Top Banner
Characterization of the in¯ammatory in®ltrate during IgE-mediated late phase reactions in the skin of normal and atopic dogs THIERRY OLIVRY,* STANLEY M. DUNSTON,* K. MARCY MURPHY* and PETER F. MOORE{ *Department of Clinical Sciences, North Carolina State University College of Veterinary Medicine, Raleigh, NC 27606, USA and {Department of Pathology, Microbiology and Immunology, University of California School of Veterinary Medicine, Davis, CA 95616, USA (Received 30 December 1999; accepted 4 May 2000) Abstract In canine and human atopic patients, the intracutaneous injection of oending allergens is followed by the development of both immediate and late-phase reactions. The present study was performed to expand on the characterization and dynamics of in¯ammatory cell subsets during IgE-mediated late-phase reactions in canine skin. Three normal dogs and three Dermatophagoides farinae-allergic dogs were selected for this experiment. All dogs were challenged intradermally with mite allergen, puri®ed anticanine IgE antibodies (positive control) or phosphate-buered saline (negative control). Skin biopsies were obtained before and 6, 12 and 24 h post-injection. Sections were stained with metachromatic and eosinophil-speci®c histological stains. Additionally, we used an immunohistochemical method with antibodies speci®c for canine leukocyte antigens. This study con®rmed the occurrence of a late-phase reaction in atopic skin following allergen challenge, and in normal and atopic canine skin after intradermal injection of IgE-speci®c antibodies. Whereas early emigrating dermal cells were composed chie¯y of neutrophil and activated eosinophil granulocytes, there was an in¯ux of ab T-lymphocytes and dermal dendritic cells in later stages of the late-phase reactions. Because IgE-mediated late-phase reactions resemble spontaneous atopic canine skin lesions, both at macroscopic and microscopic levels, we propose the use of similar challenges to study the anti-in¯ammatory eects of anti-allergic drugs in a pre-clinical setting. Keywords: allergy, atopic dermatitis, dog, late-phase reaction, skin. INTRODUCTION Intradermal injection of allergens in the skin of humans with atopic dermatitis (AD) results in a biphasic response. Cutaneous wheal-and-¯are follows the immediate degranulation of dermal mast cells, as seen in urticarial reactions characteristic of type-I hypersensitivity. IgE-mediated mast cell activation 1,2 also triggers the sequential chemoattraction of in¯ammatory cells, a phenomenon known as the late-phase reaction (LPR). 3 During allergen-induced LPR, there is an in¯ux of neutrophil and eosinophil granulocytes that occurs in less than 6 h. 4±7 Basophils also can be seen in biopsies of early stages of LPR. 8,9 Polymorphonuclear in®ltration is followed by the emigration of mononuclear cells including memory T-lymphocytes. 5±7,10±13 Since the cutaneous in®ltrate of allergen-induced LPR resembles that present in mucosae or skin of humans with atopic rhinitis, asthma or dermatitis, 14 the concept that LPR are relevant to the pathogenesis of IgE-mediated allergic reactions has gained momentum. 14,15 This hypothesis is supported by the demonstration of attenuated bronchial LPR following allergen-speci®c immu- notherapy in mite sensitized asthmatic children. 16 In dogs sensitized experimentally to ragweed, intradermal injection of allergen results in macro- and microscopic LPR. 18 These cutaneous LPR are similar to those observed in atopic humans, i.e. characterized by sequential granulocytic and mono- nuclear dermal in®ltration. 18 Similar LPR have been observed in the skin of dogs with spontaneously arising AD after intradermal injection of house dust mite extracts. 19 The relevance of LPR to the pathogenesis of canine AD is supported indirectly by the observation of a reduction of allergic pruritus and skin lesions in an open clinical trial with misoprostol. 20 Indeed, misoprostol is a prostaglandin E 1 analogue which selectively inhibits late-phase but not immediate cutaneous allergic reactions. 21 The present study was undertaken to expand the previous knowledge on the cellular nature and dynamics that occur during IgE-mediated LPR in the skin of dogs with AD. We will con®rm that LPR develop, in mite-sensitized atopic dogs, following intradermal injection of puri®ed Dermatophagoides farinae allergens. Similar in¯ammatory responses also Correspondence and requests for reprints: Dr Thierry Olivry, Department of Clinical Sciences, North Carolina State University, College of Veterinary Medicine, 4700 Hillsborough Street, Raleigh, NC 27606, USA, Tel.: (919) 513±6276, Fax: (919) 513 6336 # 2001 Blackwell Science Ltd 49 Veterinary Dermatology 2001, 12, 49±58 230 DISC
10

Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

Jul 17, 2016

Download

Documents

Jen

vet derm
Welcome message from author
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
Page 1: Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

�������������� � ��� �� ������� ��������� ������������������ ���� ����� �������� �� ��� ���� � �����

��� ����� ���

������� ������ �� ���� �� �������� �� � ��� ������� ��� ����� �� ������

����������� � �!"�"#�! �#"��#�$ ����% ����!"�� ����� ��"&��$"�' ��!!�(� � ����"���' ���"#"�� ��!�"(%�� )*+,+ �� ��� ����������� � ���%�!�(' �"#��-"�!�(' ��� ���.��!�(' ��"&��$"�' � ��!" ���"�

�#%��! � ����"���' ���"#"�� ��&"$ � /0+1+ ��

2�������� 3, ������ 1///4 ����� �� 5 ��� ),,,6

�������� �� #��"�� ��� %.��� ����"# ���"���$ �%� "����#.�����.$ "�7�#�"�� � �8���"�( �!!��(��$ "$ �!!�9��-' �%� ��&�!������ � -��% "����"��� ��� !���:�%�$� ���#�"��$� �%� ���$��� $�.�' 9�$ ��� ����� �� �;����

�� �%� #%���#���"<��"�� ��� �'���"#$ � "�=�������' #�!! $.-$��$ �.�"�( �(�:���"���� !���:�%�$� ���#�"��$"� #��"�� $>"�� �%��� �����! ��($ ��� �%��� ���� ���������� ������:�!!��("# ��($ 9��� $�!�#��� �� �%"$�;���"����� !! ��($ 9��� #%�!!��(�� "���������!!' 9"�% �"�� �!!��(�� �.�"?�� ���"#��"�� �(� ���"-��"�$

2��$"�"&� #�����!6 �� �%�$�%���:-.8���� $�!"�� 2��(��"&� #�����!6� �>"� -"��$"�$ 9��� �-��"��� -� ��� ��� + 1)��� )5 % ��$�:"�7�#�"��� ��#�"��$ 9��� $��"��� 9"�% ����#%�����"# ��� ��$"���%"!:$��#"?# %"$��!�("#�! $��"�$� ��"�"���!!' 9� .$�� �� "��.��%"$��#%��"#�! ���%�� 9"�% ���"-��"�$ $��#"?# �� #��"�� !�.>�#'�� ���"(��$�

�%"$ $�.�' #��?���� �%� �##.����#� � � !���:�%�$� ���#�"�� "� ����"# $>"� �!!�9"�( �!!��(�� #%�!!��(� ��� "������! ��� ����"# #��"�� $>"� � ��� "���������! "�7�#�"�� � �(�:$��#"?# ���"-��"�$� @%����$ ���!' ��"(���"�(�����! #�!!$ 9��� #����$�� #%"�=' � ��.����%"! ��� �#�"&���� ��$"���%"! (���.!�#'��$ �%��� 9�$ �� "�=.; � �� �:!'��%�#'��$ ��� �����! �����"�"# #�!!$ "� !���� $��(�$ � �%� !���:�%�$� ���#�"��$� A�#�.$� �(�:���"����

!���:�%�$� ���#�"��$ ��$��-!� $��������.$ ����"# #��"�� $>"� !�$"��$ -��% �� ��#��$#��"# ��� �"#��$#��"#!�&�!$ 9� �����$� �%� .$� � $"�"!�� #%�!!��(�$ �� $�.�' �%� ���":"�=�������' �8�#�$ � ���":�!!��("# ��.($ "� ����:#!"�"#�! $���"�(�

�������� �!!��(' ����"# ������"�"$ ��( !���:�%�$� ���#�"�� $>"��

���� !"��� �

����������! "�7�#�"�� � �!!��(��$ "� �%� $>"� � %.���$ 9"�% ����"# ������"�"$ 2 �6 ��$.!�$ "� �-"�%�$"# ��$���$�� �.�����.$ 9%��!:���:=��� �!!�9$�%� "����"��� ��(���.!��"�� � �����! ��$� #�!!$ �$$��� "� .��"#��"�! ���#�"��$ #%���#���"$�"# � �'��:�%'���$��$"�"&"�'� �(�:���"���� ��$� #�!! �#�"&��"�� 1)

�!$� ��"((��$ �%� $�B.���"�! #%��������#�"�� � "�=�������' #�!!$ � �%�������� >��9� �$ �%��� ������� ��� ��� 2���6�3 �.�"�( �!!��(��:"��.#����� �%��� "$ �� "�=.; � ��.����%"! ��� ��$"���%"!(���.!�#'��$ �%�� �##.�$ "� !�$$ �%�� + %�5C* A�$��%"!$�!$� #�� -� $��� "� -"��$"�$ � ���!' $��(�$ � ����D/

��!'����%��.#!��� "�?!����"�� "$ �!!�9�� -' �%���"(���"�� � �����.#!��� #�!!$ "�#!.�"�( �����'�:!'��%�#'��$�0C*1,C13 �"�#� �%� #.�����.$ "�?!������ �!!��(��:"��.#�� ��� ��$��-!�$ �%�� ���$��� "��.#�$�� �� $>"� � %.���$ 9"�% ����"# �%"�"�"$�$�%�� �� ������"�"$15 �%� #��#��� �%�� ��� �����!�&��� �� �%� ���%�(���$"$ � �(�:���"���� �!!��("#

���#�"��$ %�$ (�"��� ������.��1510 �%"$ %'���%�$"$"$ $.������� -' �%� �����$����"�� � �����.����-���#%"�! ��� �!!�9"�( �!!��(��:$��#"?# "��.:���%����' "� �"�� $��$"�"<�� �$�%���"# #%"!�����1+

