4.Pemeriksaan GlukosaMetode GOD-PADPrinsip MetodeGlukosa
ditentukan setelah oksidasi enzimatik dengan adanya oksidasi
glukosa. Hidrogen peroksida yang terbentuk bereaksi dalam katalisis
peroksidase dengan fenol dan 4-aminophenazone warna merah-violet
quinoneimine sebagai indikator.Prinsip ReaksiGlukosa + + O Glukonic
acid + 2 + 4-aminophhenazone + phenol quinoneimine + 4
RGTenzimatik reagentBuffer posfat (pH 7.5)100
mmol/I4-Aminophenazone 0,25mmol/IFenol 0,75mmol/IOksidase glukosa
.15 KU/IPeroksida .15 KU/IMutarotase .2.0 KU/INatrium azide 0.095
StabilizersSTD standarGlukosa100 mg/IPersiapan ReagenRGT dan STD
siap untuk digunakan Stabilitas Reagen Reagen tetap stabil setelah
dibuka sampai dengan tanggal kadaluarsa. Bila disimpan pada suhu
2-8. Hindari kontaminasi. Pada suhu 15..25 rgt stabil selama 2
minggu Spesimen Serum, Plasma .Glukosa stabil selama 24 jam pada
suhu 2-8 . Pada serum atau plasma dalam waktu 30 menit. Setelah
diperiksa.PemeriksaanPanjang gelombang: Hg 546 nmCeelah optik:1
cmSuhu: 2025 atau 37Pengukuran: terhadap blanko reagen hanya satu
blanko reagen digunakan untuk satu kali seri pemeriksaan.
Skema pemipetanPipet kedalam tabungMakroReagen
blankoStandarSampel
serum--20 ml
STD-20 ml-
RGT2000 ml2000 ml2000 ml
MikroReagen blankoStandarSampel
serum--10 ml
STD-10 ml-
RGT1000 ml1000 ml1000 ml
Campur, inkubasi selama 10 menit, pada suhu 20-25 atau 5 menit
pada suhu 37Absorben standar dan sampel terhadap blanko reagen
dalam waktu 60 menit.PerhitunganC = X C. St (100 mg/dl)C = X C. St
(5,55 mmol/L)LinearitasTes linear glukosa pada konsentrasi glukosa
400mg / dl atau 22,2 mmol / I. encerkan sampel 1 + 2 dengan
aquadest. konsentrasi sample diatas batas limit kalikan dengan
3.
Nilai NormalSerum, plasma : 75-115 mg/dl atau 4.2 6.4
5.PEMERIKSAAN UREA
Metode Enzymatic kolorimetri dengan modifikasi berthelot
Prinsip Urea dihidrolisis dengan adanya air dan urease untuk
menghasilkan amonia dan karbon dioksida. Dengan modifikasi
Berthelot ion amonium direaksikan dengan hipoklorit dan salisilat
untuk yang berwarna hijau. Peningkatan absorbansi pada panjang
gelombang 546 nm atau 578 nm sebanding dengan kadar urea dalam
sampel.
Komposisi ReagenRGT1 Reagen 1Fosfat buffer (pH 7.0)120
mmol/lNatrium salisilat 60 mmol/lNatrium nitroprusside 5 mmol/lEDTA
1 mmol/l
RGT2 Reagen 2Fosfat buffer (pH < 13)120 mmol/lHipoklorit0.6
g/l clIritasi mata dan kulit. jauhkan dari jangkauan anak-anak.
setelah kontak dengan mata, bilas dengan air dan berkonsultasi
dengan dokter.ENZ EnzymUrease> 500 KU/l
STDStandarUrea80 mg/dl atau 13.3 mmol/lSetara dengan BUN 37.28
mg/dl atau 6.2 mmol/dlNatrium azida 0.095 %
Persiapan ReagenRGT2 dan STD siap pakai.Enzim reagen 1a campuran
dari isi botol ENZ dengan botol RGT1:Contoh:1 ml ENZ+ 100 ml RGT1
atau 1000 l ENZ+100.000 l RGT1100 l ENZ+10.000 l RGT1 10 l ENZ+1000
l RGT1
Stabilitas ReagenReagen stabil sampai pada masa expayer dengan
penyimpan pada suhu 2...8oC.RGT1, RGT2, dan ENZ stabil setelah
dibuka selama 6 minggu pada 2...8oC atau 2 minggu di 15...25oC.STD
stabil sampai pada masa expayer.Enzim reagen 1a stabil setelah
dibuka selama 4 minggu pada suhu 2...8oC atau 2 minggu di
15...25oC.Hindari kontaminasi setelah dibuka.
