ANEXOS ANEXO 1. COLORACIÓNES COLORACIÓN DE GRAM Técnica de la coloración de Gram 1. Aplicar sobre el frotis seco y fijo, cristal violeta, dejar actuar por un minuto (colorante primario). Lavar con agua. 2. Aplicar lugol, dejar actuar por un minuto (fijador). Lavar con agua. 3. Aplicar alcohol acetona, dejar actuar por treinta segundos (decolorante). Lavar con agua. 4. Aplicar fucsina básica, dejar actuar por un minuto (colorante de contraste). Lavar con agua. Control de Calidad de la Coloración de Gram Gram positivas: Staphylococcus spp. (cocos gram positivos) Gram negativas: Escherichia coli. (bacilo gram negativo). Colorantes para la tinción de Gram 1. Cristal Violeta Cristal Violeta 2g Alcohol Metílico 100ml 2. Lugol Cristal de Yodo 1g Yoduro de Potasio 2g Agua destilada 300ml
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ANEXOS
ANEXO 1. COLORACIÓNES
COLORACIÓN DE GRAM Técnica de la coloración de Gram
1. Aplicar sobre el frotis seco y fijo, cristal violeta, dejar actuar por un
minuto (colorante primario). Lavar con agua.
2. Aplicar lugol, dejar actuar por un minuto (fijador). Lavar con agua.
3. Aplicar alcohol acetona, dejar actuar por treinta segundos
(decolorante). Lavar con agua.
4. Aplicar fucsina básica, dejar actuar por un minuto (colorante de
Colorantes para la tinción de Gram 1. Cristal Violeta
Cristal Violeta 2g
Alcohol Metílico 100ml
2. Lugol
Cristal de Yodo 1g
Yoduro de Potasio 2g
Agua destilada 300ml
3. Alcohol Acetona Acetona 40ml
Alcohol etílico 120ml
4. Fucsina Básica Fucsina básica 1g
Alcohol etílico 95% 20ml.
COLORACIÓN DE WAYSON
Técnica de la coloración de Wayson:
1. Aplicar sobre el frotis seco y fijo el colorante de Wayson, dejar actuar
por 30 segundos.
2. Lavar con agua.
Colorantes para la Tinción de Wayson:
Consta de tres Soluciones:
1. Solución 1ª Rojo congo 2 g
Agua destilada 100 ml
Solución 1B Suero 10 ml
Agua destilada 100 ml
• Mezclar las dos soluciones, filtrar y mantenerlas en nevera
2. Solución 2 Ácido clorhidrico 1,0 ml
Agua destilada 100 ml
3. Solución 3 Azul de metileno 130 ml Este se prepara a partir de: Azul de metileno 0.3 g
Alcohol etílico 30 ml
Hidróxido de potasio 0,01%
Agua destilada 100 ml
Disolver el azul de metileno en alcohol, el hidróxido de potasio en agua y
mezclar las dos soluciones.
AGRADECIMIENTOS
Expresamos un especial agradecimiento a la Dra. Alba Alicia Trespalacios,
por sus enseñanzas y su apoyo constante.
A la Dra. Marcela Mercado quien contribuyó con el análisis estadístico de
este estudio.
A la Dependencia de Monitoría de la Facultad de Ciencias porque con sus
instalaciones y equipos hicieron posible el desarrollo de este trabajo.
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN IDEAL DE ESPORAS DE
Bacillus stearothermophilus COMO INDICADOR BIOLOGICO PARA EL
CONTROL DE PROCESOS DE ESTERILIZACIÓN
LILIANA ELISA ROSERO TORRES
ANGELA MARIA ZARAMA ORTIZ
Directora Dra. Alba Alicia Trespalacios Rangel
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial para optar al título de:
BACTERIOLOGA
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE BACTERIOLOGÍA
BOGOTÁ D.C.
2006
NOTA DE ADVERTENCIA “La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velará por que no se publique nada contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia”. Artículo 23 de la Resolución No 13 de Julio de 1946.
