На правах рукописи ШЕВЦОВ АРТЕМ РАШИДОВИЧ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕОБРАЗОВАНИЯ В СЕЛЕЗЕНКЕ КРЫСЫ ПРИ СИНДРОМЕ ДЛИТЕЛЬНОГО СДАВЛЕНИЯ И В УСЛОВИЯХ КОРРЕКЦИИ БИОФЛАВОНОИДАМИ МАНЖЕТКИ ОБЫКНОВЕННОЙ 14.00.15 - патологическая анатомия 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук 1721 Новосибирск^- 2008
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
На правах рукописи
ШЕВЦОВ
АРТЕМ РАШИДОВИЧ
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕОБРАЗОВАНИЯ В СЕЛЕЗЕНКЕ КРЫСЫ ПРИ СИНДРОМЕ ДЛИТЕЛЬНОГО СДАВЛЕНИЯ И В УСЛОВИЯХ КОРРЕКЦИИ
БИОФЛАВОНОИДАМИ МАНЖЕТКИ ОБЫКНОВЕННОЙ
14.00.15 - патологическая анатомия 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
1 7 2 1
Новосибирск^- 2008
Работа выполнена в ГОУ ВПО Новосибирском
государственном медицинском университете Росздрава
на кафедре топографической анатомии и оперативной хирургии
Научные руководители:
Доктор медицинских наук, профессор Головнев Владимир Андреевич,
Доктор медицинских наук, профессор Голубева Ирина Александровна.
Официальные оппоненты:
Доктор медицинских наук, профессор Надеев Александр Петрович
Кандидат медицинских наук Потапенко Мария Михайловна
Ведущая организация: ГОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет
Росздрава, г. Барнаул.
Защита состоится « » 2008 г. в часов на заседании Диссертационного совета Д 208.062.05 при ГОУ ВПО Новосибирском государственном
медицинском университете Росздрава, 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52.
С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Новосибирского государственного
медицинского университета Росздрава по адресу: 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52.
Автореферат разослан « » 2008 г.
Ученый секретарь диссертационного совета,
доктор медицинских наук, профессор А.В. Волков
АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Углубленное теоретическое исследование проблемы патогенеза синдрома длительного
сдавления и патологических состояний, связанных с ним, всегда имело чрезвычайную
важность и остроту, а особенно, в последние годы. Природные стихийные бедствия,
технологические катастрофы, вооруженные конфликты унесли десятки тысяч человеческих
жизней. Эти события (Арзамас, Башкирия, Свердловск, Армения, Япония, США, Сахалин,
Югославия, Ливан, Юго-Восточная Азия) еще раз показали, что медицинская помощь
пострадавшим в катастрофах существенно отличается от традиционной (Шиманко И.И. и др.,
1993; Молочный В.П., 2001, Better O.S., 1997). На основании анализа многочисленных данных
у 40-68% наблюдаемых при этом больных диагностируется синдром длительного сдавления
(СДС), (Савицкий Г.Г. и др., 1989; Ery D.E., 1992).
Синдром длительного сдавления, относящийся к одному из видов травматической
болезни, характеризируется как специфическими, так и универсальными реакциями
повреждающего влияния токсинов на селезенку и стимулирует процессы восстановления
лимфоидной ткани.
Практическая и теоретическая значимость. Полученные результаты могут быть
использованы для лучшего понимания общих закономерностей восстановления структурно-
клеточного состояния лимфоидных органов в условиях токсемии и токсиколимфии в
различные сроки посткомпрессионного периода при СДС. Сравнительный анализ
патоморфологических изменений в структурно-клеточном составе селезенки в период
восстановления при СДС способствует объективизации прогнозирования состояния
дренажной и детоксикационной функций как отдельного лимфоидного органа, так и
лимфатической системы в целом.
Значение данного исследования для практической медицины заключается в том, что на
основании углубленного количественного исследования структурно-клеточного состояния
селезенки в посткомпрессионный период экспериментального СДС, показана возможность
применения растительных полифенольных соединений из манжетки обыкновенной в качестве
адаптогена и лимфопротектора.
В результате проведенных исследований показана возможность направленного
восстановления структуры и функции селезенки с помощью растительных полифенольных
соединений из манжетки обыкновенной, что способствует формированию научного
направления - восстановительной функциональной морфологии лимфоидной ткани, а также к
практическому управлению функциями лимфатической системы и внедрению полученных
данных в клинике экстремальных состояний.
Положения, выносимые на защиту:
1.В условиях экспериментального синдрома длительного сдавления в селезенке у крыс
вьивляются преобразования структуры и клеточного состава. К концу эксперимента
морфофункциональное состояние селезенки полностью не восстанавливается.
