Airlangga University Press, Surabaya :2008)

Kromatografi Lapis Tipis

Metode pemisahan kromatografi didasarkan pada perbedaan distribusi molekul-molekul komponen diantara dua fase (fase gerak dan fase diam) yang kepolarannya berbeda. Apabila molekul-molekul komponen berinteraksi secara lemah dengan fase diam maka komponen tersebut akan bergerak lebih cepat meninggalkan fase diam. Keberhasilan pemisahan kromatografi bergantung pada daya interaksi komponen-komponen campuran dengan fase diam dan fase gerak (Hendayana, 2010).

Dibandingkan dengan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dan kromatografi gas (KG), KLT mempunyai beberapa keuntungan, yaitu:1. Dalam hal memilih fase gerak, KLT memberikan fleksibilitas yang lebih besar.

2. Beberapa macam teknik untuk optimasi pemisahan seperti pengembangan 2 dimensi, pengembangan bertingkat, dan pembaceman penjerap dapat dilakukan pada KLT.3. Proses kromatografi dapat diikuti dengan mudah dan dapat dihentikan kapan saja.4. Semua komponen dalam sampel dapat dideteksi.

Bahan dan Teknik KLT (Rohman, 2009)1. Penjerap / Fase DiamPenjerap yang paling sering digunakan pada KLT adalah silika dan serbuk selulosa, sementara mekanisme sorpsi-desorpsi yang utama pada KLT adalah partisi dan adsorbsi2. Fase Gerak pada KLTSistem yang paling sederhana ialah dengan menggunakan campuran 2 pelarut oganik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal.3. Aplikasi (Penotolan) SampelPenotolan (aplikasi) sampel dapat dilakukan sebagai suatu bercak, pita, atau dalam bentuk zig zag.4. PengembanganTeknik pengembangan KLT dan KLT kinerja tinggi yaitu konvensional, pengembangan 2 dimensi, dan pengembangan kontinyu.

Penggunaan KLT (Sudjadi, 2007)KLT digunakan secara luas untuk analisis solu-solut organik terutama dalam bidang biokimia, farmasi, klinis forensik, baik untuk analisis kualitatif dengan cara membandingkan nilai Rf solute dengan nilai Rf senyawa baku atau untuk analisis kualitatif.Penggunaan umum KLT adalah untuk menentukan banyaknya komponen dalam campuran, identifikasi senyawa, memantau berjalannya suatu reaksi, menentukan efektifitas pemurnian, menentukan kondisi yang sesuai untuk kromatografi kolom, serta untuk memantau kromatografi kolom, melakukan screening sampel untuk obat.TujuanDapat mengembangkan dan menunjukkan kemampuan pengetahuan dan/praktis untuk:1. Menjelaskan teori dan prinsip-prinsip dasar KLT2. Memilih fase gerak yang sesuai untuk pemisahan terbaik3. Melakukan analisis kualitatif untuk identifikasi senyawa obat dalam pengobatan tradisional Spektra UV-Vis Spektroskopi:Ilmu yang mempelajari interaksi materi dengan energi pada level mikroskopis Spektrometri:Ilmu yang mempelajari teknik pengukuran interaksi materi dengan energi

Spektrofotometri : Ilmu yang mempelajari teknik pengukuran interaksi materi dengan energi / sinar / komponen sinar matahari Spektrofotometer:Alat/instrumenSpektroskopi adalah sebuah cabang ilmu pengetahuan yang mempergunakan cahaya (radiasi sinar tampak) dengan panjang gelombang tertentu untuk menghasilkan spektra, yang lalu digambarkan sebagai fungsi intensitas radiasi terhadap panjang gelombang atau frekuensi terhadap analit. Pengertian spektroskopi sekarang tidak hanya mencakup radiasi sinar tampak, tetapi juga radiasi elektromagnetik seperti sinar X, ultraviolet, sinar tampak, infra merah, gelombang mikro dan frekuensi radio.Radiasi serapan adalah radiasi elektromagnetik yang merupakan jenis energi yang paling banyak digunakan, namun yang paling banyak dikenal adalah energi panas dan sinar tampak, diikuti sinar gamma, sinar X , sinar ultraviolet, gelombang mikro dan radiasi frekuensi radio. Absorpsi adalah suatu proses dimana spesi kimia dalam media transparan melemahkan frekuensi dari radiasi gelombang elektromagnetik.Kareteristik serapan spesi dijelaskan oleh spektrum absorpsi yang merupakan penggambaran fungsi melemahnya berkas radiasi terhadap panjang gelombang frekuensi atau angka gelombang.Empat terminology digunakan disini adalah:

1.TransmitansiApabila seberkas sinar radiasi dilewatkan pada sebuah larutan yang diletakkan dalam sebuah wadah kuvet dengan ketebalan b cm dan konsentrasi c mol/L, maka terjadi interaksi antara energi foton dan partikel absorbsi, data berkas cahaya melemah dari Po menjadi P. Transmitansi T dari medium adalah fraksi antara radiasi insiden yang ditransmisikan oleh medium. Transmitansi dinyatakan dalam persen (%).2.Absorbansi

3.Absortivitas dan molar absortivitasAbsorbansi berbanding lurus dengan tebal larutan yang dilalui larutan dan konsentrasi dari spesi penyerap.Cahaya saat mengenai larutan bening akan mengalami 2 hal yaitu:a)Transmitansi Nilai dari Transmitansi berbanding terbalik dengan absorbansi.

Transmitansi larutan T merupakan bagian dari cahaya yang diteruskan melalui larutan.

b)Absorbansi Cahaya akan diserap jika energi cahaya tersebut sesuai dengan energi yang dibutuhkan untuk mengalami perubahan dalam molekul Absorbansi larutan bertambah dengan pengurangan kekuatan sinar Nilai absorbansi berbanding lurus dengan ketebalan dan konsentrasi Nilai absorbansi berbanding terbalik dengan transmitan HUKUM LAMBERT BEERJika suatu cahaya monokromatis dengan kekuatan Po dilewatkan kepada balok yang tegak lurus pada permukaan dengan ketebalan b dan mengandung n partikel pengabsorbsi, maka kekuatan cahaya menurun menjadi P.Syarat Hukum Beer : Konsentrasi harus rendah Zat yang diukur harus stabil Cahaya yang dipakai harus monokromatis Larutan yang diukur harus jernihP = Po 10-abc-log P/P = abc-log T = abcA = abcDimana:

T:transmisiA:absorbansia:absorptivitas (tergantung satuan [ ]); a (ppm) dan (Molar)b:tebal media/kuvetc:konsentrasi larutan

A.2Tujuan PraktikumMendapatkan dan mengidentifikasi senyawa kurkuminoid dari ekstrak temulawak (Curcumae xanthorrhiza).B. METODE PRAKTIKUM

B.1Alat

Beaker Glass Bejana Kromatografi Erlenmeyer Gelas Ukur Kolom Kromatografi Pengaduk Kaca Pipet Tetes Statif + Klem Holder Vial + TutupB.2Bahan

Ekstrak Temulawak Fase Gerak ( CHCl3:Benzena:Etanol (45:45:10) Kertas Saring Kieselgel 60 ukuran 0,063-0,200 nm Larutan NaOH dalam metanol Silika Gel GF 254 nmC. SKEMA KERJA

Penyiapan Kolom Kromatografi

Identifikasi Kurkuminoid Secara KLT

Identifikasi Kurkuminoid Secara Spektrofotometri UV-Vis

D. HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASANMekanisme pemisahan kromatografi kolom merupakan kromatografi serapan atau adsorpsi, dimana silika gel sebagai fase diam dan campuran kloroform-benzena-etanol (45:45:10) sebagai fase gerak akan mengelusi ekstrak temulawak dengan memanfaatkan gaya gravitasi sehingga eleuen bergerak turun membawa senyawa dalam ekstrak temulawak.

Adsorben yang digunakan yaitu silika gel 60 karena memiliki daya adsorbsi yang tergolong cukup besar sehingga ketika eluen yang membawa ekstrak temulawak melewati fase diam akan terbentuk fraksi-fraksi warna yang berbeda. Fraksi warna yang berbeda ini menunjukkan perbedaan senyawa yang dipisahkan dari setiap fraksi.

