laporan kuljar

LAPORAN PRAKTIKUM

KULTUR JARINGAN

Disusun Oleh :

Nama : Sriatin Rahayu

NIM : K4309078

Kelompok : 6

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN BIOLOGI

FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN

UNIVERSITAS SEBELAS MARET

SURAKARTA

2012

HALAMAN PENGESAHAN

Laporan praktikum Kultur Jaringan ini disusun guna melengkapi tugas

mata kuliah Kultur Jaringan. Laporan ini telah diketahui dan disahkan oleh Co-

Assisten dan Dosen Kultur Jaringan pada tanggal : 20 Desember 2012

Di susun Oleh :

Nama : Sriatin Rahayu

NIM : K4309078

Kelompok : 6

Mengetahui,

Dosen Kultur Jaringan Co-Assisten

Dr. Ir. Endang Yuniastuti,M S Haries Apriliyana

NIP. 197006091994022001 NIM. HO708105

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan YME yang telah

memberikan Kasih dan Karunia- Nya sehingga penulis dapat menyusun dan

menyelesaikan Laporan Praktikum Kultur Jaringan ini. Penyusunan laporan ini

bertujuan untuk melengkapi tugas mata kuliah Kultur Jaringan pada semester VII

di Program Studi Pendidikan Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan

Universitas Sebelas Maret Surakarta. Dalam penyusunan laporan praktikum ini,

penulis menyadari sepenuhnya apabila tanpa bantuan, bimbingan dan dukungan

dari berbagai pihak tidak akan dapat terselessaikan dengan baik. Oleh karena itu,

penulis menyampaikan terima kasih kepada :

1. Dr. Ir. Endang Yuniastuti, MS dan Dr. Yudi Rinanto, M.P selaku Dosen mata

kuliah Kultur Jaringan yang telah memberikan izin kepada penulis dalam proses

penyusunan laporan ini

2. Seluruh Co-Assisten Praktikum Kultur Jaringan yang telah memberikan

bimbingan kepada penulis

3. Semua pihak yang telah memberikan bantuan moral maupun spiritual kepada

penulis, baik secara langsung maupun tidak langsung

Penulis menyadari bahwa masih terdapat banyak kekurangan, oleh karena

itu saran dan kritik penulis harapkan dari pembaca agar laporan ini menjadi lebih

baik. Demikian, semoga Laporan Praktikum Kultur Jaringan ini dapat bermanfaat.

DAFTAR ISIHALAMAN JUDUL ...................................................................................... i HALAMAN PENGESAHAN .........................................................................ii KATA PENGANTAR .................................................................................... iii DAFTAR ISI .................................................................................................. iv DAFTAR TABEL ...........................................................................................viii DAFTRA GAMBAR.......................................................................................ix

ACARA I. Pembuatan Larutan Stock, Pembuatan Media Kultur dan Sterilisasinya

A. Pendahuluan ..............................................................................................1 1. Latar Belakang .............................................................................. 1

2. Tujuan ............................................................................................2

B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2

C. Metode Praktikum............... ......................................................................4 1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4

2. Alat ................................................................................................4

3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja .....................................................................................

D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan1. Hasil Pengamatan...........................................................................2. Pembahasan....................................................................................

E. Kesimpulan dan Saran................................................................................1. Kesimpulan....................................................................................2. Saran..............................................................................................

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7

ACARA II. Kultur Jaringan Sansievera


2. Tujuan ............................................................................................2



2. Alat ................................................................................................4

3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja .....................................................................................

D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan1. Hasil Pengamatan...........................................................................

2. Pembahasan....................................................................................E. Kesimpulan dan Saran................................................................................

1. Kesimpulan....................................................................................2. Saran..............................................................................................

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7

ACARA III. Kultur Jaringan Nanas


2. Tujuan ............................................................................................2



2. Alat ................................................................................................4

3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja .....................................................................................



DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7

ACARA IV. Kultur Jaringan Jeruk


2. Tujuan ............................................................................................2



2. Alat ................................................................................................4

3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja .....................................................................................


E. Kesimpulan dan Saran................................................................................

1. Kesimpulan....................................................................................2. Saran..............................................................................................

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7

ACARA V. Kultur Jaringan Jambu


2. Tujuan ............................................................................................2



2. Alat ................................................................................................4

3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja .....................................................................................



DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7

ACARA IV. Sub Kultur


2. Tujuan ............................................................................................2



2. Alat ................................................................................................4

3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja .....................................................................................



DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7

LAMPIRAN

Surakarta, 19 Desember 2012

Penulis

DAFTAR TABEL Tabel 2.1 Rekapan kultur jaringan tanaman mawar (Rosa sp ) .......................... 11

Tabel 3.1 rekapan kultur jaringan tanaman nanas (Ananas comosus) ................ 19

Tabel 3.2 Rekapan Kultur Jaringan Tanaman wortel (Daucus carota) .............. 19

Tabel 4.1 Rekapan kultur Jaringan tanaman sansievera (Sansievera sp) ........... 27

Acara I

Pembuatan Larutan Stok, Media Kultur dan Sterilisasai Alat

A. Pendahuluan

1. Latar Belakang

Kultur jaringan merupakan salah satu metode perbanyakan tanaman secara

vegetatif. Kultur jaringan tertua dilakukan pada biji anggrek dengan tujuan untuk

mengecambahkannya dalam media yang kaya nutrisi karena biji dari anggrek tidak

mempunyai cadangan makanan. Kultur jaringan terus berkembang dari

mengkulturkan biji berkembang dengan mengkulturkan jaringan dan terus

berkembang hingga mampu mengkulturkan satu sel dari tanaman.

Penggunaan kultur jaringan mempunyai kelebihan yaitu mampu

memproduksi bibit yang seragam dalam jumlah banyak dan dalam waktu yang relatifr

singkat. Oleh karena itu kultur jaringan sering dijadikan solusi sebagai metode

perbanyakana tanaman dan juga dapat digunakan sebagai suatu metode penyimpanan

plasma nutfah yang tidak membutuhkan temapat yang besar.

Keberhasilan darai kultur jaringan sangat bergantung dari ketepatan

konsentrasi nutrisi yang berada di dalam media kultur. Ketepatan konsentrasi ini

menyangkut pada ketersediaan nutrisi bagi eksplan tanaman. Kelebihan nutrisi dari

tanaman akan menyebabkan tanaman mengalami keracunan unsur hara. Oleh karena

itu, pembuatan larutan stock dan sterilisasi media dianggap penting untuk diketahui

sebagai sarana penenunjang kebutuhan informasi akan kultur jaringan.

Sterilisasi dimaksudkan untuk menciptakan serta memelihara kondisi

aseptik. Seperti yang kita ketahui bahwa sumber kontaminan yang terdiri dari

jamur dan bakteri berukuran sangat kecil. Baik media tumbuh maupun eksplan

yang akan ditanam harus dibebaskan dari sumber kontaminan yang menyebabkan

kontaminasi.

Pada dasarnya, peralatan yang digunakan dalam teknik kultur jaringan

harus bersih dan steril. Peralatan yang tidak steril mengakibatkan tanaman yang

ditanam pada kultur jaringan menjadi terkontaminasi sehingga tidak dapat tumbuh

kembang dan menghambat proses pertumbuhan pada tanaman karena yang

disebabkan oleh jamur dan bakteri.

Unsur-unsur yang dibutuhkan pada media kultur antara lain seperti

aquadest, larutan stok terdiri atas hara mikro dan hara makro, vitamin, zat

pengatur tumbuh (ZPT), agar-agar, gula serta NaOH dan HCL.

2. Tujuan

Pada praktikum acara Sterilisasi dan Pembuatan Media Kultur mempunyai

tujuan yaitu :

a. Mengetahui langkah-langkah dalam pembuatan larutan stock.

b. Mengetahui langkah-langkah dalam pembuatan media kultur jaringan.

c. Mengetahui prosedur sterilisasi alat-alat penanaman dan media kultur..