SpesimenSerum, plasma, plasma heparin, dan urin. Urin encer 1 +
100 dengan aqua bidest..Jangan menggunakan serum lipemic.Serum atau
plasma dapat disimpan sampai 3 hari pada suhu 4oC, untuk waktu yang
lama mereka harus terus dibekukan pada suhu -20oC.
Pemeriksaan Panjang gelombang:Hg 578 nm, Celah optic:1
cmSuhu:20-25oC atau 37 oCPengukuran: Terhadap blanko reagen. Hanya
menggunakan satu blanko reagen untuk satu seri pemeriksaan.
Skema PemipetanPipet ke dalam tabung
reaksiBlankoStandarSampel
Serum------10 l
Standar ---10 l---
Enzim reagen 1a1000 l1000 l1000 l
Campur dan inkubasi selama 5 menit. pada 20-250C atau selama 3
menit pada 370C
RGT21000 l1000 l1000 l
Campur, inkubasi selama 10 menit. pada 20-250C atau 5 menit. di
370C. Mengukur absorbansi sampel dan STD terhadap reagen blanko
dalam waktu 60 menit.
Perhitungan Urea Dan Konsentrasi BUNC = Faktor Konversi Untuk
BUN, UreaC (BUN) = 0.466 C (urea)C (Urea) = 2.14 C (BUN)
Karakteristik KinerjaLinearitasserum/plasma:sampai 400 mg/dl
atau 6.66 mmol/l (urea)Urin :sampai 400 g/l atau 6600 mmol/l
(urea)Sampel dengan pengenceran tertinggi harus diencerkan 1 + 1
dengan aqua bidest. Hasil kalikan dengan 2.
Nilai NormalSerum (urea):10 50 mg/dl atau 1.7 8.3 mmol/lUrin
(urea):20 35 g/latau333 583 mmol/24 h
7.PEMERIKSAAN ASAM URATMetode PAPTes enzim koorimetri asam urat
dengan factor pembersih lemakPrinsip MetodePenentuan asam urat oleh
reaksi dari uricase bereaksi dengan H2O2 bereaksi di bawah katalis
peroksidase dengan 3,5 dikloro 2 hidroxy benzene-sulfat (DCHBS) dan
4 aminopherazone (PAP) untuk memberikan warnah merah-pink dengan
pewarna quinoneimine sebagai indikator.Prinsip ReaksiAsam urat + O2
+ 2 H2O uricase allantion + CO2 + H2O2
2 H2O2 + DCHBS + PAP peroksidase quinoneimine + HCL + 4H2O
Komposisi ReagenRGT : 4 x 30 ml atau 4 x100 reagen
enzimPhosphate buffer50 mmol/liter4 aminophenazone0,3
mmol/literDCHBS4 mmol/literUricase 200 u/literPeroxidase 1000
u/liter
STD : 3 ml standar
Asam urat8 mg/liter atau 476 mmol/literSodium azide0,095 %
Persiapan ReagenRGT dan STD siap untuk digunakan.Stabilitas
ReagenReagen stabil bahkan setelah dibuka sampai tanggal kadaluarsa
dinyatakan bila disimpan pada suhu 2-80C. Kontaminasi reagen harus
benar-benar dihindari. Disimpan pada suhu 15-25oC. RGT stabil
selama 2 minggu.Spesimen Serum, plasma EDTA, plasma heparin, urine
Encerkan urine 1:10 dengan aqua bidest. Catatan : specimen lofomic
biasanya menghasilkan kekeruhan campuran reagen yang mengarah
kehasil palsu melalui faktor pembersih lemak tersebut akan
menghasilkan kekeruhan yang disebabkan oleh kekeruhan lipemik.
