Inmunofenotipos en cáncer de mama: novedades Dr. F. Ignacio Aranda López Hospital General Universitario de Alicante Reunión Territorial de la Región de Murcia (SEAP-AIP) Murcia, H. Morales Meseguer, 6 de junio 2014
Jan 07, 2016
Inmunofenotipos en cáncer de mama: novedades
Dr. F. Ignacio Aranda López Hospital General Universitario de Alicante
Reunión Territorial de la Región de Murcia (SEAP-AIP) Murcia, H. Morales Meseguer, 6 de junio 2014
Inmunofenotipos y cáncer de mama
• Concepto e historia
• Cómo se obtienen? Cuáles son los puntos críticos?
• Cuál es su relación con los perfiles y herramientas génicas de uso diagnóstico?
• Cuál es su futuro?
Inmunofenotipos: bases• Permiten una clasificación accesible, de bajo coste,
con implicaciones pronósticas y terapéuticas• Integran información (se construyen con una
combinación de variables IHQs)• Validadas en ensayos clínicos en adyuvancia y
neoadyuvancia • Facilitados por las guías• Alto nivel de exigencia en el procesamiento y en la
evaluación
Inmunofenotipos. Historia• Años 70. Estudio de receptores de estradiol
• Gerdes describe Ki-67 (congelación)
• Años 80. Inmunohistoquímica de los receptores hormonales
• Estudios de proliferación celular en parafina: PCNA, Ki-67
• Años 90. Factores pronósticos en cáncer de mama: expresión de
vimentina, CKs de alto peso, c-erbB2, p53…
• Año 2000. Clasificación molecular (Perou)
• Herramientas moleculares: Mammaprint, Oncotype, PAM50,
Endopredict
• Guías Her-2 (2007, 2013), Receptores (2010), Ki67 (2010)
• Reproducción inmunohistoquímica fenotipos (St. Gallen, 2013)
NRC, 2007
Cáncer de mama: clasificación molecular (Perou et al. Nature 2000)
Prevalen.
(%)
Prolifer.
celular
Grado 3
(%)
RE +
(%)
RP +
(%)
Her-2 +
(%)
TN
(%)
Mut p53
Luminal A 28-31 Bajo 13-30 91-100 70-74 8-11 3-4 baja
Luminal B 19-23 Alto 41-62 91-100 41-53 15-24 4-9 int.
Her-2 enriq. 12-21 Alto 55-89 29-59 25-30 66-71 14-22 alta
Basal 11-23 Alto 88-93 0-19 6-13 9-13 73-80 alta
Clasificación molecular. Correlaciones
Prat A & Perou CM. Mol Oncol 2011; 5: 5-23
Clasificación molecularLimitaciones
• Análisis de agrupamiento jerárquico, de difícil aplicación en casos aislados, prospectivos
• La identificación del subtipo es dependiente de la tecnología empleada
• Acuerdo entre diferentes métodos moderado (kappa= 0,5)
• Diferencias basadas en la expresión de genes relacionados con la proliferación.
• Correlación limitada con los métodos aceptados (inmunohistoquímica, FISH)
Blows FM et al. PLOS Med 2010
10.159 pacientes (12 estudios)Cinco marcadores IHQ: RE, RP, Her-2, CK 5-6, EGFR
Luminal Her2-
Luminal Her2+
Her2+ no luminal
Basal 5-FN Total
7243 639 632 962 683 10159
% 71 6 6 9 7
SV 72 58 53 61 65 69
Grado (%) 123
215029
63756
22373
31385
62569
164242
Edad <40 a 6 12 13 17 13 9
pN0 58 44 42 60 54 56
Tamaño < 2 cm 61 47 43 46 43 56
Blows FM et al. PLOS Med 2010
Clasificación basada en inmunohistoquímica
Marcadores para estratificar riesgo en carcinomas RE positivos (“luminales”)
• Her-2 (“luminal Her-2”)• Ki-67• R. Progesterona • Otros
– TP53. – Bcl-2– CK 5-6– IGF1R, FOXA1, SRC-1, RE-beta, GATA-3
Ki-67 y cáncer de mama• Marcador de proliferación celular con
significado pronóstico independiente (SLE y SVG). Evidencia I-B
• Es uno de los 5 genes de proliferación incluido en Oncotype
• Permite subclasificar los carcinomas de mama RE positivos
• Punto de corte más aceptado 13-20 %Cheang MC et al. J Nat Cancer Inst, 2009Yerushalmi R et al. Lancet Oncol, 2010Luporsi E et al. BCRT, 2012
Sobre 144 casos RH +“Gold standard” PAM 50Curva ROC de Ki-67: 13,25%Validación con 2598 casos RH positivos
