1 Biologie Moléculaire Compétences Techniques Compétences Micropipetage Préparation de solutions Travailler avec les concentrations Dilutions Quantités Électrophorèse sur gel d’agarose Micropipetage- Mesurer de petits volumes Permet la mesure de microlitres (μL) 1 000 X moins que 1 millilitre 2-20 μL 50-200 μL 100-1000 μL Max. 0.02 mL 0.2mL 1mL
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Transcript
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Biologie Moléculaire
Compétences Techniques
Compétences
Micropipetage
Préparation de solutions
Travailler avec les concentrations
Dilutions
Quantités
Électrophorèse sur gel d’agarose
Micropipetage- Mesurer de petits volumes
Permet la mesure de microlitres (µL)
1 000 X moins que 1 millilitre
2-20 µL 50-200 µL 100-1000 µL
Max. 0.02 mL 0.2mL 1mL
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Réglage du volume- P20
Dizaines (0, 1=10 or 2=20)
Unités (0-9)
Décimale (1-9 = 0.1-0.9)
Réglage du volume- P200
Centaines (0, 1=100 ou 2=200)
Dizaines (0, 1-9=10-90)
Unités (1-9)
Réglage du volume - P1000
Milliers (0, 1=1000)
Centaines (0, 1-9=100-900)
Dizaines (0, 1-9=10 - 90)
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Utilisation du micropipetteur
Étape 1
Insérer embout
Étape 2
Peser piston
jusqu’au
Premier arrêt
Étape 3
Insérer embout dans la
solution a être prise
Étape 4
Aspirer l’échantillon en
relâchant lentement le piston
Étape 5
Retirer pipetteur
Livraison
Commencer à livrer 1er arrêt =livrer 2e arrêt = expulsion
Directives pour reproductibilité optimale
Utiliser le pipetteur dont le volume se rapproche le plus de celui désiré
VITESSE et FORCE consistante pour peser et relâcher le PISTON
PROFONDEUR D’IMMERSION consistante
3-4mm sous la surface
EVITER les bulles d’airs
Ne jamais aller au-delà des limites du pipetteur
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Préparation des Solutions
Définitions
Solution
Mélange de 2 substances ou plus dans une phase unique
Solution composée de deux composantes
Soluté
– Partie qui est dissoute ou diluée – Habituellement la
plus petite quantité
Solvant (OU Diluent)
– Partie de la solution dans laquelle le soluté est
dissout – Habituellement le plus grand volume
Concentration = Quantité de soluté
Quantité de solution (Pas solvant)
Trois façons d’exprimer les concentrations:
Concentration Molaire (Molarité)
Pourcentages
Masse par volume
Concentrations
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Molarité
No de Moles de soluté/Litre de solution
Masse de soluté/PM de soluté = Moles de
soluté
Moles de soluté/vol en L de solution = Molarité
Pourcentages
Les concentrations en pourcentage peuvent être exprimé en tant que :
V/V – volume de soluté/100 mL de solution
M/M – Masse de soluté/ 100g de solution
M/V – Masse de soluté/100 mL de solution
Tous représentent des fractions de 100
Pourcentages (suite)
%V/V
Ex. 4.1L soluté/55L solution =7.5%
Doit avoir les mêmes unités en haut et en bas!
%M/V
Ex. 16g soluté/50mL solution =32%
Dois avoir des unités du même ordre de grandeur en haut et en bas!
% M/M
Ex. 1.7g soluté/35g solution =4.9%
Dois avoir les mêmes unités en haut et en bas!
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Les Dilutions
La Réduction d’une Concentration
Une Fraction
Dilutions
Dilution = produire des solutions plus faibles à partir de solutions plus fortes
Exemple : Faire du jus d’orange à partir de concentré. Mélanger une cannette de concentré de jus d’orange congelé avec trois (3) cannettes d’eau
Dilutions (suite)
Les dilutions sont exprimées comme le volume de la solution étant diluée par le volume total final de la dilution
Dans l’exemple du jus d’orange, la dilution serait exprimée comme 1/4, pour une cannette de jus à un TOTAL de quatre cannettes de jus dilué. Quand on parle de la dilution, vous diriez pour l’exemple du jus : « un dans quatre ».