B. Tinjauan Pustaka

Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur

jaringan. Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang

akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral,

vitamin, dan hormon. Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar,

gula, dan lain-lain. Zat pengatur tumbuh (hormon) yang ditambahkan juga

bervariasi, baik jenisnya maupun jumlahnya, tergantung dengan tujuan dari kultur

jaringan yang dilakukan. Media yang sudah jadi ditempatkan pada tabung reaksi

atau botol-botol kaca. Media yang digunakan juga harus disterilkan dengan cara

memanaskannya dengan autoklaf (Anonim, 2008). Cara kerjanya hampir sama

dengan alat masak pressure cooker sebab alat ini merupakan sebuah bejana yang

dapat diisi air dan ditutup rapat-rapat. Sumber pemanas autoklaf ada yang dari

listrik, tetapi ada pula yang harus diletakkan diatas kompor gas. Jika alat ini

dipanaskan maka akan terdapat uap air yang tidak dapat keluar karena bejana

tertutup rapat sehingga tekanan normal. Kenaikan tekanan uap ini akan

menyebabkan air mendidih diatas 100 %. Apabila tekanan uap ini tidak diatur

maka akan bertambah tinggi (Nugroho dan Sudito, 2000).

Apabila kita melakukan gerakan-gerakan selama bekerja di dalam

laboratorium, akan megakibatkan timbulnya suatu awan debu yang hampir tidak

tampak. Debu tersebut mengandung spora yang sangat besar jumlahnya. Bila

spora ini kontak dengan media kultur yang digunakan dalam pekerjaan tersebut,

spora kan tumbuh dengan cepat. Dalam beberapa hari spora akan tumbuh menjadi

koloni yang terlihat oleh mata biasa (Wetherel, 1982). Untuk membuat media

dengan jumlah zat seperti yang ditentukan, diperlukan penimbangan dan

penakaran bahan secara tepat. Ketidaktepatan ukuran dapat menyebabkan

terjadinya proses yang dikehendaki. Pada umumnya untuk suatu keperluan, media

yang telah dirumuskan dapat diubah atau diperbarui, dengan mengganti zat-zat

tertentu, atau menambah zat lain. Untuk melakukan perubahan ini diperlukan

acuan yang mantap atau pengalaman (Rahardja, 1988).

Media yang umum digunakan dalam kultur jaringan adalah medium

padat, medium semi padat dan medium cair. Keadaan fisik media akan

mempengaruhi pertumbuhan kulur, kecepatan pertumbuhan dan differensiasinya.

Keadaan fisik media ini mempengaruhi pertumbuhan antara lain karena efeknya

terhadap osmolaritas larutan dalam media serta ketersediaan oksigen bagi

pertumbuhan eksplan yang dikulturkan.

Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur

jaringan. Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang

akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral,

vitamin dan hormon. Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar, gula

(sebagai sumber energi), dan lain-lain. Zat pengatur tumbuh (hormon) yang

ditambahkan juga bervariasi, baik jenis maupun jumlahnya, tergantung dengan

tujuan dari kultur jaringan yang dilakukan. Media yang sudah jadi ditempatkan

pada tabung reaksi atau botol-botol kaca. Media yang digunakan juga harus

disterilkan dengan cara memanaskannya menggunakan autoklaf (Yuniastuti.

2012).

Komponen media kultur yang lengkap adalah sebagai berikut :

1. Air destilata (akuades) atau air bebas ion sebagai pelarut atau solvent

2. Hara-hara makro dan mikro

3. Gula (umumnya sukrosa) sebagai sumber energi

4. Vitamin, asam amino dan bahan organic lain

5. Zat pengatur tumbuh

6. Suplemen berupa bahan-bahan alami, jika diperlukan

7. Agar-agar atau Gelrite sebagai pemadat media (Yusnita, 2003).

Keberhasilan penggunaan metode kultur jaringan sangat tergantung pada

media yang digunakan. Media kultur jaringan menyediakan tidak banyak unsure

hara – unsure hara makro dan mikro, tetapi yang kabohidrat yang pada umnya

beberapa gula untuk menggantikan karbon yang didapat dari fotosintetis.

Penggunaan media ½ MS+IBA dengan konsentrasi antara 10 sampai dengan 100

mg/l yang ditambah dengan ZPT NAA 1mg/l mampu mengindukasi akar sampai

70%. Kombinasi ZPT auksin dan sitokinin yang diberikan bersamaan kedalam

media yang sama nampaknya selalau berhasil ( Herawan dan M. Na”iem, 2006 )

Auksin yang biasa digunakan dalam kultur jaringan adalah IAA.