�� ��($ $��$"�"<�� �;���"�����!!' �� ��(9���"���������! "�7�#�"�� � �!!��(�� ��$.!�$ "� ��#��:��� �"#��$#��"# ����1D �%�$� #.�����.$ ��� ���$"�"!�� �� �%�$� �-$��&�� "� ����"# %.���$ "���#%���#���"<�� -' $�B.���"�! (���.!�#'�"# ��� ����:�.#!��� �����! "�?!����"���1D �"�"!�� ��� %�&� -����-$��&�� "� �%� $>"� � ��($ 9"�% $��������.$!'��"$"�( � � ��� "���������! "�7�#�"�� � %�.$� �.$��"�� �;���#�$�1/ �%� ��!�&��#� � ��� �� �%����%�(���$"$ � #��"�� � "$ $.������� "��"��#�!'-' �%� �-$��&��"�� � � ���.#�"�� � �!!��("# ��.�"�.$��� $>"� !�$"��$ "� �� ���� #!"�"#�! ��"�! 9"�%�"$����$��!�), ������ �"$����$��! "$ � ���$��(!���"��1 ���!�(.� 9%"#% $�!�#�"&�!' "�%"-"�$ !���:�%�$� -.���� "����"��� #.�����.$ �!!��("# ���#�"��$�)1

�%� ���$��� $�.�' 9�$ .������>�� �� �;���� �%����&"�.$ >��9!��(� �� �%� #�!!.!�� ���.�� ����'���"#$ �%�� �##.� �.�"�( �(�:���"���� ��� "��%� $>"� � ��($ 9"�% �� @� 9"!! #��?�� �%�� �����&�!�� "� �"��:$��$"�"<�� ����"# ��($ �!!�9"�("���������! "�7�#�"�� � �.�"?�� ���� ���������������� �!!��(��$� �"�"!�� "�=�������' ��$���$�$ �!$�

�����$������#� ��� ��B.�$�$ �� ����"��$E �� �%"���' �!"&�'

���������� � �!"�"#�! �#"��#�$ ����% ����!"�� ����� ��"&��$"�'

��!!�(� � ����"���' ���"#"�� 5*,, �"!!$-���.(% ������ ��!�"(%

�� )*+,+ �� ��!�E 2/1/6 013C+)*+ ��;E 2/1/6 013 +33+

� ),,1 A!�#>9�!! �#"��#� ��� 5/

�� ����� ���� ����� ),,1 #$% 5/C0D

)3, ����

Page 2: Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

0, �� �!"&�' � ���

9"!! -� ���&�>�� -' "���������! #%�!!��(� 9"�% ���":�(� ���"-��"�$ "� �����! �� ����"# #��"�� $>"��A�#�.$� �%� �����! "�?!����� � .!!:-!�9� �����$��-!�$ �%�� 9%"#% "$ $��� "� �%� ����"$ � ��($9"�% �)))3 9� �����$� �%�� $.#% ���#�"��$ #�.!� -�.$�� �$ � ����! �� $�.�' �(�:���"���� �!!��("#"�=�����"�� "� #��"�� $>"��

&��' !(

����� ��� �� ������ ����� ��%��� ��.!� ��($ �"�(��$�� 9"�% � 9��� �������"� �%� $�.�' � ��� �� "� ����� #��$��� 9�$ �-��"��� ��� �%�"� �9���� �� �%�$� ��($ �%� �"�(��$"$ � �9�$ #���"�� �.� -' .!?!���� � �%� #!"�"#�! #�"���"������$�� -' @"!!��$��)5 ��$��-!"�( ��.�"�"# �"$��$�$2��(� ��&��$� ��� ���#�"��$ $#�-"�$ ��� "�$�#� -"��%'���$��$"�"&"�"�$6 9��� �.!��:�.� -' $������� �"�(:��$�"# �� �%�����.�"# ���%��$ 2�!"�"���"�� �"���#��"#"��! �%����' ��� =�� #�����! ��$��#�"&�!'6� !!�%��� ��($ �;%"-"��� ��$"�"&� "����"��� ���#�"��$� ��� "���������! "�7�#�"�� � � #�����#"�!!' �&�"!:�-!� ���� ���������� ������ 2��6 $�!.�"�� 21E 1,,,C1E 0,,,, 9F&4 G���� !�-������"�$ ����"� �� �� 6� ��":"�=�������' ��.($ %�� -��� �"$#���"�.�� ��&��"�-!� !��(�%$ � �"�� ������"�( .��� �%� ��.(#���(��' $� �%�� �%�' 9�.!� ��� "���� ��� 9"�%"����"��� ���#�"�� (������"�� 2��(� 1 9��> �����"%"$���"��$ 3 9��>$ �� ���! #���"#�$����"�$ ���+ 9��>$ �� ����$"���' (!.#�#���"#�"� ���.!��"��$6��� 9�$ %���� �%�� �%�$� 9"�%���9�! �"��$ 9�.!� -�$.H#"��� �� ��� "���� ��� 9"�% ��� (������"�� �$�%��� ��� �� �.-!"$%�� 9"�%���9�! (."��!"��$ �$��-:!"$%�� �� �%� "���� ����#� � �%�$� ��.($ �� #.�����.$��� "� �%� #��"�� $��#"�$�

�%��� ��.!� ��$���#% -��(!� ��($ 9��� #%�$�� �$�����! #�����!$ -�#�.$� � !�#> � -���� ��� ��"!'%"$���' � ��.�"�.$ $>"� !�$"��$ ��� #.�����.$ -�#���"�!"� �#�"��$� ���� � �%�$� ��($ �;%"-"��� ��' "����"������#�"��$ � ��� "���������! #%�!!��(� 9"�% �%� ��#�����#"�! �;���#� �� 1E 1,,,C1E 0,,,, �"!.�"��$�

���� ��� �� !�"������ �� #$���#% � �%� �%��� ����"# ��� �%��� �����! ��($ 9���#%�!!��(�� �� �%� !�����! �%���; 9"�% ��"�!"#���"���������! "�7�#�"��$ � �� %�.$� �.$� �"�� �!!��(��$��� $."��-!� #�����!$�

!!��(�� #%�!!��(� 9�$ ��� ����� 9"�% � �.�"?�� ��#�"�� � �� %�.$� �.$� �"�� �;���#� >��9� ��#����"� �%� %"(% ��!�#.!�� 9�"(%� ��7�� �!!��(��$ ����($ 2��� ��6 2�$#% �� �� �!�$��� I� G"���� ��G�"�� �� I� �!"&�' �� �$�!��"�� ��� #%���#���"<��"��� � ��7�� �.$� �"�� 2���� ���������� ������6�!!��(��"# ��#�"�� "� ��($� $��������� �� �� %�������� ��� �� �� %%��&%'��� ��$%&"!!� �� 1//*ED*CD�6� �� �&�"� "��"&"�.�! &��"�-"!"�' "� �%� ���"(�����&�#��"�� �%� �%��� ����"# ��($ 9��� ��$���"�"�"�!!' 9"�% &��'"�( �"!.�"��$ � �%� ��� �� �"�� ��#�"��� �%� �"�"�.� #%�!!��(� ��$� 2���6 � ���

�� �.�� �� �!"#"� � 1,:�� 9%��! "� ��#% ��( � ���10 �"� 9�$ ������"��� �� -� ,�,0 �� � � 3:�(���1 �"!.�"�� 2"��� �� �����;"���� ��$� � 10, �( � ��: �� ��� "�7�#�"��6� �"�#� �%� (������"�� � ���"� %.��� �!!��("# "��"&"�.�!$ "$ ���!"?�� 9"�%"�#���$�� #��#������"��$ � �!!��(��$1, ����"# ��������! ��($ 9��� "�7�#��� "���������!!' 9"�% 1,�"��$ �%� ��� "��� �1�0 �( � ��: �� "� � ?��!&�!.�� � ,�,0 ���

�� $��&� �$ ��$"�"&� #�����! 9� .$�� �����"� G�H�"�':�.�"?�� ��--"� ��!'#!���! �(G $��#"?# ��#��"�� �(� 2#�.���$' � �� A�.#� ������-��( ������� ��"&��$"�' ��!�"(% �� �� 6�)0

��"#��"�� �(� ���"-��"�$ "��.#� ��(���.!��"�� � #��"�� ��$� #�!!$ �� �� � �� !��$� "� ���� &"� �� �(�:��������� ��#%��"$�)+ ��� $.#% ���"-��"�$ %�&� -���.$�� �� "��.#� "����"���:�'�� %'���$��$"�"&"�' ���#:�"��$ �� ���� "� #��"�� $>"��)* ���!"�"���' �;���"����$ �� �%� ���$��� $�.�' �����$������ �%�� "���������!"�7�#�"�� � ���:"��.�� ��--"� �(G "� �����! #��"��$>"� ��"�%�� ��$.!��� "� "����"��� ��� !���:�%�$� #.���:��.$ ���#�"��$ 2A� ������-��( �� ����� ��"&��$"�'��!�"(% �� �� 1//* .��.-!"$%�� ����6�

�%� ��� ��#�$$��' �� ����.#� � 1,:�� 9%��! "���#% ����"# ��( 9�$ �$�"����� �� -� �*,, �( � ���"#��"�� �(� ���"-��"�$ �$ ������"��� -' ���&"�.$"���������! #%�!!��(�$ .$"�( $��"�! �"!.�"��$ � �%"$���(���� �� ��$.�� ���"��! (������"�� � #.�����.$��� �!! ��($ 9��� "�7�#��� "���������!!' 9"�% 1,�"��$ �%� ��� 2�����;"����!' * �( � ���":�(����"-��"�$ "� � &�!.�� � ,�,0 ��6� $ �%� ��(��"&�#�����! ,�,0 �� � �%�$�%���:-.8���� $�!"�� 2�A�69�$ "�7�#��� "� �%� ����"$ � �����! ��� ����"# ��($�

