Ejemplo formato artculo
Determinacin cuantitativa de protenas solubles por el mtodo de
biuret ngela Ruiz, Anglica Quiroz & Carlos Maje
Estudiantes Del V semestre de Ingeniera De Alimentos
Docente: Yudi Silva
Universidad De La Amazonia Avd. Circunvalar, Barrio Porvenir
Florencia -Caquet
Bioqumica
Abril
2015-------------------------------------------------------------------------------------------------------------Resumen:
Para el estudio de la estructura de una protena, de la actividad de
una enzima o el contenido protenico de un alimento, es necesario
conocer cuantitativamente la concentracin de las protenas por tal
razn en esta prctica se utiliz el mtodo de Biuret con el objetivo
de conocer la concentracin de protena contenida en la clara de
huevo, donde se realizo una curva estndar, al despejar la ecuacin
la curva se obtuvo 130,14mg/ ml de albumina y en porcentaje se
obtuvo 13%. Palabras claves: cuantificacin de protenas, Biuret,
curva patrn, espectrofotometra. IntroduccinEstimar la concentracin
de protena es necesario no solo en los laboratorios de
investigacin, sino tambin en la industria alimenticia, farmacutica,
y biotecnolgica en general. Existen muchos mtodos para la
determinacin de protenas. Primitivamente, la cantidad de protenas
se evaluaba midiendo la cantidad total de nitrgeno proteico, y
teniendo en cuenta que este elemento representa aproximadamente el
16% del peso de una protena. Este era un mtodo largo y laborioso y
con poca sensibilidad. La aparicin de mtodos calorimtricos ha
permitido solventar estos dos inconvenientes. (Arellano &
Duhalt, s.f)Entre los mtodos que se basan en la formacin de
complejos colorimtricos entre las protenas y reactivos especficos
se encuentran: el mtodo de Biuret, el mtodo de Lowry y el mtodo de
Bradford. Tomado de: MANUAL PRCTICAS DE LABORATORIO DE
BIOQUMICA
Los tres mtodos tienen como principio alguna reaccin qumica de
los grupos alquilo o arilo de los diferentes aminocidos. El mtodo
de Biuret es la tcnica ms simple para la determinacin de protenas
solubles, las sustancias que contienen dos o ms enlaces peptdicos
forman un complejo purpura-violeta con sales de cobre (II)
alcalinas (figura 1). Es posible que el color se forme por la
formacin de un ion coordinado, tetracuprico, con dos grupos amida
adyacentes. El desarrollo del color es diferente para cada protena
y su intensidad se puede determinar espectroscpicamente a 540nm. La
cuantificacin de la protena se lleva acabo con una curva patrn, el
principio establecido por la ley de Lambert Beer. Existen pocas
interferencias en esta determinacin; entre ellas, la presencia del
ion amonio altera el desarrollo del color; algunos pigmentos
absorben a la misma longitud de onda, algunos lpidos y
carbohidratos son capaces de formar complejos con el ion
coordinado. (Bolaos, Giselle, & Herrera, 2003)
El espectrofotmetro que se va a manejar en la prctica es del
tipo convencional de haz simple. Un esquema del mismo se presenta a
continuacin:
Figura 2: Esquema de un espectrofotmetro convencional de haz
simpleEl objetivos a realizar en esta prctica es determinar el
porcentaje de albumina obtenida en la clara de huevo por el mtodo
de biuret. Materiales y mtodos Los materiales utilizados en esta
prctica fueron: 8 tubos de ensayo, una gradilla, un beaker, un
agitador el espectrofotmetro, dos pipetas.
Reactivos: solucin de albumina de huevo, reactivo de Biuret,
NaCl.La prueba consisti en: primero, en preparar la muestra con
solucin de albumina de huevo, luego se rotularon 9 tubos de ensayo
y se procedi de la siguiente manera: Un tubo se rotulo como blanco,
y el resto se rotularon con nmeros de 1 al 8; al tubo rotulado como
blanco se le agrego 2.0 ml de agua y 4.0 ml del reactiv de biuret,
al tubo 1 se la agrego, 0.2 ml de patrn de albumina, 1,8 ml de agua
y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 2 se le agrego 0.4 ml de patrn
de albumina, 1.6 ml de agua y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 3
se le agrego 0.6 ml de patrn de albumina, 1,4 ml de agua y 4.0 del
reactiv de biuret, al tubo 4 se le agrego 0.8 ml de patrn de
albumina, 1,2 ml de agua y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 5 se
le agrego 1.0 ml de patrn de albumina, 0,5 ml de muestra, 1,5 ml de
agua y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 6 se le agrego 0.5 ml de
muestra, 1.5 ml de agua y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 7 se
le agrego 1.0 ml de muestra, 1.0 ml de agua y 4.0 ml del reactiv de
biuret y al tubo 8 se le agrego 0.3 ml de muestra, 1,7 ml de agua y
4.0 del reactiv de biuret.Despus de tener todos los tubos con la
solucin se colocaron en reposo por 30 minutos en una parte oscura.
Al trmino del tiempo se realiz la cuantificacin de la solucin por
medio de un espectrofotmetro a 540 nm de los tubos, entre cada
medicin se lavaban las celdas; al tener todas las mediciones se
dispuso a realizar la curva de calibracin.Resultados y Clculos
Figura 3: tubos de ensayo despus de agregarle patrn de albumina,
muestra, agua y reactivo de Biuret.
