Transcript
Automatización en Hematología
Mg. Marden Alfaro G.
Cámara de Neubauer o Hemocitómetro
Centrífuga de Microhematocrito
Contador Hematológico
Reportye numerico
Reporte grafico(Histogramas)
ANALISIS DE COAGULACION
LABORATORIO DE HEMATOLOGIA
RECUENTO DE LEUCOCITOS RECUENTO DE ERITROCITOS RECUENTO PLAQUETAS DOSAJE DE HEMOGLOBINA HEMATOCRITO CONSTANTES CORPUSCULARES FORMULA LEUCOCITARIA OBSERVACIONES DE FROTIS DE
SANGRE PERIFERICA (HEMOPARASITOS).
ANALISIS DE ELEMENTOS FORMES
HEMOGRAMA (EXAMEN DE HEMATOLOGIA POR
EXCELENCIA)
VENTAJAS DE EQUIPOS AUTOMATIZADOS
Velocidad. Reproducibilidad. Mayor contaje en Nro células. Reducción de costos. Obtención de nuevos parámetros Visualización: histogramas - dispersogramas. No necesita experiencia laboral. No tiene sesgos de coloración, distribución y
extendido .
SEMI-AUTOMATIZADO AUTOMATIZADO
GB, GR,PLT, HB,HCT, VCM
NUMERACION
FORMULA DE 3
POBLACIONES
FORMULA DE 5 POBLACIONES
7 PAR 8 PAR
18 PAR + HIS.DIF
22 PAR RETIC. CD4/CD8
1954 1972 1980 1990 1994 1995
AUTOMATIZACION DEL HEMOGRAMA POR ETAPAS
1ra GENERACION 2da GENERACION 3ra GENERACION
4ta GENERACION
5ta
GEN
ER
AC
ION
PRIMERA GENERACIÓN DE ANALIZADORES HEMATÓLOGICOS AUTOMÁTIZADOS
El contador Coulter Modelo S fue el primer instrumento que de manera automática procesó datos multiparamétricos en sangre :
Eritrocitos (RBC) Leucocitos(WBC) Plaquetas (PLT)
Dilución de la sangre
Toma de muestra de una
cantidad medida
Conteo de partículas.
TODO CONTEO CELULAR COMPARTE TRES PASOS BÁSICOS
La Célula
Propiedades fisicoquímicas de las células
Variedad de tamaños Relación núcleo citoplasma propio de cada
célula. Densidad caracterizable y diferente entre
células. Malas conductoras de la electricidad Se comportan en forma diferente a la luz:
absorben, refractan, difractan y dispersan. Composición citoquímica diferente y
caracterizable para cada una.
El recuento celular absoluto se realiza conociendo el volumen preciso de sangre total diluida que atraviesa la abertura durante el ciclo de recuento
VOLUMETRIA
HASTA DONDE SE PUEDE CONFIAR ?
Métodos Para el recuento celular
- Impedancia
- Citometría de Flujo
PRINCIPIOS DE MEDICIÓN DE LOS EQUIPOS AUTOMATIZADOS
IMPEDANCIA ELECTRICA DISPERSION DE LUZ ENFOQUE HIDRODINAMICO RADIOFRECUENCIA O
CONDUCTIVIDAD CITOQUIMICA FLUORESCENCIA. CITOMETRIA DE FLUJO
Métodos Para el recuento celular
Los sistemas por impedancia fueron los primeros utilizados para conteo de partículas, pero tenían varios defectos.
Los sistemas por citometría de flujo revolucionaron el conteo celular mediante el enfoque hidrodinámico.
El enfoque hidrodinámico también se aplico en impedancia.
Equipos automatizados por impedancia.
El principio de impedancia se basa en el aumento de la resistencia producida cuando una célula sanguínea con baja conductividad pasa a través de un campo eléctrico. El número de intermitencias indica la cifra de células sanguíneas y la amplitud de cada intermitencia es proporcional al volumen de la célula.
Impedancia eléctrica una célula pasa a través de una apertura por la cual fluye una corriente eléctrica continua y constante en un medio electrolítico, generará una variación en la velocidad de flujo de esta corriente eléctrica: IMPEDANCIA ELECTRICA.
Impedancia eléctrica El número de pulsos: NÚMERO DE PARTICULAS
Amplitud del pulso eléctrico: VOLUMEN DE LA CÉLULA - Es directamente proporcional
Enfoque Hidrodinámico
Alineamiento de partículas por medio de dos fluidos de diferentes densidades o velocidades.
