Universidad Nacional Autnoma de MxicoFacultad de Estudios
Superiores Zaragoza BiologaLaboratorio de Investigacin Formativa
IIIUnidad II: Embriologa
Prctica 3: Viabilidad de gametosM. en C. Ral Zavala Chavero
Equipo 9Rosiles Prez PamelaOsorio Celis Cristian Alan Franca
Lpez Tania Lorena
Grupo: 2301Prctica 3: Viabilidad de gametosINTRODUCCINLa
espermatobioscopia es un estudio de laboratorio que sirve para
comprobar que los gametos masculinos funcionan correctamente; se
analizan caractersticas fisicoqumicas del semen, al igual que
caractersticas numricas, funcionales y estructurales de los
espermatozoides. Para dicho estudio es necesaria una muestra en
fresco de semen, el cual est compuesto por lquido seminal y
espermatozoides. Lquido seminal Es un lquido compuesto por diversas
sustancias. Tiene como lugar de formacin el epiddimo, las vesculas
seminales y la prstata; dependiendo del lugar de formacin ser la
cantidad de sustancias que lo componen, quedando as: Vesculas
seminales 60% de sustancias que componen el semen; Epiddimo 20% de
sustancias que componen el semen; Prstata 20% de las sustancias
restantes. Espermatozoides Tienen como lugar de formacin los
Testculos, produciendo as el 100% de los espermatozoides.Existen 2
tipos de espermatobioscopia, la directa y la indirecta. En la
directa la toma de muestra es va masturbacin. En la indirecta
(Mtodo de Sims Hunter) se cita una pareja heterosexual, se realiza
el coito y la muestra es tomada va vaginal de la mujer.Hay ciertas
situaciones en las que se indica una espermatobioscopia:a) Animales
de registro (sementales) se realiza para verificar y producir
estrictamente, semen de alta calidad.b) Diagnstico de la pareja
estril se toma como 1era opcin el diagnstico de esterilidad en la
pareja; resulta un mtodo de ms fcil y rpido diagnstico (en el varn)
que estudios hormonales y de largo seguimiento (en la mujer).c)
Donacin a bancos de semen se realiza el estudio para saber si la
muestra es de calidad y as almacenarse hasta que sea requerida.d)
Control de natalidad se realiza la vasectoma y despus de un tiempo
se realiza el estudio para determinar si an hay restos de
semen.Para tener la muestra necesaria y el objeto de estudio para
la espermatobioscopia, los espermatozoides sufren diversos cambios;
pasando por diferentes etapas de formacin y de maduracin llamadas
espermatognesis y espermiognesis. La espermatognesis es el proceso
por el cual se originan las clulas gamticas, dando como resultados
4 clulas haploides (dos con 23X y dos con 23Y). Tiene 5 etapas:
espermatogonia, espermatocito primario y secundario, espermtida y
espermatozoide.La espermiognesis es la etapa de maduracin entre
espermtida y espermatozoide, tambin es llamada etapa de
diferenciacin. Tiene diferentes fases:1.- Inicia con la cabeza,
esta se forma gracias a las modificaciones que sufre el ncleo. ste
tiene que disminuir su tamao perdiendo jugo nuclear lquido y
cubierta nuclear, tambin el material gentico se condensar.2.-El
sistema acrosmico (la parte superior de la cabeza) proviene del
aparato de Golgi. ste sistema tiene un grnulo acrosmico con 2
derivados: a) Caperuza o casquete es una doble membrana que se
extiende hasta la mitad de la cabeza.b) Acrosoma es un espacio con
gran cantidad de enzimas acrosmicas y es el marcador espermtico que
reconoce el vulo.3.- Sistema de centriolos:a) Centriolo proximal
determina la presencia del cuello en el espermatozoide.b) Centriolo
distal contribuye a la formacin del flagelo.4.- Cuando aparece el
anillo de Jensen, ste manda seales para que las mitocondrias se
agrupen alrededor del flagelo, as se forma el cuerpo. Las
mitocondrias brindarn la energa necesaria para que el
espermatozoide tenga una alta movilidad, le brindan una fbrica de
energa propia.5.- Cuerpo residual: son todas las estructuras que no
sirven, se desechan.Cualquier tipo de alteracin estructural se da
durante la espermiognesis, dando origen a la teratozoospermia:
Permutacin de cabeza y pieza intermedia, bicfalo, megacfalo,
bicaudo y microcfalo, entre otras.
