AANNEEMMIIAASS NNOORRMMOOCC ÍÍ TTIICCAASS · Anemias hemolíticas AANNEEMMIIAASS NNOORRMMOOCC ÍÍ TTIICCAASS A. hemol íticas intracorpusculares, métodos de estudio: MEMBRANOPATIAS

Anemias hemolíticas 

ANEMIAS NORMOC ANEMIAS NORMOCÍ Í TICAS TICAS 

A. hemolíticas intracorpusculares, métodos de estudio: MEMBRANOPATIAS: esferocitosis y eliptocitosis hereditaria ENZIMOPATIAS: G6PD y PK HEMOGLOBINOPATIAS: talasemias y hemoglobinopatías estructurales 

(anemia falciforme) A. hemolíticas extracorpusculares, métodos de estudio: 

A.  H. ALOINMUNITARIA A.  H. del RECIÉN NACIDO A.  H. AUTOINMUNE A.  H. AUTOMEDICAMENTOSA 

Anemias por aplasia medular

CICLO VITAL DE ERITROCITO

SMF

Hb+haptoglobulina (plasma)

G. Hemo y Globina

Bilirrubina+albúmina (plasma)

Anemias hemolíticas 

•  Hemólisis intravascular: Hb plasma 

ü  Hemoglobinemia ü  Hemoglobinuria ü ↓ haptoglobina ü ↑ LDH 

ANEMIAS NORMOC ANEMIAS NORMOCÍ Í TICAS TICAS 

•  Hemólisis extravascular: BiliRB plasma 

ü  Bilirrubinemia ü  Esplenomegalia ü ↓ haptoglobina ü ↑ LDH 

•  Mec. Disminución vida media: Intracorpusculares ü  MEMBRANOPATIAS 

ü  ENZIMOPATIAS 

ü  HEMOGLOBINOPATIAS: 

Talasemias 

Estructurales 

•  Mec. Disminución vida media: Extracorpusculares ü  INMUNITARIAS 

ü  NO INMUNITARIAS

1. Pruebas para determinar la fragilidad eritrocitaria A) ROE o FOE 

B) Prueba lisis en glicerol acidificado (PLGA) 

Valor normal > 1800 sg (30min) 

Esferocitosis hereditaria < 1800 sg 

2. Prueba de autohemólisis a 37ºC Capacidad de GR para mantener su integridad in vitro tras 24 h (ATP) 

3. Prueba de la estabilidad térmica eritrocitaria 

La membrana resiste aumentos Tª hasta 49ºC. Después → poiquilocitos 

Piropoiquilocitosis congénita (PPC)  Tª corporal 

A. hemolíticas intracorpusculares: membranopatías 

Pruebas indirectas, no se identifican espectrina y ankirina

G6PD: glucosa 6 fosfato deshidrogenasa 

PK: piruvato kinasa 

Métodos cualitativos: prueba de la mancha fluorescente 

Sangre total + sustratos de la G6PD  gota sobre filtro y 

observación a luz UV (340 nm) la aparición o no de fluorescencia 

Métodos cuantitativos Se usan diferentes kits comerciales 

A. hemolíticas intracorpusculares: enzimopatías

Hemoglobinopatías estructurales: Hb S (anemia de células falciformes) 

•Hb S transmisión autosómica dominante. Hb S funcional hasta desoxigenación. 

•Hb S se demuestra por: 

vElectroforesis de Hb en acetato de celulosa (pH = 8,6) 

vTécnica de falciformación: sangre en medio pobre en oxígeno → drepano­ 

citos → A. falciforme 

Método falciformación 

Gota sangre diluida en un portaobjetos. Cubreobjetos cuyos bordes son sellados. Después incubación 37 ºC 1 h  eritrocitos falciformes 

A. hemolíticas intracorpusculares: hemoglobinopatías 

Hb S: 0% Hb C: 0% 

Hb A 1 : 95­98% Hb A 2 : 2­3% Hb F: 0,8­2%

Talasemias: β­Talasemias 

Talasemia menor 

A. hemolíticas intracorpusculares: hemoglobinopatías 

Talasemia mayor (A. de Cooley)

⇓β HBA 2

Técnicas para el estudio de las talasemias 1. Electroforesis de Hb 2. Cuantificación de la fracción Hb A 2 3. Cuantificación de la Hb fetal (Hb F) 4. Estudio de la estabilidad molecular de la Hb 5. Otros métodos 

1. Electroforesis de hemoglobinas 

Acetato celulosa o geles (gel poliacrilamida, pH = 8,6) 

2. Cuantificación de la Hb A 2 Cualitativo o cuantitativo. Cortar tira y medir D.O. Valores normales = 2­3% 

Hb A, Hb A 2 , Hb F 

Hb S, Hb E, Hb J (mutantes) 

A. hemolíticas intracorpusculares: hemoglobinopatías

3. Hb F: Método de resistencia a la elución ácida sobre porta Resistencia de la Hb F a la elución cuando un frotis (GR) se somete a pH ácido → potente coloración roja 

Hb F (recién nacido): 50­80% Hb F (< 6 meses): 8% Hb F (> 6 meses): 1­2% 

(Para Hb A 2 y Hb F existen también métodos automáticos) 

4. Estudio de la estabilidad molecular de la hemoglobina a) Método de estabilidad térmica b) Método de estabilidad química 

Solución de Hb  Incuba 2 h 50ºC  Cuerpos Heinz 

Isopropanol 

5. Otros métodos a) Azul cresilo brillante (ACB)  Cuerpos Heinz 

(Hb H) = Hb β4 b) Test de falciformación para Hb S 

A. hemolíticas intracorpusculares: hemoglobinopatías

Estudio de las anemias hemolíticas inmunitarias Prueba de Coombs indirecta  o antiglobulina indirecta (PAI) ­ Especificidad de un Ac incompleto que al unirse al Ag in vitro, NO es capaz de aglutinarlo. Se necesita antiglobulina humana para conseguir la aglutinación y comprobar la existencia del Ac. 

USO: Detectar Ac anti­D libres en el plasma de embarazada Rh (–) con riesgo sensibilización previa. O la presencia de Ag Du (no aglutina con Ac anti­D) 

Prueba de Coombs directa (PAD) ­ Reconoce Ac unidos a la membrana de los GR 

­ Antiglobulina + eritrocitos recubiertos de Ac. Aglutinación → hemólisis in vivo 

1. Anemia hemolítica autoinmune 

2. Anemia hemolítica recién nacido 

A. hemolíticas extracorpusculares 

A.  H. ALOINMUNITARIA A.  H. del RECIÉN NACIDO A.  H. AUTOINMUNE A.  H. AUTOMEDICAMENTOSA 

Destrucción del GR por fijación de Ac a su membrana. 

Ac­Ag è aloAc y aloAg

Test de Coombs 

A. hemolíticas extracorpusculares 

Ac (Ig) unidos a GR muestra 

Antiinmunoglobunlina humana  AGLUTINACIÓN 

AntiIg humana 

Ac (Ig) libres 

Hematies del paciente 

Reacción Ag­Ac en membrana  AGLUTINACIÓN

Anemia por aplasia medular 

Anemia Arregenerativa: RETICULOPENIA 

­Es normocítica y normocrómica ­Aparece hipersideremia, leucopenia y trombocitopenia 

Diagnóstico: aspirado medular y/o biopsia 

Tratamiento: No es maligna transfusiones constantes a veces transplante de M.O.