P. 0 4 St e m Fl e x M e di u m P. 0 6 Al e x a Fl u or P L U S s e c o n d ar y a nti b o di e s P. 0 7 E V O S c elli m a gi n gs y st e m P. 0 8 Cli c k-i T C ol ori m etri cI H C d et e cti o n kit s P. 0 9 P h a s e m a k e r T u b e s P. 1 0 Q u a nt St u di o 3 D デ ジ タ ル P C R シ ス テ ム P. 1 1 I o n S 5/I o n S 5 X L 次 世 代 シ ー ケ ン シ ン グ シ ス テ ム P. 1 2 T a q P at h Pr o A m p M a st er Mi x T a q P at h Pr o A m p M ulti pl e x M a st er Mi x P. 1 3 O n c o S c a n F F P E a n d C N V F F P E A s s a y P. 1 4 E x o S A P-I T E x pr e s s P C R Pr o d u ct Cl e a n u p R e a g e nt N E X TI nt er vi e w バイオハイブリ ッ ドで挑む 創 薬 、再 生 医 療 、生 命 シ ス テ ム 異 分 野 融 合 が 生 み 出 す 多 彩 な ア プ ロ ー チ 竹 内 昌 治 氏 東 京 大 学 生 産 技 術 研 究 所 教 授 同 研 究 所 統 合 バ イ オ メ デ ィカ ル シ ス テ ム 国 際 研 究 セ ン タ ー センター長 ・ 教 授 2 0 1 7/ May N o. 40 S ci e n c e, Pr o d u ct s, a n dI nf or m ati o n サーモフ ィ ッシャーサイエンテ ィ フ ィ ッ ク ライフサイエン ス 情 報 誌
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P. 0 4 St e m Fl e x M e di u m
P. 0 6 Al e x a Fl u o r P L U S s e c o n d a r y a nti b o di e s
P. 0 7 E V O S c ell i m a gi n g s y st e m
P. 0 8 Cli c k -i T C ol o ri m et ri c I H C d et e cti o n kit s
P. 0 9 P h a s e m a k e r T u b e s
P. 1 0 Q u a nt St u di o 3 D デ ジ タ ル P C R シ ス テ ム
P. 1 1 I o n S 5 / I o n S 5 X L 次 世 代 シ ー ケ ン シ ン グ シ ス テ ム
P. 1 2 T a q P at h P r o A m p M a st e r Mi x
T a q P at h P r o A m p M ulti pl e x M a st e r Mi x
P. 1 3 O n c o S c a n F F P E a n d C N V F F P E A s s a y
P. 1 4 E x o S A P -I T E x pr e s s P C R Pr o d u ct Cl e a n u p R e a g e nt
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そ れ ぞ れ の 培 地 で 増 殖 さ せ 、 Gi b c o ™ Tr y p L E ™ S el e ct 酵 素 を 用 い て シ ン グ ル セ ル 化 し た P S C に 、
C a s 9 タ ン パ ク 質 / H P R Tガ イ ド R N A( g R N A ) 複 合 体 を エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ ン で 導 入 し ま し た 。 R h o
N x T A c o u sti c F o c u si n g C yt o m et er の モ ニ タ ー 機 器 を 貸 出 し い た し ま す 。 さ ら に 本 機 器 を 使 用 時 に 必 要 な 試 薬 5 0 万 円 分 ※ を ご 提 供 い
た し ま す 。 ※ I n vitr o g e n製 品 ( e Bi o s ci e n c e 製 品 を 含 む ) の 中 か ら 選 択 で き ま す 。
