Top Banner
Comparative sequence analysis of the INS±IGF2±H19 gene cluster in pigs Vale rie Amarger, 1 Minh Nguyen, 2 Anne-Sophie Van Laere, 1 Martin Braunschweig, 1 Carine Nezer, 2 Michel Georges, 2 Leif Andersson 1 1 Department of Animal Breeding and Genetics, Swedish University of Agricultural Sciences, Box 597, SE-751 24 Uppsala, Sweden 2 Department of Genetics, Faculty of Veterinary Medicine, University of Liege B43), 20, bd. de Colonster, 4000 Liege, Belgium Received: 18 July 2001 / Accepted: 12 March 2002 Abstract. IGF2 is the major candidate gene for a paternally expressed Quantitative Trait Locus QTL) in the pig primarily aecting muscle development. Here we report two sequence contigs together comprising almost 90 kb containing the INS± IGF2 and H19 genes. A comparative sequence analysis of the pig, human, and mouse genomic sequences was conducted to identify the exon/intron organization, all promoters, and other evolutionarily conserved elements. RT-PCR analysis showed that IGF2 transcripts originated from four dierent promoters and included various combinations of seven untranslated ex- ons together with three coding exons, in agreement with pre- vious ®ndings in other mammals. The observed sequence similarity in intronic and intragenic regions among the three species is remarkable and is most likely explained by the complicated regulation of imprinting and expression of these genes. The general trend was, as expected, a higher sequence similarity between human and pig than between these species and the mouse, but a few exceptions to this rule were noted. This genomic region exhibits several striking features, includ- ing a very high GC content, many CpG islands, and a low amount of interspersed repeats. The high GC and CpG con- tent were more pronounced in the pig than in the two other species. The results will facilitate the further characterization of this important QTL in the pig. A paternally expressed QTL Quantitative Trait Locus) af- fecting muscle mass in pig has been identi®ed at the distal end of pig Chromosome Chr) 2p. The QTL was mapped inde- pendently in a Large White/Pietrain intercross Nezer et al. 1999), a Wild Boar/Large White intercross Jeon et al. 1999), and later in an intercross between Landrace/Large White and Meishan pigs de Koning et al. 2000). Pig Chr 2p1.7 shows conserved synteny with human chromosome 11p15, which is extensively studied because of the presence of a cluster of imprinted genes. Among them, the insulin-like growth factor II IGF2) gene is paternally expressed and was identi®ed as the major candidate gene for the QTL, because of its involvement in muscle growth and dierentiation Florini et al. 1995). The paternal expression of pig IGF2 has been con®rmed Nezer et al. 1999). IGF2 is ¯anked on its 5 0 and 3 0 sides by the insulin INS) and H19 genes, respectively, and these three genes cover a region of about 150 kb on human Chr 11p15 and 1 mouse Chr 7 Zemel et al. 1992; Onyango et al. 2000). These three genes seem to have a closely related regulation and have been extensively studied because of their involvement in several pathologies. The VNTR present in the 5 0 region of the human INS gene is associated with susceptibility to insulin-dependent diabetes mellitus IDDM; Bennett et al. 1995). This VNTR has an eect on INS mRNA levels Pugliese et al. 1997; Va®adis et al. 1998), and it also in¯uences the expression of IGF2 in human placenta in vivo Paquette et al. 1998). However, this transcriptional eect is absent in leukocytes Va®adis et al. 1998), suggesting a tissue-speci®c regulation dependent on the particular promoter used for IGF2 transcription. IGF2 is a complex transcription unit that consists of 10 exons in human Mineo et al. 2000). The ®rst seven exons denoted 1±6 and 4b) are non-coding leader exons, while exons 7±9 encode pre-pro IGF2 consisting of 180 amino acid residues. Exons 1, 4, 5, and 6 are preceded by dis- tinct promoters P1±P4), which give rise to a family of mRNA transcripts containing dierent leader exons but the same coding exons Holthuizen et al. 1990). The dierent promoters confer a tissue-speci®c as well as a development-speci®c ex- pression of the gene. IGF2 and H19 are expressed in a monoallelic fashion from the paternal and maternal chromosomes, respectively, and their imprinting is closely co-regulated. Over-expression of IGF2, with or without disruption of the imprinting pat- tern of itself and H19 is implicated in several disorders in the human, mostly growth disorders and tumors. For instance, the Beckwith-Wiedemann syndrome shows evidence of both H19-dependent and H19-independent pathways aecting the IGF2 imprinting status Brown et al. 1996; Reik et al. 1995). Considering the complex regulation of IGF2 and the close interaction between INS, IGF2, and H19, our ®rst step in understanding the molecular basis of the QTL eect was to sequence the region covering the three genes in pig. Because no dierence in the coding sequence of IGF2 was identi®ed in animals carrying dierent QTL alleles, the causative muta- tions) may be regulatory Nezer et al. 1999). Comparative sequencing is a powerful tool to identify functionally impor- tant sequences that are evolutionarily conserved even between distantly related organisms. Human and mouse comparative sequence analysis was used to identify new genes and potential regulatory elements in the human Chr 11 imprinted domain Onyango et al. 2000; Ishihara et al. 2000). In this study, we used comparative sequence analysis of pig, human, and mouse to de®ne the organization of these three genes in the pig and to identify potential regulatory elements that could be responsible for the QTL eect. Mammalian Genome 13, 388±398 2002). DOI: 10.1007/s00335-001-3059-x The genomic and cDNA sequence data reported in this paper have been submitted to GenBank and have been assigned the accession numbers AY044827±AY044828 and AF466293±AF466299. V.A. and M.N. contributed equally to this work Present address of V.A.: UMR1061 INRA/Universite Limoges, 123 av. Albert Thomas, 87060 Limoges, France. Correspondence to: L. Andersson; e-mail: [email protected]
11

Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

Apr 27, 2023

Download

Documents

Simon Usherwood
Welcome message from author
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
Page 1: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

��������� �� �� �������� �� �� ���������� �� �� ��� �� ����

���� �� �������� ���� �� ���� ��������� ��� ���� ������ !�� ����"���� ����� �#��� ����� $������

�� ��%������

���������� � � ��� ����� � �� ���� ��� ���� �� � ���� �� � ��� �������� �� ����� �� �� � �!" �� #$ �������� �����#��������� � ���� ��� %������ � &���� ��� '�� � �� � ���� �� � ( ��� )�$*+� #,� -�. �� /������ $,,, ( ���� ���� ��

0��� ���1 �2 3��� #,,� � ��������1 �# '���� #,,#

�&������' ���� � ��� ��4� ��� ���� ��� �� � ������������������ 5��� ��� �� 6�� � (��� )56(+ ��� � � �� ��� ���7��� � ������ ���������. 8��� �� ����� �� ��9������ �� ������� ���� � � ����� �, :- ��� � ��� �������� �� � ����. � ������� �� ��9���� ����� � � ���� �� ����� �� ���� ��� � ��9����� ��� ������� � ��� �� ��� ��; �� ��� <�� � ��� �������� �� ��������� �� �� ������� �������. 06"=/0 ����� � ��������� ���� ������ ��� � � ���� ��� ��� � 7���� ��������� ������ ��� �� ��- �� � � ���� ���������� ��"� ������� � �� ����� �� � ���� �������� � �� ���"� �� >� �� ���� �������. 6�� -������ ��9����� � ��� �� �� � �� ����� � ��� � ��� ��� ��������� �� � �����:�-�� �� � ��� � :��� ����� �� -� ������� ����� ������� � ��� � � �� ������� � ���������. 6�� ������ ���� ���� �� ��������� � � ���� ��9����� � ��� �� -����� ���� �� � � ��� -����� ����� ���� ���� ��� ����� -�� � ��� ������ � � �� � ���� ���� ���.6� � ��� � ��� ��� - �� ������� ��� : � ��������� ����" � � ���� � �� �/ ����� ��� /�� ������ �� � ������ � ���������� �������. 6�� � �� �/ �� /�� �"��� ���� ��� ������ ��� � � ��� ��� �� �������� ��. 6�� ������� � �� ��� � ���� ��� ������� ��������� <�� � �� � ������ 56( ��� � �.

� ��������� ��������� 56( )5��� ��� �� 6�� � (���+ ��"���� � ������ ���� � � ��� -�� ��� >�� �� ��� � ���� ��� � � /������ )/��+ #�. 6�� 56( ��� ������ ��"������� � (���� ?� ��;= ���� ������� )@�<�� �� ��.����+� � ? �� ���;(���� ?� �� ������� )3� �� ��. ����+��� ����� � ������� -����� (������;(���� ?� �� ��'� ��� � �� )�� A � �� ��. #,,,+. = � /�� #��. ����������� ����� � �� ���� ������� ������ �� �� ������ ���� ���� �� -������ � ��� ������� � � ������� � ��� ��� ����. ��� ����� ��� ��� "� :� ����� ����� BB)����+ ��� � ��������� ��������� �� ��� ��� >�� �� �����4� ��� ���� ��� �� ��� 56(� -������ � �� ������� ������ ����� �� � 7���� �� )%�� �� ��. ����+. 6��������� ������� � � � ���� ��� -�� �>���� )@�<���� ��. ����+.