DETERMINACION DE LA CONCENTRACIÓN IDEAL DE ESPORAS DE
Bacillus stearothermophilus COMO INDICADOR BIOLOGICO PARA EL
A continuación se muestra en la Figura 10 las cajas donde hubo crecimiento
después de la esterilización en cada una de las partes del autoclave
evaluadas con el ciclo de material limpio.
A. B.
C. D.
Figura 10. Ensayos en el Autoclave: A una concentración de 12.9 x 108 UFC/ml después de esterilizar se observó crecimiento en: A. Autoclave Inferior Derecho: 1 colonia. A la concentración de 14.3 x 108 UFC/ml se observó crecimiento en B. Autoclave Inferior Izquierdo: 4 colonias. C y D. Autoclave Inferior Derecho: 3 y 5 colonias respectivamente.
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6.8 Ensayos con el Indicador Biológico en el Horno
Se evaluaron 5 puntos diferentes con el indicador biológico: parte superior
derecha, parte superior izquierda, centro, parte inferior derecha y parte
inferior izquierda. En la tabla 7 se observó que desde la concentración 0.6 x
108 hasta la 11.3 x 108 no hubo crecimiento de Bacillus stearothermophilus
ATCC 7953 después del proceso de esterilización. Mientras que para las
concentraciones 12.9 x 108 y 14.3 x 108 hubo crecimiento del indicador
biológico ubicado en la parte central, en la parte inferior derecha y en la parte
inferior izquierda.
TABLA 7. Ensayos en el Horno.
Concentración HORNO UFC/ml
UFC/ml Sup. Der Sup. Izq Centro Inf. Der Inf. Izq
0.6 x 108
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
1.2 x 108
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
2.6 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
4.0 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
5.3 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
6.5 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
8.0 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
8.8 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
11.3 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
12.9 x 10
8 0 0 0 0 30 0 20 0 0 0
14.3 x 10
8 0 0 0 0 20 0 60 20 40 0
En la figura 11 se muestran las cajas que presentaron crecimiento del bacilo
en las cinco partes del horno evaluadas, después de la esterilización. Este
crecimiento correspondió a las concentraciones más altas.
38
A. B.
C. D.
E. F.
FIGURA 11. Ensayos en el horno: A una concentración de 12.9 x 108 UFC/ml después de esterilizar se observó crecimiento en: A. Horno Inferior Derecho: 2 colonias. B. Horno Centro: 3 colonias. A la concentración de 14.3 x 108 UFC/ml se observó crecimiento en C. Horno Centro: 2 colonias. D y F. Horno Inferior Derecho: 2 y 6 colonias respectivamente. E. Horno Inferior Izquierdo: 4 colonias.
39
6.9 Ensayos con el Indicador Biológico con Hipoclorito de sodio
Se realizaron 4 ensayos con Hipoclorito de sodio al 0.52% y al 2.5%. En la
tabla 8 se puede ver que desde la concentración 0.6 x 108 hasta la 11.3 x
108 no hubo crecimiento de Bacillus stearothermophilus ATCC 7953 después
del proceso de desinfección con hipoclorito de sodio al 0.52% y 2.5%.
Mientras que para las concentraciones 12.9 x 108 y 14.3 x 108 hubo
crecimiento del indicador biológico después de la desinfección con hipoclorito
al 0.52%.
TABLA 8. Ensayos con hipoclorito de sodio.
Concentración UFC/ml
Hipoclorito 0.52% UFC/ml
Hipoclorito 2.5 % UFC/ml
0.6 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0
1.2 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0
2.6 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0
4.0 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0
5.3 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0
6.5 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0
8.0 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0
8.8 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0
11.3 x 10
8 0 0 0 0 0 0 0 0
12.9 x 10
8 20 10 30 0 0 0 0 0
14.3 x 10
8 50 0 30 20 0 0 0 0
En la figura 12 se muestra las cajas en las que hubo crecimiento del bacilo
después de la desinfección con hipoclorito de sodio al 0.52%.