�������� ������ ��� ��� ������������ �.�#% -"��$' $��#"��� 2D ��6 9�$ #�!!�#��� ��� �����! ������"�( $>"� �� �%� !�����! �%���;-� ��� "�7�#�"��� �"�"!�� $���!�$ 9��� #�!!�#��� + 1)��� )5 % ��$�:"�7�#�"�� ��� $>"� $"��$ #%�!!��(��9"�% �� ���":�(� ��� �A�� �����"���!' � ���$���!"�( $>"� $���!�$ 9��� -"$�#���� ��� %�! � ��#% $��#"��� 9�$ �!�#�� "� ��.���! -.8���� ����!"� �� ��.�"�� ��-���"�( "� ����H�� �%�$�#��� %�! 9�$ ����$"��� "� ���"��! �.��"�(��������.�� ���".� 2��� �"$$.� ��> A�;����"�(��$�"#$ ��#� �#G�9 ���> �� �� 6 "����$��"� "$�������� #��!�� �� "�$ ���<"�( ��"�� "� !"B."��"���(�� ��� �%�� $����� �� �*,�� .��"! ���#�$$�� �� "��.��%"$��#%��"#�! $��"�"�(�

(�� �������� � ������ �� �������� �� ��� ��� ������"&� �"#������� $�#�"��$ 9��� �-��"��� ��� ����H�-!�#>$ ��� $��"��� 9"�% ��.�"�� %������;'!"�:��$"� �� &"$.�!"<��"�� � �%� "�=�������' ���#�"�� ����������� ������"���"�� � �����! ��.����%"!"� ��� ��$":���%"!"� ����H� $�#�"��$ 9��� #�!�.��� 9"�% �.��J$$��"� �� ��$"���%"!$�)D ���!"�"���' $�.�"�$ 9������ ����� �� $�!�#� � ��#%�"B.� �%�� ����"���� �%���$' �"8�����"��"�� � -�$��%"!$ ��� ��$� #�!!$ "� �%�����"$� ���( �%� &��"�.$ ���%��$ ��"�� 2G"��$�

� ),,1 A!�#>9�!! �#"��#� ��� �� ����� ���� ����� #$ 5/C0D

)3, ����

Page 3: Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

���"�� #.�����.$ !���:�%�$� ���#�"��$ 01

��� ��!."�"�� -!.� �'�$ �$����$� %"$��#%��"#�! $��"��� ��'���$�F#%'��$� "��.��%"$��#%��"$��'6 9� $�:!�#��� � %"$��!�("#�! $��"�"�( 9"�% �!#"�� -!.� ����.#!��� �$� ��� #�.����$��"�� �%"$ ���%�� ����"�����"8�����"��"�� � ��.�� ��� $�(������ �.#!�".���$>�� ��� �%� �-.����� #'���!�$�"# (���.!�$�

!���������� ����� �� �� ������ ���������� ������� ������"�� �%� �%����'�� ��� �.�-��$ � �����!�����.#!��� #�!!$ 9� .$�� � �%���:$��� !�-�!!��$������&"�"� ���%��)3 ��� �%� ���(���$ !"$��� "� ��-!�1 2�!! �"!.��� �� 1 E 1,6� !! ��"���' ����#!���!���"-��"�$ 9��� $��#"?# �� #��"�� !�.>�#'�� ���"(��$��� %�&� -��� (�������� �� �%� ��"&��$"�' � ��!" ���"� ��&"$ -' ��� � �%� �.�%��$ 2���6�)/C31

����� �� ���������� ��� ������7�#��� $>"� $"��$ 9��� �;��"��� ), �"� ��� + 1)��� )5 % � ��� "���������! #%�!!��(� �� ��'��#��$#��"# $"(�$ � "�=�����"��� �%� �"������ � &"$"-!� ��'�%�����.$ ���#%�$ 9�$ ���$.��� "� �9��������"#.!�� �"��#�"��$ ��� �&���(��� �"�"!��!' ���!! �"�� ��"��$ ��� $"��$ $>"� �%"#>��$$ 9�$ ���$.���9"�% #�!!"���$� ���$.������$ 9��� �&���(�� ����(�%� �%��� ����"# �� �%� �%��� �����! ��($� ����"$�"#�!���!'$�$ 9��� ��� ��� ����� -�#�.$� � �%� !�9�.�-�� � ��($ "� ��#% (��.��

"����� ��� �� ����� �����G���.!�#'��$ ��$� #�!!$ ��� �����.#!��� #�!!$ 9���#�.���� "� �%� ����"$ � ��#% -"��$' .$"�( ��"#��$#��� �� 1,,� ����! ��(�"?#��"�� ��� ���#���(.!�� ?�!� #�&��"�( ,�,+ ��)� �";���� #��:$�#.�"&� ?�!�$ "��� � ����! $.� �#� � 1 ��) 9����;��"��� "� �%� $.���?#"�! ����"$ ��� �%� &��"�.$#�!! �'��$ 9��� ��.�������� �����! #�!! #�.��$ 9����&���(�� -��9��� -"��$"�$ ��� �%� �%��� ��($ "���#% (��.�� ��!!"�$ 9��� �;���$$�� �$ �.�-�� � #�!!$��� ��) � ����"$�

��(")�(

#$� ��� � ����)�� �� ����� ��� � ���� ������ �)���� ����� ��� .��"#��"�! ���#�"��$ #%���#���"$�"# � �'�� � %'���$��$"�"&"�' 9��� $��� ), �"� �!!�9"�(�%� "�7�#�"�� � ���":�(� ��!'#!���! ���"-��"�$���'�%�����.$ ���#%�$ �&���("�( 11 �� "� �"��������� 1 �� � "�#���$�� $>"� �%"#>��$$ 9��� �"$:

#�&���� + % � ��� �%� "�7�#�"�� � �%"$ ��$"�"&� #�����!2�"(� 1�-6� �.#% ��� ��#���$�� ���(��$$"&�!' "��"������$ -.� ���$"$��� �� �%� ���"�� �.���"�� � �%�$�.�' 2"��� )5 %6� �����"��� �� !���:�%�$� ���#�"��$9��� ��� �-$��&�� �!!�9"�( �A� �� ��� ��"���������! "�7�#�"�� "� �����! #��"�� $>"��

�� ����� ��� 9%��!$ ��&�!���� 9"�%"� ), �"� � "���������! #%�!!��(� 9"�% ��: �� ��#�"�� ��� ���":�(� ���"-��"�$� ��'�%�����.$ ���#%�$ "��"#��"&� � ��� ���$� �� -��% �!!��(�� ��� ��$"�"&� #�����! $"��$��%� �#�� � ��#��$#��"# "�=�����"�� 9�$ �-$��&��-��9��� + ��� 1) % ��$�:#%�!!��(� 2�"($ 1�- ��� )6��%��� 9��� �� "����"��� �� !���:�%�$� ���#�"��$ �!!�9"�( "���������! "�7�#�"��$ � �A��

�%�$� ��$.!�$ #��?���� �%�� ��� ��&�!�� �!!�9:"�( �� �!!��(�� "���������! #%�!!��(� "� �"��:�!!��("#��($� �"�"!�� ��#��$#��"# ���#�"��$ #�.!� -� ���:&�>�� "� �����! �� ����"# ��($ � ��� "����#.�����.$"�7�#�"�� � ���":�(� ���"-��"�$� �&�� �%�.(% �%�"����$"�' � �%�$� ���#�"��$ 9�$ !�9�� "� �����! �%������"# ��($ �%"$ $�.�' �$��-!"$%�$ #!���!' �%�� �(�:���"���� ��� #�� -� "��.#�� "� �����! #��"�� $>"��

��� ����� �� �� ��� �� ����� �� ������ #$� �������� �)�� !#"�� -!.� $��"�"�( 9"�% �.#!��� �$� ��� #�.����:$��"� ����"���� �%� &"$.�!"<��"�� "� � ���"&�$#.!��!�#��"�� � !��(� #�!!$ 9"�% ��.�� �.#!�" ��� � !�9�.#!���E #'���!�$�"# ���"�� �%�$� #�!!$ 9��� "����"?���$ ��$� #�!!$� A�$��%"! (���.!�#'��$ 9"�% � $��!!��#�!! �"������ ��� � $�(������ �.#!�.$ 9��� �����#�(�"<�� "� ��' � �%� $��#"���$ �;��"����

�� ����� #��"�� -"��$"�$ �%� �.�-�� � �����!��$� #�!!$ &��"�� �&�� �"�� ��� �� �&���(� � 1)C10 1)C1+ ��� 1)C1, #�!!$F��) � ��� #%�!!��(� 9"�%�A� ��: �� ��� ���":�(� ��$��#�"&�!'�

�"�"!��!' "� $��#"���$ #�!!�#��� ��� ����� ��($�����! ��$� #�!! #�.��$ #%��(�� ��� 1/ �� )0 1/C))��� 1/C1, #�!!$F��) �!!�9"�( "���������! "�7�#�"��9"�% �A� ��: �� ��� ���":�(� ��$��#�"&�!'� ������"# $>"� #%�!!��(�� 9"�% ��: �� �� "� �����!��� ����"# $��#"���$ "�7�#��� 9"�% ���":�(� ���":-��"�$ �����! ��$� #�!!$ � ��� �;%"-"��� � �"����#'���!�$�"# #�!�.� �%�� "� $���!�$ ���&"�.$!'#%�!!��(�� 9"�% �A�� �%"$ ?��"�( 9�$ "�����������$ ��$� #�!! ��(���.!��"�� �!!�9"�( �#�"&��"�� -'�!!��(��$ �� ���":�(� ���"-��"�$�

*�� ����� ��� ���������� �������� �� ����� � ��������� #$� �� ������ �)���� ����� ��� "���������! "�7�#�"�� � ���":�(����"-��"�$ 9�$ �!!�9�� -' �%� ���!' ��"(���"�� � ��.����%"! ��� ��$"���%"! (���.!�#'��$ "� �%� $.���:?#"�! ����"$ �$ &"$.�!"<�� 9"�% %������;'!"�:��$"� ���.��J$ $��"� 2�"(� 3�-6� �%� ������� � "�=�����"��9�$ $.���?#"�! ���"&�$#.!�� �� "����$�"�"�!� !! -"��$'$��#"���$ #%�!!��(�� 9"�% �%� ��$"�"&� #�����!#����"��� �#�"&���� ��$"���%"!$ #%���#���"<�� -'�((��(���� "����:�� ����#�!!.!�� ��$"���%"!"# (���:.!�$� �����! ��$"���%"! #�.��$ 9��� .$.�!!' �9"#� �$

� ),,1 A!�#>9�!! �#"��#� ��� �� ����� ���� ����� #$ 5/C0D

����� #� ����! � ���"-��"�$ $��#"?# �� #��"�� !�.>�#'�� ���"(��$

��!! �'�� �� �!���

�����"�"# #�!!$ ��1# � 13�/�11

��3 � 1*�) 1)

��5 � 13�1�5

�:!'��%�#'��$ ��D� � /�I�3

���2�6�� � 10�DG*

���2�6 � ),�+ 3

���2�6 � ),�D�1

�:!'��%�#'��$ ��)1 � )�1�+

)3, ����

Page 4: Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

0) �� �!"&�' � ���

%"(% �$ ��.����%"! ��!!"�$� ��$"���%"!$ 9��� ��� $����� $"��$ � ���&"�.$ �A� �� �� "�7�#�"��$�

�����"#�! (���.!�#'�"# "�=.; 9�$ $��� "� �������������� �!!�9"�( "����#.�����.$ #%�!!��(�$ 9"�% ��: �� %�.$� �.$� �"�� ��#�"�� ��� ���":�(� ���"-��"�$2�"(� 3�-6� �%� "�=�������' ������� �(�"� 9�$#%���#���"<�� �$ $.���?#"�! ���"&�$#.!�� �� "����$�"�"�!

