Lampiran 1. Surat keterangan Hasil Determinasi Tanaman ... · e. Pembuatan seri konsentrasi dari larutan stok kuersetin 200 ppm 1. Membuat larutan stok kuersetin 2 ppm sebanyak 10

52

Lampiran 1. Surat keterangan Hasil Determinasi Tanaman Jeruk Bali Putih

(Citrus grandis)

53

Lampiran 1. Lanjutan...

54

Lampiran 1. Lanjutan...

55

Lampiran 2. Surat keterangan telah melakukan Penelitian di Laboratorium

Biologi Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang

56

Lampiran 3. Surat keterangan telah melakukan Penelitian di Laboratorium Kimia

Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang

57

Lampiran 4. Perhitungan Susut Pengeringan dan Randemen Ekstrak

a. Perhitungan susut pengeringan = Bobot awal- Bobot akhir X 100%

Bobot awal

Susut Pengeringan = 14000 gram – 2680 gram X 100%

14000 gram

Susut Pengeringan = 11320 gram X 100%

14000 gram

Susut Pengeringan = 80,86%

b. Perhitungan Rendemen Ekstrak

Rendemen Ekstrak = Bobot Ekstrak Kental X 100%

Bobot Simplisia Kering

Rendemen Ekstrak = 105 gram X 100%

300 gram

Rendemen Ekstrak = 35%

58

Lampiran 5. Perhitungan Larutan Stok dan Seri Konsentrasi

a. Data penimbangan DPPH

Keterangan Hasil Penimbangan

Berat botol timbang 15020,1 mg

Berat botol timbang + DPPH 15030,9 mg

Berat botol timbang + sisa 15021,1,1 mg

Berat DPPH 9,8 mg

b. Pembuatan larutan stok DPPH 0,1 mM sebanyak 250 mL (Mr DPPH =

394,32 g/mol)

Konsentrasi = Berat DPPH X 1000

Mr Vol. Pembuatan

Konsentrasi = 9,8 X 1000

394,32 250

Konsentrasi = 0,02485 X 4

Konsentrasi = 0,0994 mM ~ 0,1 mM

Sebanyak 9,8 mg DPPH dilarutkan dalam etanol p.a ad 250 mL dalam

labu takar

c. Pembuatan larutan stok kuersetin 200 ppm sebanyak 50 mL

Kuersetin 200 ppm = 0,2 gram / 1000 mL

= 0,02 gram/ 100 mL

= 20 mg/ 100 mL

= 10 mg/50 mL

Kuersetin sebanyak 10mg dilarutkan dalam etanol p.a ad 50 mL dalam

labu takar.

59

Lampiran 5. Lanjutan...

d. Penimbangan larutan stok kuersetin

Keterangan Hail Penimbangan

Berat kertas 336,1 mg

Berat kertas + kuersetin 346,3 mg

Berat kertas + sisa 336,2 mg

Berat kuersetin 10,1 mg

e. Pembuatan seri konsentrasi dari larutan stok kuersetin 200 ppm

1. Membuat larutan stok kuersetin 2 ppm sebanyak 10 mL

2 ppm = V1 x C1 = V2 x C2

= V1 x 200 ppm = 10 ml x 2 ppm

= V1 = 0,1 ml ~ 100 µl

Sebanyak 0,1 mL larutan stok kuersetin 200 ppm diencerkan dalam

etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.

2. Membuat larutan stok kuersetin 4 ppm sebanyak 10 mL

4 ppm = V1 x C1 = V2 x C2

= V1 x 200 ppm = 10 ml x 4 ppm

= V1 = 0,2 ml ~ 200 µl

Sebanyak 0,2 mL larutan stok kuersetin 200 ppm diencerkan dalam

etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.

60

Lampiran 5. Lanjutan...

