analisis mikrobiologi anfar2

ANALYSIS OF MICROBIOLOG

Y

SCOPE OF ANALYSIS

OBJECTIVES

SAMPLES

METHODS

OBJECTIVES SPECIES/STRAINS IDENTIFICATION

BIO-ACTIVITIES TEST

VIABLE PLATE COUNT

STERILITY TEST

BIOBURDANT TEST

POTENCY TEST

DETERMINATION OF ACTIVE SUBSTANCES

SAMPLES

FOODS

DRUGS

COSMETICS

CHEMICALS

OTHERS

METHODS

STANDARD METHODS

VALIDATED METHODS

IMPROVED METHODS

ACEPTABLE METHODS

STEPS OF ANALYSIS

PROVIDING EQUIPMENTS

MEDIA PREPARATION

STERILIZATION

STOCK CULTURES PREPARATION

SAMPLES/STANDARD PREPARATION

BIO-ASSAYS

DATA ANALYSIS

ANALYSIS REQUIREMENTS

• YOU HAVE TO MAKE SURE THAT YOU HAVE DONE EVERYTHING ASEPTICALLY

• CONTAMINATION OF UNACCEPTABLE MICROORGANISMS SHOULD BE AVOIDED

• ALWAYS USE CONTROL (POS. AND NEG.)

• PLEASE BE CAREFUL, ESPECIALLY FOR PERFORMING PATHOGENIC MICROORGANISMS

PENGUJIAN MIKROBIOLOGI

• LAB. KLINIK (KEDOKTERAN, KESEHATAN)

• INDUSTRI OBAT, MAKANAN/MINUMAN (QC)

• INDUSTRI KOSMETIKA

• INDUSTRI ALAT KESEHATAN

• LAB. HEWAN (BALAI KARANTINA)

• BALAI PEMERIKSAAN OBAT DAN MAKANAN

DILAKUKAN OLEH:

KENDALA PENGUJIAN

• STAF PENGUJI

• SARANA LABORATORIUM

• METODE ANALISIS

• PENGADAAN LAB.

• PENGEMBANGAN LAB.

SOP

(PROSEDUR OPERASIONAL BAKU PENGUJIAN)

DISEBABKAN OLEH:

HAMBATAN

DIATASI DENGAN:

PROSEDUR OPERASIONAL BAKU PENGUJIAN

• FI EDISI III (1979)

• FI EDISI IV (1995)

• USP XXVI (2000)

• BP (2000)

• KODEKS MAKANAN INDONESIA (2000)

• KODEKS KOSMETIKA INDONESIA (1980)

• MANUAL OF FOOD QUALITY CONTROL-FAO (1979)

• PUSTAKA LAIN YANG MENUNJANG

DISUSUN BERDASARKAN KETENTUAN :

JENIS PENGUJIANJENIS PENGUJIAN

TERGANTUNG:

JENIS SAMPEL (OBAT, MAKANAN, KOSMETIKA, OBAT TRADISIONAL)

TUJUAN PENGUJIAN (KONTROL KUALITAS, PENENTUAN KADAR,

REFERENSIREFERENSI1. FARMAKOPE INDONESIA ED III, 1979, DEP.KES.

2. FARMAKOPE INDONESIA ED IV, 1995, DEP.KES.

3. KIRSOP, B.E. AND A. DOYLE (1991), MAINTENANCE OF MICROORGANISMS AND CULTURED CELLS

4. BATAS CEMARAN MIKROBA DAN BATAS MAKSIMUM RESIDU DALAM MAKANAN ASAL HEWAN, STANDAR NASIONAL INDONESIA (SNI) 01-6366-2000

5. KAVANAGH,F. (1972), ANALYTICAL MICROBIOLOGY

6. DANIEL, I.C.W. ET AL. (1979), FERMENTATION AND ENZYME TECHNOLOGY

7. USP 26 2003

8. HORWITZ, W. (2000), OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS OF AOAC INTERNETIONAL ED. 17.

MAPING CONCEPT

-SPESIFIK

-NONSPESIFIK

-BAKTERI

-JAMUR

KARAKTERISASI/ IDENTIFIKASI

ANALISIS MIKROBIOLOGI

UJI BATAS CEMARAN

UJI POTENSI DAN RASIO

POTENSI A.B

UJI EFEKTIVITAS

ANTIMIKROBA

UJI STERILITAS

AIR, TANAH, UDARA, ALAT,

PERSONIL

- TPC, AEROBIC PLATE COUNT, ALT

- MPN

ALAT, BAHAN BAKU, MEDIA,

SEDIAAN

-DIFUSI AGAR

-TURBIDIMETRI

POLA UJI STATISTIK

JENIS, SPEKTRUM

RESISTENSI DAN

SENSITIVITAS

SUMBER KESALAHAN

KONSENTRASI

HAMBATAN MINIMUM

(KHM)