OBJETIVOS Aplicar la metodologa de la espermatobioscopia para
determinar la viabilidad espermtica, la estructura, la movilidad y
el recuento. Analizar caractersticas fsicas del semen Observar
caractersticas morfolgicas normales y anormales de los
espermatozoides. Describir las caractersticas funcionales
(movilidad, nmero y estructura) normales y anormales de los
espermatozoides.
MATERIAL Y EQUIPOMaterial biolgico: muestra en fresco de
semenMaterial:Equipo:-Placa de calentamiento-Microscopio ptico
-Termmetro -Vaso de precipitados de 250 ml -Pipeta Pasteur con
bulbo -PortaobjetosReactivos:-Azul de
Tripano-Metanol-Giemsa-Vaselina slido (Petrolato)-Solucin de
Citrato de Sodio -Hipoclorito de Sodio
-Pipeta de Thoma para glbulos blancos -Cmara de Neubauer-Jeringa
de insulina de 1ml-Esptula-Tubo cnico de centrfuga-Tira de
pH-PalilloMETODOLOGIA1. Toma de muestra2. Despus de un periodo de
abstinencia sexual de 3 a 5 das previos a la recoleccin.3. Se
realizara espermatobioscopia directa por mtodo de masturbacin,
puesto que permite que la muestra sea completa y sin contaminacin.
No deben aceptarse las muestras recogidas en preservativos ya que
contienen sustancias espermicidas que alteraran el resultado.4. Se
suelen utilizar frascos de polipropileno neutro diseados para la
recoleccin de orina, los cuales son limpios, secos y estriles.
Previamente a la recogida se debe realizar un lavado minucioso del
meato urinario y del glande. 5. Una vez realizada la recoleccin,
debe conservarse a bao mara a 37C para evitar los cambios de
temperatura que afectan su calidad.Examen fsico del semen6. Color:
Se observa y se anota el color que representa. El semen recin
emitido es denso, viscoso, opaco y blanquecino. El color
amarillento indica piospermia por infecciones y el color rojizo
hemospermia por procesos varicosos o traumticos. 7. Volumen: La
medida del volumen se realiza colocando la muestra en un tubo de
centrfuga graduado y se registra el volumen. El volumen normal es
de 2 a 5 ml, siendo el volumen medio 3.5 ml. Un volumen superior a
10 ml se denomina polisemia y es patolgico, ya que los
espermatozoides van muy diluido y llegan en poca concentracin al
moco cervical. Un volumen inferior a un ml se denomina oligocemia y
tambin es completamente patolgico. 8. Licuacin: Para evaluar, al
verter en el tubo cnico en la orilla se pondr una gota y se alejara
para observar la forma en que escurre que debe ser en hilo; despus
de 1 hr, se homogeneizara y con un palillo se tomara un poco de la
muestra y se observara como escurre que debera ser en gota. El
semen coagula tras su emisin y en circunstancias normales deben
licuarse totalmente a los 15 minutos. Un semen que se emite ya
licuado indica posible inflamacin prosttica o de las vesculas
seminales. Un tiempo de licuacin superior a 4 horas supone un
obstculo para la fecundacin. 9. pH: El pH se determina fcilmente
con una tira reactiva y debe hacerse relativamente pronto porque se
va alcalinizando con el tiempo. El lquido seminal tiene un pH
alcalino oscilando entre 7,2 y 8. Si hay inflamacin de la glndula,
el pH es superior a 8. Si hay una obstruccin en el conducto
eyaculador el pH puede ser cido. Estudio microscpico: Consiste en
el estudio de las caractersticas de los espermatozoides comprende
los siguientes exmenes.10. Recuento: Dilucin de la muestra con una
pipeta de Thomas de glbulos blancos hasta la seal 0,5 y el lquido
diluyente (solucin de citrato de sodio) hasta la seal 11. Con ello
se obtienen una dilucin 1/20. El citrato de sodio tendr 2 propsito,
evitar la aglutinacin de los espermatozoides y como ayuda para
conservar.Se homogeniza la muestra agitando intensamente la pipeta
sujeta por ambos extremos haciendo girar la bolita de su interior.