3. Membuat larutan stok kuersetin 6 ppm sebanyak 10 mL

6 ppm = V1 x C1 = V2 x C2

= V1 x 200 ppm = 10 ml x 6 ppm

= V1 = 0,3 ml ~ 300 µl

Sebanyak 0,3 mL larutan stok kuersetin 200 ppm diencerkan dalam

etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar

4. Membuat larutan stok kuersetin 8 ppm sebanyak 10 mL

8 ppm = V1 x C1 = V2 x C2

= V1 x 200 ppm = 10 ml x 6 ppm

= V1 = 0,4 ml ~ 400 µl

Sebanyak 0,4 mL larutan stok kuersetin 200 ppm diencerkan dalam

etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar

5. Membuat larutan stok kuersetin 6 ppm sebanyak 10 mL

10 ppm = V1 x C1 = V2 x C2

= V1 X 200 ppm = 10 ml x 10 ppm

= V1 = 0,5 ml ~ 500 µl

Sebanyak 0,5 mL larutan stok kuersetin 200 ppm diencerkan dalam

etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.

61

Lampiran 5. Lanjutan...

f. Pembuatan larutan uji fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk bali putih

Keterangan Hasil Penimbangan

Berat kaca arloji kosong 8237,9 mg

Berat kaca arloji + zat 8437,9 mg

Berat kaca arloji + sisa 8237,9 mg

Berat zat 200 mg

g. Pembuatan larutan stok Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Kulit Jeruk Bali

Putih (FEAEEKJBP)

1. Membuat larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 12,5 ppm sebanyak 10

mL

12,5 ppm = V1 x C1 = V2 x C2

= V1 X 8000 ppm = 10 ml x 12,5 ppm

= V1 = 0,016 ml ~ 16 µl

Sebanyak 0,016 mL larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 8000 ppm

diencerkan dalam etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.

2. Membuat larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 25 ppm sebanyak 10

mL

25 ppm = V1 x C1 = V2 x C2

= V1 X 8000 ppm = 10 ml x 25 ppm

= V1 = 0,031 ml ~ 31 µl

Sebanyak 0,031 mL larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 8000 ppm

diencerkan dalam etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.

62

Lampiran 5. Lanjutan...

3. Membuat larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 50 ppm sebanyak 10

mL

50 ppm = V1 x C1 = V2 x C2

= V1 X 8000 ppm = 10 ml x 50 ppm

= V1 = 0,063 ml ~ 63 µl

Sebanyak 0,063 mL larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 8000 ppm

diencerkan dalam etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.

4. Membuat larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 100 ppm sebanyak 10

mL

100 ppm = V1 x C1 = V2 x C2

= V1 X 8000 ppm = 10 ml x 100 ppm

= V1 = 0,125 ml ~ 125 µl

Sebanyak 0,125 mL larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 8000 ppm

diencerkan dalam etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar

5. Membuat larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 200 ppm sebanyak 10

mL

200 ppm = V1 x C1 = V2 x C2

= V1 X 8000 ppm = 10 ml x 200 ppm

= V1 = 0,25 ml ~ 250 µl

Sebanyak 0,25 mL larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 8000 ppm

diencerkan dalam etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.

63

Lampiran 6. Data Perhitungan Aktivitas Antioksidan

1. Perhitungan Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Kulit

Jeruk Bali Putih (FEAEEKJBP) Replikasi 1

% Aktivitas Antioksidan = Abs kontrol – Abs perlakuan x 100%

Abs kontrol

Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878

Sampel Seri Konsentrasi

(µg/mL)

Absorbansi

sampel

(nm)

Aktivitas

Antioksidan (%)

Kuersetin

Replikasi 1

2 0,612 30,296

4 0,571 41,116

6 0,431 50,911

8 0,322 63,326

10 0,231 73,690

FEAEEKJBP

Replikasi 1

12,5 0,755 14,009

25 0,713 18,793

50 0,551 37,244

100 0,380 56,719

200 0,221 74,829

64

Lampiran 6. Lanjutan...

2. Perhitungan Nilai IC50 Replikasi 1

Nilai IC50 diperoleh dari persamaan regresi linier Y = bx + a antara seri

konsentrasi larutan uji dengan presentase aktivitas antioksidan.