2�"(� 5�:�6� �%� ���> � ��.����%"! "�=.; �##.����-��9��� + ��� 1) % 9%����$ �%�� � ��$"���%"!$ ���$��� !���� �"��$ 2�"(� 3�-6� �� �!! -"��$"�$ #'��!�("#�!���>��$ � �#�"&��"�� �&"���#�� -' (���.!� #��:=.��#� 9��� $��� "� $.���?#"�! �����! ��$"���%"!$2�"(� 06� �%� ��(�"�.�� � �����! ��$"���%"!"� "�����"# #��"�� $>"� �!!�9"�( ���":�(� ���"-��' "�7�#:�"�� 9�$ �!��$� �9"#� �%�� �##.��"�( "� �����! $>"�$��#"���$ $"�"!��!' #%�!!��(�� 2�"(� 3-6� �� ����"#-"��$"�$ �%� �.�-�� � ��$"���%"!$ 9�$ �9� �� 1,: �!��%�� � ��.����%"!$ "� �%� $��� $��#"���$ 2�"(� 3�-6�

#� ������� ��� �������� �� ������ ��� �� �� ������� � +��������� �� �� �,���� �� �� '�- � '�.�� �����! ��� ����"# $>"� -"��$"�$ "�7�#��� 9"�% ���":�(� ���"-��"�$ �:!'��%�#'��$ �;���$$"�( ��3 ����%� �� �:#�!! ��#����� -�(�� ��"(���"�( "��� �%�����"$ + % ��$�:#%�!!��(� ��� #���"�.�� �� �"$� "��.�-��$ �.�"�( �%� #�.�$� � �%� $�.�' 2�"(� 3#6��"�"!�� �:#�!! "�=.; �!-�"� ���$��� �� � %"(%�� ��(����##.���� "� ����"# $>"� �!!�9"�( ��: �� �!!��(�����&�#��"�� 2�"($ 3# ��� +6� �����>�-!' � ��.-!"�(� �� �:#�!!$ 2��;"�.� � 0, #�!!$F��)6 9�$ $��� �!$�"� �����! #��"�� $>"� #%�!!��(�� 9"�% �"�� �!!��(��$�

�:#�!!$ �;���$$"�( �%� �:#�!! ��#����� 9��� ����"$#�&���� "� �%� ����"$ � ��' �����! #��"�� $>"�$���!�$� �� ����"# $��#"���$ �%�' 9��� .�#�&���� "�&��' !�9 �.�-��$ 2"��� !�$$ �%�� 1, #�!!$F��)6 "� /F3,-"��$"�$� A:!'��%�#'��$ �;���$$"�( ��)1 9��� ���$��� "� ��' � �%� $�"�.!���� $>"� $���!�$�

�� �!!��(�� ��� ���":�(� $�"�.!���� $���!�$ �:!'��%�#'��$ �;���$$�� �"�%�� ��5 �� ��D 2���� ���

� ),,1 A!�#>9�!! �#"��#� ��� �� ����� ���� ����� #$ 5/C0D

*����� #+ ����������! "�7�#�"�� � �!!��(�� �� ���":�(� ���"-��"�$ "$ �!!�9�� -' �%� ��&�!������ � � !���:�%�$� ���#�"�� #%���#���"<�� -'

��'�%�����.$ ���#%�$ 21�6 ��� "�#���$�� $>"� �%"#>��$$ 21-6�

*����� $+ � ��'�%�����.$ ���#% �##.���� + % � ��� "���������!

"�7�#�"�� � ���� ���������� ������ ���"(�� "� � �"��:�!!��("# ��(�

)3, ����

Page 5: Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

���"�� #.�����.$ !���:�%�$� ���#�"��$ 03

$%�9�6� ���#"$� ���!'$"$ � ��5E��D #�!!.!�� ���"�$���&�� ����"�(!�$$ �$ "� ��$� -"��$"�$ �%� �.�-��� #�!!$ �;���$$"�( ��5 �� ��D 9�$ %"(%�� �%�� �%��� ��3K !'��%�#'��$� �%�$� ��$.!�$ $.((�$� �%����%�� #�!!$ $.#% �$ �#�"&���� �����! �����"�"# #�!!$ ����.����%"!$)/ �;���$$�� ��5�

����� ����� �� ����� ������� �� ���� ���� ������� ���������� ����� �� �� � ������ �� ������ #$��� ����"# $>"� $���!�$ #%�!!��(�� 9"�% �"�� �!!��(����� "� �����! �� ����"# -"��$"�$ ���&�>�� 9"�%���":�(� ���"-��"�$ �%� �.�-�� � ��1#K �����"�"##�!!$ ���$� ���(��$$"&�!' �.�"�( �%� #�.�$� � �%�$�.�' 2�"(� 3�6� �� �%� $.���?#"�! ����"$ � ��$�-"��$"�$ �����! �����"�"# #�!!$ 9��� �"$��$�� "����$� #!.$���$ � $"(� � #�!!.!�� �#�"&��"�� 2�"(� *6��%�$� #!.$���$ � ��� �##.���� "� �%� &"#"�"�' � �����.#!��� #�!!$ ���$.��� �� -� �:!'��%�#'��$��%� �.�-�� � �����! �����"�"# #�!!$ 9�$ "� (�����!�9� �"��$ %"(%�� �%�� �%�� � ��3K �:!'��%�#'��$"� ��#% � �%� $��#"���$ ��� ���#%�� )3, 2"� ��:"�7�#��� $"��$6 �� 3+, #�!!$F��) 2"� ���":�(�:#%�!:!��(�� $��#"���$6�

!�(�"((� �

�%� ���$��� $�.�' #��?��$ �%�� "���������! "�7�#�"��� �� %�.$� �.$� �"�� �!!��(��$ "� #��"�� ����"#���"���$ ��"((��$ ��� ��!' "����"��� .��"#��"�� -.��!$� !��( !�$�"�( &"$"-!� ��� �"#��$#��"# "�=����:�"�� 9"�% �%����'�"# ���.��$ � �(�:���"���� ���"� %.��� $>"�� �����>�-!' $"�"!�� ���#�"��$ #�� -�"��.#�� "� �����! �� ����"# #��"�� $>"� �!!�9"�("����#.�����.$ #%�!!��(� 9"�% �.�"?�� ���"#��"�� �(���!'#!���! ��--"� �(G ���"-��"�$� @� �;���� �� �%����&"�.$ >��9!��(�1D1/ �%�� �"#��$#��"#�!!' #��"��#.�����.$ ��� ��� �$$�#"���� 9"�% �%� ���!' ��"(��:�"�� � ��.����%"! ��� ��$"���%"! (���.!�#'��$��.��%������ 9� �$��-!"$% �%�� �� �:!'��%�#'��$��� �����! �����"�"# #�!!$ �"(���� �� �%� ����"$ "�!���� $��(�$ � "�=�����"���

�� ����"# ��($ #%�!!��(�� 9"�% �� �� "� �����! �������"# ��($ ���&�>�� 9"�% ���":�(� ���"-��"�$#!"�"#�! $"(�$ � ��� #��$"$� � ��'�%��� ���"�#���$�� $>"� �%"#>��"�(� �%�$� ��� !�$"��$ -.���� �%� .��"#��"�! 9%��!$ $��� "� "����"��� �!!��("#���#�"��$ ��$��-!� �%�$� $��� "� ��($ 9"�% �� �%�

� ),,1 A!�#>9�!! �#"��#� ��� �� ����� ���� ����� #$ 5/C0D

*����� ,+ ���!' $��(�$ � �(�:���"��� !��� �%�$� ���#�"��$ ��� #%���#���"<�� -' �%� ��"(���"�� � ��.����%"! 2�6 ��� ��$"���%"! 2-6

(���.!�#'��$� ����� $��(�$ ��� �$$�#"���� 9"�% �� "�=.; � ��3K�:!'��%�#'��$ 2#6 ��� �����! �����"�"# #�!!$ �;���$$"�( ��1# 2�6�

)3, ����

Page 6: Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

05 �� �!"&�' � ���

#!"�"#�! �#�� � �!!��(�� ��� ���":�(�:"��.#�� ����##.�$ ���.�� + % � ��� #%�!!��(� $"�"!��!' �� ����&"�.$ �-$��&��"���1D

A�#�.$� ��� #�.!� -� ��!�&��� �� �%� ���%�(���$"$� #��"�� � 9� ��#������ �%�� �&�!.��"�� � "���������! �!!��(' ��$�$ $%�.!� ��#����$$ ��� ��!' �����"�( � "����"��� ���#�"��$ � ��� 10C3, �"� -.��!$� �� �$$�$$���� � ��� + % � ��� #%�!!��(��

� ),,1 A!�#>9�!! �#"��#� ��� �� ����� ���� ����� #$ 5/C0D

*����� -+ �%��� "$ �� "�=�����"�� "� �����! #��"�� $>"� 2�6� �"; 2-6 1) 2#6 ��� )5 2�6 %�.�$ � ��� ���� ���������� ������ ���"(�� #%�!!��(�

"� ����"# #��"�� $>"� �����! "�=�����"�� �##.�$ "� � ���"&�$#.!�� �� "����$�"�"�! �������� �.��J$ $��"� �� ��$"���%"!$ -��L3,, ���

*����� .+ #�"&���� ��$"���%"!$ #%���#���"<�� -' �((��(���� "����:

��� ����#�!!.!�� ��$"���%"! (���.!�$ ��� $��� 1) % � ���

���� ���������� ������ ���"(�� "�7�#�"�� "� �� ����"# ��(�

�.��J$ $��"� �� ��$"���%"!$ -��L), ���

*����� /+ �9���': �.� %�.�$ � ��� ���� ���������� ������

���"(�� "�7�#�"�� "� ����"# #��"�� $>"� �:!'��%�#'��$ #!.$��� "�

�%� $.���?#"�! ����"$� ���.��%"$��#%��"#�! ���%�� �� �:#�!!