応 募 期 間 : 2 0 1 7年 4 月 1 7 日 ( 月 ) ~ 2 0 1 7 年 6 月 2 日 ( 金 ) ま で ※ 実 施 要 項 と ご 応 募 は こ ち ら か ら w w w.t h er m ofi s h er. c o m/j p - att u n e - gr a nt 2 0 1 7
リ ン パ 節 形 成 過 程 の 解 明 を 目 指 し 、 2 0 1 6
年 1 0 月 に 北 海 道 大 学 で 免 疫 組 織 の 発 生 機 構
を 研 究 す る 新 規 グ ル ー プ を 立 ち 上 げ た 澤 新 一
郎 氏 。 こ れ ま で 自 然 リ ン パ 球 の 一 つ で あ る L T i
( L y m p h oi d Ti s s u e i n d u c e r ) 細 胞 の 最 終
分 化 に R A N K L - R A N K シ グ ナ ル が 重 要 で あ る
こ と な ど 、 リ ン パ 節 形 成 の 鍵 と な る 分 子 機 構 を
精 力 的 に 追 っ て き ま し た 。「 間 葉 系 ス ト ロ マ 細
胞 と 自 然 リ ン パ 球 の 相 互 作 用 は リ ン パ 節 の 発
生 初 期 に 必 須 の ス テ ッ プ で す が 、 マ イ ナ ー ポ
ピ ュ レ ー シ ョ ン で あ る こ れ ら の 細 胞 を 解 析 す る
に は 、 レ ポ ー タ ー マ ウ ス と 、 高 感 度 で パ ワ フ ル
な フ ロ ー サ イ ト メ ー タ ー が 欠 か せ ま せ ん 」 と 澤
氏 は 話 し ま す 。
リ ン パ 節 の 「 種 ( タ ネ ) 」 を 突 き 止 め る
澤 氏 の 大 き な テ ー マ の 一 つ は 「 免 疫 の 場 」
で あ る リ ン パ 節 が い つ 、 い か に し て 形 成 さ れ
る か と い う こ と 。 哺 乳 類 で は 胎 児 期 に 間 葉 系
ス ト ロ マ 細 胞 と 自 然 リ ン パ 球 が イ ン タ ラ ク シ ョ
ン す る こ と で リ ン パ 節 形 成 が 始 ま り ま す 。 自 然
リ ン パ 球 に つ い て は こ れ ま で 、 優 れ た 知 見 が
蓄 積 さ れ て き て お り 、 澤 氏 曰 く 「 役 者 が 分 か っ
て き て は 」 い ま す が 、 一 方 、 そ の 相 手 と な る 間
葉 系 ス ト ロ マ 細 胞 の 詳 細 は 未 だ 明 ら か で は あ
り ま せ ん 。 澤 氏 は 間 葉 系 ス ト ロ マ 細 胞 の 明 ら
か な 特 徴 や 挙 動 の 解 析 を 通 じ て 「 こ れ こ そ が
ま さ に リ ン パ 節 を 作 る 種 の よ う な 細 胞 」 で あ る
と 明 快 に 理 解 す る こ と を 目 指 し て い ま す 。「 全
身 の 各 リ ン パ 節 は 時 空 間 的 制 御 を 受 け て 独
立 に 形 成 さ れ ま す が 、 す べ て に 共 通 す る 本 質
的 イ ベ ン ト が 間 葉 系 ス ト ロ マ 細 胞 と 自 然 リ ン
パ 球 の 『 出 会 い 』 で す 。 こ れ を よ く 理 解 し 再 現
す る こ と が 可 能 に な れ ば 、 例 え ば 人 工 リ ン パ
節 の 実 現 も 不 可 能 で は あ り ま せ ん 」 。
ゲ ノ ム 編 集 も 活 用 し 、
わ ず か な 細 胞 集 団 を 見 極 め る
小 さ な 胎 児 期 の リ ン パ 節 形 成 を 観 察 す る
場 合 、 免 疫 組 織 化 学 的 な 解 析 と 両 輪 で 、 マ イ
ナ ー ポ ピ ュ レ ー シ ョ ン を 定 量 す る 必 要 が あ り
ま す 。「 自 然 リ ン パ 球 や 間 葉 系 ス ト ロ マ 細 胞
は 、 T 細 胞 や B 細 胞 と 異 な り 、 明 確 な 細 胞 表 面
マ ー カ ー が あ り ま せ ん 。 そ の た め 特 徴 的 な 転
写 因 子 や サ イ ト カ イ ン を 染 色 す る 必 要 が あ り
ま す 。 私 た ち は こ れ ま で 、 間 葉 系 ス ト ロ マ 細 胞
に R A N K L( R e c e pt or a cti v at or of N F k B
li g a n d) が な い と リ ン パ 節 形 成 が 起 こ ら な い
こ と を 明 ら か に し て き ま し た 。 そ こ で R A N K L
プ ロ モ ー タ ー の 下 流 に C r e を コ ー ド す る マ ウ