PemeriksaanPanjang gelombang: Hg 546 nmCelah optic: 1 cmSuhu:
20-25oC atau 37oCPengukuran: terhadap reagen kosong per seri yang
diperlukan.Skema Pemipetan
BlankoStandarSampel
Serum--20ul
Standar-20ul-
RGT1000ul1000ul1000ul
Campurkan, inkubasi 10 menit dengan suhu 20-25oC, dan 5 menit
dengan suhu 37oC.Baca absorben sampel dan standar terhadap blanko
reagen dengan panjang gelomabng 546 nm.PerhitunganKalkulasi dari
konsentrasi asam urat, serum, plasma.C : Abs Sampel x C.Standar (8
mg/dl) Abs standarC: Abs sampel x C. standar (476 Mmol/liter)
UrinC : Abs sampel x C. Standar (88 mg/dl) Abs standarC : Abs
sampel x C.standar (5235 mg/Mmol/liter Abs standarKarakteristik
KinerjaLinearitas: tes linearty ini sampai dengan konsentrasi asam
urat 20mg/liter atau 1190 mmol/liter. Encerkan sampel sampai dengan
konsentrasi yang lebih tinggi 1:1 dengan garam fisiologis (NaCl
0,9%).Nilai RujukanLaki-laki: 3,4-7,0 mg/liter atau 200-400
Mmol/literPerempuan:2,4-5,7 mg/liter atau 140-340 Mmol/literUrin
:250-750 mg/liter atau 1,5-4,5 Mmol/24 jam
8.Pemeriksaan BilirubinMetodeMetode jendrassik Untuk direct (D)
dan total bilirubinUji fotometrik untuk langsung dan total
bilirubin Prinsip MetodeBillirubin bereaksi dengan diazotigasi asam
sulphanilic untuk menghasilkan warna merah azo. Absorbansi pewarna
ini 546 nm berbanding lurus dengan konsentrasi billirubin dalam
sampel. Reaksi Glucuronies billirubin larut dalam air bereaksi
secara langsung dengan DSA sedangkan albumin billirubin tidak
langsung terkonjugasi hanya akan bereaksi dengan DSA dengan
akselerator : Total bilirubin = direct + indirect billirubin
Prinsip reaksiAsam sulphanilic + natrium nitric DSA
Billirubin + DSA direct Azobillirubin
Billirubin + DSA + Accelerator total azobillirubin
TBRKomposisi Reagen
1 X 100 ML (Total Billirubin reagent) Asam sulphanilic= 14 mmol
/L Asam klorida= 300 mmol/L Kafcin (Akselerator)= 200 mmol/L
Natrium benzoate= 420 mmol/L
TNRDBR1 x 9 ml (Total- Nitrit reagent ) = 390 mmol/L ,untuk
menentukan total billirubin natrium nitric ( , R 22) 1 x 100 ml (
Direct billirubin reagen ) Asam sulphanilic= 14 mmol/L DNRAsam
klorida= 300 mmol/L 1 x 9 ml ( Direct-Nitrik reagen ) Untuk
penentuan direct bilirubin natrium nitrit.Persiapan Reagen dan
StabilitasKedua reagen dan solusi nitric siap untuk digunakan
stabil, bahkan setelah pembukaan, naik tanggal kadaluwarsa
diberikan bila disimpan pada suhu 15-25C. Hindari
kontaminasiSpesimenSerum atau plasma heparin Menghindari hemolitik
dan sampel lipemic harus dilindungi dari cahaya langsung.
Stabilitas : Billirubin stabil selama 3 hari bila disimpan cahaya
di proteksi pada suhu 2-8CPemeriksaan Panjang gelombang : 546 nm
Celah optic : 1 cm Suhu: 20-25 C Pengukuran : terhadap blanko
sampelProsedurTotal bilirubinPipet ke dalam kuvetBlanko
sampelSampel
TBRTNR1000 l----1000 l1 tetes
Campur secara menyeruruh , inkubasi selama 5 menit
sampel100 l100 l
Campuran , inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit.
Mengukur absorbansi sampel terhadap metode blanko sampel ( A 546
)
1 Tetes = 40 lDirect bilirubin Pipet ke tabungSampel
kosongSampel
DBRDNR1000 L----1000 L1 Tetes
Campuran secara menyeluruh, inkubasi sampel dalam waktu 2
menit
Sampel100 l100 l
Campuran , inkubasi pada suhu kamar secara tepat 5 menit .
mengukur absorbansi sampel terhadap blanko sampel .