Pada praktikum ini digunakan metode kromatografi kolom basah yaitu silika gel dilarutkan dalam fase gerak kemudian dituang ke dalam kolom dan didiamkan semalam supaya campuran menjadi homogen dan memberi kesempatan campuran memadat sehingga tidak ada udara yang terjebak di dalam kolom. Fase gerak harus selalu berada di atas permukaan fase diam karena jika sampai fase gerak habis dapat menyebabkan fase diam menjadi kering dan terjadi keretakan pada kolom. Setelah fase diam mampat, kolom diisi dengan ekstrak temulawak dan dialiri dengan fase geraknya sehingga ada senyawa akan terbawa oleh fase gerak dan teradsorbsi oleh fase diam. Senyawa yang terlarut dalam eluen terbawa sampai ke bagian bawah kolom dan kemudian keluar melalui kran. Senyawa yang lebih mudah larut akan terbawa lebih dahulu bersama fase gerak. Segera diambil tetesan fraksi pertama sebanyak 5mL dengan menggunakan botol vial sebagai wadah yang telah dikaliberasi 5 mL. Langkah tersebut dilakukan sampai mendapat 50 fraksi dan kolom tetap dijaga agar tidak kering dengan menambahkan eluen sampai pada fraksi ke-50. Setiap fraksi masing-masing diberikan label agar tidak tertukar. Fraksi-fraksi dalam botol vial dibungkus dengan aluminium foil agar tidak terkontaminasi dari udara luar dan tidak terurai akibat kontak dengan cahaya. Lima puluh fraksi yang didapatkan menghasilkan warna yang berbeda-beda ada yang berwarna kuning muda, kuning tua, kuning pekat, sesuai dengan kadungan senyawa yang terlarut dalam eluen.Identifikasi dilakukan untuk mengetahui kemurnian dan adanya zat kurkimin dari hasil pemurnian dengan kromatografi kolom, Oleh kerena itu perlu dilakukan tahapan identifikasi ini antara lain:

A. Kromatografi Lapis Tipis

Fase Diam: Silikagel GF 254

Fase Gerak: kloroform-benzena-etanol (45:45:10)Penampak Noda: KOH 5% dalam etanol

Dalam praktikum KLT ini fase diam yang digunakan adalah silika gel GF254 yang bersifat polar dan fase geraknya yaitu pelarut campuran (Benzena : kloroform : etanol 96% = 45:45:10) yang bersifat non polar. Fasediam silika gel GF254 yang mana G adalah Gypsum (pengikat) biasanya pengikat yang digunakan adalah kalsium sulfat, F adalah Flouresence (panjang gelombang), dan 254 adalah panjang gelombang yang digunakan yaitu 254 nm. Jadi arti GF 254 adalah penjerap silika gel dengan pengikat kalsium sulfat dengan ditambahkan indikator yang dapat berflouresensi jika dideteksi pada sinar ultraviolet dengan panjang gelombang 254 nm. Indikator flouresensi akan padam jika terdapat senyawa yang terjerapHasil pemurnian dari kromatografi kolom yang terfraksi-fraksi dalam vial-vial yang telah dikalibrasi 5ml, kemudian mulai diidentifikasi secara KLT untuk vial-vial dengan kelipatan 5, yaitu antara lain 1, 6, 11, 16, 21, 26, 31, 36, 41, dan 46.

Dari masing-masing vial tersebut kemudian ditotolkan pada Lempeng KLT, sehingga didapatkan 10 totolan, kemudian lempeng klt yang telah ditotolkan dieluasi dengan fese gerak sehingga pada akhir eluasi kan diperoleh 10 noda.

Dari hasil kromatografi kolom, telah ditampung vial 46 yang siap untuk dianalisis. Pemisahan pertama dapat dilihat pada gambar l, dimana vial nomor 1 hingga 6 belum menunjukkan adanya noda, pada vial nomor 16 sampai 26 memberikan noda sehingga diperkirakan sudah mengandung kurkuminoid, namun yang terlihat sangat cerah pada noda dari vial nomer 11 dan 16, sedangkan pada vial nomor 27 sampai 41 menunjukan noda yang tidakterlalu kuning (cerah).

Gambar 1. Hasil KLT secara kromatografi kolom penotolan vial 1 sampai 46 dengan kelipatan 5

Setelah disinari dengan UV 254 nm, pada vial 1 sampai 46 tidak menunjukkan fluoresensi, diperkirakan pada vial adri nomer 1 hingga 46 terdapat senyawa, namun belum dapat diketahui apakah senyawa tersebut merupakan senyawa kurkuminoid. kurkumin. Noda dari vial nomer 11 memiliki ketinggian yang sama dengan noda dari nomer 16, maka larutan pada vial 11-16 dijadikan satu dala satu fraksi. Larutan pada vial 21-26 digabung menjadi 1 fraksi dan vial 31-41 juga bagung menjadi 1 fraksi, maka diperoleh 3 fraksi yang mengandung kurkuminoid.