OBAT, MAKANAN, BAHAN ALAM, HASIL FERMENTASI

ANALISIS SIFAT

MELAKUKAN/MEMILIH

MENCARI SUMBER

KUANTITASI

MEMPERHATIKAN SUBSTANSI ANALISIS

MEMPERHATIKAN SUBSTANSI ANALISIS

MEMERLUKAN PENGERTIAN

MENGGUNAKAN METODE

MENGHASILKAN DATA

ANALISIS DATAHARUS MEMPERHATIKAN

MELIPUTI

KOMPONEN KOMPONEN ANALISISANALISIS SAMPEL/ANALIT/SPESIMENSAMPEL/ANALIT/SPESIMEN

STANDAR/BAKU/PEMBANDINGSTANDAR/BAKU/PEMBANDING MIKROBA UJI/ INOKULUM MIKROBA UJI/ INOKULUM MEDIA KULTURMEDIA KULTUR LARUTAN DAPARLARUTAN DAPAR PELARUTPELARUT LARUTAN PENGENCERLARUTAN PENGENCER METODE ANALISIS YANG METODE ANALISIS YANG

BAKUBAKU

• BAHAN BAKU

• SEDIAAN OBAT

• MAKANAN

• MINUMAN

• SEDIAAN BIOLOGIS

MODEREN

TRADISIONAL

ANTIBIOTIKA MIKROBA UJI ATCC

AMPISILIN Micrococcus luteus 9341

GENTAMISIN Staphylococcus epidermidis

12228

KLORTETRASIKLIN Staphylococcus aureus 29737

KLORAMFENIKOL Escherichia coli 10536

NEOMISIN Klebsiella pneumoniae 10031

DIHIDROSTREPTOMISIN

Bacillus subtilis 6633

UNTUK PENETAPAN POTENSI ANTIBIOTIKA

FASILITAS UJIFASILITAS UJI

CLEAN ROOMS CLEAN ROOMS

CLEAN ZONESCLEAN ZONES

ISOLATORISOLATOR

TEKNIK ASEPTIK

DITERAPKAN SELAMA: PENANGANAN SAMPEL

PENYIAPAN SAMPEL

PELAKSANAAN UJI

TUJUAN: MENJAGA KEMURNIAN KULTUR

MENGURANGI KONTAMINASI

MENJAMIN KEAMANAN PERSONEL

TAHAPAN ANALISISTAHAPAN ANALISIS

PENYIAPAN SPESIMEN UJI TEKNIK SAMPLING !

PENYIAPAN STANDAR/PEMBANDING

PENYIAPAN INOKULUM/ MIKROBA UJI

UJI STERILITAS MEDIA KONTROL

UJI FERTILITAS KONTROL

SEBELUM UJI STERILITAS

•YAKINKAN BAHWA BAKTERIOSTATIK DAN FUNGISTATIK DALAM SAMPEL TIDAK MEMPENGARUHI HASIL ANALISIS

•PROSEDUR UJI SESUAI DENGAN SAMPEL

•GUNAKAN MEDIA ALTERNATIF

•TAMBAHKAN INAKTIVATOR/NEUTRALIZER

•LAKUKAN UJI EFEKTIVITAS ANTIMIKROBA SEBAGAI PRESERVATIF MENGGUNAKAN ENCERAN MIKROBA UJI SAMPAI DIPEROLEH JUMLAH MIKROBA < 100 CFU

UNTUK UJI STERILITAS

INKUBASI DILAKUKAN MINIMAL PADA DUA MACAM SUHU

LAMA INKUBASI DITUNGGU SAMPAI 14 HARI

GUNAKAN INDIKATOR UNTUK KONTROL STERILITAS

KEY WORDS

UJIPOTENSI

ANTIBIOTIKA

UJI POTENSI ANTIBIOTIKA

UJI• SYARAT UJI

STERILITAS, TEKNIK ASEPTIK, KONTROL, PEMBANDING/BAKU/STANDAR, MIKROBA

•METODE UJI

DIFUSI ATAU CARA TABUNG

• FASILITAS UJI

PENCADANG: ring, sumur, cakram

• ANALISIS HASIL

UJI BIOMETRI (FARMAKOPE IND. IV, 1995)