PerhitunganMenghitung konsentrasi total dan langsung bilirubin
dengan menggunakan factor 13.0 konsentrasi bilirubin (mg/dl)= A546
X 13.0 (mg/dl) x 17.1 = (mol/L). Konsentrasi Bilirubin total =
absorbansi sampel X F (13,O mg/dl ) Bilirubin direct =absorbansi
sampel X F (13.0 mg/dl ) Bilirubin indirect = X F (13.0 mg/dl)
LinearitasLinearitas : pengujian kadar logam adalah linear hingga
25 mg/dl. Konsentrasi bilirubin melebihi 25 mg/dl. Encerkan sampel
1:4 dengan fisiologis (0.9 %) dan ulangi pengujian tersebut.
Kalikan hasilnya dengan 5.
Nilai normalTotal bilirubin(mg/dl)( mol/I)
bayi baru lahirberusia 5 hariberusia 1 bulanorang
dewasa5121.51.185.5205.025.618.8
Bilirubin direct
Dewasa0.254.3
9.PEMERIKSAAN KOLESTEROLMetode CHOD-PAP (Kolesterol Oxidase
posfat Amino Penazon)Tes kolometri enzimatik untuk kolesterol
dengan faktor kliring lipidPrinsip MetodeKolesterol ditentukan
setelah hidrolisis enzimatik dan oksidase indikator quinoneimine
terbentuk dari hidrogen peroksida dan 4 eminophenazone dengan
adanya fenol dan peroksidase.Prinsip ReaksiCHE (Cholestreol
esterase)Cholesterolester + O cholesterol + fatty Acid
CHO (Cholesterol Oxidase)Cholesterol + cholestene-3-one +
POD (Posfat Oxidase)2 + 4-amino cholesterol + 4O Phenazone +
phenol
Komposisi ReagenRGT4x30 ml, 3x250 ml atau 4x100, ml reagen
enzimBuffer posfat100 mmol/l4-aminophenazone0,3 mmol/lFenol5
mmol/lPeroksidase >5 KU/lCholesterolesterase>150
U/lCholesteroloxidase>100 U/lNatrium oxida0,05 %STD 3 ml standar
Cholesterol 200 mg/dl atau 5,17 mmol/lPersiapan ReagenRGT dan STD
siap untuk dipakai.Stabilitas ReagenReagen yang stabil setelah
dibuka di buka dan sampai dengan masa expayer bahkan setelah
pembukaan, disimpan pada 2- C. Reagen yang telah dibuka akan stabil
selama 2 minggu disuhu 15-. Hindari kontaminasi.Spesimen Serum,
plasma heparinist, atau EDTA plasmaCatatan : serum lipemic jika
menghasilkan kekeruhan dari campuran sampel/larutan reagen yang
mengarah ke hasil palsu meningkat. Tes koleterol liquicolor
menghindari peningkatan hasil ketinggian palsu melalui built-in
faktor kliring lipid (LCF) . LCF membersihkan secara total kekruhan
yang disebabkan oleh spesimen lipemic dapat dihindari.
PemeriksaanPanjang gelombang : Hg 546 nmCelah optik : 1 cm Suhu
: 20... / CPengukuran : dengan blanko reagen, hanya satu blanko
reagen untuk 1 seri pemeriksaan.Skema Pemipetan Pipet kedalam
tabung reaksiPipet ke kuvvets Blanko Standar Sampel
Sampel ....... ...... 10 ml
Standar ..... 10 ml ........
RGT 1000 ml 1000 ml 1000 ml
Perhitungan Konsentrasi KolesterolDengan faktorPanjang Gelombang
C (mg / dl) C (mmol/l)
Hg 546 840 x A 21,7 x A
500 nm 553 x A 14,3 x A
Dengan standar Hanya standar yang direkomendasikan oleh manusia
(tertutup dalam kit / tersedia secara terpisah, REF 10015) harus
digunakan.
