Analisi di tossine algali tramite cromatografia liquida/spettrometria di massa e-mail: [email protected]Sara Bogialli , Antonio Di Corcia Università di Roma,“La Sapienza” Dipartimento di Chimica Piazza Aldo Moro, 5 00185 Roma I CIANOBATTERI POTENZIALMENTE TOSSICI: IMPLICAZIONI SANITARIE E GESTIONE DEL RISCHIO Dipartimento Ambiente e connessa Prevenzione Primaria Roma, 15 novembre 2007
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Analisi di tossine algali tramite cromatografia liquida ...old.iss.it/binary/baaq/cont/Metodi chimici_LCMS_Bogialli.119702768… · Sviluppo di metodi basati su LC/MS tandem per l’analisi
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Analisi di tossine algali tramitecromatografia liquida/spettrometria di massa
MCTESSU2088 Sm (Mn, 2x1) 3: MRM of 6 Channels ES+ TIC
4,36e4
MCTESSU2088 Sm (Mn, 2x1) 2: MRM of 9 Channels ES+ TIC
1,71e3
MCTESSU2088 Sm (Mn, 2x1) 1: MRM of 5 Channels ES+ Sum
1,12e3
MCTESSU2088 Sm (Mn, 2x1) 1: MRM of 5 Channels ES+ 512,5 > 134,8
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Dem-MC-RR
NODULARINA (SURROGATO)
IS
pozzo 5 campionato a dicembre 2006. Il campione risulta contaminato da dem-MC-RR (~ 4 ng/L).
QC ESTRAZIONE
QC DETECTOR
25
1 g
5 g
ESTRAZIONE DA CAMPIONI DI PESCE: MSPD
FORNOGC
POMPA HPLC
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COLONNA C-18FASI MOBILI
H20 10 mM HCOOHACN 10 mM HCOOH
ACQUISIZIONE IN MODALITA’MRM (Multi Reaction Monitoring),
IONOZZAZIONE POSITIVA
ESTRAZIONE DA CAMPIONI DI PESCE: MSPD
27
0
10
20
30
40
50
60
70
80
ANA MC-RR NOD MC-YR MC-LR MC-LA MC-LW
RE
CO
VE
RY
(%
)
60°C 80°C 100°C
ESTRAZIONE CON MSPD + HOT WATER
Condizioni di estrazione:4 mL H2O 10 mM HCl 80°C
3.863 (4)51 (4)MC-LW
3.172 (9)50 (8)MC-LA
4.071 (9)49 (7)MC-LR
3.976 (9)51 (8)MC-YR
1.680 (5)45 (8)NOD
1.662 (6)41 (3)MC -RR
0.574 (5)38 (10)ANA-a
LOQ, ng/gH2O (pH 2)H2OComposto
Applicabile a 4 diversi tipi di pesce di lago (persico, carassio, muggine e trota)
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Omogenizzazione del campione
Estr. con solventi organici
e centrif.
Purificazione degli estratti ⇒⇒⇒⇒ SPE
Evap. e concentr. degli estratti
Ridissoluzione degli estratti
Iniezione nel sistema LC/MS
ANALISI DI CONFERMA TESSUTI:TEMPI
Preparazione del campione (MSPD)
Estrazione con acqua (HWE)
Iniezione diretta e analisi LC/MS
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Tutti i bianchi presentano un composto incognitocon lo stesso ione molecolare, stesso pattern di
frammentazione e tempo di ritenzione vicino a quelloall’anatossina-a.
Falso positivo dell’anatossina-a
COMPOSTO INCOGNITO FENILALANINA
ANA-a IN CAMPIONI BIOLOGICI
30
O
NH2
OH
CONFRONTO ANA-a E Phe
52.8%27%10.5%9.7%165.234Ana-a
13.4%50%34.4%2.2%165.191Phe
166 >>>> 149166 >>>> 131166 >>>> 107166 >>>>91
Transizioni, (m/z) e abbondanze relativeMassa esatta,
(m/z)Composto
CH3
O
NH
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ANA-a NEL PESCE
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CONCLUSIONI
•Sviluppo di un metodo specifico e sensibile per la determinazione di MCs a livelli di pochi ppt nelle acque
•Sviluppo di un metodo specifico e rapido per la determinazione di MCs e ANA-a a livelli di pochi ppb in 4 diversi tipi di pesce
•Iniezione diretta di CYL e ANA-a con LOQ di 300 ppt e 50 pptnelle acque
•Possibilità di determinare MCs di cui non si possiedono gli standard
•Monitoraggio del lago di Albano e Vico: si evidenza la presenza di 4 varianti di MCs e CYL, con concentrazioni totali superiori al
limite di attenzione per MC-LR
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RINGRAZIAMENTI
1. Bogialli, S. et al. Environ. Sci. Technol., 2006, 40, 29172. Bogialli, S. et al. J. Chromatogr A,. 2006, 1122, 1803. Bogialli, S. et al. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 6586