PENETAPAN INHIBITORY ACTIVITY PEROKSIDASE DARI …eprints.undip.ac.id/52855/1/Cover.pdf · (Michaelis–Menten konstanta), V max ... Latar Belakang ... Grafik Michaelis-Menten pada
Post on 12-Jun-2019
219 Views
Preview:
Transcript
i
PENETAPAN INHIBITORY ACTIVITY PEROKSIDASE DARI EKSTRAK DAUN TOMAT OLEH
GULA D-PSIKOSA DAN L-PSIKOSA
SKRIPSI
Oleh
AKHMAD RIFQI CAHYO UTOMO
PROGRAM STUDI S-1 TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS PETERNAKAN DAN PERTANIAN
UNIVERSITAS DIPONEGORO SEMARANG
2 0 1 6
ii
ii
PENETAPAN INHIBITORY ACTIVITY PEROKSIDASE DARI EKSTRAK DAUN TOMAT OLEH
GULA D-PSIKOSA DAN L-PSIKOSA
Oleh
AKHMAD RIFQI CAHYO UTOMO
NIM : 23020112100012
Sebagai Salah Satu Syarat untuk Memperoleh Gelar Sarjana Teknologi Pertanian pada Program Studi S-1 Teknologi Pangan
Fakultas Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro
PROGRAM STUDI S-1 TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS PETERNAKAN DAN PERTANIAN
UNIVERSITAS DIPONEGORO SEMARANG
2016
v
v
RINGKASAN
AKHMAD RIFQI CAHYO UTOMO. 2302011210012. 2016. Penetapan Inhibitory Activity Peroksidase dari Ekstrak Daun Tomat oleh Gula D-psikosa dan L-psikosa. (Determination of Inhibitory Activity Peroxidase from Tomato Leaves Extract Against D-psicose and L-psicose). (Pembimbing: AHMAD N. AL-BAARRI dan ANANG M. LEGOWO).
Penelitian ini dilaksanakan Penelitian dilaksanakan pada bulan Mei 2015 – Desember 2015 di Laboratorium Kimia dan Gizi Pangan Fakultas Peternakan dan Pertanian dan Laboratorium Terpadu, Universitas Diponegoro, Semarang. Penelitian ini bertujuan untuk mengukur aktivitas inhibisi D-psikosa dan L-psikosa pada enzim peroksidase daun tomat dengan penentuan nilai Km, Vmax dan Ki. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun tomat (diambil sesaat sebelum proses pemanenan), H2O2 (Merck, Germany), 2,2’-azino-bis (3-ethylbenzthia-zoline-6-sulfonicacid)(ABTS)(AppliChem, Germany Lot no. 2X001714), DEAE-Sepharose (Sigma-Aldrich, USA, Lot no.MKBS5227V), Sodium Chloride (HIMEDIA, India), di-Sodium Hydrogen Phosphate (HIMEDIA, India), rare sugar D-psikosa dan L-psikosa (Kagawa Rare Sugar Research Center, Japan) dan bahan reagen lainnya yang sesuai dengan dipersyaratkan. Alat yang digunakan diantaranya timbangan analitik, kolom purifikasi, plate reader (Biochrom EZ Read 800 Plus Microplate Reader, United Kingdom), centrifuse tube, centrifuge, vortex, micropipet, refrigrator dan microtube. Metode penelitian yang dilaksanakan terdiri dari Ekstraksi Daun Tomat, Purifikasi Peroksidase Daun Tomat, Uji Profil Protein Elektroforesis Gel Poliakrilamida-Sodium Dodesil Sulfat (SDS PAGE), Uji Total Protein Bradford, Pengujian Aktivitas Enzim dengan Inhibitor D-psikosa dan L-psikosa, Perhitungan Kinetika Enzim dan Analisis Data. Hasil penelitian nilai Km, Vmax dan Ki pada inhibitor D-psikosa secara berturut-turut adalah 0,0184±0,00006, 9,267±0,942 dan 0,809±0,244 mM. Nilai Km, Vmax dan Ki pada inhibitor L-psikosa secara berturut-turut adalah 0,0177±0,0007, 9,82±1,2871 dan 0,499±0,313 mM. Berdasarkan hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa nilai Km D-psikosa lebih tinggi daripada L-psikosa sehingga lebih cepat mencapai Vmax atau kemampuan inhibisi lebih rendah dibandingkan L-psikosa. Nilai Ki D-psikosa lebih tinggi daripada L-psikosa sehingga D-psikosa lebih lemah menghambat aktivitas enzim. D-psikosa dan L-psikosa merupakan inhibitor non-kompetitif.