���� � C�:�� �� �� �� *� � ��� -� ��� ��� )���+ ��� ����� ������� ����� �� ����� ����� ���� ���� � ��� ��-�� ��, :- ���� /�� ����� ��� ���� /�� )D������ ��. ���#E F��� �� ��. #,,,+. 6���� ����� ���� ���� ����� � ������ ������� ������� �� ���� -�� ����� �������� �� -������ � ��� � ������� ������� ������ ��. 6��&@60 ������ ��� �� ��� � ��� ���� ��� ��� ����� ���� � �� ������� - � �� � ��� "������� � �-�������� ��� )B��'E ����� �� ��. ����+. 6� � &@60 ��� � �7��� ��� �0@� ������ )=��� ��� �� ��. ��� E &�>�� � �� ��. ���2+��� � ��� C����� ��� ������� � ���� ���� ��������� � � )=�9����� �� ��. ���2+. 8������ �� � ������ �� ���7��� � �-��� ���:����� )&�>�� � �� ��. ���2+� ������� � �� ����"���� >� ������� ������� ��� ���� ����� ���������� �� ���� ������ �� . ���� � � ������ ������ �� � � ���� �� ��� � �, ��� ���� )' � �� ��. #,,,+. 6��>��� ���� ��� )����� �GH �� $-+ ��� "�� � ���������� �� �� ��� G� ���� ���"�� B�%# �� �� � � �2,�� �� � ��� ����. !�� �� $� �� �� H ��� �������� -� � �"� �� ������� )=�G=$+� �� �� � �� � �� � � ��� �� � �0@������� ��� ��� � � 7���� ������ ��� -�� ��� ������ � ��� )8���� <� �� ��. ���,+. 6�� � 7���� ����������� � � ����"���� >� �� ���� �� � ���������"���� >� ��"����� � ��� ���.

���� �� � ��� ��������� � ������ � ���� ��� ��� ������� �� ������� ��������� ������� ������� ��� � ��� � � � ������ �"���������. F���"������� � ����� � �� � � ���� � ����� � ��� ��� � � ���"��� � ����� �� � � ��� ����� ������� � ������ ��� ����� ����� ����� � ������ �� �����. %� ��������� ���:� ��"? ����� ������ ���� �� ���� �-�� �"������� �� �" ������� �������� �7��� ���� ���� ��� � � ������ )��� �� ��. ���HE 0� : �� ��.����+.

/� ��� � ��� ������ ������� � ���� �� ��� ���� ������ -����� ���� ����� �� �� �� >��� ���� �������� � ��� �������� -�� � � ��� 56( �7��� ��� ���9���� ��� ��� ���� � ��� ����� ���� � �. ������� � 7����� ��� �� � ��9���� � ���� ��� ��� >�� � ���� ����� � � 7���� 56( �������� ��� ������ �� ����"� )�+ ��� -� ��������� )@�<�� �� ��. ����+. /������ ����9��� � � � ������� �� � ��� �� ���� ���� ���"��� ��9����� ���� ��� ����� �� �� ������� ��� -������ ������ ������� ��� ���. 8��� �� ���� ������� ����9���� ����� � ��� ���� � ��� �� �� ���� �� ���� ����������� ������� ��� ���� /�� �� ��� ��� ��� )F��� �� ��. #,,,E B�� ���� �� ��. #,,,+. B �� � ������ ������ ������� �� ��9���� ����� � � � �� ����� �� ����� ��>� ��� ��� <�� � ����� ����� ���� ��� � � �� � ��� �� ���� �� ��������� ������� ���� ���� -� ����� -���� ��� 56( �7���.

'����� � ���� �*� *22G*�2 )#,,#+.

�FB1 �,.�,, ;�,,**�",,�"*,��"�

6�� ��� � �� ��@� ��9���� ���� ������� �� � ����� ����

-�� ��-� ���� � ����: �� ���� -�� ��� ��� ��� ������

��-��� �I,$$2# G�I,$$2#2 �� �%$HH#�*G�%$HH#��.

&.�. �� '.@. ��� -���� �9����� � �� � ��:

������� ������� �� ���.1 �'0�,H� B@0�;� ���� ��J ( ����� �#* ��.

��-��� 6����� 2 ,H, ( ����� %����.

�������������� ��� (. ������E ����� � (� �.������K-��.��.��

Page 2: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

�������� ��% ����%�

�!��� ��� ��!�� ��"!���� ����� 6�� ���� ��9���� ���� ���� �������� ��� � � � ��- �� � �� ������� � ��9�������� ��-�� ����:E (B�$$, )��� � � �#*$2+ �� �/,,H$,2 )���H�,,� � $#�2�� ������� ����������+. 6�� ���� ��9���� ���� ��� � ��� ��� ��:� ��� ��� ��9���� �/,�#*2#. 6�� ���� ����9���� � ��� �/,,$��H� �� ��� ���� � ��9���� ����=,,*�2# �� �%,$�,��.

#���������� ������$ �� �%� &�� � ����� ��/ �@� ��� ��� >��-� �� � ��� 5B��!@ ����� � � � : � )5B��!@� ������+. 6�� ������ � ��/ �@� ��� � ������ � �� �, � �� � ���B ����� �� �<���. 6�� �������� ���� ��������� -� =%�!. ���� ���� �� �� $&;� �� �H � �� �$�/ � �� ��� ����� � ��� ������ ��� ,.� � #.� ���.%��� � ����������� �� ���� ���� ��� �� � �� ��� � �� -�� ����� ��� �������� ���� � ���� <�� -� ������� � �& � ���. ���B ��"��� �� �������� ���� ��-���� � �@!���* )@�� !���� � "��-�+.

&�� ��"!�����$� �@� ��� ��/ * , ��� ��� >�� -� � ��:�� ���� � ����� ������ -� ����;������� ������� . 6���� � "������ � �@� ��� ���� ���� � ������ -� �, � �� ��!*�B )@��!���� � ��-�+ �� �, � �� * �/. � ������ �@� ��� ��������� �� ������ ����� �� �������� -����� �.� �� #.� :- ���� ��� ����� ��� >�� � �� ��� 5B�!L BB : � )5B��!@� ������+. �-�� �,,� � ��� >�� �@� ��� � ����� � �,, � � &��8� ����� ������/B2 )��������"=������ � � ����� �������� �����+ -� �� � 6$�@� � ���� )@�� !���� � ��-�+ �� ��� ���� � ������� L(�-��� '� �� �� =���� � �@� ��� �������� -� � ��:�� � ��� � ������� ��9����� � �� � ������ '�* ������� �� ������ �� ���� -��� � ��� � � ��� 6��� ��� ��9��� � : � )=��: !���� ���� ��� ������+. ��9����� ���� �� � ��B * ������ � ��9�����)=��: !���� ���� �� � ������+. � M���� ��������� � �� � ���� � ���/ ���� �� �� ��������� � �� � /� ���� ��9����� -� �� � �����6= � � ��� 6��� ��� : � )=��: !���� ���� �� � ������+.

���B ����� �� �������� ��� � ��� � ��� ���� ��"9����� �� � ��� !D116@� 6����� B���� ������ )!� �����6����� ��� '�� �� ?B+. 6����� ������ ����- �� ���"�� � �@� ��� ��9����� �� ����� -�� �-��.

&������������ ��� (���� ��9����� ���� �����-��� -� �� � ���=����;=����;/��� ���:��� )!� � �� ��. ���2E ��� �� ��. ���2+.6�� �����-��� ��9����� ���� ��� ����<�� � �� � ��� ��� � ��"����� ������� �������. ��9���� ����� � � �� ��@� ��9�������� �� � �� �� �� �� �(��6 �� ����1;;���.�- .��. �.��. 0�"��� � �� ������� ���� ���� <�� �� ��� >�� -� 0�����'��:��)�.%.�. �� � N =. ����� ���-� ����E ����1;;���.����.���� �"�.���; ���.����+. B ���� � ������ � � ���� >� ���������� ��"������ ��� ������ � � -���� � ������� ��� ��� � �� ��� ��������� ������� � �� � ������ � � �B@! ��9���� �� ���� � �"���"� >� �������. ��9���� ��� �� ���� ���� -�� �� -� �� � &B�6�)��-���: �� ��. #,,,E '��� �� ��. #,,,+ �� ����1;;���"���.�-�.��.6�� ����� � -����� � � �� ���� ��9����� ��� �� � ��������� )3���-�� �� ���- #,,,+. ������� ���� ��� ������ /��)�. ' �:��� �� 0. ���- � ���-� ����+ �� ������ � ��� ����"��� � /�� �����. �� �������� � /�� ���� � ��>�� �� � �@�������� �� ����� #,, -� �� � �� � �/ ���� O�,� �� � -������"�"�������� ��� � /�� � ����� ��� O,.H )���� ��"����� ��%����� ��2 +. /������ ������� ���� ��� >�� -� �� � ���) ������ �������+ �� �� �� �� �(��6� �� �� � �-��.

#)���# ��� (��� �� ���� ������������ ����� �� ����� � ����������� ���� ���� ����� ��<� � 9� � ���� �� ����� ��� ,�/ � 0@������� )��- + �� � ���� 0@� ��� �������� -��� � 60B<� )�B�/F �0(+ ����� � � ��� �����������P� ���"��. 6�� ������ 0@� ��� �@��� B )��- + �������� �� �� �����-��9����� ��� ����� -� ����G������� ������� . % ���"����� ��@� ������ � ��� �� -� �� � ���� 0@� ������� ��"�� � ��� �����������P� ������ � )�������� =������ � � "����+.

06"=/0 ��� ���� �� �� � �� ��� ���������"�/ ��@� =/0: � )/(F@6!/8+. 6�� ���� � �� ���� ���� ���� � ������ � �������� � ��� ��� ������� )=�G=$+1 =�� ������ �� ��� B�%#!L�%

��"��6���/��/6����6���6��"*� �� � �� ��������� ��� B�%#!L20 ��"6�//��//6�/6����6�����"*� ���4��� -����� �� �� 2E =#� ������ �� ��� B�%#!L$%��"6///6���6/66//��/���/6���/�6"*� �� $ ��������� �� ��� B�%#!L 0 ��"/6/�/6����/��6���/��/�"6��/��"*� �� E =*� ������ �� ��� B�%#!L�% ��"/��//"/�6//6////���/��6/���/"*� �� � �� ������� �� ���B�%#!L 0 ��"���/��6���/��/�6��/��/�/���"*� �� E �� =$ ������ �� ��� B�%#!LH% ��"��/���/6//"/��/66//6//6//6//"*� �� H �� ��� ������� �� ���B�%#!L�0 ��"���/���/6�/66//���6�6/�6��/"*� �� �. 6�� -�� �� =/0 ������� ���� ������ ��� ������ ������ ��9����� � ������ � '�����/!� �,,, ��9��� � ����"������ �� � ��� �I!�� �� !6 ��� ���� ��� ����� ��9��� � : �)�������� =������ � � ����+.