2.Восстановление морфологии селезенки при синдроме длительного сдавления при
направленном использовании адаптогена растительного происхождения с лимфотропным
действием в виде комплекса полифенольных соединений из манжетки обыкновенной
начинается раньше и происходит быстрее по сравнению с группой животных с СДС без
коррекции.
- 5 -
Апробация результатов исследования Основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседаниях: Международной
конференции «Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на
внутреннюю среду организма» (Чолпон-Ата, 2005, 2007), Международной конференции
«Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии»
(Новосибирск, 2004, 2006); Ежегодном конкурсе-конференции студентов и молодых ученых
«Авиценна», (Новосибирск, 2004, 2005, 2006, 2007); проблемной комиссии «Морфология»
53.06, Новосибирск, 2007.
Публикации: По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, одна в журнале, рекомендуемом ВАК для публикации результатов диссертационных исследований.
Внедрение результатов исследования
Основные положения диссертационной работы внедрены в учебную программу
лекций и практических занятий на кафедрах патологической анатомии, анатомии человека,
топографической анатомии с оперативной хирургией и патофизиологии Новосибирского
государственного медицинского университета.
Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 165 страницах компьютерного набора на русском языке и
содержит 83 фотографии и 4 таблицы. Состоит из введения, обзора литературы, главы
материалы и методы исследования, четырех глав собственных исследований, главы
литературы, включающего 272 отечественных и иностранных источников.
Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован
лично автором.
Содержание работы
Материалы и методы исследования
Только в условиях эксперимента можно попытаться воспроизвести то или иное заболевание и,
следовательно, приблизиться к пониманию путей его возникновения и развития в
действительности.
В качестве экспериментальных животных были выбраны крысы-самцы линии Wist
массой тела 180-200 г. в количестве 130, в возрасте 5-6 месяцев. Выбор животных крыс
самцов диктовался необходимостью получения стабильных результатов, исключая влияни
циклических изменений, характерных для организма самок (Сахаров П.П. и др., 1952
- 6 -
Западнюк И.П., 1974; Rogers P.A., Gannon B.J., 1981). Крысы имели свободный доступ к корму и воде.
Все животные были разбиты на 3 группы: первая группа - интактные животные (10 крыс); вторая группа - животные с СДС без лечения (60 крыс); третья группа - животные с СДС, получавшие препарат полифенолов манжетки обыкновенной (60 крыс); (см. таблицу 1).
Таблица 1
Количество животных и взятых у них ткани селезенки для морфометрических и цитологических исследований при синдроме длительного сдавления
Сроки исследования
интактные
1 сутки
3 суток
7 суток
14 суток
Всего:
Итого :
Контроль
10
-
-
-
-10
115(15)*
Селезенка при СДС без коррекции
-
10(5)*
12(3)*
13(2)*
13(2)*
48(12)*
Селезенка при СДС и коррекции полифенолами манжетки обыкновенной
-
13(2)*
14(1)*
15(0)*
15(0)*
57(3)*
Примечание : ( )* - число погибших животных в эксперименте Площадь сдавливающих конечностей около 5 см2. Тиски накладывались на 4 часа на
левую тазовую конечность параллельно пупартовой связке. Закручивание тисков
производилось до упора с последующим подкручиванием в течение 15-20 минут (Кулагин
Для изучения морфоцитоархитектоники срезы окрашивали гематоксилином Майера и
эозином, азур-2-эозином и заключали их в канадский бальзам. Указанные выше методы
описаны в руководствах Б.Ромейса (1954), В.Г.Елисеева и др. (1972), Р.Лилли (1969),
А.Ф.Киселевой и др. (1983), R.L. Ridgway (1986).
- 8 -
С помощью стандартной окулярной сетки (256 точек) методом точечного счета при 32-кратном увеличении в микроскопе МБС - 10 определяли общую площадь срезов и площади всех структурных компонентов селезенки в 10 полях зрения. Каждая структурно-функциональная зона учитывалась отдельно (Афанасьев Ю.И., 1987).
Морфометрию площадей структурных компонентов органов проводили по методу Г.Г. Автандилова (1980, 1990, 2002). При этом выполняли основное требование: на структуры, занимающие наименьшую площадь, приходилось не менее одной точки (Христолюбова Н.Б. и др., 1974; Ташке К., 1980; Непомнящих Л.М. и др., 1984).
При исследовании селезенки определяли площадь белой пульпы (периартериальной муфты, лимфоидных фолликулов (центров размножения и мантии), маргинальной зоны), красной пульпы (общая площадь синусов и тяжей), центральной артерии, капсулы.