Interaksi antara auksin dan sitokinin yang diberikan pada media yang diproduksi

secara endogen oleh tanaman menentukan arah perkembangan suatu kultur

tanaman. Sitokinin digunakan untuk pembelahan sel terutama bila ditambahkan

dengan auksin. Zat pengatur tumbuh mempunyai peran yang sangat penting dalam

mengatur pertumbuhan dan perkembangan eksplan dalam kultur. Pertumbuhan

dan morfogenesis dalam budidaya jaringan diatur oleh interaksi dan

keseimbangan antara pemberian ZPT pada media dengan hormon endogen yang

terdapat dalam eksplan (Hidayat, 2002).

Kultur jaringan atau biakan jaringan merupakan teknik pemeliharaan

jaringan atau bagian dari individu secara buatan (artifisial). Yang dimaksud secara

buatan adalah dilakukan di luar individu yang bersangkutan. Karena itu teknik ini

sering kali disebut kultur in vitro, sebagai lawan dari in vivo. Dikatakan in vitro

(bahasa Latin, berarti "di dalam kaca") karena jaringan dibiakkan di dalam tabung

inkubasi atau cawan petri dari kaca atau material tembus pandang lainnya. Kultur

jaringan secara teoretis dapat dilakukan untuk semua jaringan, baik dari tumbuhan

maupun hewan (termasuk manusia) namun masing-masing jaringan memerlukan

komposisi media tertentu (Anonim, 2008).

C. Metode Praktikum

1. Waktu dan Tempat Praktikum

Praktikum acara sterilisasi alat dam pembuatan media kultur dilaksanakan

pada hari Selasa, 8 Oktober 2012 pukul 19.00 s/d 21.00 WIB yang bertempat di

Laboratorium Kultur Jaringan Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret

Surakarta.

2. Alat

Alat pembuatan larutan stock - Timbangan analitik

- Sendok

- Pipet

- Erlenmeyer

http://id.wikipedia.org/wiki/Media

http://id.wikipedia.org/wiki/Manusia

http://id.wikipedia.org/wiki/Hewan

http://id.wikipedia.org/wiki/Tumbuhan

http://id.wikipedia.org/wiki/Kaca

http://id.wikipedia.org/wiki/Cawan_Petri

http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Inkubasi&action=edit

http://id.wikipedia.org/wiki/Bahasa_Latin

http://id.wikipedia.org/wiki/Jaringan

Alat pembuatan media tanam - Magneitk stirer

- Timbangan analitik

- Pipet

- Ph meter

- Gelas piala

- Botol-botol kultur

- Plastik pp 0.3 mm

- Karet gelang

- Kertas label

Alat sterilisasi - Autoklaf

3. Bahan

Bahan pembuatan larutan stock - Unsur hara makro dan mikro, vitamin, ZPT

- Aquadest Bahan-bahan pembuatan media

- Aquadest

- Larutan stok, terdiri dari hara makro dan mikro, vitamin serta ZPT

- Agar-agar

- Gula

- NaOH 1 N dan HCL 1 N

4. Cara Kerja

A.Membuat larutan stok a. Larutan stok media

1). Menimbang bahan-bahan kimia yang telah dikalikan menjadi beberapa

kali konsentrasi, misalnya untuk unsur hara makro dikalikan 20 dan unsur

hara mikro dikalikan 100 kali konsentrasi.

2). Melarutkan bahan-bahan kimia tersebut ke dalam aquadest dengan

volume tertentu, misalnya 500 ml.

3). Memasukkan masing-masing larutan ke dalanm botol dan

menyimpannnya ke dalam refrigerator.

b. Larutan stok zat pengatur tumbuh

1). Menghitung kebutuhan BAP 100 ppm sebanyak 300 ml adalah sebagai

berikut :

100ppm = 100mg/l

= 30 mg/0.3 l

= 30 mg/300 ml

2). Menghitung kebutuhan IBA 100 ppm sebanyak 100 ml adalah sebagai

berikut

100 ppm = 100 mg/l

= 10 mg/ 0.1 l

= 10 mg/100 ml

3). Melarutkan bahan dengan alkohol atau NaOH 1 N kemudian ditambah dengan aquadest sampai 300 ml untuk BAP dan 100 ml untuk IBA.

4). Memasukkan masing-masing larutan tersebut ke dalam botol dan menyimpannya ke dalam refrigerator.