(� ���

#���������� ������$ �� �%� ��$ &�� � ����� 6� ��/ ����)��/ #�* �� * ,+ ��� � ���� ���� ������ ��� � � ���� � � -���� -� �� � ���� �� ���� )3� �� ��. ����+.�@� ��� ����� �� ���� ��� � ������ � �� ��� ����� �� �<��� ���B� �� ��� ������ � ����� �� �������� ������������� -� ���� �� �� ���� �� ������ >��� ��� ������"����� � )=%�!+. ��/ #�* �� * , ��� �� � �� �������B� ����� �� ��������� ������� ����� ��� � � <� ����.# � H* :-. ��� ����� �������� )������ ��� H*":- �������+���� ��-���� �� ��9����� ��� -�� ���. F������"� � � �� ���� ���� ��� ��� �� ��� ��-���� �� ���� ����9��� � � �� ��� ��/ �@� �� ��������. /���� � ���� -�� �� ��9����� �� ��� �� ��9����� � ��� ��-���������� ���- ���� ���� � � ��� ���B ����� �� ����"���� )% �. ��+. 6�� ���� � ��� ��� �� � ���� ��/ * , �� #�* ��� ����-� ���� -� =/0 ���� >��� ����9��� �. 6�� ���� � ���������� ))�+ ��� ��� ��� >����� � ��� ��9��� � ������.

��"!�����$ �� �%� �������� ��� � ��$����� � ����� � "-���� ��� ��������� �� ��/ * , ��� � ��� ����������� . F� ������ ���� ���� ��9����� ��� -�� ����� � � ����� ������ �H,, � ��"9��� �� ��9�����. ����� ��"���-��� ����� ������� �� ���� ���� � >�� ����. 6�� >��� �������� ����� � � ���� �� ��� ���: ��� � ��� ��� ��� -�������� �� ��� � � ����� ���. 6�� ���� ����� =/0���� >��� )� �� ��� ��/ �@� �� ��������+ � � ��� � �"����� -����� �� �� �� ���� ���� -� ������ �� � ��������� � ������� �� ����� � -� �� � ��� ������ ������9����. 6�� �� �� �������� ����� ��-�� � � ��/ ��"��� �� �������� ���� � � ���� ������ -� ��9��� � -��� ��� ���:. 6�� #$":- ���B ������� ��� � � �� ������ ��� �.#"� �.�"� H.�"� �� #$":- ���B �������� ��� � ���� �������� ��� ���� ��-���� �� ��9����� � �������� ���� �. � *#":- �� ���� ��9���� ��� " � ��� ���� >�� ��� � )� �� ��� ������� ��� �� �������� �� � �H":- ��9���� ��� � ��� � ��� ���������� ��. ��� ��� ���B � ��� � ��� ����� �� ��� ������� ��� ��9����� ���� � � ���� �� ���� <�� � ������� ��� ����� �� ��� )% �. �+. 6�� � ������ -�������� ���� ���� ������ �� �� �����1 )���.� :-G���G,. :-G�����22.� :-G��

6�� �/ ���� � ��� �� ��9����� ��� � � � � >"����� � ���� � � ��� ��� ������� � ��� ����)6�-�� �+ �� -�� ���� �� ���� � ���� ��� ��� �����������. � ����� ��-�� � /�� ����� ��� ��� ��� >����� � � � �� ��� � 7����� ��� �/ ����� ��� ��-���� � <�� ��� ������ � � ��� ����. 6� � � ��� ��"���� ��� � ��� � ����� ��� ���� ����� � /�� ����� � �-�� �, � ��� � ���� � � ��� ���� )6�-�� �E% �. �+.

�. ������� �� ��.1 ����� � � ���������� = �� *2�

Page 3: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

6�� ��9����� ���� ������� �� ����� � �� ��9����� -� �� �0�����'��:�� )6�-�� �+. 6�� ���� ��-�� � ������� � � ���� ���� ��� � ��. B ��� � ��� � �� � � 7����� � ����� � ��� ����� � ���������� �������� �� �� � ������ ��� � ��� � ���� ���� ��� � �� ������� �����-�� � � ���� ������� � � � ���. 6�� �������� ��� ���������� <�� -� � ����� � ��� �� ���� � ���������� ��"����� �� � � �� ����� � � ���� ������� -�� ���� ��.6�� �� ���������� ������ ��� ��� � � ���� ��� ��� �'����� � B���������� 0����� )'B0+� �� �� ���� ���������� -����� � � �� ����E 'B0 ������� �������� ������ � ���� ���������� ������� )�B@!+ ��� ��� �������.

���!��!��� �� �%� ��$ ���* ����* ��� � $����� 6�� ��; �� ��� <�� � ��� � � ���� ��� ������� -� �� � ���� ��� � ��9���� � �� ��@� ��9����� ��� � � ���

��� ��-�� )��� �0@� �%,H$���E ���� �0@� L�H,�$ ��06"=/0 ������� ����� -�� -���+ � ��� ���� )�+. ?� ��� >�� �, ���� ��� ��� � �� �� ��� ������� � ����� � ���� ���� ���� ��� >�� -� � ��- �� �������� �0@� ��9����� -�� �� ��� � 7���� � �����)����: '##* #� L,H#��� L,*$#*� I�*H**� L�H�*��L�H�$,� �� L,*�H#+. 6�� � ��� � � ���� ��� >�� -���9���� � � ��� �� � �� ��� ���� �0@� ��9���� )��"��: '*#,�*+. !� �� �� � <��� �� ��9���� ��� � ��-����� ��� ���� �� � � ���� ��� �������� 6�-�� #.���� ��� � 2� �� � ��� �� � �� ����� �� �� �����������. 8������ ��� ���� ���������� ��� ��� ������� ���� �������� � �� ��9���� ��� � �� ��� � ��� $� ���. 6�� ��� ���� ������� ��� ��� ��� �� �� � ����������� ��� ����� �� ��� >��� ��� ��� � ��� � ������� ��� � �� H�� ��� ��� -����� ��� �� ���� ��. 6��

)��' �' �1 ���B ����� �� ��� � �� � � ��/ ���� )#�* �� * ,+ ���� � ��� �������� �� � ��� �. ! �� �1 /������ �� ��9��������� � � ��� � � �� ���� ��9����� �� � �������. /������ ������� ��� ���������� -� �� -��� � :�� -� � � �. ������ �� �� � -������ ������� ������� ��� >�� -� �(��6 �� ��� ���� ����� ������� ����. =� � � � ���� �������� �� /�� ����� ��� � �����.

*�&� �' ��-�� ��9���� ����� � � ��� ���� �� � � �������� �� � ��� �.

�������� �

= � 8���� = � 8���-

(���� )-�+ *#�$H *��H$ �H�$,$ ,� �,� �/ H�., H�.$ H .� H�.H/�� ����� � � �H H6��� ����� � /�� ����� )-�+ 2�H,� $�2# � �H## ���$,6��� ��-�� � /�� � ����� ��� 2#* �,� ��#$H � �B���������� ������� )� � ���� ��9����+ ,.$ �.$� �.HH 2.#�� ���� ������� )� � ���� ��9����+ *.� $.�� �.#� �.#$6��� ������� )� � ���� ��9����+ $.$$ �.�# #.�� �.$�

� 6�� ���� �������� ��9���� � � ��- �� � �� ������� � ��9�����1 (� �$$, )� � �#*$2+ �� �/,,H$,2 )$� ,# � H�,,�� ������� ����������� �����+.- ����: ��9���� �/,$��H )#��H � �H �H� ������� ����������� �����+.

*�, &. ������� �� ��.1 ����� � � ���������� = ��

Page 4: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

��������� � � � �������� -�� ��� ����� � ��9���� ��� �� � ������� ���� ��� � � �� ����� 6�� ����� � ��9���� ��� �� � �� � ��9����� ���� �� ����-�� ��� �� .��� ��� ��� �� ������� �� ���� ���� ��� �� ����������� �� � ) ,�+� ���� ��� #� *� $� �� � )H2� HH� $� �� *�� ������� ����+.

6�� ���� ������ ��9����� �� ���� ����� �� ���� ��� ��-�� ��� !�:���� � =����� ����-��� )����1;;���.���. �-"� -.��;E =�� �� �� ��. #,,,+. ?� ���� ���� �������9����� � ��� �� ��� � � ������� -� ��9���� � � ��� ��������. 6�� �� � � � ��� ������� ��� �������� �� ������� ��� � � �� ��9���� ��� �� � ��� ���� �� )% �. #+.

�%��������+����� �� ���� ����������� ��� �������� !��$� �� ���� ��� ��! � ����!�� 6�� ���� ������ ��� �� ��� ������ ������� � 7���� ����� �� ����� ��� � � ����� �������� -� 06"=/0 ����� � ��� ��� ��� 6�-�� *. =����� � )=�+ �������� ����� ���� �������� ����� � ���� ����� ���� �� ������ ���. B ��� � � ��� ������ �� �������� ��� ���� "���� ������� ���� ��@� ��9���� )L�H,�$,+ ��� �

��� ��* �� G�� �� ��� � =� ������ �� � ���� �� *�� � =� ������ �� ���� � �� #. 6�� =� ����� ����� ���-�� � ����� ������ � ����� � ����������� ���� >� ��"��� � =�. 6�� ���� ���� �� � ��� �� =� ������ ��� ��� ����� � ���� -�� � ����� � ���. =����� # � $ )=#G=$+������ ��� ���� �������� ��� ���� ����� � �����. =# ������������� �� � 7���� ������ ���� �� ��� ������� ��������� ��� ������ �� ���� � �� $- � ���� ���� �-������� ��� ������ �� � ���� �. 6�� ��9��� � ������� � �������� ���� =/0 ������� ��� ����� ������� � ���� ��: ��� ���� �� ���� � �� ��� ������� ���� ����� ���"��� ��� ��� � �� $- ��� ��� ���. 6�� >� � � ����� �� $- � � ������ ���� � �� ��� ������� ��-� ���� -�F���� �� ��. )���$+ �� ������ �� -� ' � �� ��. )#,,,+� ���>���� ��� �� ����� � � �,�� �� � ���� ����.

