Universidad de Carabobo Facultad de Ciencias de la Salud Escuela de Medicina Dr. Witremundo Torrealba Departamento de Morfología Normal y Patológica Br .Contramaestre Roiman
Dec 21, 2015
Universidad de Carabobo
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina Dr. Witremundo Torrealba
Departamento de Morfología Normal y Patológica
Br .Contramaestre Roiman
Microscopio óptico
Este es un instrumento que nos sirve
para visualizar estructuras pequeñas
cuyas dimensiones son inferiores al límite del
poder de resolución del ojo humano
Partes del microscopio óptico
Parte Mecánica
BASE
TORNILLO MACROMÉTRICO.
TORNILLO MICROMÉTRICO.
BRAZO PLATINA
LOS OBJETIVOS
En números de 3 a 5 están insertados en la parte inferior del tubo, este sistema óptico proporciona una imagen real,
aumentada e invertida.Los objetivos poseen un valor grabado 10x, 40x y 100x que
indica el aumento del objetivo.
EL CONDENSADOR
Es una combinación de lentes ubicados por debajo de la platina, que enfoca la luz sobre el objeto.
EL ESPEJO
Refleja los rayos de la fuente luminosa sobre el objetivo.
LA FUENTE DE LUZ ARTIFICIAL
Esta colocada por debajo del espejo dentro de la base del microscopio.
Propiedades del microscopio AMPLIACIÓN… de la imagen que se va a observar, se recomienda comenzar por el objetivo de menor aumento.
DEFINICIÓN… es la nitidez que nos proporciona el uso adecuado de los lentes.
RESOLUCIÓN… cuanto mayor sea el poder de resolución del objetivo, será más clara la imagen y aumentará la capacidad de poner en manifiesto detalles estructurales.
PROFUNDIDAD DE FOCO… es la capacidad de los objetivos de permitir observar varios planos en una misma posición de enfoque.
DISTANCIA FOCAL… es la disancia que existe entre el lente frontal del objetivo y el portaobjetos cuando la imagen está enfocada.
OBJETIVO 10x de 5-6mm
OBJETIVO 40x de 0.5-1.5mm
OBJETIVO 100x de 0.15-0.20mm
CAMPO OSCURO Bacteriología con preparaciones húmedas, para detectar espiroquetas u otros microorganismos con movilidad.
CONTRASTE DE FASE Permite el estudio de material vivo no teñido.
POLARIZACIÓN Sirve para identificar cuerpos extraños, tales como partículas de talco, suturas y pelos en los tejidos.
FLUORESCENCIA INMUNOFLUORESCENCIA
ELECTRÓNICO Permite investigar detalles ultraestructurales de las células y los tejidos al ofrecernos un incremento al aumento y del poder de resolución, utiliza como fuente de luz un haz de electrones.
Tipos de microscopio
Tipos de microscopio electrónico
ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN (MET)
Este tipo de microscopio nos proporciona imágenes
ultraestructurales.
ELECTRÓNICO DE BARRIDO (MEB)
Rastrea la superficie de la muestra.
Pasos de la técnica histológica para microscopía óptico
RECOLECCIÓN DE MATERIAL
Material muerto (necropsia) o material vivo (biopsia).
FIJACIÓN
Tiene como finalidad preservar las estructuras de la célula.
AUTÓLISIS
Es el proceso por el cual, después de la muerte, se produce la autodigestión enzimática celular, tras la
salida de contenido lisósomico al citoplasma por rotura de la membrana delimitante de estos
orgánulos.
PUTREFACCIÓN
Es el efecto ejercido por determinadas toxinas y enzimas bacterianas sobre los tejidos.
Autólisis
y putrefacci
ón
Temperatura ambiente
37°C y 42°C
Velocidad de autólisis y putrefacción
IMAGEN HISTÓLOGICA REAL
Es la que mostraría ese tejido cuando estaba vivo.IMAGEN HISTÓLOGICA EQUIVALENTE
Obtenida después de la manipulación histológica (fijación, inclusión, corte y coloración).