Llenamos la cmara de recuento de Neubauer. Se desecha las 3 o 4
primeras gotas, y se llena la cmara dejando reposar 2 minutos en
una cmara hmeda para que sedimente los espermatozoides. Se coloca
la cmara en la platina del microscopio y con el objetivo 10x se
comprueba que la distribucin que es homognea y que no hay
aglutinacin de espermatozoides. Se procede al conteo de 1
cuadricula grande para leucocitos, la cantidad obtenida se
multiplica por 200,0000 y el resultado es el nmero de
espermatozoides por ml.11. Movilidad: La movilidad puede medirse
mediante observacin directa, para esto, se monta una gota de semen
lquido o licuado entre porta y cubre con el portaobjeto
precalentado a 37 y que en los bordes de la gota tiene vaselina,
para evitar la desecacin. Se observa microscpicamente.La movilidad
se valora observando varios campos con el objetivo de 40x, contando
por lo menos 100 espermatozoides por campo. La movilidad se
registra en % de espermatozoides mviles y en % de inmviles.Es
necesario que los espermatozoides tengan una movilidad activa para
que atraviesen el moco cervical y lleguen hasta el vulo. Esta
movilidad va a depender de factores intrnsecos para los
espermatozoides. 12. Vitalidad: Se toma una gota homognea de la
muestra de semen y se coloca en un portaobjetos, para teir con azul
de tripano. Observar al microscopio a 10x y a 40x. Los
espermatozoides muertos sufren una alteracin en su membrana, que
hace que esta deje pasar a su interior el colorante (azul de
tripano) mientras que las formas vivas no se colorean. Es un
estudio complementario que se distingue dentro del grupo de las
formas inmviles de las que estn vivas de las que estn muertas, el %
de espermatozoides teidos nunca puede ser superior al de formas
inmviles.13. Estudio morfolgico: Se realiza un frotis tomando una
gota de la muestra de semen con una pipeta Pasteur y extendiendo la
por capilaridad y arrastre con un portaobjetos. Se deja secar la
laminilla y se fija con metanol durante 5 min. Concluido el tiempo
de fijado se tie con Giemsa por 5 min y luego del tiempo se hace un
lavado simple. Observar a microscopio a 10x y 40x. Contar 100
espermatozoides e identificar cuantos presentan anormalidades. Es
muy importante el conocimiento de las caractersticas morfolgicas de
los espermatozoides para valorar el potencial fecundativo de una
muestra junto con el nmero total de espermatozoides y su movilidad.
La morfologa del espermatozoide se valora mediante recuentos
diferenciales de los tipos de espermatozoides morfolgicamente
normales y anormales en extensiones teidas.
RESULTADOSValores de referenciaValores de la muestra
Licuacin del semen al inicioViscoso escurre en hiloescurre en
hilo
Licuacin del semen 1hr despusLiquido escurre en gotasescurre en
gotas
Volumen3.5 5 ml2.5 ml
pH7.5 8 7
ColorBlanco opalescenteBlanco con tonalidad amarilla muy
ligera
Movilidad80%80%
Vitalidad90%85 - 90%
Morfologa 70% de normales30% de anormales10/100 son anormales
predominan macrocfalos
RecuentoMnimo 50 a 60 millones por ml100 millones por ml98600000
por ml
2.- Estructura de los espermatozoides:
Aumento con lente 40x. A-4
Aumento con lente 40x. A-3
Aumento con lente 40x. A-2
Aumento con lente 40x. A-1
Aumento con lente 40x. A-4
ANALISIS DE RESULTADOSEn licuacin al inicio y a la hora, la
muestra presenta valores normales.Su volumen que presente es ms
bajo por 1 ml que el promedio.El pH se encuentra dentro del rango
ya que tena una coloracin un poco ms fuerte que el valor de 7, pero
menor al valor de 8; por lo cual en el resultado se coloca al 7
siendo un valor normal.El color que presenta la muestra tiene una
coloracin normal con algunos matices amarillentos, muy ligeros para
representar algn problema.En la observacin de la movilidad, la
mayora presentan movilidad en un ndice de 80%, un valor normal.Al
observar la laminilla de vitalidad, se encontraron pocos
espermatozoides teidos por lo que se valora que hay de un 85 a 90%
vivos, el cual est dentro de los parmetros normales.En el recuento
se obtuvieron en todas las casilla un valor de 21-36
espermatozoides, que al sumar nos dan 493. Se multiplico por