B. Membuat media kultur Langkah-langkah pembuatan media (1 liter) adalah sebagai berikut :

1). Mengambil masing-masing larutan stok sesuai dengan ukuran yang

telah ditentukan dan memasukkannya ke dalam gelas piala.

2). Mengambil larutan stok ZPT sesuai dengan perlakuan

3). Menambah aquadest sampai 1000 ml.

4). Menambah gula sebanyak 30 gr.

5). Mengatur pH dalam kisaran 5,8-6,3 dengan menambahkan beberapa

tetes NaOH untuk menaikkan pH atau HCL untuk menurunkan pH. Pada

saat pengukuran pH, larutan media diaduk dengan magnetik stirer.

6). Menambahkan agar-agar 8 gr kemudian dididihkan

7). Menuangkan larutan media ke dalam botol-botol kultur kurang lebih 25

ml tiap botol

8). Menutup botol berisi larutan media dengan plastik

9). Memasukkan botol-botol berisi media ke dalam autoklaf untuk proses

sterilisasi pada tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit

10). Menyimpan media pada rak penyimpan media yang bertujuan untuk

mengantisipasi ada tidaknya kontaminasi pada media sehingga dapat

dicegah penggunaan media yang telah terkontaminasi pada saat

penanaman.

C. Media Penanaman

Dalam praktikum ini, media yang digunakan adalah media

Murashige dan Skoog (MS) yang dimodifikasi dengan penambahan ZPT

BAP 2 ppm dan IAA 0,5 ppm. Media kultur tersebut digunakan untuk

penanaman 5 macam eksplan dengan masing-masing eksplan diulang

sebanyak 2 kali untuk setiap mahasiswa / praktikan.

D. Melakukan sterilisasi Alat dan Media Kultur

1). Sterilissasi alat dan media kultur jaringan dilakukan secara bersama-

sama menggunakan autoklaf .

2). Membungkus alat-alat kultur seperti petridish, pisau scalpel dan pinset

dengan kertas koran.

3). Memasukkan botol-botol berisi media dan alat-alat kultur yang telah

dibungkus kertas koran ke dalam autoklaf untuk proses sterilisasi pada

suhu 121 C, tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit.

4). Menyimpan alat-alat kultur dalam oven

5). Menyimpan media pada rak penyimpanan media yang bertujuan untuk

mengantisipasi ada tidaknya kontaminasi pada media sehingga dapat

dicegah penggunaan media yang telah terkontaminasi pada saat

penanaman.

D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan

1. Hasil Pengamatan

Gambar 1. 1 Media kultur jaringan

2. Pembahasan

Media adalah tempat tumbuh eksplan yang di dalamnya

mengandung banyak nutrisi untuk menunjang kehidupan dan pertumbuhan

eksplan. Media merupakan faktor penentu keberhasilan dalam

perbanyakan tanaman dengan kultur jaringan (Matatula, 2003: 203).

Ciri-ciri media yang baik untuk kultur jaringan adalah

- media padat dan tidak lembek

- PH sesuai untuk kehidupan tanaman

- Mengandung Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) yang mendukung

kehidupan tanaman.

Sesuai pendapat Endang Yuniastuti (2009: 10), komposisi utama

media tanam kultur jaringan terdiri dari komponen berikut: (1) air distilata

(akuades) atau air bebas ion sebagai pelarut atau solven, (2) hara-hara

makro dan mikro, (3) gula (umumnya sukrosa) sebagai sumber energi, (4)

vitamin, asam amino dan bahan organic lain, (5) zat pengatur tumbuh, (6)

suplemen berupa bahan-bahan alami, jika diperlukan dan (7) agar-agar

atau gelrite sebagai pemadat media. Perbedaan komposisi media dapat

mengakibatkan perbedaan pertumbuhan dan perkembangan eksplan yang

ditumbuhkan secara in vitro (Marlina, 2004: 4).