Цитоархитектонику (малые, средние лимфоциты и бластные формы клеток,
ретикулярные клетки, плазмоциты зрелые и незрелые, клетки Мотта, тучные клетки,
нейтрофильные и эозинофильные гранулоциты, эритроциты, макрофаги и митотически
делящиеся клетки, погибшие клетки) изучали в структурах селезенки (центре размножения,
периартериальной муфте, маргинальной зоне, тяжах и синуса красной пульпы) на
гистологических срезах с помощью морфометрической вставки, представляющей собой
закрытую квадратную тестовую систему. При увеличении в 1000 раз (объектив 100 -
масляная иммерсия, окуляр 10) подсчитывали абсолютное количество разных видов клеток
на стандартной площади 3200 мкм .
В процессе дифференцировки и анализа клеточных форм возникла необходимость
вывести показатель, или индекс репаративной (физиологической) регенерации, как
отношение количества митотически делящихся клеток к количеству погибших клеток и
обозначили его как Мит/Пог (Овсянко Я.У., 1999).
Для всех морфометрических данных вычисляли абсолютные и относительные
показатели. При заборе материала, его фиксации, проводке и заливке в блоки, а также при
получении срезов все манипуляции в максимальной степени стандартизировали.
Во всех опытах для каждого из этапов экспериментов использовались 10-15 животных.
От каждого животного получали соответственно 10-15 блоков образцов селезенки. Всего в
эксперименте бьшо использовано 130 животных, 15 из которых погибли при моделировании
СДС и его коррекции препаратом манжетки обыкновенной, в основном в ранние его сроки
(табл. 1).
Подготовку исследуемого материала, планирования и проведения морфометрических
исследований выполняли в соответствии, со ставшими теперь общепринятыми, принципами и
методами, опубликованными в ряде отечественных и зарубежных руководств (Катинас Г.С.;
- 9 -
Полонский Ю.З., 1970, Христолюбова Н.Б., 1974; Шилов А.Г., 1974; Автандилов Г.Г. и др.,
Статистическая обработка материала осуществлялась пакетом прикладных программ
Excel 7,0 на PC Pentium-100 с использованием средней арифметической, ошибки средней,
критерия Стьюдента, корреляционного анализа (Гончаров A.M., 1996; Додж М., Кайнет К.,
1996). При этом достоверными результаты считались при Р<0,05.
Результаты собственных исследований и их обсуждение
Исходя из патогенеза СДС и определяющей в нем роли ишемии и токсемии, тяжесть
посттравматического процесса во многом определяется состоянием лимфатической системы.
Ухудшение общего состояния пострадавшего при СДС связано с освобождением длительно
ишемизированной конечности от компрессии. В момент декомпрессии токсические вещества
поступают в лимфоток и далее с лимфой проникают в лимфатические узлы, которым
принадлежит защитная и барьерная функции. При их дисфункции токсиканты прорываются в
кровь, вызывая значительные патологические изменения в организме. Ю.И.Бородин (2000,
2007) справедливо полагает, что при многих патологических состояниях в лимфу раньше, чем
в кровь, поступают как экзогенные, так и эндогенные токсины. При этом при токсемии и
токсиколимфии ухудшаются условия гемомикроциркуляции, проявляющиеся нарушениями
микроциркуляторного гомеостаза.
В норме паренхима селезенки крысы представлена белой и красной пульпой в
соотношении 1:1,87 с сильной отрицательной корреляцией (г = - 0,82). На долю
тимусзависимой периартериальной муфты приходится более 10% общей площади среза
органа. Имеются немногочисленные лимфоидные фолликулы. Капсула и центральная артерия
хорошо выражены. Цитоархитектоника центров размножения лимфоидных фолликулов белой
пульпы селезенки в контроле свидетельствует о том, что преобладающим клеточным
элементом являются средние и малые лимфоциты. Содержание макрофагов и ретикулярных
клеток примерно равно.
Проведенное исследование показало, что синдром длительного сдавления оказывает
существенное влияние на морфофункциональное состояние селезенки. Через 1 сутки после
создания экспериментального синдрома длительного сдавления летальность
экспериментальных животных составила 3,85 %.
Максимальное среди всех сроков данной серии эксперимента увеличение в 1,5 раза по
сравнению контролем площади среза селезенки и преобразования микроанатомической
организации органа на 1 сутки СДС связано, по-видимому, с развитием отека селезенки
вследствие возникающего эндотоксикоза после снятия тисков. На 1 сутки эксперимента у - Ю -
животных в селезенке происходит перераспределение процентного соотношения в сторону
увеличения доли красной пульпы и снижения доли белой пульпы в 4,43 раза. Показатель
соотношения красной и белой пульпы в эксперименте больше контрольных цифр в 6,3 раза,
коэффициент корреляции между ними равен -0,84 (сильная отрицательная зависимость).