��������� � ��� (��� �� �%� �!���� � ����,#%�� ��� �%��������������� !����� � ���� ������ �� � � ���� � ���-���.�� ������ )�� :- �������� � �+ ��� ���"� ���� ������� -� B�� ���� �� ��. )���2+ ��� -�� � � �"

*�&� �' /������ �� ��; �� ��� <�� � ��� ���� �� � � ���� ����� �� � ����.

!� ����� )-�+=� �� �� �� �. �����

B�� ����� )-�+=� �� �� �� �. �����

��� !�; �� = � 8��� )�+ = � 8��� )�+

B@�� $* $# H� �H# � � ,# #,* #,$ 2� *�� 2 Q�,* �$, �$H 2�

����� ��# �� 2* $$, 2�## Q�,# ��* ##, 2* �#H, �*�2 H2* #*# #$# $ H�� H*�� HH$ *2� *�, 2 �*H �� $$- �H� �H� �, H$2 H�# H�� ��$2 ��H$ 2� 2�� �$� *H ��� �,, �, �2� �H�2 Q�, �H* �H* 22 ��,� � ,� Q�,2 �$� �$� �� #�2 #�* Q�,� #$, #* 22

�� �*�$ �*#2 H 22 �H Q�,# �#H �*� 2 �� ��* ��2 ��* �$ 2* 2, Q�,$ �#2 �#* 2# 2# 2� �H� ��, H�$ ,

� =� �� �� �� ���� ����� ���� ������ �� -� �� � /������? �� ����1;;���.�- .��.�:E /������? ���� � ������ ������ �� ����� �� ��9���� ��� � �� Q�,�.

)��' �' ��9���� �� ���� � ��� ���� ��� � ������ ��� � �� ��� ���* ����� ��� ����. 6�� ���� ���� ������� ���: ��������� �� �����. 8��� ������ ��9��������� ��� ��� !�:���� � =����� ����"-��� )����1;;���.���. �-"� -.��+. B��� � �� ���� ���� ��9����� ��� � ����� -� ��� ���� ���� ���� ��� � ����� -� ������.

�. ������� �� ��.1 ����� � � ���������� = �� *��

Page 5: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

��� �� � �� !�6� ���� ���� ��-��9����� �>���� -�@����� -�� �� 0�/! �������. B� ��� �������� � �� ����-� B�� ���� �� ��. )���2+ �� ��-��9����� �� #%�� -�F��� �� ��. )#,,,+. 6�� ������� � ������ ��� ��� " ��� ���� "�� �� �� �� ��� �� ��������� �:������������. 6�� ���� ������ �� � � � ��������� <�� -� ��������� �� � �-�� #,, -� ��������� -� � �� � ##*�-� ��� � �������� �� � �� ����� #$ $ -�. 6�� *� �� ��� � ��� ������� ��� � ��� - � � ������ �������"��� � ��� �� � -���� ��� ���� -� � ��� � ���"�����:� �� �� � ���� ���� � ���� �� ��� ��� ������� ���"��� �� ����. B� �� ��������� �� :��� � ������� � ������ � *� �� � ����� ������ ���.

6�� �� �� � ���� �������� � � ����� ��� ��"�� � ������� -����� ����� ����� �� � � ). �*G� 6�-�� $+. 8������ � �� ��� ������ � � ���� !�6)�%*�*,�H+ � �:� � � ������� -� F��� �� ��.)#,,,+� ���� ���� � � � !�6 ���� � � �� � ��� ���� -� ��� >��. 6�� �%*�*,�H !�6 ���� ��� �� �G �� � -����� �� ����� ��������� ������� � ����� ��� �������. B� � ������� �� � ������ ���� ���������� � �� ��� �� � �� � � ������� ��� ����.�(��6 �������� �������� � �� ��� �%*�*,�H !�6 ��������� ���� � � >���� ������� �$$"-� ����� � �� �� �* � � ������� ���� �� �� ��� � -� ������ -�� ��� ��� ���� �� ���������. 6� � ����� �� L'R, *H�* ��� ���� ��� �$ ������ � �-�� #, :- -����� � �� -���.. �� ���� ���� ������� � ��� � �� ��� ������� � ���� ��� � ��9����� � � � ������ �� �� ���� �� ������� ���� ������� � ��G�� -���� �� � �� ���� ������. ?� �������� ������� ���� L'R, *H�* � � �����"�� "� �� ��� ���� �� .

F��� �� ��. )#,,,+ ��� ��� >�� � #2#"-� �� ���� ������ �-�� #� :- �������� � �� 6�� ������� � ��"� � �@� ��9���� ��� ������� � ������ ���� �.,":-������ ��� ��� � �� ���� � ���� �������� �� -�� )����+� -� @����� -�� ����� �. B� ��� �������� � �� �%���6�� ������� � ��9���� �� ������� ������� � ���� ��� ���� � ��� � �. ������ ����� � � ��� ����"��� � ��� � ����� ����� �� � � � � � ��� ���� ���� �� ���� �� ����� ����"��������� ����� �� �� �"������ ���. �%�� �� ��������� �� ����� �� � �����S�� � ����� ���� �� �� ����.

��$% ( ������ �� ���������$ � ������� ��-�� ��9���� ��"� �� ���� � ��� �������� �� �� ��� � -����� � �� ��"��� �� ���� ��� ���� ��� ����� � ��� �� -����� ����

�� � � � � ���� ��� ���� -����� ���� �� ����� � � ��� ���� )% �. *+. 6�� ��� ��� � ���� �������� -�� � �������-�� � �� � �� ����� � ��� � ��� ��� �����:�-������ ������� ��� ��� ����� ���� ��. 6�� ������� ������)3���-�� �� ���- #,,,+ ��� ���� � ������ � ������"� �� ����� � -����� ��� � � �� ���� ��9����� �� � ��� �� ����� �� �� ������� ������� )% �. �+. 6�� ��"9���� � ����� ������� ������ ��� ��� ������� � �� ������� ��9���� -� �� �� �� �(��6 )����1;;���.�- .��." �.��+� � �� ��� ���� � ����������1 ��� � <� E �������� � � ������ ��. 6�� ������� ���� ���� ��� � -� �"������ ��� ���� ��� � ����� 6�-�� $. ������� ������ ���� � ������ ��� � � �� ���� ��9����� �� � ����� � ��� ������� )���� � ���+. ������� ���� ���������������� ������� :� ����� �� ��������� ��� ��� � ���9����� ������� � �� ��� ���� ������� ������� �������� � ���� � -� ������ ��. ������� ���� � ���� ������� ��� )�@� ���: �� ���E 3���-�� �� ��. ����+� �� ����� ��� ��� � ��� �� ����� ������� �� �� "�� ���9����� ���� ��� � M���� � �� �. ?�� ����� � ��� ��"�� �� � � ��9������ �� ��� ���� ��� ������� � ��� ���� ��� ��� � ��� ������� -�� �� � �� ��� �� �� �� �(��6 -��� � �������� ���������� )��� � <� ��� ������ �� � � �"����� �#+.

?� ���� ������ �� ��� �� ��������� ������� ���� ���������� � -� ����� ��� ������� � ���� ������� .6� ������� ������� �������� � ��� ��� ������ ).� �� # 6�-�� $+ ��� ��-�-�� ����� ��� ������� ������� �� . 6���� ��� �� ���� � ������� �# � �&@60 ��9���� �� ������ �-�� �,, -� �������� � ������� ��� ��� )����� �� ��. ����+. 6�� ���� &@60������ � � � �/�����6�6����� �� �� ������� ����� �/"� �� ��� � �� ���� ����� � ��9� � -� �� � ��� / ����� ���. 8������ ��� �� �� �� ����� ��6���� ��� ��� >�� �� ���� � ���� ������� ����� �������� �� ������� � � ��� �� �� )�� ����� /����� 6���6�����6� ������ �� ����/+ ��� ������� � � ���9����� -�� ���� ��� � ��� <�� � ����� ������. 6���� � ����� � ��9� � -� �� ��� � � -������ � ��� ������� �������� ��������� � /�.

� ������� /�� ���� � H�, -� � ��� �-�� * :-�������� � ���� �� $� ���-� � 2 �� , /�� � ����"� ��� � � �� ����� ������� ����. ������� ���� ��9����������� � �� �� � /�� ���� ��� ���� ���� ������� ).# G*� 6�-�� $+. 6� � ��� �������� � � ������������� ������� ����� � 7���� ���� ���������� ��� �)�'0�+ ����� �� �� ���� � � 7���� �� ��������

*�&� +' /�������� <�� � ��� � ���� ������ ��� �� ������ )=�G=$+ ����� ����� �� ����� � ����� -� �� � 06"=/0.�

���� ������ �����

=� =# =* =$

!�� !�� !�� !�� !�� !�� !��6 ����� �� G� ��*� G� �G*� G� $� G� $�$-� G� �� G� H� G�

����� ������ )T+ T UTV T T����� � ��� T T T T UTV T T����� : ��� )T+ )T+ T UTV T T%���� ��� )T+ T T )T+ T T%���� � ��� T T )T+ T T%���� : ��� T )T+ T T%���� ����� T )T+ T T%���� -�� )T+ )T+ T )T+ T T%���� ������� )T+ T )T+ T T%���� ��� T )T+ T T

� 6�� ������� =/0 �� ���� ���� ������ �� ��� 4��� � �� �� 2 �� ��� =� ���� �� �� �� ��� =# �� ��� =* ���� ��� �� �� � �� ��� =$���� �. ?� ������ ���� ��� ������ ��� ��� ��� �� � ��� G�.)T+ W ���� �� � =/0 ������ � ��� ������� � � <� ��� -�� �� -�� � ��9�����.UTV W =/0 ������� ���� ���� ������� �� ��9�����.