40
A. B.
C. D.
E. F.
Figura 12. Ensayos con Hipoclorito de sodio: Después de realizar el proceso de desinfección se observó crecimiento a una concentración de 12.9 x 108 UFC/ml en: A, B y C. Hipoclorito de sodio 0.52%: 1, 2 y 3 colonias respectivamente. Con la concentración de 14.3 x 108 UFC/ml se observó crecimiento en: D, E y F. Hipoclorito de sodio 0.52%: 3, 2 y 1 colonia respectivamente.
41
6.10 Estadística de los resultados para el Horno
Según los datos arrojados por el programa statistix, en la tabla 9 se indica el
valor de p para cada concentración del indicador biológico el cual se emplea
para rechazar o no la prueba, se muestra también el número de repeticiones
realizadas y el número de cajas en las que no hubo crecimiento de Bacillus
stearothermophilus ATCC 7953 después de realizada la esterilización en el
horno. Con color azul se señalan las pruebas rechazadas y con color verde
se señalan las pruebas no rechazadas.
TABLA 9. Estadística para Ensayos en el Horno.
Concentración HORNO UFC/ml
UFC/ml No Repeticiones Sin Crecimiento Valor de P
0.6 x 108
10 10 0.468
1.2 x 108
10 10 0.468
2.6 x 10
8 10 10 0.468
4.0 x 10
8 10 10 0.468
5.3 x 10
8 10 10 0.468
6.5 x 10
8 10 10 0.468
8.0 x 10
8 10 10 0.468
8.8 x 10
8 10 10 0.468
11.3 x 10
8 10 10 0.468
12.9 x 10
8 10 8 0.029
14.3 x 10
8 10 6 0.0002
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6.11 Estadística de los resultados para el Autoclave
Según los datos arrojados por el programa statistix, en la tabla 10 se indica
el valor de p para cada concentración del indicador biológico el cual se
emplea para rechazar o no la prueba, se muestra también el número de
repeticiones realizadas y el número de cajas en las que no hubo crecimiento
de Bacillus stearothermophilus ATCC 7953 después de realizada la
esterilización en el autoclave para material limpio. Con color azul se señalan
las pruebas rechazadas y con color verde se señalan las pruebas no
rechazadas.
TABLA 10. Estadística para los Ensayos realizados en el Autoclave.
Bacillus stearothermophilus es considerado un indicador biológico ideal para
el monitoreo de los procesos de esterilización porque carece de
patogenicidad, pirogenicidad, toxicidad y sus esporas son altamente
resistentes al calor. Publicaciones como las del World Health Organization
(2003), Fallis (1998), Parra et al. (1999) se han basado en el
comportamiento de estas esporas a diferentes condiciones de tiempo y
temperatura, los resultados de la muerte de estas esporas nos llevan a
pensar que al ser verificada la eliminación de estas esporas, se puede
pensar también en la muerte de formas bacterianas menos resistentes,
garantizando un proceso de esterilización altamente eficiente. Por esto
nuestro estudio utilizó Bacillus stearothermophilus ATCC 7953, para obtener
una concentración ideal de esporas en el control de los procesos de
esterilización.
De acuerdo con los resultados obtenidos en la producción de esporas, se
obtuvo el 87% del cultivo en fase esporulada a los tres días. Este resultado
no era el esperado por nosotras ya que en estudios como los de Zmidzinska
et al. (2004) y Kralovic (2000), los cultivos de Bacillus stearothermophilus a
55ºC duraban alrededor de siete días en producir un porcentaje mayor al
80%, esto pudo deberse al medio empleado, ya que se presentó una mayor
desecación del medio con la consecuente disminución de nutrientes,
aportando un ambiente desfavorable que pudo acelerar de alguna manera
el proceso de esporulación.