Reactivo de Cubierta
Pipeta de muestra Tubo atrapador
Apertura
Histogramas
Definición Representan una
distribución de frecuencias por la acumulación de impulsos, que se generan cuando las células atraviesan la apertura de los electrodos
Propósito del histograma
Identificar y clasificar la pauta de variación
Desarrollar una explicación razonable y relevante de la pauta
HISTOGRAMA
GRAFICO QUE REPRESENTA DOS VARIABLES:
-Volumen de la partícula: Eje de las abscisas (X), en femtolitros. -Número de partículas: Eje de las ordenadas (Y):
HISTOGRAMA DE GLOBULOS ROJOS
Para determinar los GR se diluye la muestra en un medio isotónico.
La curva de GR es cónica, modal y su tamaño es de 60 a 120 fl.
Recuento de Glóbulos Rojos
Zona izquierda Evidencia de fragmentos
Citoplasmatico Grandes Plaquetas
Zona derecha : Pasaje de
coincidencia Agregados celulares Globulos blancos
VCM
ALTERACIONES EN HISTOGRAMAS
Izquierda: células microciticas, esquistocitos, dacriocitos de registro menor de 60 fl.
Derecha: células
macrociticas, macro ovalocitos, eliptocitos
Curva Bimodal: existe dos
poblaciones celulares, en pacientes transfundidos, anemias una vez iniciado el tratamiento.
Histogramas De Glóbulos Rojos
.
VCM
Desplazamiento a la Izquierda: Microcitosis
Histogramas De Glóbulos Rojos
.
VCM
Desplazamiento a la Derecha: Macrocitosis
Histogramas De Glóbulos Rojos
.
RDW
RDW Mayor de 15%: Anisocitosis
Recuento de Globulos Rojos (Los Parámetros Calculados)
Ht = Hematocrito Ht = (GR x VCM)/10
HCM = Hemoglobina Corpuscular Media Hb CMH = x 10 RBC 10 6/mm3
CHCM = Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media
Hb l CHCM = x 1000 HTO 10 6/mm3
MEDICION DE HEMOGLOBINA
Source lumineuse
Cuve de
mesure
Filtre
Photo-détecteur
CIANMETAHEMOGLOBINA SULFATO LAURIL DE SODIO
HISTOGRAMA DE GLOBULOS BLANCOS
Se diluye la sangre en un medio que lisa los eritrocitos, a su vez desprenderá el citoplasma de los GB dejando libres los núcleos, los cuales serán medidos y contados.
Los GB se agrupan formando 3 curvas :
Linfocitos 50 a 100 fl. Mixtos o Intermedios 100 a
150 fl. Granulocitos 150 a 380 fl.
Anormalidades CURVA DE LINFOCITOS: Perdida de altura:
disminución del numero de linfocitos.
Arranque extenso en
Y: células o restos celulares de menor tamaño que un linfocito pequeño (macroplaquetas, núcleos de hematíes).
Anormalidades
CURVA DE LINFOCITOS: Distribución no
normal a la derecha: linfocitos atípicos, aumento de monocitos o de linfocitos grandes.
CURVA DE GRANULOCITOS :
Curva plana o no existente: granulocitopenias, acompañada de linfocitosis.
Curva extendida a 400
fl con extensión a mononucleares: neutrofilia, células de líneas mas inmaduras (mielos y metas).
Histogramas de Plaquetas
La curva normal es cónica, modal y su tamaño es 2 a 20 fl.
Zona de Macroplaquetas, Agregados plaquetarios, microcitos
Alarmas en el histograma
PRINCIPALES ALARMAS:
. PLTR: Indica que el recuento de plaquetas está por debajo del rango
de normalidad. LRI: Indica interferencia en la región baja de plaquetas. micro plaquetas inclusiones eritrocitarias fragmentos celulares hemólisis URI : Indica interferencia en la región alta de plaquetas. microcitos Fragmentos de eritrocitos macroplaquetas satelitismo plaquetario agregados plaquetarios
Alarmas por encima del histograma
Indica interferencia en la región entre 20 y 40 fl. Se activa por alguna de las siguientes causas:
Macroplaquetas Esquistocitos Microcitos Satelitismo plaq. Agregados plaquetarios
Anormalidades No arranque en x:
numero de plaquetas esta disminuido.
Extendida 25-30 fl:
aumento en el tamaño de las plaquetas y están aumentadas.
MÉTODOS DE DISPERSIÓN DE LUZ
BASADOS EN CITOMETRIA DE FLUJO
Equipos automatizados por dispersión óptica. Principio
Está basada en las mediciones de la dispersión de la luz obtenidas de una sola célula sanguínea que pasa a través de un haz de luz (óptico o láser). Estas células crean una dispersión hacia delante y lateral las cuales se detectan mediante fotodetectores .El grado de dispersión hacia delante es una mediación del tamaño de la celular mientras que el lateral es una medición de la granularidad de la célula..
Señales de Dispersión La dispersión resulta de la
interacción de la luz con una partícula que produce un cambio de dirección) en todas las direcciones del espacio.