*�# &. ������� �� ��.1 ����� � � ���������� = ��

Page 6: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

������� �� ��� ����������� ������ � ���� ���� � �� � � "����� ���� ������� ��������� � ����� )/���� � �� ��.#,,,+. 6�� ������ �� ����� �/%# )�/ - � � �����+ ������������ � ������� ��� ������ �� ������ - � � �������������� ������. '������� ���� ������ - � � � ����������� ��� ������� ������ )!�� �� ��. #,,�+. 8��������� ��� � � ������ � �$�� ���� �:������ ������ � "������� � ��� �'0� �������� � ������� � � ���"���� � ����"���� >� ������� � ��� ��� � � )?�-�� �� ��.#,,�+. 6�� �$"-� ��� ��� � � 7���� ���� ������������� # )�'0#+ ������ ���� �$�� �� H )'�������� ��. #,,�+ � ��� ���� ������� ��� � � ��9���� )2�� ��� ��+.

� ����� /�� ���� � �-�� *.� :- ��� � ��� ��� ��� ���� �� $ � � ���� � �� � � ��� -�� � ���� ����. � ����� ��-�� � ������� ��9����� ). *�G$#

6�-�� $+ ��� ��� �� � ��� �� � ���� � �� ���� �� ��� /�� ����. B��� $ �� � ���-� ������� � ����������� �������� �� �� ��� � :��� � -� ����� ���������� � ������ �� ��� ������� =* �� =$. �������� �������� ��� �=� - � � �� � �����/����/"���� �������� � ��� =* ������ � ��������� ������� ������ �� ��� =*G$ ������ ����� -�� -� 0 ������ �� ��. )��� +.'�� ���� ������� ������� � �� � ����� ���� � ��� � � ��2 -� �� ���� ���� � �� �� �:� ��� ������ ������ ��� �������� ��� )6�-�� $+. 6�� ���� *��60 ���-��� ����� ��-�� � ������� �������. 6���� ����� �������� ���� �������� ������� � �� � ���� � "����� � �� ���"���� ). $�G�� 6�-�� $+.

� ������ ������ � ������� ������� ��� ��� ��"������ � �� � ������� �� � �������� ���� � ��� ������� ��9���� ��� ��� ����� � ��� ��� � � )% �. $+ -�"

*�&� ,' /������ ������� )��� �� ���� ������� �� � ���� �������+ ��� ��� �������� )� � ��+ �� � )H, � � + ��� �. =� � � � ���� ����� ��� ��� ��� � ����� -� �����.

/�������������

=� � � � ��9���� (���� -�

��9����B��� �� � /����

/�������������

=� � � � ��9���� (���� -�

��9����B��� �� � /����

�������� ��$��� $� #��$ G#�� 2 *# �$� *�� G$,�$ �2 �,, ����� �, *,�*�G*,� * *� �## $, ,G$��H $ 2� ����� �� *,�$�G*,�HH ## �,,

��� � * ��*HG��� ## �, �# *��#*G*��H, *2 ������ $ �� $G�H#� $2 2� �* *�#,*G*�##� # �H���� � H�$�G ,HH �## 2 �$ *�***G*�*$� � �,,

H 2,HHG2,�� *$ �$ ����� �� *�* G*�*�$ �2 �$ ���� *� �60 2�*�G2��* #* �� ����� �H *��,2G*��#H �� ��2 2H,,G2H�# �* �$ ����� � *��2$G*�H�� # 22� �HH,G� $� �, 2� 'B0 ������ �2 *� *HG*� 2# $ 2*

�, ��*,*G��*�, $2 2� �� *#�2,G*#$*2 #�� 2��� ��$$�G��$2 *� �$ � ��$����# ��2H�G���,$ *H �� H, #,��G#��� #� �,,�* �#�2�G�##,H ## �� H� ##�2G#*#H H� 2H�$ �###,G�##*H � �,, H# *�� G$, $ 2 ���� �## �G�##�� � �,, H* �***G� �2 H� 2H�H �#���G�#�2$ *, 2 H$ �2�2G�2�* *H �$� �*,*2G�*,H2 *� �, H� �,2$ G�,2 � #� �H�2 �*##�G�** � ��� 2� ����� HH �,�**G��,#� � ��

��# � �� �* �,G�* � H# 2* H �H,��G�H�*� $� 2�#, �*2� G�*� H 2, �, H2 �H#��G�H#$$ *, �,#� �$,*2G�$,�� ## �� � � ��� � ����

�� G���������. ��,*, *$

H� �2$ *G�2��, *2 �,

## �$,2�G�$�*� $* 22 , ��# HG��* � �H 2$ � � ��� �%*�*,���

��* � #* ����$G�H,#* *, �, � #,#HHG#,# , $� 2$#$ �H*�2G�H*�2 $� �� # #,2��G#�,*, �#$ �# � � ��� �%*�*,�,�

#� �HH$,G�HHH #2 2� * #�#*#G#�#�� #$ �H#H � $,HG� �� *,2 2$ ����� $ ##$�HG##$�2 2* 22# �2,H�G�2,�# #$ �� � ##�2�G##H,� #� �##2 �2�$�G�2#H* ��� 2$ H ## ,�G## $$ $$ �*#� �2*#HG�2*$� #, �� /�� ���� #$#2,G#$*�� 2, �,*, �2�#*G�2��* *� � )���� �'0�+� 2 #�$ #G#� �2 #2 2H*� ��� �G���� #* �,, � � � *$###G*$#�# *� �**# #,��HG#�#*� *H 2� 2, $,� HG$,$2 *�# 2H !����� B�

��$ � ** #,*$HG#,* � #H �# 2� $#H�HG$# � ��H 2� !����� BB�

*$ #�� �G#�#,� *� �, ����� 2# $H$�$G$H�#� # 2H /��-��

*� #�22$G#��#* $, 2 2* $ $ HG$ �#2 �* 2 �����

*H ##,$�G##,�* �* �,, /�� ���� 2$ $2##*G$2#�� * ��* ##���G##�*� � �,, ���� �� $ 2� $�#2�G$�*�H *H �

��$- � 2H $�*��G$�*� $ �� /�H-��

��� � *2 #$*H*G#$$#� H 2� 2 $�$��G$��� H* 2$*� #$�,,G#$�$, $� �* 22 �, �2G�, �$ * �#$, #$H��G#$H�� * 2� ���� �� � 2� ��*H2G��*�2 *� � /� -��

$� #$ �HG#$ �* *2 �� �, ��$�HG��$ � H, 2�$# #$�, G#$�*2 *# �# �� �#�$#G�#��H �� ��

��H � $* #�**�G#�* * *� �� �# �#��$G�##� H$ �� /�2-��

$$ #H,��G#H,�, *# �� �* �#$$�G�#�2� �* 2# � � ��� �%*�*,�H�

$� #H�H#G#H�2* ## �� �$ �#H� G�#H*� �� �,,$H #H�*HG#H�22 �* 2� ����� �� �$���G��,#� *� 2 �����

�� � $ #2*,*G#2*H H� 2$ �H ��, ,G����� $H 2 ��2�� � $2 #�22,G#��,� *, �* � �H*$2G�H*2H *� 2

� 8��� ; ���� ������� ������� )F��� �� ��. #,,,+.- /������ ����� �� ������� )B�� ���� �� ��. #,,,+.� 8��� ; ���� ������� ������� )�� � �����+.

�. ������� �� ��.1 ����� � � ���������� = �� *�*

Page 7: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

���� ��.� �� �#.H :- ��� ��� ������ �� ����� � �.6���� �������� ���� ���� ��� >�� ����� ����� �� ���)%����� �� ��. ����E ���� �� %�������� #,,,+� ��� � �#"-������� ��9���� ���� � � - � � � �� �� /6/% )///6/"- � � �����+. 6�� ��9���� ��� �� � ��� ������� -�����

���� �� � � ������ ��� �� ��� �#"-� ������ � �� ����� � �� -� )% �. $+. /6/% � � �����-���� ������� ������-�� � ��� � ����� ��� ��� � �@�G���� �������� "����� � �� �� ���� �� ���� � ��� ��� ��� � ������"� � � ��� �� �� ������ ����� )F���� �� ��. #,,�+.

)��' +' ��9���� ��� �� ���� �� �� �� �� ����� �� � ���� �� ����� �� ���� ����� �� � ��� � ��� �. =;81 � �;����� =;'1 � �;����� 8;'1 ����;���� )��������� ��� ������������ � �� � � �� ����� � �,, -�+. /������ ��9�����

��� ��� ����� �� � ��� � �� � � ��� � � ��9���� )�� <"��� ����+� �� ��� ��������� � ��� � �� )�,�G�,,�+ ��� � ����� ��� ���� ��� ����. 6�� ���� � � ��� ��� ��� �-�� �����>��.

*�$ &. ������� �� ��.1 ����� � � ���������� = ��

Page 8: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

6�� �� ��� � � ��� � � ��� � � ���: ���������" <�� -� ������� ������"���� >� �������� )6�������� �� ��.���2+. /6/% - � � � ��� �� � ��� ��� ��� ���������� ���� �� � � �� ���� �� ���� ��� ��� ��� ���� � � � � ��� ������� )?�� � �� ��. #,,,+ �� ���� ���� ��� -��� � ��� � ������� � � ��-� � ���� -� �������� � ������ -���� �� )���� �� %�������� #,,,EA�7�� �� ��. #,,,+.