200,000 ya que solo se hizo el conteo de una cuadricula grande, y
da como resultado 98,600,000 por ml, el cual es un valor
normal.21343232
24323036
30312934
36323228
Estructura de los espermatozoides:En la muestra A-1con lente 40x
se observa al centro un tipo de teratozoospermia, la cual es
megacfalo. Teniendo as una cabeza muy grande y un flagelo normal,
sobresale entre los dems. En la muestra A-2 con lente 40x se
observa, a las 7 de las manecillas del reloj, otra
teratozoospermia: un megacfalo y una prdida de fragmento en la
parte de la cabeza.En la muestra A-3 con lente 40x se observa
claramente, a las 4 de las manecillas del reloj, un bicfalo (tipo
de teratozoospermia en la cual presentan 2 cabezas y un solo
flagelo) y un bicaudo (una sola cabeza con dos flagelos)Finalmente
en la muestra A-4 con lente 40x, se observan espermatozoides
normales, presentan cabeza, pieza media y flagelo de tamao y
estructuras correctas.CONCLUSIONESSe aplic la metodologa de la
espermatobioscopia directa que determina la viabilidad, vitalidad
espermtica, estructura, movilidad y recuento de los espermatozoides
(en cmara de Neubauer), y se analiz las caractersticas fsicas de la
muestra de Semen, podemos determinar mediante los resultados
obtenidos y teniendo control sobre el correcto manejo de la muestra
que: La Evaluacin realizada y con base a los valores de referencia
se puede determinar que el individuo es frtil, se encuentra en un
estndar normal y dentro de los parmetros.CUESTIONARIO1. Escriba
cuales estructuras celulares estn involucradas en el proceso
espermiognico.En este proceso estn involucrados los organelos de la
espermtida que son: Centriolo: sistema de propulsin para trasladar
el ncleoAparato de Golgi: provee la formacin de la vescula
acrosmica y que contiene enzimas que dirigen protenas y glcidos
complejosGranulo autosmicoMitocondrias: proveen de energa al
espermatozoideDesarrollo del acrosoma: almacena enzimas que son
utilizadas para degradar y atravesar la cubierta externa del gameto
femenino.
1. Describa en detalle los mecanismos celulares que se llevan a
cabo durante el proceso espermiognico. La primera etapa es la
construccin de la vescula autosmica desde el aparato de Golgi. El
acrosoma forma un casquete que cubre al ncleo del espermatozoide. A
medida de que se forma el casquete acrosmico el ncleo rota de modo
tal que el casquete quedar despus enfrentado a la membrana basal
del tbulo seminfero. Esta rotacin es necesaria debido a que el
flagelo que est comenzando a formarse desde el centriolo desde el
otro lado del ncleo, que se extender hacia la cavidad. Durante el
ltimo estadio de la espermiognesis, el ncleo se aplana y se
condensa, el citoplasma restante se desecha y las mitocondrias
forman un anillo alrededor de la base del flagelo.Uno de los
principales cambios en el Ncleo es el remplazo de las histonas por
protaminas. La transcripcin de los genes por protaminas es
observada en las espermtides haploides tempranas, aunque la
traduccin es demorada por varios das. Las protaminas son protenas
relativamente pequeas con cerca de un 60% de arginina. Durante la
espermiognesis los ncleos se disocian, y las histonas del ncleo
haploide son finamente reemplazadas por protaminas. Esto causa la
paralizacin completa de la transcripcin en el ncleo y facilita que
este adquiera una estructura casi cristalina. El espermatozoide
resultante luego ingresa en la cavidad del tbulo.
1. Defina los trminos esterilidad e infertilidad.La
infertilidad: la incapacidad para conseguir o mantener el embarazo,
no es una enfermedad en el usual sentido de la palabra. No es un
sntoma o afeccin que impide el bienestar fsico de individuos o
parejas infrtiles. No hay definicin precisa de infertilidad. En su
lugar la infertilidad es la ausencia de embarazo despus de un
tiempo apropiado del intento de concepcin mediante relaciones
sexuales regulares.La infertilidad puede ser causada por el fracaso
para ovular o madurar al ovocito, por pocos espermatozoides o que
estos sean defectuosos, mediante el bloqueo fsico de los conductos
masculinos o femeninos o por la incompatibilidad entre el
espermatozoide y el entorno del ovocito o del tracto
reproductivo.