��#�����:$��#"?# ����#!���! ���"-��' � 10�DG* ��"��:��%'!:

#��-�<�!� #%����(�� ��� %������;'!"� #�.����$��"� -��L *0 ��

2"�$�� 5, ��6�

)3, ����

Page 7: Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

���"�� #.�����.$ !���:�%�$� ���#�"��$ 00

�%� �!#"�� -!.�F�.#!��� �$� ��� %"$��!�("#�! $��"�$�!�#��� �� ����#%�����"# #�!! "����"?#��"�� ���:�"���� �%� ��.�����"�� � �����! ��$� #�!!$ "� �&��'$���!�� �%��.(%�.� �%� #�.�$� � �%� $�.�' �%��.�-�� � ��$� #�!!$ �"� ��� &��' ���>��!' 9"�%"���#% (��.� � $���!�$� ��9�&�� �%��� 9�$ .$.�!!' ���#���$� "� �%� "����$"�' � �%� #'���!�$�"# $��"�"�(��%"$ �-$��&��"�� 9�$ ����"-.��� �� �%� ��!��$� � ��$�#�!! (���.!�$ $.((�$�"�( �%�� �%�$� #�!!$ %�� -����#�"&���� �!!�9"�( �(� ��#����� #��$$:!"�>"�( � ����"�%�� �!!��(�� �� ���":�(� ���"-��' #%�!!��(��

�����>�-!' �&�� �%�.(% �.� #�!�.���"�� �!!�9����$' �"$�"�#�"�� � �.#!��� #����.�$ 9� �"� ��� ���"#���' -�$��%"! (���.!�#'��$ "� ��' $��#"���� �� ����&"�.$ $�.�' � ��� "� ��($ -�$��%"!$ $"�"!��!'9��� ��� $����1D �%�$� �-$��&��"��$ ��� "� ���>��#�����$� 9"�% ������$ � ��� "��.#�� "� %.���$>"��/1, �� �%�$� �;���"����$ -�$��%"!$ 9��� ����#���9"�%"� +CD % �!!�9"�( �!!��(�� #%�!!��(�� �%�$��"&��("�( ��$.!�$ #�.!� -� �;�!�"��� -' � �"8����#� "��%� ���%�(���$"$ � ��� -��9��� $��#"�$ �� -' � !�#>� �������"��� ����#�"�� � -�$��%"!$ -' �.� ���%����� $.����� � �%� !����� %'���%�$"$ ����" � ��� ���������%�� ���:��#�."��� -�$��%"!$ 9��� .�����#��-!� � �����!."�"�� -!.� $��"�"�( -.� 9��� &"$"-!� � ��� "��.��:%"$��#%��"#�! #�!�.�"�( .$"�( � $��#"?# ����#!���!���"-��'�/ �� ���.����!' ���"-��"�$ ��&�!�����(�"�$� #��"�� -�$��%"!$ ��� #.�����!' ��� �&�"!�-!��

�.� $�.�' #����-������ �%�� (���.!�#'��$ -��%��.����%"!$ ��� ��$"���%"!$ 9��� �%� ?�$� #�!!$�"(���"�( "��� �%� $"��$ � �(�:���"���� ��� "�#��"�� $>"�� ������ ��.����%"! "�=.; 9�$ $��� ���!'23, �"� �� 1 %6 � ��� ���"(�� #%�!!��(� "� �9� ���&"�.$"�&�$�"(��"��$ �� #��"�� #.�����.$ ����1D1/ �� �%����$��� $�.�' �%� ��(�"�.�� � ��.����%"! "�=.;� ��� �!!��(�� #%�!!��(� 9�$ $"�"!�� �� �%�� ���&"�.$!'�������� "� -��% #��"��1D1/ ��� %.��� $>"��3)33 ����($ ��.����%"! �"(���"�� %�$ -��� �;�!�"��� "����� -' �%� ���#��"�( ��!��$� � !�.>���"��� A5 "���$"��$ � ���&�#��"���1/ �� %.���$ %�9�&�� �%� ���!'

��!��$� � #%���>"��$ ��(� "����!�.>"� 2��6:D "$%'���%�$"<�� �� ��"((�� ��.����%"! "�=.;�3530

�%"$ $�.�' #��?���� ���!"�� ?��"�($ �%�� ��$"��:�%"! (���.!�#'��$ 9��� �%� #�!!$ ��$� #�����!'��"(���"�( "��� �%� ����"$ 9"�%"� 1) % ��$�:#%�!!��(�9"�% �!!��(��1D �� ���":�(� ���"-��"�$� A�#�.$� ��$������! ��$"���%"!$ �;%"-"��� �"#��$#��"# $"(�$ � ��(���.!��"�� "� "$ !">�!' �%�� �%�"� #'����;"# �����"�$#�.!� -� ��$���$"-!� �� $��� � �%� �"$$.� ����(���� ��$.!�"�( ��'�%��� ��� ������ � ���!' ��� "�#��"�� $>"�� �� %.���$ �%� ���> � ��$"���%"! "�=.;�!$� ��>�$ �!�#� �����;"����!' + % � ��� �!!��(�� ���"��.#�"���501,1133 �%� �.�-�� � �"(���"�( ��$"��:�%"!$ � ��� �!!��(�� #%�!!��(� %�9�&�� ������$ �.#%!�9�� "� %.���$ 2*0C10, #�!!$F��) �� + %���>6501133 �%�� "� #��"�� ����"# $>"� 20,, #�!!$F��)6� �%� ���$�� �� �%"$ �"8����#� "$ ��� >��9� �����$��� �"��$ -.� "� #�.!� -� �.� �� �%� ��(�"�.�� �����.�� � �%� $�#���"�� � #%���>"��$ "�&�!&�� "���$"���%"! #%��������#�"�� 2��(� ����;"�$ � ������� ���:3 ��� :56�3+

�.�"�( !��� �%�$�$ � ��� "� #��"�� $>"� ����:�.#!��� #�!!$ %�&� -��� $%�9� �� �����$��� �%�������"���� #�!! #���(��'�1D �.� $�.�' #��?�����%"$ �-$��&��"�� ��� �;������ �%� ���&"�.$ >��9!:��(� 9"�% �%� �����$����"�� �%�� ��"(���"�( ����:�.#!��� #�!!$ #��$"$��� � �:!'��%�#'��$ ��� ��1K

�����! �����"�"# #�!!$� �'��%�#'��$ ��$� #�����!'�;���$$�� �%� �� �:#�!! ��#������ �:#�!!$ �;���$$"�(�%� ���"(�� ��#����� 9��� �-$��&�� ��!' ����!' "�����"# $��#"���$ � ��� "���������! �!!��(�� #%�!!��(���%�$� ��$.!�$ ��� "� #�����$� �� �%�$� � ���.��!#��"�� ����"# $>"� !�$"��$ "� 9%"#% �%�$� #�!!$ ��� $��� ��B.���!' "� �%� ��"����"$ ��� ����"$�)3 A�#�.$� �:!'��%�#'��$ ��� "�&�!&�� "� ��"�%�!"�! �� ��#�3*

9� %'���%�$"<� �%�� �%� �-$��&�� �"8����#� -��9���!�$"���! ����"# $>"� $���!�$ ��� $��#"���$ "� �%"$$�.�' "$ -�$� �;�!�"��� -' �%� ��.�� � �!!��(��#%�!!��(�� @%����$ ��"#.�����.$ ���&�#��"�� 9"�%�!!��(��$ �$ $.$��#��� �� #��"�� � $>"� 9�.!���$.!� "� �%� %'����!�$"� � ��"�%�!"�����"# �:!'��%�#'��$ "���������! ���"(�� #%�!!��(� 9�.!�!��� �� �� �:#�!! ��"(���"�� "� �%� ���$��� �;���":����� !������"&�!' �:#�!! %'����!�$"� #�.!� -��%� ��$.!� � ���!��(�� �� #���"�.�.$ �!!��(��#%�!!��(� 2�$ $��� "� ����"# ���"���$6 � ���&�#��"��9%"#% 9�.!� -� �"8����� ��� �%� $"�(!� "���������!"�7�#�"�� � �%"$ $�.�'�

�� #��"�� �!!��(�� ��� ���":�(�:"��.#�� $>"� �����1#K �����"�"# #�!!$ ��"(����� "� %"(% �.�-��$ ���%� $"��$ � "���������! #%�!!��(�� �!.$���"�( � �%�$������"�"# #�!!$ �� �%� &"#"�"�' � !'��%�#'��$ $.((�$����%�� �#�"&� �#" � ���"(�� #���.�� �� ���$�����"���##.���� "� �%� ����"$� ���&��$�!' �%� �.�-�� � �����! ��1�K �����"�"# #�!!$ �"� ��� "�#���$� �&���"�� "� � $�.�' � ���:"��.#�"�� "� %.��� ����"#$>"��13 �� �%� $>"� � ��($ 9"�% $��������.$ �%�9�&�� �����"�"# #�!!$ ��� %'����!�$�"#�)) @%����$���(��%��$J #�!! %'����!�$"� ��� #!.$���"�( �##.� "��%� ��"����"$ � !�$"���! ����"# #��"�� $>"� �����!