������� ������ ������� ���� ���� ��������� <�� ��"�� ��;� ���� )?�--�� �� ��. ���2E B�� ���� �� ��. #,,,+���� ��� �������� �� �������� � �� B ��� � �� ����� ������"���� >� ������� ��� � ������ �� *.� �� �.H :-�������� � ). 2, �� 2� 6�-�� $+. %�� ����������� ��9����� )/�+ ��� >�� -� B�� ���� �� ��. )#,,,+-����� ���� �� ���� ���� ��� ��� ���� ��� � � ). 2#� 2�T2HT2 � 2�T�,� �� ��T�# 6�-�� $� � �" ��� � /��� H� � �� 2� ������� ����+. /��� H� �� ��� - � �� ����"���� >� ������ ��� � ��� �� /�H � ���� ������� "������ � -������ � � �� ��� �� ��� �� �:������ ������)B�� ���� �� ��. #,,,+. ?� ���� ��� ��� ������� ���� ���"���� ���� ���� ���� ���� ��� >�� � -� ������� -��������� �� ����� -�� ��� � ���� � ��� �� �� �:� ). ,� #� �� �*T�$ 6�-�� $+.

-��� �����

?� ������ ���� � ������� �� ��9���� ����� � � �-�� �,:- ��� ��� ��� ��� � ��� �������� �� � ���� � �� ����� �� ����. 6�� � ������� -����� ��� ������ � � � ���� � ��� ����� �� , � �� ������ ������� ��"�� �� � �� � ������ ����� ������ �,, � �� ����� ��)������ �� ��. ���H+. 6�� ��9���� � � ��� �� � � �� ��� ���� -�� ��� ��� �� ����� � ��� �.8������ � � � :��� ���� ��� ��� �� ����� ��� ������� C���� � � � ��� � �� �/ ���� �� ��� ��� /�� ����� �� � ��� . 6�� ��9���� ��� �� ���� �� ��� ������� �� �� ���� �� ����� �� ���� �����:�-�� � � ��� )% �. *+.6�� ������ ���� ��� � � ���� ��9���� � � ��� �� -����� � ��� ���� ��� -����� ����� ���� �� �� ���� �� ����������� ��� �������� � ����� �� �. 6���� ��� ��� ������ �� ������� �� -����� ���� �� ���� ��� ���� ���� -� ���� "���� ������. 6�� ����� � � ����� -����� )� �� ��� ����� ������ ��� ���� )#,, :-E F��� �� ��. #,,,+ ��� � � � � �� ���� )#G* :-+. ���� �� * � ���� �������-����� � � �� ���� ) $�+� -�� � ���� )Q�,�

��� �� ������� � �� ���� � � �� % �. *+. 6�� �� C�: ���� � ���� �� � �� ���� �� ���� � �� � �� � ����������� -����� � � �� ���� )O ��+� -�� � �����)Q�,�+. 6���� ����� ���� � ������ ��-�� ��� ���� � ������ � ����� ������� � � ������� ���� �� ��� ��������� . 6�� ������� ��������� �� � ������� �� ����� � -���� ����� � ��� ���� �� ���� ���� � ��� ��������� ����� ����� .

6�� ������� )��� �� �(��6+ ���� ���� ���� � ��� ��������� ������� -����� ���� �� � � ��� ��� ��� � ��� �� ���� ������� ������� � �� ����� ��� � ��� ����� ��� -� �� ���. 6�� ��� ���� ��� )���� �� ��"�����+ � ������� � -� ��� ��� � �� ��� �(��6 ���������� �� �� ��� ���� ���� )3���-�� �� ��. ����+. B ������� ��� ����� � ���� ������� ������� ��� >�� -� �(��6�� ��� ������� � ��� �� � ��� ���:� � ������� �����9���� ��� �� ����� �� ��� � ���� ��� ������� -�"���� ��� ����� ���� ��. ?� ��� >�� ������� � "-� ����������� ��� �,,� ������� -����� � � �� ���� )6�-�� $+. ?�-�� ��� ���� �� � ������� � ������ � ������ ���� ���������������� � :� ������ �� ����� - � � � ���. � ���������9���� �� � ������� �� � � � :��� � -� ���� ���� ������. F���� ���������� ���� ���� -� F��� �� ��.)#,,,+ ��� ����� � ��� �"'- ��9���� ���� � ��� ������ ���� ��� ��� ��� . 6�� � ��> � � � �������������� ��� O�,, -� � �� O ,� ����� �� ��� ��. ��� ���������� �� ��� >�� ��� O2,�� ��� ��� �� ������� ����� ���� -� ������ �� �� ����� �� � � ��� ��� � �� ����� ������ � � � ��� ��� �� ���������� ��� ��� �� ����.6� � ���� ������ ��� ����� � �� ��� ��9����� )��"� �� ���� �� �������+� �� ���� �. � �� $.H� ����������� �� � ��� �� ������� ����� � � ����� ����� � ���*�.2� ��� ����� �� ��� ����;���� ����� � � ��� ��� -��%� ��� )F��� �� ��. #,,,+. ?�� ��� ����������� �� ���� ���������� ���� ���� � ������ ��� ��"�� � ��� � �� ��� � � �������� ��� � ���������9����� ���� ��� >�� -����� ����� �� �������� ��� �.6� � ���� ���� ��� ��4� �� � ��� ������� ��� � ������� �� � ����� ��� � ���� ��9���� � � ��� � ��.

F�� ��9���� ���� �������� ��� ��; �� ��� <�� ��������� �� ���� ���� �� ��������� ��� � � ��� ��������� �� � ���� � �. 6�� ����� ���� ��� ���� ����������� -����� ���� �� � �. 6�� �� ��� � �������� �� ��� ��� ������� ���� ��� >�� � � -� ��"����� �� ��9��� �. F�� 06"=/0 ����� � �>���� ���� ����� ���� ��� �� ��� ��� ������� ��� ���� ��� � �. B� ����� � � � ���� ��� ��-�� � ���� ��� ����� ���

)��' ,' ��9���� �� ���� � ��� ���� )8� � 8 + �� � � )=� � =*+ ������� �������� � �� ��� � ��� /6/% ����� - � � � ��.B��� � �� � ��� ���� ��9����� ��� � ����� -� ��� �� �� ���� ���� ��� � ����� -� ������.

�. ������� �� ��.1 ����� � � ���������� = �� *��

Page 9: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

�������� �� ����� � -� �� -�� �� -������ � � � ������� �� ��� � � ���� �� )����� $-+ � ��������������� � �� ' � �� ��. )#,,,+.

� ���� � ���/ ���� �� � ������ �� ������� �/�� ����� ��������� <� �� � ��� � ��� -�� ������ � �. 6� � ������ � � � >����� ������ � � ��� ����� �� �� � ��� ������� ��� � -� � ���� ��� ���� )F��� �� ��. #,,,+. 6�� ����� ���� � � � ��� ���9���� ��-� ��� ��� ��-�� � � � � ��� � :� ������� �� �� ���� �/ ���� � � ������ ���� � ��� � � ���� ��"����� � �� ��� ���� ���� � ������� �� � � ���� >� � �� ���� . 8������ � ������� ������� �� ����� � � �*,":- ��� � ��� � � /�� �� �� ���� /�� # )&. �"������� �������� + ���� � � � ��� �/ ���� -������ �� )$�.H� �� $�.$� � � �� ����� ������� ����+. 6��������� �� ������� � /�� ����� ��� � � �� � �"�� ��� ���� � � ���� ����-� ����. ������� ��� � ��� �� ������� ����������� � ������� ���� /�� ����� ��� ��"������ � ����-� �� �� �� �� ��� � � ������� )=����� ����. #,,,E !���� �� ��. #,,,+. 6�� ��� � /�� ����� ���������� � ������ �������� -� ����� � � ��� ��������� ���� � ��� ��� ���� -�� � �����. 6�� ������� � ����� � ��� : � � 7����� ��� /�� ���� ������ ��� � �������� ������ ��� )F:����� �� ��. #,,,+. /�� ����� ��� ��� ���� ���� � �� ��� � � ���� ��� �)B/0+ ���-� � � � 7���� �� ����� � �������� . 6�� ����������� � ����� B/0� ��������� ������� ������������� "��� � �� �@� - � � ������ ���� �� ��� �� "������� )8����� �� ��. #,,�+ � ��������� )!�� �� ��. #,,�+.

����� ��� : � ������� � ��� �� ����� � ���"������� ������� ��� ���� � � �� � ���� ����� �� ������ ������� ��� � � )6�-�� �+. B� � ��� -�� ���� ��� � � ��"� ����� ��� �� ����� - ����� � �� ���������� ������� ��� ������� �� ��� ����� -�� �� � ��� ����� ��� -������ � ��� ����� � 7����� ���������� ������� -����� ��� � ��� ���� � ��� �� �. � �� 2.#�. %���������� �� � � �"������ � ������ �� -� � � � ��� � 7����� �/ �������� ����� -� �- ����. 6� � �����:�-�� �� ����� � ���������� ������� ����� � -� ���� >� � ��� ������������� � � �� *,� � ��� ���� �"'- ��� /�� ����� ������� � ���������� ������� )F��� �� ��. #,,,+� ����� ������� ���9���� �� ��� ���� ���� � �-�� $��)(���� �� ��. #,,�+. 6���� ��� �������� ��� � �� ������ �� ��� � ��� � �� � �� ��� � � ����������������� �� ��� �/0 ��� ��������� �� �� ������� ���� ��� >���� -� � ��� � ��� ��� ������"�� ��� � ��� �������� )(���� �� ��. #,,�+. � �� ���� � ����������������� ��� ��� -������ ��� ��� ��� ��� ��� ���� ��� 1��2 � ��#� ���� ������� � �� � �����:�-������ � ��� -�� � ����� �������� �� �� ������� � -� �"������ -����� ���� �� ���� )!���� �� ��. #,,,+. 6������ ���� ���� ��� ���������� ������� ��� ������ ������������� ��� � � �����. 8������ ��� �������� -� ������� � ��� ���� ����� ������� � ��� ������� �� ��� � � � ����� ����� �� ������ � ��� � ��"9����� ��� � ����- ����� �� ���"��������� ����� ���. B������� ��� ���9���� � � ���� ������� ��� ���,���� ��"� � �� ����� � ���� ��� ��� ���� ������� )�$� �� �*�+. B���� ���� ���� -�� ��������� ���� � ���� ������� ��� ���� ���� ��� ������� � ��� ��� ���� )�� -��� �� ��. ���2+�-�� ����� ����� �� ��� -�� ��������� <�� � ���. �������� �������� � ������ � �������� �� ������ )������� /���������� � �� ������� �+ ��� *��60 � ���� � ������� ����� � �� ����� �� ���� )3� �� ��. ����+.