POTENSI

DAYA/KEMAMPUAN ANTIBIOTIKA/ANALIT MENGHAMBAT

PERTUMBUHAN/MEMBUNUH MIKROBA UJI

•DIAMETER ZONA JERNIH•INTENSITAS KEKERUHAN

DINYATAKAN SEBAGAI

ANTIBIOTIKA

SUATU SENYAWA YANG DIHASILKAN OLEH MIKROORGANISME, YANG DALAM JUMLAH

KECIL DAPAT MENGHAMBAT PERTUMBUHAN ATAU MEMBUNUH MIKROORGANISME LAIN

• MEKENISME KERJA• JENIS ANTIBIOTIKA

PEKA/SENSITIF TERHADAP PERUBAHAN GRADIENT KONSENTRASI

Kurva pertumbuhan mikro-organisme

Alur fermentasi penisilin dari P. chrysogenum

Kultur persediaan B. Subtilis Media

Pertumbuhan

Pengamatan Zona

Diagram alur Uji potensi antibiotika (F1 Ed IV, 1995)

Inkubasi

SUMBER KESALAHAN ANALISISMIKROBA SBG.

MAHLUK HIDUPPERLAKUAN

PRA-ANALISISASIMETRIS

SISTEM PENGUJIAN

VARIASI SISTEM HAYATI:

• KONDISI PERCOBAAN (SUHU INKUBASI, pH MEDIA)

• POLA PERCOBAAN• INOKULASI

• ISOLASI• PEMISAHAN• PEMURNIAN• PENIMBANGAN• PENGENCERAN

• KOMPONEN LAIN• HASIL DEGRADASI• PERBEDAAN NO.

BATCH MEDIA, BAHAN BAKU

• METODE TIDAK SESUAI

VARIASI POTENSI DALAM SUATU SERI ENCERAN

SAMPEL

KESALAHAN RAWU

KESALAHAN SISTEMATIK

BIAS/KESALAHAN NON-RAWU

• JUMLAH SAMPEL >> • POLA UJI HAYATI :

BIOMETRI• SERAGAMKAN

KONDISI PERCOBAAN

GUNAKAN PEMBANDING

SPESIFIK, TERGANTUNG

SUMBER KESALAHAN

INTERPRETASI HASIL UJIINTERPRETASI HASIL UJI

APABILA HASIL UJI STERILITAS MENUNJUKKAN TIDAK ADA PERTUMBUHAN MIKROBA, MAKA UJI STERILITAS CLEAN ROOMS DAN CLEAN ZONE PERLU DILAKUKAN.

APABILA HASIL UJI STERILITAS MENUNJUKKAN ADANYA PERTUMBUHAN MIKROBA, MAKA TIDAK PERLU DILAKUKAN UJI STERILITAS CLEAN ROOMS DAN CLEAN ZONE

APABILA PERTUMBUHAN TSB. DISEBABKAN OLEH KESALAHAN TEKNIK ASEPTIK ATAU BAHAN YANG DIGUNAKAN, HASIL UJI TIDAK VALID DAN HARUS DIULANG.

INTERPRETASI HASIL UJI(LANJUTAN)

INTERPRETASI HASIL UJI(LANJUTAN)

• JIKA PADA INTERVAL WAKTU TERTENTU ATAU AKHIR INKUBASI PERTUMBUHAN NEGATIF, MAKA BAHAN UJI DINYATAKAN MEMENUHI SYARAT

•JIKA PERTUMBUHAN MIKROBA TERAMATI, MAKA PERLU DILAKUKAN PENGAMATAN TAHAP KEDUA DENGAN MENAIKKAN JUMLAH SPESIMEN MINIMUM DUA KALI TAHAP SEBELUMNYA

FAKTOR-FAKTOR YANG MENDUKUNG HASIL ANALISIS MIKROBIOLOGI

1. PENYIAPAN ALAT-ALAT2. PEMILIHAN DAN PREPARASI MEDIA3. PRINSIP TEKNIK ASEPTIK4. STERILISASI (ALAT, BAHAN DAN

MEDIA)5. PREPARASI LEMPENG6. KULTIVASI MIKROBA 7. TEKNIK MENUANG MEDIA8. TEKNIK MENGGESEK9. PENANAMAN BIAKAN MIKROBA

PADA AGAR MIRING DAN MEDIA CAIR

10. INKUBASI