ス を 作 製 し 、 組 織 中 で R A N K L 発 現 細 胞 を 蛍
光 タ ン パ ク 質 で 特 異 的 に 検 出 で き る 系 を 確
立 し て い ま す 」 と 話 し ま す 。 し か し R A N K L 陽
性 の 間 葉 系 ス ト ロ マ 細 胞 は 0. 0 5 % に 満 た な
い マ イ ナ ー ポ ピ ュ レ ー シ ョ ン で あ り 、 こ れ を 感
度 よ く 検 出 す る こ と が 絶 対 的 に 必 要 で し た 。
「 今 回 、 Att u n e N x T A c o u sti c F o c u si n g
球 ( I L C) の 解 析 デ ー タ ( 右 ) 。 R O R γ tは 、 核 内 受 容 体 R eti n oi c
a ci d or p h a n r e c e pt or ( R O R ) フ ァ ミ リ ー の 一 つ で あ り 、 I L C 3
で 発 現 す る マ ー カ ー 。 Att u n e N x T を 使 用 。
従 来 品 を 上 回 る S / N 比 で 一 段 と 鮮 明 な 画 像 に
図 1 従 来 品 よ り も 明 る い 細 胞 画 像
従 来 の Al e x a Fl u or 4 8 8 S e c o n d ar y A nti b o d y( 左 ) と 、 新 し い Al e x a Fl u or Pl u s 4 8 8 S e c o n d ar y A nti b o d y( 右 ) を 比 較 し た 結 果 、
Li g ht c u b e 3 色 固 定 4 つ ( 交 換 可 能 ) ※ 1 4 つ ( 交 換 可 能 ) ※ 1
タ イ ム ラ プ ス × 〇 ◎ ( 多 点 )
細 胞 カ ウ ン ト × 〇 〇
自 動 ス キ ャ ン ・ フ ォ ー カ ス × × ○
画 像 の 拡 大 × ○ ○
製 品 名 サ イ ズ 製 品 番 号 価 格
G o at a nti - M o u s e I g G ( H + L ) Hi g hl y Cr o s s - A d s or b e d S e c o n d ar y A nti b o d y, Al e x a Fl u or Pl u s 4 8 8 1 m g A 3 2 7 2 3 ¥ 6 1, 0 0 0
G o at a nti - M o u s e I g G ( H + L ) Hi g hl y Cr o s s - A d s or b e d S e c o n d ar y A nti b o d y, Al e x a Fl u or Pl u s 5 5 5 1 m g A 3 2 7 2 7 ¥ 6 1, 0 0 0
G o at a nti - M o u s e I g G ( H + L ) Hi g hl y Cr o s s - A d s or b e d S e c o n d ar y A nti b o d y, Al e x a Fl u or Pl u s 6 4 7 1 m g A 3 2 7 2 8 ¥ 6 1, 0 0 0
G o at a nti - R a b bit I g G ( H + L ) Hi g hl y Cr o s s - A d s or b e d S e c o n d ar y A nti b o d y, Al e x a Fl u or Pl u s 4 8 8 1 m g A 3 2 7 3 1 ¥ 6 1, 0 0 0
G o at a nti - R a b bit I g G ( H + L ) Hi g hl y Cr o s s - A d s or b e d S e c o n d ar y A nti b o d y, Al e x a Fl u or Pl u s 5 5 5 1 m g A 3 2 7 3 2 ¥ 6 1, 0 0 0
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製 品 名 例 製 品 番 号 参 考 価 格
E V O S F L A ut o 2 I m a gi n g S y st e m対 物 レ ン ズ : 4 × P h 、 1 0 × Fl 、 2 0 × Fl 、 4 0 × Fl 、 ラ イ ト キ ュ ー ブ : G F P 、 R F P 、 D A PI
E V O S F L oi d C ell I m a gi n g St ati o n 対 物 レ ン ズ : 2 0 倍 固 定 、 ラ イ ト キ ュ ー ブ : FI T C 、 T e x a s R e d 、 D A PI 、 カ メ ラ : モ ノ ク ロ 4 4 7 1 1 3 6 ¥ 1, 9 8 0, 0 0 0