� ),,1 A!�#>9�!! �#"��#� ��� �� ����� ���� ����� #$ 5/C0D

*����� 0+ �����"�"# #�!!$ �((��(��� ���.�� �����.#!��� #�!!$ "� �%�

$.���?#"�! ����"$ � -"��$"�$ #�!!�#��� )5 % � ��� ���� ����������

������ ���"(�� "�7�#�"�� "� �%� $>"� � � �"��:�!!��("# ��(�

���.��%"$��#%��"#�! ���%�� ��1#:$��#"?# ����#!���!

���"-��' � 13�/�11 ��"��:��%'!:#��-�<�!� #%����(�� ���

%������;'!"� #�.����$��"� -��L*0 �� 2"�$�� 5, ��6�

)3, ����

Page 8: Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

0+ �� �!"&�' � ���

�����"�"# #�!!$ ��� "� %"(% �.�-�� "� �%� ����"$ � -��% !�$"���! ��� ���!�$"���! ����"# $��#"���$�)) �%���$.!�$ � �%� ���$��� $�.�' �%��� ��� ��� $"�"!�� �� �%��-$��&��"��$ "� $��������.$ #��"�� � $>"� �!-�"���=�#�"�( �%� �"8����#� "� �%� !�#��"�� 2"���������!&$� ��"�����!6 �!!��(�� #%�!!��(�$�

�� #��#!.$"�� �.� $�.�' � ��� (������"�� "� -��%����"# ��� �����! #��"�� $>"� %"(%!"(%�$ �%� $"�"!��"�'-��9��� �%� !��� $��(�$ � "��.#�� ���#�"��$ ��� �%������! "�=�����"�� � $��������.$ #��"�� ����"#$>"�� �&�� �%�.(% �.� $�.�' 9�$ !"�"��� �� )5 % ��$�:#%�!!��(� 9� ���$.�� �%�� !���� -"��$"�$ 9�.!� %�&�'"�!��� �����! "�=�����"�� �"#%�� "� �����.#!���#�!!$ ��� ������ "� (���.!�#'��$ %��#� �&�� ����$"�"!�� �� �%�� � ���.��! � "� ��($� @%��%�� �� ���#.�����.$ ��� #�.!� $��&� �$ �� �;���"�����! ����! �� � $>"� !�$"��$ ����"�$ �%� $.-7�#� � ��-��� "�%.���$�* ������ ���!' �%�$�$ � "���������!!'���&�>�� ��� ��� �"#%�� "� (���.!�#'��$ �%�� M����'���#% ��$�$J ��� ����"# $>"� !�$"��$�* �%"$ �"8����#� "�#�!!.!�� �'���"#$ %�9�&�� #�.!� -� �;�!�"��� -' �%��"8����#� "� #%���>"�� ��!��$� �!!�9"�( �����!"�$���� � ��"�����! �!!��(�� ���&�#��"���

��&���%�!�$$ 9� ��#.������ �%�� "���������!"�7�#�"�� � ���":�(� ���"-��"�$ "��� �%� ����"$ � �����! ��($ "$ �!!�9�� -' �� ���� �%"$ ?��"�( "$ ���$.���"$"�( "� !"(%� � �%� ���$��#� � �(� �� $>"� ��$�#�!!$ � �����! ��($�))3D �.�����.$ ���#�"��$ � ���"���������! #%�!!��(�$ 9"�% �(�:$��#"?# ���"-��"�$ "������! ��($E 216 ��$� !">�!' ��$.!� ��� ��$� #�!!�#�"&��"�� �!!�9"�( �(�:��#����� #��$$:!"�>"�( 2)6 ���$"�"!�� �� �%�$� �##.��"�( � ��� �!!��(�� ���&�#��"�� "�����"# ��($ ��� 236 ��$��-!� ����"# $>"� !�$"�� -��%��#�� ��� �"#��$#��"#�!!'� @� �����$� �%��� ����%�� �(�:���"���� ��� "� �����! #��"�� $>"� #�.!� -�.$�� �� $�.�' "�%"-"���' �8�#�$ � M���":����"#J�%����#�!�("#�! �(���$ "� � ���:#!"�"#�! $���"�(������� $.#% �� �;���"�����! ������#% %�$ -���&�!"����� ��#���!' -' �"8����� "�&�$�"(����$�)*

��1� 2)�!3�&���(

�%"$ $�.�' 9�$ .���� -' � #�����"�"&� ��$���#%(���� ��� �%� ���"#�� #����' � ����"���'�������!�('� �%� �.�%��$ �%��> ��$ ��-��� �$#%2G���� ��-������"�$ ����"� �� �� 6 ��� A�.#�������-��( 2�� ����� ��"&��$"�' ��!!�(� � ����"���' ���"#"�� �� �� 6 �� ���&"�"�( �%��"�� �!!��(��"# ��#�"�� ��� ���"#��"�� �(� ���"-�:�"�$ ��$��#�"&�!'� @� ��� (���� .! �� @���' ��&�(�2A"����"#�! ����.�"#��"�� �� ����� ��"&��$"�'��!!�(� � ����"���' ���"#"�� �� �� 6 ��%�!�"�( 9"�% �%"$ �����J$ #�!�.� ?(.��$�

��*������(

1� ��!!�' G��� G!�"#% G�I� I����� ���� �#%������ ��� ���� �%�$� � �%� "����"��� 9%��! ��� =��� $>"�

���#�"��$E "�$ ��������#� �� �(� ���"-��"�$� /����� ��'������� !���� ��� ��� 1/*+4 .4E 5,DC),�

)� ��9��� �� ��(�" �� A�$�>" �� � ��� �%� �;���$$"��� �.�"�� #.�����.$ !��� �%�$� ���#�"�� ��B."��$ -��%�(� ���"-��"�$ ��� ��5 � #�!!$� '������� ���

",������ �� %����� 1//*4 $0E ))0C31�3� �%��!�$9���% ���� �%� $>"� �$ � ����! �� $�.�' �%�

���%�(���$"$ � �(�:���"���� �#.�� ��� !���:�%�$�

��$���$�$� /����� �� %����� ��� '������� !���������1//54 5-E 1)5,C0,�

5� ���9 �I� ��' �A� �%� ��!��"��$%"� -��9���"�?!����"�( ��5K !'��%�#'��$ �#�"&���� ��$"���%"!$

��� �%� ��(�"�.�� � �%� �!!��(��:"��.#�� !���:�%�$�#.�����.$ ���#�"��$ "� ���� /����� �� !���������1/DD4 #-#E 510DC+5�

0� �$"#���.!�$ � ���"� N� ��#<>. � � ��� �"���"#$� #�!! "�?!����"�� ��� #'��>"�� ��$$��(�� �� �;���$$"�� � ��� "���������! #%�!!��(� 9"�% �!!��(��

��� �.-��#.!"� "� �%� $��� ����"# "��"&"�.�!$� /������� %����� ��� '������� !��������� 1//54 5-E *+5C*)�

+� @�� �! �� ��$$�' @� �"#%���$��"� ���� A�#%���

A��� ��� �����"�! ��#�."����� � �#�"&���� �����' �!'��%�#'��$ "��� $>"� #%��-�� =."�$ �.�"�( %.���#.�����.$ !���:�%�$� �!!��("# ���#�"��$� /����� ��%����� ��� '������� !��������� 1//04 5/E 0*C+0�

*� ���(�&�!�:@"!�$#%.� ��G� �%���� �� A"%��" ���� � ��� �&�!.��"�� � �%� ����' ���#% ��$� ��� �%�#.�����.$ !���:�%�$� ���#�"�� �$ ��!�&��� ����!$ ��

�%� $�.�' � �!!��("# "�=�����"�� "� ���"���$ 9"�%����"# �#<���� /����� �� %����� ��� '�������!��������� 1//+4 54E 1,1/C)*�

D� �%��!�$9���% ���� �%� ��!� � -�$��%"!$ ��� ��$�#�!!$ "� �#.�� ��� !��� ���#�"��$ "� �%� $>"�� %�����1//*4 .$E 31C53�

/� ����" ��� � �.��( �� O"� ��P� � ���

���.��%"$��#%��"#�! ����#�"�� � %.��� -�$��%"!$"� !���:�%�$� $>"� ���#�"��$� /����� �� %����� ���'������� !��������� 1//D4 #6#E 305C+)�

1,� �%��!�$9���% ���� ���� ��� ����� �� � ��(�':��-��>� � ������ ���� �"#%���$��"� �����.�����.$ !���:�%�$� ��$���$� �� �!!��(��C���"����

��!��$� ��� "�=�������' #�!! "�?!����"��� /����� ��'������� !���� ��� ��� 1/D/4 4,E 101/C)+�

11� G�(� �� ���9 �I� ����' � � ��' �A�

��$"���%"! �#�"&��"�� ��� � !'��%�#'�� "�?!����"�� "��!!��(��:"��.#�� !��� �%�$� $>"� ���#�"��$ ��� #!�$$"#�!��!�'��:�'�� %'���$��$"�"&"�'� /����� �� !���������1//14 #-0E D1+C))�

1)� ��$$"� ���� A���"� A��� �" G�N� ��$>�&"�< �P9�"��� A� N.���"���"&� ���!'$"$ � �:#�!! ��#�����-��� &��"�-!�:(��� .$�(� "� #.�����.$ !���:�%�$�

���#�"��$E ���!"#��"��$ �� �:!'��%�#'�� ��#�."�����"� #.�����.$ "�=�����"��� '������� ��� ������� ��#��� �� !��������� 1///4 /E D0CD�

13� �"�( �� A����� ���� ���( N� � ��� �"(%:�H�"�' "��.��(!�-.!"� � ��#����� 2�# ��$"!�� ��6 :-���"�( ��$"���%"!$ ��$� #�!!$ ��#���%�(�$ ���

���(��%��$J #�!!$ "� �!!��(��:"��.#�� !���:�%�$�#.�����.$ ���#�"��$ "� ����"# $.-7�#�$� !���������1//D4 5,E )D1CD�

15� P9�"��� A� �%� !���:�%�$� ���#�"��E ��!� � �(� "�$

��#����� ��� #'��>"��$� '��� 0������ �� !���������1//34 .E /0,C0�

10� ��!"��� ���� �'���%�$�$ �� �%� #����"-.�"�� � !���:

�%�$� �!!��("# ��$���$�$ �� �%� .����$����"�( ���

� ),,1 A!�#>9�!! �#"��#� ��� �� ����� ���� ����� #$ 5/C0D

)3, ����

Page 9: Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

���"�� #.�����.$ !���:�%�$� ���#�"��$ 0*

��������� � �!!��("# �"$��$�$ Q��"���"�!R� /����� ��%����� ��� '������� !��������� 1/D54 0,E 311�

1+� @����� I��� ����%"!! I��� ��"#� I��� ��' ����������!!�� ��"�! � %'��$��$"�"<��"�� ������ ���������� � ���������� "� #%"!���� 9"�%

�$�%��� #���� 1/*D4 $E /1)C*�1*� ��#>#�� � ��@� �.H� ���� ���(���&� ����

��������#� � �!!��(��:"��.#�� "�#���$�$ "� �"�9�'

��$���$"&���$$ ��!' � ��� �������� �!!��(�� "�%�!��"��$"� �9� $.-7�#�$� '������� ��� ",������ �� %����� 1/D/4#5E ))0C*�

1D� A�#>�� �A� �%.�( ���� �#����!� ���� ��"#>

���� G�!� @��� �.�����.$ �!!��("# ��$���$� "�����"# ��($E ��!��"��$%"� � #�!!.!�� ��� %"$���"����$���$�� /����� �� %����� ��� '������� !���������

1/DD4 4#E 551CD�1/� �%��$�� ���� ��"$���$�� �� �!!"�( �� ���#"�$

$��#"?#"�' "� �%� (������"�� � �"#�$���"�$E ���%�$"$ ��

!�.>�#'��:�#�"&��"�( �#���$ "� �%� $>"� � �!!��("# ��($��� %.���$� ��E �%�>� ��I� ��$�� ���� @%"�� ������$� %������� �� �� ����� ���� �����1 �! )

�; ���E ���(���� ���$$4 1//3E +3C*D�),� �!"&�' �� G.�(.�S �� �� ��T �"���� �� ��������� �

#��"�� ����"# ������"�"$ 9"�% �%� ���$��(!���"� �1���!�( �"$����$��!E �� ���� $�.�'� /����� ��

���� �������� +�� ��� 1//*4 4E )53C*�)1� !�� �� ��I������ � ���8��� �� ���$'�%� �� �

�.��� �� G���� I� � ��!�#�"&� "�%"-"�"�� � �%�

#.�����.$ !��� -.� ��� "����"��� �!!��("# ��$���$� �����"(��$ -' �"$����$��! � �G� ���!�(C��$.!�$ � ���.-!�:-!"�� �!�#�-�:#�����!!�� ������"<�� $�.�'�

%������ ������ �� ������ �� �������� 1//34 #-4E1,++C*,�

))� �!"&�' �� ����� ���� 8�!��� ��� ��'��� �������(��%��$ #�!! %'����!�$"� ��� �(� �;���$$"�� "�

#��"�� ����"# ������"�"$� %������ �� ���� ��������������� 1//+4 $44E 0*/CD0�

)3� �!"&�' �� ��'��� ���� ����� ����

�%���#���"<��"�� � �%� #.�����.$ "�=�������'"�?!����� "� #��"�� ����"# ������"�"$� %������/����� �� ���� ��� ������ 1//*4 #5E 5**CD+�

)5� @"!!��$� �� ���"# $>"� �"$��$�E � ��&"�9 ��� ���#��$"�����"�� � �"�(��$�"# #�"���"�� /����� �� �����%����� $�� ��� 1/D+4 $0E **1CD�

)0� G�-%��� �� ����� �� ���"$��� �� ��>�(�>" ����A��� �� ������-��( A� ���"�� �(� ����#!���!���"-��' $��#"?# �� � ?!��"�! ���"(��E ����.#�"�� -' �#��"�� ; �.�"�� %�����%'-�"���� .$"�( A #�!!$ ��� �

#!"�"#�!!' �8�#��� !'��% ����� !��������� 1//04 4.E5)/C35�

)+� A��<"$ �� N.���!� �� ������ �� ������ ��

�."(������ � ��������"&� $�.�' � %"$���"����!��$� ��� $>"� ��$� #�!!$ �"$���$�� ��� ����"#

�$#��"$:$��$"�"&� ��� %��!�%' ��($� �� �����!��������� ��� !������� ������ 1//D4 //E 53C01�

)*� ��-��� ��I� ���!�' �I� �$� � "��.#�� #.�����.$"����"���:�'�� %'���$��$"�"&"�' ���#�"��$ �� �&�!.������":"�=�������' �8�#�$ � ��"��#"��!��� ���"#�!

$�!.�"�� "� �%��� ��($� �� ����� ���� ����� ),,,4##E )0C33�

)D� �.�� ��G� ������ �� ��� ������ � ������ �� ���� �� ��

%��� 2���� !�� � � � �� $� ������� 3�� ���� ��9���>E �#G��9:�"!! A��> ������'4 1/+DE 111C)�

)/� ����� ���� ��$$"��� ��� ���"!��>� ����@"�!��(� I�I� ��8 ���� ��&���$ �� ����#!���!

���"-��"�$ $��#"?# �� #��"�� ��5 ��� ��D ��?�� .�#�"���! �:!'��%�#'�� $.-$��$ ��� %"(% ���$"�'�;���$$"�� � ��5 -' #��"�� ��.����%"!$� +�����

%� ����� 1//)4 -6E *0CD0�3,� ����� ���� ��$$"��� ��� ��&�!������ �

����#!���! ���"-��"�$ �� �%� #��"�� �:#�!! ��#�����

#���!�; 2���F��36 ��� �%�"� .�"!"<��"�� "� �%��"�(��$"$ � �:#�!! ����!�$"�� �� ����� $� ������1//34 ,6E 50*�

31� ����� ���� ��$$"��� ��� �!"&�' �� ��&�!������ � ����#!���! ���"-��"�$ �� #��"�� � #�!! ��#�����:12���:6 ��� �%�"� .�"!"<��"�� "� �%� �"�(��$"$ � ��"���������"# #.�����.$ �:#�!! !'��%���� �� �����

$� ������ 1//54 ,#E 0/*�3)� ���9 �I� ����' � � G�(� �� ��' �A�

���.��%"$��!�(' � %.��� �!!��("# !���:�%�$� $>"�

���#�"��$� �)�� $���������� 1//14 -2�.��!� 16E *1CD�33� �"�( �� ���( N� ��-����:A����� �� ��' �A�

$$�#"��"�� � ������$"$ � ��.����%"!$ ��� ��$"���%"!$

��� �%�"� "�(�$�"�� -' ��#���%�(�$ 9"�% ��$�!.�"�� � �%� �!!��(��:"��.#�� #.�����.$ !���:�%�$� ��$���$� "�����"# %.��� $.-7�#�$� $��������� �� �� %������ ����� %������ $��������� 1//*4 #65E 5)C0,�

35� P9�"��� A� ���!�� ��� ���( ��I� ��$>�&"�< ����'��>"�� !�&�!$ ��� "�=�������' ��$���$�$ "� ��&�!��:"�( !���:�%�$� �!!��("# ���#�"��$ "� �%� $>"�� /����� ��

%����� ��� '������� !��������� 1//*4 #66E 1,5C/�30� P9�"��� A� ��$>�&"�< ��� &�� !!��� ��

������"$�� � "�=�������' �&���$ �.�"�( ��&�!��:

"�( "��.��(!�-.!"� �:���"���� !���:�%�$� ���#�"��$��� ��!�'��:%'���$��$"�"&"�' ���#�"��$� '������� ���������� �� #��� �� !��������� 1//D4 .E 0*5C*�

3+� ���!�� ��� �.�� �� �%���>"��$ ��� �%� !���:�%�$����#�"��� %����� 1//D4 .,E �)*C�3)�

3*� A!.�$���� I� � �%����" �� �#"����$ �� ����!"�( ��� ��� (���� ��!�� #�!!$E � $��#"�!"<�� �:#�!! $.-$��

"� �%� "��.�� $'$���� %����� ������ �� '��� ������������� �� 3������ 1//04 ##E 3,*C03�

3D� ��!!"9�!! ����@� �%� !�#�!"<��"�� � �(� "� #��"��

$>"�E �� "��.��=.���$#��� $�.�'� /����� ��!��������� 1/*34 ##6E 5))C3,�

� ),,1 A!�#>9�!! �#"��#� ��� �� ����� ���� ����� #$ 5/C0D

��7 ����7 �%�< !�$ #%"��$ �� !�$ %.��"�$ ����"B.�$ !J"�7�#�"�� "����#.����T � ��$ �!!��(�S ��$ ��$���$�-!�$ �$�$."&"� ��� !J�����"�"�� �� ��T �#�"��$ "���T �"���$ �� �������T �$� ����� �T �.�� � �T ��T ��T �!"$�T � ��.� ��T ����"��� !����.�� �� !� &��"��"�� �� !J"�?!���� "�=������"�� �-$��&�T ������� !�$ ��T �#�"��$ �������T �$ ��T �"�T �$ ��� !�$ �(�

���$ !� ���. ��$ #%"��$� ���"$ #%"��$ �����.; �� ���"$ #%"��$ �!!��("B.�$ �S ���� ���������� ������ ��� �T ��T

"�#!.$� ��.$ !�$ #%"��$ ��� �T ��T ��$��T $ ��� &�"� "��������"B.� �&�# .� �;���"� �J�#��"��$ .� ���"#���$ �.�"?�T

���":�(� #��"�� 2#�����U !� ��$"�" 6 �� �. $�!.��T $�!�T 2#�����U !� ��T (��" 6� ��$ -"��$"�$ #.����T �$ ��� �T ��T ��T �!"$�T �$

