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Neuraminidaseor N Protein
Hemagglutinin orH Protein
Fatty or LipidEnvelopeMatrix ProteinembraneProtein Coat
orNucleoproteinRNA
LINFLUENZACOME
MALATTIARESPIRATORIA
Giorgio Pal, MDDipartimento di Istologia,
Microbiologia e Biotecnologie MedicheU i it d li St di di P
d
1 Congresso NazionaleUnione Italiana per la Pneumologia
UIP
8-11 novembre 2000 - Acireale (CT)Centro CongressiLa Perla
Ionica
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PREVALENZA DEI SINTOMITosse
MalessereSensazione di febbre
Esordio improvvisoBrividi
CefaleaAnoressia
Congestione nasaleMialgia
Mal di golaCatarro
VertiginiAbbassamento di voce
Dolore retrosternaleVomitoDiarrea
Dolore addominaleFebbre >37.8C
Percentuale dei casi0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Nicholson, 1998
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MANIFESTAZIONI CLINICHE
Il periodo di incubazione pu durare dalle 24 ore ai 5/6 giorni.
Linizio della malattia improvviso, con comparsa di febbre,
brividi,
mal di testa, gola secca, mialgia, malessere inappetenza e mal
digola.
Il sintomo pi rilevante la febbre , che in assenza di
trattamentoantipiretico si innalza bruscamente nel corso di 24-48
hrs fino ai41C.
Lo spettro delle manifestazioni cliniche varia notevolmente per
gravit,da manifestazioni asintomatiche a complicazioni minori quali
rinite e/ofaringite fino alla polmonite virale con esito
potenzialmente fatale
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COME SI TRASMETTE?
Flusso dariaClearance mucociliareLinfonodi
Il virus viene trasmessotramite goccioline di salivastarnutendo,
tossendo osemplicemente parlando
La trasmissione facilitatadal contatto stretto
altamente contagioso etrasmissibile
I soggetti infetti sonocontagiosi da pochi giorniprima e per i
5-7 giornisuccessivi alla comparsa deisintomi
Turbinati nasali
Esofago
Bronchi
Bronchioli
Trachea
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I L V I R U S I N F L U E N Z A L E N E L T R A T T OR E S P I R
A T O R I O
I l v i r u s i n f l u e n z a l e s ia t t a c c a ( t r a m i
t e l H A )
a l l e c e l l u l e e p i t e l i a l id e l t r a t t o r e s
p i r a t o r i o
I l v i r u s r e p l i c a a l l i n t e r n od e l l e c e l l
u l e
L a n e u r a m i n i d a s i v i r a l ec o n s e n t e i l r i
l a s c i o
d e i v i r i o n i n e o f o r m a t in e l l a v i e a e r e
e
-
LINFLUENZA COME MALATTIARESPIRATORIA
Patogenesi viraleVirus OspiteP immunit umoraleHA immunit
cellulareNA risposta citochinicaM risposta cellulare aspecificaNP
barriera genetica aspecifica:NS lectine del surfactant
acido sialicoendoproteasi
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VI
R
U
S
T
I
T
E
R
N
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S
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P
H
A
R
Y
N
G
E
A
L
W
A
S
H
(
T
C
I
D
5
0
/
M
L
)
101
102
103
104
105
100
101
102
103
A
N
T
I
B
O
D
Y
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(
R
e
c
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o
c
a
l
G
e
o
m
.