Determinan: Tamaño celular, la membrana, el núcleo y el material granular del interior de la célula, llamado complejidad.
Método de radio frecuencia
Corriente directa
Mide tamaño
Radio frecuencia
Mide densidad celular
Sistema óptico de la dispersion de luz
Dispersogramas
Son gráficas analíticas, que en base a la metodología de medición celular, logra ubicar bi y tridimensionalmente los distintos componentes celulares de la sangre.
Permite determinar la densidad celular de cada población
Las alarmas son altamente específicas
Dispersogramas de Leucocitos
Son los más ampliamente estudiados
Enorme contribución en el esclarecimiento de las series comprometidas con la patología
Son dependientes de la metodología de medición.
Beckman Coulter: VCS
Volumen Conductividad Scatter Light
VOLUMEN Y DISPERSION DE LUZ
MAPSS
Multi Angle Polarized Scatter Separation – 0° Tamaño – 10° Complejidad (Estructura Interna) – 90° Lobularidad (Estructura Nuclear) – 90D° Refringencia de los Gránulos
Información de la dispersion de luz en diferentes ángulos
Medida a 0º sirve para medir el tamaño celular
Medida a 10º mide la complejidad celular
Medida a 90º mide la superficie celular y la estructura interna ( lobularidad )
Medida a 90ºD mide determinados tipos de
granularidad celular
1°/3° (0°) Taille
1°/3° (0°) Taille
10° Structure
10° Structure
90°Pol/ 90°dep Granulations
Faisceau laser Po l ar i sat i on
Dispersogramas
NEUTROFILOS
EOSINOFILOS
LINFOCITOS
MONO
BASO
0°
10°
TAMAÑO
COMPLEJIDAD
Dispersogramas
POLINUCLEARES
MONONUCLEARES
90°
10°
LOBULARIDAD
COMPLEJIDAD
Dispersogramas
90°D
90°
GRANULARIDAD
LOBULARIDAD
CELULAS SIN GRANULOS REFRINGENTES
CELULAS CON GRANULOS REFRINGENTES
Dispersogramas
EOSINOFILOS
NEUTROFILOS
90°D
90°
GRANULARIDAD
LOBULARIDAD
Dispersogramas
90°
0°
LOBULARIDAD
TAMAÑO
ZONA DE BLASTOS
POLI
MONO
Sysmex: ACAS
Adaptative Cluster Análisis System
Cumulos de Plaquetas?
Fantasmas (WBC, RBC, PLT, NRBC)
Blastos ?
Imm Gran?
Desviacion a la izquieda?
RF
CD
I M I
Escategrama: Areas de Celulas Anormales en el Canal IMI
Principios y Tecnología
HPC ?
Dispersograma para granulocitos inmaduros
Siemmens - Bayer: PANDA Peroxidase Actity Nuclear Density Analisis
Dispersograma para reticulocitos y plaquetas opticas
Citoquímica
•Reacciones desarrollas en el proceso de automatización para evidenciar enzimas y otras moléculas que permitan diferenciar una célula de otra. •Puede darse a nivel de membrana, citoplasmático y núcleo.
Ejemplos de dispersogramas
Sysmex
Ejemplos de dispersogramas
Cell Dyn 3500 - 3700
DISPERSOGRAMA ABBOT
Ejemplos de dispersogramas
1 Ruido electrónico 2 NRBC’ls 3 P laquetas 4 Linfocitos y Basófilos 5 Células Grandes no
teñidas (LUC) 6 Monocitos 7 Neutrófilos 8 Eosinófilos
Advia
Dispersograma para basófilos
Dispersograma para basofilos
Autoanalizadores con diferencial de 5 partes
SYSMEX XE ADVIA 210
CELLDYN COULTER
DISTRIBUCIONES NORMALES
REGIONES DE ALARMA
Tipo de célula
Tamaño en fL
Células presentes en el rango
Linfocitos 35 - 90 Linfocitos normales y atípicos
Mononucleares
90 - 160 Mo, Prom, Mye, plasmocitos, blastos
Granulocitos
160 - 450 Segm, Abast, Metas, eos, basófilos
parámetros de medición Autoanali
zador con
diferencial de 3 partes
HISTOGRAMAS DE WBC
Canal DIFF
D( Estructura Celular Interna )
F
LU
OR
ESC
EN
CIA
(in
form
ació
n de
l RN
A/ D
NA
)
Escatergrama DIFF Anormal
FLU
OR
ESC
EN
CIA
(I
nfor
mac
ión
del R
NA
/DN
A)
RADIOFRECUENCIA ( Conductividad )
La conductividad de las ondas de radio A través de las células, nos revelan su composición interna
SYSMEX SF - 3000
SE - 9500
Beckman Coulter
Beckman Gen-S with slidemaker
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