�&��� �� + 1) �� )5% ����S $ "�7�#�"��� ��$ $�#�"��$ ��� �T ��T #�!���T �$ ��� ��$ #�!����"��$ %"$��!�("B.�$ ��T ��:#%�����"B.�$ �� $��T #"?B.�$ ��$ �T �$"���%"!�$� �� �.��� ��.$ �&��$ .�"!"$�T .�� ��#%�"B.� "��.��%"$��:#%"�"B.� �&�# ��$ ���"#���$ $��T #"?B.�$ ��$ ���"(�S ��$ !�.#�#'��"��$ #��"�$� �J�T �.�� � #��?���T !J�����"�"���J.�� ��T �#�"�� �������T � #%�< !�$ #%"��$ ����"B.�$ ����S $ !� $�"�.!��"�� ���"(�T �"B.� �� #%�< !�$ #%"��$ $�"�$ �� !�$

)3, ����

Page 10: Characterization of the Inflammatory Infiltrate During IgE-mediated Late Phase Reactions in the Skin of Normal and Atopic Dogs (Pages

0D �� �!"&�' � ���

� ),,1 A!�#>9�!! �#"��#� ��� �� ����� ���� ����� #$ 5/C0D

#%"��$ ����"B.�$ ����S $ !J"�7�#�"�� "��������"B.� �J���"#���$ $��T #"?B.�$ �J�(�� A"�� B.� !�$ ����"�S ��$ #�!!.!�$�-$��&�T �$ ���$ !� ����� �"��� �T ��T ��$ ��.����%"!�$ �� ��$ (���.!�#'��$ �T �$"���%"!�$ �#�"&�T $ .� �V.; ��

!'��%�#'��$ � �� �� �� #�!!.!�$ �����"�"B.�$ � �T ��T �-$��&�T ���$ !�$ ����"��$ $����$ ��$ ��T �#�"��$ �������T �$������ !�$ ��T �#�"��$ �������T �$ ��T �"�T �$ ��� !�$ �(� ��$$��-!��� �.; !�T $"��$ $�������T �$ �� ������"�� ����"B.��S !� �"$ ��#��$#��"B.����� �� �"#��$#��"B.����� ��.$ �����$��$ !J.�"!"$��"�� �� ��$�$ $"�"!�"��$ ��.�

�T �.�"�� !�$ �8��$ ���":"�=������"��$ ��$ ��!�T #.!�$ ���":�!!��("B.�$� Q�!"&�' �� �.�$��� �� �� �.��%' ���� �� ����� �� �� �%���#���"<��"�� � �%� "�=�������' "�?!����� �.�"�( �(�:���"���� !��� �%�$� ���#�"��$ "��%� $>"� � �����! ��� ����"# ��($� 2����#��T �"$��"�� �� !J"�?!���� "�=������"�� ��$ ��T �#�"��$ �������T �$ �S �(�

���$ !� ���. �� #%"��$ �����.; �� �� #%"��$ ����"B.�$�6 �� ����� ���� ����� ),,14 #$E 5/C0D�R

������� �� ��#"����$ ���T �"#�$ #��"��$ ' %.����$ !� "��#.!�#"�T � "����#.��T ��� �� �!�T �(���$ � ��$"&�$ �$

$�(."�� ��� .�� ���##"�T � "����"��� ' �� �$� ����WT �� �$�� �$�.�"� $� ���!"<�T ���� ���!"�� !� #���#���"<�#"�T � ' !��"��T �"#� �� �" ������$ $.-(�.��$ �� #�T !.!�$ "�=������"�$ �.����� !�$ ���##"���$ �� �$� ����WT � ���"���$ ����(� �� !� �"�! #��"��� ���$ �����$ �����!�$ ' ���$ �����$ �!�T �("#�$ � ���� ���������� ������ .����

$�!�##"�����$ ���� �$�� �;���"������ ����$ !�$ �����$ .���� "��#.!���$ "������T ��"#������ #�� �!�T �(��� ��!�T #��� ���"#.����$ ���":�(� #��"��$ �.�"?#���$ 2#�����! ��$"�"&�6 � $.��� $�!"�� ��������� #�� �$ ���2#�����! ��(��"&�6� �� �-�.&"���� -"��$"�$ #.��T ���$ ����$ ' + 1) ' )5 % ��$�:"��#.!�#"�T �� ��$ $�##"���$ .����

���X "��$ #�� �"�#"���$ ����#����T �"#�$ ' �$��#WT ?#�$ �� ��$"��T ?!�$� ����T $ .�"<���$ .� ��T ����"��.��%"$��B.WT�"#� #�� ���"#.����$ �$��#WT ?#�$ ���� !�.#�#"��$ #��"��$� �$�� �$�.�"� #��?���T !��;"$���#"� �� .�� ���##"�T � �� �$� ����WT � �� �"�! ���T �"#� ��$�.�T $ �� ������ �� #����#�� #�� �! �!�T �(��� '

�� �"�! #��"�� �����! ' ���T �"#� ��$�.�T $ �� !� "��#.!�#"�T � "������T ��"#� �� ���"#.����$ �(�:�$��#WT ?#�$��"�����$ !�$ #�T !.!�$ ��"(�����$ ��T ��"#�$ �� �$� �������� $� #�����WT �� ��"�#"��!����� ��� ��.���T ?!�$ '(���.!�#"��$ ��$"��T ?!�$ �#�"&���$ %�-WT � .� "�=.7� �� !"� �#"��$ �� � ' #�T !.!�$ �����WT �"#�$ ��T ��"#�$ �����##"���$ �� �$���WT �$ ��$���"���$ ' ����WT �$� �.�$�� B.� !�$ ���##"���$ �� �$� ����WT � ���"���$ ��� �(� $�

�$���7�� � !�$ !�$"���$ #.��T ���$ �$�����T ���$ �� !� ����"� #��"�� ����� � �"&�! �"#��$#�T �"#� #�����#��$#�T �"#� ���������$ .�"!"<�� ���-�$ $"�"!���$ ���� �$�.�"�� !�$ � �#��$ ���":"�=������"�$ �� �T ���#�$���":�!�T �("#�$ �� .� �$�.�"� ���:#!WT �"#�� Q�!"&�' �� �.�$��� �� �� �.��%' �� �� ' ����� �� ��

�%���#���"<��"�� � �%� "�=�������' "�?!����� �.�"�( �(�:���"���� !��� �%�$� ���#�"��$ "� �%� $>"� � �����!��� ����"# ��($� 2����#���"<�#"�T � ��! "�?!����� "�=������"� �.����� !�$ ���##"���$ �� �$� ����WT � ���"���$��� �(� �� !� �"�! �� �����$ �����!�$ ' ���T �"#�$�6 �� ����� ���� ����� ),,14 #$E 5/C0D�R

8�������������� A�" ����"$#%�� �.���� .�� ���$#%�� ���9"#>�!� $"#% ��#% "����>.����� ��7�>�"�� &����!�&����� !!��(���� ���>�"���� &�� �� ���:9"� �.#% &�� ���Y ��'�� �"�$� ��.�"� 9.��� �.�#%(� .Y %�� .�

�"� �.-�'��� ��� ���<.Y ��.�($<�!!�� 9�Y %���� �(�:&���"���!��� ���Y ����>�"���� "� ��� �.���%�.� 9�"��� <.#%���>���"$"����� ���" �����!� �.��� .�� ���" �.��� �"� �"��� !!��("� (�(�� ���� ���������� ������9.���� .Y � �"�$�$ �;���"���� �.$(�9�Y %!�� !!� �.��� 9.���� �"� �"!-���!!��(�� (���"�"(��� >��"��� ��":

�(� ��">�Y ����� 2��$"�"&� ������!!�6 ���� �"� �"� �%�$�%�� (��.8����� ��!<!�Y $.�( 2��(��"&� ������!!�6-�%����!�� ��.�-"��$"�� 9.���� &�� .�� + 1) .�� )5 ��.���� ��#% ��� ��7�>�"�� (�������� �"� �#%�"���9.���� �"� ����#%�����"$#%�� .�� ��$"���%"!:$��<"?$#%�� %"$��!�("$#%�� �#%�"���� (� �Y �-�� P.$�Y �<!"#%

&��9������� 9"� �"�� "��.�%"$��#%��"$#%� ���%��� �"� .Y � >��"�� ��.>�<'��� $��<"?$#%�� ��">�Y �������"�$� ��.�"� -�$��Y �"(� ��$ ��%�����$�"� �"��� ���Y ����>�"�� "� ����"$#%�� ��.� ��#% ��"(���;���"��.�(.�� "� �����!�� .�� ����"$#%�� ��.� ��#% ��� ��7�>�"�� &�� �(�:$��<"?$#%�� ��">�Y ������ @�Y %���� �$ $"#%

-�" ��� �.Y % "� �"� ��.� ��"(�"������� P�!!�� .� ��.����%"!� .�� �>�"&"���� ��$"���%"!� G���.!�<'���%����!�� 9�� "� ��� ��#% �!(����� �%�$�� ��� ���Y ����>�"�� �"� ��=.; &�� �� �:�'��%�<'��� .�� �����!�������"�"$#%�� P�!!�� �$�<.$��!!��� @�"! -�"� �.�� �(�:&���"���!�� ���Y ����>�"���� �">��$>��"$#% .����>��$>��"$#% $�������� ����"$#%�� ��Y $"���� �Y %��!� $#%!�(�� 9"� �"�$� ���%��� &�� .�

���<.Y ��.�($%������� @"�>.�(�� &�� ���":�!!��("$#%�� ���">������� "� �"��� &��>!"�"$#%�� ����".� <.��$���� Q�!"&�' �� �.�$��� �� �� �.��%' �� �� .�� ����� �� �� �%���#���"<��"�� � �%� "�=�������'"�?!����� �.�"�( �(�:���"���� !��� �%�$� ���#�"��$ "� �%� $>"� � �����! ��� ����"# ��($� 2�%���>���"$"��.�(

��$ ���<.Y ��!"#%�� ��?!����$ 9�Y %���� ��� �(�:&���"���!��� ���Y ����>�"�� "� ��� ��.� &�� �����!�� .������"$#%�� �.�����6 �� ����� ���� ����� ),,14 #$E 5/C0D�R

)3, ����