Teniendo en cuenta que hay dos presentaciones de indicadores biológicos
disponibles como lo menciona Fallis (1998), uno con esporas impregnadas
en papel filtro y otro a manera de ampollas que contienen las esporas en un
caldo nutritivo; nosotras desarrollamos nuestro propio indicador biológico a
manera de esporas de Bacillus stearothermophilus ATCC 7953 impregnadas
en papel filtro, el cual fue sometido a los diferentes ensayos de esterilización
y desinfección y de acuerdo a los resultados obtenidos se obtuvo que en los
controles de viabilidad hubo una recuperación del 50% de esporas presentes
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en la tira de papel filtro, lo cual pudo deberse a que no se empleó un
tratamiento con lisozimas, centrifugación y lavados repetidos para permitir la
liberación de todas las endosporas desde el esporangio y la lisis de algunas
células no esporuladas presentes en la solución, como lo explica el estudio
de Zmidzinska et al. (2004). Otro aspecto importante que puede explicar la
disminución en la recuperación total de esporas dada en nuestro estudio, se
basa en que según Beaman et al. (1988) menos del 10% del número total de
esporas sin un tratamiento previo al calor germinan y forman colonias. Sin
embargo la población de esporas recuperadas en nuestro estudio fue apta,
suficiente y superior al compararla con indicadores comerciales como el
Sterikon Plus Bioindicador de Merck ® en donde la concentración de
esporas (5 x 105 – 1 x 107 por unidad) es similar a la empleada en nuestro
estudio.
En cuanto a los resultados de los ensayos de esterilización a vapor y calor
seco se puede ver que la concentración ideal de esporas para el control de
estos procesos es la de 11.3 x 108 UFC/ml p(0.468), porque fue la última
concentración en la que presentó ausencia total del crecimiento de Bacillus
stearothermophilus ATCC 7953 en un 95% de acuerdo a la prueba para la
proporción realizada en este estudio. Aunque hay carencia de información
acerca de los efectos de la temperatura sobre la resistencia de esporas
según Beaman et al. (1988), al comparar con el estudio de Zmidzinska et al.
(2004) en donde se analizaron los efectos de diferentes concentraciones de
esporas al calor, se encontró que diferentes niveles de inóculos afectan la
resistencia de las esporas, esto puede explicar porque en nuestro estudio a
concentraciones mayores a 11.3 x 108 UFC/ml, hubo un crecimiento gradual
del bacilo. En la publicación también se mostró que las esporas a
concentraciones bajas procesadas a temperaturas de 105ºC y 130ºC
requirieron 65.9 minutos y 23.5 minutos respectivamente para destruir el 90%
de la población. Este porcentaje de destrucción con esporas de inóculos más
altos tratados con las mismas temperaturas no pudo ser calculado aun
después de 80 minutos de procesamiento. Las esporas tratadas a
45
temperaturas altas (145, 160, 175ºC) fueron eliminadas mas rápidamente
para el caso de los inóculos de mayor concentración. Esto se puede
comparar con nuestro estudio en donde se evaluó las mayores
concentraciones de esporas en el autoclave para material sucio el cual
trabaja con un ciclo de mayor temperatura y mayor presión (135ºC 35 Lb de
presión) que el autoclave para material limpio y se encontró una eliminación
total de esporas a estas concentraciones.
Si se comparan los dos procesos de esterilización se puede decir que la
concentración ideal de esporas requirió una menor temperatura y tiempo en
el autoclave que en el horno para eliminar el 95% de esporas, esto puede
deberse a que según lo afirmado por Spicher y Peters (1997) las moléculas
de agua son capaces de desplazar a los puentes de hidrógeno rompiéndose
más fácilmente que con el calor seco, por el contrario, la esterilización con
calor seco necesita recurrir a mayores temperaturas ya que al no existir
moléculas de agua la rotura de puentes de hidrogeno y la desnaturalización
de proteínas así como la fusión de membranas se efectúa a mayores
energías.
De los resultados de los ensayos de desinfección desarrollados con
Hipoclorito de sodio, de manera descriptiva se puede decir que fueron los
esperados por nosotras ya que de acuerdo con el Manual de Limpieza,
Desinfección y Esterilización de la Universidad Autónoma de Barcelona
(2004), éste desinfectante tiene un extenso espectro de actividad
(bactericida, virucida y esporicida) según la concentración de uso. A una
mayor concentración de desinfectante se elimina mayor carga microbiana.