Gambar 2. Noda pada sinar UV 254 nmGambar 3. Noda pada sinar UV 365 nm

Fraksi 11-16 ditotolkan pada lempeng klt dan dieluasi dengan fase gerak yang sama dan diukur Rfnya, yaitu Rf= 0,51. Perlakuan yang sama dilakukan untuk fraksi dari vial 21-26 dan vial 31-41, dan diperoleh Rf secara berturut yaitu Rf= 0,34 dan Rf= 0,21. Berdasarkan hasil pengamatan tersebut diketahui bahwa senyawa kurkuminoid yang diperoleh melalui hasil pemurnian dengan kromatografi kolom merupakam 3 senyawa kurkuminiod yang terbesar kandungannya dalam temulawak, yaitu: curcumin, demetoksikurkumin, bidesmetoksikurkumin. Sesuai data yang diperoleh dari pustaka, dari Kromatogram HPLC dari rimpang temulawak dapat mendeteksi adanya 4 senyawa yaitu kurkumin 61-67%, desmetoksikurkumin 22-26%, bisdesmetoksikurkumin 1-3%, dan turunan kurkuminoid 10-11%. (Cahyono, 2011).

Berdasarkan hasil Rf dari ketiga senyawa kurkumin yang diperoleh dalam proses pemurnian ini dapat diketahui bahwa senyawa pada vial 11-16 adala kurkumin, vial 21-26 adalah demetoksikurkumin, dan vial no 31-41 adalah bidesmetoksikurkumin. Hal ini sesuai dengan pustaka, yaitu : curcuminoids standard dengan fase diam silica gel GF 254, Fase gerak kloroform-benzena-etanol (45:45:10) Rf = 0.4 curcumin, Rf = 0.35 desmethoxy curcumin, and Rf = 0.25 bisdesmethoxy curcumin. (Asghari, 2009). Berdasarkan kepolaran dari senyawa kurkuminoid maka dapat diketahui bahwa curcunin bersifat lebih non polar dibandingkan senyawa kurkuminoid lain secara berturut-turut: desmetoksikurkumin dan bisesmetoksikurkumin. Kurkumin lebih terlarut dan terbawa oleh fase gerak yang bersifat non polar dibandingkan terjerap dalam fase gerak yang bersifat lebih polar.B. Spektrofotometri UV-VisSampel: Kurkumin (vial no 11-16)

Pelarut: Etanol 96%

Pereaksi Geser: NaOH 2MKurkumin hasil pemurnian secara kromatografi kolom kemudian dilarutkan dalam pelarut etanol. Pelarut yang digunakan etanol karena kurkumin juga memiliki kelarutan yang baik dalam etanol selain metanol. Pada Hasil identifikasi kurkumin secara spektrofotometri UV-VIS pada diperoleh panjang gelombang maksimum pada 422 nm. Hal ini sesuai dengan pustaka yaitu panjang gelombang maksimum kurkumin dalam etanol berkisar antara 420-430 nm (Verghese, 1999) dan pustaka lain yang mengatakan panjang gelombang maksimum kurkumin dalam etanol adalah 425 nm sehingga dapat disimpulkan bahwa isolat yang didapat adalah kurkumin yang murni.Hasil pengujian kurkumin dalam pelarut metanol secara spektrofotometri UV-VIS setelah ditambah 3 tetes NaOH 2M, tampak ada perubahan warna senyawa dari kekuningan menjadi merah, serta hasil pembacaan panjang gelombang maksimumnya mengalami pergeseran sebesar 54 nm sehingga panjang gelombang maksimumnya menjadi 476 nm. Pergeseran panjang gelombang yang terjadi adalah pergeseran batochromic yaitu pergeseran absorbansi maksimum ke arah panjang gelombang yang lebih besar.

Adanya pergeseran puncak spectra terjadi karena adanya perubahan struktur dari kurkumin, dimana kurkumin mrmiliki gugus hidroksil bereaksi dengan NaOH (suatu basa kua)t sehingga akan mengionkan semua gugus hidroksil yang ada menjadi gugus fenolatE. KESIMPULAN

Dari Hasil pemurnian ini diketahui bahwa senyawa kurkuminoid terdiri dari kurkumin, desmetoksikurkumin dan bidesmetoksikurkumin.

Hasil Pemurnian kurkumin dari metode kromatografi kolom preparative diperoleh hasil kurkumin yang murni pada fraksi dari vial nomer 11-16 yang didentifikasi dengan metode Kromatografi Lapis Tipis.