6�� &@60 �������� � ��� ���� ��� ��� �� �������� � ���� �� ���� -�� � ��� � ��� ��� � � ��9����.8������ ������� �"-� �� �� ������ ��� &@60 � � ������� ���������� ��� ������� � ��� ��� � �. B� �

� ����� �� �� � &@60 �7���� ��� ������� � -�� � ��� C���� ��� ������ ���������� ������ � ��� ������ - � ��� ������ �� ������. B� ���� ��� -� � ������ �� �����"- � � � ��. 6�� ���� ���� �� � &@60 � � ������� -������� 9� �� ������ ������� ���� �� � :� ���� �� � �� �� ����� ���� ��������� ������� ��� ���� ���� �������� ���"����� ���� ��� ���� � �� � ��9���� � ��� � -� � ������������� � �� ����� � �� ���������. &@60� ��� ����� ���������� ��-������ � ��� � ��� ���� ���� )����"��� �� ��. ���2+.

������� ������� ��� ������ ��� �� ��� � �� 6� ���� ��� -�� ��� � ��� � �� ���� � ���: ��"9� ��� �� ��� ��� � � � -�� � �� ���� )6���-����� ��. ����E 6�������� �� ��. ���2+. B� ���� �� � ������)A�7�� �� ��. #,,,+� �� �� ��� � �� � ������� �� ��������-���� ������"-��: � ���� /6/% )���� �� %��"������ #,,,+. 6�� �������� ������ � �� � ��� ����� �-� ��� ��4� ����� �� -� �� �� ��� ������ ��� � �� ��������� )8����� �� ��. #,,�E 0��� �� ��. #,,�+� ��/6/% ���� ���:� ��� �$��,� ������� ��� ������"�"� � "������� ���� )F���� �� ��. #,,�+. 6����� � ��� � � � ���� ��������� � �� - ����� � �����"�������� � �� � ��� ��� ��������� � � �� � ���� ��"� � � �������� ����� )@�:����� �� ��. #,,�+. 8�������-����� �������� � � ������ ���� ���� � �� �-���� ��� � � )/� �� ��. #,,�+. B ��� � �� ����� �� �� � �� �- � � � �� ��� ��� � ������� ������ �������� ������� ������ ��.� � �#.H :- �������� � �� � � ����� ������ ����� ��� ������� � ��� ��� � � � ��� ������������� � �������� "���� � �� ���� ������� �� � "������ ��� ��� ���� )������� �� ��. #,,,1 %�����"�� �� #,,,+. 8������ �� � � � >� �� �� ���� �������� � �� � ��� ��� � �. %���������� � �:������������"���� >� ������ ����� ��� � ��� � � ��� �$��������� ������ ��� ��� >�� ��� ��� � �$���� ���"�� � ��� )� ����� �� ��. #,,,+� -�� �� � � ��9������� � ��������� ���� �� � ��� . ������� � �� � ����"���� >� ���� � �� � ������ � � ���� �� ������ ��������� ���� �� � ��� ����"� :�� 56( ��� � �. 6�� *���� � � ���-�� ������� ������ ������� ���� �7���������� � -�� ���� �� � )?�--�� �� ��. ���2+. ��"� ��� ��� �� ����"��������� <��� ������"���� >� ������������ ����� �� ������ ������� ���� ���� ���� � � ����"���� >� ��� ��� ������ �� � ��� .

6� � ����� �������� � ����� ��-�� � ������� ����������� � ��� ���� � ���� �� ��� ������� � ���� ������"� . ������� ��������� �� � -� ���� � ��� �� ����������� -�� � �� ��� ��������� ��������� 56( �7��� ������� ��������� ��� � �. %�� ��� ��9���� ����"� �������� ����� � ��-�� � ���� � ���:��� �� -��������� �� ���� � ��>� ��������� ���� ���� � ��� 7���� 56( �������. 6� � �������� ���� ���� �� � ������� ��� ���� ��� . � ������ �� ������� ��� ���� ����� �� ��� ������� ���� ��� -� ������� ��� ���������� ������� ��� ��>�� ��� . 8������ ��� ��"����� � ��� ������ ����� ��� ���� �� � � �� �� �� -� � ����"���� � � � ��� ����� ��-�� � ������� ����������� ���� C��� � ���� ���� � �� �� ��� ���������� ��� - � �� ���� ��� 56( ������� ��� -� ��� � �����- �� �7��� � ���� ��� ��-�� ��� �. � ������ �� ��� ������ �������� � ��� � ����� ���� ������� � ���"� ����� �:������ ������. 6�� ��9���� ����� ��� ������� � �� ��� � ���� ����� ���� ��.

��3��4 ��$������ 6� � ��: ��� �������� -� ��� ���� �� 0�������/�� � �� %������ �� ��� �������� ���� �� %���� �� ����"��� � 0�������� ������� ���� ��� �� � ���� ��� ��� ���� � ' " ���� � ��� ������� )��;#G� ���+. 6�� ������ ���: 0. !������

*�H &. ������� �� ��.1 ����� � � ���������� = ��

Page 10: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

�� �. �� �� ��9��� � � ���� � ��� ��/* , �� ��� ����/����� 0��� B�� ���� � 6������� ���:���E @ ���� 3���-�� ��� � ���� � �� �������E !� : �����"0���7 �� - ����� � ��"� �����E �� �X �� ������ �� ������ ��� �����.

(�����

� ����� 3%L� 3� 0'� ���� �/� ���� '� )#,,,+ � �:������������"���� >� ���� �$�� �������� � �� $, :- �������� � ������. ��������� �# � *�#*G*�*,

������� &� ����� �� �� I���� '� �� � %� = � =� �� ��. )���2+����� � � � ��� -�� ��� ����� � �� �� ��� ����� � ������� � ������ ��-������ � � � � � ������ �� ����������.��� �� �#� H#G �

������ (� ���� -��� �� ���-���� '� ���� �� ������� ? �� ��.)���H+ /������ �� ���� ��� <�� � �����-�����. 6�� % ���B����� �� ?�:��� /������ �� ���� F��� <�� .'��� ���� � � G *$

���� �/� %�������� � )#,,,+ '������� � � /6/%"�������-����� ����� ��� ��� ������� � ��� �$�� ���. @�����$,�� $2#G$2�

����� �6� (������ �'� ���� �/� =���� !!� ��� � �! �� ��.)����+ ������� - � �� � ���� ���� � � �-���� �� B��'# � �����"� �� -� ����� ������ ��� �� �� ��� ��� ��� � ������ ������. @�� ���� �� #2$G#�#

��� A?� & ���� �3� � �:��� ?� /����"�� �� 3� /������� � ����. )���H+ B��� � � ����� ��� ���:� ��"? ����� ��"���� ����� � - ����� � ���� ������� ������ � �" ����"��� �������. 8�� '� ���� �� #,# G#,*#

/���� � '� ��� ?� (��� �� '�� 6� A����� � �� ��. )#,,,+����� � � � ����� ������ �$�� ������� ��� � ��� � � ������� �. @�� ���� #H� #,*G#,H

/� 8� @ �� �< !(� 0����� 3�� F��� =� �����-��� �� �� ��.)#,,�+ (�� � ��� � � � ��� "� :� ����� �����"BB ? ���P���� ����� ����� ������� �������� -�� � ����� � �/6/% � �� - � � � ��. /���� 0�� H�� $�$ G$��,

�� A � �3� 0��� : �=� 8��� < �� �� �� ����: 3�� ��������!? �� ��. )#,,,+ ����"� �� ��� �� -�� ���� � � ��������� ������ ��� � ��� � �. =�� @��� ���� �� ��� � � �$ G ��,

������� 0�� ���� 3�� � ����� 3%L� ���� �/� 8 �� A3 �� ��.)#,,,+ ����� � � � ����� ������ � ������ � ��� � � ��"������� � � �@� �������� �� ���� � �� ���. ����������# � *$��G*$#2

��-���: B� ���� '� (�� ��� '��� /� =������ ( �� ��. )#,,,+��� �� ������� � �� � ��9����� �������� -� *"������� �� ����� ��. ���� 0�� �,� �*,G�*H

!�� �� /���� � '� 8��� ���� 6� ��� ?� ������ � �� ��.)#,,�+ � �������� �������� ������ ����� � ��� �$�� ��� �" �. !'�F 3 #,� *��2G*�#�

!���� �� ���X � �:� '� =����� '� %���: F� 0� ����� 0 �� ��.)#,,,+ ��9���� �� ���� �� ����� � ��� ���:� ��"? ����� ��� 1 ��� ��� � �� � ��� ��� � � ����� ��������� ��� � �. 8�� '� ���� �� #H��G# ,H

