Citogenética em quelônios Tiago Lucena da Silva
Citogenética em quelônios
Tiago Lucena da Silva
Introdução
Introdução
Criptodira:
Testudinoidea, Trionychoidea e Chelonioidea
Pleurodira:
Chelidae e Pelomedusidae
Introdução
Chelonoidis carbonaria
C. carbonaria X C. denticulata
Geochelone hesterna ( Aufemberg 1971)
Morfologia
Citogenética Cromossomos de
aves e répteis são muito variáveis em termo de tamanho e morfologia,caracterizando-se por cariótipos assimétricos, composto por macro e microcromossomos
Cariótipo de quelônios apresentam grande quantidade de microcromossomos, variando a proporção dos mesmos entre os grupos, apresentam grande variação do n cromossômico, podendo ser encontrado de 26 até 96 cromossomos
Material e métodos1. É coletado 3 a 5 ml de sangue venoso (arterial) em seringa 1. É coletado 3 a 5 ml de sangue venoso (arterial) em seringa heparinizada com o máximo de assepsia.heparinizada com o máximo de assepsia.
2. Semeado 1 ml de sangue no meio de cultura de cariótipo em 2. Semeado 1 ml de sangue no meio de cultura de cariótipo em ambiente asséptico em fluxo laminar.ambiente asséptico em fluxo laminar.
Composição do meio de culturaComposição do meio de cultura Meio de culturaMeio de culturaSoro bovino fetalSoro bovino fetalAntibióticosAntibióticosFitohemaglutininaFitohemaglutinina
3. O meio de cultura é mantido em estufa à 37ºC por 72 horas.3. O meio de cultura é mantido em estufa à 37ºC por 72 horas.4. Duas horas antes de completar as 72 horas , adicionar duas gts. de 4. Duas horas antes de completar as 72 horas , adicionar duas gts. de colchicina .colchicina .5. Completar 72 horas na estufa.5. Completar 72 horas na estufa.6. retirada da cultura.6. retirada da cultura.
Material e métodos
Bandamentos cromossômicos Detectar alterações cromossômicas Parear os cromossomos homólogos Elaborar mapas cromossômicos por
meio da técnica de FiSH Comparar cariótipos de espécies
próximas buscando detectar possíveis rearranjos cromossômicos averiguar as mudanças produzidas pelo processo evolutivo
Bandamento G Segmentos cromossômicos que se
condensam mais cedo na prófase (bandas escuras)
Segmentos cromossômicos que se condensam mais tarde na prófase (bandas claras)
Bandamento GBandas G - Claras
Dna rico em citosina e guanina
Muitos genes
Bandas G- Escuras
Dna rico em adenina e timina
Poucos genes
Bandamento C Localiza a heterocromatina constitutiva Solução de Hidróxido de bário (Básica) Solução salina a alta temperatura Fragmentação do DNA cromossômico
(Eucromatina) Bandas escuras correspondentes a
heterocromatina
AG-NOR Regiões responsáveis pela transcrição de
RNA ribossomal Marca apenas as RONs que foram
transcritas durante a interfase anterior a metáfase analisada
Pode não demonstrar todas as RONs Estudos de comportamento nucleolar
durante o ciclo celular
AG-NOR
FISH / HIBRIDAÇÃO IN SITU-HIS
CMA3
Material e métodos
metacentrico
Submetacentrico
Acrocentrico
Perguntas ?