Absorbance sampel C = x C ( Standar 200 mg/dl) Absorbance
standar
Absorbance sampel C = x C ( Standar 5,17 mmol/l) Absorbance
standar
Karakteristik KerjaLinearitasTes linear sampai dengan
konsentrasi kolesteroldari 750 mg/dl (19,3 mmol/l), sampai
diencerkan dengan ketinggian konsentrasi kolesterol 1+2 dengan
garam physiogical (NaCl 0,9 %) dan ulangi determnasi. Hasilnya
dikalikan 3.Interpretasi Hasil (Nilai Normal)Diduga Kelebihan220
mg/dl5,7 mmol/l
Peningkatan Kelebihan260 mg/dl6,7 mmol/l
10.PEMERIKSAAN TRIGLISERIDAMetodeTrigliserida dutentukan setelah
hidrolisis enzimatik dengan lipases. Idikatornya adalah
quinoneimine yang terbentuk dari hydrogen peroksida,
4-amino-antipirin dan 4-klorophenol dibawah pengaruh katalitas dari
peroksidasi.Prinsip KerjaTrigliserida lipases Gliserol + Jaringan
asam lemakGliserol + ATP GK Gliserol-3-pospat +
ADPGliserol-3-pospat-O2 GPOdihidroksiaton pospat + H2O2H2O2 +
4-aminoantipirin POD quinoneimine + HCl + H2O2 + 4-Klorophenol
RGTKomposisi Reagen15 ml; 100 ml atau 250 ml monoreagenPIPES
buffer (pH 7,5)50 mmol/l4-klorophenol5 mmol/l4-aminopenazone0,25
mmol/lIon magnesium4,5 mmol/lATP2 mmol/lLipases 1300 U/lPeroksidase
500 U/lGliserol kinase 400 U/lGliserol-3-pospat oksidase 1500
U/lSodium azide0,05%
STD3 ml standarTrigliserida200 mg/dl atau 2,28 mmol/lPersiapan
Reagen dan StabilitasRGT dan STD siap untuk digunakan. Reagen tetap
stabil setelah dibuka, sampai penentuan tanggal kedaluarsa bila
disimpan pada suhu 2-8C. Pada suhu 20-25C RGT stabil dalam waktu 4
mingguPencemaran Yang Harus Dihindari:Melindungi dari
cahaya.SpesimenSerum, Plasma heparin atau Plasma EDTA.Keseimbangan:
3 hari pada 2-8C 4 bulan pada suhu -20CCatatan: Lipemic specimen
biasanya menghasilkan kekeruhan dari campuran reagen dan sampel
yang memimpin untuk menghasilkan hasil yang sangat baik.
Pemeriksaan trigliserida diuji untuk memastikan bahwa pemeriksaan
ini menghasilkan hasil yag sangat baik sampai selesai, itu dibentuk
didalam Lipid Clearing Factor (LCF). LCF membersihkan total
kekeruhan yang disebabkan dari spesime lipemic.PemeriksaanPanjang
gelombang: 500 nm, Tinggi 546 nmGaris batas pegelihatan: 1 cmSuhu:
20-25C atau 37CUkuran : Berbeda dengan reagen blanko (RB). Hanya
satu reagen blanko per rankaian yang diperlukan.PemipetanSilahkan
gunakan HUMAN standar trigliserida yang tersedia dengan syarat
digunakan per kotak atau terpisah: REF 10163Dipipet kedalam
kuvetRBSampel atau STD
Sampel/STD---10 ul
RTG1000 ul1000 ul
Campur dan inkubasi 10menit pada suhu 20-25C atau 5 menit pada
suhu 37C. Ukur absorban dari sampel (Asampel) dan standar
(Astandar) berbeda dengan reagen blanko dalam 60 menit.
Perhitungan Konsentrasi Trigliserida:C = 200 x [mg/dl] atau C =
2,28 x [mmol/l]SifatLinearitasUji linearitas adalah uji untuk
menguji kenaikan konsentrasi trigliserida dari 1000 mg/dl atau 11,4
mmol/l. Sampel degan kosentrasi tinggi memiliki kelemahan 1+4
dengan garam fisiologi (0,9%) dan retested. Mengalihkan hasil yang
mendekati 5.