Исследование цитоархитектоники селезенки на данном сроке эксперимента выявило
однонаправленность клеточных изменений. Во всех изученных зонах органа с разной
степенью достоверности снижается доля малых лимфоцитов. Характерной особенностью
морфологических изменений в преобладающем числе структурно-функциональных зон
селезенки на 1 сутки периода декомпрессии было увеличение относительного количества
погибших клеток, макрофагов, ретикулярных клеток, появление или увеличение числа
эозинофильных и нейтрофильных гранулоцитов.
Уменьшение индекса соотношения клеток с фигурами митозов и погибших клеток в
центрах размножения лимфоидных фолликулов белой пульпы в 1,8 раза и тяжах красной
пульпы селезенки в 7,5 раз на 1 сутки СДС по сравнению с контролем свидетельствует о
снижении процессов репаративной регенерации в органе. Увеличение процента содержания
зрелых и незрелых плазматических клеток в различных структурных компартментах
селезенки можно расценить как морфологический маркер появления антигена в паренхиме
органа.
Через 3 суток после создания экспериментального синдрома длительного сдавления
летальность среди крыс составила 2,34%. Анализ выявленных микроанатомических
преобразований на 3 сутки СДС показал наличие некой волнообразности в изменении
относительных площадей структурных компонентов селезенки на данном сроке
эксперимента. Площадь среза селезенки по сравнению с контролем оставалась увеличенной в
1,16 раза, но уменьшилась в 1,29 раза по сравнению с предыдущим сроком эксперимента. При
сравнении с полученными результатами исследования органа на 1 сутки СДС сохраняется та
же направленность морфологических преобразований, но она менее значима по степени
выраженности. Выявленное максимальное среди всех сроков СДС увеличение относительной
площади зоны центральной артерии в 2,1 раза по сравнению с контролем возможно за счет
раскрытия «резервных» сосудов. Полученные морфологические данные не противоречат
предложенной ранее классификации А.В.Ефремова (1992): (1 сутки - лимфостаз, 3 сутки -
лимфостаз с развитием коллатералей, 7 сутки - начало разрешения лимфостаза, 14 сутки -
разрешение лимфостаза), основанной на морфологических преобразованиях в регионарных
подколенных лимфоузлах при СДС и прижизненной непрямой лимфорентгенографии.
Характерной чертой морфологических преобразований для структурно-
функциональных зон селезенки на 3 сутки СДС в отношении контроля является уменьшение
-11-
доли клеток лимфоидного ряда на фоне увеличения количества макрофагов, плазматических
клеток (особенно незрелых), ретикулярных и погибших клеток, нейтрофильных и
эозинофильных гранулоцитов. Доказано, что именно лимфоциты следует рассматривать как
центральное звено специфических иммунных реакций, как предшественников
антителообразующих клеток и как носителей иммунологической памяти (Baer W. et al., 2001).
Показатель индекса репаративной регенерации отражает преобразования клеточного состава
и еще больше понижен по отношению к норме (в 3,2 раза). Это является, по нашему мнению,
морфологическим маркером сниженных адаптационных возможностей селезенки на данном
сроке эксперимента в условиях развивающегося эндотоксикоза. Выявленная структурно-
клеточная перестройка отражает реакцию селезенки на поступление циркулирующих
реагентов, попавших в кровоток после снятия тисков у экспериментального животного на 3
сутки развития синдрома длительного сдавления.
Через 7 суток после создания экспериментального синдрома длительного сдавления
летальность среди крыс составила 1,54 %. Площадь среза селезенки по сравнению с
контролем оставалась увеличенной в 1,4 раза, и увеличилась в 1,2 раза по сравнению с
предыдущим сроком эксперимента. Выявленные изменения микроанатомии селезенки на 7
сутки эксперимента мы рассматриваем как период наибольших проявлений компенсаторно-
адаптационных возможностей органа. На данном сроке эксперимента с одной стороны
выявлена однонаправленность цитологических преобразований с 1 сутками СДС, но с
большей степенью выраженности. С другой стороны, мозаичность преобразований
цитоархитектоники среди структурно-функциональных зон селезенки подтверждает наше
предположение о максимальном воздействии на орган циркулирующих антигенов и токсинов
на данном сроке эксперимента, поступающих в кровоток после снятия тисков у
экспериментальных животных. Повсеместное увеличение числа плазматических клеток
именно с 7 суток периода декомпрессии, по-видимому, можно объяснить с точки зрения
классификации Ефремова А.В. (1992), где он обозначен как "начало разрешения лимфостаза".
