-
UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE LA MIXTECA
MAESTRÍA EN CIENCIAS PRODUCTOS
NATURALES Y ALIMENTOS
“ANÁLISIS TERMODINÁMICO DEL PROCESO DE ENCAPSULAMIENTO
DEL ÁCIDO FERÚLICO CON CICLODEXTRINAS, Y LA ELUCIDACIÓN
ESTRUCTURAL DE LOS COMPLEJOS ”
PROTOCOLO DE INVESTIGACIÓN
PRESENTA
I.A. ARMANDO TORRALBA GONZÁLEZ
2 DE AGOSTO DEL 2013
DIRECTORA DE TESIS
DRA. EDITH GRACIELA GONZÁLEZ
MONDRAGÓN
CO-DIRECTOR DE TESIS
DR. RAFAEL ZUBILLAGA LUNA
1
-
ÁCIDO FERÚLICO
2
• Pertenece al grupo de los polifenoles
• Es derivado del ácido cinámico
INTRODUCCIÓN
Kikugawa et al., 2012
-
ÁCIDO FERÚLICO
3
Se encuentra en
la pared celular de
material vegetal
Forma enlaces entre:
• Ligninas
• Polisacaridos
• Glucósidos
Ácido
Ferúlico
INTRODUCCIÓN
Kikugawa et al., 2012
-
APLICACIONES DEL AF
4
En el área de salud y farmaceutica:
• Antiinflamatorio
• Capacidad de acomplejar proteínas
• Antimicrobianas
• Acción quimiopreventiva
En la industria alimentaria:
• Antioxidante
• Precursor de la vainillina
• Ingrediente en formulación de
alimentos funcionales
Vainillina
INTRODUCCIÓN
Urbaniak y Szela, 2013
-
CARACTERÍSTICAS DEL ÁCIDO
FERÚLICO
5
La estructura molecular del AF le confiere:
1. Baja solubilidad en agua
2. Inestabilidad por su sensibilidad a la luz y
calor
3. Sabor astringente y amargo
Esto limita su uso en alimentos y en
medicamentos orales
INTRODUCCIÓN
Munin, 2011
-
ESTABILIZAR EL ÁCIDO FERÚLICO
6
Sintetizar derivados de AF por
esterificación.
Utilizar ciclodextrinas con el fin de
encapsular a la molécula.
Métodos para proteger y solubilizar al ácido ferúlico
INTRODUCCIÓN
Kikugawa et al., 2012, Munin, 2011
-
CICLODEXTRINAS
7
Son oligosacáridos cíclicos
INTRODUCCIÓN
Unidas por enlaces α-(1,4)
De 6, 7, 8 o más unidades de glucopiranosa.
Valle, 2003
-
PROPIEDADES DE LAS
CICLODEXTRINAS
8
INTRODUCCIÓN
Valle, 2003
-
USO DE LAS CICLODEXTRINAS
9
CD’s utilizadas para acomplejar al AF:
① Antioxidantes ② Fármacos
INTRODUCCIÓN
Uso en:
Alimentos
Productos farmacéuticos
Cosméticos
Bioconversión
Embalaje y la industria textil
-
10
Los estudios que se han realizado son los siguientes:
USO DE CICLODEXTRINAS
ACOMPLEJANDO AF
INTRODUCCIÓN
-
11
INTRODUCCIÓN
Como se acomplejan las moléculas
El factor estérico
Interacciones termodinámicas
CD:
①Tamaño de la cavidad
Molécula huésped:
①Tamaño ②Grupos funcionales
FUNDAMENTO DEL ACOMPLEJAMIENTO
Castronuovo y Nicolli, 2006
-
FUNDAMENTO DEL ACOMPLEJAMIENTO
12
Interacciones de van der Waals
Reordenamiento de las moléculas
Puentes de hidrógeno
Interacciones hidrófobicas
INTRODUCCIÓN
-
13
F ormation of complexes
Cyclodextrins in aqueous
solutions welcome “guest
molecules”, other than water, in
their hydrophobic cavities (Szejtli,
1998). The interaction of a CD
and a guest molecule has usually a
molar ratio of 1:1, but other kinds
of interactions can be found, as
showed in figure 3 (Stella et al.
2008). This complex formation
can then increase the solubility of
some drug molecules (Stella et al.
2008 and Loftsson et al. 1996).
