This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Mycobacterium tuberculosis in lung, Ziehl-Neelsen acid fast stain
Ειδικές Ιστοχημικές Χρώσεις
Glycogen in Ewing's sarcoma, PAS stain
The t(14;19)(q32;q13)-positive small B-cell leukaemia
The t(14;19)(q32;q13)-positive small B-cell leukaemia
The t(14;19)(q32;q13)-positive small B-cell leukaemia
Fluorescence in situ hybridizationt(11;14)
Real-Time PCR
Real-Time PCR
Real-Time PCR
Advantages of Real-Time PCR
• No post-PCR manipulation is required. Thus, the results are available as soon as PCR is completed (i.e., within two hours) decreasing the turnaround time and additionally reducing the risk of PCR contamination.
• This methodology allows co-amplification and detection of a normalizer gene (housekeeping gene and/or positive internal control) in the same tube to obtain accurate quantitative measurements and to confirm the presence of amplifiable DNA in a test sample.
• Decreased variability, because the collection of the data is performed during the exponential phase of the PCR, thus the results are not influenced by limited reagents.
• As the TaqMan probe is complementary to the target, the assay is target specific.
• High sensitivity, 1 tumor cell in 100,000 normal cells can be detected.
• Μεθοδολογία ελέγχου ύπαρξης μεταλλάξεων στην κινάση Abl• Απομόνωση RNA από 10cc ηπαρινισμένου περιφερικού αίματος (Qiagen RNA blood)• Εκτίμηση ποιότητας/ποσότητας RNA (Agilent 2100 Bioanalyzer)• Ανάστροφη μεταγραφή 1 μg RNA προς cDNA• Εκτέλεση PCR αντίδρασης, με κατάλληλους εκκινητές, για τον πολλαπλασιασμό του υβριδικού γονιδίου
BCR/ABL.• 2μl από την πρώτη PCR χρησιμοποιούνται για την εκτέλεση 2ης PCR για τον πολλαπλασιασμό του ABL του
υβριδικού γονιδίου BCR/ABL, με κατάλληλους εκκινητές. (S. Branford et al, Blood, 2002;99 3472-3475)• BCR ABL
1η PCR• • 2η PCR (820bp)• Κλωνοποίηση PCR προιόντος σε ΤΑ vector• Διαμόλυνση E. Coli (TOP10F) και απομόνωση πλασμιδιακού DNA από 7 αποικίες• Ανάλυση αλληλουχίας βάσεων πλασμιδίων (Beckman-Coulter CEQ8000), με ανάγνωση και από τις δύο
κατευθύνσεις• Σύγκριση των αλληλουχιών βάσεων των πλασμιδίων με τη γενωμική αλληλουχία του γονιδίου ABL.• Με την τεχνική αυτή έχουμε ανίχνευση μεταλλάξεων στο γονίδιο ΑBL που εμπεριέχεται στο παθολογικό υβριδικό
γονίδιο BCR/ABL με ευαισθησία 14%.• ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑ • Aνιχνεύθηκε η μετάλλαξη Ε255Κ σε 4 από τις 7 αλληλουχίες που αναλύθηκαν.