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Aluna: Ana Paula Segantin GaspariRibeiro Preto/2014
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INTRODUODesenvolvimento de metalo-frmacos
Desenvolvimento de frmacos que interajam com stios
especficos
Cisplatina: busca por frmacos que possam ser utilizados em
tratamentos de tumores resistentes a ela.
DNA: intercalao com complexos distorce forma helicoidal (inibio
da replicao de enzimas)
Variao de ligantes: diferentes interaes com o DNA.
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MTODOSSntese e caracterizao dos complexos
Estudo da ligao dos complexos ao DNA (timo de bezerro)
CT-DNA
- Espectros de absoro do CT-DNA na ausncia e presena dos
complexos em tampo tris-HCl (pH = 7,2).
- Estudos de luminescncia na presena de brometo de etdeo:
competio pela interao com o DNA.
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MTODOS Estudo da interao dos complexos a uma protena (albumina
de soro bovino). Por que albumina?
Abundncia no sangue
Interao com frmacos
Transporte de ons metlicos, complexos pela corrente sangunea
Ligao reversvel endgenos e exgenos
Mudanas no espectro de emisso do triptofano mudana de
conformao.
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MTODOSLigao dos complexos a protena (albumina de soro
bovino)
- Anlise da intensidade de emisso de resduos de triptofano
(excitao em 280 nm e emisso em 345 nm) ao adicionar os complexos em
tampo fosfato.
Estudos de citotoxicidade
-Teste MTT em clulas HeLa (cncer cervival humano) e clulas
sadias NIH3T3 (fibroblasto embrionrio de rato)
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RESULTADOS E DISCUSSO
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Snteses[Ru(H)(Cl)(CO)(PPh3)3] + MeOH
Refluxo por 12hcis-[RuCl2(DMSO)4] +MeOH
Refluxo por 12h
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Espectroscopia Uv-vis com adio de quantidades crescentes de DNA
(titulao)Adio do CT-DNA solues dos complexos fazendo-se fatores de
correo para no terem erros devido diluio.
Duas Hipteses:
Deslocamento para a regio IV (batocrmico) e diminuio das bandas
(hipocrmico) Interao via intercalao
Deslocamento da a regio UV (hipsocrmico) e aumento das bandas
(hipercrmico) Interao eletrostticaWang, H.F., Shen, R. e Tang, N.
European Journal of Medicinal Chemistry, 44 (2009) 4509-4515
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Espectroscopia Uv-vis com adio de quantidades crescentes de DNA-
Diminuio das bandas e pequeno desvio para IV (2 nm) com adio de
CT-DNA: intercalao.
Ligante (Ci = 25 M)Complexo 1 (Ci = 25 M)Complexo 2 (Ci = 25
M)
AbsorbnciaAbsorbnciaAbsorbncia*CT-DNA variando de 0 a 40 M
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Clculos das constantes de ligao intrnseca
Kb = 1,4 x104 L mol-1 (HL)Kb = 4,11 x 104 L mol-1 (Complexo 1)Kb
= 9,90 x104 L mol-1 (Complexo 2)
Complexo 2 > Kb devido ao maior efeito hidrofbico de
complexos que contm DMSO.
Ligantes: tamanho e forma interferem na fora da ligao com o
DNA.AFINIDADEComplexos > Ligante livreComplexo 2 > Complexo
1
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Ensaios de Fluorescncia: confirmao da interao por via
intercalativa - brometo de etdeo (BE)
BE forma complexos com cidos nuclicos e possuem intensa
fluorescncia na presena de DNA, devido intercalao.
- Verificao da supresso da fluorescncia: competio pelo stio de
ligao. Confirmao da interao via intercalao.
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Ensaios de Fluorescncia: confirmao da interao por via
intercalativa - brometo de etdeo (BE)Intensidade de
emissoIntensidade de emissoIntensidade de emissoliganteComplexo
1Complexo 2Clculo da constante de Stern-Volmer para obteno de Kq
(quenching constant)[BE] = 7,5 M / [DNA] = 7,5 M / [COMPLEXOS] = 0
16 M
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Clculos das constantes de supressoKq = 1,73 x102 L mol-1 (HL)Kq
= 1,55 x 103 L mol-1 (Complexo 1)Kq = 8,26 x105 L mol-1 (Complexo
2)
Supresso da fluorescncia do BE ocorre devido competio pela
intercalao com o DNA
ComprovaoAFINIDADEComplexos > Ligante livreComplexo 2 >
Complexo 1
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Estudo da Interao dos complexos com a albuminaIntensidade de
emissoIntensidade de emissoIntensidade de emissoCondies: Albumina:
1 M, ex = 280 nm e em = 345 nm.Ligante, Complexo 1 e 2 = 0-12 M
Aumento da concentrao do ligante, complexo 1 e 2
SupressoLiganteComplexo 1 Complexo 2
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Clculos das constantes de supressoKb = 4,4 x103 L mol-1 (HL)Kb =
2,02 x104 L mol-1 (Complexo 1)Kb = 3,40 x 105 L mol-1 (Complexo
2)
Complexo 2 > Kb devido ao maior efeito hidrofbico de
complexos que contm DMSO, maior interao com a
protena.AFINIDADEComplexos > Ligante livreComplexo 2 >
Complexo 1
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CitotoxicidadeTestes MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil
brometo de tetrazolina) determinao colorimtrica de viabilidade
celular.
Somente clulas vivas reduzem o reagente amarelo (MTT) ao produto
azul (formazan).
IC50 = concentrao requerida do complexo para levar 50% das
clulas morte.
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Citotoxicidade
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ConclusoComplexo 2 apresenta uma maior afinidade pelo DNA e pela
albumina, e tambm apresenta melhores resultados de
citotoxicidade.
Ambos os complexos so ativos contra clulas cancergenas, mas no
so ativos contra linhagens sadias.
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Obrigada =)