Tabla 2: Resultados Obtenidos Del Espectrofotmetro Y Clculos De
La Concentracin De Albumina
TubosAbsorbancia[ Mg/Ml Albumina ]
10.1350.167
20.1630.330
30.2000.500
40.2380.667
50.2730.833
Tubo de la muestra a determinar la concentracin de albumina
:
80.249130,14
Los tubos 6 y 7 se omitieron debido a que los resultados
arrojados por el espectrofotmetro estn por fuera de los rangos de
los tubos 1 al 5
Clculos para determinar la concentracin del tubo 8:
Convertir los mg a gramos
Regla de tres simple para saber cuntos gramos hay en 100 ml. 1
ml
X 100 ml
Ahora si determinamos del porcentaje peso/ volumen de la
concentracin de albumina en el tubo 8
Discusin de los resultadosCuando se determin la absorbancia por
medio del espectrofotmetro de los diferentes tubos del 1 al 5 (vase
tabla 2) se observa que la absorbancia va aumentado de tubo en
tubo, y esto es debido a que la intensidad del color de la reaccin
es proporcional a la cantidad de protena en la muestra. Esto se
observ claramente en la coloracin de las soluciones (vase figura
3), el tubo #1 fue el ms claro de todos y es el tubo que contiene
tan slo 0.2ml de la solucin patrn de protena. En el tubo #2, 3, 4,
y 5 el color va aumentando en tubo en tubo, de acuerdo al aumento
de la concentracin de protena. Adems, la solucin problema (tubo 8)
tiene tambin un color claro y present un valor de absorbancia de
0,249 que se encuentra entre los valores del tubo #4 y 5.Despejando
de la ecuacin de la recta se obtuvo una concentracin de 130,14mg/ml
de albumina contenida en el tubo 8, y en porcentaje peso/volumen se
obtuvo 13%. Segn Gmez, 2013. la clara de huevo tiene 10,9 % de
proteina. El resultado obtenido es casi silimar al establecido por
Gomez.
ConclusinAplicando el mtodo Biuret se puede determinar la
concentracin de protena en unas muestras problema, que resulta de
despejar una ecuacin de los valores de absorbancia en una curva
patrn originada a partir de concentracin de protena
conocida.Cuestionario:1. Describa que es el espectrofotmetro y para
qu sirve. Rta: Un espectrofotmetro es un instrumento para medir la
transmitancia o absorbancia de una muestra, en funcin de la
longitud de onda de la radiacin electromagntica.Sirve para calcular
las concentraciones de las distintas sustancias en funcin de la
absorcin del color.2. defina con sus propias palabras que es una
curva patrn.
Rta: Son las medidas conocidas en orden ascendente que sirven de
gua para ajustar una solucin problema.3. cules son las ventajas y
desventajas, de emplear los reactivos de biuret para cuantificar
protenas explique. Rta: Dentro de las ventajas del reactivo de
Biuret es que es bastante especfico para protenas, muestra pocas
interferencias y es barato. Y la desventaja es que es poco
sensible.4. mencione cual es la razn de que el mtodo de biuret la
absorbancia de una protena se lea a una longitud de 540nm.
Rta: El color violeta caracterstico se presenta a esa longitud
la cual se da por la coordinacin de un tomo de cobre con cuatro
tomos de nitrgeno. El complejo se basa en la desprotonacin de los
grupos amida para formar el enlace con el cobre (II) o por el
establecimiento de un enlace coordinado entre el metal y los pares
de electrones libres de los tomos de oxgeno y de nitrgeno del
pptido..5. Explique si una curva patrn puede ser empleada para
cuantificar sustancias diferentes a las protenas y cules seran las
diferencias con estas. 6. cul es la finalidad de utilizar un tubo
como blanco? Mencione si siempre se utiliza agua como blanco.
Rta: Tomar la medida de la cual parte la curva patrn, no siempre
se utiliza agua como blanco, sino una mezcla concentrada de la
sustancia con la cual se est trabajando.Bibliografa Arellano, H.
G., & Duhalt, R. V. (s.f). cuantificacion de proteinas.
Recuperado el 19 de 04 de 2015, de
http://www.smbb.com.mx/revista/Revista_1998_2/bitacora.pdf.Bolaos,
N., G. L., & Herrera, C. H. (2003). Qumica de Alimentos: Manual
de laboratorio. Recuperado el 19 de 04 de 2015, de
https://books.google.com.co/books?id=8VpJ8foyDiIC&pg=PA36&lpg=PA36&dq=curva+de+calibraci%C3%B3n+para+la+determinaci%C3%B3n+cuantitativa+de+las+prote%C3%ADnas&source=bl&ots=q1sOlQfj1f&sig=lqVb8LgOiSKr0VnCK2NTZ3uQqOw&hl=es&sa=X&ei=5UcwVYrgMoKFsAWQ-4CACw&ved.
CALLE, H. D., SNCHEZ, S. C., & LAITN, J. C. (s.f). MANUAL
PRCTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA. Recuperado el 19 de 04 de
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Gmez, D. (2013). HUEVOS: GENERALIDADES. Recuperado el 29 de 04
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https://deymerg.files.wordpress.com/2013/10/huevos_generalidades.pdf.
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