Por último, a partir de los resultados obtenidos en este estudio nosotras
queremos aportar un buen punto de referencia para proyectos posteriores
que continúen con el proceso de validación de este control biológico y así
establecer calidad en los procesos de esterilización.
46
8. CONCLUSIONES
• La concentración ideal de esporas de Bacillus stearothermophilus
ATCC 7953, establecida en este estudio para el control de los
procesos de esterilización como calor seco y calor a vapor fue de 11.3
x 108 UFC/ml.
• Se obtuvo el 87% del cultivo de Bacillus stearothermophilus ATCC
7953 en fase esporulada a los tres días después de recuperada la
cepa.
• Las esporas de Bacilllus stearothermophilus ATCC 7953, son buenas
indicadoras de los procesos de esterilización porque cumplen con las
características de termoresistencia y no patogenicidad para el ser
humano.
• Si se comparan los dos procesos de esterilización se puede decir que
la concentración ideal de esporas requirió una menor temperatura y
tiempo en el autoclave que en el horno para eliminar el 95% de
esporas.
• Se observó que la concentración de hipoclorito de sodio al 2.5% fue
más efectiva que la de 0.52% por eliminar una mayor carga
microbiana.
47
BIBLIOGRAFÍA
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50
RECOMENDACIONES
Como en este trabajo se estandarizó la concentración de esporas nosotras
recomendamos continuar el estudio con un proceso de validación frente a un
indicador biológico comercial. De igual manera se recomendamos el uso de
tratamientos con lisozimas, centrifugación y lavados con buffer salino con el
fin de optimizar el proceso de recuperación de esporas.
Es importante que se continúe con la realización de pruebas suficientes que
confirmen estadísticamente la eficiencia del proceso de desinfección con
hipoclorito de sodio frente a la concentración determinada en este estudio
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN IDEAL DE ESPORAS DE Bacillus stearothermophilus
COMO INDICADOR BIOLÓGICO PARA EL CONTROL DE LOS PROCESOS DE
ESTERILIZACIÓN
ANGELA MARÍA ZARAMA ORTÍZLILIANA ELISA ROSERO TORRES
DRA. ALBA ALICIA TRESPALACIOS RANGELDirectora
Determinar el tiempo requerido para la producción del 80% de Determinar el tiempo requerido para la producción del 80% de esporas de esporas de Bacillus stearothermophilus.Bacillus stearothermophilus.
Estandarizar la concentración adecuada de esporas de Estandarizar la concentración adecuada de esporas de Bacillus Bacillus stearothermophilusstearothermophilus para evaluar los procesos de esterilización a para evaluar los procesos de esterilización a vapor, calor seco y desinfección con hipoclorito de sodio.vapor, calor seco y desinfección con hipoclorito de sodio.
Determinar la concentración ideal de esporas de Bacillus stearothermophilus como indicador biológico para el control de procesos de esterilización.
Frecuente contaminación de medios de cultivo y áreas Frecuente contaminación de medios de cultivo y áreas de trabajo con microorganismos ambientales.de trabajo con microorganismos ambientales.
Asegurar la completa eliminación de todas las formas Asegurar la completa eliminación de todas las formas de vida microbiana.de vida microbiana.
El indicador biológico desarrollado permitirá a la El indicador biológico desarrollado permitirá a la dependencia de monitoría controlar de manera más dependencia de monitoría controlar de manera más efectiva los procesos de esterilización.efectiva los procesos de esterilización.
Dado los altos costos de los indicadores biológicos Dado los altos costos de los indicadores biológicos comerciales, el indicador desarrollado permitirá evaluar comerciales, el indicador desarrollado permitirá evaluar el sistema de esterilización pero a un bajo costo.el sistema de esterilización pero a un bajo costo.
Mecanismo para la destrucción de microorganismos Mecanismo para la destrucción de microorganismos mediante agentes de naturaleza química mediante agentes de naturaleza química (desinfectantes).(desinfectantes).