Kata Kunci : Daun Tomat, Peroksidase, Kinetika Inhibisi
vi
vi
KATA PENGANTAR
Daun tomat tidak banyak dimanfaatkan dan hanya menjadi limbah pasca
panen, namun berdasarkan beberapa penelitian, daun tomat mengadung enzim
peroksidase yang dapat dimanfaaatkan sebagai senyawa antimikroba. Aktivitas
kinetik enzim peroksidase terhadap inhibitor dapat diketahui dari nilai Km
(Michaelis–Menten konstanta), Vmax(kecepatan reaksi maksimum) dan
Ki(Konstanta Inhibisi). Data kinetik dari enzim peroksida dari berbagai macam
tanaman seperti lobak dan kedelai telah diketahui namun dari ekstrak daun tomat
sampai saat ini belum diketahui. Tujuan penelitan untuk mengukur aktivitas
inhibisi D-psikosa dan L-psikosa pada enzim peroksidase daun tomat dengan
penentuan nilai Km, Vmax dan Ki sebagai dasar kinetika enzim peroksidase daun
tomat. Manfaat yang diperoleh dari penelitian ini adalah untuk memberikan
informasi terkait data kinetik enzim daun tomat (Km, Vmax) dan nilai aktivitas
inhibisi (Ki) D-psikosa dan L-psikosa dari daun tomat sebagai landasan untuk
penelitian berikutnya tentang aplikasi enzim tersebut di bidang pangan.
Penulis menyampaikan ucapan terimakasih kepada Prof. Dr. Ir. Anang M.
Legowo, M.Sc., selaku Ketua Program Studi S-1 Teknologi Pangan, selaku dosen
pembimbing dan selaku dosen wali atas bimbingannya; Ahmad N. Al-Baarri
PhD., selaku Ketua Laboratorium Kimia dan Gizi Pangan dan dosen pembimbing
atas bimbingannya, saran, perhatian, kesabaran pemberian ilmu dan
pengarahannya sehingga dapat menyelesaikan skripsi dengan judul
“PENETAPAN INHIBITORY ACTIVITY PEROKSIDASE DARI EKSTRAK
DAUN TOMAT OLEH GULA D-PSIKOSA DAN L-PSIKOSA”
vii
vii
Penulis juga ingin mengucapkan rasa terimakasih yang sebesar-besarnya
kepada orang tua tercinta, Edy Suprapto dan Sri Yuli Purwanti serta adik saya
Ismah Dwi Cahyani atas doa, kasih sayang serta dukungannya yang sangat
memotivasi Penulis dalam menempuh masa perkuliahan serta proses penulisan
tugas akhir.
Penulis menyadari bahwa tugas akhir ini tidak akan terlaksana dengan baik
tanpa adanya bantuan, motivasi, dan doa dari berbagai pihak. Oleh karena itu,
Penulis juga ingin menyampaikan ucapan terimakasih kepada:
1. Prof. Dr. Ir. Mukh Arifin, M.Sc., Ph.D., selaku Dekan Fakultas
Peternakan dan Pertanian.
2. Dr. Ir. Nurwantoro, MS., Dr. Heni Rizqiati S.Pt., M.P., dan Prof.
Dr. Ir. V. Priyo Bintoro, M.Agr., selaku dosen penguji dan dosen
panitia.
3. Seluruh dosen dan staff akademik Fakultas Peternakan dan
Pertanian Universitas Diponegoro terutama Program Studi
Teknologi Pangan, Bapak Nurwantoro, Bapak Setya Budi, Bapak
Priyo, Bapak Yoyok, Ibu Etza, Ibu Santi, Ibu Heni, Bapak Hintono,
Bapak Bambang Dwiloka, Bapak Yoga, Bapak Masykuri, Mas
Indarto, Ibu Ninuk dan Mba Tari yang memberikan ilmu
pengetahuan, memotivasi, dan memperlancar proses penulisan
tugas akhir ini.