Praktikum kali ini menggunakan media Murashige Skoog (MS)

yang sebelumnya telah dibuat larutan stok. Larutan stok merupakan larutan

pekat senyawa-senyawa kimia penyusun media yang memudahkan

penimbangan sehingga jumlah atau volume masing-masing komponen

media yang terbentuk dalam jumlah tepat. Larutan stok dibuat dalam

konsentrasi pekat 10 atau 100 kali konsentrasi akhir yang dibutuhkan

untuk media. Pada praktikum kali ini, untuk hara makro kecuali

CaCl2.2H2O dibuat larutan stoknya, untuk CaCl2.2H2O dibuat larutan stock

tersendiri karena apabila di campur zat ini akan mengendap. Media

Murashige skoog (MS) terdiri dari komponen-komponen berikut:

a. Garam-garam anorganik terdiri dari makronutrient (C, H, O, N, S, P, K,

Ca, Mg). N didapatkan dari NO3- atau NH4

+ atau asam amino. Mg dan S

didapatkan dari MgSO4.7H2O. P didapat dari NaH2PO4.H2O dan

KH2PO4. K didapat dari KCl, K2NO3 atau KH2PO4. K didapatkan dari

KCl, K2NO3 atau KH2PO4. Ca didapatkan dari CaCl2.2H2O atau

Ca(NO3)2. Dan Cl dari KCl atau CaCl2. Selain itu dibutuhkan juga

mikronutrient yang terdiri dari Cu, Zn, FeEDTA, B, Mo, Co, dan I.

b. Sumber karbon yang digunakan adalah sukrosa, sebagai sumber energi.

Konsentrasi sukrosa yang digunakan adalah 20.000- 45.000 mg/L.

c. Asam amino merupakan sumber N organik. Asam amino yang sering

digunakan adalah glutamine, asparagin, sistein, dan glisin.

d. Vitamin berfungsi sebagai katalisator dalam sistem enzim dan

diperlukan dalam jumlah kecil. Vitamin yang dibutuhkan pada sebagian

besar kultur jaringan tumbuhan adalah thiamin, yang diberikan dalam

bentuk Thiamin-HCl. Vitamin lain yang biasa digunakan adalah asam

nikotinat dan piridoksin HCl (vitamin B6).

Dalam media juga perlu diperhatikan tingkat keasamannya ( pH ).

Sel-sel tanaman yang dikembangkan dengan teknik kultur jaringan

mempunyai toleransi pH yang relatif sempit dengan titik optimal antara pH

5,0 – 6,0 (Daisy, 1994). Dalam pembuatan media pH-nya harus dijaga

pada pH 5,8 sampai 6,3 dengan penambahan KOH atau NaOH untuk

menaikkan pH dan dan HCl untuk menurunkan pH. pH harus dijaga pada

5,8 sampai 6,3 sebab pada kawasan pH ini merupakan pH yang optimum

untuk penyerapan hara oleh tanaman. Pada praktikum kali ini dilakukan

penambahan HCl sebanyak kurang lebih 5 tetes karena campuran media

yang didapat terlalu basa dan setelah dilakukan penambahan HCl

dilakukan pula penambahan NaOH sebanyak 2 tetes karena pH yang

didapat terlalu asam. Media yang terlalu asam menyebabkan media sukar

mengendap. Namun harus juga dihindari penambahan HCl dan NaOH

secara berlebihan karena akan mengurangi tingkat keberhasilan pembuatan

media.

Dari hasil pengamatan, media yang dibuat oleh kelompok kami

kurang berhasil. Ini karena setelah disterilisasi dan diletakkan di dalam rak

kultur, media tidak benar-benar memadat, agak cair dan agak lembek.

Permukaan media rata dan bagus tidak bergelombang sama sekali.

Keberhasilan dan kegagalan dalam membuat media dipengaruhi

oleh banyak hal meliputi :

a. Pengukuran komponen pembuatan media yang ditambahkan kurang

tepat.

b. Perataan komponen media dengan menggunakan magnetic stirer kurang

lama sehingga media yang di dapat belum benar-benar homogen.

c. Pemasakan media yang kurang matang sehingga komponen yang

ditambahkan terutama agar-agar belum tercampur dengan baik,

d. Pengambilan media dari autoklaf ketika sterilisasi terlalu cepat sehingga

media banyak yang gagal ditandai dengan penutup media yang rusak

ketika pengambilan.

Sterilisasi alat dan media

Untuk mendapatkan media yang baik harus didukung dengan

proses sterilisasi alat dan media yang baik pula, Sterilisasi adalah suatu

proses untuk mematikan semua organisme yang terdapat pada atau di

dalam suatu benda.

