AUTOMATIZACION 2013 Areg (5)

Automatización en Hematología

Mg. Marden Alfaro G.

Cámara de Neubauer o Hemocitómetro

Centrífuga de Microhematocrito

Contador Hematológico

Reportye numerico

Reporte grafico(Histogramas)

ANALISIS DE COAGULACION

LABORATORIO DE HEMATOLOGIA

RECUENTO DE LEUCOCITOS RECUENTO DE ERITROCITOS RECUENTO PLAQUETAS DOSAJE DE HEMOGLOBINA HEMATOCRITO CONSTANTES CORPUSCULARES FORMULA LEUCOCITARIA OBSERVACIONES DE FROTIS DE

SANGRE PERIFERICA (HEMOPARASITOS).

ANALISIS DE ELEMENTOS FORMES

HEMOGRAMA (EXAMEN DE HEMATOLOGIA POR

EXCELENCIA)

VENTAJAS DE EQUIPOS AUTOMATIZADOS

Velocidad. Reproducibilidad. Mayor contaje en Nro células. Reducción de costos. Obtención de nuevos parámetros Visualización: histogramas - dispersogramas. No necesita experiencia laboral. No tiene sesgos de coloración, distribución y

extendido .

SEMI-AUTOMATIZADO AUTOMATIZADO

GB, GR,PLT, HB,HCT, VCM

NUMERACION

FORMULA DE 3

POBLACIONES

FORMULA DE 5 POBLACIONES

7 PAR 8 PAR

18 PAR + HIS.DIF

22 PAR RETIC. CD4/CD8

1954 1972 1980 1990 1994 1995

AUTOMATIZACION DEL HEMOGRAMA POR ETAPAS

1ra GENERACION 2da GENERACION 3ra GENERACION

4ta GENERACION

5ta

GEN

ER

AC

ION

PRIMERA GENERACIÓN DE ANALIZADORES HEMATÓLOGICOS AUTOMÁTIZADOS

El contador Coulter Modelo S fue el primer instrumento que de manera automática procesó datos multiparamétricos en sangre :

Eritrocitos (RBC) Leucocitos(WBC) Plaquetas (PLT)

Dilución de la sangre

Toma de muestra de una

cantidad medida

Conteo de partículas.

TODO CONTEO CELULAR COMPARTE TRES PASOS BÁSICOS

La Célula

Propiedades fisicoquímicas de las células

Variedad de tamaños Relación núcleo citoplasma propio de cada

célula. Densidad caracterizable y diferente entre

células. Malas conductoras de la electricidad Se comportan en forma diferente a la luz:

absorben, refractan, difractan y dispersan. Composición citoquímica diferente y

caracterizable para cada una.

El recuento celular absoluto se realiza conociendo el volumen preciso de sangre total diluida que atraviesa la abertura durante el ciclo de recuento

VOLUMETRIA

HASTA DONDE SE PUEDE CONFIAR ?

Métodos Para el recuento celular

- Impedancia

- Citometría de Flujo

PRINCIPIOS DE MEDICIÓN DE LOS EQUIPOS AUTOMATIZADOS

IMPEDANCIA ELECTRICA DISPERSION DE LUZ ENFOQUE HIDRODINAMICO RADIOFRECUENCIA O

CONDUCTIVIDAD CITOQUIMICA FLUORESCENCIA. CITOMETRIA DE FLUJO

Métodos Para el recuento celular

Los sistemas por impedancia fueron los primeros utilizados para conteo de partículas, pero tenían varios defectos.

Los sistemas por citometría de flujo revolucionaron el conteo celular mediante el enfoque hidrodinámico.

El enfoque hidrodinámico también se aplico en impedancia.

Equipos automatizados por impedancia.

El principio de impedancia se basa en el aumento de la resistencia producida cuando una célula sanguínea con baja conductividad pasa a través de un campo eléctrico. El número de intermitencias indica la cifra de células sanguíneas y la amplitud de cada intermitencia es proporcional al volumen de la célula.

Impedancia eléctrica una célula pasa a través de una apertura por la cual fluye una corriente eléctrica continua y constante en un medio electrolítico, generará una variación en la velocidad de flujo de esta corriente eléctrica: IMPEDANCIA ELECTRICA.

Impedancia eléctrica El número de pulsos: NÚMERO DE PARTICULAS

Amplitud del pulso eléctrico: VOLUMEN DE LA CÉLULA - Es directamente proporcional

Enfoque Hidrodinámico

Alineamiento de partículas por medio de dos fluidos de diferentes densidades o velocidades.

