Eletroforese em gel de acrilamida

Separação de Biomoléculas Eletroforese em Gel de Acrilamida

Eletroforese em Gel de Acrilamida

• Metodologia de separação de biomoléculas

• Baseada no peso molecular (KDa) e/ou na carga das moléculas

• Pode ser realizada uma dimensão ou duas dimensões (2D)

• Pode ser em gel desnaturante ou não desnaturante


Arranjo básico de um sistema de Eletroforese


Diagramas de aparatos de corrida de gel (A) tubo; (B) eletroforese vertical; (C) Eletroforese horizontal; (D) horizontal de camada fina


Gel de Agarose e de Acrilamida (A) Géis de agarose são formados por pontes de hidrogênio e interações hidrofóbicas entre os polímeros

(B) Géis de Acrilamida possuem ligações covalentes cruzadas entre camadas de polímeros


Principais soluções utilizadas para confecção de géis


Soluções finais de Gel – De corrida e Stack


Diagrama de aparato de eletroforese vertical - montagem


Montagem do aparato


Montagem do Aparato


Efeito de menisco na forma do gel. Adicionar água ou n-butanol acima do gel permite uma superfície reta para melhor formato das bandas


Montagem do Aparato


Montagem do Aparato


Gel final corado


(A) Gel de acrilamida para separação de DNA; (B) Gráfico tamanho (par de bases – bp) X distância percorrida; (C) Gráfico do log do tamanho (bp) X distância percorrida


Exemplo de tabela de cálculo para encontrar o peso molecular


Exemplo de tabela de cálculo para encontrar o peso molecular


Sistemas de blotting eletroforético (A) Sistema de transferência úmida (tank buffer)

(B) Sistema de transferência semi-úmido

Eletroforese em gel de acrilamida

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