Throughout the formation of
complexes between cyclodextrins
and drug molecules, no breakages
of covalent bonds are noticed, but
what leads to the formation of
such complexes is the release of
water molecules from the cavity
of the cyclodextrins,
hydrophobic interactions,
hydrogen bonding, among others (Loftsson 2004). Complexes formed
by HP-0.6-β-CD and β-CD
with some bile salts: glycocholate (GC), glycodeoxycholate (GDC)
and glycochenodeoxycholate
(GCDC) are the most relevant complexes for this report.
2.2. Bile Salts
Figure 4 : Cholesterol conversion to 7-hydroxy-Cholesterol
(Stamp & Jenkins, 2008)
This section will explain the basic and important aspects of BS
while also distinguishing the
difference between what is known as BS and bile acid (BA).
Figure 3: Formation of complexes
(http://www.nature.com/nrd/journal/v3/n12/images/nrd1576-f3.jpg)
No sigue un
patrón común
Tamaño relativo
cavidad
Tamaño
molécula huésped
INTRODUCCIÓN
FUNDAMENTO DEL ACOMPLEJAMIENTO
Paulon et al., 2009
-
MÉTODO DE ACOPLEJAMIENTO
14
INTRODUCCIÓN
Coprecipitación
Extrusión
Acomplejamiento por suspensión
Acomplejamiento por pegado
Valle, 2003
-
METODOS DE RECUPERACIÓN DEL
COMPLEJO
Centrifugación
Separación con papel filtro con un tamaño
de poro de 0.45 mm
El complejo se recupera en estado sólido
15
INTRODUCCIÓN
-
ANÁLISIS DE LOS COMPLEJOS DE INCLUSIÓN
CON CD
Termodinámico
• Calorimetría de titulación isotérmica (ITC)
• Espectroscopía de fluorescencia
• Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC)
Estructura
• Resonancia Magnética Nuclear (NMR)
• Difractometría de Rayos X
• Espectrocopía infrarroja y Raman
• Microscopía electrónica de barrido
• Espectrofotometría UV-Vis
16
INTRODUCCIÓN
Singh et al., 2010
-
CALORIMETRÍA DE TITULACIÓN
ISOTÉRMICA (ITC)
Equipo de ITC
17
Paulon et al., 2009, Krishnakumari y Nagaraj, 2012
INTRODUCCIÓN
Calor liberado o absorbido
Se da en proporción directa
a la cantidad de
uniones producidas
-
CURVA DE TITULACIÓN
18
INTRODUCCIÓN
Paulon et al., 2009
4.1 HP-0.6-β-CD
Figure 8: (a) the raw data and enthalpy with fitted line for
HP-0.6-β-CD and GC for 25°C, replica 1; (b) the
raw data and enthalpy with fitted line for HP-0.6-β-CD and GDC
for 25°C, replica 1; (c) the raw data and
enthalpy with fitted line for HP-0.6-β-CD and GCDC for 25°C,
replica 2. This illustrates the diference in
binding properties.
4.1.1 Binding Constant – K
Graphs indicating the K value for temperature 25, 30, 40 and
50ºC are shown below. All
temperature points show a decrease in K value, shifting the
complexation equilibrium favoring
the reactants as temperature increases. It seems that GC has the
highest decrease in K compared
to GDC and GCDC, where GC has decreased by 50%, GDC 30% and GCDC
32% from 25ºC to
50ºC. The CIs are smallest for GCDC and are largest for GC. This
may be due to GCDC binding
more strongly with the CD, which gives a better “S” shaped curve
when the ITC integrates the
peaks (observed in figure 8c). This can give a more accurate
“one set of sites” iteration of the
data points.
K at T=25ºC (M-1) K at T=50ºC (M-1) Diff. %
GC 1380 680 700 50,72
GDC 3440 2420 1020 29,65
GCDC 43700 29400 14300 32,72Table 4: The table shows the
difference and the decrease of the K value for the three BS from
25ºC to 50ºC.
Cada adición produce una reacción
liberando o absorbiendo calor.
El calorímetro mide la energía por unidad
de tiempo (μcal s-1) que debe ser aplicado
a la celda de muestra para mantener la Tº
constante
Después de una serie de adiciones los
sitios de unión disponibles de la CD se
saturan.