抗 体 検 索 は こ ち ら か ら → w w w.t h e r m ofi s h e r. c o m / a nti b o di e s 詳 細 は こ ち ら か ら → w w w.t h e r m ofi s h e r. c o m / a nti b o di e s -l e a r ni n g - c e nt e r
Cli c k -i T E d U C ol o ri m e t ri c I H C D e t e c ti o n Ki t
T RI z ol 試 薬 単 独 と P h a s e m a k er T u b e( 2 ロ ッ ト 使 用 ) と の 併 用 で 回 収 し た R N A 収 量 を 比 較 し ま し た 。
吸 光 度 で 収 量 ・ 純 度 を 測 定 し た 結 果 、 T RI z ol 試 薬 単 独 よ り も P h a s e m a k er T u b e と の 併 用 で R N A 収 量 が 増 加 し ま し た 。 ど ち ら も 高 純 度 な R N A を 回 収 で き ま し た 。
製 品 名 サ イ ズ 製 品 番 号 価 格
P h a s e m a k er T u b e s 1 0 チ ュ ー ブ A 3 3 2 4 9 ¥ 3, 0 0 0
P h a s e m a k er T u b e s 1 0 0 チ ュ ー ブ A 3 3 2 4 8 ¥ 1 3, 0 0 0
T RI z ol R e a g e nt a n d P h a s e m a k er T u b e s C o m pl et e S y st e m 1 0 0 m L, 1 0 0 チ ュ ー ブ A 3 3 2 5 0 ¥ 3 7, 0 0 0
T RI z ol R e a g e nt a n d P h a s e m a k er T u b e s C o m pl et e S y st e m 2 0 0 m L, 2 0 0 チ ュ ー ブ A 3 3 2 5 1 ¥ 5 6, 0 0 0
T RI z ol L S R e a g e nt a n d P h a s e m a k er T u b e s C o m pl et e S y st e m 1 0 0 m L, 1 0 0 チ ュ ー ブ A 3 3 2 5 2 ¥ 3 7, 0 0 0
T RI z ol L S R e a g e nt a n d P h a s e m a k er T u b e s C o m pl et e S y st e m 2 0 0 m L, 2 0 0 チ ュ ー ブ A 3 3 2 5 3 ¥ 5 7, 0 0 0
T RI z ol Pl u s R N A P urifi c ati o n Kit a n d P h a s e m a k er T u b e s C o m pl et e S y st e m 5 0 回 分 A 3 3 2 5 4 ¥ 6 4, 0 0 0
T R I zol 試 薬 と P h a s e m a k er T u b e s
L o t 1
T R I zol 試 薬 と P h a s e m a k er T u b e s
L o t 2
T R I zol 試 薬
2, 5 0 0
2, 0 0 0
1, 5 0 0
1, 0 0 0
5 0 0
0
ng/µL
n g / µL
A 2 6 0/ 2 8 0
2. 5 0
2. 0 0
1. 5 0
1. 0 0
0. 5 0
0. 0 0
A260/
280
肝 臓 か ら の R N A 回 収
T RI z o l試 薬 +P h a s e m a k er T u b e
T RI z o l試 薬 単 独 に 対 す る 増 加 収 量
L ot 1 2 0 %
L ot 2 1 4 %
T R I zol 試 薬 と P h a s e m a k er T u b e s
L o t 1
T R I zol 試 薬 と P h a s e m a k er T u b e s
L o t 2
T R I zol 試 薬
1, 4 0
1, 2 0
1, 0 0
8 0 0
6 0 0
0
ng/µL
2. 5 0
2. 0 0
1. 5 0
1. 0 0
0. 5 0
0. 0 0
A260/
280
膵 臓 か ら の R N A 回 収
4 0 0
2 0 0
n g / µL
A 2 6 0/ 2 8 0
T RI z ol 試 薬 +P h a s e m a k er T u b e