Luminal AKi67<14%
Her-2 -
Luminal BKi67≥14%
Her-2 -
Luminal Her-2
Total
n 1530 846 222 2598
% 59 32 9 100
SV 10 a (%) 79 64 57
Cheang MCU et al. JNCI, 2009
Clasificación del luminal (RH+) basada en Ki67 y Her-2
Penault-Llorca F. J Clin Oncol 2009;27: 2809-15
0 50 100 150 200 250 300
Global SV (months)
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
Log rank p=0.0072
Ki-67
<20%
>20%
Ki-67 (20%), ER+, Her-2 neg, N0/N1
Aranda FI, et al. Mod Pathol 2008;21(s1): 20A USCAP 2008
n=635
p= 0,002 y 0,001Hospital General de Alicante (n=329)
2 4 6 8 10
Ki-67
0
50
100
150
% cells % cases
0-4 15.0
5-9 20.9
10-14 24.9
15-19 12.6
20-24 9.8
25-29 7.4
30-34 2.5
35-39 2.5
40-44 1.6
45-49 0.3
>49 2.5
Ki-67 en ER+/Her2 neg, N0/N1 (n= 635, HGUA)
Mean: 14.9 (St. Dev 12.4)
Ki-67<10%. 35%
Ki-67 10-24 %. 45-50%
Ki-67 >24 %. 15-20%
Ki-67: interpretación y cuantificación (1)
• Tinción nuclear, con independencia de la intensidad
• Expresar en porcentaje• Control intrínseco• Cuantificar:
– Tres campos de gran aumento (x400)– Porción periférica– “Hot spots”: incluir en la cuantificación– Total: 500-2000 células
Dowsett M, JNCI, 2011
Ki-67: interpretación y cuantificación (2)
• Estimación: No recomendada• Cuantificación directa: seguir recomendaciones
– Cuantificación sobre edición en papel
• Imagen digital: método validado por la FDA– Puede ser de ayuda. – Problemas en casos intensidad variable, o con
poblaciones no neoplásicas (linfocitos, estroma)
Ki-67: punto de corte
• Amplio rango en la literatura 1-30%• Acuerdo >20%: Alto (St. Gallen, 2013)• Correlación con perfil molecular: 13-14%
(Cheang, 2009)• Separación entre L-A y L-B, 13% (St. Gallen,
2013)• Otros, 20% más informativo
Ki-67 49/604= 8,1%
Ki-67 81/392= 20,7%
Ki-67, conclusiones (1)
• Permite separar nivel de riesgo en carcinoma RE positivo
• Predictor independiente de RPC y SVG (evidencia II-B)
• Debe ser tenido en cuenta en la decisión terapéutica
• Nivel de corte: 14%, 20%
Dowsett M, JNCI, 2011Feeley LP, et al. Mod Pathol, 2014
Ki-67, conclusiones (2)
• Aplicar sistemas de cuantificación especialmente en casos de proliferación intermedia (entre 10 y 25 %)
• Dedicar tiempo (no hacer simples estimaciones)
• Elección de las áreas mas activas, e incluir “puntos calientes”
• Cuidar el procedimiento técnicoFasching PA et al. BMC Cancer, 2011
R. progesterona
• Mayor predictor a la respuesta hormonal que RE (Horwitz, 1975)
• RE+/RP negativos, mayor expresión de señalización de factores de crecimiento
• Activación de la vía PI3K y MAPK• RE+/RP negativos, peor pronóstico
0,00 50,00 100,00
RP %
0
100
200
300
Mean = 45,6364Std. Dev. = 39,07296N = 1.155
% cells % cases
0 26.7
1-10 10.9
11-20 5.5
21-30 2.9
31-40 4.1
41-50 4.1
51-60 5.3
61-70 7.2
71-80 8.1
81-90 11.4
91-100 13.9
RP 15/317= 4,7%
Braun L, et al. Mod Pathol, 2013
N=443 pacientes postmenopaúsicas, sin QT15 Ac: αRE, βRE, RP, Her-2, bcl-2, p53, EGFR, IGF1R, Src-1, GATA3, FOXA1, AIB1, P300, CK5-6 (TMAs)Análisis de agrupamiento
Luminal A Luminal B Her-2 TN
RP alto (≥6) 96 20 12 5
RE >1% 88 83 41 21
Her-2 0 <1 98 0
Ki-67 (media) 10 15 45 60
P53 1 4 15 55
Bcl-2 99 85 30 0
CK 5-6 1 2 5 35
EGFR 1 2 8 45
Braun L, et al. Mod Pathol, 2013
Prat A, et al. JCO, 2013
Significado pronóstico de RP en Luminales RE+/Ki67 bajo (<14%)
0 30 60 90 120 150
SV libre de evento
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
Log rank p=0,0217
R:P:
<15%
>15%
R. progesterona (15%), REpos/Her-2 neg N0/N1
0 50 100 150 200 250 300
SV global
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
Log rank p=0,0016
R.P.