!� � �� 8 �� �� (� ?��� '� ���� = )���2+ �������� � � ���"����� ��9����� ������ �� � �����. B. �������� ���������.���� 0�� 2� � �G�2�

%�����"�� �� �/ )#,,,+ ���� � ��� � �1 � ��� � ����������� ��� � ���. /��� � � �,� 02 #G02 �

%�� 30� !�� �D� '� ?��� %3 )����+ B�%�� ������ ������ �������� �. � �-���� 0�� *� *G�#

%����� '�� ����-� �3� =������ ��� 0���� �! )����+ '������� ��9��� � ����� � ��>�� ��� ��� � � �� ����� ? �������. 3 � � /��� # $� #�**�G#�*$,

���� ��"����� '� %����� ' )��2 + /�� ����� �����-���������. 3 '� � � ��H� #H�G#2#

��� �� �-�4 � /� ���� = )���2+ /���1 � ����� ��� �� ����9���� > �� �. ���� 0�� 2� ���G#,#

8����� /� A���� /� ���� �� ?��� �� '�:������� 0 �� ��.)#,,�+ /�� �������� ��������� ��� �$��,� ������. /��� � ���� ��#2G��*,

8���� <� =� �� ��� (�� %'� B:�4 � A� I����� '� �����-���3� )���,+ B��� >��� �� � �� ��������� <�� � � ����������� �� �� ������ � ��� ���� B�%"BB ���. � �� �� ���� ���� �,2 � *$�G*$*

B�� ���� A� A�� 0� %����� 8� D�-� � '� ����: 8 )���2+ ��9����� � $#":- ���� ��� ��� � ��� ��� ��� 8�� ����1 ��"� >��� � � ��� ������"���� >� ������ �� � � ��� �- ����� � ������� . '��� ���� �� �G

B�� ���� A� 8��� @� %����� 8� A�� 0� B��: 6 �� ��. )#,,,+/������ �� ��� � ��9��� � ��� >�� ��� � ����"���� >�������� �� ��9���� ������� �� �������� "��� � �� ������ ��� ����� �$��,� ��� � �. ���� 0�� �,� HH$GH �

3���-�� @� ���- 0 )#,,,+ �������Y� ��:-��� �� ������� ����� � ��9���� ����� �. ���� 0�� �,� ��$2G���

3���-�� @� � ��� !� ���- 0 )����+ /������ �� ����� � ��� � ��� � � ������� ���� �� ���� ��� �� ��.���� 0�� �� 2��G2#$

3� 36� /���-�� FX � 6X ���� �� � �7�� !� ������� & �� ��. )����+ ���������� ��������� 56( �7��� � �:������ �� ���� �� ������ ���� � �� ���� � ��� ���� ����. @�� ���� #�� �� G��2

A�7�� /0� �� ������� '� =��: AI� B��� !� 8� �� � �� ��. )#,,,+6����� �� �� ������ �� ��� ��� ��� �,�$�� ����. ������� �$� ��,2G����

(���� !�� ( � ('� � ��� �� @��-��� /� D�� '/ �� ��. )#,,�+B � �� ��9��� � �� ����� � � ��� ���� ����. @����� $,��2H,G�#�

'��� /� ���� '� �������< 30� =� �:� �� 0�- !' �� ��.)#,,,+ &B�6�1 � ���� < � ��-�� �@� ��9���� �� ����� ���- ����� �����. � ����� �� �H� �,$HG�,$

' � 0� % ����� !� ( �� �"3� %�4 ��"I������� I )#,,,+ =���������� �� ��� "� :� ����� �����"BB ������� �� -� ����� -������ �������� �� -������ � ������ �� �>���� � ��,�� ��. � ���� � ���� 0�� /��� #H2� 22HG2�#

'������ �� 8��� �� ���� (� /���� � '� ��� ? �� ��. )#,,�+� ����� � ���������� ��� ��� ��� ��� B��# ��� ���"���� ������ �� . !'�F 0�� #� ��,�G��,H

@�:����� 8� /���� �: 0�� =�����: =� =���� /� @�:����� I �� ��.)#,,�+ (�� � ��� � � � ��� ��� "� :� ����� ����� BB �������� -� - ����� � �������� � ��� ��� � �"���� ����/6/%"- � � � ��� �������� �����. =�� @��� ���� �� ����2� ���G��H

@�<�� /� '���� (� ������� �� /�� ����� ?� ��� ����� 3 �� ��.)����+ � ��� ��� 56( � �� ��4� �7��� ������ ���� �� ������� � ���� � ���� ���� � ��. @�� ���� #�� ���G��H

F���� �'� (���-��� A�� ?� !� )���$+ /�������� <�� � ���� :�� � � ��� �� ��� "� :� ����� �����"BB ����. �@�/��� � � �*� * G*22

F���� 0� 0�:�� �< 0� (-��:� & )#,,�+ /6/% � � � 9���������� �� ������ �� �������� � :�� � �� ���� �� �� � �����.6���� ���� � � �#,G�#

F:����� A� 8�� ����"6�:���� I� ( 6� &� 68� 8 �� ' �� ��. )#,,,+/������ �� ���� ����� � � ��� ���� ��� ��� ��� �������� �� ��� ��� ���� ���� �-���)1 ����� ��� �����"����� -�� � �� ���� ��"���� >� ��� � �. ����0�� �,� �2 2G�22�

F��� =� ' ���� ?� (���<:� 3� (��� /6� � ��� � �� ��. )#,,,+��9���� �� ������� �� ����� � � ��� ���� �"����-��� ��� ������� � ��� ���� ����� ��� ��� ��� . ���� 0���,� �H� G� �,

=�9����� 3� � ��:�: � @� =������:� /� &�>�� � =� ���� /)���2+ 6�� ��� �� ��� �-�� ��-�� � ����� ������� � ���� ����� �� ���� ������� �����. 3 � � /��� # *� �$��2G�$�H$

=����� '� !�"'���� F� !���� �� ���X � �:� '� %���: F �� ��.)#,,,+ ��9���� ������� �� ��� �- � �� � ��� � � ������:� ��"? ����� ������ ��� ������� ���� �� ����.8�� '� ���� �� �2#�G�2$�

=�� �� 0/� =��< &� 3� �� 6� ���� /� ������ = )#,,,+ 6�� ��:"���� � ������ ����-��� )!=�+. @���� � �� �� 0�� #2� *,#G*,*

=��� ��� �� D����� '� %�����< 3� �� D���-��� (3� �������� 03 �� ��.)��� + 6�� ��� ��� � ������ -�� ��� ���� ������ �������� �� ������ ���������� �� ����� � ��� �� �� ��� B@�&@60"B��'#������� - � �� ���� �� ���� �� �-����.@������ ��� #�*G#�

0��� '0� 8��� /%� 0 ��� ��� '� 30 )#,,�+ � ������ ��"�� ��� ������� -� ��� ������ � �� ��� ��� ��� � ���� ������� �� ������� � �������� �� ��������� �$�� ������� ���"�����. ��� �� $� �2HG��H

0� : ?� ��� A?� ���� � 8� (� ��� I� � �:��� ? �� ��. )����+B��� � � ����� � ��� ���:� ��"? ����� ������ ���"������ -� ������� ��� � � ������ ��� B�%#"8�� ��� . 8��'� ���� $� #* �G#*2�

�. ������� �� ��.1 ����� � � ���������� = �� *�

Page 11: Comparative sequence analysis of the INS-IGF2-H19 gene cluster in pigs

0 ������ (!� 8���� <� =!� �����-��� 3� )��� + B��� >��� � �:�� ��������� ������ �� ��� -���� ��� � �� � ��� ���� ��� "� :� ����� ����� BB ��� ������ =*. � ���� 3 *# � H2�GH�

�� -��� 8� I�� I� A�� 0� ���� 6� A�� �� ' �� ��. )���2+ ��������� ��� � ���: ��� ���� ��� ��� ��� ���,����5-� ���� ������ � ��� ������� � �� ��� 6���7���� ���1� ���� �� � �� � ���� ����� ������ �� � ������������������ . ��� �� $�� *,G*

6�������� 3(� ���� A(� ������� '� )���2+ ����� � ���� � 7���� ���� ���������� ��� ������� ��� � ��� ���������� � � �� �$��. ���� ��� �#� *H�*G* ,#

6���-��� A�� ���� 30� B���� 0�� 6 ����� �'� ������� '�)����+ � �������"���� >� �������� ��� � ���:� ��� ������� ���� ���� � ���. @�� ���� �� $, G$�*

&�>�� � =� ����� �6� 6�� 3�� ���-� 0� =������:� / )���2+� ������� -����� ���� � ������ ��� � ���� ������ ��

������ ���:����� �� � B��'#"����� ������� - � �� � ���� �� �-����. 3 /� !��� � '���- 2*� #�**G#�*�

?�--�� �(� B���� 0�� (����� 3'� 6 ����� �' )���2+ (��� � ������� � ����� �� �� ��� ��� � � � � �� �$�� ����.@����� *��� ��G ��

?�-�� '� ' �� �� (� �����-�� (� �� � !� ����� / �� ��. )#,,�+!���� �� � ����"���� >� ��� �� � ����� � �������� ��� �$����� ��� � ���� ����� ���������1 ����� � ������� �� ��� � �. '��� ��� �,�� �**G�$�

?�� � ��� '����� �A� F�� 6/� 3 ���� 0( )#,,,+ @��� ��� ���891,�)9� ��� ���� ������� �$ ��� � �� ������ � � � ���� ��� ����� ����,� ������� . ���� 0���,� � ��G� �2

D���� �� ������� '�� 6 ����� �' )���#+ =��� ��� � :��� � �������� � ��� ��� ����� 8�� �� ��� "� :� ����� ����� #.@�� ���� #� H�GH�

*�2 &. ������� �� ��.1 ����� � � ���������� = ��