PRINCIPIOS GENERALES DE LA FIJACIÓN
No existe un método universal fijación.
No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido.
Un defecto de fijación jamás puede ser corregido.
Es inútil un estudio histológico sobre un material con graves defectos de fijación.
FIJACIÓN HISTOLÓGICA
Conserva la arquitectura y estructura de los tejidos y células sin considerar los cambios moleculares sobre
sus componentes bioquímicos.
FIJACIÓN HISTOQUÍMICA
Es más importante preservar la composición molecular y bioquímica de los tejidos.
CLASES DE AGENTES FIJADORES SEGÚN SU MECANISMO DE ACTUACIÓN
Se clasifican en dos grupos:
Fijadores por métodos físicos: congelación.
Fijadores por métodos químicos: agentes fijadores.
CARACTERÍSTICAS FUNDAMENTALES QUE DEBE POSEER UN LÍQUIDO FIJADOR IDEAL
Capacidad para bloquear de inmediato la autólisis.
Efecto microbicida.
No provocar retracciones o distorsiones del tejido.
Alta velocidad de penetración.
TIPOS DE FIJADORES
FIJADORES SIMPLES
Alcohol etílico.
Acetona.
Ácido acético.
Ácido tricloro acético.
Ácido crónico.
Cloruro de mercurio.
Dicromato potásico.
Ácido pícrico.
Acetato de uranilo.
Formol o formaldehido.
MEZCLAS FIJADORAS
Líquido de BOUIN (Ácido pícrico, formol y ácido acético).
BOUIN – Hollander (Acetato, ácido pícrico, formol, agua destilada y ácido acético).
BOUIN – Alcohólico (Duboscq - Brasil) (Alcohol etílico, ácido pícrico, formol y ácido acético).
Fijador de Müller (Dicromoto potásico, sulfato sódico, agua destilada).
Fijador Orth (Müller - formol).
Solución de Zenker.
FIJACIÓN EN MICROSCOPIA ELECTRÓNICA
Glutaraldehído.
Tetróxido de osmio.
Procesamiento del material histológico
Deshidratación Extraer toda el agua de los tejidos.
Aclaramiento Consiste en eliminar el exceso de alcohol.
Inclusión Consiste en sustituir con parafina todos los espacios ocupados por el agua.
PARAFINASe saca la muestra del procesador de tejidos.
Se llena el molde de metal con parafina.
Confección de bloques de parafina
Se extiende la tira de parafina en el baño de flotación para
eliminar las arrugas del tejido.
Se saca la tira de parafina extendida de baño de
flotación en una lámina portaobjetos.
Las láminas portaobjetos conteniendo las tiras de parafina son introducidas en una estufa, para fijar los cortes a la
lámina. Son introducidas por un mínimo de quince minutos en la estufa.
Coloración
XILOL XILOL ALCOHOL ALCOHOL
HEMATOXILINAALCOHOLEOSINAALCOHOL
ALCOHOL
ALCOHOL XILOL XILOL XILOL
TIPOS DE COLORANTES
Ácidos.
Básicos.
Neutros.
Indiferentes.
Después de fijadas
las tiras de parafina en
la estufa se sacan y se dejan
enfriar por cinco
minutos y luego se
procede a la
coloración .
Según su afinidad
Basofilia.
Acidofilia.
Ortocromática Mismo color.
Metacromática Color diferente.
Coloración vital
Intravital Supravital
Células principales con
citoplasma basófilo (teñido
de azul)
Células parietales
con citoplasma eosinófilo (teñido de
rojo).
Preparaciones de cortes para microscopía
electrónica1) Tejidos de menor tamaño.
2) Bloques más pequeños.
3) El tejido tiene que ser lo más fresco posible.
4) Procesamiento más rápido.