<15%
>15%
R. progesterona (15%), RE pos/Her-2 neg, N0/N1
Hospital General de Alicante (n=635)
Definición de perfiles IHQ (St. Gallen, 2013)
RE (1%) RP Ki-67 Her-2
Luminal A-like Positivo ≥ 20% < 14% Negativo
Luminal B-like Her2 negativo
Positivo < 20% ≥ 14% Negativo
Luminal B-like Her2 positivo
Positivo Indiferente Indiferente (alto)
Positivo
Her-2 no luminal
Negativo Negativo Indiferente (alto)
Positivo
Triple negativo Negativo Negativo Indiferente (alto)
Negativo
Goldhirsch A et al. Annals Oncol 2013
RE +RP +/-Her-2 -
RE +RP +/-Her-2 -
Riesgo bajo(“Luminal A”)Riesgo bajo
(“Luminal A”)
Riesgo alto(“Luminal B”Riesgo alto
(“Luminal B”
RP ≥10%Ki-67≤ 20%
RP <10%Ki-67> 20%
Braun L, et al. Mod Pathol, 2013
Estratificación de RE+/Her-2 neg
• Basada en el nivel de expresión de Ki-67 y RP• Puntos de corte
– Ki-67: 14-20%– RP: 10-20%
• Otros: pendientes (p53, bcl-2…)
Her-2/neu• Factor pronóstico negativo, 1987• Trastuzumab, 1998• HercepTest (A0485)/Pathway (CB11), FDA 1999• HER2 FISH pharmDx/PathVysion Her-2• Grupo molecular Her-2 (Perou, 2000)• Neoadyuvancia (2007)• Guías: 2007, 2013• Lapatinib, Pertuzumab, FDA 2013
Her-2 (+)n=64
Paclitaxel+FEC
Paclitaxel+FEC+
Tz (24s)
RPC 25% RPC 60%p=0,016
Buzdar et al. Clin Cancer Res 2007; 13: 228-33MDACC
19 23+22
Wolff AC, et al. APLM, 2014
Wolff AC, et al. APLM, 2014
Wolff AC, et al. APLM, 2014
Tsang RY, BJC 2012
p= 0,003 y 0,000Hospital General de Alicante, 2014
Her-2 positivo: subtipos
• Her-2 puro (RE/RP negativo)• Luminal B-like Her2 positivo• Otros
– RA positivos (apocrinos)– CK basales/EGFR positivos (5-8%)– P53 positivos (10-15%)
Carcinoma de mama “Triple negativo”
• Definido por su negatividad a RE/RP y Her-2• La mayoría, carcinoma infiltrante NOS G2 y G3• Tipos histológicos especiales• No equivale al tipo molecular “basal-like”
– Expresión de EGFR o CK basales (60%)
• Mutación p53 50-60%• PI3K ~10%
Leydi J, et al. APLM, 2014
Leydi J, et al. APLM, 2014
Prat A, et al. The Oncologist, 2013
Triple negativo y “basal-like”
Lehman BD, et al. J. Clin Invest, 2011
Estudio molecular de casi 100 genesAnálisis de agrupamiento sobre 587 casos “triple negativo”Identifican 6 grupos (+ uno inestable)
TNBC subtipos y PAM50
Lehman BD, et al. J Pathol 2014
Subtipo (%) Vías implicadas Morfología RPC (A-T), %Matsuda, 2103
TTO
BL1 (15) División celularRespuesta daño ADN
(ATR/BRCA)
Carcinoma alto grado
Ki-67 alto
52 Antimitóticos (taxanos)Platino+Inh PARP
BL2 (5) Señalización de F. de crecimiento (EGFR, NGF, MET,
Wnt/beta catenina…)
Origen basal/mioepitelial
p63, CD10
0 Inh R-GF
IM (20)(Inmunomodulador)
Vías de transducción de señales de respuesta inmune
(TH1, TH2, NK, BCR)
MedularLIT
30
M (20)(Mesenquimal)
Motilidad, EMT, matriz extracelular, Wnt-beta
catenina. Claudin-low. PI3K-mTOR