Gráfico de la unión entre una sal biliar
con HP-βCD a 30ºC
-
OBTENCIÓN DE PARAMETROS
TERMODINÁMICOS
19
Para obtener la energía libre de Gibbs y a la entropía se
utilizan las siguientes ecuaciones
INTRODUCCIÓN
a sigmoidal curve. This plot provides enough information to
estimate ΔH°, Ka and the stoichiometry of reaction, if the initial
concentrations of the reactants are known (Ladbury and
Chowdhry, 1996). Heat absorbed or released after each injection
is proportional to the change of
concentration of a bound ligand, described in the following
equation:
Q = V* ΔH° * Δ[L]boundEquation 1: Cumulative heat
where V- reaction volume, ΔH° – enthalpy of binding.For a
reaction with one type of binding site for the molecule – M + nL ↔
MLn (for one type of
binding site n=1) and the cumulative heat can be calculated as
follows:
Equation 2: Cumulative heat (Holdgate, 2001).
Data plotting and fitting is obtained by plotting the 1st
derivative of Q with respect to [L]total against the molar ratio
[L]total/[M]total (Holdgate, 2001). As equation shows, Q is
dependent on Ka,
ΔH° and N. Those parameters can be obtained by fitting a line to
data points (Ladbury and Chowdhry, 1996).
Further on, when ΔH° and Ka values are known, the magnitudes of
ΔG° and ΔS° can be calculated from the following relationship:
ΔGo = ΔHo - T ΔSo = -RTlnKa Equation 3: Standard Gibbs free
energy
Along with ΔG°, ΔH° and ΔS°, it is also possible to measure ΔCp
– the change of heat capacity or specific heat. ΔCp is used to
predict the change of the other three parameters according to
different temperatures. The relationship is as follows:
Equation 4: Change in heat capacity (Holdgate, 2001).
-
ANÁLISIS TERMODINÁMICO DEL PROCESO DE
ACOMPLEJAMIENTO
20
INTRODUCCIÓN
Cambios de
entalpía y
entropía
Formación de
los complejos
impulsada por
Posibles
enlaces
formados
Negativos
Entalpía
Fuerzas de
• van der Waals
• puentes de
hidrógeno
Positivos
Entropía
Principalmente
• Fuerzas
hidrofóbicas
-
PARÁMETROS TERMODINÁMICOS OBTENIDOS POR ITC ACOMPLEJANDO CON
CICLODEXTRINAS
21
INTRODUCCIÓN
-
IR
22
En la formación de complejos: 1. Los picos pueden cambiar de
posición
2. Disminuir o desaparición de algunas bandas
Análisis por IR de un modelo hipotetico de medicamento puro (A),
ciclodextrina (B),
mezcla fisica de ambos (C) y el complejo (D).
(Takahashi et al., 2012)
-
LUZ ENERGÍA ENERGÍA
ENERGÍA
ESPECTROFLUORÓMETRO
FLUORESCENCIA
ÁCIDO FERÚLICO
Titulación con
ciclodextrinas y
monitoreo de los
cambios en la intensidad
de fluorescencia
INTRODUCCIÓN
-
ESPECTRO
EMISIÓN
LONGITUD DE ONDA
INT
EN
SID
AD
DE
FL
UO
RE
SC
EN
CIA
ESPECTRO
EXITACIÓN
310 nm excitación
330 nm emisión
FLUORESCENCIA
Obtener la longitud de onda máxima
de excitación, para obtener la mayor
señal de intensidad de emisión de
fluorescencia
INTRODUCCIÓN
Ejemplo de acomplejamiento entre AF
y βCD
Zhang, et al., 2010
-
OBTENCIÓN DEL VALOR DE KU
25
Ecuación modificada de
Benesi–Hildebrand
① Curva de titulación fluorometríca ② Ajustar mediante un
modelo
matemático la curva de titulación
③ Obtener Ku ④ Posteriormente calcular ΔGu
o
Zhang, et al., 2010
INTRODUCCIÓN
HP-β-CD
β-CD
Ejemplo de acomplejamiento entre AF
y βCD
-
INCREMENTO EN LA INTENSIDAD DE
FLUORESCENCIA
26
Zhang et al., (2010)
INTRODUCCIÓN
Espectro de emisión de fluorescencia.