El hipoclorito de sodio actúa sobre todas las bacterias El hipoclorito de sodio actúa sobre todas las bacterias incluyendo el bacilo tuberculoso, virus, hongos y incluyendo el bacilo tuberculoso, virus, hongos y esporas.esporas.
Completa destrucción de todas las formas de vida Completa destrucción de todas las formas de vida microbiana, contenidas en un objeto o sustancia.microbiana, contenidas en un objeto o sustancia.
Entre los procesos más empleados están el calor a vapor y Entre los procesos más empleados están el calor a vapor y calor secocalor seco
CONTROL MECÁNICO CONTROL QUIMICO
CONTROL BIOLOGICO
Bacilo Gram positivoBacilo Gram positivo Formador de esporas Formador de esporas TermorresistenteTermorresistente Habita en lugares donde existe formación de agua y Habita en lugares donde existe formación de agua y
yacimientos petrolerosyacimientos petroleros Carece de patogenicidad, pirogenicidad y toxicidadCarece de patogenicidad, pirogenicidad y toxicidad Empleado para monitorear los procesos de esterilizaciónEmpleado para monitorear los procesos de esterilización
Reconstituir 48 h-65 C Repique a agar BHI
Coloración de Gram
Catalasa
RECUPERACIÓN DE LA CEPA
COLORACIÓN DE GRAM E IDENTIFICACIÓN BIOQUIMICA
SIM TSI Fen Urea RM VP Glu Lac Sac Mal
PRODUCCIÓN DE ESPORAS
Coloración de Wayson
Repique a 15 cajas agar BHI
PREPARACIÓN PATRÓN DE MAC FARLAND
FABRICACIÓN DEL INDICADOR BIOLÓGICO
0.5 cm x 3 cm
37ºC0.5-10
0.5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
CONTROLES DE VIABILIDAD
1 µl
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
65ºC por 48 h 30-300 colonias
Stock
ENSAYOS EN AUTOCLAVE
Ciclo material limpio20 Lb 121ºC 20 min
Ciclo material sucio35 Lb 135ºC 15 min
65ºC por 48 h BHI
ENSAYOS EN HORNO
220ºC por 2 horas
65ºC por 48 h BHI
ENSAYOS CON HIPOCLORITO DE SODIO
0.52% 1 min
2.5% 1 min
BHI 65ºC por 48 h
ANÁLISIS ESTADÍSTICO
La proporción de pruebas de esterilidad con ausencia total de crecimiento de Bacillus stearothermophilus ATCC 7953 es del 95%.
Bacillus stearothermophilus Bacillus stearothermophilus es considerado un indicador es considerado un indicador
biológico ideal para el monitoreo de los procesos de biológico ideal para el monitoreo de los procesos de esterilización.esterilización. World Health Organization (2003), Fallis World Health Organization (2003), Fallis (1998), Parra et al. (1999). (1998), Parra et al. (1999).
Se obtuvo el 87% del cultivo en fase esporulada a los tres Se obtuvo el 87% del cultivo en fase esporulada a los tres días. Otrosdías. Otros cultivos duraban alrededor de siete días en cultivos duraban alrededor de siete días en producir un porcentaje mayor al 80%. Zmidzinska et al. producir un porcentaje mayor al 80%. Zmidzinska et al. (2004) y Kralovic (2000). (2004) y Kralovic (2000).
En los controles de viabilidad hubo una recuperación del 50% En los controles de viabilidad hubo una recuperación del 50% de esporas presentes en la tira de papel filtro ya que node esporas presentes en la tira de papel filtro ya que no se se empleó un tratamiento con lisozimas, centrifugación y empleó un tratamiento con lisozimas, centrifugación y lavados repetidos. Zmidzinska et al. (2004).lavados repetidos. Zmidzinska et al. (2004).