Dalam praktikum pembuatan media, sterilisasi yang dilakukan

meliputi sterilisasi alat-alat penanaman dan media tanam.

a. Sterilisasi alat-alat penanaman

Alat-alat tanam yang disterilisasi meliputi : Pinset, scapel,

Petridish, Botol-botol kultur. Sterilisasi pada alat tanam dilakukan

dengan sterilisasi fisik melalui pemanasan maupun sterilisasi

mekanik dan kimawi. Sterilisasi mekanik dan kimiawi dilakukan

dengan mencuci alat-alat menggunakan sabun yang mengandung

bahan kimiawi.

b. Sterilisasi media tanam

Sterilisasi media tanam dilakukan dengan sterilisasi fisik,

yakni dengan pemanasan menggunakan autoklaf. Media tanam yang

telah dimasukkan dalam botol kultur selanjutnya ditata pada rak

autoklaf dan dimasukkan ke dalam tabung autoklaf. Pada

prinsipnya, sterilisasi autoklaf menggunakan panas dan tekanan dari

uap air. Temperature sterilasi biasanya 121o C, tekanan yang biasa

digunakan antara 15-17,5 psi (pound per square inci) atau 1 atm

selama 45 menit. selanjutnya setelah 45 menit media dikeluarkan

dan ditata dalam rak kultur diruang steril.

Keberhasilan dan kegagalan sterilisasi bisa diakibatkan adanya

salah satu atau beberapa kunci pada autoklaf yang tidak menutup dengan

sempurna sehingga tekanan yang timbul dari autoklaf bocor ke luar.

Kegagalan sterilisasi akibat sebelum tekanan dalam autoklaf menurun dan

semua air yang ada di autoklaf belum habis autoklaf sudah terbuka

sehingga dapat menimbulkan ledakan atau kerusakan klep pengatur

tekanan pada autoklaf. Kegagalan sterilisasi dapat dihindari dengan jalan

mengikuti semua ketentuan dan prosedur pelaksanaan sterilisasi meliputi

penggunaan alat dan pelaksanaan prosedur sterilisasi.

1) Kesimpulan Dan Saran

a. Kesimpulan

Dalam pembuatan media sterilsasi alat yang dibutuhkan harus

steril dan terbebas dari jamur dan bakteri

Faktor penyebab kegagalan dalam sterilisasi alat dan pembuatan

media kultur antara lain karena alat yang digunakan tidak steril

ZPT yang digunakan harus sesuai yang dan memiliki takaran

yang tepat untuk perlakuan.

b. Saran

Alatnya harus lebih steril dan bebas dari jamur dan bakteri

Seharusnya lebih teliti lagi dalam pembuatan media kuljar

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 2008. Kultur Jaringan. http://id.wikipedia.org/wiki/Kultur_jaringan. Diakses tanggal 15 Desember 2012 jam 18.00 wib.

Hendra, T. 2007. Kultur Jaringan. http://lelos66.com.htm. Diakses pada tanggal 16 desember 2012

Hidayat. 2002. Respon Subkultur Pisang Canvedish Terhadap Naphtalene Acetic Acid dan Benzil Aminopuryn. Buletin Pertanian dan Peternakan. Vol 3(5):1-10.

Nugroho, A dan Sudito. 2000. Teknik Kultur Jaringan. Jakarta: Penebar Swadaya.

Rahardja, P.E. 1988. Kultur Jaringan Teknik Perbanyakan Tanaman Secara Modern. Panebar Swadaya. Jakarta

T . Herawan dan M. Na”iem. 2006. pengaruh Jenis Madia dan Konsentrasi ZPT Kinetin Terhadap Perakaran Pada Kultur Jaringan Cendana ( Santalum album Linn ). Agrosains Volume 19 ( 2 ) : 198.

Wetherel, D.F. 2008. Propagasi Tanaman Secara In Vitro. Avery Publishing Group Inc. New Jersey.

Yuniastuti, Endang. 2012. Petunjuk Praktikum Kultur Jaringan. Surakarta:uns Press

Yusnita. 2003. Kultur Jaringan. www.bioteknologi-unibraw.ac.id. Diakses pada 18 Desember 2012.

http://www.bioteknologi-unibraw.ac.id/

http://id.wikipedia.org/wiki/Kultur_jaringan

laporan kuljar

Education