AF (1X10-5M) en presencia de β-CD (0-5X10-3 M)
Ejemplo de acomplejamiento entre AF
y βCD
-
ESTUDIO DE RMN
27
INTRODUCCIÓN
Identificación de la parte de la
molécula huésped que se incluye en la
cavidad de CD
-
Volume 12, Issue 1, January – February 2012; Article-002 ISSN
0976 – 044X
International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and
Research Page 12 Available online at
www.globalresearchonline.net
The modification of some of the bands representing the guest
molecule is indicative that only part of the molecule has been
encapsulated by CD. The portion that has not been complexed is
responsible for the presence of any unchanged bands
56.
However, it is important to emphasize that when complexation
occurs, the bands representing CD remain unchanged, and if the
guest molecule does not present a very characteristic band, the
changes may be imperceptible
1. Some authors report difficulty in
interpreting results due to the lack of a band representing the
guest molecule that produces noticeable changes
40,57,58. There are still other authors who have
obtained inconclusive results59,60
.
Recent studies employing IR to evaluate the formation of
inclusion complexes are presented in Table 2.
NUCLEAR MAGNETIC RESONANCE
Nuclear magnetic resonance (NMR) is a technique that has been
widely employed to determine the formation of inclusion complexes,
because it has the advantage of being able to reveal the structure
of the complex by identifying the part of the host molecule that is
included in the CD cavity
1.
There are six protons in CD that can be used in the analysis of
the NMR spectra of hydrogen (HNMR): three located in the outer
surface (H1, H2 and H4), two in the cavity (H3 and H5), H3 near the
wider exit and H5 near the narrow side. The last proton, H6, is
closer to the narrow output of the cavity. The changes that occur
in CD are usually in H3 and H5 and sometimes in H6, depending on
the depth that the guest molecule enters the CD cavity
76,77, as illustrated in Figure 3.
Figure 3: Hypothetical model of analysis by HNMR of CD (A) and
inclusion complex (B).
Due to the formation of chemical bonds, when complexation
occurs, signal changes take place in CD and guest molecule
spectra60,78.
Another technique employed in the characterization of CD
complexes is carbon 13 NMR (C13NMR). The results reveal the part of
the guest molecule that has been encapsulated by CD, complementing
the HRMN information
79.
Recent studies that use NMR to assess the formation of inclusion
complexes are presented in Table 3.
CONCLUSION
A complete characterization of drug-cyclodextrin inclusion
complex can be obtained using several analytical techniques as
described in a previous review - part I. The analytical tools
described in this review can show important details of the
molecules whose, in addition with other techniques as phase
solubility diagrams, dissolution studies and scanning electron
microscopy can generate a more complete characterization of the
formed complexes.
REFERENCES
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tecnologia farmacêutica. 1 ed., Minerva Coimbra Editora, Coimbra,
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2. Corti G, Capasso G, Maestrelli F, Cirri M, Mura P,
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Anal., 45, 2007,
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3. Patel RP, Patel MM, Solid-state characterization and
dissolution properties of lovastatin hydroxypropyl-β-cyclodextrin
inclusion
complex, Pharm. Tech., 31, 2007, 72-82.
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Solid-state characterization and dissolution properties of
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Biomed. Anal., 47, 2008, 535-540.
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investigation of the effects of water-soluble polymers on
vinpocetinecomplexation with β-cyclodextrin and its
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solid state, Eur. J. Pharm. Sci., 20, 2003, 253-266.
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Physicochemical characterization of clarithromycin-citric
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Carlfors J, Lehto VP, Järvinen T, Järvinem K, Preparation of
budesonide/γ-
cyclodextrin complexes in supercritical fluids with a novel SEDS
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characterization and dissolution properties of
bicalutamide-β-cyclodextrin inclusion
complex, Pharmazie, 63, 2008, 282-285.
11. Scalia S, Coppi G, Iannuccelli V,Microencapsulation of a
cyclodextrin complex of the UV filter, butyl
28
ESTUDIO DE RMN
• Tres situados en la
superficie exterior (H1,
H2 y H4)
• Dos en la cavidad (H3 y
H5)
• H6, está más cerca de
la salida estrecha de la
cavidad
Hay seis protones en las CD’s que se
pueden utilizar en el análisis
Modelo hipotético de análisis por RMN de CD de (A) y el complejo
de
inclusión (B).
(Takahashi et al., 2012)
INTRODUCCIÓN
-
JUSTIFICACIÓN
Es relevante acomplejar al ácido ferúlico con ciclodextrinas ya
que le brindará mayor solubilidad en soluciones acuosas y mayor
estabilidad en el transcurso de su almacenamiento.