Reactivo de Cubierta

Pipeta de muestra Tubo atrapador

Apertura

Histogramas

Definición Representan una

distribución de frecuencias por la acumulación de impulsos, que se generan cuando las células atraviesan la apertura de los electrodos

Propósito del histograma

Identificar y clasificar la pauta de variación

Desarrollar una explicación razonable y relevante de la pauta

HISTOGRAMA

GRAFICO QUE REPRESENTA DOS VARIABLES:

-Volumen de la partícula: Eje de las abscisas (X), en femtolitros. -Número de partículas: Eje de las ordenadas (Y):

HISTOGRAMA DE GLOBULOS ROJOS

Para determinar los GR se diluye la muestra en un medio isotónico.

La curva de GR es cónica, modal y su tamaño es de 60 a 120 fl.

Recuento de Glóbulos Rojos

Zona izquierda Evidencia de fragmentos

Citoplasmatico Grandes Plaquetas

Zona derecha : Pasaje de

coincidencia Agregados celulares Globulos blancos

VCM

ALTERACIONES EN HISTOGRAMAS

Izquierda: células microciticas, esquistocitos, dacriocitos de registro menor de 60 fl.

Derecha: células

macrociticas, macro ovalocitos, eliptocitos

Curva Bimodal: existe dos

poblaciones celulares, en pacientes transfundidos, anemias una vez iniciado el tratamiento.

Histogramas De Glóbulos Rojos

.

VCM

Desplazamiento a la Izquierda: Microcitosis

Histogramas De Glóbulos Rojos

.

VCM

Desplazamiento a la Derecha: Macrocitosis

Histogramas De Glóbulos Rojos

.

RDW

RDW Mayor de 15%: Anisocitosis

Recuento de Globulos Rojos (Los Parámetros Calculados)

Ht = Hematocrito Ht = (GR x VCM)/10

HCM = Hemoglobina Corpuscular Media Hb CMH = x 10 RBC 10 6/mm3

CHCM = Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media

Hb l CHCM = x 1000 HTO 10 6/mm3

MEDICION DE HEMOGLOBINA

Source lumineuse

Cuve de

mesure

Filtre

Photo-détecteur

CIANMETAHEMOGLOBINA SULFATO LAURIL DE SODIO

HISTOGRAMA DE GLOBULOS BLANCOS

Se diluye la sangre en un medio que lisa los eritrocitos, a su vez desprenderá el citoplasma de los GB dejando libres los núcleos, los cuales serán medidos y contados.

Los GB se agrupan formando 3 curvas :

Linfocitos 50 a 100 fl. Mixtos o Intermedios 100 a

150 fl. Granulocitos 150 a 380 fl.

Anormalidades CURVA DE LINFOCITOS: Perdida de altura:

disminución del numero de linfocitos.

Arranque extenso en

Y: células o restos celulares de menor tamaño que un linfocito pequeño (macroplaquetas, núcleos de hematíes).

Anormalidades

CURVA DE LINFOCITOS: Distribución no

normal a la derecha: linfocitos atípicos, aumento de monocitos o de linfocitos grandes.

CURVA DE GRANULOCITOS :

Curva plana o no existente: granulocitopenias, acompañada de linfocitosis.

Curva extendida a 400

fl con extensión a mononucleares: neutrofilia, células de líneas mas inmaduras (mielos y metas).

Histogramas de Plaquetas

La curva normal es cónica, modal y su tamaño es 2 a 20 fl.

Zona de Macroplaquetas, Agregados plaquetarios, microcitos

Alarmas en el histograma

PRINCIPALES ALARMAS:

. PLTR: Indica que el recuento de plaquetas está por debajo del rango

de normalidad. LRI: Indica interferencia en la región baja de plaquetas. micro plaquetas inclusiones eritrocitarias fragmentos celulares hemólisis URI : Indica interferencia en la región alta de plaquetas. microcitos Fragmentos de eritrocitos macroplaquetas satelitismo plaquetario agregados plaquetarios

Alarmas por encima del histograma

Indica interferencia en la región entre 20 y 40 fl. Se activa por alguna de las siguientes causas:

Macroplaquetas Esquistocitos Microcitos Satelitismo plaq. Agregados plaquetarios

Anormalidades No arranque en x:

numero de plaquetas esta disminuido.

Extendida 25-30 fl:

aumento en el tamaño de las plaquetas y están aumentadas.

MÉTODOS DE DISPERSIÓN DE LUZ

BASADOS EN CITOMETRIA DE FLUJO

Equipos automatizados por dispersión óptica. Principio

Está basada en las mediciones de la dispersión de la luz obtenidas de una sola célula sanguínea que pasa a través de un haz de luz (óptico o láser). Estas células crean una dispersión hacia delante y lateral las cuales se detectan mediante fotodetectores .El grado de dispersión hacia delante es una mediación del tamaño de la celular mientras que el lateral es una medición de la granularidad de la célula..

Señales de Dispersión La dispersión resulta de la

interacción de la luz con una partícula que produce un cambio de dirección) en todas las direcciones del espacio.