M
e
a
n
)
10
20
30
40
0 2 4 6 8 10 14 21 28DAYS AFTER VIRUS ADMINISTRATION
INTERFERO
NTITER
INNASO
PHARYNGEAL
WASH
(U/ml)
Febrile Influenzal Illness+ + + + + +
Nasal Wash Neutralizing AntibodySerum Antineuraminidase
AntibodySerum Neutralizing Antibody
Virus
Interferon
-
PRODUZIONE DI CITOCHINE DURANTE LINFEZIONEDA INFLUENZA A
ACQUISITA NATURALMENTE
Concentrazionemedia di citochine
nel lavaggionasale (pg/ml)
Hayden et al, 1998
-
CORRELATION BETWEEN FEBRILE RESPONSEAND RECOVERED VIRUS
TITRE
0
2
4
6
8
0 1 2 3 4 5 6FEVER SCORE
L
O
G
1
0
M
A
X
I
M
U
M
N
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S
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P
H
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G
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V
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I
T
E
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(
R
M
K
T
C
I
D
5
0
/
m
l
)
-
DIAGNOSI DI INFLUENZA
Riconoscimento dellantigene
Isolamento virale
Serologia
(RT-PCR)
lavaggio/tampone nasale aspirato nasofaringeo tampone faringeo,
saliva
test di inibizionedellemagglutinazione
fissazione delcomplemento
}
La disponibilit di dati epidemiologici provenienti da unsistema
locale di sorveglianza migliora le possibilit di una
diagnosi clinica attendibile
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COMPLICAZIONI DELLINFLUENZA
Respiratorie Polmonite virale Polmonite batterica
da stafilococco da streptococco
Non-respiratorie Miosite Miocardite, pericardite Mioglobinuria
depressione midollare CNS
sindrome di Guillain-Barr mielite trasversa sindrome di Reye
syndrome Encefalite
-
URTI - otite media- sinusite
LRTI - esacerbazione di asma/BPCO- croup, bronchiolite-
polmonite virale primaria (rara*)- polmonite batterica
secondaria
* 5-10% delle polmoniti come complicanzedellinfluenza
INFLUENZA: LE COMPLICAZIONIRESPIRATORIE
-
INFLUENZA AL DI FUORI DEL TRATTORESPIRATORIO
? dati disponibili su modelli animali Influenza come causa
riconosciuta di miocardite nei
cavalli Dati molto limitati sulluomo La PCR potr aiutare a
riconoscere la presenza di
virus influenzale al di fuori del tratto respiratorio
-
LE CELLULE DELLEPITELIO RESPIRATORIO SONO ILPRINCIPALE SITO
REPLICATIVO NELLUOMO
Dati limitati a sostegno di viremia/infezionesistemica
La sintomatologia sistemica dellinfluenza riconducibile al
rilascio sistemico di mediatoridellinfiammazione (IL-6 e IFN-a)
Inibitori della neuraminidasi - zanamivir -somministrati per via
topica direttamente nelleprime vie aeree sono efficaci nel
trattamentodellinfluenza
-
REPLICATION OF INFLUENZA VIRUS
mRNA
vRNA (-)
cRNA (+)
Translation
PosttranslationalProcessing Packaging
NUCLEUS
Fusion andUncoating
Endocytosis
Adsorption
-
GEMMAZIONE DEL VIRUS DALLACELLULA OSPITE
-
HA MONOMERINFLUENZA VIRUS
-
ATTACHMENTATTACHMENT
Specificit per
NANA 2,6 galattosio
NANA 2,3 galattosio
Receptor binding site (estremit distale molecole HA)
legamolecole NANA su glicoproteine o glicolipidi
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THREE-DIMENSIONAL STRUCTURE OF INFLUENZA VIRUSHA AT THE pH OF
MEMBRANE FUSION
-
INGRESSO INTRACELLULAREINGRESSO INTRACELLULARE
Endocitosi mediata da recettori
Vescicole ricoperte di clatrina Fusione con endosomi
Acidificazione endosoma
Modificazione conformazionale HA
Esposizione peptide fusione HA2 Fusione e rilascio
-
M2 PROTEIN
-
PROTEINA MPROTEINA M22 Omotetramero Membrana delle cellule
infettate Poche molecole incorporate nel virione Inserita
cotraduzionalmente nella membrana RE
CANALE IONICO: Durante la spoliazione permette a protoni di
entrare nel
virione e causa la dissociazione del capside Regola pH del
compartimento intracellulare in trans-Golgi