Sampel Seri Konsentrasi

(µg/mL)

Aktivitas

Antioksidan

(%)

Nilai IC50

(µg/mL)

Kuersetin

Replikasi 1

2 30,296

5,658 4 41,116

6 50,911

8 63,326

10 73,690

FEAEEKJBP

Replikasi 1

12,5 14,009

107,591

25 18,793

50 37,244

100 56,719

200 74,829

Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878

a. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Kuersetin Replikasi 1

Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi kuersetin

(X) dengan presentase aktivitas antioksidan kuersetin (Y) diperoleh

nilai a = 19,168 b = 5,449 dan r = 0,999

Y = bx + a

50 = 5,449 x + 19,168

50 – 19,168 = 5,449x

X = 5,658 µg/mL

65

Lampiran 6. Lanjutan...

b. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Kulit Jeruk

Bali Putih Replikasi 1

Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi fraksi etil asetat

ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (x) dengan presentase aktivitas

antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (y)

diperoleh nilai a= 15,248 b = 0,323, dan r = 0,963

Y = bx + a

50 = 0,323 x + 15,248

50 – 15,248 = 0,323 x

X = 107,591 µg/mL

3. Perhitungan Aktivitas Antioksidan Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit

jeruk bali putih (FEAEEKJBP) Replikasi 2

% Aktivitas Antioksidan = Abs kontrol – Abs perlakuan x 100%

Abs kontrol

66

Lampiran 6. Lanjutan...

Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878

4. Perhitungan Nilai IC50 Replikasi 2

Nilai IC50 diperoleh dari persamaan regresi linier Y = bx + a antara seri

konsentrasi larutan uji dengan presentase aktivitas antioksidan.

Sampel Seri

Konsentrasi

(µg/mL)

Aktivitas

Antioksidan

(%)

Nilai IC50

(µg/mL)

Kuersetin

Replikasi 2

2 22,893

5,928 4 38,724

6 50,569

8 63,212

10 76,993

FEAEEKJBP

Replikasi 2

12,5 13,212

106,695

25 18,907

50 39,522

100 57,175

200 74,487

Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878

Sampel Seri Konsentrasi

(µg/mL)

Absorbansi

sampel (nm)

Aktivitas

Antioksidan (%)

Kuersetin

Replikasi 2

2 0,677 22,893

4 0,538 38,724

6 0,434 50,569

8 0,323 63,212

10 0,202 76,993

FEAEEKJBP

Replikasi 2

12,5 0,762 13,212

25 0,712 18,907

50 0,531 39,522

100 0,376 57,175

200 0,224 74,487

67

Lampiran 6. Lanjutan...

a. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Kuersetin 2

Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi kuersetin

(X) dengan presentase aktivitas antioksidan kuersetin (Y) diperoleh

nilai a = 10,672 b = 6,634 dan r = 0,998

Y = bx + a

50 = 6,634 x + 10,672

50 – 10,672 = 6,634 x

X = 5,928 µg/mL

b. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk

bali putih (FEAEEKJBP) Replikasi 2

Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi Fraksi etil asetat

ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (x) dengan presentase aktivitas

antioksidan Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (y)

diperoleh nilai a= 15,751, b = 0,321, dan r = 0,953

Y = bx + a

50 = 0,321 x + 15,751

50 – 15,751 = 0,321 x

X = 106,695 µg/mL

5. Perhitungan Aktivitas Antioksidan Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit

jeruk bali putih (FEAEEKJBP) Replikasi 3

% Aktivitas Antioksidan = Abs kontrol – Abs perlakuan x 100%

Abs kontrol

68

Lampiran 6. Lanjutan...

Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878

6. Perhitungan Nilai IC50 Replikasi 3

Nilai IC50 diperoleh dari persamaan regresi linier Y = bx + a antara seri

konsentrasi larutan uji dengan presentase aktivitas antioksidan.

Sampel Seri Konsentrasi

(µg/mL)

Absorbansi

sampel (nm)

Aktivitas

Antioksidan (%)

Kuersetin

Replikasi 3

2 0,698 20,501

4 0,586 33,257

6 0,448 48,975

8 0,382 56,492

10 0,242 72,437

FEAEEKJBP

Replikasi 3

12,5 0,770 12,301

25 0,727 17,198

50 0,542 38,269

100 0,349 60,251

200 0,220 74,943

69

Lampiran 6. Lanjutan...