Interpretasi Klinis Untuk Kemungkinan AtheoscleoritikDicurigai:
diatas 100 mg/dl atau 1,71 mmol/lMeningkat: diatas 200 mg/dl atau
2,28 mmol/l.11.PEMERIKSAAN LDL- CHOLESTEROLTujuanParameter
pemeriksaan LDL Cholesterol adalah pemeriksaan enzymatic homogeny
langsung untuk pengukuran kuantitatif LDL- Cholesterol (LDL). LDL
dianggap sebagai komponen lemak yang menaikkan resiko terhadap
jantung coroner (CHD).MetodeTest mengkombinasi 2 langkah :1. Dalam
langkah pertama chylomicrons, VLDL, dan HDL cholesterol dihilangkan
secara khusus melalui reaksi enzymatic2. Dalam langkah kedua LDL-
cholesterol yang tertinggal diukur melalui reaksi enzymatic khusus,
juga memakai surfactants specific untuk LDL. Kombinasi ini membuat
pemeriksaan ini lebih spesifik untuk LDL dari pada metoda
lain.Prinsip ReaksiLangkah Pertama CHE + CHOHDL, VLDL dan
chylomicrons ---------------------- > cholestenone + H2O2
Kondisi Khusus
2 H2O2 ---------------------- > 2 H2O + O2
Langkah kedua
CHE + CHOLDL------------------------ > cholestenone +
H2O2Surfactant khusus
Peroxidase2H2O2 + chromogen------------------------ > zat
warna qulnone
Isi, Komposisi reagen dalam test
R1160 ml Enzyme (tutup merah)50 mmol/lBuffer Goods, pH 7,0 (250
C)600 U/lCholesterol esteruse500U/lCholesterol oxidase400
UmlKatalaseN- (2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-5-Dimethoxyaniline
(HDAOS)0,56 mmol/lDeterjen0,3 % w/vPengawet0,1 % w/v
R21ml substrat (tutup biru)Peroxidase4000 U/l4- Aminoantipyrin
(4- AA)4 mmol/lBuffer goods , pH 7,0 (250C)50 mmol/lNatrium
azida0,09%Deterjen> 1 % w/v
31 ml CalibratorCholesterol
Persiapan Reagen dan Stabilitas
R1 dan R2 siap pakai Stabilitas : setelah reagen dibuka stabil
sampai 1 bulan bila disimpan pada 2-80C. Hindari kontaminasi.
Jangan dibekukan Tutup jangan terbuka
Calibrator
Rekonstitusi isi vial dengan 4 ml tempat air suling segar bebas
germ,tutup vial dan putar hati-hati untuk melarutkan semua
lyophilisat. Hindari buih. Biarkan selama 30 menit sebelum
digunakan.Stabilitas : 10 hari pada 2-8oC. Bila perlu, calibrator
segar yang dibuat dapat dibagi dalam beberapa bagian dan disimpan
beku pada suhu 20oC selama 30 hari. Membekukan dan mencairkan hanya
sekali, campur dengan hati-hati selalu mencairkan.
Spesimen
Serum, plasma Stabilitas : Dianjurkan untuk memeriksa langsung
setelah sampling. Serum dapat disimpan pada suhu 2-8oC sampai 5
hari Dalam plasma, konsentrasi anti koagulan berikut tidak boleh
lebih :1. EDTA -2 Na < 200 mg/dl;2. Na- sitrat < 1000
mg/dl;3. Heparin < 50 mg/dl;4. NaF < 2000 mg/dl Tidak
dipengaruhi trygliserida sampai 1000 mg/dl, hemoglobin sampai 500
mg/dl, bilirubin sampai 30 mg/dl, asam askorbat sampai 50 mg/dl dan
sampel yang agak keruh. Sampel dengan triglyserida yang melebihi
1000 mg/dl di encerkan dengan garam fisiologis (0,9 %) 1:1 dan
kalikan hasil dengan 2.
Pemeriksaan
Panjang Gelombang: Hg 578 nm Celah Optik: 1 cmSuhu:
37oCPengukuran: terhadap blanko reagen (RB) cukup 1 blanko per
seri
Prosedur (manual)
Hangatkan reagen dan cuvet sampai 37oC. Suhu harus dijaga
konstan (0,5 oC) selama test.
Pipet kedalam cuvetBlanko StandarSampel
AquabidessSampelStandarR110------750
------10750
---10---
Campur dengan hati-hati, inkubasi selama 5 menit tepat padasuhu
37oC .