La concentración ideal de esporas para el control de la La concentración ideal de esporas para el control de la esterilización a vapor y calor seco es de 11.3x10esterilización a vapor y calor seco es de 11.3x1088 UFC/ml. UFC/ml. DDiferentes niveles de inóculos afectan la resistencia de las iferentes niveles de inóculos afectan la resistencia de las esporas. Zmidzinska et al. (2004).esporas. Zmidzinska et al. (2004).
La concentración ideal de esporas requirió una menor La concentración ideal de esporas requirió una menor
temperatura y tiempo en el autoclave que en el horno para temperatura y tiempo en el autoclave que en el horno para eliminar un 95% de esporas. Leliminar un 95% de esporas. Las moléculas de agua son as moléculas de agua son capaces de desplazar a los puentes de hidrógeno rompiéndose capaces de desplazar a los puentes de hidrógeno rompiéndose más fácilmente que con el calor seco. Spicher y Peters más fácilmente que con el calor seco. Spicher y Peters (1997). (1997).
El desinfectante tiene un extenso espectro de actividad El desinfectante tiene un extenso espectro de actividad (bactericida, virucida, esporicida) según la concentración de (bactericida, virucida, esporicida) según la concentración de uso. uso. Manual de Limpieza, Desinfección y Esterilización de la Universidad Autónoma de Barcelona (2004).
La concentración ideal de esporas de La concentración ideal de esporas de B. stearothermophilusB. stearothermophilusATCC 7953 establecida en este estudio para el control de ATCC 7953 establecida en este estudio para el control de los procesos de esterilización como calor seco y calor a vapor los procesos de esterilización como calor seco y calor a vapor fue de 11.3x10fue de 11.3x1088 UFC/ml. UFC/ml.
Se obtuvo el 87% del cultivo de Se obtuvo el 87% del cultivo de B. stearothermophilusB. stearothermophilus en en fase esporulada a los tres días después de recuperada la fase esporulada a los tres días después de recuperada la cepa.cepa.
Las esporas de Las esporas de B. stearothermophilusB. stearothermophilus son buenas indicadoras son buenas indicadoras de los procesos de esterilización porque cumplen con las de los procesos de esterilización porque cumplen con las características de termoresistencia y no patogenicidad para características de termoresistencia y no patogenicidad para el ser humano.el ser humano.
La concentración ideal de esporas requirió una menor La concentración ideal de esporas requirió una menor temperatura y tiempo en el autoclave que en el horno para temperatura y tiempo en el autoclave que en el horno para eliminar el 95% de esporas.eliminar el 95% de esporas.
Se observó que la concentración de Hipoclorito de sodio al Se observó que la concentración de Hipoclorito de sodio al 2.5% fue más efectiva que la de 0.52% por eliminar una 2.5% fue más efectiva que la de 0.52% por eliminar una mayor carga microbiana.mayor carga microbiana.
Se recomienda continuar el estudio para un proceso de Se recomienda continuar el estudio para un proceso de validación frente a un indicador biológico comercial.validación frente a un indicador biológico comercial.
Se recomienda el uso de tratamiento con lisozimas, Se recomienda el uso de tratamiento con lisozimas, centrifugación y lavados con buffer salino con el fin de centrifugación y lavados con buffer salino con el fin de optimizar el proceso de recuperación de esporas.optimizar el proceso de recuperación de esporas.
Es importante continuar con la realización de pruebas Es importante continuar con la realización de pruebas suficientes que confirmen estadísticamente la eficiencia del suficientes que confirmen estadísticamente la eficiencia del proceso de desinfección con Hipoclorito de sodio frente a la proceso de desinfección con Hipoclorito de sodio frente a la concentración determinada en este estudio.concentración determinada en este estudio.
Es necesario aumentar la concentración de Hipoclorito de Es necesario aumentar la concentración de Hipoclorito de sodio cuando hayan accidentes de trabajo en el laboratorio.sodio cuando hayan accidentes de trabajo en el laboratorio.
Un agradecimiento especial a la Dra Alba Alicia Trespalacios, Dra Marcela Mercado, Dra Ofelia
Díez y a la Dependencia de Monitoría de la Facultad de Ciencias de la Pontificia Universidad