Los parámetros termodinámicos obtenidos por las técnicas de ITC
y de espectroscopía de fluorescencia permitirán establecerán las
fuerzas intermoleculares que gobiernan el proceso de inclusión del
ácido ferúlico dentro de las ciclodextrinas.
Por otro lado el tener la estructura del acomplejamiento
proporcionará información acerca de cómo esta unido
estructuralmente el ácido ferúlico en las ciclodextrinas.
29
-
HIPÓTESIS
El ácido ferúlico presenta una estructura molecular
que permitirá la inclusión con determinada facilidad y
con asosiaciones específicas en cada una de las
ciclodextrinas (α, β, γ). Así mismo los métodos de ITC,
fluorescencia, IR y RMN permitirán obtener
información de la termodinámica y de la estructura del
proceso de acomplejamiento del ácido ferúlico con las
ciclodextrinas (α, β, γ).
30
-
OBJETIVOS
Objetivo General
Evaluar los parámetros termodinámicos del
proceso de encapsulamiento del ácido ferúlico
con ciclodextrinas, y la elucidación estructural
de los complejos.
31
-
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
32
1. Realizar el análisis termodinámico del proceso de
acomplejamiento entre la ciclodextrina y el ácido ferúlico
utilizando la técnica de calorimetría de titulación
isotérmica
2. Obtener los parámetros termodinámicos mediante el
ajuste de la curva de titulación: la constante de unión
(Ku),
la entalpía (ΔHuo) y la estequiometría de unión (n).
-
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
33
3. Calcular la energía libre de Gibbs (ΔGuo) y la entropía
(ΔSuo) a partir de los parámetros anteriores.
4. Investigar la posibilidad de determinar la constante de
unión (Ku) del ácido ferúlico acomplejado con las CD,
empleando una técnica de fluorescencia.
5. Elucidar la estructura la estructura de los complejos
del ácido ferúlico con las diferentes ciclodextrinas,
mediante resonancia magnética nuclear (RMN)
unidimensional y bidimensional homonuclear.
-
METAS
34
1. Determinar los parámetros termodinámicos
propios del proceso de acomplejamiento del ácido
ferúlico con las ciclodextrinas (α, β, γ) mediante
calorimetría de titulación isotérmica (ITC).
2. Determinar la contante de unión (Ku) mediante
una titulación fluorimétrica para contar con una medición
alternativa.
3. Obtener la estructura de los complejos del ácido
ferúlico con las diferentes ciclodextrinas.
-
METODOLOGÍA
35
1.-Determinar el disolvente a emplear
Metanol (50 y 100%), Etanol (60, 70 y 100%),
NaOH (5 y 10%) Amortiguador de fosfatos 100 mM en un
intervalo
de pH de 8 a 12
2.- Generar los espectros de IR
Mezclando 1mM de ácido ferúlico con las
diferentes ciclodextrinas 1 mM,
usando como disolvente metanol al
100%.
3.- Obtener los diagramas de fase-
solubilidad
Mediante la técnica descrita por Higuchi y
Connors del ácido ferúlico con la
ciclodextrinas al 100%.