R2250 250 250
Campur dengan hati-hati, inkubasi pada suhu 37oC dan baca
absorbans calibrator dan sampel terhadap blanko reagen (RB) setelah
5 menit.
Test dapat dijalankan dalam mode kinetic fixed time pada
analiser.
Perhitungan
Hitung konsentrasi sampel sebagai berikut : sampelCsampel =
----------------- C (131,6 mg/dl) standarFaktor konversi : C
(mg/dl) 0,02586 = C (mmol/l)
Linearitas
Sampai LDL-cholesterol 1000 mg/dl (prosedur manual).Bila
digunakan analiser, batas linearitas tergantung pada pemakaian.
Jika konsentrasi LDL melebihi range pengukuran, encerkan sampel 1+1
dengan saline (0,9%) dan ulangi pemeriksaan. Kalikan hasil dengan
2.
Nilai Rujukan
Laki-lakiWanitaResiko menurun untuk CHD< 50 mg/dl< 63
mg/dlResiko meningkat untuk CHD> 172 mg/dl> 16si, tiap
laboratorium 7 mg/dl
Range ini diberikan hanya sebagai orientasi, tiap laboratorium
harus membuat range rujukan sendiri, Sex, diet, umur, lokasi
geografi dan factor lain mempengaruhi nilai yang diharapkan.
Kontrol kualitas
Semua serum manusia berdasarkan serum control dengan kadar
LDL-cholesterol yang diukur dengan metoda ini dapat
dipakai.12.PEMERIKSAAN HDL Kolesterol
PRINSIP METODEKilomikron, VLDL (Veri low density lipoproteins)
dan LDL (low density lipoproteins) di endapkan dengan penambahan
asam fostotungstat dan magnesium klorida. Setelah disentrifuge
cairan supernatan mengandung HDL (High density lipoprotein).bagian,
dengan pengujian dengan kolesterol HDL dan tes kit.
PRINSIP REAGENIsi, komposisi reagenPREC4 x 80ml dasar Asam
fosfotungstat0,55 mmol/lMagnesium klorida25,00 mmol/lSTD1 x 3 ml
standar Kolesterol50 mg/dl or 1,29 mmol/l
PREC aPreparasi reagen Dasar untuk uji makro Gunakan PREC murni
Dasar untuk uji semi mikroEncerkan 1 botol PREC dengan 20ml
aquabides atau encerkan 4 bagian dalam botol dengan satu bagian
aquadest (4 + 1).
STDSTD siap untuk digunakan dan dapat dikerjakan secara langsung
dalam tes / uji. Yang dibutuhkan adalah tidak adanya pengendapan.
Factor dari kalkulasi terdiri dari pengenceran rasio.
Stabilitas Reagen PREC stabil / tidak berubah, meskipun setelah
dibuka, hingga sampai pada tanggal kadaluwarsa bila disimpan pada
suhu 2 25oC. di hindarkan dari kontaminasiSPESIMENSerum, plasma
heparin atau plasma EDTA
PENGUKURANLihat kit kolesterol1. PengendapanPipet ke dalam
tabung sentrifugemakroSemi-mikro
SerumPrec aPrec b500l1000l..200l..500l
Campur, inkubasi selama 10 menit pada suhu kamar. Di sentrifuge
sekurang-kurangnya 2 menit jika 10000 gram, dan kemungkinan lain 10
menit jika 4000 gram.