5) Fijadores (formol, tetroxido de osmio y glutaraldehido).
6) Medio de inclusión: Resina epon.
7) Colorantes sales de metales pesados como el citrato de plomo y uranio.
8) Método de preparación para los tejidos se utiliza la criofractura (congelación y fractura).
Métodos de investigación histológica
Existen dos métodos de estudio:
Material muerto.
Material vivo.
Ventajas de material muerto
Permite la aplicación de gran variedad de técnicas.
Nos proporciona un material de estudio permanente para la docencia e investigación (preparaciones histológicas).
Desventajas de material muerto Puede producir artefactos.
Estos artefactos pueden ser causados por: Muescas en las cuchillas (por falta de filo). Precipitación del fijador. Restos de colorantes. Autólisis. Arrugas. Retracción de los tejidos.
Ventajas de material vivo
Nos da información directa sobre estructuras vivas, se puede estudiar la fisiología animal.
Se observan estructuras que con la muerte desaparecen.
Desventajas de material vivo
No se obtienen preparaciones permanentes.
No se pueden aplicar muchas técnicas de estudios (se utilizan solo coloraciones vitales).
Otros métodos de estudio histológico
Citoquímica e histoquímica.
Inmunohistoquímica.
Histoautorradiografía.
Cultivo de tejido.
Microcirugía.
Fraccionamiento celular.
UNIVERSIDAD DE CARABOBOFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE MEDICINA “WITREMUNDO TORREALBA”DEPARTAMENTO DE MORFOLOGIA NORMAL Y PATOLOGICA
MORFOLOGIA MICROSCOPICA
Prof(a) Morella de RoloMarzo 2013
La Célula
Definición de célulaConocer los componentes celularesDescribir la organización generalDefinir tejidos, órganos y sistemasComposición químicaTamaño celularIdentificar al M.O. las diversas formas
celularesPropiedades fisiológicas de las células
Agenda
Es la unidad estructural y funcional fundamental de los seres vivos.
Membrana plasmática
Protoplasma NúcleoCitoplasma
Las células se pueden dividir en dos gruposPROCARIOTASMaterial genetico disperso en elCitoplasma (NUCLEOIDE)Bacterias, rickettsias
EUCARIOTASHombre, multicelulares.material genético concentrado en el núcleo
Reino Móneras Protista Hongos vegetales Animales
• Organismos representativ
o
BacteriasAlgas Azules
ProtozoosCrisófitas
HongosHongos verdes
Algas verdesAlgas rojas y
pardasBriofílas
Traqueófila
Metazoos
Clasificación celular
Procariotas Eucariotas
Clasificación de los organismos y las células
Diferencias entre las procariotas y eucariotasC. Procariotas C. Eucariotas
Envoltura nuclear Ausente Presente
ADN Desnudo Combinado con proteínas
Cromosomas Único Múltiples
Nucléolo Ausentes Presentes
Ribosomas 70S (50S+30S) 80S (60S+40S)
Endomembranas Ausentes Presentes
Mitocondrias
Enzimas respiratorias y
fotosintéticas en la membrana plasmática
Presentes
Pared celular No celulósica Celulósica en las c. vegetales
Exocitosis y endocitosis Ausente Presente
Locomoción Fibrilla única ó flagelo Cilios y flagelos
CITOPLASMAOrganoides
Metabólicamente activosDesempeñan una función específica
Inclusiones Acúmulos transitoriossustancias alimenticias, productos inertes o depósitos de sustancias (pigmentos melanina, gotas lípidos)
Citoesqueleto NO visible al MO sólo visible al MEElementos fibrilares Microtúbulos, microfilamentos y filamentos Intermedios)
Organización general de una célula eucariotaPrincipal componente Subcomponentes Función