Sampel Seri

Konsentrasi

(µg/mL)

Aktivitas

Antioksidan

(%)

Nilai IC50

(µg/mL)

Kuersetin

Replikasi 3

2 20,501

6,577 4 33,257

6 48,975

8 56,492

10 72,437

FEAEEKJBP

Replikasi 3

12,5 12,301

105,507

25 17,198

50 38,269

100 60,251

200 74,943

Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878

a. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Kuersetin Replikasi 3

Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi kuersetin

(X) dengan presentase aktivitas antioksidan kuersetin (Y) diperoleh

nilai a = 8,200 b = 6,355 dan r = 0,995

Y = bx + a

50 = 6,355x + 8,200

50 – 8,200 = x + 6,355

X = 6,577 µg/mL

b. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Kulit Jeruk

Bali Putih Replikasi 3

Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi fraksi etil asetat

ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (x) dengan presentase aktivitas

70

Lampiran 6. Lanjutan...

antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (y)

diperoleh nilai a= 14,655, b = 0335, dan r = 0,944

Y = bx + a

50 = 0,335 x + 14,655

50 – 14,655 = 0,335 x

X = 105,507 µg/mL

b. Hasil rerata dan standar deviasi uji aktivitas antioksidan fraksi etil

asetat ekstrak etanol kulit jeruk bali putih

Sampel Replikasi Persamaan Regresi

Linier

IC50

(µg/mL)

IC50 (µg/mL) ±

SD

Fraksi Etil Asetat

Ekstrak Etanol

Kulit Jeruk Bali

Putih

1

y = bx + a

50 = 0,323 x + 15,248

r2

= 0,927 r = 0,963

107,591

106,597 ± 1,045 2

y = bx + a

50 = 0,321 x + 15,751

r2

= 0,908 r = 0,953

106,695

3

y = bx + a

50 = 0,335 x + 14,655

r2

= 0,891 r = 0,944

105,507

Kuersetin

1

y = bx + a

50 = 5,449 x + 19,168

r2 = 0,998 r = 0,999

5,658

6,054 ± 0,472

2

y = bx + a

50 = 6,634 x + 10,672

r2 = 0,996 r = 0,998

5,928

3

y = bx + a

y= 6,355 x + 8,200

r2 = 0,990 r = 0,995

6,577

71

Lampiran 6. Lanjutan...

c. Hasil Perhitungan Penetapan Kadar Flavonoid Total Fraksi Etil Asetat

Ekstrak Etanol Kulit Jeruk Bali Putih

Replikasi Absorbansi Flavonoid Total

(mgEQ/gram) ekstrak

Replikasi I 0,420 60,20

Replikasi II 0,415 59,22

Replikasi III 0,404 57,06

Rata- rata kadar

flavonoid total

58,83

72

Lampiran 7. Panjang Gelombang DPPH

73

Lampiran 8. Penentuan Panjang Gelombang Kuersetin

74

Lampiran 9. Penentuan Operating Time Kuersetin

75

Lampiran 10. Penentuan Operating Time DPPH

76

Lampiran 11. Penentuan Persentase Aktivitas Antioksidan Kuersetin

a. Replikasi 1

77

Lampiran 11. Lanjutan…

b. Replikasi 2

78

Lampiran 11. Lanjutan…

c. Replikasi 3

79

Lampiran 12. Penentuan Persentase Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat

Ekstrak Etanol Kulit Jeruk Bali Putih

80

Lampiran 13. Penentuan Kurva Baku Kuersetin

a. Replikasi 1

81

Lampiran 13. Lanjutan…

b. Replikasi 2

82

Lampiran 13. Lanjutan…

c. Replikasi 3

83

Lampiran 14. Penetapan Kadar Flavonoid Total

84

Lampiran 15. Dokumentasi Penelitian

Penimbangan Kulit Jeruk Bali Putih Pengovenan Kulit Jeruk Bali

Putih pada suhu 500C

Pengecekan Kadar Air Perkolasi

Fraksinasi Larutan Stok Kuersetin

85

Lampiran 15. Lanjutan…

Larutan Uji Fraksi Etil Asetat Larutan DPPH dan Kuersetin

Ekstrak Etanol Kulit Jeruk

Bali Putih dan DPPH