MetaplásicoCarcinoma
sarcomatoso
31 Bloque vía wntBloqueo vía
PI3K/mTOR, src
MSL (10)(Mesenquimal célula madre)
Motilidad/vías de crecimiento y EGFR, PDGF, proteínas G, genes EMT, angiogénesis,
claudin lowStem cells
Metaplásico con CD44+/CD24-
23 + Bloqueo SCC
LAR (10-15) (Luminal R. Andrógeno)
Relacionados metabolismo hormonal, receptor
andrógenos
Apocrino RA positivo
10 Anti RABloqueo vía PI3K/mTOR
Subtipos de triple negativo (Lehmann, 2011)
Masuda H, et al. CCR, 2013
Ki-67 CK 5-6
R. AndrógenosCK AE1/AE3
Futuras vías de tratamiento en TN• Anti-EGFR. Respuesta ~6 %(monoterapia)
– Cetuximab + platino, 10-20%– Pendiente de resultados en casos con amplificación EGFR
• Anti-VEGF. Respuesta ~15% (monoterapia)– Bevacizumab+QT, respuesta 40% (vs 30% solo QT)
• Alteración reparación ADN (BRCA1-2)– Platino RPC, 22%– En poliQT, con platino, RPC 60%– Platino+ Inhibidores del PARP (52 vs 32% solo QT)
Grupo “triple negativo”• Identificar tipos histológicos especiales con
mejor pronóstico (CAQ, metaplásico fibromatosis-like…)
• Atención al grado 1, Ki-67 bajo• Ki-67 alto/p53 positiva. Antimitóticos. • R. Andrógenos. Subgrupo de mejor pronóstico• Carcinomas metaplásicos• Linfocitos intraepiteliales: “medular like”
Inmunofenotipos versus PAM50
IHQ
(n=560)
% RPC % PAM50
n=247
% RPC
RE+/Her-2 -/grado bajo/Ki-67 bajo
38/32 2,3/3,9 L-A 33 4,9
RE+/Her-2 -/grado alto/Ki-67 alto
8,6/13 14,6/5,5 L-B 20 8,2
RE+/Her-2 + 12 30,8 Her-2 17 48,8
Her-2 + /RE- 10 55,4
TN 27 36,2 Basal 19 41,7
“Normal” 11 19,2
Lips EH et al. BCRT 2013
RE Ki67 p53Her-2
(Mama derecha, BAG 14G)• Carcinoma infiltrante NOS (ductal)• Grado histológico: 3 (3-3-2)• RE 100%, positivo• RP 70%, positivo• Her-2, negativo• Ki67 40%, alto• PAAF GL: negativa
• Inmunofenotipo: luminal B-like Her2 negativo
• Neoadyuvancia: Adriamicina, taxanos• Respuesta patológica completa esperable: 15-25 %
En resumen:• Mejorar la obtención y reproductibilidad de las
variables patológicas (criterios histológicos precisos)• Identificar nuevos subtipos y conocer sus
implicaciones pronósticas y terapéuticas• Cuidar la fase “preanalítica” (recepción y
procesamiento)• Inmunohistoquímica/FISH. Guías. Seguimiento de
calidad. Acreditación • Incorporación racional (eficiente) de las
herramientas moleculares validadas, en el contexto de la patología
Reflexión finalEl patólogo debe implicarse en las decisiones terapéuticas a través del diagnóstico, con criterios de eficacia y eficiencia
Debe valorar y dimensionar su trabajo de forma objetiva y disponer de los recursos necesarios
Debe participar en el diseño y ejecución de los ensayos clínicos (en adyuvancia y neoadyuvancia)
Debe hacerse visible dentro y fuera del hospital (proyección a la sociedad)
¡Muchas gracias!