4. Sahabat-sahabat seperjuangan Penulis Tim Enzim Cornelius
Wahyu Candra Adi, Triutami, Adrian Rachmantyo, Fauzan
Lanang, Hanif Nur, Adhie Wijaya, Desy Ayuningtias, Cleopatra
viii
viii
Hendria, Dyah Nurul Oktaviani, Hanna Fauziat K., Rikyan Hanif
Sarya, Anugrah Tamam Basroni, Rahim Fajar Pangestu, Muthia
Cita Hapsari, Fathiyatul Islamiyah, Mba Ica, Mba Novia dan Mas
Nurul Yaqin yang selalu kompak demi terselesaikannya penelitian.
5. Sahabat-sahabat mahasiswa Teknologi Pangan 2012 yang selalu
memberikan dukungannya.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna sehingga
saran dan kritik yang bersifat membangun sangat diharapkan demi perbaikan di
masa mendatang. Semoga tugas akhir berupa skripsi ini bermanfaat bagi semua
pihak.
Semarang, Juni 2016
Penulis
ix
ix
DAFTAR ISI
Halaman
KATA PENGANTAR .......................................................................... vi
DAFTAR ISI ........................................................................................... ix
DAFTAR TABEL .................................................................................. xi
DAFTAR ILUSTRASI ......................................................................... xii
BAB I PENDAHULUAN ...................................................................... 1
1.1. Latar Belakang ......................................................................... 1
1.2. Tujuan dan Manfaat Penelitian ................................................ 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................... 5
2.1. Enzim Peroksidase ................................................................... 5
2.2. Daun Tomat ............................................................................. 6
2.3. D-psikosa dan L-psikosa .......................................................... 7
2.4. Kinetika Enzim ........................................................................ 10
BAB III MATERI DAN METODE ....................................................... 14
3.1. Materi ....................................................................................... 14
3.2. Metode ..................................................................................... 14
3.3. Analisis Data ............................................................................ 19
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................... 20
4.1. Ekstraksi dan Purifikasi Peroksidase Daun Tomat .................. 20
4.2. Jumlah Substrat yang terkonversi menjadi produk .................. 23
4.3. Kurva Michaelis-Menten Enzim Peroksidase Daun Tomat dengan Inhibitor Gula D-psikosa dan L-Psikosa ................... 24
4.4. Kurva Lineweaver-Burk plot D-psikosa dan L-psikosa .......... 27
x
x
BAB V SIMPULAN DAN SARAN ..................................................... 32
5.1. Simpulan ............................................................................... 32
5.2. Saran ...................................................................................... 32
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................... 33
RIWAYAT HIDUP .............................................................................. 36
xi
xi
DAFTAR TABEL
Nomor Halaman
1. Nilai Aktivitas Enzim pada Fraksi (7,8,9,10,37,38,39 dan 40) ... 21
2. Presentase Substrat H2O2 yang Terkonversi Menjadi Produk pada Peroksidase Daun Tomat dengan Inhibitor D-psikosa dan L-psikosa .................................................................................... 23
3. Data Kinetik Enzim Peroksidase Daun Tomat .......................... 27
4. Data Aktivitas Inhibisi D-psikosa dan L-psikosa pada Enzim Peroksidase Daun Tomat ........................................................... 31
xii
xii
DAFTAR ILUSTRASI
Nomor Halaman
1. Diagram Perumusan Masalah ..................................................... 4
2. Rumus bangun D-psikosa (Li et al., 2013) ................................... 9
3. Rumus bangun L-psikosa (Li et al., 2013) ................................. 10
4. Mekanisme inhibitor Competitive, Non-competitive dan Uncompetitive (Lin dan Lu, 1998) ............................................. 13
5. Grafik Michaelis-Menten pada Peroksidase Daun Tomat dengan
Inhibitor gula D-psikosa .............................................................. 25 6. Grafik Michaelis-Menten pada Peroksidase Daun Tomat dengan
Inhibitor gula L-psikosa .............................................................. 25 7. Kurva Lineweaver-Burk plot D-psikosa .................................... 28
8. Kurva Lineweaver-Burk plot L-psikosa ..................................... 28
9. Kurva Lineweaver-Burk plot D-psikosa .................................... 29
10. Kurva Lineweaver-Burk plot L-psikosa ..................................... 29
top related