Увеличение количества плазматических клеток в данный период декомпрессии СДС можно
связать с усиленным поступлением в селезенку с кровью и лимфой аутоантител, токсинов и
продуктов распада тканей. Индекс репаративной регенерации остается пониженным с разной
степенью достоверности (аналогично предыдущим срокам эксперимента), что отражает
сохранение сниженных компенсаторных возможностей селезенки в ответ на развивающийся
эндотоксикоз к 7 суткам периода декомпрессии. По нашему мнению, совокупность
выявленных морфологических преобразований структуры и клеточного состава селезенки,
минимальное количество клеток лимфоидного ряда, а особенно малых лимфоцитов, на фоне
достоверных высоких значений числа погибших клеток, макрофагов и плазматических клеток
-12-
является проявлением снижения компенсаторных возможностей селезенки на пик агрессивного антигенного воздействия, приходящегося именно на 7 сутки эксперимента. Можно согласиться с А.А.Пузыревым и др. (1997), что совокупность компенсаторно-приспособительных реакций определяется гетерохронностью развивающихся изменений на всех иерархических уровнях биологической системы, которая определяется индивидуальной чувствительностью животных и асинхронностью развития первичных реакций на уровне клеток и органелл. Последнее приводит к мозаичности строения клеток в составе ткани: наряду с деструктивно измененными клетками выявляются элементы, находящиеся на различных этапах функциональной активности и внутриклеточной репарации.
Через 14 суток после создания экспериментального синдрома длительного сдавления летальность среди крыс составила 1,54 %. Преобразования в микроанатомической картине селезенки характеризуются перестройкой паренхиматозно-стромальных отношений в сторону увеличения доли белой пульпы над красной пульпой на фоне сохраненной повышенной площади среза органа. Площадь среза селезенки по сравнению с контролем оставалась увеличенной в 1,3 раза, но уменьшилась в 1,2 раза по сравнению с предыдущим сроком эксперимента. Таким образом, сохранилась волнообразность в изменении данного параметра органа. В отличие от предыдущих сроков периода декомпрессии по сравнению с контролем доля красной пульпы уменьшилась в 1,4 раза, а белой - увеличилась в 1,5 раза. При этом коэффициент корреляции между содержанием белой и красной пульпы показал наличие сильной отрицательной зависимости (г = - 0,81).
Полученная картина цитологических преобразований на фоне повышающегося значения индекса репаративной регенерации, по нашему мнению, косвенно может судить о снижении поступления антигенного материала в орган к 14 суткам после снятия тисков либо активизации компенсаторных возможностей селезенки. В общем, преобразования клеточного состава структурно-функциональных зон селезенки крыс на этот срок СДС можно охарактеризовать как период начала некой "стабилизации" морфофункционального состояния органа, которое к концу эксперимента полностью не восстанавливается.
По нашему мнению адаптация тканей как эволюционно закрепленное явление, осуществляется постоянно в живом организме на всех структурных уровнях (Георгиевский А.Б., 1989). Независимо от природы воздействия в процессе адаптации наблюдаются общие закономерности развивающихся структурных изменений и определяющих направление, глубину и обратимость компенсаторно-приспособительных реакций. Они проявляются в первичности ответа на уровне внутриклеточных мембран, гетерохронии структурных и количественных изменений органелл и клеток, усилении процессов физиологической регенерации. Различные реакции клеток в составе одной ткани на неблагоприятный фактор
- 1 3 -
определяются степенью их дифференцировки и функциональным состоянием (Ефремов А.А. и др., 2005, Поздняков О.Б. 2006).
Через 1 сутки после снятия тисков с конечности крысы в группе использования полифенолов манжетки обыкновенной летальность составила 1,54 %, что ниже показателя аналогичного срока СДС без коррекции в 2,5 раза. Площадь среза селезенки была достоверно выше уровня контроля в 1,12 раза. Структурные преобразования селезенки на 1 сутки СДС в условиях применения полифенолов манжетки обыкновенной отличаются меньшей степенью выраженности морфологических изменений по сравнению с аналогичным периодом декомпрессии без введения препарата, и в количественном выражении более приближены к уровню контроля. Отсутствие значительных преобразований в структурно-паренхиматозных взаимоотношениях селезенки при введении манжетки на 1 сутки СДС свидетельствуют о лимфопротекторном действии полифенолов манжетки обыкновенной. В пользу этого действия препарата, по нашему мнению, говорит и меньшая степень дилятации кровеносных сосудов. По-видимому, расширение капиллярного русла селезенки является неспецифической реакцией на стрессовое воздействие в комплексе неспецифических морфологических изменений, возникающих в тканях и органах при экстремальных воздействиях, что согласуется с данными В.И.Янушевского, О.В.Качалка (1992), Манвелидзе Р.А.(2005), Самсоновой Е.Н. (2005).