Setelah di sentrifuge, pisahkan supernatant dari endapan dan
setelah 1 jam dan gunakan konsentrasi kolesterol untuk pemeriksaan
HDL kolesterol dengan reagen kolesterol.2. Ukuran Kolesterol Pipet
dalam tabungReagen BlankoStandar Sampel
AquabidestStandarHDL
supernatantReagen100l....1000l..100l..1000l.....100l1000l
Campurkan, inkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC atau 10 menit
pada suhu 20 25oC. ukur absorbance pada sampel dan standar terhadap
reagen blanko sekitar 60 menit ( A)
Kalkulasi pada HDL kolesterol dengan faktorPanjang
GelombangMakro Semi mikro
C = [mg/dl]= A xC= [mmol/l]= A xC= [mg/dl]= A xC= [mmol/l]= A
x
Hg 546 nm2747,093208,2
500 nm1804,652105,43
Kalkulasi HDL kolesterol dengan menggunakan STD1. Metode makroC
= Abs sampel x 150 mg/dlC = Abs sampel x 3,87 mmol/l Abs standar
Abs standar2. Metode semi mikroC = Abs sampel x 175 mg/dl C = Abs
sampel x 4,52 mmol/l Abs standar Abs standar
Kalkulasi pada LDL kolesterolMassa LDL kolesterol ( LDL C)
adalah akumulasi dari jumlah massa kolesterol (TC). Massa HDL
kolesterol (HDL-C) dan massa trigliserida (TG) menurut Friedwald et
al.LDL C = TC HDL C TG [mg/dl] 5LDL C = TC HDL C TG [mmol/l]
5INTERPRETASI KLINIS1. HDL KolesterolPriawanita
[ mg/dl][mmol/l][mg/dl][mmol/l]
Perkiraan Terbaik> 55> 1,42> 65> 1,68
Tingkat standar resiko35 550,9 1,4245 651,16 1,68
Resiko indikasi< 35< 0,9< 45< 1,16
2. LDL-KolesterolPrasangka : 150 mg/dl or 3,9 mmol/ltinggi: 190
mg/dl or 4,9 mmol/l
13.PEMERIKSAAN BESIMetodeCAB (Chromazurol B) dengan factor
pembersih lipidPrinsipBesi (III) bereaksi dengan Chromazurol B
(CAB) dan cetyltrimethylammonium bromide (CTMA) untuk membentuk
warna kompleks dengan absorbance maksimum 623 nm. Intensitas warna
yang diproduksi sebanding dengan konsentrasi zat besi dalam sampel.
Tes ini juga dapat digunakan dalam kombinasi dengan TIBC kit untuk
menentukan TIBC.Komposisi
RGT2x30 ml atau 2x100 ml reagen CABCAB0,18 mmol/lCTMA2,2
mmol/lGuanidinium chloride2,6 mmol/lBuffer Sodium Asetat(pH 4,7)45
mmol/l
STD5 ml standar Besi100 g/dlAtau17,9 mol/l
STDRGTPersiapan ReagenDan siap untuk digunakan
RGTStabilitas Reagen Stabil bahkan setelah dibuka sampai tanggal
kadaluarsa bila disimpan pada suhu 225oC. kontaminasi reagen
benar-benar harus dihindari.SpesimenSerum, plasma heparinJangan
menggunakan plasma EDTA, plasma sitrat atau serum hemilotik.Catatan
:Specimen lipemic biasanya menghasilkan kekeruhan campuran reagen
sampel yang mengarah kehasil palsu tinggi.Tes liquicolor besi
menghindarkan dari hasil palsu tinggi dengan lipid factor kliring
(LCF). LCF membersihkan kekeruhan yang disebapkan oleh specimen
liemic selama inkubasi.PemeriksaanPanjang gelombang: Hg 623 nmSuhu:
2025 oCPengukuran: terhadap blanko reagen (Rb). Cukup menggunakan
satu blanko utuk satu seri.
Skema Pemipetan BlankoStandarSampel
Serum --50 l
Standar -50 l-
Aquabidest50 l--
RGT1000 l1000 l1000 l
Campur dengan hati-hati, inkubasi selama 15 menit pada suhu 2025
oC. Ukur absorbance sampel (Asampel) dan standar (ASTD) terhadap
reagen blanko selama 60 menit.
Perhitungan Kosentrasi Besi Dengan FactorPanjang gelombangBesi
[g/dl]Besi [mol/l]
Hg 623nm830 x Asampel149 x Asampel
Perhitungan Kosentrasi Besi Dengan StandarJika panjang gelombang
yang berbeda (620-640 nm) akan digunakan untuk pengukuran standar
yang disediakan dengan kit harus digunakan untuk perhitungan.
C = x 100 [g/dl]
C = x 17,9 [mol/l]Linearitas Tes linearitas sampai kosentrasi
500 g/dl atau 89,5 mol/lNilai Rujukan Laki-laki : 59-148 g/dl atau
10,6-28,3 mol/lPerempuan: 37-145 g/dl atau 6,6-26
mol/l14.PEMERIKSAAN TIBC ( Total Iron-Binding Capacity )