Berdasakan hasil identifikasi secara spektrofotometri UV-Vis diketahui bahwa kurkumin hasil pemurnian memiliki puncak pada panjang gelombang 422nm dengan absorbansi sebesar 0,353. Terjadi pergeseran puncak spectra dari kurkumin sebesar 54 nm sehingga panjang gelombang maksimumnya menjadi 476 nm. Hal ini disebabkan karena terjadi perubahan struktur hridroksi pada kurkumin menjadi suatu senyawa fenolat.F. DAFTAR PUSTAKA

Asghari, G, A. Mostajeran, M. Shebli. 2009. Curcuminoid And Essential Oil Components Of Turmeric At Different Stages Of Growth Cultivated In Iran. Research in Pharmaceutical Sciences, April 2009; 4(1): 55-61Cahyono, Bambang, Muhammad Diah Khoirul Huda, dan Leenawaty Limantara. 2011. PENGARUH PROSES PENGERINGAN RIMPANG TEMULAWAK (Curcuma xanthorriza ROXB) TERHADAP KANDUNGAN DAN KOMPOSISI KURKUMINOID. Reaktor, Vol. 13 No. 3, Juni 2011, Hal. 165-171.

Food and agriculture organization of united states. 2003. Curcumin.www.fao.org/ag/agn/jecfa-addivitives/spec/monograph1/Additive-140.pdf

Kristanti, Alfinda Novi, dkk. 2008. Buku Ajar Fitokimia. Surabaya: Airlangga University Press.

Lide, David. 2001. Handbook of Chemistry and Physic.

Soesilo, Slamet, dkk. 1989. Vademekum Bahan Obat Alam. Jakarta: Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Departemen Kesehatan Repulik Indonesia. Siapkan fase diam Kieselgel 60 ukuran 0,063-0,200 nm

Kolom kromatografi dicuci bersih

Ditimbang fase diam : ekstrak dengan perbandingan 1:50

Fase diam dimasukkan wadah, disuspensikan dengna fase geraknya

Dipasang pada statif

Dibilas dengan fase gerak yang akan dipakai

Fase diam dimasukkan ke dalam kolom sampai homogen tanpa ada udara dengan fase gerak sampai 3-5cm di atas permukaan fase gerak

Ekstrak dicampur homogen dengan sedikit fase diam ( Kieselgel 60

Diamkan semalam

Ekstrak + fase diam dimasukkan merata pada permukaan fase diam pada kolom

Ditunggu hingga menyebar sampai ke dasar kolom kromatografi

Kemudian kran dibuka

Cairan yang keluar ditampung dalam vial yang sudah ditara 5 mL

NB : Usahakan fase gerak selalu ada di atas permukaan fase diam

Totolkan masing-masing kelipatan lima (1,6,11,16,) vial hasil kromatografi kolom pada lempeng silika gel GF 254 nm

Eluasi dengan fase gerak CHCl3:Benzena:Etanol (45:45:10)

Visualisasi dengan penampak noda larutan KOH 5% dalam etanol

Gabungkan filtrat dalam vial-vial yang mempunyai profil kromatografi yang sama kemudian lakukan KLT lagi terhadap filtrat hasil gabungan tersebut

Gabungkan filtrat dalam vial-vial yang mempunyai profil kromatografi yang sama kemudian lakukan KLT lagi terhadap filtrat hasil gabungan tersebut

Apabila masih terdapat vial yang mengandung lebih dari satu noda, lakukan kromatografi kolom lagi sampai diperoleh satu noda

Uapkan larutan kurkumin hasil pemurnian di atas sampai kering

Larutkan dalam etanol q.s

Amati spektrumnya pada panjang gelombang 300-600 nm pada spektrofotometri uv-vis

Tambahkan larutan NaOH dalam metanol 3 tetes, kemudian amati kembali spektrumnya

11

6

1

41

36

21

31

16

26

46

11

6

1

41

36

21

31

16

26

46

36

11

6

1

21

31

16

26

41

46

Gambar 4. Noda dengan penampak noda (KOH 5% dalam etanol)

Gambar 7. Pada sinar UV 366 nm dari fraksi vial nomer (Kiri ke Kanan): 31-41, 21-26, dan 11-16.

Gambar 6. Noda dengan penampak noda KOH 5% dalam etanol dari fraksi vial nomer (Kiri ke Kanan): 11-16, 21-26, dan 31-41.

Gambar 6. Pada sirar UV 25 4nm dari fraksi vial nomer (Kiri ke Kanan): 11-16, 21-26, dan 31-41.

Gambar 5. Noda hasil eluasi dari fraksi vial nomer (Kiri ke Kanan): 11-16, 21-26, dan 31-41.

Gambar 9. Spektra Spectrofotometri UV-Vis Kurkumin dalam pelarut etanol dan setelah penambahan NaOH

Gambar 8. Spektra Spectrofotometri UV-Vis Kurkumin dalam pelarut etanol