Изучение клеточного состава структурно-функциональных зон селезенки на 1 сутки периода декомпрессии при введении препаратов манжетки в сравнении с контролем выявило общую направленность изменений: снижение содержании общего относительного числа клеток лимфоидного ряда и малых лимфоцитов в частности, индекса репаративной регенерации на фоне увеличения процента содержания плазматических клеток (особенно зрелых плазмоцитов), макрофагов и гибнущих клеток. Известно, что при защитных реакциях организма количество макрофагов значительно увеличивается (Новиков В.Д., Проваторов Г.В., 2003 Поздняков О.Б. 2006, Никитенко Л.Л., Колесников СИ. 2007). Макрофагальная реакция автоматична и филогенетически очень стара и при действии разнообразных факторов создаются условия автономности функций этих клеток. Представляя собой неспецифический фактор защиты, макрофаги послужили той основой, на которой в эволюции возник и развивался специфический иммунитет. Уменьшение численности лимфоидных клеток в исследованных зонах паренхимы селезенки на 1 сутки СДС при введении полифенолов манжетки может быть связано с усилением гибели клеток и снижением регенераторной активности. Уменьшение процента содержания малых лимфоцитов в тимусзависимой периартериальной муфте возможно связано со снижением процессов рециркуляции и миграции Т-лимфоцитов из тимуса. Увеличение количества плазматических клеток и, в
-14-
особенности зрелых плазмоцитов, можно охарактеризовать как морфологический маркер активизации гуморального звена иммунитета организма в ответ на усиленное поступление в селезенку антигенов и других продуктов распада тканей при СДС.
Таким образом, можно предположить, что введение препаратов манжетки обыкновенной на 1 сутки периода декомпрессии способствует морфологическим преобразованиям в селезенке, характеризующим его лимфопротекторное действие, так как выявлены структурно-клеточные преобразования, имеющиеся и в группе без лечения, но с меньшей степенью их проявлений. Известно, что под влиянием полифенолов манжетки обыкновенной в крови достоверно снижается количество тромбоцитов, увеличивается пул лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов и отмечается снижение содержания палочкоядерных нейтрофилов (Бородин Ю.И. и др., 2007).
Через 3 суток периода декомпрессии в группе использования полифенолов манжетки обыкновенной летальность составила 0,72 %, что ниже аналогичного показателя 3-х суток посткомпрессионного синдрома без коррекции в 3,25 раза. Была выявлена максимально увеличенными площадь среза селезенки в данной серии эксперимента по сравнению с контролем в 1,33 раза и объем микроциркуляторного русла селезенки, за счет увеличения общего числа площади зоны центральной артерии белой пульпы органа. По-видимому, можно предположить об активизации процесса ангиогенеза на введение манжетки, выявленного и другими исследователями (Горчаков В.Н., 1990; Головнев В.А., 1992; Обухова Л.А., 1998, Папантонопуло А.Н., 2001, Бородин Ю.И. и др., 2007). Соотношение красной и белой пульпы в селезенке не отличалось от уровня контроля. Эти структурные изменения отражают, по нашему мнению, лимфотропное действие полифенольньк соединений из манжетки обыкновенной. Выявленная умеренная дилятация микроциркуляторного русла, по-видимому, адекватна уровню повышенной функциональной активности органа.
Изменения клеточного состава структурно-функциональных зон селезенки на 3 сутки периода декомпрессии и при его коррекции свидетельствуют о том, что полифенольные соединения из манжетки обыкновенной оказывают стимулирующее влияние на пролиферативные процессы в органе. С этой позиции, по нашему мнению, возможно объяснить и усиление гибели лимфоидных клеток. Для поддержания гомеостаза в любой ткани необходимо равновесие между процессами пролиферации и гибели клеток.
Изменения структурно-паренхиматозных отношений селезенки на 7 сутки после снятия тисков и при коррекции препаратом манжетки не подвержены выявленной ранее волнообразности преобразований ее морфологии без использования препарата. С другой стороны, так же как в серии эксперимента без использования полифенолов на 14 сутки СДС, именно на 7 сутки СДС выявляются морфологические изменения, имеющие наибольшую
- 1 5 -
степень проявления. Выявлен сохраненный эндотелиальный слой сосудов, умеренно разрыхленный интерстициальный слой, умеренный периваскулярный отек в сосудах артериального звена. Летальность среди животных данной группы эксперимента отсутствовала.