Membrana celular Membrana plasmática ProtecciónInteracción celularPermeabilidadEndo y Exocitosis
Núcleo CromosomasNucléolo
GenesSíntesis de ribosomas
Citoplasma
Citosol Enzimas solublesRibosomas
GlicolisisSíntesis proteica
Citoesqueleto MicrotúbulosMicrofilamentos
Forma y movilidad celular
Organoides microtubulares
Centrosomas y CentríolosCuerpos basales y cilios
División celularMotilidad celular
Sistema de Endomembranas
Membrana nuclearR. EndoplásmicoAparato de GolgiEndosomas y lisosomas
Permeabilidad nuclearSíntesis y procesamientoSecreciónDigestión
Organoides de Membrana MitocondriasPeroxisomas
Síntesis de ATPProtección
Inclusiones Gránulos de glucógenoGotas de lípidosPigmentos de MelaninaGránulos de Lipofuscina
Reserva Energética
Deposito de SustanciasCuerpos residuales
Composición Química de las Células
Inorgánicos
Agua 75-85%95% en forma libre5% ligada a las proteínas
Minerales 2 – 3 %Cl-, Na+ y K+
Mg+2
Ca+2
FeVestigios: Manganeso, cobre, cobalto, yodo, selenio, níquel, molibdeno y zinc
Proteínas
Son cadenas de aminoácidos ligados por uniones peptídicas Pueden existir como solución ó gel
Aminoácidos ácido orgánico con un grupo amino (NH2), uno carboxilo (COOH) y un radical (R). Existen 20 aa diferentes
Simple Fibrosas y globularesCombinadas
Funciones Síntesis de más proteínas Forman parte de las membranas
celulares Matriz fundamental Material genético Enzimas Hormonas Metabolismo celular
Lípidos
Compuestos insolubles en agua. Triglicéridos: fuente de reservaFosfolípidos: componente estructural de las membranas biológicas
Hidratos de carbono
Principal fuente de energía de las células en forma de glucógeno y glucosa.Constituyentes estructurales de la pared celular y de las sustancias intercelulares
Ácidos Nucleicos
ADN ADN doble hélice (núcleo)ADN lineal (mitocondria)
ARN ARN mensajeroARN de transferenciaARN ribosomal
Bases nitrogenadas
Un azúcar:ADN: DesorribosaARN: Ribosa
Formas y tamaño de las células
1.-Presión que ejercen las células vecinas2.-Tensión superficial3.-Rigidez de la membrana celular4.-Viscosidad del citoplasma
PlanaCúbicaPrismáticaEsféricaEstrellada
Fusiforme Cilíndricas CaliciformePiriforme
LEY DEL VOLUMEN CELULAR CONSTANTE
la ≠ en la masa total de un órgano se debe al número de células y no al tamaño de las células
HIPERPLASIA aumenta número celular
HIPERTROFIA aumenta tamaño celular
Propiedades fisiológicas de las células
Irritabilidad: Respuesta a estímulos
Conductividad: Onda de excitación, sitio de estímulo, cambio potencial eléctrico, se propaga,
se trasmite a otras células
Contractilidad: Acortamiento de las células
Absorción y asimilación: Captar alimentos y sustancias del ambiente, modificarlas y
transformarlas (metabolismo)
Secreción: Utilizar sustancias absorbidas para síntesis de nuevas sustancias que van a ser
eliminadas
Propiedades fisiológicas de las células
Excreción: Eliminación de sustancias que no se necesitan o que su alta concentración puede ser
nociva (urea, creatinina)
Respiración: El O2 absorbido se usado para oxidar sustancias alimenticias en su interior
obteniendo energía necesaria para funcionamiento
Crecimiento y reproducción: Constante renovación de elementos estructurales de
órganos y tejidos
Polaridad funcional: Polo Basal, Polo Apical. En cel secretoras de proteínas, acino
pancreático, citoplasma basal abundante RER y mitocondrias, citoplasma apical Golgi muy desarrollado supranuclear con gránulos de
zimógeno