1. Especifique las diferencias entre vialidad y vida espermtica
u ovular indicando para cada caso sus valores normales.La
viabilidad espermtica es la cantidad de espermatozoides vivos en
una muestra y se mide en porcentajes, el normal es de 75 % La vida
espermtica depende de las condiciones en las que se encuentre el
espermatozoide. Generalizando, se puede considerar que, en medio
seco y a temperatura ambiente, no consiguen sobrevivir ms de
algunos segundos, en cualquier caso hasta que se observe que el
semen, el lquido que los contiene, se ha secado, porque no
olvidemos que el semen es un medio ptimo de humedad. Dentro de los
conductos deferentes del hombre, el espermatozoide tiene una vida
de 42 das aproximadamente. En el interior del canal vaginal (un
medio hmedo), el pH cido no les suele ser favorable, por otra parte
el pH neutro de las secreciones seminales crea un entorno favorable
que protege a los espermatozoides del pH cido de la vagina, si
consiguen llegar hasta el cuello del tero, o ms all de ste en las
trompas, pueden vivir y permanecer activos hasta unos tres a cinco
das. Si el pene acaba de eyacular, aunque se observe que el semen
ya se ha secado, puede contener restos de espermatozoides en su
conducto deferente (el mismo lquido preseminal los arrastra en su
salida), por lo que una nueva penetracin sin proteccin tiene riesgo
de embarazo. Igualmente, si previamente hubo penetracin sin
proteccin, aun sin eyacular dentro, ya que como expuse antes,
pueden vivir hasta 42 das en los conductos deferentes del hombre.
En cuanto al agua, tener en cuenta que no cualquier tipo de agua es
vlido para permitir la supervivencia de las clulas espermticas;
pues estas necesitan unas condiciones especficas para su
conservacin ptima como son, por ejemplo, un pH adecuado. El agua
potable de red tratada con cloro, nos asegura una baja carga
microbiana, pero dicho cloro es txico para el semen, sin embargo el
agua del mar es bastante adecuada.
1. Qu significa el termino Reproduccin asistida y como lo
relaciona con la metodologa?Reproduccin asistida o fecundacin
artificial es el conjunto de tcnicas o mtodos biomdicos, que
facilitan o sustituyen a los procesos naturales que se dan durante
la reproduccin. La Reproduccin Asistida no puede considerase como
un mtodo teraputico en el sentido habitual ya que no cura las
diversas situaciones patolgicas de la infertilidad. El paciente
sigue con el mismo problema orgnico despus de su utilizacin y tendr
que volver a someterse a estas tcnicas si desea lograr otro
embarazo.Mientras que hay numerosos tratamientos para las mujeres
que pueden llevar a la maduracin y ovulacin de los ovocitos, hay
relativamente pocos tratamientos para los hombres que no estn
produciendo suficientes espermatozoides. En las mujeres las
gonadotrofinas exgenas o las drogas antiestrognicas ( clomifeno o
tamoxifeno ), pueden ser utilizadas para estimular los ovarios. En
los hombres los espermatozoides pueden ser concentrados e
inyectados en el ovocito o en el tracto reproductivo cerca del
ovocito, puede existir una relacin directa con la metodologa de la
espermatobioscopia, ya que esta nos predice si los espermatozoides
utilizados en cualquier tcnica de reproduccin asistida son viables
o no, se considera a esta tcnica la primera a considerar en el
estudio de la pareja estril, en torno a los espermatozoides por ser
precisa en torno a las caractersticas fsicas y morfolgicas normales
y anormales. La tcnica de la espermatobioscopia es muy sencilla y
fcil de realizar adems de ser de bajo costo econmico.
BIBLIOGRAFIA Dollander A., Fenart R., (1990), Elementos de
embriologa (Embriologa general), Editorial Noriega Limusa, Mxico
D.F., pp. 93-100 Balinsky B. I., (1978), Introduccin a la
embriologa, Ediciones Omega, Espaa Barcelona, pp. 19-24 Gilbert S.
Biologa del desarrollo. 7a Edicin. Editorial Mdica panamericana.
Mxico. 673 680 pp. Langman T. Embriologa mdica 7a Edicin Ediorial
Mdica panamericana. Mxico 16-20 pp.