4.- Realizar el análisis termodinámico del
proceso de acomplejamiento
utilizando la técnica de calorimetría de
titulación isotérmica
-
36
METODOLOGÍA 5.- Obtener los
parámetros termodinámicos
mediante el ajuste de la curva de titulación:
constante de unión (Ku), entalpía (ΔHu
o) y la estequiometría de unión
(n)
6.- Calcular la energía libre de
Gibbs (ΔGuo) y la
entropía (ΔSuo)
mediante las relaciones
termodinámicas estándar 7.- Determinar la
constante de unión (Ku)
Del acomplejamientoe
mpleando la técnica de
fluorescencia
8.- Elucidación estructural
De los complejos ácido ferúlico-CD
por espectroscopía
de RMN
-
37
Solubilizar
Se logró solubilizar el ácido ferúlico en
NaOH al 5 y 10 % (pH 12.0)
Amortiguador de fosfatos 100 mM, en el intervalo de pH de 9.0 a
12.0
No fue posible solubilizar
El ácido ferúlico en etanol
Las tres ciclodextrinas en
metanol
RESULTADOS
-
ESPECTROS DE IR DE LOS COMPLEJOS CD-
AF
38
RESULTADOS
C:\OPUS_7.0.129\MEAS\ciclodextrinas acomplejadas.12
ciclodextrinas acomplejadas Instrument type and / or accessory
C:\OPUS_7.0.129\MEAS\ciclodextrinas acomplejadas.13
ciclodextrinas acomplejadas Instrument type and / or accessory
C:\OPUS_7.0.129\MEAS\ciclodextrinas acomplejadas.14
ciclodextrinas acomplejadas Instrument type and / or accessory
03/06/2013
03/06/2013
03/06/2013
500100015002000250030003500
Wavenumber cm-1
50
60
70
80
90
100
Tra
nsm
itta
nce [
%]
Page 1/1
Azul=Complejo AlfaCD-AF
Rojo=AlfaCD
Rosa=AF
-
C:\OPUS_7.0.129\MEAS\ciclodextrinas acomplejadas.15
ciclodextrinas acomplejadas Instrument type and / or accessory
C:\OPUS_7.0.129\MEAS\ciclodextrinas acomplejadas.16
ciclodextrinas acomplejadas Instrument type and / or accessory
C:\OPUS_7.0.129\MEAS\ciclodextrinas acomplejadas.17
ciclodextrinas acomplejadas Instrument type and / or accessory
03/06/2013
03/06/2013
03/06/2013
500100015002000250030003500
Wavenumber cm-1
60
65
70
75
80
85
90
95
100
Tra
nsm
itta
nce [
%]
Page 1/1
ESPECTROS DE IR DE LOS COMPLEJOS CD-
AF
39
RESULTADOS
Azul=Complejo BetaCD-AF
Rojo=BetaCD
Rosa=AF
-
C:\OPUS_7.0.129\MEAS\ciclodextrinas acomplejadas.15
ciclodextrinas acomplejadas Instrument type and / or accessory
C:\OPUS_7.0.129\MEAS\ciclodextrinas acomplejadas.16
ciclodextrinas acomplejadas Instrument type and / or accessory
C:\OPUS_7.0.129\MEAS\ciclodextrinas acomplejadas.17
ciclodextrinas acomplejadas Instrument type and / or accessory
03/06/2013
03/06/2013
03/06/2013
500100015002000250030003500
Wavenumber cm-1
60
65
70
75
80
85
90
95
100
Tra
nsm
itta
nce [
%]
Page 1/1
ESPECTROS DE IR DE LOS COMPLEJOS CD-
AF
40
RESULTADOS
Azul=Complejo GamaCD-AF
Rojo=GamaCD
Rosa=AF
-
CONCLUSIONES PARCIALES
41
1. Se logró disolver tanto el ácido ferúlico (3.0
mM) como a las ciclodextrinas (1 mM),
utilizando amortiguador de fosfatos 100
mM, pH 9.0, con agitación constante
durante 24 h a 30°C.
2. Se obtuvieron los espectros de IR para los
polvos del ácido ferúlico, cada una de las
ciclodextrinas así como para los
complejos.
-
CRONOGRAMA TRIMESTRAL DE ACTIVIDADES
42
-
43
CRONOGRAMA TRIMESTRAL DE ACTIVIDADES
-
GRACIAS
POR SU
ATENCIÓN
-
DIAPOS DE APOYO
“Por que determinar humedad de la ciclodextrinas”
La hidratación de las CD’s es inebitable, los problemas que
pueda causar esto es:
Introducir variaciones en la medición de los parámetros
termodinámicos utilizando el calorímetro al incroporar màs
agua
al medio de reacción.
El calor absorbido o liberado después de cada inyección es
proporcional a la variación de la concentración de un
ligando
unido
45
-
CONDICIONES DE LA
EXPERIMENTACIÓN CON ITC
Ácido ferúlico 1X10-3 M
Ciclodextrinas (α-CD, β-CD, γ-CD) 1X10-2 M
Las condiciones de los experimentos serán:
20 inyecciones de 1.5 μl de solucio ́n de ciclodextrina en la
celda
de muestra que contiene la solucio ́n de a ́cido ferúlico.
El intervalo de tiempo entre las inyecciones sera ́ de 300
segundos.
La velocidad de agitacio ́n será de 310 rpm
La temperatura de la celda sera ́ de 25 ºC
46
-
ESTUDIO DE SOLUBILIDAD
47