network e vescicole di trasporto associate
-
Assembly ofpolymerase
complex
PB2PA
PB1
INACTIVECOMPLEX vRNA
5 3
mRNA
PB2PA
PB13
PB2PA
PB13
CAP-BINDING ACTIVATED
PB2PA
PB1ENDONUCLEASE
ACTIVATED
PB2PA
PB1
MATURETRANSCRIPTIONCOMPLEX
-
NA TETRAMERNA TETRAMER
-
NA
Rimuove NANA da HA, NA, superficie cellulare Trasporto virus a
cellule bersaglio, attraverso strato mucoso
tratto respiratorio Rilascio efficiente virus da superficie
cellulare priva di NANA Impedita laggregazione di particelle
virali
Acil Neuraminil Idrolasi: taglia legame -chetosidico tra
acidosialico terminale e D-galattosio o D-galattosammina
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EVOLUTION OF THE INFLUENZA A VIRUSESCURRENTLY CIRCULATING IN
HUMANS
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LINFLUENZA COME MALATTIARESPIRATORIA
ProfilassiVaccino inattivatoVaccino inattivato adiuvatoVaccino
mucosaleVaccino a subunitVaccino attenuato cold virusDNA
vaccination
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PRODUCTION OF LIVE ATTENUATED VIRUSES BYGENETIC REASSORTMENT
Attenuated DonorVirus
Virulent Wild TypeVirus
Attenuated ReassortantVaccine Virus
PB2PB1PAHANANPM
NS
PB2PB1PAHANANPM
NSPB2PB1PA
HANA
NPM
NS
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LINFLUENZA COME MALATTIARESPIRATORIA
Diagnosi virologicaDiretta Indiretta
(RFC)Coltura HAIIF SRIEIA MicroneutralizzazionePCR NAI
- SSCP- HDA- sequencing
-
LINFLUENZA COME MALATTIARESPIRATORIA
FarmaciAmantidina/Rimantidina
ZanamivirOseltamivir
Nuovi analoghi
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STRUCTURES OF NA INHIBITORS
CO2H
O
NH
NHCOCH3OH
HO
OH
NH2
NH
CO2C2H5
NHCOCH3
NH2O
CO2H
NH
NH
NH2CH3COHN
HO
Oseltamivir RWJ-270201Zanamivir
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Zanamivir Bound to the Active Sites ofInfluenza A and B
Neuraminidases
Zanamivir
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DISTRIBUZIONE DI ZANAMIVIR DOPO INALAZIONECON DISKHALERTM
Cass et al, 1999
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INHIBITION OF MUTANT NAs
IC50 (nM)NA residue Mutation Zanamivir Oseltamivir
RWJ-270201
Gly >100 0.6 1.9Ala >100 3 0.9
119Glu
Asp >100 1.3 8
Framework
274 His Tyr 1.1 >100 40
292 Arg Lys 18 >100 16Catalytic
152 Arg Lys >100 >100 >100
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ANTI-INFLUENZA DRUG RESISTANCE:Clinical Features
Frequencyduring therapy
Infectivityin animals Virulence Transmiss-
ibilityAmantadine/Rimantadine
High (~30%)(10% to >50%)
Wild-type Wild-type Yes
Zanamivir Low (?) Reduced Reduced ?
Oseltamivir Low (1-2%) Reduced(>400 fold)
Reduced ?
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NA INHIBITORS: Resistance Mechanisms
Hemagglutinin Mutations near receptor binding site affinity of
HA for sialic acid dependence on NA for release
Neuraminidase Framework mutations:
Glu 119 ( Gly, Ala, Asp, Val) His 274 ( Tyr)
Catalytic site mutations Arg 292 or Arg 152 ( Lys)
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MUTAZIONI NELLA HA POSSONO CONFERIRERESISTENZA IN VITRO AGLI
INIBITORI DELLA NA
il legame al recettore emediato dalla HA
la distruzione del recettore emediato dalla NA
Ridotta affinit della HA per il recettore (acido sialico)
Ridotta dipendenza dalla NA per il distacco virale
Ridotta sensibilit agli inibitori della NA
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LINFLUENZA COME MALATTIARESPIRATORIA
Come impostare lapproccio terapeutico
Effettuare una diagnosi correttaConsiderare lefficacia del
vaccino o di unachemioprofilassi preventivaSomministrare il farmaco
pi efficace(Zanamivir) entro le prime ore dallesordiodei
sintomiConsiderare linsorgenza di mutantiresistenti