Citogenética molecular

BÉJAR VILELA ROSARIO

CITOGENÉTICA MOLECULAR

Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para hibridizarse entre sí.

Permite la detección y localización de secuencias específicas de ADN.

CITOGENETICA MOLECULAR

Biología molecular y citogenética.

Utilización de una serie de técnicas del estilo de hibridación por fluorescencia in situ (FISH).

CITOGENÉTICA MOLECULAR

Método Directo: Utiliza nucleótidos marcados con sustancias fluorescentes puede observarse la señal inmediatamente después del FISH al microscopio de fluorescencia.

Método Indirecto: Utilizan sondas unidas a moléculas como la biotina o digoxigenina marcadas con sondas fluorescentes que permiten su observación al microscopio de fluorescencia. Hay una amplia variedad de sondas comerciales y tambien pueden fabricarse con la técnica “nick translation

FISH

ADNsc

Detección de cromosomas concretos Anormalidades numéricas

- Reconoce 2 - 3% secuencias centromericas. - Detección de cromosomas concretos - Anormalidades numéricas

- Secuencia especifica del ADN:

LOCUS DETERMINADO - Reordenamiento estructurales - Anormalidades estructurales

TECNICA DE FISH

PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA

PREPARACION DE LAS PLACAS

PREPARACION DE LAS SONDAS

HIBRIDACION

LAVADOS POST-HIBRIDACION

DETECCION

TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o DAPI)

VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)

PCR

Técnica que permite la amplificación in vitro de una secuencia específica de ADN hasta generar millones de copias de una manera rápida y sencilla

Permite analizar muestras con cantidades mínimas de ADN

FASES DE AMPLIFICACIÓN DE PCR

“Aparear” primers a la hebra molde para dirigir la síntesis de DNA . La síntesis de DNA requiere de primers para comenzar.

Adición de nucleótidos, uno a la vez, para extender la hebra de DNA (extremo 3’) utilizando a la hebra madre como molde A partir de este ciclo, se empieza a acumular, de forma exponencial, la secuencia diana de ADN

Separar las hebras molde para la síntesis de nuevas hebras

Sondas marcadas

fluorescentemente son para

cada cromosoma hechas

para marcar DNA específico

de cada cromosoma con

diferentes fluoróforos.

La diferencia espectral generada por el

etiquetado combinatorio son capturadas y

analizadas usando un interferómetro agregado a

un microscopio de fluorescencia.

El programa de procesamiento de imágenes

entonces asigna un pseudocolor a cada

combinación espectralmente diferente,

permitiendo la visualización de cromosomas

coloreados.

SKY

GRACIAS