T RI z ol 試 薬 単 独 に 対 す る 増 加 収 量
L ot 1 1 1 7 %
L ot 2 1 2 0 %
サ ン プ ル : 1 05 - 1 06 個 の H e L a 細 胞 ( 3 5 m m デ ィ ッ シ ュ で 培 養 )
培 地 を 除 き 、 T R I z o l を
5 0 0 µ L 加 え て 細 胞 を 溶 か し
ま す 。
4 ℃ 、 1 5, 0 0 0 × G で 1 0 分 間
遠 心 し 、 取 り 出 し ま す 。
2 0 0 - 2 5 0 µ L の 水 層 が 回 収
で き ま す 。
実 験 の 流 れ
細 胞 溶 解 液 を す べ て P h a s e
m a k er t u b e に 移 し 、 ク ロ ロ
ホ ル ム を 2 0 0 µ L 加 え 、 良 く 混
和 し ま す 。
R N A が 溶 け て い る 水 層 ( 上
層 ) を 回 収 し ま す 。 傾 け て も
ゲ ル バ リ ア は 動 か な い の で 、
最 後 ま で 回 収 で き ま す 。
イ ソ プ ロ パ ノ ー ル を 加 え て
遠 心 。 R N A を ペ レ ッ ト で 回 収 。
製 品 名 サ イ ズ 製 品 番 号 価 格
Cli c k -i T E d U C ol ori m etri c I H C D et e cti o n Kit 5 0 ス ラ イ ド C 1 0 6 4 4 ¥ 8 7, 8 0 0
Cli c k -i T T U N E L C ol ori m etri c I H C D et e cti o n Kit 1 キ ッ ト ( 5 0 反 応 分 ) C 1 0 6 2 5 ¥ 9 7, 0 0 0
ア ル キ ン 分 子 を 含 む チ ミ ジ ン 核 酸 誘 導 体 の 5 - et h y n yl - 2' - d e o x y uri di n e( E d U ) を D N A 鎖 に 取 り 込 ま せ 、 ア ジ
マ ウ ス 心 臓 の 切 片 を 、 Cli c k -i T E d U C ol ori m etri c Kit で 増 殖 中 の 核 ( 茶 色 ) や 、 M o v at ’s P e nt a c hr o m e 染 色 で 非 増 殖 細 胞 の 核 ( 灰 色 ) 、 コ ラ ー ゲ ン ( 黄
Cli c k -i T T U N E L C ol o ri m e t ri c I H C D e t e c ti o n Ki t
ア ポ ト ー シ ス 後 期 に フ ラ グ メ ン ト 化 す る D N A 末 端 を 、 ア ル キ ン 分 子 を 含 む d U T P で 酵 素 的 に 標 識 し ( T U N E L
法 ) 、 上 記 キ ッ ト と 同 じ 反 応 フ ロ ー で 発 色 さ せ ま す 。
図 2. マ ウ ス 小 腸 に お け る ア ポ ト ー シ ス 細 胞 の 観 察
マ ウ ス 小 腸 の F F P E サ ン プ ル を Cli c k -i T T U N E L C ol ori m etri c Kit と メ チ ル グ リ ー ン で 染 色 。 ア ポ ト ー シ ス ( T U N E L ポ ジ テ ィ ブ ) 細 胞 は 茶 色 、 普 通 の 細 胞 の
核 は 緑 。 I n vitr o g e n ™ E V O S ™ F L A ut o C ell I m a gi n gで 4 0 倍 の 対 物 レ ン ズ を 使 っ て 撮 影 。
p a g e 0 9p a g e 0 8
I n vi t r o g e n ™ T RI z ol ™ 試 薬 で 組 織 や 細 胞 か ら R N A を 回 収 す る 際 、 I n vi t r o g e n ™
P h a s e m a k e r T u b e を 使 え ば 、 回 収 操 作 を 簡 便 化 で き ま す 。 T RI z ol ミ ッ ク ス 遠 心 後 に 、
デ ジ タ ル P C R で コ ピ ー 数 多 型 ( C N V ) 解 析 を タ ー ゲ ッ ト シ ー ケ ン ス 解 析 の ベ ス ト ソ リ ュ ー シ ョ ン
Q u a n t S t u di o 3 D デ ジ タ ル P C R シ ス テ ム I o n S 5 / I o n S 5 X L 次 世 代 シ ー ケ ン シ ン グ シ ス テ ム
製 品 名 製 品 番 号 価 格
I o n S 5 シ ス テ ム チ ッ プ 作 製 自 動 化 シ ス テ ム 付