Сравнительный анализ клеточных преобразований в структурно-функциональных зонах селезенки крыс на 7 сутки с применением коррекции СДС и без нее показал, что после применения полифенольных соединений к 7 суткам эксперимента усиливаются процессы бласттрансформации и пролиферации в белой пульпе селезенки. Выявлено увеличение относительного содержания нейтрофилов. По современным представлениям, нейтрофилы не только участвуют в фагоцитозе, но и выделяют целый ряд веществ, влияющих на пролиферацию элементов кроветворения, стимулируют регенерацию тканей, повышают проницаемость сосудов. Давно известно об участии нейтрофилов в реализации иммунных реакций организма (Rytter M. et al., 1985). Таким образом, становится более ясной роль этих клеток при синдроме длительного сдавления. Активны процессы гибели клеток и их реутилизация макрофагами. Морфологически это проявлялось увеличением количества лимфоидных клеток с пикнотическими ядрами и числа макрофагов, содержащих фагоцитированные остатки их ядер. В литературе известно, что малые лимфоциты выполняют трофическую функцию (Меерсон Ф.З., 1995). При распаде лимфоцитов реутилизируются такие важные для организма вещества, как нуклеиновые кислоты и продукты белкового обмена, не только стимулируются лимфоцитопоэз, рост и регенерация тканей, но и создаются возможности передачи морфогенетической иммунной информации (Никитенко Л.Л., Колесников С.И.2007).
На 14 сутки СДС в условиях использования полифенолов манжетки летальность среди животных данной экспериментальной группы отсутствует. Направленность структурных преобразований аналогична 3 суткам посткомпрессионного синдрома с использованием полифенолов манжетки, но отличается большей степенью проявлений. Изменения структурно-паренхиматозных взаимоотношений в селезенке крысы на 14 сутки периода декомпрессии в условиях его коррекции препаратом полифенолов манжетки обыкновенной коррелируют с преобразованиями цитоархитектоники исследованных зон органа. К концу эксперимента не происходит полного восстановления структурно-функционального состояния органа, хотя такие предпосылки уже имеются. Например, количество малых лимфоцитов в периартериальной муфте и доля иммунобластов в центрах размножения фолликулов белой пульпы селезенки приближается к исходному значению. По выявленным результатам видно, что клеточный состав достаточно активно реагирует на проводящуюся коррекцию. Наши результаты не противоречат уже имеющимся в литературе данным, где
- 1 6 -
предлагается в качестве критерия завершенности восстановления структуры использовать показатели, которые в условиях хронического эксперимента восстанавливаются позже других (Александрова Л.И., 1995, Самсонова Е.Н. 2005). Так в клеточном составе предлагается учитывать помимо восстановления процентного соотношения лимфоцитов, возвращение к исходным значениям процента бластов. Изменения количественных соотношений клеток и доли бластов по мнению Г.В.Правоторова, В.Д.Новикова (1996) рассматривается как проявление реакции бластгрансформации в живом организме, которая служит предпосылкой развития иммуноморфологической пролиферативной реакции в лимфоидной ткани. Указанная пролиферативная реакция возникает не только при воздействии антигенных факторов и носит неспецифический характер.
Изменения клеточного состава свидетельствуют о том, что полифенольные соединения из манжетки обыкновенной стимулируют пролиферативные процессы в селезенке. Усиление процесса гибели лимфоидньгх клеток объясняется необходимостью поддержания равновесия между процессами пролиферации и гибели клеток для сохранения гомеостаза ткани. Анализируя клеточные преобразования зон селезенки к 14 суткам СДС мы пришли к заключению, что полифенолы манжетки обыкновенной обладают лимфопротекторным действием.
Таким образом, в результате проведенных исследований показаны существенные возможности направленного восстановления структуры и функции лимфоидного органа при синдроме длительного сдавления с помощью растительных полифенольных соединений из манжетки обыкновенной и, тем самым, сделан еще один шаг к дальнейшему познанию восстановительной функциональной морфологии лимфатического русла, а также к практическому управлению функциями лимфатической системы и внедрению полученных данных в клинике.
ВЫВОДЫ
1. В норме паренхима селезенки крысы представлена белой и красной пульпой в
соотношении 1 : 1,87, а при СДС этот показатель изменяется за счет увеличения доли красной
пульпы. Летальность при СДС без лечения выявлена во все сроки с убыванием к концу
эксперимента.
2. Морфологические преобразования в селезенке на 7 сутки периода декомпрессии
характеризуются минимальным числом малых лимфоцитов, пониженным значением индекса
репаративной регенерации при увеличенном содержании погибших клеток, макрофагов и
плазматических клеток среди всех сроков СДС.
- 1 7 -
3. К 14 суткам эксперимента доля белой пульпы преобладает над красной (увеличивается число лимфоидных узелков, площадь маргинальной зоны, периартериальной муфты). Увеличивается число делящихся клеток в 3,9 раза, значения индекса репаративной регенерации в 2 раза по сравнению с контролем.
4. На 7 сутки СДС в условиях применения манжетки обыкновенной летальность среди крыс отсутствует. Микроанатомические изменения селезенки приближаются к показателям контроля за счет всех структурных компонентов белой пульпы (лимфоидных узелков, периартериальной муфты, маргинальной зоны) Увеличивается число макрофагов, плазмоцитов, делящихся клеток и значения индекса репаративной регенерации.
