2. Yeny Acosta. Laboratorio en autoinmunidad

Laboratorio en Autoinmunidad

Yeny Acosta-Ampudia, MSc, PhD

Centro de Estudio de Enfermedades AutoinmunesUniversidad del Rosario

Auto-anticuerpos

Diagnóstico PronósticoSeguimiento

Síntomas clínicos

Papel del laboratorio en Reumatología

Evolución histórica de los métodos de Inmunodiagnóstico

1948Células LE

1957Inmunofluorescencia

1995Métodos Monoplex

automatizadosEIA, FIA, LIA, RIA

2003Métodos Multiplex

line-blot

2006Métodos Multiplex

Microarray

2009Inmunofluorescencia

indirecta automatizada

Clasificación de métodos para detección y medición de autoanticuerpos

Primera generación-monoplexInmunofidusión dobleFijación de complementoInmunofluorescencia indirectaAglutinación pasivaRadio-inmunoprecipitaciónWestern blot

Segunda y tercera generación-monoplexRadioinmunoensayosEnsayo inmunoenzimáticoInmunoblot InmunodotQuimioluminiscenciaEnsayo fluorimétrico

MultiplexMicroperlas

Tozzoli et al. Clin Chem Lab Med 2013; 51(1): 129-138

Razones de revolución tecnológica en el campo de la autoinmunidad

• Incremento en el conocimiento de la fisiopatología y la función de diagnóstico de autoanticuerpos

• Perfeccionamiento de los procedimientos para la identificación y la purificación de autoantígenos

• Determinación cuantitativa de autoanticuerpos por los sistemas analíticos automatizados

• Desarrollo de tecnologías proteómicas

Arrays de autoantígenos para detección de autoanticuerpos

Membrana

Nucleares

Citoplasmáticos

Mitocondrias

Fosfolípidos

Apoyo Formato Sistema de detección Autoanticuerpos Rendimiento

(test/hora)Portaobjetos Microspot Quimioluminiscencia 115 ~10.000

Portaobjetos Microspot Fluorescencia 196 ~10.000



Microplaca Microspot Colorimetría 15 ND

Membrana Nitrocelulosa Microspot Colorimetría 30 ND

Membrana Nitrocelulosa Line-blot Colorimetría 15 ~50



Membrana Nitrocelulosa Nanodot Quimioluminiscencia 10 ND

Zhu H. et al. Genomics Proteomics Bioinformatics. 2015. 13:210-218

NALIA- nanoensayo luminométrico múltiple

<20 IU/ml de anti-dsDNARo (98%), La (93%), Sm (97%), RNP (97%)

Tecnología de microarray espectral

LuminexCitometría de Flujo

¿Epítopes conformacionales?

Sistema Fabricante Perfiles de autoanticuerpos

FIDIS BMD, francia ANA (9), Artritis Reumatoide (2), Vasculitis (2), Enfermedad Celiaca (3), Tiroideos(2)

Quanta plex Inova, España ANA (8), Vasculitis (2), Enfermedad Celiaca (3)

Athena Multi-Lyte Zeus, Estados Unidos ANA (10), Vasculitis (3), Enfermedad Celiaca (2), Tiroideos (2)

Bioplex 2200 Bio-Rad, Estados Unidos ANA (13), ANCA (3), CCP (1), APS (2), Enfermedad Celiaca (3)

Rouquette A-M. et al. Am J Clinical Pathol 2003; 120:676-81Giovanella L. et al. Head Neck 2011Shovman O. et al. Autoimmunity 2005; 38:105-9

Ventajas sistemas Multiplex

Plataformas multiplex comerciales

Plataforma automatizada de pruebas IFI basada en células y ensayos multiplex-AKLIDES

Annika Willitzki et al. Clinical and Developmental Immunology. 2012

Tecnología para detectar nuevos autoantígenos

PhIP Seq

William H & Lawrence Steinman. Nat Biot 2001. 29, 500-502

Anticuerpos Antinucleares

Armonización y estandarización de pruebas de autoinmunidad

• Anticuerpos frente a antígenos intracelulares

• Dilución de partida

• Elección del titulo: 1:40, 1:80

• Algoritmo diagnóstico

Es esencial que este fuerte impulso innovador se traduzca en la práctica clínica de manera coordinada para evitar confusiones y el riesgo de

errores potencialmente perjudiciales para el paciente.

Gracias

2. Yeny Acosta. Laboratorio en autoinmunidad

Health & Medicine