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Dilutions (suite)
Un autre exemple :
Si vous diluez 1 ml de sérum avec 9 ml de salin, la dilution serait écrite 1/10 ou dite « un dans dix », car vous exprimez le volume de la solution étant diluée (1 ml de sérum) par le volume final TOTAL de la dilution (10 ml totaux).
Dilutions (suite)
Un autre exemple :
Une (1) partie d’acide concentré est diluée avec 100 parties d’eau. Le volume total de solution est 101 parties (1 partie d’acide + 100 parties d’eau). La dilution est écrite comme 1/101 ou dite “un dans cent un ”.
Dilutions (suite)
Remarquez que les dilutions n’ont pas d’unités (cannettes, ml, ou parties) mais sont plutôt exprimées comme un nombre par rapport à un autre nombre
Exemple : 1/10 ou « un dans dix»
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Dilutions (suite)
Les dilutions sont toujours exprimées avec la substance originale étant diluée comme étant un (1). Si plus d’une partie de la substance originale est initialement utilisée, il est nécessaire de convertir la partie de la substance originale à un (1) quand la dilution est exprimée.
Dilutions (suite)
Exemple: Deux (2) parties d’un colorant sont diluées avec huit (8)
parties de diluant. Le volume total de solution est 10 parties (2 parties de colorant + 8 parties de diluent). La dilution est initialement exprimée comme 2/10, mais la substance originale doit être exprimée comme étant un (1). Pour convertir le volume original à un (1), utiliser une équation de rapport et de proportion. Rappelez-vous que les dilutions sont exprimées en terme de 1 à quelque chose :
__2 parties de colorant = ___1.0___ Volume total de 10 parties x 2 x = 10 x = 5 La dilution est exprimée comme étant 1/5.
Dilutions (suite)
La dilution n’est pas toujours comme des nombres entiers. Exemple: Deux parties (2) de sang sont diluées avec cinq (5) parties
de saline. Le volume total de solution est sept (7) parties (2 parties de sang + 5 parties de saline). La dilution serait 2/7, ou plus précisément 1/3.5. Encore une fois, ceci est calculé en utilisant une équation de rapports et de proportions. Rappelez-vous que les dilutions sont exprimées en terme de 1 à quelque chose:
__2 parties de sang_____ = ___1.0___ Volume total de 7 parties x 2 x = 7 x = 3.5 La dilution est exprimée comme 1/3.5
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Qu’est que cela veut dire??
Si une solution possède une dilution de 1/10 le nombre représente 1 partie de l’échantillon ajouté à 9 parties de diluant.
Si cette solution était préparée à un volume final de 110 mL, quels volumes de soluté et de solvent doivent être utilisés?
Ceci représente 1 partie d’échantillon ajoutée à 9 parties de diluant.
En autres mots, quel est le volume de 1 partie et de 9 parties?
Facteur de Dilution
EXEMPLE: Quel est le facteur de dilution si vous ajoutez 0.1 mL d’un spécimen à 9.9 mL de diluant? Le volume final est égal au volume de l’échantillon
PLUS le volume du diluent: 0.1 mL + 9.9 mL = 10 mL
Le facteur de dilution est égal au volume final diviser par le volume de l’échantillon : 10 mL/0.1 mL = Facteur de dilution de 100X
Exemple d’un Problème
Quel est le facteur de dilution quand 0.2 mL est ajouté à 3.8 mL de diluant?
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Dilutions en série
Si une dilution de 1/8 d’une solution mère est faite suivie par une dilution de 1/6 quelle est la dilution finale?