5. Выявлено лимфотропное адаптогенное действие на селезенку полифенольных соединений из манжетки обыкновенной при синдроме длительного сдавления. К концу эксперимента (14 сутки СДС) количество малых лимфоцитов в периартериальной муфте и доля иммунобластов в центрах размножения фолликулов белой пульпы селезенки приближается к исходному значению, увеличивается доля периартериальной муфты, число делящихся клеток, значение индекса репаративной регенерации.
Практические рекомендации
В целях повышения объективизации диагностики патологических процессов в поврежденном организме при СДС необходим комплексный морфологический анализ лимфоидных органов - лимфоузлов, селезенки, являющихся одним из важных звеньев в патогенезе синдрома длительного сдавления.
При проведении лечения пострадавших с СДС наряду с традиционной терапией на ранних мстадиях его течения необходима дополнительная коррекция препаратами биофлавоноидами манжетки обыкновенной, которые способствуют снижению повреждающего влияния токсинов на селезенку и стимулирует процессы восстановления лимфоидной ткани.
- 1 8 -
Список работ, опубликованных по теме диссертации
I. Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Голубева И.А. Структурная организация селезенки при синдроме длительного сдавления / // Морфология и хирургия: сб. науч. тр. НГМА. -Новосибирск, 2003. -Вып. 4. -С.38.
2.Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Ефремов А.В., Голубева И.А. Характеристика структурно-клеточных изменений в селезенке при экспериментальном синдроме длительного сдавления // Медицина и образование в XXI веке: ежегод. науч.-практ. конф. с междунар. участием. -Новосибирск, 2004. -С.161-162.
3. Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Ефремов А.В., Голубева И.А. Особенности микроанатомических и цитологических преобразований в селезёнке при синдроме длительного сдавления / // Клинико-морфологические аспекты общепатологических процессов при социально-значимых заболеваниях: всерос. науч.-практ. конф., посвящ. памяти проф.Ю.Г. Целлариуса. - Новосибирск, 2004. - С.167-168
4. Шевцов А.Р. Селезёнка при экспериментальном синдроме длительного сдавления //Авиценна-2004: ежегод. конкурс-конф. студентов и молодых ученых. -Новосибирск, 2004. -С. 65.
5. Шевцов А.Р., Голубева И.А., Головнёв В.А. Влияние полифенолов манжетки обыкновенной на клеточный состав селезенки при экспериментальном синдроме длительного сдавления / // Морфология и хирургия: сб. науч. тр. НГМА.-Новосибирск, 2005. -Вып. 5. -С.85-87.
6. Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Ефремов А.В., Голубева И.А. Морфо-функциональные преобразования селезенки при синдроме длительного сдавления в эксперименте / // Медицина и образование в XXI веке: ежегодная науч.-практ. конф., посвящ. 70-летию НГМА. -Новосибирск, 2005. -С.411-412.
7. Голубева И.А., Головнёв В.А., Ефремов А.В., Шевцов А.Р. Структура селезенки при экспериментальном синдроме длительного сдавления и после фармакологической коррекции манжеткой обыкновенной / // Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма: материалы 7-го междунар. симп. и 8-ой Чуйской науч.-практ. конф. -Чолпон-Ата, 2005. -С. 60-62.
8. Шевцов А.Р. Морфология селезенки на разных этапах синдрома длительного сдавления и при использовании лимфотропного препарата // Авиценна-2006: ежегод. конкурс-конф. студентов и молодых ученых. -Новосибирск, 2006. -С. 88-89.
9. Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Голубева И.А. Морфология селезенки в норме, при моделировании синдрома длительного сдавления и в условиях применения полифенолов манжетки обыкновенной // Вестник НГУ. Серия: биология, клиническая медицина. 2006. -Т. 4, вып. 3. -С. 62-65.
10. Головнёв В.А., Голубева И.А., Шевцов А.Р. Цитоархитектоника селезёнки в условиях синдрома длительного сдавления и при коррекции // Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма: материалы 8-го междунар. симп. и 9-ой Чуйской науч.-практ. конф. -Чолпон-Ата - Бишкек. 2007. -С. 73-75.
II. Шевцов А.Р. Применение полифенолов манжетки обыкновенной при моделировании синдрома длительного сдавления. Авиценна-2007: ежегод. конкурс-конф. студентов и молодых ученых. -Новосибирск, 2007. -С. 89-90.
-19-
Корректор Тропина Любовь Михайловна
Подписано в печать 08.08.08. Формат 60х 84/16 Усл. печ. л. 1.0 Бумага офсетная.