I o n S 5 シ ー ケ ン サ 、 I o n C h ef シ ス テ ム 、 卓 上 遠 心 機 、 無 停 電 安 定 化 電 源 装 置 、 イ ン ス タ レ ー シ ョ ン キ ッ ト 、 設 置 ・ 基 本 取 扱 説 明 付 S 5 - 0 0 1 C S 2( 2 年 保 証 ) ¥ 1 7, 7 0 0, 0 0 0
I o n S 5 X L シ ス テ ム チ ッ プ 作 製 自 動 化 シ ス テ ム 付
I o n S 5 X L シ ー ケ ン サ 、 T orr e nt サ ー バ ー 、 I o n C h ef シ ス テ ム 、 卓 上 遠 心 機 、 無 停 電 安 定 化 電 源 装 置 、 イ ン ス タ レ ー シ ョ ン キ ッ ト 、 設 置 ・ 基 本 取 扱 説 明 付 S 5 X L - 0 0 1 C S 2( 2 年 保 証 ) ¥ 2 9, 8 0 0, 0 0 0
製 品 名 サ イ ズ 製 品 番 号 価 格
Q u a nt St u di o 3 Dデ ジ タ ル P C R シ ス テ ム Pr o Fl e x P C R シ ス テ ム 付 き 1 式 Q S 3 D - P F( 2 年 保 証 ) ¥ 6, 4 0 0, 0 0 0
T a q M a n C o p y N u m b er A s s a y s, S m all※ 3 6 0 反 応 ( 2 0 µ L 反 応 系 ) 4 4 0 0 2 9 1 ¥ 5 0, 7 0 0
※ 異 な る サ イ ズ や 各 種 T a q M a n A s s a y の 検 索 は こ ち ら か ら ⇒ w w w.t h er m ofi s h er. c o m/j p - a s g e
● よ く 研 究 さ れ て い る 9 遺 伝 子 ・ 計 7 4 箇 所 の 突 然 変 異 を 同 時 検 出 ( O n c o S c a n F F P E A s s a y Kit の み )
● 無 償 の N e x u s E x p r e s s S oft w a r e f o r O n c o S c a n ™ で マ ル チ サ ン プ ル の 全 ゲ ノ ム コ ピ ー 数 を 迅 速 に プ ロ フ ァ イ ル
P O I N TP O I N T
F F P E サ ン プ ル 中 の 固 形 腫 瘍 の 全 ゲ ノ ム コ ピ ー 数 異 常 を 解 析 !明 確 な ジ ェ ノ タ イ ピ ン グ や C N V 解 析 を 実 現
O n c o S c a n F F P E a n d C N V F F P E A s s a yT a q P a t h P r o A m p M a s t e r Mi x a n d T a q P a t h P r o A m p M ul ti pl e x M a s t e r Mi x
F F P Eサ ン プ ル 由 来 の 微 量 な 分 解 D N A を 解 析
高 品 質 な ジ ェ ノ タ イ ピ ン グ デ ー タ を 提 供
阻 害 剤 へ の 高 い 抵 抗 性
様 々 な 用 途 に 合 わ せ て 選 べ る T a q P a t h シ リ ー ズ
分 解 が 進 ん だ F F P E サ ン プ ル に 最 適 化 さ れ た M ol e c ul ar I n v er si o n Pr o b e ( MI P ) テ ク ノ ロ ジ ー
を 使 用 し 、 F F P E 由 来 の 希 少 な D N A に 対 応 し ま す 。 7, 0 0 0 サ ン プ ル 以 上 の 検 証 に お い て 、 ア ッ セ
イ 成 功 率 は 9 0 % を 超 え 、 1 0 年 以 上 経 過 し た F F P E 由 来 の D N A 解 析 に も 成 功 し て い ま す 。
S N P タ イ ピ ン グ ( 右 図 ) や C N V 解 析 に お い て 優 れ た 結 果 を
提 供 し ま す 。
P C R 阻 害 物 質 に 対 し て 高 い 抵 抗 性 を 示 し ま す 。
ジ ェ ノ タ イ ピ ン グ や C N V 解 析 だ け で な く 、 遺
伝 子 発 現 解 析 用 マ ス タ ー ミ ッ ク ス も 提 供 し て
い ま す 。 マ ル チ プ レ ッ ク ス で は 最 大 4 タ ー ゲ ッ
ト ま で 対 応 。 す べ て 阻 害 物 抵 抗 性 が 高 く 、 ロ ッ
ト 管 理 が 行 き 届 い た 再 現 性 の 高 い 結 果 を 提
供 す る 製 品 で す 。
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