Determinan: Tamaño celular, la membrana, el núcleo y el material granular del interior de la célula, llamado complejidad.

Método de radio frecuencia

Corriente directa

Mide tamaño

Radio frecuencia

Mide densidad celular

Sistema óptico de la dispersion de luz

Dispersogramas

Son gráficas analíticas, que en base a la metodología de medición celular, logra ubicar bi y tridimensionalmente los distintos componentes celulares de la sangre.

Permite determinar la densidad celular de cada población

Las alarmas son altamente específicas

Dispersogramas de Leucocitos

Son los más ampliamente estudiados

Enorme contribución en el esclarecimiento de las series comprometidas con la patología

Son dependientes de la metodología de medición.

Beckman Coulter: VCS

Volumen Conductividad Scatter Light

VOLUMEN Y DISPERSION DE LUZ

MAPSS

Multi Angle Polarized Scatter Separation – 0° Tamaño – 10° Complejidad (Estructura Interna) – 90° Lobularidad (Estructura Nuclear) – 90D° Refringencia de los Gránulos

Información de la dispersion de luz en diferentes ángulos

Medida a 0º sirve para medir el tamaño celular

Medida a 10º mide la complejidad celular

Medida a 90º mide la superficie celular y la estructura interna ( lobularidad )

Medida a 90ºD mide determinados tipos de

granularidad celular

1°/3° (0°) Taille

1°/3° (0°) Taille

10° Structure

10° Structure

90°Pol/ 90°dep Granulations

Faisceau laser Po l ar i sat i on

Dispersogramas

NEUTROFILOS

EOSINOFILOS

LINFOCITOS

MONO

BASO

0°

10°

TAMAÑO

COMPLEJIDAD

Dispersogramas

POLINUCLEARES

MONONUCLEARES

90°

10°

LOBULARIDAD

COMPLEJIDAD

Dispersogramas

90°D

90°

GRANULARIDAD

LOBULARIDAD

CELULAS SIN GRANULOS REFRINGENTES

CELULAS CON GRANULOS REFRINGENTES

Dispersogramas

EOSINOFILOS

NEUTROFILOS

90°D

90°

GRANULARIDAD

LOBULARIDAD

Dispersogramas

90°

0°

LOBULARIDAD

TAMAÑO

ZONA DE BLASTOS

POLI

MONO

Sysmex: ACAS

Adaptative Cluster Análisis System

Cumulos de Plaquetas?

Fantasmas (WBC, RBC, PLT, NRBC)

Blastos ?

Imm Gran?

Desviacion a la izquieda?

RF

CD

I M I

Escategrama: Areas de Celulas Anormales en el Canal IMI

Principios y Tecnología

HPC ?

Dispersograma para granulocitos inmaduros

Siemmens - Bayer: PANDA Peroxidase Actity Nuclear Density Analisis

Dispersograma para reticulocitos y plaquetas opticas

Citoquímica

•Reacciones desarrollas en el proceso de automatización para evidenciar enzimas y otras moléculas que permitan diferenciar una célula de otra. •Puede darse a nivel de membrana, citoplasmático y núcleo.

Ejemplos de dispersogramas

Sysmex

Ejemplos de dispersogramas

Cell Dyn 3500 - 3700

DISPERSOGRAMA ABBOT

Ejemplos de dispersogramas

1 Ruido electrónico 2 NRBC’ls 3 P laquetas 4 Linfocitos y Basófilos 5 Células Grandes no

teñidas (LUC) 6 Monocitos 7 Neutrófilos 8 Eosinófilos

Advia

Dispersograma para basófilos

Dispersograma para basofilos

Autoanalizadores con diferencial de 5 partes

SYSMEX XE ADVIA 210

CELLDYN COULTER

DISTRIBUCIONES NORMALES

REGIONES DE ALARMA

Tipo de célula

Tamaño en fL

Células presentes en el rango

Linfocitos 35 - 90 Linfocitos normales y atípicos

Mononucleares

90 - 160 Mo, Prom, Mye, plasmocitos, blastos

Granulocitos

160 - 450 Segm, Abast, Metas, eos, basófilos

parámetros de medición Autoanali

zador con

diferencial de 3 partes

HISTOGRAMAS DE WBC

Canal DIFF

D( Estructura Celular Interna )

F

LU

OR

ESC

EN

CIA

(in

form

ació

n de

l RN

A/ D

NA

)

Escatergrama DIFF Anormal

FLU

OR

ESC

EN

CIA

(I

nfor

mac

ión

del R

NA

/DN

A)

RADIOFRECUENCIA ( Conductividad )

La conductividad de las ondas de radio A través de las células, nos revelan su composición interna

SYSMEX SF - 3000

SE - 9500

Beckman Coulter

Beckman Gen-S with slidemaker